KR102493496B1 - 천연물 유래의 간 손상 완화 및 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 천연물 유래의 간 손상 완화 및 개선용 조성물에 관한 것이다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 본 발명에 의한 약물로 인한 간손상 치료제는 천연물로부터 수득한 물질을 이용하기 때문에 부작용을 유발하지 않고, 간손상이 일어난 간을 보호하고 회복시킬 수 있어 약물로 인한 간손상을 효과적으로 다스릴 수 있다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 본 발명에 의한 약물로 인한 간손상 치료제는 천연물로부터 수득한 물질을 이용하기 때문에 부작용을 유발하지 않고, 간손상이 일어난 간을 보호하고 회복시킬 수 있어 약물로 인한 간손상을 효과적으로 다스릴 수 있다.
Description
본 발명은 천연물 유래의 간 손상 완화 및 개선용 조성물에 관한 것이다.
간은 상복부 우측에 위치한 장기로 각종 영양소를 만들어 저장하고 체내 노폐물과 독소 배출 등 중요한 기능을 한다. 간은 영양소 대사의 중심 역할을 하는 장기로 정상적인 사람의 간은 약 1,500g의 무게를 가지며 간 기능의 이상이 초래되면 생체의 영양소 대사에 문제를 유발하여, 포도당을 글리코겐으로 만들거나 또는 단백질을 알부민으로 전환하거나 불필요한 것을 분해하여 쓸개즙으로 전달하는 등의 간의 기능에 이상이 생긴다. 정신적 휴식을 가질 경우 경미한 간 손상의 경우, 간세포는 다시 복구될 수 있지만, 바쁜 현대사회에서는 휴식을 취할 여유를 가질 수 없어서 간질환이 가중되기도 한다.
일반적으로 간에 염증이 생기는 간염이 간질환의 대부분을 차지하며, 양상에 따라 급성 간염과 만성 간염, 원인에 따라 바이러스성 간염, 알코올성 간염, 약물성 간염 등으로 나눌 수 있다. 이런 이상으로 유발되는 간질환에는 지방간, 간염, 간경변증, 간암 등이 있다. 운동이나 금주, 식이요법 등과 약물 치료 등을 병행해서 간질환을 치료하고는 있지만, 근본적으로 완전히 치유가 되기는 어렵기 때문에 효과적이고 개선된 간질환 치료제 또는 보호제의 개발이 계속적으로 필요하다.
특히, 간세포가 파괴돼 간 기능이 절반 이하로 떨어져도 특별한 증상이 나타나지 않기 때문에 치료시기를 놓치는 경우가 많아 더욱 주의가 필요하다.
간의 손상 정도가 심해지면 소변 색이 갈색으로 변하고 눈동자와 피부가 노랗게 되는 황달 증세가 나타난다. 만일 간이 붓거나 염증으로 커지면 우측 갈비뼈 아래 부근을 눌렀을 때 만져지기도 한다.
본 발명자는 중국에서 비방으로 전래되어 온 간 손상의 치료 및 개선용 조성물에 관한 내용을 입수하고, 상기 조성물이 실제로 간손상을 회복 및 개선시키는 효과가 있다는 것을 확인하여 이를 토대로 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은, 천연물 유래 추출물을 이용하여 손상된 간의 회복 및 개선 효과를 보이는 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 간의 회복 및 개선용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 상기 조성물을 포함하는 간질환 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 조성물을 포함하는 간질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
실시예들에서 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 사항들로 제한되지 않으며, 언급하지 않은 또 다른 기술적 과제들은 이하 설명할 다양한 실시예들로부터 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 고려될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인진, 청호, 금전초, 산치자, 대황, 황금, 토사자, 생맥아, 어성초, 저령, 의이인, 복령, 천련자, 목향, 후박, 연교 및 계내금으로 구성되는 군으로부터 하나 이상 선택된 천연물의 추출물을 포함하는, 간 손상 치료 및 개선용 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 조성물은, 인진, 청호, 금전초 및 산치자가 2:2:1:1의 중량비로 구성된 혼합물로부터 수득한 제1혼합추출물; 대황, 황금, 토사자, 생맥아, 어성초, 저령, 의이인 및 복령이 3:1:1:2:1:1:2:1의 중량비로 구성된 혼합물로부터 수득한 제2혼합추출물; 및 천련자, 목향, 후박, 연교 및 계내금으로 구성된 혼합물로부터 수득한 제3혼합추출물;이 4:2:1의 중량비로 혼합된 것을 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서, 상기 “인진(茵蔯)”은 사철쑥이라고도 불리며, 구형으로서 지름 2mm의 두상화(頭狀花)를 주로 하고 실모양의 잎과 화서축(花序軸) 및 가는 줄기의 절편으로 되어 있으며, 질은 가볍고 녹갈색-어두운 갈색이다. 간열이 왕성한 것을 치료하고, 열기를 식히면서 소변을 잘 나오게 하여 습을 빼내며 황달을 물리치는 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서, 상기 “청호(靑蒿)”는 개사철쑥이라고도 불리며, 잎이 거의 없는 꽃대가 있는 줄기이며 길이 60-90cm이다. 줄기의 바깥면은 황갈색이며 질은 단단하며 꺾인 면은 섬유상이다. 잎은 녹갈색이고 잔주름이 많고 말려졌으며 부서지기 쉽고 꽃대는 황록색이다. 이 약은 특이한 냄새가 있고 맛은 덤덤하다. 눈을 밝게 하고, 기생충을 없애며, 양혈과 동시에 열기를 가라앉히고, 더위먹은 것을 풀어주며 학질을 치료하는 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “금전초(金錢草)”는 긴병풀꽃이라고도 부르며, 잎의 모양이 금전을 닮았다고 하여 붙여진 이름이다. 열을 꺼주고, 습사를 제거하며, 붓기를 가라앉히고 소변이 잘 나오게 하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “산치자(山梔子)”는 꼭두서니과(, Rubiaceae)에 속한 상록관목인 치자나무(Gardenia jasminoides Ellis)의 잘 익은 열매를 의미한다. 소변이 잘 나오게 하고, 열기를 식혀주며, 독성을 풀어주어 눈자위가 충혈되거나 불면증 등의 치료에 사용되었다.
본 발명에서 상기 “대황(大黃)”양혈하고 해독하며, 변이 잘 나오게 하고, 어혈을 제거하여 월경통을 완화시키는 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “황금(黃芩)”열을 풀어주면서 해독하고, 임산부의 유산을 예방하거나, 태기를 안정시키는 효능, 지혈하는 효능 및 열기를 식히고 습기를 말리는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “토사자()”는 메꽃과에 속하며 구형-원반형으로 된 작은 알맹이 모양이고 지름 1-3mm, 100개의 무게는 100mg 정도가 되는 새실삼의 씨를 약으로 사용한다. 임산부의 유산을 예방하거나, 눈을 밝게하고, 간과 신장을 보하며, 설사를 치료하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “생 맥아(麥芽)”는 비장을 튼튼하게 하고 위를 열어주며, 적을 없애고, 소화작용을 도와주며 정체된 것을 풀어주고, 담을 삭이며 젖이 나오지 않게 하고, 분만을 도와주는 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “어성초(魚腥草)”는 비린내가 난다고 하여 어성초로 부르며, 길이 20-35 cm, 지름 2-3mm로 세로로 주름이 있고 마디가 명료하다. 해독 효과와 고름을 빼내고 상처가 부은 것을 가라앉히는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “저령(猪)”은 구멍쟁이버섯과에 속하는 버섯의 균핵으로, 주로 습을 소변으로 배출시키고 간염을 방지하는데도 쓰인다.
본 발명에서 상기 “의이인(薏苡仁)”은 기를 내리고, 폐와 비장의 기운을 보하며, 설사를 그치게 하고, 열기를 식히며, 상처가 부은 것을 가라앉히는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “복령(茯)”은 소나무에 기생하는 균체로, 껍질은 복령피라 하고, 균체가 소나무 뿌리를 내부에 싸고 자란 것은 복신(茯神), 내부의 색이 흰 것은 백복령, 붉은 것은 적복령이라 하여 모두 약으로 쓴다. 약성은 평범하며 맛이 달고 덤덤하다. 이뇨작용이 및 건위작용이 있어 부종이 있거나 신장염, 방광염등에 효과가 좋고 기관지 장애나 위장염 등에 사용되는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “천련자(川子)”는 간에 기를 통하게 하며 진통작용이 있고, 소변이 잘 나오게 하며, 기생충을 없애는 효능이 있으며, 열을 발산시키며 담낭을 수축시켜 담즙을 배출하게 하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “목향(木香)”은 국화과에 속하는 다년생 초본식물로서, 위와 장의 운동을 정상화하고, 급성장염의 치료제로 쓰이거나 식욕을 돋우는데 사용되는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “후박(厚朴)”은 녹나무과에 속하는 상록교목의 껍질로서, 위한증을 치료하고, 체한 것을 내려가게 하며, 막혀 있는 담을 쳐 내리고, 천식을 가라앉히며, 눈과 귀를 밝게하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “연교(連翹)”는 해독작용을 하며 추출물은 염증 치료에도 효과가 있고, 기생충을 제거하며 뭉치거나 몰린 것을 헤치는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 “계내금(鷄內金)”은 위를 튼튼하게 하고 소화작용을 도우며, 열을 제거하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 다른 측면은, (a) 인진, 청호, 금전초 및 산치자가 2:2:1:1의 중량비로 혼합하고 분쇄한 후, 80내지 90℃에서 2 내지 3시간동안 열수 추출하여 제1혼합추출물을 수득하는 단계; (b) 대황, 황금, 토사자, 생맥아, 어성초, 저령, 의이인 및 복령을 3:1:1:2:1:1:2:1의 중량비로 혼합하고 분쇄한 후, 80% 에탄올로 50 내지 65℃에서 3~4시간동안 환류추출 하여 제2혼합추출물을 수득하는 단계; (c) 천련자, 목향, 후박, 연교 및 계내금을 혼합한 후, 100℃로 2시간 열수추출하여 제3혼합추출물을 수득하는 단계; 및 (d) 상기 제1혼합추출물 내지 제3혼합추출물을 4:2:1의 중량비로 혼합하고, 감암농축하는 단계;를 포함하는 간의 회복 및 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 조성물을 포함하는 간질환 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에서 상기 간질환은 급성간염, 만성간염, 지방간증, 간경화증, 간섬유화증, 간암, 약물에 의한 간염, 황달, 간경화 등일 수 있으며, 이에 제한하지 않고 간의 손상과 그로 인해 유발된 모든 비정상적인 건강상태를 모두 포함하는 것으로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명은 약학 조성물은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양, 즉 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양인 치료상 유효량으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학 조성물은 1~10,000㎎/㎏/day, 바람직하게는 1~200㎎/㎏/day의 양으로 투여할 수 있으며, 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수 회에 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 간 보호, 간질환 또는 합병증의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 조성물을 포함하는 간질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 예를 들어, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물이 음료로 제조될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드; 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐 등의 합성 감미제 등이 사용될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01~10 중량%, 바람직하게는 0.01~0.1 중량%로 포함되는 것이다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기의 첨가제 비율은 크게 제한되지는 않으나, 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1 중량% 범위 내로 포함되는 것이 좋다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 본 발명에 의한 약물로 인한 간손상 치료제는 천연물로부터 수득한 물질을 이용하기 때문에 부작용을 유발하지 않고, 간손상이 일어난 간을 보호하고 회복시킬 수 있어 약물로 인한 간손상을 효과적으로 다스릴 수 있다.
실시예들에 대한 이해를 돕기 위해 상세한 설명의 일부로 포함된, 첨부 도면은 다양한 실시예들을 제공하고, 상세한 설명과 함께 다양한 실시예들의 기술적 특징을 설명한다.
도 1은 본 발명 조성물이 세포독성을 나타내는지 간세포를 대상으로 세포독성 실험을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명 조성물이 in vitro에서 간세포 보호 효과를 보이는지 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명 조성물이 in vivo에서 실제로 효과를 나타내는지 동물실험한 결과를 나타낸 것이다
도 1은 본 발명 조성물이 세포독성을 나타내는지 간세포를 대상으로 세포독성 실험을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명 조성물이 in vitro에서 간세포 보호 효과를 보이는지 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명 조성물이 in vivo에서 실제로 효과를 나타내는지 동물실험한 결과를 나타낸 것이다
이하의 실시예들은 실시예들의 구성요소들과 특징들을 소정 형태로 결합한 것들이다. 각 구성요소 또는 특징은 별도의 명시적 언급이 없는 한 선택적인 것으로 고려될 수 있다. 각 구성요소 또는 특징은 다른 구성요소나 특징과 결합되지 않은 형태로 실시될 수 있다. 또한, 일부 구성요소들 및/또는 특징들을 결합하여 다양한 실시예들을 구성할 수도 있다. 다양한 실시예들에서 설명되는 동작들의 순서는 변경될 수 있다. 어느 실시예의 일부 구성이나 특징은 다른 실시예에 포함될 수 있고, 또는 다른 실시예의 대응하는 구성 또는 특징과 교체될 수 있다.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함(comprising 또는 including)"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다. 또한, 명세서에 기재된 "...부", "...기", "모듈" 등의 용어는 적어도 하나의 기능이나 동작을 처리하는 단위를 의미하며, 이는 하드웨어나 소프트웨어 또는 하드웨어 및 소프트웨어의 결합으로 구현될 수 있다. 또한, "일(a 또는 an)", "하나(one)", "그(the)" 및 유사 관련어는 다양한 실시예들을 기술하는 문맥에 있어서(특히, 이하의 청구항의 문맥에서) 본 명세서에 달리 지시되거나 문맥에 의해 분명하게 반박되지 않는 한, 단수 및 복수 모두를 포함하는 의미로 사용될 수 있다.
실시예 1. 간 손상 완화 및 개선용 조성물 제조
다음과 같은 단계를 거쳐 본 발명의 간 손상 완화 및 개선용 조성물을 제조하였다.
(a) 인진, 청호, 금전초 및 산치자가 2:2:1:1의 중량비로 혼합하고 분쇄한 후, 83℃에서 2.5시간동안 열수 추출하여 제1혼합추출물을 수득하는 단계; (b) 대황, 황금, 토사자, 생맥아, 어성초, 저령, 의이인 및 복령을 3:1:1:2:1:1:2:1의 중량비로 혼합하고 분쇄한 후, 80% 에탄올로 60℃에서 3시간동안 환류추출 하여 제2혼합추출물을 수득하는 단계; (c) 천련자, 목향, 후박, 연교 및 계내금을 혼합한 후, 100℃로 2시간 열수추출하여 제3혼합추출물을 수득하는 단계; 및 (d) 상기 제1혼합추출물 내지 제3혼합추출물을 4:2:1의 중량비로 혼합하고, 감암농축하는 단계를 거쳐, 본 발명 실시예 1의 간 손상 완화 및 개선용 조성물을 제조하였다.
비교예 1. 비율을 달리하여 제조한 조성물
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하되, 제1혼합추출물을 구성하는 4개의 약재가 모두 동일한 중량비(1:1:1:1)로 혼합하여 추출한 것을 사용하였고, 제1내지 제3혼합추출물의 혼합 비율을 5:2:1로 하여 제조하였다. 이는 간에 좋은 것으로 알려진 약재의 비율을 높이는 경우 당연하게 더 우수한 효과가 나타나는지를 확인하기 위함이다.
비교예 2. 추출 방법 달리한 조성물의 제조
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하되, 제1 내지 제3혼합추출물 모두 일반적인 탕약을 달이는 온도인 85~90도에서 4시간동안 열수추출한 것을 사용하는 점을 달리하였다.
비교예 3. 일부 약재를 생략한 조성물의 제조
간과 직접적인 연관이 없는 것으로 알려진 약재인 의이인, 복령, 목향 및 계내금을 제외하고, 해당 비율만큼 각 혼합추출물의 나머지 성분의 비율을 높여 제1 내지 제3혼합추출물의 비율은 똑같이 유지되도록 하고, 나머지는 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
실험예 1. 세포독성
본 발명 조성물이 세포독성을 나타내는지 우선적으로 확인하기 위하여, 간세포를 대상으로 in vitro 실험을 실시하였다.
본 실험에 사용한 세포주는 간암 세포인 HepG2(human hepatocellular carcinoma cell)를 사용하였고, MEM 배지에 10% FBS(feral bovine serum)와 1% 100 units/ml의 페니실린-스트레프로마이신(penicillin-strepromycin)이 함유된 배지를 사용하여, 37℃ 5% CO2 배양기에서 단일층(monolayer)으로 배양하여 준비하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 본 발명 실시예 1의 조성물을 각각 1, 5, 10, 25, 50 ug/ml로 처리하는 경우에 있어, 50ug/ml의 고농도에서도 95% 이상의 생존율을 보여 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.
실험예 2.
In vitro
에서의 간세포 보호 효과 확인
본 발명의 조성물이 실제로 간세포의 보호 효과를 가지는지 확인하기 위하여, 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 준비한 HepG2 세포에 본 발명 실시예 및 비교예의 조성물을 1, 10, 25ug/ml의 농도로 처리하고, 12시간 경과 후 3%의 에탄올과 비교예 및 실시예의 조성물을 같은 농도로 처리하였다. 24시간 경과 후 MTT-assay를 통해 세포 생존율을 계산하여 실제로 간세포의 보호 효과가 있는지를 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명 실시예 1의 조성물은 농도 의존적으로 우수한 간세포 보호 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 반면, 비교예 1 내지 3 모두 실시예 1과 비교하여 효과가 떨어졌으며, 특히 비교예 2 및 3의 경우에는 농도와 상관없이 거의 유사한 정도의 효과만을 보이는가 하면 오히려 생존율이 감소하는 경우도 발생하였다(비교예 2).
실험예 3.
In vivo
에서의 간 손상 완화 효과 확인
본 발명 조성물이 실제 in vivo에서도 간 손상 완화 내지 치료 효과를 보이는지 확인하기 위하여, 마우스를 이용한 실험을 진행하였다.
구체적으로, 300g내외의 Sprague-Dawley흰쥐 수컷을 실험에 사용하였다. 실험 동물은 2주 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 본 실험을 시작하였다. 실험기간 동안 명암주기 12시간 간격, 온도 25±2℃ 습도 55%로 실험실 환경을 유지하였다.
간 손상은 TAA(Thioacetamide) 용액 100mg/kg을 복강으로 주사하여 유발하였으며, 본 발명의 실시예 1의 조성물을 20, 50mg/kg의 양으로 투여한 경우에 간 손상 지표인 GOT(Glutamate-oxaloacetate transaminase) 및 GPT(Glutamate-pyruvate transaminase)의 변화를 분석하였다. 음성대조군은 실시예 1의 조성물 대신 생리식염수를 투여하였다.
총 일주일간 TAA는 3회 주사하였고, 실시예 1의 조성물 및 생리식염수는 매일 1회씩 경구 투여하였다. 이외에는 자유롭게 사육하였다.
일주일 경과 후 실험 동물을 질식시킨 후 복대동맥에서 혈액을 채취하고 혈청(GOT 및 GPT)을 분석하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 TAA를 투여한 음성대조군의 경우 두가지 지표가 모두 유의하게 증가하여 간손상이 일어났음을 확인하였다. 반면, 실시예 1의 조성물을 투여한 실험군은 그 투여 용량과 무관하게 모든 실험군에서 유의미한 효과를 확인하였다.
상술한 다양한 실시예들은 그 기술적 아이디어 및 필수적 특징을 벗어나지 않는 범위에서 다른 특정한 형태로 구체화될 수 있다. 따라서, 상기의 상세한 설명은 모든 면에서 제한적으로 해석되어서는 아니되고 예시적인 것으로 고려되어야 한다. 다양한 실시예들의 범위는 첨부된 청구항의 합리적 해석에 의해 결정되어야 하고, 다양한 실시예들의 등가적 범위 내에서의 모든 변경은 다양한 실시예들의 범위에 포함된다. 또한, 특허청구범위에서 명시적인 인용 관계가 있지 않은 청구항들을 결합하여 실시예를 구성하거나 출원 후의 보정에 의해 새로운 청구항으로 포함할 수 있다.
Claims (5)
- 인진, 청호, 금전초 및 산치자가 2:2:1:1의 중량비로 구성된 혼합물로부터 수득한 제1혼합추출물;
대황, 황금, 토사자, 생맥아, 어성초, 저령, 의이인 및 복령이 3:1:1:2:1:1:2:1의 중량비로 구성된 혼합물로부터 수득한 제2혼합추출물; 및
천련자, 목향, 후박, 연교 및 계내금으로 구성된 혼합물로부터 수득한 제3혼합추출물;이 혼합된 것인,
간 손상 치료 및 개선용 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 제1혼합추출물:제2혼합추출물:제3혼합추출물은 4:2:1의 중량비로 혼합된 것인,
간 손상 치료 및 개선용 조성물. - 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는,
간질환 예방 및 치료용 약학적 조성물. - 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는,
간질환 예방 및 개선용 식품 조성물.
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