KR102510540B1 - Compositions and methods for inhibiting the biological activity of soluble biomolecules - Google Patents

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Abstract

본 발명은 다른 것들 중에서도, 가용성 생물분자에 결합하고 그의 생물학적 활성을 억제하는 조성물 및 그의 약학 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 조성물이 유용한 많은 응용(예를 들어, 치료적 응용)을 제공한다.The present invention provides, among other things, compositions and pharmaceutical compositions thereof that bind to and inhibit the biological activity of soluble biomolecules. The present invention also provides many applications (eg, therapeutic applications) for which the compositions are useful.

Description

가용성 생물분자의 생물학적 활성을 억제하기 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF SOLUBLE BIOMOLECULES}Compositions and methods for inhibiting the biological activity of soluble biomolecules

본 발명은 2014년 10월 3일에 출원된 미국 가출원 제62/059,628호, 2015년 7월 29일에 출원된 미국 가출원 제62/198,519호, 2015년 7월 29일에 출원된 미국 가출원 제62/198,541호에 대한 우선권을 주장하며, 그 각각은 전체가 참고로 본 발명에 통합된다.The present invention is disclosed in U.S. Provisional Application No. 62/059,628, filed on October 3, 2014, U.S. Provisional Application No. 62/198,519, filed on July 29, 2015, and U.S. Provisional Application No. 62, filed on July 29, 2015. /198,541, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

임상적으로 이용가능하거나 개발중인 수십 가지의 항암 치료법은 면역계가 암을 인식하거나 파괴하는 능력 또는 두 가지 능력 모두의 자극에 관련된다. 가장 두드러지는 것 중 세 가지는 항-체크포인트(checkpoint) 억제제인 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)로부터의 예르보이(Yervoy)(이피리무맙(Ipilimumab)), 머크(Merck)로부터의 케이트루다(Keytruda)(펨브로리주맙(Pembrolizumab), 이전에는 람브로리주맙(Lambrolizumab)) 및 모피트 암 센터/국립 암 연구소(Moffitt Cancer Center/National Cancer Institute)로부터의 종양 침윤 림프구를 이용한 입양 세포 이식(ACT/TIL)으로 알려진 세포 치료법이다. 그러나, 이들 및 다른 접근법은 개체의 면역계의 전체적인 상향-조절에 관련되어, 자가면역 질환과 유사한 잠재적으로 심각한 증상 및/또는 다른 중요한 부작용을 유도한다. Dozens of anti-cancer therapies that are clinically available or in development involve stimulation of the immune system's ability to recognize or destroy cancer, or both. Three of the most notable are the anti-checkpoint inhibitors Yervoy (Ipilimumab) from Bristol-Myers Squibb, Kate from Merck. Adoptive cell transplantation using tumor infiltrating lymphocytes from Keytruda (Pembrolizumab, formerly Lambrolizumab) and Moffitt Cancer Center/National Cancer Institute ( It is a cell therapy known as ACT/TIL). However, these and other approaches involve a global up-regulation of an individual's immune system, leading to potentially serious symptoms and/or other significant side effects similar to those of autoimmune diseases.

자가-면역을 피하는 개체의 능력을 방해하지 않고, 암, 특히 전이성 암을 치료하기 위한 보다 효과적인 약리학적 접근법이 당업계에서 필요하다. 다른 것들 중에서도, 본 발명은 종양 미세환경을 탈억제하는 것(dis-inhibiting), 즉, 자극하는 면역 세포에 대한 종양의 방어 시스템을 약화시키는 것을 비롯한, 암에 대한 개체 자신의 면역계를 활용하는 대안적 접근법에 기초한 방법과 조성물을 제공한다. There is a need in the art for more effective pharmacological approaches to treat cancer, particularly metastatic cancer, without interfering with the individual's ability to evade auto-immunity. Among other things, the present invention provides an alternative to utilizing an individual's own immune system against cancer, including dis-inhibiting the tumor microenvironment, i.e., weakening the tumor's defense system against stimulating immune cells. Provided are methods and compositions based on the linear approach.

국제 특허 출원 공개 WO 2013/011764호, WO 2013/029278호 및 WO 2014/151381호, 미국 특허 출원 공개 제2014/0271886호, 국제 특허 출원 공개 WO 2010/084088호, 미국 특허 출원 공개 제20140199352호, 제20080277346호, 및 제20040105821호, 미국 특허 제8,778,830호 및 제8,586,096호, 미국 특허 제5,814,272호 및 제7,932,311호; 및 미국 특허 출원 공개 제20040166166호, 국제 특허 출원 공개 WO 2012/085891호, 미국 특허 출원 공개 제2014/0096274호, PCT 특허 출원 공개 WO2014/170899호, 미국 특허 제7,918,842호, 미국 특허 출원 공개 제2013/0039848호 및 제2014/0248210호, 미국 특허 출원 공개 제2011/0028662호, 미국 특허 출원 공개 제2013/0337070호, 미국 특허 출원 공개 제2014/0235803호, 제2014/0147387호, 제2013/0196450호 및 제2012/0141797호 및 미국 특허 제8,574,549호, 미국 특허 제8,685,538호 및 미국 특허 출원 공개 제2013/0323182호, 미국 특허 출원 공개 제2008/0241223호; 미국 특허 제5,501,856호; 제5,164,188호; 제4,863,457호; 및 제3,710,795호; EP488401호; 및 EP430539호International Patent Application Publication Nos. WO 2013/011764, WO 2013/029278 and WO 2014/151381, US Patent Application Publication No. 2014/0271886, International Patent Application Publication WO 2010/084088, US Patent Application Publication No. 20140199352; 20080277346; and US Patent Application Publication No. 20040166166, International Patent Application Publication WO 2012/085891, US Patent Application Publication No. 2014/0096274, PCT Patent Application Publication WO2014/170899, US Patent No. 7,918,842, US Patent Application Publication No. 2013 /0039848 and 2014/0248210, US Patent Application Publication Nos. 2011/0028662, US Patent Application Publication Nos. 2013/0337070, US Patent Application Publication Nos. 2014/0235803, 2014/0147387, 2013/0196450 and 2012/0141797 and US Patent Nos. 8,574,549, US Patent No. 8,685,538 and US Patent Application Publication Nos. 2013/0323182, US Patent Application Publication Nos. 2008/0241223; U.S. Patent No. 5,501,856; 5,164,188; 4,863,457; and 3,710,795; EP488401; and EP430539

본 발명은 다른 것들 중에서도, 가용성 생물분자에 결합하고 그의 생물학적 활성을 억제하는 조성물 및 그의 약학 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 조성물이 유용한 많은 응용을 제공한다. 예를 들어, 본원에 개시된 조성물은 암세포와 같은 세포의 증식, 성장 및/또는 생존을 억제하는데 유용하다. 다른 예에서, 본원에 개시된 조성물은 독소(예를 들어, 동물독소, 세균 독소 및/또는 식물 독소), 바이러스, 또는 개체의 순환계 내의 다른 외래 화합물에 결합하고 중화시키는 데 유용할 수 있다. The present invention provides, among other things, compositions and pharmaceutical compositions thereof that bind to and inhibit the biological activity of soluble biomolecules. The present invention also provides many applications in which the composition is useful. For example, the compositions disclosed herein are useful for inhibiting proliferation, growth and/or survival of cells, such as cancer cells. In another example, the compositions disclosed herein may be useful for binding to and neutralizing toxins (eg, animal toxins, bacterial toxins, and/or plant toxins), viruses, or other foreign compounds within the circulatory system of a subject.

"폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 상호교환되어 사용되며, 길이 또는 번역후 변형에 관계없이, 임의의 펩티드-연결된 아미노산 쇄를 의미한다.“Polypeptide,” “peptide” and “protein” are used interchangeably and refer to any peptide-linked chain of amino acids, regardless of length or post-translational modification.

달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 관련되는 기술분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 바람직한 방법과 물질이 하기에 개시되지만, 본원에 개시된 것들과 유사하거나 동등한 방법과 물질 또한 본원에 개시된 방법과 조성물의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있다. 본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전체가 참고로 통합된다. Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention pertains. Although preferred methods and materials are disclosed below, methods and materials similar or equivalent to those disclosed herein may also be used in the practice or testing of the methods and compositions disclosed herein. All publications, patent applications, patents and other references mentioned herein are incorporated by reference in their entirety.

본원은 전술한 양태 및 실시양태의 임의의 것들의 모든 조합, 및 상세한 설명과 실시예에 개시된 임의의 실시양태와의 조합을 포함한다.This disclosure includes all combinations of any of the foregoing aspects and embodiments, and combinations with any of the embodiments disclosed in the specification and examples.

도 1은 TNF 수용체(TNFR)의 가용성 형태에 결합하는 입자의 예시적인 실시양태를 도시한다. 입자는 1 ㎛3이다. 입자의 내면 표면은 고정된 TNF를 함유하며, 이것은 가용성 TNFR에 결합하여 그의 천연 리간드로부터 TNFR을 격리(소거)시킬 수 있다.
도 2는 TNF 수용체(TNFR)의 가용성 형태에 결합하는 입자의 예시적인 실시양태를 도시한다. 고리 모양의 입자는 175 nm의 직경을 갖는다. 입자의 내면 표면은 고정된 TNF를 함유하며, 이것은 가용성 TNFR에 결합하여 그의 천연 리간드로부터 TNFR을 격리(소거)시킬 수 있다.
도 3은 TNF 수용체(TNFR)의 가용성 형태에 결합하는 입자의 예시적인 실시양태를 도시한다. 도면의 좌측의 입자는 최장 치수가 100 내지 150 nm인 코어를 가진 8면체이다. 도면의 우측의 입자는 최장 치수가 200 내지 300 nm인 코어를 가진 20면체이다. 각 입자는 추가로 코어 다면체 구조의 꼭짓점으로부터 밖으로 향하는 분자 돌출부를 포함한다. 돌출부는 입자에 결합된 TNF와 세포 표면 TNFR 사이의 상호작용을 억제하는 "세포 반발자(repeller)"로서 작용한다.1 depicts an exemplary embodiment of a particle that binds to a soluble form of the TNF receptor (TNFR). The particles are 1 μm 3 . The inner surface of the particle contains immobilized TNF, which can bind to and sequester (clear) TNFR from its natural ligands.
2 depicts an exemplary embodiment of a particle that binds to a soluble form of the TNF receptor (TNFR). The ring-shaped particles have a diameter of 175 nm. The inner surface of the particle contains immobilized TNF, which can bind to and sequester (clear) TNFR from its natural ligands.
3 depicts an exemplary embodiment of a particle that binds to a soluble form of the TNF receptor (TNFR). The particle on the left side of the figure is an octahedron with a core of 100 to 150 nm in longest dimension. The particle on the right side of the figure is an icosahedron with a core of 200 to 300 nm in longest dimension. Each particle further includes molecular protrusions pointing outward from the vertices of the core polyhedral structure. The protrusions act as "cell repellers" that inhibit the interaction between TNF bound to the particle and cell surface TNFR.

본 발명은 가용성 생물분자를 그의 천연 환경으로부터 격리시켜, 예를 들어, 가용성 생물분자의 생물학적 활성을 억제하기 위한 조성물과 방법을 특징으로 한다. 예를 들어, 본 발명은 가용성 생물분자에 선택적으로 결합하는 제제(예를 들어, 입자의 표면에 고정된)를 포함하는 표면을 가진, 입자 또는 다수의 입자를 제공한다. 가용성 생물분자가 제제에 의해 결합되면, 가용성 생물분자가 가용성 생물분자의 다른 천연 결합 파트너와 상호작용하는 능력이 감소되도록(예를 들어, 상당히 감소된 능력 또는 무능력) 생물분자는 입자에 의해 격리된다. 따라서, 가용성 생물분자는 불활성이 된다. The present invention features compositions and methods for isolating soluble biomolecules from their natural environment, eg, inhibiting the biological activity of soluble biomolecules. For example, the present invention provides a particle or plurality of particles having a surface comprising an agent that selectively binds to a soluble biomolecule (eg, immobilized to the surface of the particle). Once the soluble biomolecule is bound by the agent, the biomolecule is sequestered by the particle such that the ability of the soluble biomolecule to interact with the soluble biomolecule's other natural binding partners is reduced (e.g., significantly reduced ability or inability). . Thus, soluble biomolecules become inactive.

I. 생물분자 I. Biomolecule

가용성 생물분자는 일반적으로 특이적 결합 쌍의 첫번째 구성원이다. 본원에서 사용된 "결합 파트너", "특이적 결합 파트너" 또는 "특이적 결합 쌍의 구성원"은 일반적으로 상당한 친화성과 특이성으로 서로 결합하는 한 쌍의 결합 구성원의 임의의 구성원을 포함한다. 한 쌍의 결합 파트너는 샘플의 적어도 대부분 또는 적어도 실질적으로 모든 다른 성분들을 실질적으로 배제하는 정도로 서로 결합할 수 있고/있거나 다른 것 중에서도 약 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 또는 10-8 M 미만의 해리 상수를 가질 수 있다. 한 쌍의 결합 파트너는 특이성 및 친화성을 협동적으로 증가시키기 위해 다수의 원자 상호작용에 의존하는 소정의 방식으로 서로 "맞을" 수 있다. 결합 파트너는 생물학적 시스템(예를 들어, 수용체-리간드 상호작용), 화학적 상호작용으로부터 및/또는 다른 것들 중에서도 분자 임프린팅 기술에 의해 유도될 수 있다. 특이적 결합 쌍으로도 불리는, 예시적인 대응 결합 파트너 쌍은 표 1에 나타나며, "제1" 및 "제2"는 임의적이며 상호교환가능하다. A soluble biomolecule is usually the first member of a specific binding pair. As used herein, “binding partner,” “specific binding partner,” or “member of a specific binding pair” includes any member of a pair of binding members that binds to each other, generally with significant affinity and specificity. A pair of binding partners can bind to each other to an extent that substantially excludes at least a majority or at least substantially all other components of the sample and/or is capable of binding to each other by about 10 −4 , 10 −5 , 10 −6 , 10 −7 , or a dissociation constant of less than 10 −8 M. A pair of binding partners can "fit" each other in certain ways that rely on multiple atom interactions to cooperatively increase specificity and affinity. Binding partners may be derived from biological systems (eg, receptor-ligand interactions), chemical interactions, and/or by molecular imprinting techniques, among others. Exemplary corresponding binding partner pairs, also referred to as specific binding pairs, are shown in Table 1, where "first" and "second" are arbitrary and interchangeable.

본원에서 사용된 용어 "생물분자"는 살아있는 유기체에 영향을 줄 수 있는 임의의 분자를 말한다. 일부 실시양태에서, 생물분자는 리튬 또는 납과 같은 원자이다(예를 들어, 생물분자는 금속 양이온일 수 있다). 일부 실시양태에서, 생물분자는 원자 또는 금속 이온이 아니다. 예를 들어, 생물분자는 유기 화합물 또는 무기 화합물과 같은 분자일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물분자는 와파린과 같은 약물이다. 생물분자는 디아세틸모르핀과 같은 향정신성 약물일 수 있다. 생물분자는 독, 독소 또는 뱀독일 수 있다. 생물분자는 알레르겐일 수 있다. 생물분자는 발암물질일 수 있다. 생물분자는 신경작용제와 같은 화학 무기 제제일 수 있다. 생물분자는 바이러스 또는 비로이드일 수 있다. 생물분자는 호르몬, 사이토카인, 신경전달자, 가용성 세포외 수용체, 항체 또는 가용성 매트릭스 단백질과 같은 유기체에 내인성(endogenous)인 분자일 수 있다. 생물분자는 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 탄수화물 또는 당일 수 있다. 생물분자는 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 탄수화물 또는 당을 포함할 수 있다. 생물분자는 지질, 스테로이드 또는 콜레스테롤일 수 있다. As used herein, the term "biomolecule" refers to any molecule capable of affecting a living organism. In some embodiments, the biomolecule is an atom such as lithium or lead (eg, the biomolecule can be a metal cation). In some embodiments, a biomolecule is not an atom or metal ion. For example, a biomolecule can be a molecule such as an organic compound or an inorganic compound. In some embodiments, the biomolecule is a drug such as warfarin. The biomolecule may be a psychoactive drug such as diacetylmorphine. The biomolecule may be poison, toxin or snake venom. A biomolecule may be an allergen. Biomolecules may be carcinogens. The biomolecule may be a chemical weapon agent such as a nerve agent. A biomolecule may be a virus or a viroid. A biomolecule may be a molecule endogenous to an organism such as a hormone, cytokine, neurotransmitter, soluble extracellular receptor, antibody or soluble matrix protein. A biomolecule can be a peptide, polypeptide, protein, nucleic acid, carbohydrate or sugar. Biomolecules may include peptides, polypeptides, proteins, nucleic acids, carbohydrates or sugars. Biomolecules can be lipids, steroids or cholesterol.

생물분자는 세포 표면 수용체의 리간드일 수 있다. 리간드는 천연-발생 리간드 또는 합성 리간드일 수 있다. 리간드는 수용체의 천연 리간드(예를 들어, 생체 내(in vivo)에서 개체에 의해 생산되는 리간드) 또는 비천연 리간드(예를 들어, 바이러스 또는 약물과 같은, 개체내로 도입되는 리간드)일 수 있다. 생물분자는 세포질 수용체 또는 핵 수용체에 대한 리간드일 수 있다. The biomolecule may be a ligand of a cell surface receptor. A ligand can be a naturally-occurring ligand or a synthetic ligand. A ligand can be a receptor's natural ligand (eg, a ligand produced by a subject in vivo ) or a non-natural ligand (eg, a ligand introduced into a subject, such as a virus or a drug). A biomolecule may be a ligand for a cytoplasmic receptor or a nuclear receptor.

특이적 결합 쌍의 예Examples of specific binding pairs 제1 결합 파트너first binding partner 제2 결합 파트너Second binding partner 세포 표면 수용체(예를 들어, TNF 수용체)Cell surface receptors (eg, TNF receptor) 천연 리간드(예를 들어, TNFα)natural ligands (e.g., TNFα) 바이러스 코트 또는 외피 단백질(예를 들어, HIV-1 gp120)Viral coat or envelope proteins (e.g., HIV-1 gp120) 대응 세포 수용체(예를 들어, CD4)Corresponding cell receptor (e.g., CD4) 보툴리눔 독소botulinum toxin 시냅토태그민 II 세포 표면 수용체synaptotagmin II cell surface receptor 가용성 수용체(예를 들어, 가용성 TNFR 또는 가용성 IL-2 수용체)Soluble receptors (e.g., soluble TNFR or soluble IL-2 receptor) 천연 리간드(예를 들어, TNFα 또는 IL-2)Natural ligand (e.g., TNFα or IL-2)

상기에 개시한 바와 같이, 종양 세포는 사이토카인 수용체의 가용성 형태를 발산(shedding)함으로써 숙주 면역 감시로부터 자신을 보호하는 것으로 알려져 있으며, 가용성 수용체는 종양 미세환경에서 면역 세포에 의해 생산된 사이토카인에 결합한다. 예를 들어, 암세포는 IL-2 수용체 및 TRAIL 수용체와 같은 TNF 수용체 및 다른 사이토카인 수용체의 가용성 형태를 발산한다. 이들 가용성 수용체는 TNFα, IL-2, 및 TRAIL의 프로-세포사멸(pro-apoptotic) 효과를 세포로부터 덜어줌으로써 암세포에 성장 이점을 부여한다. 카르파토바 등(Karpatova et al.)은 종양 침윤 및 전이를 증대시킬 수 있는 인간 암세포에 의한 67kD 라미닌 수용체의 발산을 발표하였다((1996) J Cell Biochem 60(2):226-234). 따라서, 본원에서 개시된 입자는 예를 들어, 암의 치료에 사용하기 위해, 세포 표면 수용체 단백질의 가용성 형태를 소거하기 위해 조작될 수 있다. As described above, tumor cells are known to protect themselves from host immune surveillance by shedding soluble forms of cytokine receptors, which respond to cytokines produced by immune cells in the tumor microenvironment. combine For example, cancer cells shed soluble forms of TNF receptors and other cytokine receptors, such as the IL-2 receptor and the TRAIL receptor. These soluble receptors confer a growth advantage to cancer cells by relieving the cells of the pro-apoptotic effects of TNFα, IL-2, and TRAIL. Karpatova et al. reported the release of a 67kD laminin receptor by human cancer cells that could enhance tumor invasion and metastasis ((1996) J Cell Biochem 60(2) :226-234). Thus, the particles disclosed herein can be engineered to scavenge soluble forms of cell surface receptor proteins, for example, for use in the treatment of cancer.

따라서, 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 암 세포에 의해 발현되고/되거나 세포 표면 수용체 단백질은 암세포에 의해 세포 표면 수용체 단백질의 가용성 형태로서 발산되는 단백질이다. 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 활성화되면, 세포사멸을 유도한다(예를 들어, 사멸 수용체). 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 단백질(예를 들어, TNFR-1 또는 TNFR-2)이다. 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 Fas 수용체 단백질이다. 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 TNF-관련 세포사멸-유도 리간드 수용체(TRAILR) 단백질, 4-1BB 수용체 단백질, CD30 단백질, EDA 수용체 단백질, HVEM 단백질, 림프독소 베타 수용체 단백질, DR3 단백질 또는 TWEAK 수용체 단백질이다. 일부 실시양태에서, 세포 표면 수용체 단백질은 인터루킨 수용체 단백질, 예를 들어, IL-2 수용체 단백질이다. 그러한 실시양태에서, 표적 가용성 생물분자는 예를 들어, 암세포로부터 발산되는, 세포 표면 수용체의 가용성 형태일 수 있다. Thus, in some embodiments, a cell surface receptor protein is expressed by cancer cells and/or a cell surface receptor protein is a protein that is shed by cancer cells as a soluble form of a cell surface receptor protein. In some embodiments, a cell surface receptor protein, when activated, induces cell death (eg, death receptor). In some embodiments, the cell surface receptor protein is a tumor necrosis factor receptor (TNFR) protein (eg, TNFR-1 or TNFR-2). In some embodiments, the cell surface receptor protein is a Fas receptor protein. In some embodiments, the cell surface receptor protein is a TNF-related apoptosis-inducing ligand receptor (TRAILR) protein, 4-1BB receptor protein, CD30 protein, EDA receptor protein, HVEM protein, lymphotoxin beta receptor protein, DR3 protein, or TWEAK It is a receptor protein. In some embodiments, the cell surface receptor protein is an interleukin receptor protein, such as an IL-2 receptor protein. In such embodiments, the target soluble biomolecule may be a soluble form of a cell surface receptor, e.g., shed from cancer cells.

당업자는 또한 본원에 개시된 입자가 또한 그 생물학적 활성이 예를 들어, 바람직하지 않을 수 있는 매우 다양한 가용성 생물분자를 소거하기 위해 유용함을 이해할 것이다. 예를 들어, 입자는 바이러스 캡시드 또는 외피의 성분에 결합하여 개체의 혈액으로부터 바이러스를 격리하기 위해 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 입자는 개체의 순환계에서 독소(예를 들어, 세균 독소, 식물 독소 및 뱀독의 하나 이상의 성분과 같은 동물 독소)에 결합하여 격리하기 위해 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 입자는 개체의 순환계로부터 소분자(예를 들어, 불법 마약 또는 소분자 독소)에 결합하여 격리하기 위해 조작될 수 있다. 그러한 실시양태에서, 입자는 예를 들어, 뱀 또는 곤충에 물린 후, 신체로부터 독소를 제거하기 위해 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 입자는 (예를 들어, 과민성 면역 반응을 야기하는 항원을 소거함으로써) 개체에서 과민성 충격을 치료하거나, 예방하거나, 개시를 지연시키거나 그 심각성을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. Those skilled in the art will also appreciate that the particles disclosed herein are also useful for scavenging a wide variety of soluble biomolecules, the biological activity of which may, for example, be undesirable. For example, the particle can be engineered to sequester the virus from a subject's blood by binding to a component of the viral capsid or envelope. In some embodiments, the particles can be engineered to bind to and sequester toxins (eg, bacterial toxins, plant toxins, and animal toxins such as one or more components of snake venom) in the subject's circulatory system. In some embodiments, the particle can be engineered to bind and sequester a small molecule (eg, an illicit drug or small molecule toxin) from the individual's circulatory system. In such embodiments, the particles may be useful for removing toxins from the body, for example after a snake or insect bite. In some embodiments, the particles can be used to treat, prevent, delay the onset or reduce the severity of anaphylaxis in an individual (eg, by clearing antigens that cause an overactive immune response).

일부 실시양태에서, 가용성 생물분자는 제제에 의해 결합되는 바이러스, 예를 들어, 바이러스 구조 단백질(예를 들어, 바이러스 캡시드 또는 바이러스 외피 단백질)이다. 그러한 실시양태에서, 입자는 예를 들어, 바이러스에 감염되거나 바이러스에 감염될 위험이 있는 개체를 위한 항-바이러스 치료법으로서 유용하다. In some embodiments, the soluble biomolecule is a virus, eg, a viral structural protein (eg, a viral capsid or viral envelope protein) bound by the agent. In such embodiments, the particles are useful, for example, as an anti-viral therapy for individuals infected with or at risk of contracting a virus.

일부 실시양태에서, 가용성 생물분자는 소분자 또는 거대분자이다. 일부 실시양태에서, 가용성 생물분자의 최장 치수는 600 nm 이하(예를 들어, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 또는 25 nm 미만)이다. 생물분자는 약 1 Å 내지 약 1 ㎛, 예를 들어, 약 1 Å 내지 약 100 nm, 약 1 Å 내지 약 20 nm, 약 1 nm 내지 약 1 ㎛, 약 1 nm 내지 약 100 nm 또는 약 1 nm 내지 약 20 nm의 분자 반경을 가질 수 있다. 생물분자는 약 3 amu 내지 약 107 amu, 예를 들어, 약 100 amu 내지 약 107 amu, 약 3 amu 내지 약 106 amu, 약 3 amu 내지 약 105 amu, 약 100 amu 내지 약 106 amu 또는 약 400 amu 내지 약 106 amu의 분자량을 가질 수 있다. In some embodiments, soluble biomolecules are small or macromolecules. In some embodiments, the longest dimension of the soluble biomolecule is 600 nm or less (eg, less than 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, or 25 nm). The biomolecule may be about 1 Å to about 1 μm, for example about 1 Å to about 100 nm, about 1 Å to about 20 nm, about 1 nm to about 1 μm, about 1 nm to about 100 nm or about 1 nm to about 20 nm in molecular radius. The biomolecule may be about 3 amu to about 10 7 amu, such as about 100 amu to about 10 7 amu, about 3 amu to about 10 6 amu, about 3 amu to about 10 5 amu, about 100 amu to about 10 6 amu or from about 400 amu to about 10 6 amu.

본원에서 사용된 용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합하는", "선택적 결합", "선택적으로 결합하는" 및 유사한 문법적 용어는 생리학적 조건하에서 상대적으로 안정한 복합체를 두 분자가 형성함을 말한다. 전형적으로, 결합은 결합 상수(ka)가 106 M-1s-1보다 높을 때 특이적으로 간주된다. 따라서, 특이적 결합 쌍의 제1 구성원은 적어도 106 (또는 더 큰)(예를 들어, 적어도 107, 108, 109, 1010, 1011, 1012, 1013, 1014, 또는 1015 이상 또는 더 큰) M-1s-1의 ka로 결합 쌍의 제2 구성원에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 선택적 상호작용은 10-3 (예를 들어, 8 x 10-4, 5 x 10-4, 2 x 10-4, 10-4 또는 10-5) s-1 이하의 해리 상수(kd)를 갖는다. As used herein, the terms "specific binding", "specifically binds", "selective binding", "selectively binds" and similar grammatical terms refer to two molecules forming a complex that is relatively stable under physiological conditions. say Typically, binding is considered specific when the binding constant (k a ) is higher than 10 6 M −1 s −1 . Thus, the first member of a specific binding pair is at least 10 6 (or greater) (eg, at least 10 7 , 10 8 , 10 9 , 10 10 , 10 11 , 10 12 , 10 13 , 10 14 , or 10 15 or greater) M -1 s -1 of ka to specifically bind to the second member of the binding pair. In some embodiments, a selective interaction has a dissociation constant of 10 −3 (eg, 8×10 −4 , 5×10 −4 , 2×10 −4 , 10 −4 , or 10 −5 ) s −1 or less. (k d ).

일부 실시양태에서, 선택적 상호작용은 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 또는 10-12 M 미만의 KD를 갖는다. 평형 상수 KD는 운동 속도 상수의 비 -kd/ka이다. 일부 실시양태에서, 선택적 상호작용은 1 x 10-9 M 미만의 KD를 갖는다. In some embodiments, the selective interaction has a K D of less than 10 −8 , 10 −9 , 10 −10 , 10 −11 , or 10 −12 M. The equilibrium constant K D is the ratio of the kinetic rate constant -k d /k a . In some embodiments, a selective interaction has a K D of less than 1 x 10 -9 M.

본원에서 사용된 두 분자 사이의 상호작용을 말할 때 용어 "상호작용"은 분자 서로간의 물리적 접촉(예를 들어, 결합)을 말한다. 일반적으로, 그러한 상호작용은 상기 분자 중 하나 또는 둘 모두의 활성(생물학적 효과를 생산함)을 야기한다. 그러한 상호작용의 억제는 상호작용에 관련된 하나 이상의 분자의 활성의 파괴를 야기한다.As used herein, the term "interaction" when referring to an interaction between two molecules refers to physical contact (eg, bonding) between the molecules. Generally, such interaction results in activation of one or both of the molecules (producing a biological effect). Inhibition of such interactions results in disruption of the activity of one or more molecules involved in the interactions.

본원에서 사용된 용어 "억제하는" 및 그의 문법적 등가물은 특정 작용, 기능 또는 상호작용의 감소, 제한 및/또는 차단을 말한다. 일 실시양태에서, 이 용어는 주어진 결과물 또는 파라미터의 수준을 대응하는 대조군에서의 양보다 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 적거나 또는 그 미만인 양(예를 들어, 특이적 결합 쌍의 두 구성원 사이의 상호작용의 배경 수준)으로 감소시키는 것을 말한다. 주어진 결과물 또는 파라미터의 감소된 수준이 결과물 또는 파라미터의 절대적 부재를 의미할 필요는 없지만 그럴 수도 있다. 본 발명은 결과물 또는 파라미터를 전적으로 제거하는 방법을 요구하지 않으며 이에 제한되지 않는다. 실질적인 억제는 예를 들어, 두 생물분자(예를 들어, 결합 쌍의 제1 및 제2 구성원) 사이의 상호작용의 적어도 50 (예를 들어, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 또는 95 이상) % 억제이다. The term "inhibiting" and its grammatical equivalents as used herein refers to reducing, limiting and/or blocking a particular action, function or interaction. In one embodiment, the term refers to a level of a given outcome or parameter that is at least 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, An amount less than or equal to 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% (e.g., the interaction between two members of a specific binding pair) background level of action). A reduced level of a given outcome or parameter need not, but may, imply an absolute absence of the outcome or parameter. The present invention does not require, and is not limited to, methods that completely eliminate products or parameters. Substantial inhibition is, for example, at least 50 (eg, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85) of the interaction between two biomolecules (eg, first and second members of a binding pair) , 90, or 95 or more) % inhibition.

다른 생물분자에 대한 하나의 생물분자의 상호작용을 검출하거나, 친화성을 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 두 생물분자의 결합은 생물층 간섭계법(BioLayer Interferometry)(BLI), 웨스턴 블롯, 닷 블롯, 표면 플라스몬 공명법(SPR),효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 알파스크린(AlphaScreen)® 또는 알파리사(AlphaLISA)® 분석 또는 질량분광법 기반 방법과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 다양한 기술을 이용하여 검출 및/또는 정량될 수 있다. Methods for detecting the interaction of one biomolecule with another biomolecule or measuring affinity are known in the art. For example, the binding of two biomolecules can be detected by BioLayer Interferometry (BLI), western blot, dot blot, surface plasmon resonance (SPR), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), alphascreen ( AlphaScreen® or AlphaLISA® assays or mass spectrometry-based methods, such as, but not limited to, can be detected and/or quantified using a variety of techniques.

일부 실시양태에서, 결합은 두 생물분자의 상호작용의 동역학적 파라미터를 규명하기 위하여 당업계에 알려진 임의의 SPR-기반 분석을 이용하여 분석될 수 있다. 비아코어(BIAcore) 장비(비아코어 에이비(Biacore AB); 스웨덴 웁살라);라시스(lAsys) 장비(어피니티 센서(Affinity Sensors); 매사추세츠주, 프랭클린); 아이비스(IBIS) 시스템(윈저 사이언티픽 리미티드(Windsor Scientific Limited); 영국, 벅스), 에스피알-셀리아(SPR-CELLIA) 시스템(니폰 레이저 앤드 일렉트로닉스 랩(Nippon Laser and Electronics Lab); 일본, 호카이도), 및 SPR 디텍터 스프리타(Detector Spreeta)(텍사스 인스트루먼츠(Texas Instruments); 텍사스주, 달라스)를 포함하며, 이에 제한되지 않는 구매가능한 임의의 SPR 장비가 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있다. 예를 들어, Mullett et al. (2000) Methods 22: 77-91 ; Dong et al. (2002) Reviews in Mol Biotech 82: 303-323; Fivash et al. (1998) Curr Opin Biotechnol 9: 97-101; 및 Rich et al. (2000) Curr Opin Biotechnol 11 : 54-61을 참고한다. In some embodiments, binding can be analyzed using any SPR-based assay known in the art to characterize the kinetic parameters of the interaction of two biomolecules. BIAcore equipment (Biacore AB; Uppsala, Sweden); lAsys equipment (Affinity Sensors; Franklin, MA); IBIS system (Windsor Scientific Limited; Bucks, UK), SPR-CELLIA system (Nippon Laser and Electronics Lab; Hokkaido, Japan) , and the SPR detector Spreeta (Texas Instruments; Dallas, TX), including but not limited to, can be used in the methods disclosed herein. For example, Mullett et al. (2000) Methods 22 :77-91; Dong et al. (2002) Reviews in Mol Biotech 82 : 303-323; Fivash et al. (1998) Curr Opin Biotechnol 9 :97-101; and Rich et al. (2000) Curr See Opin Biotechnol 11 :54-61.

일부 실시양태에서, 두 생물분자 사이의 생물분자 상호작용은 옥테트(Octet) (포르테바이오 인크.(ForteBio Inc.))에서의 BLI를 이용하여 분석할 수 있다. BLI는 실시간으로 바이오센서 팁 상의 단백질 층의 두께 변화를 측정하여 바이오센서 팁에 고정된 리간드와 용액 내의 분석물 사이의 결합을 감지하는 무라벨 광학 분석 기술이다. In some embodiments, biomolecular interactions between two biomolecules can be analyzed using BLI in Octet (ForteBio Inc.). BLI is a no-label optical analysis technique that detects the binding between a ligand immobilized on a biosensor tip and an analyte in a solution by measuring a change in the thickness of a protein layer on a biosensor tip in real time.

일부 실시양태에서, 알파스크린(펄킨엘머(PerkinElmer)) 분석은 두 생물분자의 결합을 규명하기 위해 이용될 수 있다. 두문자어 알파(ALPHA)는 증폭 발광 근접성 균질 분석(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)을 나타낸다. 알파스크린은 공여체 및 수용체 비드 사이의 에너지 전달에 의해 생성된 신호를 측정함으로써 공여체 및 수용체 비드에 부착된 분자들 사이의 결합을 감지하는 비드-기반 근접성 분석이다.(예를 들어, Eglen et al. (2008) Curr Chem Genomics 1:2-10 참고). In some embodiments, an AlphaScreen (PerkinElmer) assay can be used to characterize the association of two biomolecules. The acronym ALPHA stands for Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay. AlphaScreen is a bead-based proximity assay that detects binding between molecules attached to donor and acceptor beads by measuring the signal produced by the transfer of energy between donor and acceptor beads (eg, Eglen et al. (2008) Curr Chem Genomics 1 :2-10).

일부 실시양태에서, 알파리사®(펄킨엘머) 분석이 두 생물분자의 결합을 규명하기 위해 사용될 수 있다. 알파리사는 유로퓸-함유 수용체 비드를 포함시키기 위해 상기에 개시한 알파스크린 분석으로부터 변형되며 전통적인 ELISA 분석에 대한 대안으로 기능한다.(예를 들어, Eglen et al. (2008) Curr Chem Genomics 1 :2-10 참고.) In some embodiments, the AlphaLisa® (PerkinElmer) assay can be used to characterize the association of two biomolecules. AlphaLisa is modified from the AlphaScreen assay described above to include europium-containing receptor beads and serves as an alternative to traditional ELISA assays (e.g., Eglen et al. (2008) Curr Chem See Genomics 1 :2-10.)

경쟁적 및 비경쟁적 면역분석을 비롯한 다양한 면역분석 기술이 이용될 수 있다. 용어 "면역분석"은 유세포분석, FACS, 효소 면역분석(EIA), 예를 들어, 효소 증폭 면역분석 기술(enzyme multiplied immunoassay technique)(EMIT), 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), IgM 항체 포획 ELISA(MAC ELISA) 및 미세입자 효소 면역분석(MEIA), 또한 모세관 전기영동 면역분석(CEIA), 방사성-면역분석(RIA), 면역방사측정법(immunoradiometric assays)(IRMA), 형광 편광 면역분석(FPIA) 및 화학발광 분석(CL)을 제한없이 포함하는 기술을 포함한다. 소망하는 경우, 그러한 면역분석은 자동화될 수 있다. 면역분석은 또한 레이저 유도 형광과 함께 사용될 수 있다. 유동-주입 리포좀 면역분석 및 리포좀 면역센서와 같은 리포좀 면역분석이 또한 본 발명에서의 사용에 적합하다. 또한, 예를 들어, 생물분자 복합체의 형성이 마커 농도의 함수로서 최고 속도 신호로 변환되는 광 산란 증가를 야기하는 비탁분석이 본 발명의 방법에서 사용하기에 적합하다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 항온처리 생성물은 ELISA, RIA, 형광면역분석(FIA) 또는 가용성 입자 면역분석(SPIA)에 의해 검출된다. A variety of immunoassay techniques can be used, including competitive and non-competitive immunoassays. The term "immunoassay" includes flow cytometry, FACS, enzyme immunoassay (EIA), e.g., enzyme multiplied immunoassay technique (EMIT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), IgM antibody capture ELISA (MAC ELISA) and microparticle enzyme immunoassay (MEIA), also capillary electrophoretic immunoassay (CEIA), radio-immunoassay (RIA), immunoradiometric assays (IRMA), fluorescence polarization immunoassay (FPIA) ) and chemiluminescence analysis (CL). If desired, such immunoassays can be automated. Immunoassays can also be used with laser induced fluorescence. Liposomal immunoassays such as flow-injection liposome immunoassays and liposomal immunosensors are also suitable for use in the present invention. Also suitable for use in the methods of the present invention are nephelometry, for example, in which the formation of biomolecular complexes results in an increase in light scattering that is converted to a peak velocity signal as a function of marker concentration. In a preferred embodiment of the invention, the products of the incubation are detected by ELISA, RIA, Fluorescence Immunoassay (FIA) or Soluble Particle Immunoassay (SPIA).

일부 실시양태에서, 두 생물분자의 결합은 시차주사형광측정법(DSF) 및 시차 정적 광산란(differential static light scattering)(DSLS)과 관련된 열변성 방법을 이용하여 분석할 수 있다. In some embodiments, the binding of two biomolecules can be assayed using thermal denaturation methods involving differential scanning fluorescence (DSF) and differential static light scattering (DSLS).

일부 실시양태에서, 두 생물분자의 결합은 질량 분광법에 결합된 친화성 선별(affinity selection coupled to mass spectrometry)(AS-MS) 플랫폼과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 질량분광법 기반 방법을 이용하여 분석될 수 있다. 이것은 단백질과 시험 화합물이 항온처리되고, 미결합 분자는 세척하여 제거되고 단백질-리간드 복합체는 탈복합체화 단계에 이어 리간드 동정을 위해 MS에 의해 분석되는 무표지 방법이다. In some embodiments, the association of two biomolecules is analyzed using a mass spectrometry-based method such as, but not limited to, an affinity selection coupled to mass spectrometry (AS-MS) platform. can This is a label-free method in which the protein and test compound are incubated, unbound molecules are removed by washing and the protein-ligand complex is analyzed by MS for ligand identification following a decomplexation step.

일부 실시양태에서, 두 생물분자의 결합은 면역분석에 의해 또는 크로마토그래피 검출에 의해, 예를 들어, 방사성표지된(예를 들어, 32P, 35S, 14C 또는 3H), 형광 표지된(예를 들어, FITC), 또는 효소적 표지된 생물분자와 같은 검출가능하게 표지된 단백질을 이용함으로써 정량될 수 있다. In some embodiments, the association of two biomolecules is determined by immunoassay or by chromatographic detection, e.g., radiolabeled (e.g., 32 P, 35 S, 14 C, or 3 H), fluorescently labeled (eg, FITC), or a detectably labeled protein such as an enzymatically labeled biomolecule.

일부 실시양태에서, 본 발명은 직접적으로 또는 간접적으로 두 생물분자 사이의 상호작용 정도를 측정함에 있어서 형광 편광 분석 및 형광 공명 에너지 전이(FRET) 분석의 사용을 포함한다. In some embodiments, the present invention includes the use of fluorescence polarization analysis and fluorescence resonance energy transfer (FRET) analysis in determining, directly or indirectly, the degree of interaction between two biomolecules.

II. 입자 II. particle

본원에서 사용된 용어 "입자"는 알루미나, 금속(예를 들어, 금 또는 백금), 유리, 실리카, 라텍스, 플라스틱, 아가로즈, 폴리아크릴아미드, 메타크릴레이트 또는 임의의 중합성 물질과 같은 임의의 물질을 포함할 수 있으며 임의의 크기 및 모양일 수 있는 작은 덩어리를 말한다. 일부 실시양태에서, 입자 또는 입자들은 규소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2013/011764호, WO 2013/029278호 및 WO 2014/151381호 및 미국 특허 출원 공개 제2014/0271886호를 참고하며, 각각의 내용은 그 전체가 참고로 본 발명에 통합된다. 일부 실시양태에서, 입자는 전분을 포함하거나 전분으로 이루어질 수 있다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2010/084088호 참고). As used herein, the term “particle” refers to any material such as alumina, metal (eg gold or platinum), glass, silica, latex, plastic, agarose, polyacrylamide, methacrylate or any polymeric material. Small lumps that can contain matter and can be of any size and shape. In some embodiments, the particle or particles may include silicon. See, for example, International Patent Application Publication Nos. WO 2013/011764, WO 2013/029278 and WO 2014/151381, and US Patent Application Publication No. 2014/0271886, the contents of each of which are incorporated herein by reference in their entirety. integrated into In some embodiments, the particles may comprise or consist of starch (see, eg, WO 2010/084088).

또한 본 발명은 입자의 집합을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 다수의 입자는 좁거나 넓은 다분산성을 가진다. 본원에서 사용된 "다분산성"은 특정 입자 집단 내의 입자들의 크기 범위를 말한다. 즉, 매우 다분산성인 집단은 평균 크기가 1 미크론이며 개별 입자는 0.1 내지 4 미크론 범위인 입자를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, "좁은 다분산성"이 바람직하다. 즉, 특정 평균 입자 크기가 주어질 때, 집단 내의 개별 입자는 평균 입자 크기로부터 ±20% 이하, 바람직하게는 ± 15% 이하, 그리고 가장 바람직하게는 ± 10% 이하만큼 상이한 것이 현재로서는 바람직하다. 보다 구체적으로, 입자 집단은 바람직하게는 약 1 미크론 이하의 평균 입자 크기를 갖는다. 따라서, 만일 1 미크론의 평균 입자 크기가 선택된다면, 집단 내의 개별 입자는 가장 바람직하게는 약 0.8 내지 약 1.2 미크론의 범위 이내일 것이다. 일부 실시양태에서, 입자 집단은 약 0.3 내지 약 1 미크론, 예를 들어, 약 0.4 내지 약 0.9, 약 0.5 내지 약 0.9, 약 0.4 내지 약 0.8, 약 0.5 내지 약 0.7, 약 0.3 내지 약 0.9, 또는 약 0.3 내지 약 0.7 미크론의 평균 입자 크기를 갖는다. The invention also features an aggregation of particles. In some embodiments, the plurality of particles have narrow or broad polydispersity. As used herein, “polydispersity” refers to the size range of particles within a particular particle population. That is, a highly polydisperse population may contain particles with an average size of 1 micron and individual particles ranging from 0.1 to 4 microns. In some embodiments, “narrow polydispersity” is preferred. That is, it is presently preferred that, given a particular average particle size, the individual particles in the population differ from the average particle size by no more than ±20%, preferably no more than ±15%, and most preferably no more than ±10%. More specifically, the particle population preferably has an average particle size of about 1 micron or less. Thus, if an average particle size of 1 micron is chosen, the individual particles in the population will most preferably be within the range of about 0.8 to about 1.2 microns. In some embodiments, the particle population is from about 0.3 to about 1 micron, e.g., from about 0.4 to about 0.9, from about 0.5 to about 0.9, from about 0.4 to about 0.8, from about 0.5 to about 0.7, from about 0.3 to about 0.9, or It has an average particle size of about 0.3 to about 0.7 microns.

일부 실시양태에서, 본 발명은 한정된 평균 입자 크기를 갖는 다수의 입자 또는 입자 집단을 특징으로 한다. 본원에서 사용된 "평균 입자 크기"는 개별 입자 크기를 측정하고 이어서 전체 입자 수로 나눔으로써 얻어진다. 평균 입자 크기의 결정은 당업계에 공지되어 있다. 전형적으로, 입자의 최장 평균 치수는 1 ㎛ 이하이다. 일부 실시양태에서, 입자는 나노입자이다. 일부 실시양태에서, 입자의 최장 평균 치수는 900 (예를 들어, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 또는 150) nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 입자는 개체(예를 들어, 인간 개체)의 혈액 또는 혈관계(예를 들어, 동맥, 정맥 및 모세혈관)에서 순환하기 위한 모양과 크기이다. 예시적인 입자 디자인은 도 1 내지 3에 개시된다. In some embodiments, the invention features a plurality of particles or populations of particles having a defined mean particle size. As used herein, "average particle size" is obtained by measuring the individual particle size and then dividing by the total number of particles. Determination of average particle size is known in the art. Typically, the longest average dimension of the particles is 1 μm or less. In some embodiments, the particle is a nanoparticle. In some embodiments, the longest average dimension of the particles is 900 (e.g., 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 450, 400, 350, 300, 250, 200, or 150) nm or less. In some embodiments, the particles are shaped and sized to circulate in the blood or vasculature (eg, arteries, veins, and capillaries) of an individual (eg, a human individual). Exemplary particle designs are disclosed in Figures 1-3.

일부 실시양태에서, 다수의 입자는 다면체, 예를 들어, 정육면체이다. 일부 실시양태에서, 다수의 입자는 구형이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 입자는 다공성일 수 있다. 그러한 다공성 입자는 입자의 기공의 외부 표면과 내면 표면을 포함한다. 제제는 예를 들어, 내면 표면 상에 고정된다. 일부 실시양태에서, 다수의 기공은 적어도 50 nm의 단면적 치수를 갖는다. 일부 실시양태에서, 다수의 기공은 적어도 100 nm의 단면적 치수를 갖는다. 다공성 나노입자는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제20140199352호, 제20080277346호, 및 제20040105821호에 개시되었으며, 각각의 내용은 그 전체가 참고로 본 발명에 통합된다. 구형 입자는 예를 들어, 미국 특허 제8,778,830호 및 제8,586,096호에 개시되며, 각각은 참고로 본 발명에 통합된다. In some embodiments, the plurality of particles are polyhedral, eg, cubic. In some embodiments, the plurality of particles are spherical. In some embodiments, any particle disclosed herein may be porous. Such porous particles include an outer surface and an inner surface of the pores of the particle. The formulation is immobilized on, for example, an inner surface. In some embodiments, the plurality of pores have a cross-sectional dimension of at least 50 nm. In some embodiments, the plurality of pores have cross-sectional dimensions of at least 100 nm. Porous nanoparticles are disclosed, for example, in US Patent Application Publication Nos. 20140199352, 20080277346, and 20040105821, the contents of each of which are incorporated herein by reference in their entirety. Spherical particles are disclosed, for example, in U.S. Patent Nos. 8,778,830 and 8,586,096, each incorporated herein by reference.

일부 실시양태에서, 구형 입자는 추가로 입자의 구형 표면으로부터 연장되는 2개의 교차 융기부(intersecting ridges)를 포함할 수 있으며, 이때 각 구조의 최장 치수는 1 ㎛이하이며, 융기부는 (i) 구형 입자의 표면에 고정된 제제가 세포 표면 수용체 단백질에 결합하거나 이를 활성화하는 것을 억제하거나 및/또는 (ii) 가용성 생물분자가 제제에 결합될 때, 가용성 생물분자와 가용성 생물분자가 제1 구성원인 특이적 결합 쌍의 제2 구성원의 상호작용을 억제하기 위한 크기와 배향을 갖는다. In some embodiments, the spherical particle may further comprise two intersecting ridges extending from the spherical surface of the particle, wherein the longest dimension of each structure is less than or equal to 1 μm, and the ridge is (i) spherical inhibits the agent immobilized on the surface of the particle from binding to or activating a cell surface receptor protein and/or (ii) when the soluble biomolecule is bound to the agent, the soluble biomolecule and the specific specificity of which the soluble biomolecule is the first member and has a size and orientation to inhibit interaction of the second member of the enemy binding pair.

일부 실시양태에서, 다수의 입자는 환상형이다. 그러한 실시양태에서, 제제는 입자의 내면 원주 표면 상에 고정될 수 있다(예를 들어, 구멍 주위 - 도 2 참고). 일부 실시양태에서, 입자의 직경은 600(예를 들어, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 200, 또는 150) nm 이하이다. In some embodiments, the plurality of particles are toroidal. In such an embodiment, the agent can be immobilized on the inner circumferential surface of the particle (eg, around the hole - see FIG. 2 ). In some embodiments, the particle has a diameter of 600 (eg, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 200, or 150) nm or less.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 입자는 수지상이다. 그러한 입자는 예를 들어, Du et al. (2015) Small 11(4):392-413: 미국 특허 제5,814,272호 및 제7,932,311호; 및 미국 특허 출원 공개 제20040166166호에 개시되며, 각각의 내용은 참고로 본 발명에 통합된다. 하기에 상술하는 바처럼, 일부 실시양태에서 수지상 입자의 기하학적 구조는 입자의 내면 표면상에 고정된 제제가 세포 표면상의 생물분자와 상호작용하는 능력이 감소되거나 실질적으로 감소되고 및/또는 제제에 의해 입자에 결합된 가용성 생물분자가 그의 짝 리간드(특이적 결합 쌍의 제2 구성원)와 상호작용하는 능력이 감소되거나 실질적으로 감소되도록 하는 것이다. In some embodiments, the particles disclosed herein are dendritic. Such particles are described, for example, by Du et al. (2015) Small 11(4) :392-413: US Pat. Nos. 5,814,272 and 7,932,311; and US Patent Application Publication No. 20040166166, the contents of each of which are incorporated herein by reference. As detailed below, in some embodiments the geometry of the dendritic particle is such that the ability of the agent immobilized on the inner surface of the particle to interact with biomolecules on the cell surface is reduced or substantially reduced and/or by the agent. The ability of the soluble biomolecule bound to the particle to interact with its partner ligand (the second member of the specific binding pair) is reduced or substantially reduced.

일부 실시양태에서, 다수의 입자는 규칙적이든 불규칙적이든, 다면체, 예를 들어, 8면체 또는 20면체이다(예를 들어, 도 3 참고). 입자는 그들의 꼭짓점 중 적어도 하나로부터의 적어도 하나의 돌출부를 포함할 수 있다(예를 들어, 도 3 참고). 입자는 그들의 꼭짓점으로부터의 돌출부를 2 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 이상) 포함할 수 있다. 그러한 돌출부는 예를 들어, (i) 구형 입자의 표면상에 고정된 제제가 세포 표면 수용체 단백질에 결합하거나 이를 활성화하는 것을 억제하고/하거나 (ii) 가용성 생물분자가 제제에 결합될 때, 가용성 생물분자와 가용성 생물분자가 제1 구성원인 특이적 결합 쌍의 제2 구성원의 상호작용을 억제하기 위한 크기를 갖고/갖거나 배향될 수 있다. In some embodiments, the plurality of particles are polyhedral, eg, octahedral or icosahedral, whether regular or irregular (see, eg, FIG. 3 ). Particles can include at least one protrusion from at least one of their vertices (see, eg, FIG. 3 ). Particles can include two or more (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 or more) protrusions from their vertices. Such protrusions may, for example, (i) inhibit the binding of an agent immobilized on the surface of a spherical particle from binding to or activating a cell surface receptor protein and/or (ii) when a soluble biomolecule is bound to the agent, a soluble biomolecule The molecule and the soluble biomolecule may be sized and/or oriented to inhibit interaction of the first member, the second member of a specific binding pair.

III. 기공을 포함하는 입자 III. Particles containing pores

일부 실시양태에서, 입자를 만들기 위해 사용되는 물질(예를 들어, 규소)은 약 40% 내지 약 95%, 예를 들어, 약 60% 내지 약 80%의 다공성을 가질 수 있다. 본원에서 사용된 다공성은 물질 내의 빈 공간의 척도이며, 물질의 전체 부피에 대한 빈 공간의 부피의 분율이다. 특정 실시양태에서, 담체 물질은 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 심지어 적어도 약 90%의 다공성을 갖는다. 구체적 실시양태에서, 다공성은 약 40% 초과, 예를 들어, 약 50% 초과, 약 60% 초과 또는 심지어 약 70% 초과이다. In some embodiments, the material used to make the particles (eg silicon) may have a porosity of about 40% to about 95%, for example about 60% to about 80%. Porosity, as used herein, is a measure of void space within a material, and is the fraction of the volume of void space relative to the total volume of the material. In certain embodiments, the carrier material comprises at least about 10%, at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, or even It has a porosity of at least about 90%. In specific embodiments, the porosity is greater than about 40%, such as greater than about 50%, greater than about 60% or even greater than about 70%.

특정 실시양태에서, 제제는 물질의 표면으로부터 적어도 약 0.005 미크론, 적어도 0.05 미크론, 적어도 약 0.1 미크론, 적어도 약 0.2 미크론, 적어도 약 0.3 미크론, 적어도 약 0.4 미크론, 적어도 약 0.5 미크론, 적어도 약 0.6 미크론, 또는 적어도 약 0.7 미크론의 기공 깊이까지 분포된다. 특정 실시양태에서, 제제는 담체 물질의 기공 내에 실질적으로 균일하게 분포된다. In certain embodiments, the formulation is at least about 0.005 microns, at least 0.05 microns, at least about 0.1 microns, at least about 0.2 microns, at least about 0.3 microns, at least about 0.4 microns, at least about 0.5 microns, at least about 0.6 microns, or to a pore depth of at least about 0.7 microns. In certain embodiments, the agent is substantially uniformly distributed within the pores of the carrier material.

제제는 입자의 총 폭에 대한 비율로 측정되는 깊이까지 입자 내에 로딩될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제제는 입자 내로 적어도 약 10%의 깊이까지, 입자 내로 적어도 약 20%까지, 입자 내로 적어도 약 30%까지, 입자 내로 적어도 약 40%까지, 입자 내로 적어도 약 50%까지 또는 입자 내로 적어도 약 60%까지 분포된다.The agent can be loaded into the particle to a depth measured as a percentage of the total width of the particle. In certain embodiments, the agent is to a depth of at least about 10% into the particle, to at least about 20% into the particle, to at least about 30% into the particle, to at least about 40% into the particle, to at least about 50% into the particle, or to a particle distributed to at least about 60% of

기공 크기는 생물분자의 방출을 제어하기 위하여 제제 및 표적 생물분자의 치수 특징에 대하여 사전선택될 수 있다. 전형적으로, 너무 작은 기공 크기는 제제의 로딩 및/또는 생물분자의 결합을 배제한다. 예를 들어, 물질을 위한 평균 기공 직경은 예를 들어, 200,000-500,000 amu의 고분자량 분자에 대해 예를 들어, 15 nm 내지 40 nm의 큰 기공 및, 예를 들어, 10,000-50,0000 amu의 저분자량 분자에 대해 예를 들어, 2 nm 내지 10 nm의 작은 기공으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 직경이 약 6 nm인 평균 기공 크기는 약 14,700 amu와 같은 약 14,000 내지 15,000 amu의 분자량의 분자를 위해 적합할 수 있다. 직경이 약 10 nm인 평균 기공 크기는 약 48,000 amu와 같은 약 45,000 내지 50,000 amu의 분자량의 분자를 위해 선택될 수 있다. 직경이 약 25-30 nm인 평균 기공 크기는 약 150,000 amu의 분자량의 분자를 위해 선택될 수 있다. The pore size can be preselected relative to the dimensional characteristics of the agent and the target biomolecule in order to control the release of the biomolecule. Typically, pore sizes that are too small preclude loading of agents and/or binding of biomolecules. For example, the average pore diameter for the material is eg 15 nm to 40 nm for large pores and eg 10,000-50,0000 amu for high molecular weight molecules of eg 200,000-500,000 amu. For low molecular weight molecules it may be selected from small pores, for example from 2 nm to 10 nm. For example, an average pore size of about 6 nm in diameter may be suitable for molecules of molecular weight between about 14,000 and 15,000 amu, such as about 14,700 amu. An average pore size of about 10 nm in diameter may be selected for molecules of molecular weight between about 45,000 and 50,000 amu, such as about 48,000 amu. An average pore size of about 25-30 nm in diameter may be selected for molecules of molecular weight of about 150,000 amu.

기공 크기는 제제 또는 생물분자의 분자 반경에 맞추기 위해 사전선택될 수 있다. 예를 들어, 직경이 약 25 nm 내지 약 40 nm인 평균 기공 크기는 최대 분자 반경이 약 6 nm 내지 약 8 nm인 분자를 위해 적합할 수 있다. 분자 반경은 X-선 결정학 데이터에 기초한 분자의 물리적 치수를 이용하거나 분자의 용액 상태 크기를 나타내는 유체역학적 반경을 이용하는 것과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 계산할 수 있다. 용액 상태 계산은 계산이 이루어지는 용액의 특성에 의존하므로, 일부 측정은 X-선 결정학 데이터에 기초한 분자의 물리적 치수를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 본원에서 사용된 최대 분자 반경은 치료제의 최대 치수의 절반을 반영한다. The pore size may be preselected to match the molecular radius of the agent or biomolecule. For example, an average pore size of about 25 nm to about 40 nm in diameter may be suitable for molecules having a maximum molecular radius of about 6 nm to about 8 nm. The molecular radius can be calculated by any suitable method, such as using physical dimensions of a molecule based on X-ray crystallographic data or using a hydrodynamic radius representing the size of a molecule in solution. Since solution state calculations depend on the properties of the solution being calculated, it may be desirable for some measurements to use physical dimensions of molecules based on X-ray crystallography data. As used herein, the maximum molecular radius reflects half of the maximum dimension of the therapeutic agent.

특정 실시양태에서, 평균 기공 직경은 기공 내의, 분자, 예를 들어, 단백질의 응집을 제한하도록 선택된다. 단백질과 같은 생물분자가 담체 물질내에서 응집하는 것을 방지하는 것이 유익할 것이며, 그 이유는 응집은 생물계 내로의 분자의 제어된 방출을 방해하는 것으로 생각되기 때문이다. 따라서, 그 크기와 생물분자의 크기 사이의 관계로 인해 예를 들어, 단지 하나의 생물분자만이 한번에 기공 내로 들어가도록 하는 기공은 다수의 생물분자가 함께 기공에 들어가서 기공 내에서 응집하게 하는 기공보다 바람직할 것이다. 특정 실시양태에서, 다수의 생물분자가 기공 내로 로딩될 수 있으나, 기공의 깊이로 인해 기공의 이 깊이 전체에 걸쳐 분포된 단백질은 덜 응집할 것이다. In certain embodiments, the average pore diameter is selected to limit aggregation of molecules, such as proteins, within the pores. It would be beneficial to prevent aggregation of biomolecules, such as proteins, within a carrier material, since aggregation is believed to interfere with the controlled release of molecules into biological systems. Thus, due to the relationship between its size and the size of the biomolecule, for example, a pore that allows only one biomolecule to enter the pore at a time is better than a pore that allows a large number of biomolecules to enter the pore together and aggregate within the pore. would be preferable In certain embodiments, a large number of biomolecules can be loaded into the pore, but due to the depth of the pore, proteins distributed throughout this depth of the pore will aggregate less.

IV. 제제 IV. formulation

일부 실시양태에서, 입자의 기하형태는 고정된 제제가 세포 표면상의 생물분자와 상호작용하는 능력이 감소되거나 실질적으로 감소되도록 하는 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 입자의 표면 상에 고정된 TNFα 또는 IL-2는 자유 TNFα 또는 IL-2가 세포 표면 상의 TNFα 수용체 또는 IL-2 수용체에 결합하는 능력의 50(예를 들어, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1)% 미만을 갖는다. 일부 실시양태에서, 입자에 결합된 가용성 생물분자는 그의 짝 리간드(특이적 결합 쌍의 제2 구성원)와 상호작용하는 능력이 감소되거나 실질적으로 감소된다. 예를 들어, 본원에 개시된 입자에 결합된 가용성 TNFR은 자유 가용성 TNFR이 자유 TNFα와 상호작용하는 능력의 50(예를 들어, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1)% 미만을 갖는다. 다른 예에서, 본원에 개시된 입자에 결합된 가용성 비리온은 자유 비리온이 그의 짝 세포 표면 수용체(들)과 상호작용하고 세포를 감염시키는 능력의 50(예를 들어, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1)% 미만을 갖는다. 제제와 세포 표면상의 생물분자의 상호작용 또는 입자에 결합된 생물분자와 그의 짝 리간드 사이의 상호작용을 감소시키거나 실질적으로 감소시킬 수 있는 예시적인 입자 기하형태는 도 1 내지 3에 개시되며 본원에 개시된다. In some embodiments, the geometry of the particle is such that the ability of the immobilized agent to interact with biomolecules on the cell surface is reduced or substantially reduced. For example, in some embodiments, TNFα or IL-2 immobilized on the surface of a particle disclosed herein is less than 50% of the ability of free TNFα or IL-2 to bind to a TNFα receptor or IL-2 receptor on the cell surface (eg eg, less than 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1)%. In some embodiments, the soluble biomolecule bound to the particle has reduced or substantially reduced ability to interact with its partner ligand (the second member of the specific binding pair). For example, soluble TNFR bound to a particle disclosed herein is less than 50 (e.g., 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, less than 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1)%. In another example, a soluble virion bound to a particle disclosed herein has 50 (e.g., 45, 40, 35, 30%) of the ability of a free virion to interact with its partner cell surface receptor(s) and infect a cell. , 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1)%. Exemplary particle geometries that can reduce or substantially reduce the interaction of an agent with a biomolecule on a cell surface or between a biomolecule bound to the particle and its cognate ligand are disclosed in FIGS. 1-3 and herein is initiated

일부 실시양태에서, 입자의 표면 상에 고정된 제제는 소분자, 환형거대분자 화합물(macrocycle compound), 폴리펩티드, 펩티드모방체 화합물, 앱타머, 핵산 또는 핵산 유사체이다. 본원에서 사용된 "소분자"는 분자량이 약 6 kDa 미만이고 가장 바람직하게는 약 2.5 kDa 미만인 제제를 말한다. 많은 제약 회사는 소분자, 종종 본 출원의 임의의 분석으로 스크리닝될 수 있는 진균, 세균 또는 조류 추출물의 어레이를 포함하는 화학적 및/또는 생물학적 혼합물의 방대한 라이브러리를 갖는다. 본 출원은 다른 것들 중에서도, 소 화합물 라이브러리, 펩티드 라이브러리 또는 천연 생성물의 집합의 이용을 고려한다. 탄 등(Tan et al.)은 소형화된 세포-기반 분석과 양립성인 2백만이 넘는 합성 화합물을 가진 라이브러리를 개시하였다(J Am Chem Soc (1998) 120:8565-8566). In some embodiments, the immobilized agent on the surface of the particle is a small molecule, macrocycle compound, polypeptide, peptidomimetic compound, aptamer, nucleic acid or nucleic acid analog. As used herein, "small molecule" refers to an agent having a molecular weight less than about 6 kDa and most preferably less than about 2.5 kDa. Many pharmaceutical companies have vast libraries of small molecules, often chemical and/or biological compounds comprising arrays of fungal, bacterial or algal extracts that can be screened with any of the assays of the present application. This application contemplates, among other things, the use of small compound libraries, peptide libraries or collections of natural products. Tan et al. have disclosed a library with over 2 million synthetic compounds compatible with miniaturized cell-based assays (J Am Chem Soc (1998) 120:8565-8566).

펩티드모방체는 대상 폴리펩티드의 적어도 일부가 변형된 화합물일 수 있으며, 펩티드모방체의 삼차 구조는 대상 폴리펩티드의 삼차 구조와 실질적으로 동일하게 유지된다. 펩티드모방체는 그 자체가 대상 폴리펩티드 서열 내에 하나 이상의 치환 또는 다른 변형을 함유한 폴리펩티드인, 본원의 대상 폴리펩티드의 유사체일 수 있다. 대안적으로, 대상 폴리펩티드 서열의 적어도 일부는 대상 폴리펩티드의 삼차 구조가 실질적으로 유지되도록 비펩티드 구조로 교체될 수 있다. 다시 말하면, 대상 폴리펩티드 서열 내의 하나, 둘 또는 세 아미노산 잔기가 비펩티드 구조에 의해 교체될 수 있다. 또한, 대상 폴리펩티드의 다른 펩티드 부분이 비펩티드 구조로 교체될 수 있으나, 그럴 필요는 없다. 펩티드모방체(펩티드 및 비펩티드 유사체 둘 모두)는 개선된 특성(예를 들어, 단백질분해 감소, 체류 증가 또는 생체이용률 증가)을 가질 수 있다. 펩티드모방체는 일반적으로 개선된 경구 이용가능성을 가지며, 이는 그들을 인간 또는 동물의 치료에 특히 적합하도록 한다. 펩티드모방체는 유사한 이차 화학 구조를 갖거나 갖지 않을 수 있으나, 공통된 삼차 구조 특징 및 기하형태를 공유함을 유의해야 한다. 각각의 펩티드모방체는 추가로 하나 이상의 독특한 추가의 결합 요소를 가질 수 있다. A peptidomimetic may be a compound in which at least a portion of a subject polypeptide is modified, and the tertiary structure of the peptidomimetic remains substantially the same as that of the subject polypeptide. A peptidomimetic may be an analogue of a subject polypeptide herein, which is itself a polypeptide that contains one or more substitutions or other modifications within the subject polypeptide sequence. Alternatively, at least a portion of the subject polypeptide sequence may be replaced with a non-peptide structure such that the tertiary structure of the subject polypeptide is substantially retained. In other words, one, two or three amino acid residues within a subject polypeptide sequence may be replaced by a non-peptide structure. In addition, other peptide portions of the polypeptide of interest may, but need not, be replaced with non-peptide structures. Peptidomimetics (both peptide and non-peptide analogs) may have improved properties (eg, reduced proteolysis, increased retention or increased bioavailability). Peptidomimetics generally have improved oral availability, which makes them particularly suitable for treatment of humans or animals. It should be noted that peptidomimetics may or may not have similar secondary chemical structures, but share common tertiary structural characteristics and geometries. Each peptidomimetic may additionally have one or more unique additional binding elements.

앱타머는 세포 표면 단백질을 비롯한 거의 모든 분자를 인식하고 특이적으로 결합하기 위해 사용될 수 있는 짧은 올리고뉴클레오티드 서열이다. 지수적 농축에 의한 리간드의 체계적 진화(SELEX) 과정은 강력하며 그러한 앱타머를 동정(同定)하기 위하여 쉽게 사용될 수 있다. 앱타머는 치료 및 진단을 위해 중요한 광범위한 단백질, 예를 들어, 성장 인자 및 세포 표면 항원을 위해 제조될 수 있다. 이들 올리고뉴클레오티드는 항체와 유사한 친화성과 특이성으로 그들의 표적에 결합한다(예를 들어, Uirich (2006) Handb Exp Pharmacol 173:305-326 참고). Aptamers are short oligonucleotide sequences that can be used to recognize and specifically bind to almost any molecule, including cell surface proteins. The systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) process is robust and can be easily used to identify such aptamers. Aptamers can be made for a wide range of proteins important for therapy and diagnosis, such as growth factors and cell surface antigens. These oligonucleotides bind their targets with similar affinity and specificity to antibodies (see, eg, Uirich (2006) Handb Exp Pharmacol 173 :305-326).

상기에 기재한 대로, 용어 "항체"는 IgM, IgG, IgA, IgD 및 IgE 항체와 같은 상이한 동종(isotype)의 항체를 비롯한 전체 항체를 말한다. 용어 "항체"는 다클론 항체, 단클론 항체, 키메라화된 또는 키메라 항체, 인간화 항체, 영장류화된 항체(primatized antibody), 탈면역된 항체(deimmunized antibody) 및 완전 인간 항체를 포함한다. 항체는 임의의 다양한 종, 예를 들어, 인간, 비인간 영장류(예를 들어, 오랑우탄, 개코원숭이 또는 침팬지), 말, 소, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니피그, 게르빌루스쥐, 햄스터, 래트 및 마우스와 같은 포유류에서 만들어지거나 이로부터 유도될 수 있다. 항체는 정제 또는 재조합 항체일 수 있다. As described above, the term "antibody" refers to whole antibodies, including antibodies of different isotypes such as IgM, IgG, IgA, IgD and IgE antibodies. The term "antibody" includes polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, chimeric or chimeric antibodies, humanized antibodies, primatized antibodies, deimmunized antibodies and fully human antibodies. Antibodies may be isolated from any of a variety of species, eg, humans, non-human primates (eg, orangutans, baboons or chimpanzees), horses, cattle, pigs, sheep, goats, dogs, cats, rabbits, guinea pigs, gerbils. , can be made in or derived from mammals such as hamsters, rats and mice. Antibodies may be purified or recombinant antibodies.

용어 "항체 단편", "생물분자-결합 단편" 또는 유사 용어는 표적 항원에 결합하는 능력을 보유한 항체 단편을 말한다. 그러한 단편은 예를 들어, 단일쇄 항체, 단일쇄 Fv 단편(scFv), Fd 단편, Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. scFv 단편은 scFv가 유래되는 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 둘 모두를 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄이다. 또한, 인트라바디(intrabodies), 미니바디(minibodies), 트리아바디(triabodies) 및 디아바디(diabodies) 또한 항체의 정의에 포함되며 본원에 개시된 방법에서 사용하기에 적합하다(예를 들어, Todorovska et al. (2001) J Immunol Methods 248(1):47-66; Hudson and Kortt (1999) J Immunol Methods 231(1): 177-189; Poljak (1994) Structure 2(12): 1121-1123; Rondon and Marasco (1997) Annual Review of Microbiology 51:257-283을 참고하며, 각각의 내용은 그 전체가 참고로 본 발명에 통합됨). (DVD-Ig 항체를 비롯한) 이특이적 항체 또한 용어 "항체"에 의해 포함된다. 이특이적 항체는 적어도 두 가지 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 가진 단클론, 바람직하게는 인간 또는 인간화 항체이다. The terms "antibody fragment", "biomolecule-binding fragment" or similar terms refer to antibody fragments that retain the ability to bind a target antigen. Such fragments include, for example, single chain antibodies, single chain Fv fragments (scFv), Fd fragments, Fab fragments, Fab' fragments or F(ab') 2 fragments. An scFv fragment is a single polypeptide chain comprising both the heavy and light chain variable regions of the antibody from which the scFv is derived. In addition, intrabodies, minibodies, triabodies, and diabodies are also included within the definition of antibodies and are suitable for use in the methods disclosed herein (e.g., Todorovska et al (2001) J Immunol Methods 248(1) :47-66;Hudson and Kortt (1999) J Immunol Methods 231(1) :177-189;Poljak (1994) Structure 2(12) :1121-1123;Rondon and See Marasco (1997) Annual Review of Microbiology 51 :257-283, the contents of each of which are incorporated herein by reference in their entirety). Bispecific antibodies (including DVD-Ig antibodies) are also encompassed by the term “antibody”. Bispecific antibodies are monoclonal, preferably human or humanized, antibodies that have binding specificities for at least two different antigens.

본원에서 사용된 "항체"는 또한 예를 들어, 낙타과 유래 단일 도메인 항체(camelized single domain antibodies)와 같은 단일 도메인 항체를 포함한다. 예를 들어, Muyldermans et al. (2001) Trends Biochem Sci 26:230-235; Nuttall et al. (2000) Curr Pharm Biotech 1:253-263; Reichmann et al. (1999) J Immunol Meth 231:25-38; PCT 출원 공개 WO 94/04678호 및 WO 94/25591호; 및 미국 특허 제6,005,079호, 제6,015,695호 및 제7,794,981호를 참고하며, 이들 모두는 그 전체가 참고로 본 발명에 통합된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 단일 도메인 항체가 형성되도록 변형을 가진 두 VH 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체를 제공한다. As used herein, “antibody” also includes single domain antibodies, such as, for example, camelized single domain antibodies. For example, Muyldermans et al. (2001) Trends Biochem Sci 26 :230-235; Nuttall et al. (2000) Curr Pharm Biotech 1 :253-263; Reichmann et al. (1999) J Immunol Meth 231 :25-38; PCT Application Publication Nos. WO 94/04678 and WO 94/25591; and U.S. Patent Nos. 6,005,079, 6,015,695, and 7,794,981, all of which are incorporated herein by reference in their entirety. In some embodiments, the invention provides single domain antibodies comprising two VH domains with modifications such that single domain antibodies are formed.

일부 실시양태에서, 제제는 비-항체, 스캐폴드 단백질이다. 이들 단백질은 일반적으로 기존의 리간드- 또는 항원-결합 단백질의 조합 화학-기반 적응을 통해 수득된다. 예를 들어, 인간 트랜스페린 수용체를 위한 인간 트랜스페린의 결합 부위는 그 중 일부가 상이한 항원에 대한 친화성을 획득한 트랜스페린 변이체의 다양한 라이브러리를 생성하도록, 조합 화학을 이용하여 변형될 수 있다(Ali et al. (1999) J Biol Chem 274, 24066-24073 참고). 수용체 결합에 관여하지 않는 인간 트랜스페린의 부분은 변하지 않으며 항체의 골격 영역처럼, 가변 결합 부위를 제시하기 위한 스캐폴드로서 작용한다. 이어서 라이브러리는 항체 라이브러리처럼, 표적 항원에 대해 최적의 선택성과 친화성을 가진 변이체를 동정하기 위하여 관심 표적 항원에 대하여 스크리닝된다. 기능에 있어서 항체와 유사한 한편, 비-항체 스캐폴드 단백질은 항체에 비교할 때 많은 이점을 갖는 것을 장점으로 하며, 이러한 이점에는 다른 것들 중에서도 가용성 향상 및 조직 침투력 향상, 제조 비용 감소, 및 다른 관심 분자에의 접합 용이성이 포함된다(Hey et al. (2005) TRENDS Biotechnol 23(10) :514-522 참고). In some embodiments, the agent is a non-antibody, scaffold protein. These proteins are generally obtained through combinatorial chemistry-based adaptation of existing ligand- or antigen-binding proteins. For example, the binding site of human transferrin for the human transferrin receptor can be modified using combinatorial chemistry to generate a diverse library of transferrin variants, some of which have acquired affinity for different antigens (Ali et al. (1999) J Biol Chem 274, 24066-24073). The portion of human transferrin not involved in receptor binding is invariant and, like the framework region of an antibody, serves as a scaffold to present the variable binding sites. The library is then screened, like an antibody library, against the target antigen of interest to identify variants with optimal selectivity and affinity for the target antigen. While similar in function to antibodies, non-antibody scaffold proteins benefit from a number of advantages over antibodies, including, among other things, improved solubility and improved tissue penetration, reduced manufacturing costs, and availability of other molecules of interest. ease of conjugation (see Hey et al. (2005) TRENDS Biotechnol 23(10) :514-522).

당업자는 비-항체 스캐폴드 단백질의 스캐폴드 부분이 예를 들어, 에스 . 아 우레우스(S. aureus) 단백질 A의 Z 도메인, 인간 트랜스페린, 인간 10번째 피브로넥틴 타입 III 도메인, 인간 트립신 억제제의 쿠니츠 도메인(kunitz domain), 인간 CTLA-4, 안키린 반복 단백질, 인간 리포칼린, 인간 크리스탈린, 인간 유비퀴틴 또는 이. 에라테리움(E. elaterium)으로부터의 트립신 억제제의 모두 또는 일부를 포함할 수 있다는 점을 인식할 것이다(Hey et al. (2005) TRENDS Biotechnol 23(10):514-522 참고). One of ordinary skill in the art will understand that the scaffold portion of a non-antibody scaffold protein can be, for example , S. Aureus ( S. aureus ) Z domain of protein A, human transferrin , human 10th fibronectin type III domain, human trypsin inhibitor Kunitz domain (kunitz domain), human CTLA-4, ankyrin repeat protein, human lipocalin , human crystallin, human ubiquitin or this. It will be appreciated that all or some of the trypsin inhibitors from E. elaterium can be included (see Hey et al. (2005) TRENDS Biotechnol 23(10) :514-522).

일부 실시양태에서, 제제는 표적 생물분자의 천연 리간드이다. 예를 들어, 제제는 사이토카인일 수 있다. 본원에서 사용된 "사이토카인"은 세포의 기능에 영향을 주며 면역, 염증 또는 조혈 반응에서 세포 사이의 상호작용을 조절하는 분자인 임의의 분비된 폴리펩티드를 말한다. 사이토카인은 그들을 생산하는 세포에 관계없이, 모노카인 및 림포카인을 포함하며 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 모노카인은 일반적으로 대식세포 및/또는 단핵구와 같은 단핵 세포에 의해 생산되고 분비되는 것을 말한다. 그러나, 천연 킬러 세포, 섬유아세포, 호염기구, 호중구, 내피 세포, 뇌 별아교세포, 골수 기질세포, 상피 각질세포 및 B-림프구와 같은 많은 다른 세포 또한 모노카인을 생산한다. 림포카인은 일반적으로 림프구 세포에 의해 생산되는 것으로 알려져 있다. 사이토카인의 예는 인터루킨-1(IL-1), 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-8(IL-8), 종양 괴사 인자-알파(TNF-α) 및 종양 괴사 인자 베타(TNF-β)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. In some embodiments, the agent is a natural ligand of a target biomolecule. For example, the agent may be a cytokine. As used herein, “cytokine” refers to any secreted polypeptide, a molecule that affects the function of cells and modulates interactions between cells in an immune, inflammatory or hematopoietic response. Cytokines include, but are not limited to, monokines and lymphokines, regardless of the cell that produces them. For example, monokines generally refer to those produced and secreted by monocytes, such as macrophages and/or monocytes. However, many other cells also produce monokines, such as natural killer cells, fibroblasts, basophils, neutrophils, endothelial cells, brain astrocytes, bone marrow stromal cells, epithelial keratinocytes and B-lymphocytes. It is known that lymphokines are generally produced by lymphoid cells. Examples of cytokines are interleukin-1 (IL-1), interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6), interleukin-8 (IL-8), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) ) and tumor necrosis factor beta (TNF-β).

일부 실시양태에서, 제제는 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리 리간드이며, 예를 들어, TNF 패밀리 리간드는 TNFα, TNFβ, Fas 리간드, 림프독소, 림프독소 알파, 림프독소 베타, 4-1BB 리간드, CD30 리간드, EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNFβ 및 TRAIL로부터 선택된다. In some embodiments, the agent is a tumor necrosis factor (TNF) family ligand, for example, the TNF family ligand is TNFα, TNFβ, Fas ligand, lymphotoxin, lymphotoxin alpha, lymphotoxin beta, 4-1BB ligand, CD30 ligand , EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNFβ and TRAIL.

일부 실시양태에서, 제제는 표적 생물분자를 위한 천연 리간드의 변이체, 예를 들어, 변이체 IL-2 또는 변이체 TNFα와 같은 변이체 인터루킨 폴리펩티드이다. 본 발명의 일부 실시양태에 따라, 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 함유할 수 있다. 치환은 보존적이거나 비보존적일 수 있다. 본원에서 사용된 "보존적 치환"은 주어진 폴리펩티드의 천연 서열에 존재하는 아미노산이 유사한 입체 특성을 가진 천연 또는 비천연 발생 아미노산으로 교체되는 것을 말한다. 교체되는 천연 아미노산의 측쇄가 극성 또는 소수성인 경우, 보존적 치환은 역시 극성 또는 소수성이며 선택적으로 교체된 아미노산의 측쇄와 동일하거나 유사한 입체 특성을 가진 천연 발생 아미노산 또는 비천연 발생 아미노산으로 이루어진다. 보존적 치환은 전형적으로 하기 그룹 내의 치환을 포함한다: 글리신과 알라닌; 발린, 이소루이신 및 루이신; 아스파르트산 및 글루탐산; 아스파라긴, 글루타민, 세린, 및 트레오닌; 리신, 히스티딘 및 아르기닌; 및 페닐알라닌 및 티로신. 1문자 아미노산 약자는 다음과 같다: 알라닌(A); 아르기닌(R); 아스파라긴(N); 아스파르트산(D); 시스테인(C); 글리신(G); 글루타민(Q); 글루탐산(E); 히스티딘(H); 이소루이신(I); 루이신(L); 리신(K); 메티오닌(M); 페닐알라닌(F); 프롤린(P); 세린(S); 트레오닌(T); 트립토판(W), 티로신(Y); 및 발린(V). 변이체는 또한 전길이 야생형 천연 리간드의 단편 및 단편이 유래되는 야생형 전길이 천연 리간드에 비하여 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함하는 단편을 포함한다. In some embodiments, the agent is a variant of a natural ligand for a target biomolecule, eg, a variant interleukin polypeptide such as variant IL-2 or variant TNFα. According to some embodiments of the invention, variants may contain one or more amino acid substitutions, deletions or insertions. Substitutions may be conservative or non-conservative. As used herein, "conservative substitution" refers to the replacement of an amino acid present in the natural sequence of a given polypeptide with a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid having similar steric properties. If the side chain of the natural amino acid being replaced is polar or hydrophobic, a conservative substitution is also polar or hydrophobic and optionally consists of a naturally occurring or non-naturally occurring amino acid having the same or similar steric properties as the side chain of the replaced amino acid. Conservative substitutions typically include substitutions within the following groups: glycine and alanine; valine, isoleucine and leucine; aspartic acid and glutamic acid; asparagine, glutamine, serine, and threonine; lysine, histidine and arginine; and phenylalanine and tyrosine. The one-letter amino acid abbreviations are: Alanine (A); arginine (R); asparagine (N); aspartic acid (D); cysteine (C); glycine (G); glutamine (Q); glutamic acid (E); histidine (H); isoleucine (I); leucine (L); lysine (K); methionine (M); phenylalanine (F); proline (P); serine (S); threonine (T); tryptophan (W), tyrosine (Y); and valine (V). Variants also include fragments of the full-length wild-type native ligand and fragments comprising one or more amino acid substitutions, insertions or deletions relative to the wild-type full-length native ligand from which the fragment is derived.

본원에서 사용된 어구 "비보존적 치환"은 모 서열에 존재하는 아미노산이 상이한 전기화학적 및/또는 입체 특성을 가진 다른 천연 또는 비천연 발생 아미노산에 의해 교체되는 것을 말한다. 따라서, 치환 아미노산의 측쇄는 치환되는 천연 아미노산의 측쇄보다 상당히 더 클(작을) 수 있고/있거나 치환되는 아미노산과 상당히 상이한 전자 특성을 가진 기능기를 가질 수 있다. As used herein, the phrase "non-conservative substitution" refers to the replacement of an amino acid present in a parent sequence by another naturally occurring or non-naturally occurring amino acid having different electrochemical and/or steric properties. Thus, the side chain of the substituted amino acid can be significantly larger (smaller) than the side chain of the natural amino acid being replaced and/or can have functional groups with significantly different electronic properties than the amino acid being replaced.

일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 그것이 유래된 야생형 전길이 폴리펩티드에 비하여, 적어도 2(예를 들어, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 또는 100 초과) 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 그것이 유래된 야생형 전길이 폴리펩티드에 비하여, 150 이하(예를 들어, 145, 140, 135, 130, 125, 120, 115, 110, 105, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2 이하) 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함한다. In some embodiments, the variant polypeptide is at least 2 (e.g., at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 or more than 100) amino acid substitutions, deletions or insertions. In some embodiments, the variant polypeptide has a 150 or less (eg, 145, 140, 135, 130, 125, 120, 115, 110, 105, 100, 95, 90, 85 , 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 , up to 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, or 2) amino acid substitutions, deletions or insertions.

일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드(예를 들어, 변이체 IL-2 또는 TNFα 폴리펩티드)는 그것이 유래된 야생형 전길이 폴리펩티드가 표적 생물분자(예를 들어, 야생형 전길이 폴리펩티드가 구성원인 특이적 결합 쌍의 구성원)에 결합하는 능력의 적어도 10(예를 들어, 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100)%를 보유한다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 그것이 유래된 야생형 전길이 폴리펩티드보다 표적 생물분자에 대해 더 큰 친화성을 가질 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 변이체 폴리펩티드가 유래된 야생형 전길이 폴리펩티드보다 표적 생물분자에 대해 2(3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500 또는 심지어 1000)배 더 큰 친화성을 갖는다. 두 단백질 사이의 상호작용을 검출하거나 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며 상기에 개시되어 있다. In some embodiments, a variant polypeptide (e.g., a variant IL-2 or TNFα polypeptide) is a member of a specific binding pair in which the wild-type full-length polypeptide from which it is derived is a target biomolecule (e.g., the wild-type full-length polypeptide is a member). ) at least 10 (e.g., at least 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 or 100) hold the % In some embodiments, a variant polypeptide will have a greater affinity for a target biomolecule than the wild-type full-length polypeptide from which it was derived. For example, in some embodiments, a variant polypeptide has a 2 (3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500 or even 1000) times greater affinity. Methods for detecting or measuring interactions between two proteins are known in the art and are described above.

일부 실시양태에서, 야생형 전길이 천연 리간드는 세포 표면 수용체의 활성을 조절한다. 따라서, 천연 리간드의 변이체는 야생형 천연 리간드의 활성에 비하여, 수용체의 활성을 조절하는 능력이 향상되거나 감소될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 변이체가 유래된 전길이 야생형 폴리펩티드가 세포 표면 수용체 단백질을 활성화시키는 능력의 90(예를 들어, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 또는 5 미만) % 미만을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩티드는 그것이 결합하는 수용체를 활성화시키지 않는다. In some embodiments, the wild-type full-length natural ligand modulates the activity of a cell surface receptor. Thus, the variant of the natural ligand may have improved or reduced ability to modulate the activity of the receptor compared to the activity of the wild-type natural ligand. For example, in some embodiments, a variant polypeptide has 90 (e.g., 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, less than 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, or 5)%. In some embodiments, a variant polypeptide does not activate a receptor to which it binds.

그러한 예시적인 변이체 폴리펩티드는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2012/085891호는 삼량체화하는 능력이 감소되어 TNF 패밀리 수용체를 활성화하는 능력이 감소된 TNF 패밀리 리간드 변이체를 개시한다(또한 미국 특허 출원 공개 제2014/0096274호를 참고하며 참고로 본 발명에 통합됨). 그러나 변이체 TNF 리간드는 TNF 패밀리 수용체에 결합하는 능력을 보유한다. 변이체와 야생형 천연 리간드 사이의 활성 비교를 위해 적합한 방법은 당업계에 공지되어 있다. Such exemplary variant polypeptides are known in the art. For example, International Patent Application Publication No. WO 2012/085891 discloses variants of TNF family ligands with reduced ability to trimerize and thereby activate TNF family receptors (see also US Patent Application Publication No. 2014/0096274). and incorporated herein by reference). However, variant TNF ligands retain the ability to bind to TNF family receptors. Suitable methods for comparing activity between variants and wild-type natural ligands are known in the art.

일부 실시양태에서, 가용성 생물분자는 세포 표면 수용체에 대한 리간드, 예를 들어, 당업계에 알려지거나 본원에 개시된 것들 중 임의의 것과 같은, 사이토카인 또는 케모카인이다. 일부 실시양태에서, 리간드는 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리 리간드 또는 그의 변이체이다. 일부 실시양태에서, TNF 패밀리 리간드는 TNFα 또는 그의 변이체이다. 일부 실시양태에서, TNF 패밀리 리간드는 Fas 리간드, 림프독소, 림프독소 알파, 림프독소 베타, 4-1BB 리간드, CD30 리간드, EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNFβ, TRAIL 또는 전술한 임의의 것의 변이체이다. In some embodiments, the soluble biomolecule is a ligand for a cell surface receptor, eg, a cytokine or chemokine, such as any of those known in the art or disclosed herein. In some embodiments, the ligand is a tumor necrosis factor (TNF) family ligand or variant thereof. In some embodiments, a TNF family ligand is TNFα or a variant thereof. In some embodiments, the TNF family ligand is Fas ligand, lymphotoxin, lymphotoxin alpha, lymphotoxin beta, 4-1BB ligand, CD30 ligand, EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNFβ, TRAIL, or any of the foregoing. is a variant

일부 실시양태에서, 가용성 생물분자는 표 2에 동정된 것이다. In some embodiments, soluble biomolecules are those identified in Table 2.

예시적 가용성 생물분자 및/또는 제제Exemplary Soluble Biomolecules and/or Agents 특이적 결합쌍의 제1 구성원(가용성 생물분자 또는 제제)The first member of a specific binding pair (soluble biomolecule or agent) 유전자 약자gene abbreviation 분자 부류molecular class 관련 질병 상태related disease state 특이적 결합 쌍의 제2 구성원A second member of a specific binding pair 종양 괴사 인자 알파tumor necrosis factor alpha TNFTNF 사이토카인cytokines ADAD sTNF-RsTNF-R 가용성 인터루킨-2 수용체Soluble interleukin-2 receptor IL2RAIL2RA 디코이(Decoy)Decoy 암cancer sIL-2RsIL-2R 가용성 종양 괴사 인자 수용체-1Soluble tumor necrosis factor receptor-1 TNFRSF1ATNFRSF1A 디코이Decoy 암cancer rTNFrTNF 가용성 종양 괴사 인자 수용체-2Soluble tumor necrosis factor receptor-2 TNFRSF1BTNFRSF1B 디코이Decoy 암cancer rTNFrTNF 인터루킨-2interleukin-2 IL2IL2 사이토카인cytokines ADAD sIL-2RsIL-2R 인터루킨-6interleukin-6 IL6IL6 사이토카인cytokines ADAD sIL-6RsIL-6R 인터루킨-8interleukin-8 CXCL8CXCL8 사이토카인cytokines ADAD sIL-8RsIL-8R 인터루킨-1AInterleukin-1A IL1AIL1A 사이토카인cytokines ADAD sIL-1RAsIL-1RA 인터루킨-1BInterleukin-1B IL1BIL1B 사이토카인cytokines 염증Inflammation C-X-C 모티프 케모카인 10C-X-C motif chemokine 10 CXCL10CXCL10 케모카인Chemokines 면역 활성화immune activation CXCR3CXCR3 디코이 수용체-3decoy receptor-3 FASFAS 디코이Decoy 암cancer FAS-LFAS-L 가용성 사멸 수용체-4Soluble death receptor-4 TNFRSF10ATNFRSF10A 디코이Decoy 암cancer TRAIL-R1TRAIL-R1 가용성 사멸 수용체-5Soluble death receptor-5 TNFRSF10BTNFRSF10B 디코이Decoy 암cancer TRAIL-R2TRAIL-R2 Fas 리간드Fas ligand FASLGFASLG 사이토카인cytokines ADAD sDcR3sDcR3 TNF-관련 세포사멸 유도 리간드TNF-related apoptosis inducing ligand TNFSF10TNFSF10 사이토카인cytokines ADAD sDR4/5sDR4/5 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 1(흑색종 성장 자극 활성, 알파)Chemokine (C-X-C motif) ligand 1 (melanoma growth stimulatory activity, alpha) CXCL1CXCL1 케모카인Chemokines 암cancer 세포사멸의 TNF-관련 약한 유도자TNF-related weak inducer of apoptosis TNFSF12TNFSF12 사이토카인cytokines TBDTBD sDR3sDR3 매트릭스 메탈로펩티다제 1(사이질 콜라게나제)Matrix metallopeptidase 1 (interstitial collagenase) MMP1MMP1 프로테아제protease 암cancer 매트릭스 메탈로펩티다제 2(젤라티나제 A, 72kDa 젤라티나제, 72kDa 타입 IV 콜라게나제)Matrix metallopeptidase 2 (gelatinase A, 72 kDa gelatinase, 72 kDa type IV collagenase) MMP2MMP2 프로테아제protease OA/암OA/Cancer 매트릭스 메탈로펩티다제 3(스트로메리신 1, 프로젤라티나제)Matrix metallopeptidase 3 (stromericin 1, progelatinase) MMP3MMP3 프로테아제protease 암cancer 매트릭스 메탈로펩티다제 9(젤라티나제 B, 92kDa 젤라티나제, 92kDa 타입 IV 콜라게나제)Matrix metallopeptidase 9 (gelatinase B, 92 kDa gelatinase, 92 kDa type IV collagenase) MMP9MMP9 프로테아제protease OA/암OA/Cancer 매트릭스 메탈로펩티다제 10(스트로메리신 2)Matrix metallopeptidase 10 (stromericin 2) MMP10MMP10 프로테아제protease 암cancer 매트릭스 메탈로펩티다제 12(대식세포 엘라스타제)Matrix metallopeptidase 12 (macrophage elastase) MMP12MMP12 프로테아제protease 암cancer 인돌아민 2,3-다이옥시게나제Indolamine 2,3-dioxygenase IDO1IDO1 효소enzyme 암cancer 인터루킨-5interleukin-5 IL5IL5 사이토카인cytokines ADAD 메포리주맙Meforizumab 가용성 인터루킨-5 수용체Soluble interleukin-5 receptor IL5RAIL5RA 디코이Decoy 암cancer IL-5IL-5 가용성 인터루킨-6 수용체Soluble interleukin-6 receptor IL6RIL6R 디코이Decoy 암cancer IL-6IL-6 가용성 인터루킨-8 수용체Soluble interleukin-8 receptor CXCR1CXCR1 디코이Decoy 암cancer IL-8IL-8 가용성 인터루킨-1A 수용체Soluble interleukin-1A receptor IL1R1IL1R1 디코이Decoy 암cancer IL-1AIL-1A C-반응성 단백질C-reactive protein CRPCRP 단백질protein 염증 마커inflammatory markers 가용성 사멸 수용체-3Soluble death receptor-3 TNFRSF25TNFRSF25 디코이Decoy TWEAKTWEAK

"AD"는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환을 말한다. "OA"는 골관절염을 말한다."AD" refers to an autoimmune disease and/or an inflammatory disease. “OA” refers to osteoarthritis.

일부 실시양태에서, 각 입자는 다수의 제제를 포함한다. 다수의 제제는 약 103 내지 약 107 제제의 복제 또는 약 104 내지 약 106 제제의 복제와 같은, 10 내지 약 109 제제의 복제를 포함할 수 있다. In some embodiments, each particle comprises multiple agents. The plurality of agents may include from about 10 to about 10 9 replicas, such as from about 10 3 to about 10 7 replicas or from about 10 4 to about 10 6 replicas.

V. 항체 생산 방법 V. Methods of Producing Antibodies

상기에서 개시한 바처럼, 일부 실시양태에서, 입자 또는 입자들의 표면 상에 고정된 제제는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 항체는 당업계에 공지된 방법에 의해 유도될 수 있다. 예를 들어, 마우스, 햄스터 또는 토끼와 같은 포유류는 가용성 생물분자(예를 들어, 가용성 TNFR, 독소 또는 바이러스 단백질)의 면역원성 형태로 면역될 수 있다. 대안적으로, 면역화는 관찰된 면역원 반응을 야기하는 생물분자(예를 들어, 가용성 단백질)를 생체내 발현하는 핵산을 이용함으로써 일어날 수 있다. 단백질 또는 펩티드에 면역원성을 부여하는 기술은 담체에의 접합 또는 당업계에 잘 알려진 다른 기술을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드의 펩티드 부분은 아쥬반트의 존재하에서 투여될 수 있다. 면역화의 진행은 혈장 또는 혈청 내의 항체 역가를 검출하여 모니터할 수 있다. 표준 ELISA 또는 다른 면역분석이 항체 수준을 평가하기 위하여 항원으로서 면역원을 이용하여 사용될 수 있다. As described above, in some embodiments, the particle or agent immobilized on the surface of the particles is an antibody or antigen-binding fragment thereof. Antibodies can be induced by methods known in the art. For example, a mammal such as a mouse, hamster or rabbit can be immunized with an immunogenic form of a soluble biomolecule (eg, a soluble TNFR, toxin or viral protein). Alternatively, immunization can occur by using nucleic acids expressing in vivo a biomolecule (eg, a soluble protein) that elicits an observed immunogenic response. Techniques for conferring immunogenicity on a protein or peptide include conjugation to a carrier or other techniques well known in the art. For example, the peptide portion of a polypeptide of the invention can be administered in the presence of an adjuvant. The progress of immunization can be monitored by detecting antibody titers in plasma or serum. A standard ELISA or other immunoassay can be used using the immunogen as the antigen to assess antibody levels.

면역화 후, 본 발명의 폴리펩티드와 반응성인 항혈청이 수득될 수 있으며, 소망하는 경우, 혈청으로부터 다클론 항체가 분리될 수 있다. 단클론 항체를 생산하기 위하여, 항체 생산 세포(림프구)가 면역된 동물로부터 수집되고 골수종 세포와 같은 불멸화 세포와의 표준 체세포 융합 절차에 의해 융합되어 하이브리도마 세포를 생성할 수 있다. 그러한 기술은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 하이브리도마 기술(Kohler 및 Milstein에 의해 원천 개발됨, (1975) Nature, 256: 495-497), 예를 들어, 인간 B 세포 하이브리도마 기술(Kozbar et al., (1983) Immunology Today, 4: 72) 및 인간 단클론 항체를 생산하기 위한 EBV-하이브리도마 기술(Cole et al., (1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. pp. 77-96)을 포함한다. 하이브리도마 세포는 본 발명의 폴리펩티드에 특이적으로 반응성인 항체의 생산에 대해 면역화학적으로 스크린될 수 있으며 단클론 항체가 분리될 수 있다. After immunization, antisera reactive with a polypeptide of the invention can be obtained and, if desired, polyclonal antibodies can be isolated from the serum. To produce monoclonal antibodies, antibody-producing cells (lymphocytes) can be harvested from an immunized animal and fused by standard somatic cell fusion procedures with immortalized cells, such as myeloma cells, to create hybridoma cells. Such techniques are well known in the art and include, for example, hybridoma technology (originally developed by Kohler and Milstein, (1975) Nature, 256: 495-497), such as human B cell hybridomas. technology (Kozbar et al., (1983) Immunology Today, 4: 72) and EBV-hybridoma technology to produce human monoclonal antibodies (Cole et al., (1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss , Inc. pp. 77-96). Hybridoma cells can be immunochemically screened for production of antibodies specifically reactive to a polypeptide of the invention and monoclonal antibodies can be isolated.

VI. 입자 클리어런스(clearance) VI. particle clearance

일부 실시양태에서, 입자는 클리어런스 제제(clearance agent)를 포함한다. 클리어런스 제제는 소변으로 배출, 분해, 간담즙 경로에 의한 배출 및/또는 식세포작용에 의해서와 같은 생물학적 경로를 통한 입자의 클리어런스를 촉진할 수 있다. In some embodiments, the particles include a clearance agent. The clearance agent may promote clearance of the particles via biological pathways such as excretion into the urine, degradation, excretion by the hepatobiliary pathway and/or phagocytosis.

예를 들어, 입자는 저장소를 포함할 수 있으며, 저장소는 클리어런스 제제를 포함한다. 저장소는 입자 몸체 내의 구멍 또는 공극, 예를 들어, 다공성 규소 입자의 몸체 내의 공극일 수 있다. For example, the particle can include a reservoir, and the reservoir includes a clearance agent. The reservoir may be a hole or void in the body of the particle, for example a void in the body of the porous silicon particle.

기공을 포함하는 입자의 경우, 저장소는 기공일 수 있거나 저장소는 평균 기공 크기보다 크거나 작을 수 있다. 저장소는 입자의 몸체 내의 리세스(recess)(예를 들어, 얕은 리세스)로 이루어질 수 있으며, 이때 리세스의 폭 또는 직경은 평균 기공 크기의 폭 또는 직경보다 크다. 저장소의 폭 또는 직경은 평균 기공 크기의 폭 또는 직경의 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 175, 200, 250, 300, 400, 또는 심지어 약 500배 크기일 수 있다. 저장소의 폭 또는 직경은 평균 기공 크기의 폭 또는 직경의 약 2배 내지 약 8배 또는 약 2배 내지 약 6배와 같은, 평균 기공 크기의 폭 또는 직경의 약 2배 내지 약 10배일 수 있다. 저장소의 폭 또는 직경은 평균 기공 크기의 폭 또는 직경의 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 175, 200, 250, 300, 400, 또는 심지어 약 500배 크기일 수 있다. For particles comprising pores, the reservoirs may be pores or the reservoirs may be larger or smaller than the average pore size. The reservoir may consist of a recess (eg, a shallow recess) in the body of the particle, wherein the width or diameter of the recess is greater than the average pore size width or diameter. The width or diameter of the reservoir is at least about 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 175, 200, 250, 300, 400, or even about 500 times the size. The width or diameter of the reservoir may be from about 2 times to about 10 times the average pore size width or diameter, such as from about 2 times to about 8 times the average pore size width or diameter or from about 2 times to about 6 times the average pore size width or diameter. The width or diameter of the reservoir is about 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 of the width or diameter of the average pore size. , 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 175, 200, 250, 300, 400 , or even about 500 times the size.

저장소는 개구를 포함할 수 있다. 개구는 캡 또는 부재에 의해 덮여서 클리어런스 제제와 세포 및/또는 세포외 단백질(예를 들어, 항체) 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 캡 또는 부재는 생분해성 중합체와 같은 중합체를 포함할 수 있다. 캡 또는 부재는 소정의 기간 후에 (예를 들어, 가수분해에 의해) 분해되어, 클리어런스 제제를 세포 및/또는 세포외 단백질에 노출시킬 수 있다. 캡 또는 부재는 약 1일 내지 약 5년, 예를 들어, 약 1일 내지 약 3년 또는 약 1일 내지 약 1년 동안 생물학적 유체(예를 들어, 혈장 또는 세포외 유체)에 노출된 후 분해될 수 있다. The reservoir may include an opening. The aperture may be covered by a cap or member to inhibit interactions between the clearance agent and cells and/or extracellular proteins (eg antibodies). The cap or member may include a polymer such as a biodegradable polymer. The cap or member can degrade (eg, by hydrolysis) after a period of time, exposing the clearance agent to cells and/or extracellular proteins. The cap or member degrades after exposure to a biological fluid (eg, plasma or extracellular fluid) for about 1 day to about 5 years, such as about 1 day to about 3 years or about 1 day to about 1 year. It can be.

소정의 기간은 입자가 액체(예를 들어, 수성 액체)내에 있는 기간일 수 있다. 소정의 기간은 입자의 생체내 체류 기간일 수 있다(예를 들어, 생물학적 유체, pH, 효소 및/또는 온도에의 노출). 소정의 기간은 생물분자에 대한 입자의 결합에 의해 적어도 부분적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 입자는 생물분자의 결합이 클리어런스 제제를 세포 및/또는 세포외 단백질에 노출시키도록 하는 형태를 가질 수 있다(예를 들어, 참고로 본 발명에 통합되는 PCT 특허 출원 공개 WO2014/170899호 참고). 소정의 기간은 약 1일 내지 약 5년, 예를 들어, 약 1일 내지 약 3년 또는 약 1일 내지 약 1년일 수 있다. The predetermined period of time may be a period of time during which the particles are in a liquid (eg, an aqueous liquid). The predetermined period of time may be the duration of the particle's residence in vivo (eg, exposure to biological fluids, pH, enzymes, and/or temperature). The predetermined period of time may be determined at least in part by binding of the particle to the biomolecule. For example, the particles may be shaped such that binding of the biomolecule exposes the clearance agent to cellular and/or extracellular proteins (eg, PCT Patent Application Publication No. WO2014/170899, incorporated herein by reference). see No.). The predetermined period of time may be from about 1 day to about 5 years, such as from about 1 day to about 3 years or from about 1 day to about 1 year.

캡 또는 막으로 사용하기에 적합한 예시적인 물질은 참고로 본 발명에 통합되는 미국 특허 제7,918,842호에 개시된다. 일반적으로, 이들 물질은 효소적 가수분해 또는 생체내 또는 시험관내(in vitro)에서 물에 대한 노출에 의해 또는 표면 또는 대량 부식에 의해 분해되거나 용해된다. 대표적인 합성 생분해 중합체는 폴리(아미노산) 및 폴리(펩티드)와 같은 폴리(아미드); 폴리(락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(락틱-코-글리콜 산) 및 폴리(카프로락톤)과 같은 폴리(에스테르); 폴리(안하이드라이드); 폴리(오르토에스테르); 폴리(카보네이트); 및 그의 화학적 유도체(치환, 화학기의 부가, 예를 들어, 알킬, 알킬렌, 하이드록실화, 산화 및 당업자에 의해 일상적으로 이루어지는 다른 변형), 그의 공중합체 및 혼합물을 포함한다. 캡 또는 막에 사용될 수 있는 다른 중합체는 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 글리콜) 및 폴리(테트라메틸렌 옥사이드)와 같은 폴리(에테르); 비닐 중합체 - 폴리(아크릴레이트) 및 폴리(메타크릴레이트), 예를 들어, 메틸, 에틸, 다른 알킬, 하이드록시에틸 메타크릴레이트, 아크릴 및 메타크릴 산, 및 기타, 예를 들어, 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 피롤리돈) 및 폴리(비닐 아세테이트); 폴리(우레탄); 셀룰로오스 및 그 유도체, 예를 들어, 알킬, 하이드록시알킬, 에테르, 에스테르, 니트로셀룰로오스 및 다양한 셀룰로오스 아세테이트; 폴리(실록산); 및 그의 임의의 화학 유도체(치환, 화학기의 부가, 예를 들어, 알킬, 알킬렌, 하이드록실화, 산화 및 당업자에 의해 일상적으로 이루어지는 다른 변형), 그의 공중합체 및 혼합물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 저장소 캡은 가교된 폴리비닐 알코올과 같은 하나 이상의 가교된 중합체로부터 형성된다. Exemplary materials suitable for use as a cap or membrane are disclosed in US Pat. No. 7,918,842, incorporated herein by reference. Generally, these materials are degraded or dissolved by enzymatic hydrolysis or exposure to water in vivo or in vitro or by surface or mass corrosion. Representative synthetic biodegradable polymers include poly(amides) such as poly(amino acids) and poly(peptides); poly(esters) such as poly(lactic acid), poly(glycolic acid), poly(lactic-co-glycolic acid) and poly(caprolactone); poly(anhydride); poly(orthoesters); poly(carbonate); and chemical derivatives thereof (substitutions, additions of chemical groups, eg, alkyls, alkylenes, hydroxylations, oxidations, and other modifications routinely made by those skilled in the art), copolymers, and mixtures thereof. Other polymers that may be used for the cap or membrane include poly(ether)s such as poly(ethylene oxide), poly(ethylene glycol), and poly(tetramethylene oxide); Vinyl Polymers - poly(acrylates) and poly(methacrylates) such as methyl, ethyl, other alkyl, hydroxyethyl methacrylate, acrylic and methacrylic acids, and others such as poly(vinyl alcohol), poly(vinyl pyrrolidone) and poly(vinyl acetate); Polyurethane); cellulose and its derivatives such as alkyl, hydroxyalkyl, ethers, esters, nitrocellulose and various cellulose acetates; poly(siloxane); and any chemical derivatives thereof (substitutions, additions of chemical groups such as alkyls, alkylenes, hydroxylations, oxidations, and other modifications routinely made by those skilled in the art), copolymers, and mixtures thereof. In certain embodiments, the reservoir cap is formed from one or more crosslinked polymers such as crosslinked polyvinyl alcohol.

일부 실시양태에서, 입자는 코팅을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코팅은 클리어런스 제제를 포함한다. 코팅은 클리어런스 제제를 가릴 수 있다. In some embodiments, the particles include a coating. In some embodiments, the coating includes a clearance agent. The coating may mask the clearance agent.

입자는 제1 표면과 제2 표면을 포함할 수 있으며; 제제는 제1 표면 상에 고정될 수 있으며; 코팅은 제2 표면의 적어도 일부를 덮을 수 있다. 제1 표면은 내부 표면 또는 내면 표면일 수 있으며, 예를 들어, 제1 표면은 제제가 세포 표면 상의 분자에 결합하는 능력이 감소되도록 배향될 수 있다. 내부 표면 또는 내면 표면의 예는 기공, 저장소 또는 튜브의 내면벽, 환상형의 내면 원주 표면, 또는 오목한 표면의 중공을 포함한다. 내부 표면 또는 내면 표면의 다른 예는 입자의 외부 표면을 포함하며, 이때 외부 표면은 하나 이상의 돌출부에 의해 세포와의 상호작용으로부터 보호된다. 제2 표면은 외부 표면일 수 있으며, 예를 들어, 제2 표면은 코팅이 세포와 상호작용할 수 있도록 배향될 수 있다. The particle can include a first surface and a second surface; The formulation can be immobilized on the first surface; The coating may cover at least a portion of the second surface. The first surface can be an interior surface or an interior surface, for example, the first surface can be oriented such that the ability of the agent to bind to molecules on the cell surface is reduced. Examples of inner surfaces or inner surfaces include pores, inner walls of reservoirs or tubes, annular inner circumferential surfaces, or hollows of concave surfaces. Other examples of inner or inner surfaces include the outer surface of a particle, where the outer surface is protected from interaction with cells by one or more protrusions. The second surface can be an external surface, for example, the second surface can be oriented such that the coating can interact with the cells.

코팅은 입자 사이의 상호작용을 억제할 수 있으며, 예를 들어, 코팅은 응집물을 형성하는 입자의 성향을 감소시킬 수 있다. 코팅은 예를 들어, 생물학적으로 불활성인 표면을 제시함으로써, 입자와 세포 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 코팅은 세포외 분자와의 비특이적 상호작용, 예를 들어, 생물분자의 비특이적 흡착을 억제할 수 있다. 코팅은 세포 또는 세포외 분자와의 특이적 상호작용을 억제할 수 있으며, 예를 들어, 코팅은 입자의 배출 또는 식세포작용을 불리하게 하거나 지연시킬 수 있다. 코팅은 배출 또는 식세포작용을 위해 입자를 표적화할 수 있다. 코팅 또는 배출 또는 식세포작용을 위해 입자를 표적화하는 다른 특징(예를 들어, "배출-유도 화합물")은 예를 들어, 소정의 기간 동안 혈류내에서 입자의 유지를 촉진하기 위하여, 입자의 배출 또는 식세포작용을 지연시키는 코팅(예를 들어, 제2 코팅)에 의해 가려질 수 있다. The coating can inhibit interactions between the particles, for example, the coating can reduce the tendency of the particles to form agglomerates. The coating can inhibit interactions between the particles and cells, for example by presenting a biologically inert surface. The coating can inhibit non-specific interactions with extracellular molecules, eg, non-specific adsorption of biomolecules. The coating can inhibit specific interactions with cells or extracellular molecules, for example, the coating can impair or delay the release or phagocytosis of the particle. The coating can target particles for excretion or phagocytosis. Coatings or other features that target the particle for excretion or phagocytosis (eg, “excretion-inducing compounds”) may include excretion or phagocytosis of the particle, for example to promote retention of the particle in the bloodstream for a given period of time. It may be masked by a coating that retards phagocytosis (eg, a second coating).

입자는 제2 코팅을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 제2 코팅은 제2의 다수의 코팅 분자로 이루어진다. 입자는 제2의 다수의 코팅 분자를 포함할 수 있다. 제2 코팅 및/또는 제2의 다수의 코팅 분자는 예를 들어, 코팅 및/또는 다수의 코팅 분자를 가림으로써, 생체내 입자의 클리어런스를 감소시킬 수 있다. 제2 코팅 및/또는 제2의 다수의 코팅 분자는 예를 들어, 소정의 기간 후에 세포 및/또는 세포외 단백질에 코팅 및/또는 다수의 코팅 분자를 노출시키기 위하여, 생분해성일 수 있다. 제2 코팅 및/또는 제2의 다수의 코팅 분자는 생분해성 중합체를 포함할 수 있으며, 예를 들어, 제2의 다수의 코팅 분자의 각 분자는 생분해성 중합체를 포함할 수 있다. 제2 코팅 및/또는 제2의 다수의 코팅 분자는 식세포작용을 억제하는 CD47을 포함할 수 있다. The particle can include a second coating, for example, the second coating consists of a second plurality of coating molecules. The particle may include a second plurality of coating molecules. The second coating and/or the second plurality of coating molecules may reduce clearance of the particle in vivo , for example by masking the coating and/or the plurality of coating molecules. The second coating and/or second plurality of coating molecules may be biodegradable, eg, to expose the coating and/or plurality of coating molecules to cellular and/or extracellular proteins after a predetermined period of time. The second coating and/or the second plurality of coating molecules may include a biodegradable polymer, eg, each molecule of the second plurality of coating molecules may include a biodegradable polymer. The second coating and/or second plurality of coating molecules may include CD47 to inhibit phagocytosis.

일부 실시양태에서, 입자는 제1 표면(예를 들어, 내부 표면) 및 제2 표면(예를 들어, 외부 표면)을 포함하며; 제제는 제1 표면 상에 고정되고; 코팅은 제2 표면의 적어도 일부를 덮는다. 제1 표면의 배향은 제제가 세포 표면 상의 분자와 상호작용하는 능력을 감소시킬 수 있다. 제2 표면의 배향은 코팅과 세포, 세포외 분자 및/또는 상이한 입자 사이의 상호작용을 허용할 수 있다. 코팅과 세포, 세포외 분자 및/또는 상이한 입자 사이의 "상호작용"은 예를 들어, 세포, 세포외 분자 또는 다른 입자에 대한 입자의 안정한 결합을 불리하게 하기 위하여, 약한, 중성의 또는 불리한 상호작용일 수 있다. 대안적으로, 코팅과 세포 및/또는 세포외 분자 사이의 상호작용은 예를 들어, 식세포작용과 같은 생물학적 경로를 통한 입자의 클리어런스에 유리하도록, 특이적인 또는 설계된 상호작용일 수 있다. 특정 바람직한 실시양태에서, 제2 표면은 실질적으로 제제가 없다. 특정 바람직한 실시양태에서, 제1 표면은 실질적으로 코팅이 없다. 특정 바람직한 실시양태에서, 코팅은 실질적으로 모든 제2 표면을 덮는다.In some embodiments, a particle comprises a first surface (eg, an inner surface) and a second surface (eg, an outer surface); The formulation is immobilized on the first surface; The coating covers at least a portion of the second surface. Orientation of the first surface can reduce the ability of the agent to interact with molecules on the cell surface. The orientation of the second surface can allow for interactions between the coating and cells, extracellular molecules and/or different particles. "Interactions" between the coating and cells, extracellular molecules, and/or different particles may be weak, neutral, or unfavorable interactions, e.g., to impair stable binding of the particles to cells, extracellular molecules, or other particles. may be working Alternatively, interactions between the coating and cells and/or extracellular molecules may be interactions that are specific or designed to favor clearance of the particle via a biological pathway, eg phagocytosis. In certain preferred embodiments, the second surface is substantially free of agent. In certain preferred embodiments, the first surface is substantially free of coating. In certain preferred embodiments, the coating covers substantially all of the second surface.

일부 실시양태에서, 입자는 제1 표면(예를 들어, 내부 표면) 및 제2 표면(예를 들어, 외부 표면)을 포함하며; 제제는 제1 표면 및 제2 표면 상에 고정되고; 코팅은 제2 표면의 적어도 일부를 덮는다. 그러한 실시양태에서, 코팅(및/또는 제2 코팅)은 제제와 세포 표면 상의 분자 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 특정 바람직한 실시양태에서, 코팅은 실질적으로 모든 제2 표면을 덮는다. In some embodiments, a particle comprises a first surface (eg, an inner surface) and a second surface (eg, an outer surface); The formulation is immobilized on the first surface and the second surface; The coating covers at least a portion of the second surface. In such embodiments, the coating (and/or second coating) can inhibit interactions between the agent and molecules on the cell surface. In certain preferred embodiments, the coating covers substantially all of the second surface.

일부 실시양태에서, 입자는 제1 표면(예를 들어, 내부 표면) 및 제2 표면(예를 들어, 외부 표면)을 포함하며; 제제는 제1 표면 상에 고정되고; 코팅은 제1 표면의 적어도 일부 및 제2 표면의 적어도 일부를 덮는다. 그러한 실시양태에서, 코팅은 바람직하게는 제제가 생물분자에 특이적으로 결합하는 능력에 영향을 주지 않는다. 특정 바람직한 실시양태에서, 코팅은 실질적으로 모든 제2 표면을 덮는다. In some embodiments, a particle comprises a first surface (eg, an inner surface) and a second surface (eg, an outer surface); The formulation is immobilized on the first surface; The coating covers at least a portion of the first surface and at least a portion of the second surface. In such embodiments, the coating preferably does not affect the ability of the agent to specifically bind to a biomolecule. In certain preferred embodiments, the coating covers substantially all of the second surface.

일부 실시양태에서, 입자는 표면을 포함하고; 제제는 표면 상에 고정되고; 코팅은 표면의 적어도 일부를 덮는다. 그러한 실시양태에서, 코팅은 제제가 생물분자에 특이적으로 결합하는 능력에 영향을 주지 않을 수 있다. 코팅은 제제의 일부가 생물분자에 특이적으로 결합하는 것을 허용하고 제제의 일부와 생물분자 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 코팅은 제제와 세포 표면 상의 분자 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 특정 바람직한 실시양태에서, 코팅은 실질적으로 모든 표면을 덮는다. In some embodiments, a particle comprises a surface; The formulation is immobilized on the surface; The coating covers at least a portion of the surface. In such embodiments, the coating may not affect the ability of the agent to specifically bind a biomolecule. The coating may allow a portion of the agent to specifically bind to the biomolecule and inhibit interactions between the portion of the agent and the biomolecule. The coating can inhibit interactions between the agent and molecules on the cell surface. In certain preferred embodiments, the coating covers substantially all of the surface.

코팅은 코팅 분자를 포함할 수 있으며, 예를 들어, 코팅은 다수의 코팅 분자로 이루어질 수 있거나 코팅은 코팅 분자 집단으로 이루어질 수 있다. 본원에서 사용된 "다수의 코팅 분자" 및 "코팅 분자 집단"은 각각 코팅을 말한다. 그러나, 용어 "코팅"은 하이드로젤과 같은 추가의 조성물을 말할 수 있다. 코팅 분자는 클리어런스 제제일 수 있다(그리고 따라서, 클리어런스 제제는 코팅 분자일 수 있다). A coating may include coating molecules, for example, a coating may consist of a plurality of coating molecules or a coating may consist of a population of coating molecules. As used herein, “a plurality of coating molecules” and a “population of coating molecules” respectively refer to a coating. However, the term "coating" may refer to additional compositions such as hydrogels. The coating molecule may be a clearance agent (and thus, the clearance agent may be a coating molecule).

입자는 다수의 코팅 분자를 포함할 수 있다. 입자는 표면과 표면 상에 고정된 다수의 제제를 포함할 수 있으며, 다수의 코팅 분자 중 적어도 한 분자는 표면에 결합될 수 있다. 예를 들어, 다수의 코팅 분자의 모든 또는 실질적으로 모든 분자가 표면에 결합될 수 있다. A particle may contain multiple coating molecules. The particle may include a surface and a plurality of agents immobilized on the surface, and at least one of the plurality of coating molecules may be bound to the surface. For example, all or substantially all molecules of a plurality of coating molecules may be bound to the surface.

입자는 표면과 제2 표면을 포함할 수 있으며, 표면 상에 고정된 다수의 제제 및 다수의 코팅 분자 중 적어도 한 분자는 제2 표면에 결합될 수 있다. 예를 들어, 다수의 코팅 분자 중 모든 또는 실질적으로 모든 분자가 제2 표면에 결합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 다수의 코팅 분자 중 일부 분자는 표면에 결합되며 다수의 코팅 분자 중 일부 분자는 제2 표면에 결합된다. The particle may include a surface and a second surface, and at least one molecule of the plurality of agents and the plurality of coating molecules immobilized on the surface may be bound to the second surface. For example, all or substantially all of the plurality of coating molecules may be bound to the second surface. In some embodiments, some of the plurality of coating molecules are bound to the surface and some of the plurality of coating molecules are bound to the second surface.

일부 실시양태에서, 코팅 분자는 생체내에서 입자의 클리어런스를 증가시킨다. 예를 들어, 코팅 분자는 병원균-관련 분자 패턴을 포함할 수 있다. In some embodiments, the coating molecule increases the clearance of the particle in vivo . For example, the coating molecule may include a pathogen-associated molecular pattern.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 입자는 배출-유도 화합물을 포함하는 코팅을 가지며, 이는 예를 들어, 신장, 간/장(예를 들어, 담즙을 통해) 또는 식세포작용(예를 들어, 항원-제시 세포에 의해)을 통해, 순환계로부터 입자의 제거를 촉진한다. 다수의 코팅 분자는 다수의 배출-유도 화합물일 수 있다. 예를 들어, 입자가 환상형인 실시양태에서, 내면 원주 표면(예를 들어, 제1 표면)은 고정된 제제를 포함할 수 있으며 외부 표면(예를 들어, 제2 표면)은 예를 들어, 신장, 간 또는 대식세포에 의한 입자의 클리어런스를 유도하는 화합물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 배출-유도 화합물은 프로그램된다. 즉, 화합물은 시간(예를 들어, 소정의 기간)에 걸쳐 (예를 들어, 효소 작용, 가수분해 또는 점진적 용해를 통해) 분해되어 배출-유도 화합물 또는 클리어런스 속도를 증가시키는 다른 특징을 노출시키는 코팅으로 덮일 수 있다. 코팅은 약 1일 내지 약 3년 또는 약 1일 내지 약 1년과 같은 약 1일 내지 약 5년동안 생물학적 유체(예를 들어, 혈장 또는 세포외 유체)에 노출된 후 분해될 수 있다. 따라서, 입자의 생체내 체류는 변형되고/되거나 제어될 수 있다. In some embodiments, the particles disclosed herein have a coating comprising an excretion-inducing compound, which is for example renal, hepatic/intestinal (eg, via bile) or phagocytotic (eg, antigen- by presenting cells), thereby facilitating the elimination of particles from the circulation. A plurality of coating molecules may be a plurality of excretion-inducing compounds. For example, in embodiments where the particle is toroidal, the inner circumferential surface (eg, first surface) may include a fixed agent and the outer surface (eg, second surface) may include, for example, elongation. , compounds that induce clearance of particles by the liver or macrophages. In some embodiments, the discharge-inducing compound is programmed. That is, the compound degrades (eg, through enzymatic action, hydrolysis, or gradual dissolution) over time (eg, a predetermined period of time) to expose excretion-inducing compounds or other features that increase the clearance rate of the coating. can be covered with The coating may degrade after exposure to a biological fluid (eg, plasma or extracellular fluid) for about 1 day to about 5 years, such as about 1 day to about 3 years or about 1 day to about 1 year. Thus, the retention of particles in vivo can be modified and/or controlled.

코팅은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 유기 중합체를 포함할 수 있다. 유기 중합체는 입자에 부착될 수 있으며, 예를 들어, 입자의 표면에 부착될 수 있다. 유기 중합체는 PEG, 폴리락테이트, 폴리락트산, 당, 지질, 폴리글루탐산, 폴리글리콜산(PGA), 폴리락트산(PLA), 폴리(락틱-코-글리콜 산)(PLGA), 폴리비닐 아세테이트(PVA) 및 그 조합을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 입자는 PEG에 공유적으로 접합되며, 이는 혈청 단백질의 흡착을 막고 효율적인 소변 배출을 촉진하고 입자의 응집을 감소시킨다(예를 들어, Burns et al. Nano Letters, 9(1):442-448 (2009) 및 미국 특허 출원 공개 제2013/0039848호 및 제2014/0248210호를 참고하며 각각은 참고로 본 발명에 통합됨). The coating may include an organic polymer such as polyethylene glycol (PEG). The organic polymer may be attached to the particle, for example attached to the surface of the particle. Organic polymers include PEG, polylactate, polylactic acid, sugars, lipids, polyglutamic acid, polyglycolic acid (PGA), polylactic acid (PLA), poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA), polyvinyl acetate (PVA) ) and combinations thereof. In certain embodiments, the particles are covalently conjugated to PEG, which prevents adsorption of serum proteins, promotes efficient urine excretion, and reduces aggregation of the particles (e.g., Burns et al. Nano Letters , 9(1) :442-448 (2009) and US Patent Application Publication Nos. 2013/0039848 and 2014/0248210, each incorporated herein by reference).

하나의 실시양태에서, 코팅은 적어도 하나의 친수성 모이어티(moiety), 예를 들어, 플루로닉(Pluronic)® 타입 중합체(일반식 HO(C2H40)a(-C3H60)b(C2H40)aH를 가진 비이온성 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체), 삼블록 공중합체 폴리(에틸렌 글리콜-b-(DL-락트산-코-글리콜 산)-b-에틸렌 글리콜)(PEG-PLGA-PEG), 이블록 공중합체 폴리카프로락톤-PEG(PCL-PEG), 폴리(비닐리덴 플루오라이드)-PEG (PVDF-PEG), 폴리(락트산-코-PEG)(PLA-PEG), 폴리(메틸 메타크릴레이트)-PEG (PMMA-PEG) 및 기타를 포함한다. 그러한 모이어티를 가진 실시양태에서, 친수성 모이어티는 [메톡시(폴리에틸렌옥시)프로필]-트라이메톡시실란(예를 들어, CH3(OC2H4)6-9(CH2)OSi(OCH3)3), [메톡시(폴리에틸렌옥시)프로필]-다이메톡시실란(예를 들어, CH3(OC2H4)6- 9(CH2)OSi(OCH3)2), 또는 [메톡시(폴리에틸렌옥시)프로필]-모노메톡시실란(예를 들어, CH3(OC2H4)6- 9(CH2)OSi(OCH3))와 같은 PEG 모이어티이다. 적합한 코팅은 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2011/0028662호(참고로 본 발명에 통합됨)에 개시된다. In one embodiment, the coating comprises at least one hydrophilic moiety, such as a Pluronic® type polymer (general formula HO(C 2 H 4 0) a (-C 3 H 6 0 ) b (C 2 H 4 0) a nonionic polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer with a H), triblock copolymer poly(ethylene glycol-b-(DL-lactic acid-co-glycolic acid)-b -Ethylene glycol) (PEG-PLGA-PEG), diblock copolymer polycaprolactone-PEG (PCL-PEG), poly(vinylidene fluoride)-PEG (PVDF-PEG), poly(lactic acid-co-PEG) (PLA-PEG), poly(methyl methacrylate)-PEG (PMMA-PEG) and others. In embodiments having such moieties, the hydrophilic moiety is [methoxy(polyethyleneoxy)propyl]-trimethoxysilane (eg, CH 3 (OC 2 H 4 ) 6-9 (CH 2 )OSi(OCH 3 ) 3 ), [methoxy(polyethyleneoxy)propyl]-dimethoxysilane ( eg, CH 3 (OC 2 H 4 ) 6-9 (CH 2 )OSi(OCH 3 ) 2 ), or [methoxysilane] PEG moiety such as oxy(polyethyleneoxy)propyl]-monomethoxysilane (eg, CH 3 (OC 2 H 4 ) 6-9 (CH 2 ) OSi (OCH 3 )). Suitable coatings are disclosed, for example, in US Patent Application Publication No. 2011/0028662 (incorporated herein by reference).

코팅은 천연 중합체 또는 다중-하이드록실화 중합체, 다당류, 탄수화물, 폴리올, 폴리비닐 알코올, 폴리세린과 같은 폴리아미노산 또는 2-(하이드록시에틸)메타크릴레이트와 같은 다른 중합체 또는 그 조합을 포함하는 하이드록실-함유 중합체와 같은 폴리하이드록실화 중합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리하이드록실화 중합체는 다당류이다. 다당류는 만난, 풀루란, 말토덱스트린, 전분, 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체, 검, 잔탄 검, 로쿠스트빈 검, 또는 펙틴, 그 조합을 포함한다(예를 들어, 참고로 본 발명에 통합되는 미국 특허 출원 공개 제2013/0337070호 참고). The coating may be a hydrogel containing natural polymers or multi-hydroxylated polymers, polysaccharides, carbohydrates, polyols, polyvinyl alcohols, polyamino acids such as polyserine, or other polymers such as 2-(hydroxyethyl)methacrylate or combinations thereof. polyhydroxylated polymers such as hydroxyl-containing polymers. In some embodiments, the polyhydroxylated polymer is a polysaccharide. Polysaccharides include mannan, pullulan, maltodextrin, starch, cellulose and cellulose derivatives, gums, xanthan gum, locustbin gum, or pectin, combinations thereof (e.g., U.S. patent applications incorporated herein by reference See Publication No. 2013/0337070).

일부 실시양태에서, 코팅은 쌍성이온 중합체를 포함한다(예를 들어, 각각이 참고로 본 발명에 통합되는 미국 특허 출원 공개 제2014/0235803호, 제2014/0147387호, 제2013/0196450호 및 제2012/0141797호 및 미국 특허 제8,574,549호 참고). In some embodiments, the coating comprises a zwitterionic polymer (eg, US Patent Application Publication Nos. 2014/0235803, 2014/0147387, 2013/0196450 and 2013/0196450, each of which is incorporated herein by reference). 2012/0141797 and US Patent No. 8,574,549).

다른 적합한 코팅은 폴리-알파 하이드록시 산(폴리락트산 또는 폴리락티드, 폴리글리콜산 또는 폴리글리콜리드 포함), 폴리-베타 하이드록시산(예를 들어, 폴리하이드록시부티레이트 또는 폴리하이드록시발레레이트), 에폭시 중합체(폴리에틸렌 옥사이드(PEO) 포함), 폴리비닐 알코올, 폴리에스테르, 폴리오르토에스테르, 폴리아미도에스테르, 폴리에스테르아미드, 폴리포스포에스테르 및 폴리포스포에스테르-우레탄을 포함한다. 분해성 폴리에스테르의 예는 폴리(락트산) 또는 (폴리락티드, PLA), 폴리(글리콜산) 또는 폴리글리콜리드(PGA), 폴리(3-하이드록시부티레이트), 폴리(4-하이드록시부티레이트), 폴리(3-하이드록시발레레이트), 및 폴리(카프로락톤), 또는 폴리(발레로락톤)을 포함하는 폴리(하이드록시알카노에이트)를 포함한다. 폴리옥사에스테르의 예는 폴리(에틸렌 옥살레이트) 및 아미도기를 함유한 폴리옥사에스테르와 같은 폴리(알킬렌 옥살레이트)를 포함한다. 다른 적합한 코팅 물질은 폴리글리콜, 에테르-에스테르 공중합체(코폴리(에테르-에스테르)) 및 폴리카보네이트를 포함하는 폴리에테르를 포함한다. 생분해성 폴리카보네이트의 예는 폴리오르토카보네이트, 폴리이미노카보네이트, 폴리알킬카보네이트, 예를 들어, 폴리(트리메틸렌 카보네이트), 폴리(1,3-다이옥산-2-온), 폴리(p-다이옥사논), 폴리(6,6-다이메틸-1,4-다이옥산-2-온), 폴리(1,4-다이옥세판-2-온), 및 폴리(1,5-다이옥세판-2-온)을 포함한다. 적합한 생분해성 코팅은 또한 폴리안하이드라이드, 폴리이민(예를 들어, 폴리(에틸렌 이민)(PEI)), 폴리아미드(폴리-N-(2-하이드록시프로필)-메타크릴아미드 포함), 폴리(아미노산)(폴리-L-리신과 같은 폴리리신 또는 폴리-L-글루탐산과 같은 폴리글루탐산 포함), 폴리포스파젠(예를 들어, 폴리(페녹시-코-카르복실아토페녹시 포스파젠), 폴리오르가노포스파젠, 폴리시아노아크릴레이트 및 폴리알킬시아노아크릴레이트(폴리부틸시아노아크릴레이트 포함), 폴리이소시아네이트 및 폴리비닐피롤리돈을 포함할 수 있다. Other suitable coatings include poly-alpha hydroxy acids (including polylactic acid or polylactide, polyglycolic acid or polyglycolide), poly-beta hydroxy acids (eg polyhydroxybutyrate or polyhydroxyvalerate). , epoxy polymers (including polyethylene oxide (PEO)), polyvinyl alcohol, polyesters, polyorthoesters, polyamidoesters, polyesteramides, polyphosphoesters and polyphosphoester-urethanes. Examples of degradable polyesters are poly(lactic acid) or (polylactide, PLA), poly(glycolic acid) or polyglycolide (PGA), poly(3-hydroxybutyrate), poly(4-hydroxybutyrate), poly(3-hydroxyvalerate), and poly(caprolactone), or poly(hydroxyalkanoates) including poly(valerolactone). Examples of polyoxaesters include poly(ethylene oxalates) and poly(alkylene oxalates) such as polyoxaesters containing an amido group. Other suitable coating materials include polyethers including polyglycols, ether-ester copolymers (copoly(ether-esters)) and polycarbonates. Examples of biodegradable polycarbonates include polyorthocarbonate, polyiminocarbonate, polyalkylcarbonates such as poly(trimethylene carbonate), poly(1,3-dioxan-2-one), poly(p-dioxanone) ), poly(6,6-dimethyl-1,4-dioxan-2-one), poly(1,4-dioxepan-2-one), and poly(1,5-dioxepan-2-one) includes Suitable biodegradable coatings also include polyanhydrides, polyimines (eg, poly(ethylene imine) (PEI)), polyamides (including poly-N-(2-hydroxypropyl)-methacrylamide), poly (amino acids) (including polylysines such as poly-L-lysine or polyglutamic acids such as poly-L-glutamic acid), polyphosphazenes (e.g. poly(phenoxy-co-carboxylatophenoxy phosphazenes), polyorganophosphazenes, polycyanoacrylates and polyalkylcyanoacrylates (including polybutylcyanoacrylate), polyisocyanates and polyvinylpyrrolidone.

중합체 코팅 분자의 쇄 길이는 약 4 내지 약 25 단위와 같은, 약 1 내지 약 100 단량체 단위일 수 있다. The chain length of the polymeric coating molecule may be from about 1 to about 100 monomer units, such as from about 4 to about 25 units.

입자는 피브린, 피브리노겐, 엘라스틴, 카제인, 콜라겐, 키토산, 세포외 매트릭스(ECM), 카라기난, 콘드로이틴, 펙틴, 알지네이트, 알긴산, 알부민, 덱스트린, 덱스트란, 젤라틴, 만니톨, n-할라민, 다당류, 폴리-1,4-글루칸, 전분, 하이드록시에틸 전분(HES), 다이알데히드 전분, 글리코겐, 아밀라제, 하이드록시에틸 아밀라제, 아밀로펙틴, 글루코소-글리칸, 지방산(및 그의 에스테르), 히아루론산, 프로타민, 폴리아스파트산, 폴리글루탐산, D-만누론산, L-굴루론산, 제인 및 다른 프롤아민, 알긴산, 구아검 및 포스포릴콜린, 및 그의 공중합체 및 유도체를 포함하는 천연 발생 중합체로 코팅될 수 있다. 코팅은 또한 셀룰로오스, 키틴, 덱스트란, 전분, 하이드록시에틸 전분, 폴리글루코네이트, 히아루론산 및 엘라틴 및 그의 공중합체 및 유도체와 같은 변형된 다당류를 포함할 수 있다. The particles are fibrin, fibrinogen, elastin, casein, collagen, chitosan, extracellular matrix (ECM), carrageenan, chondroitin, pectin, alginate, alginic acid, albumin, dextrin, dextran, gelatin, mannitol, n-halamine, polysaccharide, poly -1,4-Glucan, Starch, Hydroxyethyl Starch (HES), Dialdehyde Starch, Glycogen, Amylase, Hydroxyethyl Amylase, Amylopectin, Glucoso-Glycan, Fatty Acids (and Their Esters), Hyaluronic Acid, Protamine, Polya It may be coated with naturally occurring polymers including spartic acid, polyglutamic acid, D-mannuronic acid, L-guluronic acid, zein and other prolamines, alginic acid, guar gum and phosphorylcholine, and copolymers and derivatives thereof. The coating may also include modified polysaccharides such as cellulose, chitin, dextran, starch, hydroxyethyl starch, polygluconate, hyaluronic acid and elastin and copolymers and derivatives thereof.

입자는 하이드로젤로 코팅될 수 있다. 하이드로젤은 예를 들어, 폴리(하이드록시알킬 (메트)아크릴레이트), 폴리에스테르, 폴리(메트)아크릴아미드, 폴리(비닐 피롤리돈) 또는 폴리비닐 알코올과 같은 임의의 적합한 중합체로부터 선택된 베이스 중합체를 이용하여 형성될 수 있다. 가교제는 과산화물, 황, 이염화황, 금속 산화물, 셀레늄, 텔루륨, 다이아민, 다이이소시아네이트, 알킬 페닐 다이설파이드, 테트라알킬 티우람 다이설파이드, 4,4'-다이티오모르폴린, p-퀴닌 다이옥심 및 테트라클로로-p-벤조퀴논 중 하나 이상일 수 있다. 또한, 보론산-함유 중합체가 선택적인 광중합성 기를 가지고, 하이드로젤에 통합될 수 있다. Particles can be coated with a hydrogel. The hydrogel is a base polymer selected from any suitable polymer, such as, for example, poly(hydroxyalkyl (meth)acrylate), polyester, poly(meth)acrylamide, poly(vinyl pyrrolidone) or polyvinyl alcohol. can be formed using Crosslinking agent is peroxide, sulfur, sulfur dichloride, metal oxide, selenium, tellurium, diamine, diisocyanate, alkyl phenyl disulfide, tetraalkyl thiuram disulfide, 4,4'-dithiomorpholine, p-quinine dioxime and tetrachloro-p-benzoquinone. In addition, boronic acid-containing polymers, with optional photopolymerizable groups, can be incorporated into the hydrogel.

특정 바람직한 실시양태에서, 코팅은 미국 식약청(FDA)에 의해 사용 허가된 물질을 포함한다. 이들 FDA-허가 물질은 폴리글리콜산(PGA), 폴리락트산(PLA), 폴리그락틴(Polyglactin) 910(9:1 비의 글리콜리드/락티드 단위를 포함하며, 비크릴(VICRYL)™로도 알려짐), 폴리글리코네이트(9:1 비의 글리콜리드/트리메틸렌 카보네이트 단위를 포함하며, 맥손(MAXON)™으로도 알려짐), 및 폴리다이옥사논(PDS)을 포함한다. In certain preferred embodiments, the coating comprises materials approved for use by the US Food and Drug Administration (FDA). These FDA-approved substances are polyglycolic acid (PGA), polylactic acid (PLA), and Polyglactin 910 (which contains glycolide/lactide units in a 9:1 ratio, also known as VICRYL™). ), polyglyconates (comprising glycolide/trimethylene carbonate units in a 9:1 ratio, also known as MAXON™), and polydioxanone (PDS).

입자에 대한 코팅의 부착은 공유 결합 또는 비공유 결합에 의해, 예를 들어, 이온 결합, 수소 결합, 소수성 결합, 배위, 접착제 또는 물리적 흡수 또는 상호작용에 의해 이루어질 수 있다. Attachment of the coating to the particle may be by covalent or non-covalent bonding, for example, ionic bonding, hydrogen bonding, hydrophobic bonding, coordination, adhesives, or physical adsorption or interaction.

종래의 나노입자 코팅법은 건식 및 습식 접근법을 포함한다. 건식 방법은 (a) 물리적 증착(Zhang, Y. et al. Solid State Commun. 115:51 (2000)), (b) 플라즈마 처리(Shi, D. et al. Appl. Phys. Lett. 78: 1243 (2001); Vollath, D. et al. J. Nanoparticle Res. 1 :235 (1999)), (c) 화학적 증착(Takeo, O. et al. J. Mater. Chem. 8: 1323 (1998)) 및 (d) 매트릭스 내에 나노입자의 인 시추(in situ) 침전을 위한 중합체 또는 비중합체 유기 물질의 열분해(Sglavo, V. M. et al. J. Mater Sci. 28:6437 (1993))를 포함한다. 입자 코팅을 위한 습식 방법은 (a) 졸-겔 공정 및 (b) 유화 및 용매 증발 기술(Cohen, H. et al. Gene Ther. 7: 1896 (2000); Hrkach, J. S. et al. Biomaterials 18:27 (1997); Wang, D. et al. J. Control. Rel. 57:9 (1999))을 포함한다. 코팅은 전기도금, 분무코팅, 딥 코팅, 스퍼터링, 화학적 증착 또는 물리적 증착에 의해 도포될 수 있다. 부가적으로, 다당류를 가진 다양한 나노입자를 코팅하는 방법이 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 각각이 참고로 본 발명에 통합되는 미국 특허 제8,685,538호 및 미국 특허 출원 공개 제2013/0323182호 참고). Conventional nanoparticle coating methods include dry and wet approaches. Dry methods include (a) physical vapor deposition (Zhang, Y. et al. Solid State Commun. 115:51 (2000)), (b) plasma treatment (Shi, D. et al. Appl. Phys. Lett. 78: 1243 (2001);Vollath, D. et al. J. Nanoparticle Res. 1:235 (1999)), (c) chemical vapor deposition (Takeo, O. et al. J. Mater. Chem. 8: 1323 (1998)) and (d) thermal decomposition of polymeric or non-polymeric organic materials for in situ precipitation of nanoparticles in a matrix (Sglavo, VM et al. J. Mater Sci. 28:6437 (1993)). Wet methods for particle coating include (a) sol-gel processes and (b) emulsion and solvent evaporation techniques (Cohen, H. et al. Gene Ther. 7: 1896 (2000); Hrkach, JS et al. Biomaterials 18: 27 (1997); Wang, D. et al. J. Control. Rel. 57:9 (1999)). The coating may be applied by electroplating, spray coating, dip coating, sputtering, chemical vapor deposition or physical vapor deposition. Additionally, methods for coating various nanoparticles with polysaccharides are known in the art (see, for example, US Pat. No. 8,685,538 and US Patent Application Publication No. 2013/0323182, each incorporated herein by reference). ).

일부 실시양태에서, 입자는 신장 배출에 의한 클리어런스를 촉진하기 위해 맞춰질 수 있다. 정상 신장 기능을 가진 개체를 위한 신장 클리어런스는 일반적으로 15 nm 미만인 적어도 하나의 치수를 가진 입자를 요구한다(예를 들어, Choi, H.S., et al. Nat Biotechnol 25(1): 1165 (2007); Longmire, M. et al, Nanomedicine 3(5):703 (2008) 참고). 그럼에도 불구하고, 더 큰 입자가 소변으로 배출될 수 있다. 입자가 신장 클리어런스하기에는 너무 큰 실시양태의 경우에는, 그럼에도 불구하고 입자는 더 작은 크기로 생체내 분해 후 제거될 수 있다. In some embodiments, the particles may be tailored to facilitate clearance by renal excretion. Renal clearance for individuals with normal renal function generally requires particles with at least one dimension less than 15 nm (eg, Choi, HS, et al. Nat Biotechnol 25(1): 1165 (2007); See Longmire, M. et al, Nanomedicine 3(5):703 (2008)). Nevertheless, larger particles may be excreted in the urine. In embodiments where the particles are too large for renal clearance, the particles may nonetheless be eliminated after degradation in vivo to a smaller size.

일부 실시양태에서, 입자는 간담즙 배출에 의한 클리어런스를 촉진하도록 맞춰질 수 있다. 간 내의 쿠퍼 세포를 포함하는, 단핵 식세포 시스템(MPS)은 나노입자의 간 흡수 및 후속 담즙 배출에 관련된다. 나노입자의 특정 크기 및 표면 특성은 간에서 MPS에 의한 흡수를 증가시키는 것으로 알려져 있다(각각이 참고로 본 발명에 통합되는 Choi et al, J. of Dispersion Sci. Tech. 24(3/4):475-487 (2003); 및 Brannon-Peppas et al, J. Drug Delivery Sci. Tech. 14(4):257-264 (2004) 참고). 예를 들어, 입자의 소수성을 증가시키는 것은 MPS에 의한 흡수를 증가시키는 것으로 알려져 있다. 따라서, 당업자는 담즙 배출을 조절하기 위하여 소정의 특징을 가진 입자를 선택할 수 있다. 간담도계는 신장계를 통해 배출될 수 있는 입자(예를 들어, 10 내지 20 nm)보다 다소 큰 입자의 배출을 허용한다. 입자가 간담즙 배출을 하기에는 너무 큰 실시양태의 경우, 입자는 그럼에도 불구하고 작은 크기로의 생체내 분해 후 제거될 수 있다. 그러한 실시양태에서, 간담즙 배출에 의한 클리어런스를 촉진하는 코팅은 입자의 분해 후 코팅이 노출되도록 입자의 내면 표면의 일부를 덮을 수 있다. 입자는 표면의 일부를 덮는 다수의 코팅 분자, 예를 들어, 소수성 분자를 포함할 수 있다. 표면은 입자의 분해 후 노출되어, 분해된 입자의 클리어런스를 허용할 수 있다. In some embodiments, the particles may be tailored to promote clearance by hepatobiliary excretion. The mononuclear phagocyte system (MPS), which includes Kupffer cells in the liver, is involved in hepatic uptake of nanoparticles and subsequent biliary excretion. Certain sizes and surface properties of nanoparticles are known to increase uptake by MPS in the liver (Choi et al, J. of Dispersion Sci. Tech. 24(3/4): 475-487 (2003); and Brannon-Peppas et al, J. Drug Delivery Sci. Tech. 14(4):257-264 (2004)). For example, increasing the hydrophobicity of particles is known to increase uptake by MPS. Thus, one skilled in the art can select particles with certain characteristics to control bile excretion. The hepatobiliary system allows the excretion of particles somewhat larger than those that can be excreted through the renal system (eg, 10-20 nm). In embodiments where the particles are too large for hepatobiliary excretion, the particles may nonetheless be eliminated after in vivo degradation to a smaller size. In such embodiments, a coating that promotes clearance by hepatobiliary excretion may cover a portion of the inner surface of the particle such that the coating is exposed after degradation of the particle. A particle may include a number of coating molecules covering a portion of its surface, for example a hydrophobic molecule. The surface may be exposed after disintegration of the particles to allow clearance of the disintegrated particles.

일부 실시양태에서, 입자는 식세포작용에 의한 클리어런스를 촉진하기 위하여 맞춰진다. 예를 들어, 입자는 클리어런스 제제를 포함할 수 있으며, 클리어런스 제제는 예를 들어, 대식세포에 의한 인식을 위하여, 병원균-관련 분자 패턴을 포함한다. 병원균-관련 분자 패턴(PAMP)은 비메틸화 CpG DNA(세균), 이중쇄 RNA(바이러스), 지질다당류(세균), 펩티도글리칸(세균), 리포아라비노만난(세균), 지모산(효모), MALP-2와 같은 마이코플라스마 지질단백질(세균), 플라젤린(세균), 폴리(이노신-시티딜)산(세균), 리포테이코산(세균) 및 이미다조퀴놀린(합성)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, PAMP 클리어런스 제제는 입자가 하나 이상의 표적에 결합하기 전에 대식세포가 입자를 집어삼키지 않도록 가려진다. 예를 들어, PAMP 클리어런스 제제는 전술한 코팅 중 어느 하나(예를 들어, 생분해성 중합체 코팅과 같은 중합체 코팅)에 의해 가려질 수 있다. 대식세포는 20 ㎛ 만큼 큰 입자를 집어삼킬 수 있다(예를 들어, Cannon, G.J. and Swanson, J.A., J. Cell Science 101 :907-913 (1992); Champion, J.A., et al. Pharm Res 25(8): 1815-1821 (2008) 참고). 일부 실시양태에서, 식세포작용에 의한 클리어런스를 촉진하는 클리어런스 제제는 클리어런스 제제가 입자의 분해 후 노출되도록 입자의 내면 표면의 일부를 덮을 수 있다. 입자는 표면의 일부를 덮는 다수의 클리어런스 제제, 예를 들어, PAMP를 포함할 수 있다. 표면은 입자의 분해 후 노출되어, 분해된 입자의 클리어런스를 허용할 수 있다. 클리어런스 제제는 제제를 포함하는 표면과 중복되는 표면의 일부를 덮을 수 있다. 클리어런스 제제(예를 들어, PAMP)는 예를 들어, 제2 코팅의 분해 후 또는 입자의 분해 후, 입자에 대한 면역 반응을 유발할 수 있다. In some embodiments, the particles are tailored to promote clearance by phagocytosis. For example, the particle may include a clearance agent, which includes a pathogen-associated molecular pattern, eg, for recognition by macrophages. Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) include unmethylated CpG DNA (bacteria), double-stranded RNA (virus), lipopolysaccharide (bacteria), peptidoglycan (bacteria), lipoarabinomannan (bacteria), zymosic acid (yeast) ), mycoplasma lipoproteins (bacteria) such as MALP-2, flagellin (bacteria), poly(inosine-cytidyl) acid (bacteria), lipoteichoic acid (bacteria) and imidazoquinolines (synthetic). In a preferred embodiment, the PAMP clearance agent is masked to prevent macrophages from engulfing the particles prior to binding of the particles to one or more targets. For example, the PAMP clearance agent can be masked by any of the coatings described above (eg, a polymeric coating such as a biodegradable polymeric coating). Macrophages can engulf particles as large as 20 μm (see, for example, Cannon, G.J. and Swanson, J.A., J. Cell Science 101 :907-913 (1992); Champion, J.A., et al. Pharm Res 25( 8): 1815-1821 (2008)). In some embodiments, a clearance agent that promotes clearance by phagocytosis may cover a portion of the inner surface of the particle such that the clearance agent is exposed after degradation of the particle. The particles may include multiple clearance agents, such as PAMPs, covering a portion of the surface. The surface may be exposed after disintegration of the particles to allow clearance of the disintegrated particles. The clearance agent may cover a portion of the surface that overlaps the surface containing the agent. A clearance agent (eg, PAMP) can elicit an immune response to the particle, eg, after degradation of the second coating or after degradation of the particle.

일부 실시양태에서, 클리어런스 제제(예를 들어, PAMP)에 대한 면역 반응은 제제 및/또는 제제/생물분자 복합체에 대한 면역 반응을 뛰어넘어, 제제 및/또는 제제/생물분자 복합체에 대한 면역 반응을 억제하거나 개시를 지연시킬 수 있다. 예를 들어, 입자의 분해는 클리어런스 제제 및 제제(및/또는 제제/생물분자 복합체) 둘 모두를 백혈구에 노출시킬 수 있다. PAMP 클리어런스 제제는 대식세포에 의해 분해된 입자의 신속한 클리어런스를 허용하여 제제 및/또는 제제/생물분자 복합체에 대한 면역 반응(예를 들어, B-세포 매개 면역 반응)을 지연시킬 수 있다. In some embodiments, the immune response to a clearance agent (e.g., a PAMP) surpasses the immune response to the agent and/or agent/biomolecule complex, resulting in an immune response to the agent and/or agent/biomolecule complex. inhibition or delayed onset. For example, degradation of the particles can expose both the clearance agent and the agent (and/or agent/biomolecule complex) to leukocytes. A PAMP clearance agent may allow rapid clearance of degraded particles by macrophages to delay an immune response to the agent and/or agent/biomolecule complex (eg, a B-cell mediated immune response).

클리어런스 제제는 식세포작용을 유도하는 칼레티큘린일 수 있다. The clearance agent may be calreticulin, which induces phagocytosis.

일부 실시양태에서, 입자는 약 1일 내지 약 5년, 예를 들어, 약 1일 내지 약 3년 또는 약 1일 내지 약 1년 내에 유기체에 의해 제거될 수 있다. In some embodiments, the particles can be eliminated by the organism in about 1 day to about 5 years, such as in about 1 day to about 3 years or about 1 day to about 1 year.

VII. 투여 방법 VII. administration method

본 발명은 본원에 개시된 조성물(예를 들어, 본원에서 일반적으로 또는 구체적으로 개시된 입자 또는 다수의 입자 중 임의의 것)이 시험관내 및/또는 생체내에서 세포와 조직에 투여될 수 있음을 고려한다. 생체내 투여는 암의 동물 모델과 같은 질병의 동물 모델에의 투여 또는 그를 필요로 하는 개체에 대한 투여를 포함한다. 적합한 세포, 조직 또는 개체는 반려 동물, 가축, 동물원 동물, 멸종위기 종, 희귀 동물, 비인간 영장류 및 인간과 같은 동물을 포함한다. 예시적인 반려 동물은 개와 고양이를 포함한다. The present invention contemplates that a composition disclosed herein (e.g., any of a particle or plurality of particles generally or specifically disclosed herein) may be administered to cells and tissues in vitro and/or in vivo. . In vivo administration includes administration to an animal model of a disease, such as an animal model of cancer, or administration to a subject in need thereof. Suitable cells, tissues or organisms include animals such as companion animals, livestock, zoo animals, endangered species, rare animals, non-human primates and humans. Exemplary companion animals include dogs and cats.

배양 중인 세포 또는 조직에 및/또는 그 주위에와 같은, 시험관내 전달을 위해, 조성물은 예를 들어, 미세환경과 접촉하거나 배양 배지내의 가용성 물질과 접촉하거나 세포와 접촉하거나 심지어 세포에 침투하기 위해서, 배양 배지에 첨가될 수 있다. 원하는 활성 부위는 조성물(예를 들어, 본원에 개시된 입자)의 투여를 위한 전달 기전 및 수단에 영향을 준다. For in vitro delivery, such as to and/or around cells or tissues in culture, the composition may be, for example, in contact with the microenvironment, in contact with soluble substances in the culture medium, in contact with cells, or even to penetrate cells. , can be added to the culture medium. The desired active site influences the delivery mechanism and means for administration of the composition (eg, the particles disclosed herein).

생체내 세포 또는 조직에(세포와 조직의 미세환경에를 포함) 및/또는 이를 필요로 하는 개체에와 같은, 생체내 전달을 위해, 많은 투여 방법이 구상된다. 구체적인 방법은 입자 조성물 및 구체적인 응용 및 환자에 기초하여 선택될 수 있다. 다양한 전달 시스템이 공지되어 있으며 본 발명의 제제를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 임의의 그러한 방법이 본원에 개시된 임의의 제제를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 도입 방법은 장 또는 피내, 근육내, 복강내, 심근내, 정맥내, 피하, 폐, 비내, 안내, 경막외를 포함하며 이에 제한되지 않는 비경구 및 경구 경로일 수 있다. 본 발명의 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어, 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 내벽(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성 제제와 함께 (동시에 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 투여는 전신성 또는 국소적일 수 있다. such as to cells or tissues in vivo (including to the microenvironment of cells and tissues) and/or to a subject in need thereof; For in vivo delivery, many administration methods are envisioned. A specific method may be selected based on the particle composition and specific application and patient. A variety of delivery systems are known and can be used to administer the agents of the present invention. Any such method may be used to administer any of the agents disclosed herein. Methods of introduction can be parenteral and oral routes, including but not limited to enteral or intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intramyocardial, intravenous, subcutaneous, pulmonary, intranasal, intraocular, epidural. Compositions of the present invention may be administered by any convenient route, for example, by infusion or bolus injection, by absorption through an epithelial or mucocutaneous lining (eg, oral mucosa, rectal and intestinal mucosa, etc.). and can be administered (simultaneously or sequentially) with other biologically active agents. Administration may be systemic or local.

특정 실시양태에서, 조성물은 정맥내로, 예를 들어, 볼루스 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 조성물은 경구로, 피하로, 근육내로 또는 복강내로 투여된다. In certain embodiments, the composition is administered intravenously, eg, by bolus injection or infusion. In certain embodiments, the composition is administered orally, subcutaneously, intramuscularly or intraperitoneally.

특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물을 치료를 필요로 하는 영역에(예를 들어, 종양 내로의 주사에 의해서와 같이, 종양 부위에) 국소 투여하는 것이 바람직할 수 있다. In certain embodiments, it may be desirable to administer a composition of the present invention locally to the area in need of treatment (eg, to the tumor site, such as by injection into a tumor).

간은 빈번한 전이 부위이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물의 전달은 간으로 향한다. 예를 들어, 정맥 카테터는 본 발명의 제제를 간에 전달하기 위해 간문맥에 위치될 수 있다. 간문맥을 통한 다른 전달 방법 또한 고려된다. The liver is a frequent metastatic site. Thus, in certain embodiments, delivery of a composition disclosed herein is directed to the liver. For example, an intravenous catheter can be placed in the portal vein to deliver an agent of the present invention to the liver. Other delivery methods via the hepatic portal vein are also contemplated.

특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 정맥 주입에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 조성물은 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20 또는 적어도 30분의 기간에 걸쳐 주입된다. 다른 실시양태에서, 제제는 적어도 60, 90 또는 120분의 기간에 걸쳐 주입된다. 주입 기간에 관계없이, 본 발명은 특정 실시양태에서, 각 주입이 일정 기간 동안 제제가 규칙적인 스케쥴에 따라(예를 들어, 매주, 매월 등) 투여되는 전체 치료 계획의 일부임을 고려한다. 그러나, 다른 실시양태에서, 조성물은 예를 들어, 일정 기간 동안 규칙적인 스케쥴에 따라 제제가 투여되는 전체 치료의 일부로서, 볼루스 주입에 의해 전달된다. In certain embodiments, compositions of the invention are administered by intravenous infusion. In certain embodiments, the composition is infused over a period of at least 10, at least 15, at least 20 or at least 30 minutes. In other embodiments, the formulation is infused over a period of at least 60, 90 or 120 minutes. Regardless of the duration of the infusion, the present invention contemplates that, in certain embodiments, each infusion is part of an overall treatment plan in which the agent is administered on a regular schedule (eg, weekly, monthly, etc.) for a period of time. However, in other embodiments, the composition is delivered by bolus infusion, eg, as part of an overall treatment in which the agent is administered on a regular schedule over a period of time.

임의의 전술한 경우를 위해, (하나의 제제 또는 둘 이상의 그러한 제제의 조합을 포함하는) 본 발명의 조성물은 임의의 적합한 경로 또는 방법을 통해 시험관내 또는 생체내로 투여될 수 있음이 고려된다. 조성물은 특정 스케쥴에 따르는 것을 포함하여, 한번 또는 여러번 조성물이 투여되는 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물이 투여 경로 및 구체적인 응용을 위하여 적절하게 제제화될 것임을 고려한다. 본 발명은 전술한 특징의 임의의 조합 및 본원에 개시된 본 발명의 임의의 양태와 실시양태의 조합을 고려한다. For any of the foregoing instances, it is contemplated that the compositions of the present invention (including one agent or a combination of two or more such agents) may be administered in vitro or in vivo via any suitable route or method. The composition may be administered as part of a treatment regimen in which the composition is administered once or several times, including according to a specific schedule. It is also contemplated that the compositions of the present invention will be suitably formulated for the route of administration and specific application. The present invention contemplates any combination of the foregoing features and any combination of aspects and embodiments of the invention disclosed herein.

전술한 내용은 단독으로 또는 조합되어 사용되고 본원에 개시된 임의의 방법을 위해 사용되는 본 발명의 임의의 조성물(예를 들어, 입자 또는 다수의 입자)에 적용된다. 본 발명은 구체적으로 본 발명의 그러한 조성물, 조성물 및 방법의 특징과 본 섹션과 이하에서 개시된 다양한 약학 조성물 및 투여 경로를 위해 개시된 특징의 임의의 조합을 고려한다. The foregoing applies to any composition (eg, particle or plurality of particles) of the present invention used alone or in combination and for any method disclosed herein. The present invention specifically contemplates any combination of the features of such compositions, compositions and methods of the invention and features disclosed for the various pharmaceutical compositions and routes of administration disclosed in this section and below.

VIII. 약학 조성물 VIII. pharmaceutical composition

특정 실시양태에서, 본 발명의 대상 입자 또는 입자들은 약학적 허용 담체로 제형화된다. (예를 들어, 본원에 개시된 입자 또는 다수의 입자를 포함하는)하나 이상의 조성물은 단독으로 또는 약학 제형(조성물)의 성분으로 투여될 수 있다. 본원에서 일반적으로 또는 구체적으로 개시된 본 발명의 임의의 조성물은 본원에 개시된 대로 제형화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 둘 이상의 본 발명의 입자를 포함하거나 제2 치료제와 제형화된 본 발명의 입자를 포함한다.In certain embodiments, the subject particle or particles of the invention are formulated in a pharmaceutically acceptable carrier. One or more compositions (eg, comprising a particle or plurality of particles disclosed herein) may be administered alone or as a component of a pharmaceutical formulation (composition). Any composition of the invention disclosed generally or specifically herein may be formulated as disclosed herein. In certain embodiments, a composition comprises two or more particles of the invention or formulated with a second therapeutic agent.

본 발명의 조성물은 인간 또는 수의과 의약에서 사용하기 위하여 임의의 편리한 방식으로 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 습윤제, 유화제 및 활택제, 예를 들어, 소듐 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트, 및 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 착향료 및 향수 제제, 방부제 및 항산화제가 또한 조성물에 존재할 수 있다. Compositions of the present invention may be formulated for administration in any convenient manner for use in human or veterinary medicine. Wetting agents, emulsifiers and glidants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, and colorants, release agents, coating agents, sweetening, flavoring and perfume preparations, preservatives and antioxidants may also be present in the composition.

대상 입자 또는 입자들의 제형은 예를 들어, 경구, 코, 국소, 비경구, 직장 및/또는 질내 투여에 적합한 것들을 포함한다. 제형은 편리하게는 단위 투여 형태로 존재할 수 있으며 약학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주와 구체적인 투여 방식에 따라 변화될 것이다. 단일 투여 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생산하는 화합물의 양일 것이다. Formulations of the subject particle or particles include, for example, those suitable for oral, nasal, topical, parenteral, rectal and/or vaginal administration. The formulations may conveniently be presented in unit dosage form and may be prepared by any method well known in the art of pharmacy. The amount of active ingredient that can be combined with the carrier material to produce a single dosage form will vary depending on the host being treated and the particular mode of administration. The amount of active ingredient that can be combined with the carrier material to produce a single dosage form will generally be the amount of compound that will produce a therapeutic effect.

특정 실시양태에서, 이들 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 하나 이상의 입자와 담체 및, 선택적으로 하나 이상의 보조 성분을 조합하는 것을 포함한다. 일반적으로, 제형은 액체 담체 또는 미분된 고형 담체 또는 둘 모두와 제조되고 그 후 필요하면 제품을 성형한다. In certain embodiments, methods of making these formulations or compositions include combining one or more particles with a carrier and, optionally, one or more accessory ingredients. Generally, formulations are prepared with liquid carriers or finely divided solid carriers or both and then, if desired, shaped into products.

경구 투여를 위한 제형은 캡슐, 카시에낭(cachet), 알약, 정제, 로젠지(보통 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트의 착향 베이시스를 이용), 분말, 과립, 또는 수성 또는 비수성 액체 내의 용액 또는 현탁액, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼, 또는 엘릭시르 또는 시럽, 또는 캔디(젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 불활성 기제를 이용) 및/또는 구강세정액 등의 형태일 수 있으며, 각각은 소정의 양의 본 발명의 입자를 함유한다. 현탁액은 활성 화합물에 더하여, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 및 솔비탄 에스테르, 미세결정 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트, 및 그 혼합물과 같은 현탁제를 함유할 수 있다. Formulations for oral administration include capsules, cachets, pills, tablets, lozenges (usually with sucrose and a flavored basis of acacia or tragacanth), powders, granules, or solutions in aqueous or non-aqueous liquids. or a suspension, or an oil-in-water or water-in-oil liquid emulsion, or an elixir or syrup, or a candy (using an inert base such as gelatin and glycerin, or sucrose and acacia), and/or a mouthwash, and the like, each It contains the particles of the present invention in a predetermined amount. Suspensions may contain, in addition to the active compound, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohols, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth, and mixtures thereof. may contain.

경구 투여를 위한 고형 투여 형태(캡슐, 정제, 알약, 당제, 분말, 과립 등)에서, 본 발명의 하나 이상의 조성물은 소듐 시트레이트 또는 다이칼슘 포스페이트, 및/또는 하기 중 임의의 것과 같은 하나 이상의 약학적 허용 담체와 혼합될 수 있다: (1) 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산과 같은 충전제 또는 증량제; (2) 예를 들어, 카르복시메틸셀룰로오스, 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아와 같은 결합제; (3) 글리세롤과 같은 보습제; (4) 아가-아가, 칼슘 카보네이트, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 소정의 실리케이트 및 소듐 카보네이트와 같은 붕해제; (5) 파라핀과 같은 용액 지연제; (6) 4차 암모늄 화합물과 같은 흡수 가속화제; (7) 예를 들어, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트와 같은 습윤제; (8) 카올린 및 벤토나이트 점토와 같은 흡수제; (9) 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고형 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 설페이트, 및 그 혼합물과 같은 활택제; 및 (10) 착색제. 캡슐, 정제 및 알약의 경우, 약학 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고형 조성물은 또한 락토스 또는 유당 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 부형제를 이용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 약학적 허용 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 더하여, 액체 투여 형태는 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일(구체적으로, 면화씨, 땅콩, 옥수수, 싹, 올리브, 피마자, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스테르 및 그 혼합물과 같은, 당업계에서 일반적으로 사용되는 불활성 희석제를 함유할 수 있다. 불활성 희석제외에, 경구 조성물은 또한 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 착향제, 착색제, 향수제 및 방부제와 같은 보조제를 포함할 수 있다. In solid dosage forms for oral administration (capsules, tablets, pills, dragees, powders, granules, etc.), one or more compositions of the present invention may contain sodium citrate or dicalcium phosphate, and/or one or more pharmaceutical agents such as any of the following. can be mixed with acceptable carriers: (1) fillers or extenders such as starch, lactose, sucrose, glucose, mannitol and/or silicic acid; (2) binders such as, for example, carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinyl pyrrolidone, sucrose and/or acacia; (3) humectants such as glycerol; (4) disintegrants such as agar-agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates and sodium carbonate; (5) solution retardants such as paraffin; (6) absorption accelerators such as quaternary ammonium compounds; (7) humectants such as, for example, cetyl alcohol and glycerol monostearate; (8) absorbents such as kaolin and bentonite clay; (9) lubricants such as talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate, and mixtures thereof; and (10) colorants. For capsules, tablets and pills, the pharmaceutical composition may also include a buffering agent. Solid compositions of a similar type may also be employed as fillers in soft and hard-filled gelatin capsules using such excipients as lactose or milk sugar and high molecular weight polyethylene glycols and the like. Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. In addition to the active ingredient, liquid dosage forms may contain water or other solvents, solubilizers and emulsifiers such as ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3- fatty acid esters of butylene glycol, oils (specifically, cottonseed, peanut, corn, sprout, olive, castor, and sesame oil), glycerol, tetrahydrofuryl alcohol, polyethylene glycol, and sorbitan, and mixtures thereof; It may contain commonly used inert diluents. Besides inert diluents, the oral compositions may also contain adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening, flavoring, coloring, perfuming and preservative agents.

특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 자궁경관 및 질의 점막과 같은 점막 또는 피부에의 국소 투여를 포함한다. 국소 제형은 추가로 피부 또는 각질층 침투 향상제로서 효과적인 것으로 알려진 매우 다양한 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 이들의 예는 2-피롤리돈, N-메틸-2-피롤리돈, 다이메틸아세트아미드, 다이메틸포름아미드, 프로필렌 글리콜, 메틸 또는 이소프로필 알코올, 다이메틸 설폭사이드 및 아존이다. 제형을 화장학적으로 허용가능하게 하기 위하여 추가의 제제가 더 포함될 수 있다. 이들의 예는 지방, 왁스, 오일, 염료, 향료, 방부제, 안정화제 및 표면 활성 제제이다. 당업계에 공지된 바와 같은 각질용해제 또한 포함될 수 있다. 예로는 살리실산과 황이 있다. 국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 본 발명의 대상 제제는 멸균 상태에서 약학적 허용 담체와 그리고 요구될 수 있는 임의의 방부제, 완충제, 또는 압축가스와 혼합될 수 있다. 연고, 페이스트, 크림 및 젤은 본 발명의 대상 제제에 더하여, 부형제, 예를 들어, 동물 및 식물 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크 및 산화아연, 또는 그 혼합물을 함유할 수 있다. 분말과 스프레이는 본 발명의 대상 제제에 더하여, 부형제, 예를 들어, 락토스, 탈크, 규산, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 분말 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 추가적으로 관례적인 압축가스, 예를 들어, 클로로플루오로탄화수소 및 휘발성 비치환 탄화수소, 예를 들어, 부탄 및 프로판을 함유할 수 있다. In certain embodiments, the methods of the invention include topical administration to mucous membranes, such as those of the cervix and vagina, or to the skin. Topical formulations may additionally include one or more of a wide variety of agents known to be effective as skin or stratum corneum penetration enhancers. Examples of these are 2-pyrrolidone, N-methyl-2-pyrrolidone, dimethylacetamide, dimethylformamide, propylene glycol, methyl or isopropyl alcohol, dimethyl sulfoxide and azone. Additional agents may further be included to render the formulation cosmetically acceptable. Examples of these are fats, waxes, oils, dyes, flavors, preservatives, stabilizers and surface active agents. A keratolytic agent as known in the art may also be included. Examples include salicylic acid and sulfur. Dosage forms for topical or transdermal administration include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches and inhalants. The subject formulation of the present invention can be mixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and with any preservatives, buffers, or propellants that may be required. Ointments, pastes, creams and gels may contain, in addition to the formulations subject to the present invention, excipients such as animal and vegetable fats, oils, waxes, paraffins, starches, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicic acids. , talc and zinc oxide, or mixtures thereof. Powders and sprays may contain, in addition to the subject formulations of the present invention, excipients such as lactose, talc, silicic acid, aluminum hydroxide, calcium silicates and polyamide powders or mixtures of these substances. Sprays may additionally contain customary propellants such as chlorofluorohydrocarbons and volatile unsubstituted hydrocarbons such as butane and propane.

비경구 투여에 적합한 약학 조성물은 하나 이상의 약학적 허용 멸균 등장 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합된 본 발명의 하나 이상의 조성물을 포함할 수 있으며, 이는 항산화제, 완충제, 세균발육정지제, 제형이 의도된 수용체의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 또는 현탁 또는 증점 제제를 함유할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 이용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 적합한 그의 혼합물, 식물성 오일, 예를 들어, 올리브 오일 및 주사용 유기 에스테르, 예를 들어, 에틸 올리에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅 물질의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. Pharmaceutical compositions suitable for parenteral administration include those of the present invention in combination with one or more pharmaceutically acceptable sterile isotonic aqueous or nonaqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or sterile powders which may be reconstituted immediately prior to use into sterile injectable solutions or dispersions. It may contain one or more compositions, which may contain antioxidants, buffers, bacteriostats, solutes that render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient, or suspending or thickening agents. Examples of suitable aqueous and non-aqueous carriers that may be employed in the pharmaceutical compositions of the present invention are water, ethanol, polyols (eg glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), and suitable mixtures thereof, vegetable oils such as , olive oil and injectable organic esters such as ethyl oleate. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating materials such as lecithin, by maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants.

이들 조성물은 또한 방부제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균 및 항진균 제제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 솔브산 등을 포함시켜 보장할 수 있다. 또한 당, 염화나트륨 등과 같은 등장제를 조성물 내로 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 주사용 약학 형태의 지연된 흡수는 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은, 흡수를 지연시키는 제제의 포함에 의해 이루어질 수 있다. These compositions may also contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents. Prevention of the action of microorganisms can be ensured by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents, such as parabens, chlorobutanol, phenol sorbic acid and the like. It may also be desirable to include isotonic agents such as sugars, sodium chloride, and the like into the compositions. In addition, delayed absorption of the injectable pharmaceutical form may be brought about by the inclusion of agents which delay absorption, such as aluminum monostearate and gelatin.

주사용 디팟(depot) 형태는 폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생분해성 중합체에서 하나 이상의 입자의 마이크로인캡슐(microencapsule) 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비율 및 이용되는 구체적인 중합체의 특성에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(안하이드라이드)를 포함한다. 디팟 주사용 제형은 또한 신체 조직과 양립성인 리포좀 또는 마이크로에멀젼 내에 약물을 포획시킴으로써 제조된다. Injectable depot forms are prepared by forming a microencapsule matrix of one or more particles in a biodegradable polymer such as polylactide-polyglycolide. Depending on the ratio of drug to polymer and the nature of the specific polymer used, the rate of drug release can be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly(orthoesters) and poly(anhydrides). Depot injectable formulations are also prepared by entrapping the drug in liposomes or microemulsions that are compatible with body tissues.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 일상적인 절차에 따라 인간 또는 반려 동물과 같은 동물에의 정맥내 투여를 위해 맞춰진 약학 조성물로서 제형화된다. 필요한 경우, 조성물은 또한 가용화제 및 주사 부위의 고통을 덜어주기 위한 리도카인과 같은 국소 마취제를 포함할 수 있다. 조성물이 주입에 의해 투여되어야 하는 경우, 멸균 약학 등급 물 또는 염수를 함유한 주입 병을 이용하여 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수 앰퓰이 제공될 수 있다. In a preferred embodiment, the composition of the present invention is formulated as a pharmaceutical composition tailored for intravenous administration to animals such as humans or companion animals according to routine procedures. Where necessary, the composition may also contain a solubilizing agent and a local anesthetic such as lidocaine to relieve pain at the site of the injection. If the composition is to be administered by infusion, it may be dispensed using an infusion bottle containing sterile pharmaceutical grade water or saline. Where the composition is administered by injection, an ampoule of sterile water for injection or saline may be provided so that the ingredients may be mixed prior to administration.

다른 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물(예를 들어, 입자 또는 입자들)은 인간 또는 반려 동물과 같은 동물에 대한 피하, 복강내 또는 근육내 투여를 위해 제형화된다. In another embodiment, a composition (eg, particle or particles) disclosed herein is formulated for subcutaneous, intraperitoneal, or intramuscular administration to an animal, such as a human or companion animal.

특정 실시양태에서, 본 발명의 제제 및 입자는 종양에 대한 국소 전달, 예를 들어, 종양내 주사를 위한 전달을 위해 제형화된다. In certain embodiments, the agents and particles of the invention are formulated for local delivery to a tumor, eg, delivery for intratumoral injection.

특정 실시양태에서, 조성물은 간문맥을 통한 간에 대한 국소 투여를 목적으로 하며, 이에 따라 제제 및 입자가 제형화될 수 있다. In certain embodiments, the composition is intended for topical administration to the liver via the hepatic portal vein, and agents and particles may be formulated accordingly.

특정 실시양태에서, 구체적인 제형은 한 가지 보다 많은 경로를 통한 전달 맥락에서 사용하기에 적합하다. 따라서, 예를 들어, 정맥내 주입을 위해 적합한 제형은 또한 간문맥을 통한 전달을 위해 적합할 수 있다. 그러나, 다른 실시양태에서, 제형은 한 가지 전달 경로의 맥락에서 사용하기에 적합하지만, 두 번째 전달 경로의 맥락에서 사용하기에 적합하지 않다. In certain embodiments, specific formulations are suitable for use in the context of delivery via more than one route. Thus, for example, formulations suitable for intravenous infusion may also be suitable for delivery via the hepatic portal vein. However, in other embodiments, the formulation is suitable for use in the context of one route of delivery, but not suitable for use in the context of a second route of delivery.

암과 같은 질환의 치료에서 효과적이고/이거나 가용성 TNFR을 중화시키는데 효과적이고/이거나 가용성 TNFR, 특히 종양 미세환경에, 선택적으로 혈장에 존재하는 가용성 TNFR의 양 또는 TNF 알파 결합 활성을 감소시키는데 효과적이고/이거나 시험관내 또는 생체내에서 종양 세포 증식, 성장 또는 생존을 억제하는 데 효과적인 본 발명의 제제 또는 입자의 양은 표준 임상 또는 실험실 기술에 의해 결정될 수 있다. 또한, 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 돕기 위하여 시험관내 분석이 선택적으로 이용될 수 있다. 제형에서 이용될 정확한 투여량은 또한 투여 경로 및 질환의 심각도에 의존할 것이며, 실무자의 판단과 각 개체의 환경에 따라 결정되어야 한다. 인간 또는 동물에 대한 투여를 위한 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 투여량-응답 곡선으로부터 외삽될 수 있다. effective in the treatment of diseases such as cancer and/or effective in neutralizing soluble TNFR and/or effective in reducing the amount or TNF alpha binding activity of soluble TNFR present in the tumor microenvironment, particularly in the tumor microenvironment, and/or The amount of an agent or particle of the invention that is effective to inhibit tumor cell proliferation, growth or survival in vitro or in vivo can be determined by standard clinical or laboratory techniques. In addition, in vitro assays can optionally be used to help identify optimal dosage ranges. The precise dosage to be employed in the formulation will also depend on the route of administration and severity of the disease, and must be determined according to the judgment of the practitioner and each individual's circumstances. Effective amounts for administration to humans or animals can be extrapolated from dose-response curves derived from in vitro or animal model test systems.

특정 실시양태에서, 약학 제제를 포함하는 본 발명의 조성물은 비-발열성이다. 다시 말하면, 특정 실시양태에서, 조성물은 실질적으로 발열인자가 없다. 하나의 실시양태에서, 본 발명의 제형은 내독소 및/또는 관련 발열성 물질이 실질적으로 없는 무-발열인자 제형이다. 내독소는 미생물 내부에 한정되어 있고 미생물이 파괴되거나 사멸할 때만 방출되는 독소를 포함한다. 발열성 물질은 또한 세균 및 다른 미생물의 외막으로부터의 열-유도, 열안정성 물질(당단백질)을 포함한다. 이들 물질 모두는 인간에게 투여되면 열, 저혈압 및 쇼크를 야기할 수 있다. 잠재적인 유해 효과로 인해, 심지어 소량의 내독소도 정맥내 투여되는 약학적 약물 용액으로부터 제거되어야 한다. 식약청("FDA")은 정맥내 약물 적용의 경우 단일 1시간 기간 내에 5 내독소 단위(EU)/투여량/kg체중의 상한선을 설정하였다(The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)). 치료 단백질이 상대적으로 많은 투여량으로 및/또는 연장된 기간에 걸쳐(예를 들어, 환자의 전 생애 동안) 투여되는 경우, 심지어 소량의 유해하고 위험한 내독소도 위험할 수 있다. 일부 특정 실시양태에서, 조성물 내의 내독소 및 발열인자 수준은 10 EU/mg 미만, 또는 5 EU/mg 미만, 또는 1 EU/mg 미만, 또는 0.1 EU/mg 미만, 또는 0.01 EU/mg 미만 또는 0.001 EU/mg 미만이다. In certain embodiments, compositions of the invention comprising pharmaceutical agents are non-pyrogenic. In other words, in certain embodiments, the composition is substantially free of pyrogens. In one embodiment, the formulations of the present invention are pyrogen-free formulations that are substantially free of endotoxins and/or related pyrogens. Endotoxins include toxins that are confined inside the microorganism and are released only when the microorganism is destroyed or killed. Pyrogenic substances also include heat-inducing, thermostable substances (glycoproteins) from the outer membranes of bacteria and other microorganisms. All of these substances can cause fever, hypotension and shock when administered to humans. Because of the potentially harmful effects, even small amounts of endotoxin must be removed from intravenously administered pharmaceutical drug solutions. The Food and Drug Administration ("FDA") has established an upper limit of 5 endotoxin units (EU)/dose/kg body weight within a single 1-hour period for intravenous drug application (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1): 223 (2000)). Even small amounts of harmful and dangerous endotoxins can be dangerous when therapeutic proteins are administered in relatively large doses and/or over extended periods of time (eg, throughout a patient's lifetime). In some specific embodiments, the endotoxin and pyrogen levels in the composition are less than 10 EU/mg, or less than 5 EU/mg, or less than 1 EU/mg, or less than 0.1 EU/mg, or less than 0.01 EU/mg, or 0.001 EU/mg Less than EU/mg.

전술한 내용은 본원에 개시된 본 발명의 임의의 제제, 조성물 및 방법에 적용된다. 본 발명은 특히 본원에 개시된 본 발명의 제제, 조성물 및 방법(단독 또는 조합)의 특징과 본 섹션 및 상기에서 개시된 다양한 약학 조성물과 투여 경로를 위해 개시된 특징의 임의의 조합을 고려한다. The foregoing applies to any of the agents, compositions and methods of the invention disclosed herein. The present invention specifically contemplates any combination of the features of the agents, compositions and methods (alone or in combination) of the invention disclosed herein and the features disclosed for the various pharmaceutical compositions and routes of administration disclosed in this section and above.

본 발명은 본 발명의 방법에서 사용하기에 적합한 제제 및 제제의 카테고리의 많은 일반적이고 구체적인 예를 제공한다("본 발명의 제제"). 본 발명은 임의의 그러한 제제 또는 제제의 카테고리가 시험관내 또는 생체내 투여를 위해 본원에 개시된 대로 제형화될 수 있음을 고려한다. The present invention provides many general and specific examples of agents and categories of agents suitable for use in the methods of the present invention (“agents of the present invention”). The present invention contemplates that any such agent or category of agents may be formulated as disclosed herein for administration in vitro or in vivo .

또한, 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 약학적 허용 담체 및/또는 부형제로 제형화된 본원에 개시된 본 발명의 임의의 제제를 포함하는 약학 조성물을 비롯한 조성물을 고려한다. 그러한 조성물은 본원에서 제공된 본 발명의 제제의 기능적 및/또는 구조적 특징 중 임의의 것을 이용하여 개시될 수 있다. 임의의 그러한 조성물 또는 약학 조성물은 본 발명의 임의의 방법에서 시험관내 또는 생체내에서 사용될 수 있다. Also, in some embodiments, the present invention contemplates compositions, including pharmaceutical compositions, comprising any of the agents of the invention disclosed herein formulated with one or more pharmaceutically acceptable carriers and/or excipients. Such compositions may be disclosed utilizing any of the functional and/or structural features of the agents of the invention provided herein. Any such composition or pharmaceutical composition may be used in vitro or in vivo in any of the methods of the present invention.

유사하게, 본 발명은 분리되거나 정제된 본 발명의 제제를 고려한다. 본원에 개시된 제제의 임의의 기능적 및/또는 구조적 특징에 기초하여 개시된 본 발명의 제제는 분리된 제제 또는 정제된 제제로서 제공될 수 있다. 그러한 분리되거나 정제된 제제는 본원에서 개시된 임의의 시험관내 또는 생체내 방법에서의 사용을 포함해, 많은 시험관내 또는 생체내에서의 용도를 갖는다. Similarly, the present invention contemplates isolated or purified preparations of the present invention. Based on any functional and/or structural characteristics of the formulations disclosed herein, the disclosed formulations of the present invention may be provided as isolated or purified formulations. Such isolated or purified preparations have many in vitro or in vivo uses, including use in any of the in vitro or in vivo methods disclosed herein.

IX. 응용 IX. Applications

본원에 개시된 조성물(예를 들어, 입자 및 그의 약학 조성물)은 다양한 진단 및 치료 응용에서 유용하다. 예를 들어, 본원에 개시된 입자는 암을 치료하기 위해, 개체를 해독시키기 위해, 또는 바이러스 또는 세균 감염을 치료하기 위해 사용될 수 있다. The compositions (eg, particles and pharmaceutical compositions thereof) disclosed herein are useful in a variety of diagnostic and therapeutic applications. For example, the particles disclosed herein can be used to treat cancer, to detoxify a subject, or to treat a viral or bacterial infection.

치료적 응용은 본원에 개시된 하나 이상의 조성물을, 부분적으로 투여 경로에 의존하는 다양한 방법을 이용하여, 개체, 예를 들어, 인간 개체에 투여하는 것을 포함한다. 경로는 예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내(IP) 주사, 또는 근육내 주사(IM)일 수 있다. Therapeutic applications include administering one or more compositions disclosed herein to a subject, eg, a human subject, using a variety of methods dependent in part on the route of administration. The route may be, for example, intravenous injection or infusion (IV), subcutaneous injection (SC), intraperitoneal (IP) injection, or intramuscular injection (IM).

투여는 예를 들어, 국소 주입, 주사에 의해, 또는 임플란트의 수단에 의해 이루어질 수 있다. 임플란트는 다공성, 비다공성, 또는 실라스틱 막과 같은 막을 포함한 젤라틴성 물질, 또는 섬유일 수 있다. 임플란트는 조성물이 개체에게 지속적으로 또는 주기적으로 방출되도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제20080241223호; 미국 특허 제5,501,856호; 제5,164,188호; 제4,863,457호; 및 제3,710,795호; EP488401호; 및 EP430539호를 참고하며, 각각의 내용은 그 전체가 참고로 본 발명에 통합된다. 조성물은 예를 들어, 확산, 침식, 또는 대류 시스템, 예를 들어, 삼투 펌프, 생분해성 임플란트, 전기확산 시스템, 전기삼투압 시스템, 증기압 펌프, 전해 펌프, 기포 펌프, 압전 펌프, 침식-기반 시스템 또는 전기기계 시스템에 기초한 이식가능한 장치를 통해 개체에 전달될 수 있다. Administration can be by way of, for example, local infusion, injection, or by means of an implant. The implant may be a porous, non-porous, or gelatinous material, including a membrane such as a silastic membrane, or a fiber. The implant may be configured such that the composition is continuously or periodically released into the subject. See, for example, US Patent Application Publication No. 20080241223; U.S. Patent No. 5,501,856; 5,164,188; 4,863,457; and 3,710,795; EP488401; and EP430539, the contents of each of which are incorporated herein by reference in their entirety. The composition may be used, for example, in a diffusion, erosion, or convection system, eg, an osmotic pump, a biodegradable implant, an electrodiffusion system, an electroosmotic system, a vapor pressure pump, an electrolytic pump, a bubble pump, a piezoelectric pump, an erosion-based system, or It can be delivered to a subject via an implantable device based on an electromechanical system.

본원에서 사용된 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 생체내 배경에서, 치료될 질환의 하나 이상의 증상을 치료, 억제 또는 완화하거나, 그렇지 않으면 소망하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 제공하며, 예를 들어, 항원에 대한 면역 반응을 조절(예를 들어, 향상)하기 위한 충분한 투여량을 의미한다. 정확한 투여량은 개체-의존성 변수(예를 들어, 연령, 면역계 건강 등), 질병 및 이루고자 하는 치료와 같은 다양한 인자에 따라 변할 것이다. "Effective amount" or "therapeutically effective amount" as used herein, refers to treating, inhibiting or alleviating one or more symptoms of the disease being treated, in an in vivo setting, or otherwise providing a desired pharmacological and/or physiological effect, e.g. For example, it means a dosage sufficient to modulate (eg enhance) the immune response to the antigen. The precise dosage will vary depending on a variety of factors such as subject-dependent variables (eg age, immune system health, etc.), disease, and treatment being sought.

본원에서 사용된 포유류는 인간, 비인간 영장류(예를 들어, 원숭이, 개코원숭이 또는 침팬지), 말, 소, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니피그, 게르빌루스쥐, 햄스터, 래트 또는 마우스일 수 있다. 일부 실시양태에서, 포유류는 유아(예를 들어, 인간 유아)이다. As used herein, mammals include humans, non-human primates (eg, monkeys, baboons or chimpanzees), horses, cows, pigs, sheep, goats, dogs, cats, rabbits, guinea pigs, gerbils, hamsters, rats, or could be a mouse. In some embodiments, the mammal is an infant (eg, a human infant).

본원에서 사용된 "예방을 필요로 하는", "치료를 필요로 하는" 또는 "이를 필요로 하는" 개체 포유류는 적절한 의료 실무자(예를 들어, 인간의 경우에는 의사, 간호사, 또는 간호 실무자; 비인간 포유류의 경우에는 수의사)의 판단에 의해 주어진 치료로부터 합리적으로 이득을 볼 개체를 말한다. As used herein, a subject mammal “in need of prevention,” “in need of treatment,” or “in need thereof” refers to an appropriate medical practitioner (e.g., a doctor, nurse, or nursing practitioner in the case of a human; a non-human). In the case of mammals, an individual who, in the judgment of a veterinarian, would reasonably benefit from a given treatment.

용어 "예방하는"은 당업계에서 인식되며, 질환과 관련하여 사용될 경우 당업계에서 잘 이해되며, 조성물이 투여되지 않는 개체에 비하여 개체 포유류에서 의학적 질환의 증상의 빈도를 감소시키거나 개시를 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다. The term "preventing" is art-recognized and well understood in the art when used in reference to a disease, to reduce the frequency or delay the onset of symptoms of a medical condition in a subject mammal compared to a subject not administered the composition. administration of the composition.

본원에 개시된 임의의 조성물의 적합한 인간 투여량은 추가로 예를 들어, I 단계 투여량 확대 연구(Phase I dose escalation studies)에서 평가될 수 있다. 예를 들어, van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8): 1711-1718; Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531; 및 Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500를 참고한다. Suitable human doses of any composition disclosed herein can be further evaluated, for example, in Phase I dose escalation studies. For example, van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8) : 1711-1718; Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1) :523-531; and Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10) : 3499-3500.

그러한 조성물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물(예를 들어, 암, 독성 또는 감염의 동물 모델)에서의 공지의 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 이들 절차는 예를 들어, LD50(집단의 50%에 치명적인 투여량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 투여량)을 결정하기 위해 이용될 수 있다. 독성 및 치료 효과 사이의 투여량 비율은 치료 지수이며 비율 LD50/ED50로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 제제가 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 조성물이 이용될 수 있는 한편, 그러한 화합물을 질병 조직의 부위에 표적화하는 전달 시스템을 설계하고 정상 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화하여 부작용을 감소시키기 위해 주의를 기울여야 한다. Toxicity and therapeutic efficacy of such compositions can be determined by known pharmaceutical procedures in cell cultures or experimental animals (eg, animal models of cancer, toxicity or infection). These procedures can be used, for example, to determine the LD 50 (the dose lethal to 50% of the population) and the ED 50 (the dose therapeutically effective in 50% of the population). The dose ratio between toxic and therapeutic effects is the therapeutic index and can be expressed as the ratio LD 50 /ED 50 . Agents exhibiting high therapeutic indices are preferred. While compositions that exhibit toxic side effects can be used, care must be taken to reduce side effects by designing delivery systems that target such compounds to the site of diseased tissue and by minimizing potential damage to normal cells.

세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 수득한 데이터는 인간에서의 사용을 위한 투여량 범위를 정하는데 사용될 수 있다. 그러한 조성물의 투여량은 일반적으로 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 조성물의 순환 농도 범위 이내이다. 투여량은 이용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 이 범위 이내에서 변화될 수 있다. 치료 유효량은 처음에는 세포 배양 분석으로부터 추정될 수 있다. 투여량은 세포 배양에서 결정된 IC50(즉, 증상의 1/2 최대 억제를 이루는 항체의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 이루기 위해 동물 모델에서 공식화될 수 있다. 그러한 정보는 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정하기 위해 이용될 수 있다. 혈장 내 수준은 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 국소 투여가 필요한 경우, 세포 배양 또는 동물 모델링은 국소 부위 내에서 치료 유효 농도를 이루기 위해 필요한 투여량을 결정하기 위해 사용될 수 있다. Data obtained from cell culture assays and animal studies can be used to establish dosage ranges for use in humans. The dosage of such compositions is generally within a range of circulating concentrations of compositions comprising the ED 50 with little or no toxicity. The dosage can vary within this range depending on the dosage form used and the route of administration used. A therapeutically effective amount can initially be extrapolated from cell culture assays. Doses can be formulated in animal models to achieve a range of circulating plasma concentrations that include the IC 50 (ie, the concentration of antibody that achieves half-maximal inhibition of symptoms) as determined in cell culture. Such information can be used to more accurately determine useful dosages in humans. Levels in plasma can be measured, for example, by high performance liquid chromatography. In some embodiments, for example, where topical administration is desired, cell culture or animal modeling can be used to determine the dosage required to achieve a therapeutically effective concentration within the local site.

본원에 개시된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 입자는 하나 이상의 추가의 치료제(예를 들어, 감염을 치료하거나 암을 치료하기 위한 치료제)와 함께 포유류에 투여될 수 있다. In some embodiments of any of the methods disclosed herein, the particles can be administered to the mammal along with one or more additional therapeutic agents (eg, therapeutic agents for treating infection or treating cancer).

일부 실시양태에서, 입자와 추가의 치료제는 상이한 투여 경로를 이용하여 포유류에 투여될 수 있다. 예를 들어, 추가의 치료제는 피하로 또는 근육내로 투여될 수 있고 입자는 정맥내로 투여될 수 있다. In some embodiments, the particles and the additional therapeutic agent may be administered to the mammal using different routes of administration. For example, the additional therapeutic agent can be administered subcutaneously or intramuscularly and the particles can be administered intravenously.

X. 신생물에 관련된 선택된 응용X. Selected applications related to neoplasia

일부 실시양태에서, 본 원에서 개시된 입자는 암을 가진 개체를 치료하는데 유용할 수 있다. 본원에 개시된 입자 조성물에서 유용한 예시적인 제제 및/또는 그러한 입자에 의해 소거될 수 있는 가용성 생물분자는 본원에 개시되며(예를 들어, 표 2) 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, sTNFR, MMP2, MMP9, sIL-2R, sIL-1 수용체 등을 소거할 수 있는 입자는 암의 치료를 위해 및/또는 면역 탈억제를 완화시킴으로써 암에 대한 면역 반응을 향상시키기 위해 유용하다. In some embodiments, the particles disclosed herein may be useful for treating individuals with cancer. Exemplary agents useful in the particle compositions disclosed herein and/or soluble biomolecules capable of being scavenged by such particles are disclosed herein (eg, Table 2) and are known in the art. For example, particles capable of scavenging sTNFR, MMP2, MMP9, sIL-2R, sIL-1 receptors, etc. are useful for the treatment of cancer and/or to enhance the immune response to cancer by alleviating immune disinhibition. do.

면역요법에의 면역 탈억제 접근법은 부분적으로 많은 암환자가 일반적으로 전체적으로는 면역력을 갖추고 있지만 그들의 면역계가 그들의 종양의 미세환경에서는 국소적으로 억제된다는 개념에 기초한다. 만일 면역계의 이러한 억제가 본 발명의 입자의 투여에 의해 완화되면, 환자 자신의 면역계가 종양에 작용할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 입자는 면역 반응을 유발하기 위하여 세포 표면 수용체에 결합하기 위한 외인성 활성 사이토카인을 첨가하여 환자의 면역계를 과자극할 필요없이 및/또는 이와 다르게 환자의 면역계를 과자극할 필요없이, 면역요법 접근법을 제공한다. The immune desuppression approach to immunotherapy is based in part on the concept that many cancer patients are generally immune as a whole, but their immune system is suppressed locally in their tumor microenvironment. If this suppression of the immune system is alleviated by administration of the particles of the present invention, the patient's own immune system may act on the tumor. Thus, in some embodiments, the particles of the present invention can stimulate the patient's immune system without the need to and/or alternatively overstimulate the patient's immune system by adding exogenous active cytokines to bind to cell surface receptors to elicit an immune response. Provides an immunotherapeutic approach without the need for overstimulation.

이론에 구애되지 않고, 암 환자는 일반적으로, 면역력을 갖추고 있으므로, 림프구가 종양 항원을 인식하는 능력이 일반적으로 종양에 의해 영향을 받지 않는다. 따라서, 림프구는 그들이 임의의 이상 세포 집단으로 이동되는 것처럼 종양 미세환경으로 이동되며, 이 지점에서 종양 괴사 인자(TNF, 예를 들어, TNF 알파, 면역계의 주요 세포독성 "검(sword)")와 같은 사이토카인과 세포독성 인자가 림프구로부터 미세환경 내로 절단된다. 만일 암세포가 대신에 바이러스 감염된 세포라면, (TNF 알파와 같은) TNF는 감염된 세포의 표면 상의 TNF 수용체(TNFR)에 결합하여, TNF에 대한 R1 또는 R2 타입 수용체가 결합되는지 여부에 따라 세포사멸 또는 산화성 스트레스에 의해 신속한 파괴를 야기한다. 다시 말해, 종양 및/또는 종양 항원의 존재에 의해 자극되지 않는 정상 면역 반응의 맥락에서, 림프구에 의해 배치된 TNF는 시작하는 면역 반응의 일부로서 세포 표면 TNF 수용체(R1 및/또는 R2 수용체)에의 결합에 이용가능해질 것이다. 심지어 종양 맥락에서, 림프구는 종양 부위로 배치된다. Without wishing to be bound by theory, cancer patients are generally immune and therefore the ability of lymphocytes to recognize tumor antigens is generally unaffected by the tumor. Thus, lymphocytes migrate into the tumor microenvironment just as they migrate into any aberrant cell population, at which point they interact with tumor necrosis factor (TNF, eg TNF alpha, the main cytotoxic "sword" of the immune system). The same cytokines and cytotoxic factors are cleaved from lymphocytes into the microenvironment. If the cancer cell is instead a virus-infected cell, TNF (such as TNF alpha) binds to the TNF receptor (TNFR) on the surface of the infected cell, triggering either apoptosis or oxidative effects depending on whether the R1 or R2 type receptor for TNF binds. Stress causes rapid destruction. In other words, in the context of a normal immune response that is not stimulated by the presence of a tumor and/or tumor antigen, TNF deployed by lymphocytes is directed to cell surface TNF receptors (R1 and/or R2 receptors) as part of the initiating immune response. will be available for bonding. Even in a tumor context, lymphocytes are localized to the tumor site.

그러나, 많은 유형의 암세포가 TNF 수용체(두 유형 모두)를 과생산하고 종양 주위의 구름 내로 그들을 발산한다는 점에서, 많은 유형의 암세포는 바이러스 감염 세포와 같은 다른 이상 세포 유형과 상이하게 거동한다. 따라서, 암 세포 및/또는 종양의 미세환경은 일정량의 가용성 TNF 수용체를 포함한다. 이론에 구애됨없이, 종양 미세환경 내의 가용성 TNF 수용체 수준은 동일한 조직 유형의 건강한 세포와 같은 건강한 세포의 미세환경에서 발견되는 수준을 초과한다. However, many types of cancer cells behave differently from other abnormal cell types, such as virus-infected cells, in that many types of cancer cells overproduce TNF receptors (both types) and shed them into a cloud around the tumor. Thus, the microenvironment of cancer cells and/or tumors contains a certain amount of soluble TNF receptors. Without wishing to be bound by theory, levels of soluble TNF receptors within the tumor microenvironment exceed those found in the microenvironment of healthy cells, such as healthy cells of the same tissue type.

부가적으로 또는 대안적으로, TNF 수용체 발산의 속도와 정도는 건강한 세포로부터 보다 암세포에 대해 더 크다. 또한, 이론에 구애됨없이, 특정 실시양태에서, 암 환자의 혈장에서 발견되는 가용성 TNF 수용체의 수준은 건강한 환자에서 보다 더 높을 수 있다. Additionally or alternatively, the rate and extent of TNF receptor shedding is greater for cancer cells than for healthy cells. Also, without wishing to be bound by theory, in certain embodiments, the levels of soluble TNF receptor found in the plasma of cancer patients may be higher than in healthy patients.

기전에 관계없이, 이 모델에서, 이들 발산된 가용성 TNF 수용체는 모집된 림프구에 의해 내인성으로 방출된 TNF에 결합하여, 내인성 TNF를 중화하고 종양 주위에 약간의 면역 특권을 효과적으로 생성하며, 면역 특권 내에서 종양은 계속 성장하고 추가의 TNF 수용체를 발산한다. 다시 말해, 발산된 가용성 TNF 수용체는 림프구에 의해 내인성으로 생산된 TNF 알파를 흡수하고 TNF가 암세포 상의 세포 표면 TNF 수용체에 결합하는 것을 방지하거나 억제한다. 이는 암세포 상의 세포표면 TNF 수용체에 결합할 수 있는 TNF를 감소시키거나 제거한다. 가용성 TNF 수용체는 본질적으로 TNF 알파의 결합에 대해 더 뛰어나며, 따라서 TNF 알파와 같은 TNF의 세포 표면 TNF 수용체 결합 활성을 감소시킨다. Regardless of the mechanism, in this model, these shed soluble TNF receptors bind endogenously released TNF by recruited lymphocytes, neutralizing endogenous TNF and effectively creating some immune privilege around the tumor, and within immune privilege. Tumors continue to grow and shed additional TNF receptors. In other words, the shed soluble TNF receptor takes up endogenously produced TNF alpha by lymphocytes and prevents or inhibits the binding of TNF to cell surface TNF receptors on cancer cells. This reduces or eliminates TNF that can bind to cell surface TNF receptors on cancer cells. Soluble TNF receptors are inherently better at binding TNF alpha, thus reducing the cell surface TNF receptor binding activity of TNF such as TNF alpha.

상기 시나리오는 유사하게 IL-2 및 발산된 가용성 IL-2 수용체의 맥락에서 일어날 수 있다. This scenario can similarly occur in the context of IL-2 and shed soluble IL-2 receptors.

본 발명은 암에서 발산된 수용체에 의해 생성된 면역계의 억제를 완화하기 위해(예를 들어, 면역 탈억제) 전신적으로 또는 국소적으로 이용될 수 있는 약리학적 접근법을 제공한다. 본 발명은 암세포 및 종양의 미세환경에서와 같은 가용성 TNF 수용체 및/또는 가용성 IL-2 수용체(또는 면역 탈억제를 야기하는 임의의 다른 가용성 생물분자)의 양 및/또는 활성 감소(예를 들어, 활성 중화)를 위한 방법과 조성물을 제공한다. 이론에 구애됨없이, (예를 들어, 종양 미세환경에서와 같이) 예를 들어, 가용성 TNF 수용체의 양 및/또는 활성 감소는 암세포와 같은 세포의 증식, 성장 또는 생존 억제를 위한 방법의 일부로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 암세포와 같은 세포의 생존을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 방법과 제제는 본원에 개시된다. The present invention provides pharmacological approaches that can be used systemically or topically to relieve suppression of the immune system produced by receptors shed in cancer (eg, immune disinhibition). The present invention relates to reducing the amount and/or activity (e.g., of a soluble TNF receptor and/or a soluble IL-2 receptor (or any other soluble biomolecule that causes immune disinhibition), such as in the microenvironment of cancer cells and tumors). active neutralization). Without wishing to be bound by theory, it is believed that, for example, reducing the amount and/or activity of a soluble TNF receptor (eg, as in a tumor microenvironment) is part of a method for inhibiting the proliferation, growth, or survival of cells, such as cancer cells. can be used In certain embodiments, it can be used to inhibit the survival of cells such as cancer cells. Exemplary methods and formulations are disclosed herein.

조절 T 세포(TREG)는 예를 들어, 과반응성 T 세포 또는 지연된 T 세포 기능에 의해 야기된 자가면역 질병을 피하기 위하여 면역 반응을 억제하는 방식으로서 암세포와 동일한 리간드를 분비할 수 있다. 예를 들어, CD80/B7-1 및 CD86/B7-2는 T-세포 상의 CTLA-4 수용체에 결합하며 T 세포 활성을 억제한다. CTLA-4 수용체를 차단하기 보다는, 본원에 개시된 입자는 CD80/B7-1 및/또는 CD86/B7-2를 소거하도록 설계될 수 있다. 유사하게, 본원에 개시된 입자는 예를 들어, PD-1 수용체를 포함하는 입자를 이용하여, PD-1L과 같은 다른 면역 체크포인트 억제자를 소거하도록 설계될 수 있다. 그러한 입자 조성물은 암 치료를 위하여 면역계를 자극하는 다른 접근법에 비하여 여러 이득을 제공한다. Regulatory T cells (TREGs) can secrete the same ligands as cancer cells as a way to suppress the immune response to avoid, for example, autoimmune diseases caused by hyperreactive T cells or delayed T cell function. For example, CD80/B7-1 and CD86/B7-2 bind to the CTLA-4 receptor on T-cells and inhibit T-cell activity. Rather than block the CTLA-4 receptor, the particles disclosed herein may be designed to scavenge CD80/B7-1 and/or CD86/B7-2. Similarly, the particles disclosed herein can be designed to scavenge other immune checkpoint inhibitors, such as PD-1L, using, for example, particles comprising the PD-1 receptor. Such particle compositions offer several benefits over other approaches to stimulating the immune system for cancer treatment.

일부 실시양태에서, 개체는 암에 걸렸거나, 암에 걸린 것으로 의심되거나 또는 암에 걸릴 위험이 있는 개체이다. 일부 실시양태에서, 개체는 자가면역 질병에 걸렸거나 자가면역 질병에 걸린 것으로 의심되거나, 자가면역 질병에 걸릴 위험이 있는 개체이다. In some embodiments, the individual has, is suspected of having, or is at risk of having cancer. In some embodiments, the individual has, is suspected of having, or is at risk of having an autoimmune disease.

본원에서 사용된 암에 "걸릴 위험이 있는" 개체는 암에 걸릴 위험 인자를 하나 이상(예를 들어, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱 또는 여덟 이상) 가진 개체이다. 예를 들어, 암에 걸릴 위험이 있는 개체는 암에 걸릴 소인(즉, 종양 억제자 유전자에서의 돌연변이(예를 들어, BRCA1, p53, RB, 또는 APC에서의 돌연변이)와 같은 암에 걸릴 유전적 소인)을 가질 수 있거나 또는 질환을 야기할 수 있는 조건에 노출되었다. 따라서, 개체가 소정의 화합물(예를 들어, 아크롤레인, 비소, 벤젠, 벤즈[아]안트라센, 벤조[아]피렌, 폴로늄-210(라돈), 우레탄 또는 비닐 클로라이드와 같은 담배 연기 중의 발암 화합물)의 돌연변이유발 또는 발암 수준에 노출되었을 때 개체는 암에 "걸릴 위험이 있는" 개체일 수 있다. 또한, 개체가 예를 들어, 대량의 자외선 또는 X-선에 노출되었거나 파필로마바이러스, 엡스타인-바 바이러스, B형 간염 바이러스 또는 인간 T-세포 백혈병-림프종 바이러스와 같은 종양-야기/관련 바이러스에 노출(예를 들어, 감염)된 경우, 개체는 "암에 걸릴 위험이 있을" 수 있다. 암은 세포의 제어되지 않는 분열 및 이들이 침윤을 통해 인접 조직 내로 직접 성장하거나 전이에 의해 떨어진 부위 내로 이식되어(이 경우 암세포는 혈류 또는 림프계를 통해 수송됨) 확산하는 능력을 특징으로 하는 질병 또는 질환의 부류이다. 암은 모든 연령의 사람들이 걸릴 수 있지만, 연령에 따라 위험이 증가하는 경향이 있다. As used herein, an individual who is “at risk of developing” cancer is an individual who has one or more (eg, two, three, four, five, six, seven or eight or more) risk factors for developing cancer. For example, an individual at risk of developing cancer may have a genetic predisposition to cancer (i.e., a mutation in a tumor suppressor gene (e.g., a mutation in BRCA1, p53, RB, or APC)). predisposition) or have been exposed to conditions that may cause disease. Thus, a subject may be susceptible to certain compounds (e.g., carcinogenic compounds in tobacco smoke such as acrolein, arsenic, benzene, benz[a]anthracene, benzo[a]pyrene, polonium-210 (radon), urethane or vinyl chloride). An individual may be "at risk" of cancer when exposed to mutagenic or carcinogenic levels. In addition, the subject has been exposed to, for example, large amounts of ultraviolet light or X-rays or has been exposed to tumor-causing/associated viruses such as papillomavirus, Epstein-Barr virus, hepatitis B virus, or human T-cell leukemia-lymphoma virus. (eg, infection), the subject may be "at risk of developing cancer." Cancer is a disease or disorder characterized by the uncontrolled division of cells and their ability to spread by either growing directly into adjacent tissue by infiltration or by transplantation into distant sites by metastasis, in which case cancer cells are transported through the bloodstream or lymphatic system. is a category of Cancer can strike people of any age, but the risk tends to increase with age.

암의 유형은 예를 들어, 폐암, 유방암, 결장암, 췌장암, 신장암, 위암, 간암, 골암, 혈액암, 신경 조직 암(예를 들어, 다형성 교모세포종과 같은 교모세포종), 흑색종, 갑상선암, 난소암, 고환암, 전립선암, 자궁경부암, 질암 또는 방광암을 포함할 수 있다. Types of cancer include, for example, lung cancer, breast cancer, colon cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, stomach cancer, liver cancer, bone cancer, blood cancer, nerve tissue cancer (eg, glioblastoma, such as glioblastoma multiforme), melanoma, thyroid cancer, ovarian, testicular, prostate, cervical, vaginal, or bladder cancer.

유사하게, 감염을 일으킬 위험이 있는 개체는 병원성 미생물에의 노출 가능성을 증가시키는 하나 이상의 위험 인자를 가진 개체이다. Similarly, an individual at risk of developing an infection is an individual with one or more risk factors that increase the likelihood of exposure to pathogenic microorganisms.

암 또는 감염에 "걸린 것으로 의심되는" 개체는 암 또는 감염의 하나 이상의 증상을 가진 개체이다. 암 또는 감염에 걸릴 위험이 있거나 걸린 것으로 의심되는 개체가 관심 종 내의 모든 개체를 포함하지는 않는다는 것이 이해되어야 한다. An individual "suspected of having" cancer or infection is an individual who has one or more symptoms of cancer or infection. It should be understood that individuals at risk of or suspected of having cancer or infection do not include all individuals within the species of interest.

일부 실시양태에서, 본 방법은 개체가 암 또는 자가면역 질병을 가지고 있는지를 결정하는 것을 포함한다. In some embodiments, the method comprises determining whether the individual has cancer or an autoimmune disease.

XI. 염증성 및 자가면역 질환에 관련된 선택된 응용XI. Selected applications related to inflammatory and autoimmune diseases

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 입자는 염증성 질환 및/또는 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 개시된 입자 조성물에서 유용한 예시적인 제제 및/또는 그러한 입자에 의해 소거될 수 있는 가용성 생물분자는 본원에서 개시되며(예를 들어, 표 2) 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 사이토카인(예를 들어, TNFα 또는 인터루킨, 예를 들어, IL-2, IL-6, 또는 IL-1) 또는 케모카인(예를 들어, CXCL8 또는 CXCL1)을 소거할 수 있는 입자는 다양한 자가면역 및/또는 염증성 질환의 치료를 위해 유용할 수 있다. In some embodiments, the particles disclosed herein can be used to treat inflammatory diseases and/or autoimmune diseases. Exemplary agents useful in the particle compositions disclosed herein and/or soluble biomolecules capable of being scavenged by such particles are disclosed herein (eg, Table 2) and are known in the art. For example, particles capable of scavenging a cytokine (eg, TNFα or an interleukin, such as IL-2, IL-6, or IL-1) or a chemokine (eg, CXCL8 or CXCL1) It may be useful for the treatment of various autoimmune and/or inflammatory diseases.

일부 실시양태에서, 자가면역 또는 염증성 질환은 과민 반응이다. 본원에서 사용된 "과민증"은 바람직하지 않은 면역계 반응을 말한다. 과민증은 4가지 카테고리로 나뉜다. 타입 I 과민증은 알러지(예를 들어, 아토피, 아나필락시스 또는 천식)을 포함한다. 타입 II 과민증은 세포독성/항체 매개된다(예를 들어, 자가면역 용혈성 빈혈, 혈소판감소증, 태아적아구증 또는 굿파스처 증후군(Goodpasture's Symdrome)). 타입 III는 면역 복합체 질병(예를 들어, 혈청병, 아더스 반응(Arthus reaction) 또는 SLE)이다. 타입 IV는 지연형 과민증(DTH), 세포-매개 면역 기억 반응 및 항체-독립적(예를 들어, 접촉성 피부염, 투베르쿨린 피부반응 검사 또는 만성 이식 거부)이다. 본원에서 사용된 "알러지"는 IgE에 의한 비만 세포 및 호염기구의 지나친 활성화를 특징으로 하는 질환을 의미한다. 특정 경우에, IgE에 의한 비만 세포 및 호염기구의 지나친 활성화는 (부분적으로 또는 전체적으로) 염증 반응을 야기한다. 특정 경우에, 염증 반응은 국소적이다. 특정 경우에, 염증 반응은 기도 협착(즉, 기관지 수축)을 야기한다. 특정 경우에, 염증 반응은 코의 염증(즉, 비염)을 야기한다. 특정 경우에, 염증 반응은 전신성(즉, 아나필락시스)이다. In some embodiments, the autoimmune or inflammatory disease is a hypersensitivity reaction. As used herein, "hypersensitivity" refers to an undesirable immune system response. Hypersensitivity is divided into four categories. Type I hypersensitivity includes allergies (eg, atopy, anaphylaxis or asthma). Type II hypersensitivity is cytotoxic/antibody mediated (eg autoimmune hemolytic anemia, thrombocytopenia, erythrocytosis or Goodpasture's syndrome). Type III is an immune complex disease (eg serum sickness, Arthur's reaction or SLE). Type IV is delayed-type hypersensitivity (DTH), cell-mediated immune memory response and antibody-independent (eg contact dermatitis, tuberculin skin test or chronic transplant rejection). "Allergy" as used herein refers to a disease characterized by excessive activation of mast cells and basophils by IgE. In certain cases, excessive activation of mast cells and basophils by IgE causes (partially or totally) an inflammatory response. In certain instances, the inflammatory response is localized. In certain instances, the inflammatory response results in narrowing of the airways (ie, bronchoconstriction). In certain instances, the inflammatory response results in inflammation of the nose (ie, rhinitis). In certain instances, the inflammatory response is systemic (ie anaphylaxis).

XII. 병원균 및 독소에 관련된 선택된 응용 XII. Selected applications related to pathogens and toxins

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 입자는 미생물(예를 들어, 바이러스 또는 세균) 또는 내독소와 같은 미생물의 성분에 결합하도록 설계될 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 입자는 예를 들어, 감염성 질병(예를 들어, HPV, HBV, C형 간염 바이러스(HCV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV-1 및 HIV-2)와 같은 레트로바이러스, 엡스타인 바 바이러스(EBV), 사이토메갈로바이러스(CMV), HSV-1 및 HSV-2와 같은 헤르페스 바이러스 및 인플루엔자 바이러스를 비롯한 바이러스 감염성 질병)을 치료하기 위해 유용할 수 있다. 또한, 아스퍼질러스(Aspergillus), 브루기아(Brugia), 칸디다(Candida), 클라미디아(Chlamydia), 콕시디아(Coccidia), 크립토코커스(Cryptococcus), 디로피라리아(Dirofilaria), 임균(Gonococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 리슈마니아(Leishmania), 마이코박테리움(Mycobacterium), 마이코플라스마(Mycoplasma), 짚신벌레(Paramecium), 백일해(Pertussis), 말라리아원충(Plasmodium), 폐렴균(Pneumococcus), 폐포자충(Pneumocystis), 리케챠(Rickettsia), 살모넬라(Salmonella), 쉬겔라(Shigella), 포도상구균(Staphylococcus), 연쇄상구균(Streptococcus), 톡소플라스마(Toxoplasma) 및 비브리오콜레라(Vibriocholerae)와 같은 세균, 진균 및 다른 병원균 감염이 포함된다. 예시적인 종은 나이세리아 고노레아(Neisseria gonorrhea), 마이코박테리움 투 버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 해모필루스 바지날리스(Haemophilus vaginalis), 그룹 B 스트렙토코커 스 종(Group B Streptococcus sp.), 마이크로플라스마 호미니스(Microplasma hominis), 헤모필루스 두크레이(Hemophilus ducreyi), 그라누로마 인귀나 레(Granuloma inguinale), 림포파티아 베네레움(Lymphopathia venereum), 트레포네 마 팔리둠(Treponema pallidum), 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus). 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 카니스(Brucella canis), 캄필로박터 페투스(Campylobacter fetus), 캄필로박터 페 투스 인테스티날리스(Campylobacter fetus intestinalis), 렙토스피라 푸모 나(Leptospira pomona), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 브루셀라 오비스(Brucella ovis), 클라미디아 프시타시(Clamydia psittaci), 트리코모나스 포에투스(Trichomonas foetus), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 액티노바실러스 에쿠 리(Actinobacillus equuli), 살모넬라 아보르투스 오비스(Salmonella abortus ovis), 살모넬라 아보르투스 에퀴(Salmonella abortus equi), 슈도모나스 아에루기 노사(Pseudomonas aeruginosa), 코리네박테리움 에퀴(Corynebacterium equi), 코리 네박테리움 피오제네스(Corynebacterium pyogenes), 액티노바실러스 세미니 스(Actinobaccilus seminis), 마이코플라스마 보비제니타리움(Mycoplasma bovigenitalium), 아스퍼질러스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 앱시디아 라모사(Absidia ramosa), 트리파노소마 에퀴페르둠(Trypanosoma equiperdum), 바베시 아 카발리(Babesia caballi), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum); 또는 예를 들어, 파라콕시디오이드 브라실리엔시 스(Paracoccidioides brasiliensis)와 같은 진균; 또는 다른 병원균, 예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum)을 포함한다. 또한 국립 알러지 및 감염성 질병 기관(NIAID) 우선권 병원균이 포함된다. 이들은 카테고리 A 제제, 예를 들어, 대두창(variola major)(천연두), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis)(탄저병), 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis)(흑사병), 클로스트리듐 보툴리눔 독소(Clostridium botulinum toxin)(보툴리눔 식중독), 프란시셀라 투라렌시스(Francisella tularensis)(야토병), 필로바이러스(filoviruses)(에볼라 출혈열, 마르부르크(Marburg) 출혈열), 아레나바이러스(라사(Lassa)(라사열), 후닌(Junin)(아르헨티나 출혈열) 및 관련 바이러스); 카테고리 B 제제, 예를 들어, 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii)(Q열), 브루셀라(Brucella) 종(브루셀라병), 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei)(마비저), 알파바이러스(베네주엘라 뇌척수염(Venezuelan encephalomyelitis), 동부 및 서부 말 뇌척수염(eastern & western equine encephalomyelitis)), 리시누스 콤무니스(Ricinus communis)(피마자)로부터의 리신 독소, 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)의 입실론 독소; 포도상구균 장독소 B, 살모넬라(Salmonella) 종, 쉬겔라 디센테리 애(Shigella dysenteriae), 에스케리치아 콜라이 균주 0157:H7, 비브리오 콜레래(Vibrio cholerae), 크립토스포리디움 파르붐(Cryptosporidium parvum); 카테고리 C 제제, 예를 들어, 니파(nipah) 바이러스, 한타바이러스(hantaviruses), 진드기매개 출혈열 바이러스(tickborne hemorrhagic fever viruses), 진드기매개 뇌염 바이러스(tickborne encephalitis viruses), 황열 및 다제-내성 결핵; 기생충, 예를 들어, 쉬스토소마(Schistosoma) 및 태니아(Taenia); 및 원생동물, 예를 들어, 리슈마니아(예를 들어, 엘. 멕시카나(L. mexicana)), 및 말라리아 원충을 포함한다. In some embodiments, a particle disclosed herein may be designed to bind a microorganism (eg, a virus or bacterium) or a component of a microorganism, such as an endotoxin. Thus, the particles disclosed herein may be used to treat infectious diseases (e.g., HPV, HBV, hepatitis C virus (HCV), retroviruses such as human immunodeficiency virus (HIV-1 and HIV-2), Epstein Barr viruses (EBV), cytomegalovirus (CMV), herpes viruses such as HSV-1 and HSV-2, and viral infectious diseases including influenza viruses). In addition, Aspergillus, Brugia, Candida, Chlamydia, Coccidia, Cryptococcus, Dirofilaria, Gonococcus, Heath Histoplasma, Leishmania, Mycobacterium, Mycoplasma, Paramecium, Pertussis, Plasmodium, Pneumococcus, Pneumococcus Bacteria, fungi and bacteria such as Pneumocystis, Rickettsia, Salmonella, Shigella, Staphylococcus, Streptococcus, Toxoplasma and Vibriocholerae Other pathogen infections are included. An exemplary species is Neisseria Gonorea ( Neisseria gonorrhea ) , Mycobacterium tuberculosis ( Mycobacterium tuberculosis ), Candida albicans ( Candida albicans ), Candida tropicalis ( Candida tropicalis ), Trichomonas vaginalis ( Trichomonas vaginalis ), Haemophilus Vaginalis ( Haemophilus vaginalis ), Group B Streptococcus sp . , Microplasma hominis , Hemophilus ducrey ( Hemophilus ducreyi ), Granuloma Inguina Re ( Granuloma inguinale ), Lymphopathia Venereum ( Lymphopathia venereum ) , Treponema palidum pallidum ), Brucella abortus ( Brucella abortus ). Brucella melitensis ( Brucella melitensis ), Brucella suis ( Brucella suis ), Brucella canis ( Brucella canis ), Campylobacter Fetus ( Campylobacter fetus ), Campylobacter Fetus Intestinalis ( Campylobacter fetus intestinalis ) , Leptospira pomona ( Leptospira pomona ), Listeria Monocytogenes ( Listeria monocytogenes ), Brucella ovis ( Brucella ovis ), Chlamydia psittaci ( Chlamydia psittaci ), Trichomonas poetus ( Trichomonas foetus ), Toxoplasma Gondi ( Toxoplasma gondii ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), Actinobacillus Equuri ( Actinobacillus equiculi ) , Salmonella abortus Ovis ( Salmonella abortus ovis ), Salmonella abortus Equi ( Salmonella abortus) equi ), Pseudomonas aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) , Corynebacterium Equi ( Corynebacterium equi ) , Corynebacterium pyogenes ( Corynebacterium pyogenes ), Actinobacillus Seminis ( Actinobaccilus seminis ), Mycoplasma bovigenitalium ( Mycoplasma bovigenitalium ), Aspergillus Fumigatus ( Aspergillus fumigatus ), Absidia ramosa ( Absidia ramosa ), trypanosoma Equiperdum ( Trypanosoma equiperdum ), Babesia Cavalli ( Babesia caballi ) , Clostridium tetani , Clostridium botulinum ; or, for example, the paracoccidioid fungi such as Brasiliensis ( Paracoccidioides brasiliensis ) ; or other pathogens such as Plasmodium falciparum. Also included are the National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Priority Pathogens. These include Category A agents such as variola major (smallpox), Bacillus anthracis (anthrax), Yersinia pestis (black death), Clostridium botulinum toxin (Clostridium botulinum toxin (botulinum food poisoning), Francisella tularensis (tularemia), filoviruses (Ebola hemorrhagic fever, Marburg hemorrhagic fever), arenaviruses (Lassa (Lhasa fever)) , Junin (Argentine hemorrhagic fever) and related viruses); Category B agents, such as Coxiella burnetti ( Coxiella burnetii (Q fever), Brucella spp. (brucellosis), Burkholderia mallei (paralysis), alphavirus (Venezuelan encephalomyelitis), eastern & western equine encephalomyelitis )), ricinus ricin toxin from Ricinus communis (castor), epsilon toxin from Clostridium perfringens; Staphylococcus enterotoxin B , Salmonella species , Shigella dysenteriae , Escherichia E. coli strain 0157 :H7, Vibrio cholerae , Cryptosporidium Parvum ( Crypsporidium parvum ); Category C agents such as nipah virus, hantaviruses, tickborne hemorrhagic fever viruses, tickborne encephalitis viruses, yellow fever and multidrug-resistant tuberculosis; parasites such as Schistosoma and Taenia; and protozoa, such as Leishmania (eg, L. mexicana ) , and protozoa.

XIII. 제제 투여를 위한 키트XIII. Kits for Dosing Agents

특정 실시양태에서, 본 발명은 또한 적어도 하나의 본 발명의 조성물(예를 들어, 입자 또는 입자들)로 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 약학 패키지 또는 키트를 제공한다. 선택적으로, 그러한 용기(들)와 연합되어 의약 또는 생물 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 안내문이 있을 수 있으며, 안내문은 (a) 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 기관에 의한 허가, (b) 사용을 위한 설명 또는 둘 모두를 반영한다. In certain embodiments, the present invention also provides a pharmaceutical package or kit comprising one or more containers filled with at least one composition (eg, particle or particles) of the present invention. Optionally, associated with such container(s) may be a notice in the form prescribed by a governmental agency regulating the manufacture, use, or sale of medicinal or biological products, the notice indicating (a) manufacture, use for human administration. or (b) a license by the institution of sale, or (b) a description for use, or both.

특정 실시양태에서, 키트는 대상 제제의 전달을 촉진하기 위한 추가의 물질을 포함한다. 예를 들어, 키트는 카테터, 튜빙, 주입백, 시린지 등 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, (예를 들어, 본원에 개시된 입자를 포함하는) 조성물은 동결건조된 형태로 포장되며, 키트는 적어도 2개의 용기: 동결건조된 조성물을 포함하는 용기 및 동결건조 물질을 재구성하기에 적합한 물, 완충제 또는 다른 액체를 포함하는 용기를 포함한다. In certain embodiments, kits include additional materials to facilitate delivery of an agent of interest. For example, a kit may include one or more of a catheter, tubing, infusion bag, syringe, and the like. In certain embodiments, a composition (e.g., comprising particles disclosed herein) is packaged in lyophilized form, and the kit includes at least two containers: a container containing the lyophilized composition and a container for reconstituting the lyophilized material. A container containing water, buffer or other liquid suitable for

전술한 내용은 본원에 개시된 임의의 조성물과 방법에 적용된다. The foregoing applies to any compositions and methods disclosed herein.

본 발명은 그러한 조성물 및 방법(단독 또는 조합)의 특징과 본 섹션에서 개시된 다양한 키트를 위해 개시된 특징의 임의의 조합을 고려한다. The present invention contemplates any combination of features of such compositions and methods (alone or in combination) and features disclosed for the various kits disclosed in this section.

본 발명의 이들 및 다른 양태는 하기 실시예를 고려하여 추가로 이해될 것이며, 실시예는 본 발명의 일부 구체적 실시형태를 예시하고자 하는 것이며 첨부된 청구범위에 의해 정의되는, 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. These and other aspects of the invention will be further understood in consideration of the following examples, which are intended to illustrate some specific embodiments of the invention and limit the scope of the invention, which is defined by the appended claims. It's not what you want to do.

실시예Example

실시예Example 1 - 암의 치료 방법 1 - How to treat cancer

인간 환자는 의료 실무자에 의해 가용성 TNFR 또는 가용성 IL-2R을 발산하는 암(예를 들어, 폐, 결장, 유방, 뇌, 간, 췌장, 피부 또는 혈액 암)을 가진 것으로 확인된다. 환자는 암을 치료하기에 효과적인 양의, 가용성 TNFR 또는 IL-2R에 결합하고 격리시키는 (본원에 개시된) 입자를 포함하는 조성물이 투여된다. 선택적으로, 가용성 TNFR 또는 IL-2R의 효과의 억제를 유지하고 이에 의해 환자에서 암에 대한 면역 감시를 계속 향상시키기 위해 "유지 투여량"의 조성물이 환자에게 주어진다. A human patient is identified by a medical practitioner as having a cancer that sheds soluble TNFR or soluble IL-2R (eg, lung, colon, breast, brain, liver, pancreas, skin or blood cancer). A patient is administered a composition comprising particles (disclosed herein) that bind to and sequester soluble TNFR or IL-2R in an amount effective to treat cancer. Optionally, a “maintenance dose” of the composition is given to the patient to maintain suppression of the effects of soluble TNFR or IL-2R and thereby continue to enhance immune surveillance against cancer in the patient.

실시예Example 2 - 인간의 해독 방법 2 - Human Detoxification Method

보툴리눔 독소와 관련된 독성의 증상을 가진 인간 환자가 존재한다. 환자는 독성과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키기에 효과적인 양의 가용성 보툴리눔 독소에 결합하고 격리시키는 (본원에 개시된) 입자를 포함하는 조성물이 투여된다. There are human patients with symptoms of toxicity associated with botulinum toxin. A patient is administered a composition comprising particles (disclosed herein) that binds and sequesters a soluble botulinum toxin in an amount effective to alleviate one or more symptoms associated with toxicity.

실시예Example 3 - 바이러스 감염의 치료 방법 3 - Methods of treatment of viral infections

인간 환자는 HIV-1 감염을 가진 것으로 의료 실무자에 의해 확인된다. 환자는 환자의 순환계 내의 바이러스 역가를 감소시키기에 효과적인 양의, 가용성 HIV-1 비리온에 결합하고 격리시키는 (본원에 개시된) 입자를 포함하는 조성물이 투여된다. 환자는 HIV-1 비리온 역가의 감소를 유지하고 이에 의해 환자에서 감염을 억제하며 타인에게 바이러스 전파 가능성을 감소시키기 위한 "유지 투여량"의 조성물이 주어진다. A human patient is identified by a medical practitioner as having HIV-1 infection. A patient is administered a composition comprising particles (disclosed herein) that bind and sequester soluble HIV-1 virions in an amount effective to reduce viral titer in the patient's circulatory system. The patient is given a "maintenance dose" of the composition to maintain a decrease in HIV-1 virion titer, thereby suppressing infection in the patient and reducing the likelihood of transmission of the virus to others.

실시예Example 4 - 규소 입자의 제조 방법 4 - Manufacturing method of silicon particles

다양한 기공 크기를 가지며 크기가 1000 nm X 400 nm 및 1000 nm X 800 nm인 다공성 규소 디스크를 제조한다. 기공 직경 및 디스크의 크기와 형태는 주사전자현미경에 의해 규명한다. 금 나노입자(Au)를 다공성 규소 디스크의 기공 내에 침적시킨다. 종양 괴사 인자(TNF)는 배위결합을 통해 금 나노입자의 표면에 접합시킨다. 리간드 밀도 및 TNF-Au 결합 안정성을 평가한다. Porous silicon disks with different pore sizes and sizes of 1000 nm X 400 nm and 1000 nm X 800 nm are prepared. The pore diameter and the size and shape of the discs were determined by scanning electron microscopy. Gold nanoparticles (Au) are deposited in the pores of the porous silicon disk. Tumor necrosis factor (TNF) is conjugated to the surface of the gold nanoparticles through a coordinate bond. Ligand density and TNF-Au binding stability are evaluated.

실시예Example 5 - 중합체 입자의 제조 방법 5 - Manufacturing method of polymer particles

폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA) 입자를 에멀젼에 의해 제작한다. PLGA 입자의 크기 및 형태는 주사전자현미경, 원자력 현미경 및 투과전자현미경에 의해 규명한다. 입자는 대식세포 보충(즉, 식세포작용)을 위해, 4차 암모늄 베타-사이클로덱스트린으로 코팅한다. 코팅은 원자력 현미경 및 투과전자현미경으로 입증한다. 코팅 밀도 및 균일성은 투과전자 현미경 및 동적 광산란에 의해 규명한다. Poly(lactide-co-glycolide) (PLGA) particles are prepared by emulsion. The size and shape of PLGA particles were determined by scanning electron microscopy, atomic force microscopy and transmission electron microscopy. The particles are coated with quaternary ammonium beta-cyclodextrin for macrophage recruitment (i.e., phagocytosis). Coatings are verified by atomic force microscopy and transmission electron microscopy. Coating density and uniformity are determined by transmission electron microscopy and dynamic light scattering.

베타-사이클로덱스트린-코팅된 PLGA 입자를 대식세포와 항온처리하며, 식세포작용을 형광현미경에 의해 그리고 유세포분석에 의해 모니터한다. Beta-cyclodextrin-coated PLGA particles are incubated with macrophages, and phagocytosis is monitored by fluorescence microscopy and by flow cytometry.

베타-사이클로덱스트린-코팅된 PLGA 입자를 옵소닌작용 및 대식세포 흡수의 회피, 및 다른 입자에의 결합의 방지를 허용하기 위하여 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 티올 모이어티의 블렌드로 코팅한다. PEG와 티올 코팅의 균일성 및 밀도를 원자력 현미경에 의해 규명한다. Beta-cyclodextrin-coated PLGA particles are coated with a blend of polyethylene glycol (PEG) and thiol moieties to allow opsonization and avoidance of macrophage uptake, and prevention of binding to other particles. The uniformity and density of the PEG and thiol coatings are investigated by atomic force microscopy.

코팅 안정성은 다양한 기간 동안 매질에서 입자를 항온처리함으로써 규명한다. 입자의 회피 및 흡수는 상술한 대로, 대식세포와 입자를 항온처리함으로써 다양한 시점에서 모니터한다. Coating stability is characterized by incubating the particles in the medium for various periods of time. Evasion and uptake of the particles are monitored at various time points by incubating the particles with macrophages, as described above.

PLGA 입자는 종양 괴사 인자(TNF)로 코팅하고, 입자는 이황화결합에 의해 조합시켜 "스폰지"를 형성하며, 스폰지의 내부 표면 상에 TNF를 포함한다. 스폰지의 외부 표면은 선택적으로 스폰지의 TNF와 세포 사이의 상호작용을 방지하기 위하여 TNF를 포함하지 않는 입자로 차단된다. PLGA particles are coated with tumor necrosis factor (TNF), the particles are combined by disulfide bonds to form a "sponge", and include TNF on the inner surface of the sponge. The outer surface of the sponge is optionally blocked with TNF-free particles to prevent interactions between the cells and the TNF of the sponge.

실시예Example 6 - 중합체-기반 입자의 약동학 6 - Pharmacokinetics of polymer-based particles

실시예 5의 스폰지(즉, 103 내지 1012 스폰지와 같은, 실시예 5의 "스폰지"를 포함하는 조성물)를 원발암 및 전이암의 마우스 모델 및 건강한 대조군에게 정맥내로 또는 종양내로 투여한다. 스폰지의 독성은 각 투여 경로를 위한 LD50을 확인함으로써 결정한다. 스폰지의 반감기는 각 투여 경로에 대한 LC/MS 및 ICP에 의해 스폰지의 혈장 농도를 모니터함으로써 결정한다. 스폰지의 생물학적 분배는 마우스의 생검을 수득하여 LC/MS, ICP, 및 공초점 현미경에 의해 스폰지 및 그 성분에 대해 조직을 분석함으로써 결정한다. The sponge of Example 5 (ie, a composition comprising the “sponge” of Example 5, such as 10 3 to 10 12 sponge) is administered intravenously or intratumorally to mouse models of primary and metastatic cancers and healthy controls. Toxicity of the sponge is determined by determining the LD 50 for each route of administration. The half-life of the sponge is determined by monitoring the plasma concentration of the sponge by LC/MS and ICP for each route of administration. The biological distribution of the sponge is determined by obtaining a biopsy of the mouse and analyzing the tissue for the sponge and its components by LC/MS, ICP, and confocal microscopy.

실시예Example 7 - 중합체-기반 입자의 효능 7 - Efficacy of polymer-based particles

실시예 5의 스폰지(즉, 103 내지 1012 스폰지와 같은, 실시예 5의 "스폰지"를 포함하는 조성물)을 MDA-MB-231 또는 4T1 이식편을 포함하는 마우스에 투여한다. MDA-MB-231 모델을 이용하여 종양 크기 및 성장의 감소를 평가하고, 4T1 모델을 이용하여 전이 억제를 평가한다. 스폰지는 6주 동안 1주일에 한번씩 MDA-MB-231 마우스에 종양내로 투여하며, 주기적으로 체중과 종양 크기를 모니터한다. 스폰지를 6주동안 1주일에 한번씩 4T1 마우스에 정맥내로 투여하고, 전이의 수를 모니터한다.The sponge of Example 5 (ie, a composition comprising the “sponge” of Example 5, such as a 10 3 to 10 12 sponge) is administered to mice bearing MDA-MB-231 or 4T1 grafts. Reduction of tumor size and growth is evaluated using the MDA-MB-231 model, and inhibition of metastasis is assessed using the 4T1 model. The sponge is administered intratumorally to MDA-MB-231 mice once a week for 6 weeks, and body weight and tumor size are periodically monitored. The sponge is administered intravenously to 4T1 mice once a week for 6 weeks, and the number of metastases is monitored.

실시예Example 8 - 규소/금-기반 입자의 약동학 및 효능 8 - Pharmacokinetics and efficacy of silicon/gold-based particles

실시예 6과 7의 실험을 실시예 5의 다공성 규소 입자로 반복한다.The experiments of Examples 6 and 7 are repeated with the porous silicon particles of Example 5.

본 발명이 구체적인 그의 실시형태를 참조하여 개시되었지만, 본 발명의 진정한 사상과 범위를 벗어나지 않고 다양한 변화가 이루어질 수 있으며 등가물이 치환될 수 있음이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 특정 상황, 물질, 물질의 구성, 과정, 과정 단계 또는 단계들을 본 발명의 목적, 사상 및 범위에 적응시키기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 모든 그러한 변형은 본 발명의 범위 이내이다. Although the present invention has been disclosed with reference to specific embodiments thereof, it should be understood by those skilled in the art that various changes may be made and equivalents may be substituted without departing from the true spirit and scope of the present invention. In addition, many modifications may be made to adapt a particular situation, material, composition of matter, process, process step or steps to the objective, spirit and scope of the invention. All such variations are within the scope of this invention.

Claims (124)

적어도 하나의 표면 및 상기 표면 상에 고정된 제제를 갖는 입자로서,
제제는 특이적 결합 쌍의 제1 구성원인 표적에 선택적으로 결합하며;
입자에의 표적의 결합은 표적과 특이적 결합 쌍의 제2 구성원과의 상호작용을 억제하며;
표적은
(i) 가용성 생물분자,
(ii) 소분자, 단백질, 또는 핵산,
(iii) 바이러스 단백질,
(iv) 독소,
(v) 약물,
(vi) 세포 표면 수용체에 대한 리간드, 및
(vii) 세포질 수용체 또는 핵 수용체에 대한 리간드
로부터 선택되며;
제제가 세포의 표면 상의 분자에 결합하는 능력이 감소되도록, 제제가 입자 상에 고정되고; 추가로,
a) 입자는 코팅을 포함하거나;
b) 입자는 다공성이며 기공(pore)의 외부 표면과 내면 표면을 포함하고 제제는 내면 표면 상에 고정되거나; 또는
c) 입자는 그의 꼭짓점 중 적어도 하나로부터의 적어도 하나의 외향 돌출부를 포함하고, 하나 이상의 돌출부는, (i) 입자의 표면상에 고정된 제제가 세포 표면에 연관된 세포 표면 수용체 단백질에 결합하거나 이를 활성화하는 것을 억제하고, (ii) 표적이 제제에 결합될 때, 표적과, 표적이 제1 구성원인 특이적 결합 쌍의 제2 구성원과의 상호작용을 억제하기 위한 크기와 배향을 갖는,
입자. A particle having at least one surface and an agent immobilized on the surface,
The agent selectively binds to a target that is the first member of a specific binding pair;
Binding of the target to the particle inhibits interaction of the target with the second member of the specific binding pair;
the target is
(i) a soluble biomolecule;
(ii) a small molecule, protein, or nucleic acid;
(iii) viral proteins;
(iv) toxins;
(v) drugs;
(vi) a ligand for a cell surface receptor, and
(vii) ligands for cytoplasmic receptors or nuclear receptors
is selected from;
The agent is immobilized on the particle such that the ability of the agent to bind to molecules on the surface of cells is reduced; Add to,
a) the particle comprises a coating;
b) the particles are porous and include an outer surface and an inner surface of pores and the agent is immobilized on the inner surface; or
c) the particle comprises at least one outward protrusion from at least one of its vertices, the one or more protrusions comprising: (i) an agent immobilized on the surface of the particle binds to or activates a cell surface receptor protein associated with the cell surface; and (ii) have a size and orientation to inhibit interaction of the target with a second member of a specific binding pair in which the target is the first member, when the target is bound to the agent.
particle. 제1항에 있어서,
제제는 표적에 선택적으로 결합하며;
표적에의 제제의 결합은 표적과 세포 사이의 상호작용을 억제하는, 입자.According to claim 1,
The agent binds selectively to the target;
wherein binding of the agent to the target inhibits an interaction between the target and the cell. 제1항에 있어서, 제제가 세포 표면 상에 발현된 표적에 결합하는 능력이 감소되도록 제제가 입자 상에 고정되는 입자.The particle of claim 1 , wherein the agent is immobilized on the particle such that the ability of the agent to bind to a target expressed on the cell surface is reduced. 제1항에 있어서, 세포 표면 상의 표적에의 제제의 결합이 입체적으로 억제되도록 제제가 입자 상에 고정되는 입자.The particle of claim 1 , wherein the agent is immobilized on the particle such that binding of the agent to a target on the cell surface is sterically inhibited. 제1항에 있어서, 세포 표면 상의 분자에의 제제의 결합이 입체적으로 억제되도록 제제가 입자 상에 고정되는 입자.The particle of claim 1 , wherein the agent is immobilized on the particle such that binding of the agent to molecules on the cell surface is sterically inhibited. 제1항에 있어서,
(i) 바이러스 단백질은 구조 단백질이거나,
(ii) 독소는 세균 독소, 식물 독소 또는 동물독소이거나,
(iii) 소분자, 단백질, 또는 핵산은 세포막-결합 단백질이거나,
(iv) 세포 표면 수용체에 대한 리간드는 사이토카인, 케모카인 림포카인 또는 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리 리간드 또는 그의 변이체인,
입자.According to claim 1,
(i) the viral protein is a structural protein;
(ii) the toxin is a bacterial toxin, plant toxin or animal toxin;
(iii) the small molecule, protein, or nucleic acid is a cell membrane-bound protein;
(iv) the ligand for the cell surface receptor is a cytokine, chemokine lymphokine or tumor necrosis factor (TNF) family ligand or variant thereof;
particle. 제1항에 있어서, 제제가 세포 표면 수용체 단백질의 리간드인 입자.The particle of claim 1 , wherein the agent is a ligand of a cell surface receptor protein. 제7항에 있어서, 세포 표면 상의 세포 표면 수용체 단백질에의 결합 또는 이의 활성화로부터 제제가 입체적으로 억제되도록 제제가 입자 상에 고정되는 입자.8. The particle of claim 7, wherein the agent is immobilized on the particle such that the agent is sterically inhibited from binding to or activating a cell surface receptor protein on the cell surface. 제1항에 있어서,
표적은 가용성 생물분자이며;
가용성 생물분자는 세포 표면 수용체 단백질 형태이며;
세포 표면 상의 세포 표면 수용체 단백질에의 결합 또는 이의 활성화로부터 제제가 입체적으로 억제되도록 제제가 입자 상에 고정되는,
입자.According to claim 1,
A target is a soluble biomolecule;
Soluble biomolecules are in the form of cell surface receptor proteins;
wherein the agent is immobilized on the particle such that the agent is sterically inhibited from binding to or activating a cell surface receptor protein on the cell surface.
particle. 제9항에 있어서, 세포 표면 수용체 단백질은 암세포에 의해 발현되는 입자. 10. The particle of claim 9, wherein the cell surface receptor protein is expressed by cancer cells. 제10항에 있어서, 세포 표면 수용체 단백질은 세포 표면 수용체 단백질의 가용성 형태로서 암세포에 의해 발산된 단백질인 입자. 11. The particle of claim 10, wherein the cell surface receptor protein is a protein shed by cancer cells as a soluble form of the cell surface receptor protein. 제9항에 있어서, 활성화될 경우, 세포 표면 수용체 단백질은 세포사멸을 유도하는 입자. 10. The particle of claim 9, wherein when activated, the cell surface receptor protein induces apoptosis. 제7항에 있어서, 세포 표면 수용체 단백질은
(i) 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 단백질,
(ii) Fas 수용체 단백질,
(iii) TNF-관련 세포사멸-유도 리간드 수용체(TRAILR) 단백질, 4-1BB 수용체 단백질, CD30 단백질, EDA 수용체 단백질, HVEM 단백질, 림프독소 베타 수용체 단백질, DR3 단백질, 또는 TWEAK 수용체 단백질, 또는
(iv) 가용성 사멸 수용체-3, 가용성 사멸 수용체-4, 가용성 사멸 수용체-5, 가용성 인터루킨-1A 수용체, 가용성 인터루킨-5 수용체, 가용성 인터루킨-6 수용체, 가용성 인터루킨-8 수용체, CXCR1, TRAIL-R1, 또는 TRAIL-R2인,
입자.8. The method of claim 7, wherein the cell surface receptor protein is
(i) a tumor necrosis factor receptor (TNFR) protein;
(ii) Fas receptor protein;
(iii) TNF-related cell death-inducing ligand receptor (TRAILR) protein, 4-1BB receptor protein, CD30 protein, EDA receptor protein, HVEM protein, lymphotoxin beta receptor protein, DR3 protein, or TWEAK receptor protein, or
(iv) soluble death receptor-3, soluble death receptor-4, soluble death receptor-5, soluble interleukin-1A receptor, soluble interleukin-5 receptor, soluble interleukin-6 receptor, soluble interleukin-8 receptor, CXCR1, TRAIL-R1 , or TRAIL-R2;
particle. 제7항에 있어서, 세포 표면 수용체 단백질은 인터루킨 수용체 단백질인 입자. 8. The particle of claim 7, wherein the cell surface receptor protein is an interleukin receptor protein. 제9항에 있어서, 제제는
(i) 항체 또는 항체의 생물분자-결합 단편이고, 생물분자-결합 단편은 Fab 단편, F(ab)2 단편, scFv 단편 및 도메인 항체로부터 선택되거나,
(ii) 비-항체 스캐폴드 단백질이거나,
(iii) 인터루킨 단백질 또는 그의 변이체이거나,
(iv) 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리 리간드 또는 그의 변이체를 포함하거나,
(v) 핵산, 앱타머 또는 핵산 유사체를 포함하는,
입자.10. The method of claim 9, wherein the formulation
(i) an antibody or a biomolecule-binding fragment of an antibody, wherein the biomolecule-binding fragment is selected from Fab fragments, F(ab) 2 fragments, scFv fragments and domain antibodies;
(ii) is a non-antibody scaffold protein;
(iii) an interleukin protein or a variant thereof;
(iv) comprises a tumor necrosis factor (TNF) family ligand or variant thereof;
(v) comprising a nucleic acid, aptamer or nucleic acid analog;
particle. 제15항에 있어서, 제제는
(i) 항체의 생물분자-결합 단편이고, 생물분자-결합 단편은 Fab 단편, F(ab)2 단편, scFv 단편 및 도메인 항체로부터 선택되거나,
(iii) IL-2 단백질 또는 그의 변이체이거나,
(iv) TNFα, Fas 리간드, 림프독소, 림프독소 알파, 림프독소 베타, 4-1BB 리간드, CD30 리간드, EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNF, TRAIL, 또는 전술한 임의의 것의 변이체를 포함하거나,
(v) 앱타머를 포함하는,
입자.16. The method of claim 15, wherein the formulation
(i) a biomolecule-binding fragment of an antibody, wherein the biomolecule-binding fragment is selected from Fab fragments, F(ab) 2 fragments, scFv fragments and domain antibodies;
(iii) an IL-2 protein or variant thereof;
(iv) TNFα, Fas ligand, lymphotoxin, lymphotoxin alpha, lymphotoxin beta, 4-1BB ligand, CD30 ligand, EDA-A1, LIGHT, TLA1, TWEAK, TNF, TRAIL, or variants of any of the foregoing. do or,
(v) comprising an aptamer;
particle. 제7항에 있어서, 제제는 세포 표면 수용체 단백질의 천연 리간드의 능력에 비하여, 세포 표면 수용체 단백질을 활성화시키는 능력이 감소된 입자.8. The particle of claim 7, wherein the agent has a reduced ability to activate a cell surface receptor protein relative to the ability of its natural ligand. 제7항에 있어서, 제제는 세포 표면 수용체 단백질을 활성화시키지 않는 입자.8. The particle of claim 7, wherein the agent does not activate cell surface receptor proteins. 제1항에 있어서, 입자는 구형이고, 입자는 추가로 입자의 구형 표면으로부터 연장되는 2개의 교차 융기부(intersecting ridges)를 포함하며, 융기부는, (i) 구형 입자의 표면에 고정된 제제가 세포 표면 수용체 단백질에 결합하거나 이를 활성화하는 것을 억제하고/하거나 (ii) 표적이 제제에 결합될 때, 표적과, 표적이 제1 구성원인 특이적 결합 쌍의 제2 구성원과의 상호작용을 억제하기 위한 크기와 배향을 갖는 입자.2. The method of claim 1, wherein the particle is spherical and the particle further comprises two intersecting ridges extending from the spherical surface of the particle, the ridges comprising: (i) the agent immobilized on the surface of the spherical particle is inhibiting binding to or activating a cell surface receptor protein and/or (ii) inhibiting interaction of the target with a second member of a specific binding pair in which the target is the first member when the target is bound to the agent; Particles with a size and orientation for 제1항에 있어서, 입자는 개체의 혈관계에서 순환하기 위한 형상과 크기를 갖는 입자.The particle of claim 1 , wherein the particle has a shape and size to circulate in the subject's vascular system. 제1항에 있어서, 입자의 최장 치수는 약 1 ㎛ 이하, 750 nm 이하, 또는 500 nm 이하인 입자.The particle of claim 1 , wherein the particle has a longest dimension of about 1 μm or less, 750 nm or less, or 500 nm or less. 제1항에 있어서, 입자의 최소 치수는 적어도 약 300 nm인 입자.The particle of claim 1 , wherein the smallest dimension of the particle is at least about 300 nm. 제1항에 있어서, 입자는 10 내지 109 제제, 103 내지 107 제제, 또는 104 내지 106 제제를 포함하는 입자.The particle of claim 1 , wherein the particle comprises a 10 to 10 9 formulation, a 10 3 to 10 7 formulation, or a 10 4 to 10 6 formulation. 제1항에 있어서, 코팅은 적어도 두 개의 코팅 분자를 포함하는 입자.The particle of claim 1 , wherein the coating comprises at least two coating molecules. 제24항에 있어서, 적어도 하나의 코팅 분자는 표면에 결합되는 입자.25. The particle of claim 24, wherein the at least one coating molecule is bonded to the surface. 제24항에 있어서, 코팅 분자는 제제와 세포 표면 상의 분자 사이의 상호작용을 억제하는 입자.25. The particle of claim 24, wherein the coating molecule inhibits interactions between the agent and molecules on the cell surface. 제24항에 있어서, 제2 표면을 추가로 포함하며, 적어도 하나의 코팅 분자는 제2 표면에 결합되는 입자.25. The particle of claim 24, further comprising a second surface, wherein at least one coating molecule is bonded to the second surface. 제27항에 있어서, 표면은 입자의 내부 표면이고 제2 표면은 입자의 외부 표면인 입자.28. The particle of claim 27, wherein the surface is an inner surface of the particle and the second surface is an outer surface of the particle. 제27항에 있어서, 적어도 두 개의 제2 코팅 분자를 추가로 포함하며,
적어도 하나의 제2 코팅 분자는 제2 표면에 결합되며;
제2 코팅 분자는 생체내(in vivo) 입자의 클리어런스(clearance)를 감소시키는,
입자.28. The method of claim 27, further comprising at least two second coating molecules;
at least one second coating molecule is bonded to the second surface;
the second coating molecule reduces the clearance of the particle in vivo;
particle. 제29항에 있어서, 제2 코팅 분자는 코팅 분자와 세포 및/또는 세포외 단백질 사이의 상호작용을 억제하여 생체내 입자의 클리어런스를 감소시키는 입자30. The particle of claim 29, wherein the second coating molecule reduces the clearance of the particle in vivo by inhibiting the interaction between the coating molecule and a cell and/or extracellular protein. 제29항에 있어서, 제2 코팅 분자는 생분해성 중합체를 포함하는 입자.30. The particle of claim 29, wherein the second coating molecule comprises a biodegradable polymer. 제24항에 있어서, 코팅 분자는 생체내 입자의 클리어런스를 증가시키는 입자. 25. The particle of claim 24, wherein the coating molecule increases the clearance of the particle in vivo. 제32항에 있어서, 코팅 분자는 식세포작용에 의한 입자의 클리어런스, 신장 클리어런스, 또는 간담즙 클리어런스를 증가시키는 입자.33. The particle of claim 32, wherein the coating molecule increases clearance of the particle by phagocytosis, renal clearance, or hepatobiliary clearance. 제24항에 있어서,코팅 분자는 생체내 입자의 클리어런스를 감소시키는 입자.25. The particle of claim 24, wherein the coating molecule reduces the clearance of the particle in vivo. 제24항에 있어서, 코팅 분자는 폴리에테르, 폴리-알파 히드록시산, 폴리-베타 히드록시산, 당, 지질, 폴리비닐 알코올, 폴리에스테르, 폴리오르소에스테르, 폴리아미도에스테르, 폴리포스포에스테르, 우레탄 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중합체를 포함하는, 입자.25. The method of claim 24, wherein the coating molecule is polyether, poly-alpha hydroxy acid, poly-beta hydroxy acid, sugar, lipid, polyvinyl alcohol, polyester, polyorthoester, polyamidoester, polyphosphoester , urethanes, or combinations thereof. 제35항에 있어서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리글루탐산, 폴리글리콜산(PGA), 폴리락트산(PLA), 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA), 폴리비닐 아세테이트(PVA), 폴리히드록시부티레이트, 폴리히드록시발레레이트 또는 이들의 조합을 포함하는 입자.36. The method of claim 35, wherein the polymer is polyethylene glycol (PEG), polyglutamic acid, polyglycolic acid (PGA), polylactic acid (PLA), poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA), polyvinyl acetate (PVA), Particles comprising polyhydroxybutyrate, polyhydroxyvalerate or a combination thereof. 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete
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