KR102468908B1 - Cosmetic composition for Anti-oxidative or Anti-inflammatory comprising the Fermented extract Stems and Leaf of Watermelon - Google Patents
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Abstract
본 발명은 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 수박의 줄기 및 잎 추출물에 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 복합균주로 발효되어 수득된 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 의한 화장료 조성물은 천연 원료이며 세포 독성이 없어 피부에 안전한 뿐만 아니라, 천연 원료의 천연 발효를 통한 유효 성분의 극대화로 인한 항산화 또는 항염 효과가 우수한 장점이 있다. The present invention relates to a cosmetic composition for antioxidant or anti-inflammatory use containing fermented watermelon stem and leaf extracts as an active ingredient, and specifically, a combination of lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium, and Phellinus linteus mycelium in the stem and leaf extracts of watermelon. It relates to a cosmetic composition comprising a fermented product obtained by fermentation with a strain as an active ingredient. The cosmetic composition according to the present invention is a natural raw material and has no cytotoxicity, so it is safe for the skin, and has an excellent antioxidant or anti-inflammatory effect due to maximization of active ingredients through natural fermentation of natural raw materials.
Description
본 발명은 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition for antioxidant or anti-inflammatory comprising fermented watermelon stem and leaf extracts as an active ingredient.
피부는 체내 근육과 기관을 보호하고 외부로부터 침입하는 병원균으로부터 1차적으로 신체를 보호하는 기능을 가지고 있다. 그 외에도 체온 조절과 감각 기능, 단열 효과를 나타내나, 환경적 유전적으로 피부노화에 의해서 점점 얇아지고 쉽게 상처를 받도록 변하고, 자가치유력 및 탄력 감소, 항균기능 저하 등 본원의 기능들이 약해져 피부감염에도 취약해 진다. 이러한 피부 노화를 예방 또는 가꾸기 위한 방법으로 피부 기능을 회복 또는 관리해 줄 수 있는 항산화 효능 및 항염 효능, 주름개선 등의 효능이 있는 화장품 원료인 천연물, 식물추출물, 재생인자 등의 연구가 이루어져 화장품 원료 및 화장품 개발로 이루어지고 있다. 또한 화장품 원료의 천연 발효를 통한 유효 성분의 극대화 및 독성 성분은 제거되고, 기존 원료보다 항산화 성분 및 흡수력의 증가를 장점으로 들 수 있다.The skin has the function of protecting muscles and organs in the body and primarily protecting the body from pathogens invading from the outside. In addition, it exhibits temperature control, sensory function, and insulation effect, but becomes thinner and more easily damaged due to environmental and genetic skin aging, and its functions such as self-healing power and elasticity decrease and antibacterial function are weakened, making it vulnerable to skin infection. it gets done As a way to prevent or improve skin aging, research has been conducted on natural products, plant extracts, regenerative factors, etc., which are cosmetic raw materials that have antioxidant effects, anti-inflammatory effects, and anti-wrinkle effects that can restore or manage skin functions. Developing cosmetics. In addition, through natural fermentation of cosmetic raw materials, active ingredients are maximized, toxic ingredients are removed, and antioxidant ingredients and absorption capacity are increased compared to existing raw materials.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 항산화 또는 항염증 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 연구 노력한 결과, 수박 부산물인 수박 줄기와 잎의 추출물에 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 복합균주로 발효한 발효물에서 높은 항산화 또는 항염증 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다. Under this background, the present inventors have made research efforts to find natural products with fewer side effects while exhibiting antioxidant or anti-inflammatory effects. It was confirmed that water has a high antioxidant or anti-inflammatory effect and the present invention was completed.
본 발명의 목적은 천연물인 수박 부산물로부터 인체에 무해하고 항산화 또는 항염증 효과가 있는 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 제공하는 것이다. An object of the present invention is to provide an antioxidant or anti-inflammatory composition comprising, as an active ingredient, a fermented product of a watermelon stem and leaf extract, which is harmless to the human body and has an antioxidant or anti-inflammatory effect, from a watermelon by-product, which is a natural product.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 In order to achieve the above object, the present invention
수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다. Provided is an antioxidant or anti-inflammatory cosmetic composition comprising fermented watermelon stem and leaf extracts as an active ingredient.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물은 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하여 수득 될 수 있다.In one example of the present invention, the stem and leaf extract of the watermelon may be obtained by extracting by adding any one or a mixture of two or more selected from water or C1 to C4 lower alcohol as an extraction solvent.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 추출용매는 80 내지 120℃의 열수 일 수 있다. In one example of the present invention, the extraction solvent may be hot water of 80 to 120 ℃.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물을 복합 균주로 발효시켜 수득 될 수 있다. In one example of the present invention, the fermented product of the watermelon stem and leaf extract may be obtained by fermenting the watermelon stem and leaf extract with a complex strain.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 복합 균주는 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상 일 수 있다. In one example of the present invention, the complex strain may be one or two or more selected from the group consisting of lactic acid bacteria, Ganoderma lucidum mycelium, and Phellinus linteus mycelium.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 발효는 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액을 상기 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되어 제조된 것일 수 있다. In one example of the present invention, the fermentation is carried out by inoculating the culture solution of the lactic acid bacteria, Ganoderma lucidum mycelium and Phellinus phellitus mycelium to the extract of the stem and leaf of watermelon to inoculate the extract to 24 to 48 hours at 140 to 200 rpm at 30 to 37 ° C. It may be prepared by performing during.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물 또는 상기 추출물의 발효물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대해서 0.01 내지 5 중량%로 포함되는 것일 수 있다. In one example of the present invention, the stem and leaf extract of the watermelon or the fermented product of the extract may be included in 0.01 to 5% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 수분크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 마스크팩 및 바디클렌저로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다. In one example of the present invention, the cosmetic composition is skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, moisture cream, nutrient cream, sunscreen cream, moisture cream, hand cream, It may be any one formulation selected from the group consisting of foundation, essence, nutritional essence, pack, soap, cleansing foam, mask pack, and body cleanser.
본 발명은 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법으로서, The present invention is a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics,
a) 세척한 수박 부산물을 동결 건조하여 분말화 하는 단계; a) freeze-drying the washed watermelon by-product to make powder;
b) 상기 a)의 분말화된 상기 수박 부산물을 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하는 단계; 및b) extracting the powdered watermelon by-product of a) by adding water or any one or a mixture of two or more selected from C1 to C4 lower alcohols as an extraction solvent; and
c) 상기 b) 단계의 추출물을 복합 균주로 발효시키는 단계;c) fermenting the extract of step b) into a complex strain;
를 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법을 제공한다. It provides a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics comprising a.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 c) 단계의 발효는 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액을 상기 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되는 것 일 수 있다. In one example of the present invention, the fermentation in step c) is performed by inoculating the culture solution of the lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium, and the mycelium of the Phellinus Phellinus Phellinus in the stem and leaf extracts of the watermelon to inoculate the extract at 30 to 37 ° C. and 140 to 200 rpm. It may be performed for 24 to 48 hours.
본 발명은 수박의 줄기 및 잎 추출물에 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 복합균주로 발효되어 수득된 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로 천연 발효를 통한 유효 성분의 극대화로 인해 항산화 또는 항염 효과가 우수한 장점이 있다. 또한 천연 원료이며 세포 독성이 없어 피부에 안전하다. The present invention relates to a cosmetic composition comprising, as an active ingredient, a fermented product obtained by fermenting a stem and leaf extract of watermelon with a complex strain of lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium, and mycelium of Phellinus Phellinus Phellinus Phellinus, as an active ingredient. It has excellent antioxidant or anti-inflammatory effects. In addition, it is a natural raw material and is safe for the skin as it is non-cytotoxic.
도 1은 실시예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM) 및 비교예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물(WM)의 시료를 DPPH radical scavenging로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM) 및 비교예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물(WM)의 시료를 ABTS radical scavenging로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실시예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM) 및 비교예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 시료(WM)를 DCFH-DA법을 이용한 Reactive oxygen species (ROS) 생성량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 실시예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM) 및 비교예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 시료(WM)에 대한 Nitric oxide (NO) 생성량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 실시예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM) 및 비교예 1의 수박의 줄기 및 잎 추출물(WM)의 시료에 대한 사이토카인 TNF- α생성량 측정 결과를 나타낸 것이다. 1 shows the results of measuring samples of fermented watermelon stem and leaf extracts (PWM) of Example 1 and watermelon stem and leaf extracts (WM) of Comparative Example 1 by DPPH radical scavenging.
Figure 2 shows the results of measuring the fermented product (PWM) of the stem and leaf extract of watermelon of Example 1 and the stem and leaf extract (WM) of watermelon of Comparative Example 1 by ABTS radical scavenging.
3 shows the amount of reactive oxygen species (ROS) produced using the DCFH-DA method for fermented watermelon stem and leaf extracts (PWM) of Example 1 and samples (WM) of watermelon stem and leaf extracts of Comparative Example 1 It shows the measured result.
Figure 4 shows the results of measuring the amount of nitric oxide (NO) produced for the fermented product (PWM) of the stem and leaf extract of watermelon of Example 1 and the sample (WM) of the stem and leaf extract of watermelon of Comparative Example 1 .
Figure 5 shows the results of measurement of the cytokine TNF-α production for samples of the fermented watermelon stem and leaf extract (PWM) of Example 1 and the watermelon stem and leaf extract (WM) of Comparative Example 1.
이하에서 본 발명에 대해 내용을 구체적으로 설명한다. 이하, 첨부된 도면들을 포함한 제조예, 실시예 또는 시험예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 다만 하기 제조예, 실시예 또는 시험예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 하나의 참조일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니며, 여러 형태로 구현될 수 있다. Hereinafter, the present invention will be described in detail. Hereinafter, the present invention will be described in more detail through manufacturing examples, examples or test examples including the accompanying drawings. However, the following preparation examples, examples, or test examples are only one reference for explaining the present invention in detail, but the present invention is not limited thereto, and may be implemented in various forms.
또한 달리 정의되지 않는 한, 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업자 중 하나에 의해 일반적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에서 설명에 사용되는 용어는 단지 특정 실시예를 효과적으로 기술하기 위함이고 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. Also, unless defined otherwise, all technical and scientific terms have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Terms used in the description in the present invention are merely to effectively describe specific embodiments and are not intended to limit the present invention.
또한 명세서 및 첨부된 특허 청구범위에서 사용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다. Also, the singular forms used in the specification and appended claims may be intended to include the plural forms as well, unless the context dictates otherwise.
또한 본 발명에서 사용되는 용어의 단수 형태는 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 해석될 수 있다. In addition, singular forms of terms used in the present invention may be interpreted as including plural forms unless otherwise indicated.
본 발명에서, '유효성분으로 포함하는'은, 화장료 조성물로써 항산화 또는 항염증에 따른 개선 효과를 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 포함하는 것을 의미할 수도 있다. In the present invention, 'contained as an active ingredient' may mean that the cosmetic composition includes an effective amount to the extent capable of exhibiting an improvement effect according to antioxidant or anti-inflammatory properties.
또한 본 발명에서 ***는 그룹간의 비교를 one-way analysis of variance (ANOVA) 방법을 이용하고, student's t-test를 사용하여 통계적 유의성을 검증하였을 때, p<0.001, 신뢰도 99.9%로 유의적으로 효과가 있는 것을 의미한다. 또한 본 발명에서 **는 그룹간의 비교를 one-way analysis of variance(ANOVA) 방법을 이용하고, student's t-test를 사용하여 통계적 유의성을 검증하였을 때, p<0.01, 신뢰도 99%로 유의적으로 효과가 있는 것을 의미한다. 또한 본 발명에서 *는 그룹간의 비교를 one-way analysis of variance(ANOVA) 방법을 이용하고, student's t-test를 사용하여 통계적 유의성을 검증하였을 때, p<0.05, 신뢰도 95%로 유의적으로 효과가 있는 것을 의미한다.In addition, in the present invention, *** is significant with a one-way analysis of variance (ANOVA) method for comparison between groups and when statistical significance is verified using a student's t-test, p <0.001, reliability 99.9% means that it works. In addition, in the present invention, ** is significant with a one-way analysis of variance (ANOVA) method for comparison between groups and when statistical significance is verified using a student's t-test, p<0.01, reliability 99% means it works In addition, in the present invention, * is significantly effective with p<0.05, reliability of 95% when the one-way analysis of variance (ANOVA) method is used for comparison between groups and statistical significance is verified using the student's t-test means there is
또한 본 발명에서 특별한 언급 없이 불분명하게 사용된 %의 단위는 중량%를 의미한다.In addition, in the present invention, the unit of % used unambiguously without particular notice means weight %.
본 발명은 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다. The present invention provides a cosmetic composition for antioxidant or anti-inflammatory comprising fermented watermelon stem and leaf extracts as an active ingredient.
상기 수박(Watermelon, Citrullus lanatus)은 박목과의 쌍떡잎 식물로 체내에 흡수가 잘되는 대표적인 여름과일이다. 수박에는 시트룰린(citrulline)이 함유되어 있어 이뇨작용이 있고, 칼륨의 함량이 높아 나트륨 배설에 효과적이라고 알려져 있다. 또한 여러 연구를 통해 수박 과육에서는 항균, 미백 및 항염 활성이 보고되어 있으며, 수박 외피에서는 미백, 항산화 활성 및 수박 씨에서는 항균, 미백, 항염 활성이 보고되어 있다. 또한 수박 부산물인 수박의 줄기와 잎은 알칼로이드(Alkaloids), 플라보노이드(flavonoid), 테르펜(Terpene), 스테로이드(steroid), 타닌(tannin), 사포닌(saponin) 및 페놀(phenol)의 성분과 항균 효과 밖에 보고되어 있지 않다. The watermelon ( Citrullus lanatus ) is a dicotyledonous plant of the family Melon and is a representative summer fruit that is easily absorbed into the body. Watermelon contains citrulline, which has a diuretic effect, and is known to be effective in sodium excretion due to its high potassium content. In addition, antibacterial, whitening, and anti-inflammatory activities have been reported in watermelon flesh through several studies, and antibacterial, whitening, and anti-inflammatory activities have been reported in watermelon skin, whitening, antioxidant activity, and watermelon seeds. In addition, the stems and leaves of watermelon, which are watermelon by-products, contain only components of alkaloids, flavonoids, terpenes, steroids, tannins, saponins, and phenols, as well as antibacterial effects. not reported
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물은 수박 열매 외의 수박 부산물인 수박의 줄기와 잎의 추출물을 의미하며, 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물을 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. 상기 추출은 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하여 수득 될 수 있으며, 바람직하게는 물을 추출용매로 가하여 추출하여 수득 될 수 있다.The watermelon stem and leaf extract refers to an extract of watermelon stem and leaf, which is a watermelon by-product other than watermelon fruit, and includes all forms formulated using the watermelon stem and leaf extract. The extraction may be obtained by extracting by adding water or any one or a mixture of two or more selected from C1 to C4 lower alcohols as an extraction solvent, and preferably may be obtained by extraction by adding water as an extraction solvent.
상기 추출용매는 80 내지 120℃의 열수 일 수 있으나, 바람직하게는 80 내지 100℃ 의 열수 일 수 있다. The extraction solvent may be hot water of 80 to 120 ° C, but may be preferably hot water of 80 to 100 ° C.
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물을 복합 균주로 발효시켜 수득된 것을 의미한다. 상기 복합 균주는 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상 일 수 있다. The fermented product of the watermelon stem and leaf extract means obtained by fermenting the watermelon stem and leaf extract with a complex strain. The complex strain may be one or two or more selected from the group consisting of lactic acid bacteria, Ganoderma lucidum mycelium and Phellinus Phellinus mycelium.
상기 유산균은 특별한 제한이 없이, 예를 들면, 락토바실러스 속 유산균(Lactobacillus sp.), 스트렙토코쿠스 속 유산균(Streptococcus sp.), 페디오코쿠스 속 유산균(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속 유산균(Leuconostoc sp.) 및 비피도박테리움 속 유산균(Bifidobacterium sp.)이 모두 사용될 수 있다. 구체적으로 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노우수스(Lactobacillus rhamnosus), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 세레비세(Pediococcus cerevisiae), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 레코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 레코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides), 비피도박테 리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum) 등이 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 유산균이 상기 예시된 유산균에 한정되는 것은 아니며, 유산균 배양 배지 역시 각각의 유산균에 맞게 MRS(Man-RogosaSharpe), 락토오스, M17 및 APT 배지(Asparagine Enrichment Broth)로 부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 실시예에서는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 람노우수스(Lactobacillus rhamnosus)를 사용하였다. The lactic acid bacteria are not particularly limited, for example, Lactobacillus sp. , Streptococcus lactic acid bacteria ( Streptococcus sp. ), Pediococcus lactic acid bacteria ( Pediococcus sp. ), Leuconostoc lactic acid bacteria ( Leuconostoc sp. ) and Bifidobacterium lactic acid bacteria ( Bifidobacterium sp .) may all be used. Specifically, Lactobacillus plantarum , Lactobacillus delbrueckii , Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus casei, Lactobacillus brevis , Lactobacillus asia Dophilus ( Lactobacillus acidophilus ), Lactobacillus rhamnosus ( Lactobacillus rhamnosus ), Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceus ), Pediococcus cerevisiae ( Pediococcus cerevisiae ), Lactococcus lactis ( Lactococcus lactis ), Les Conostoc citreum ( Leuconostoc citreum ), Leconostoc mesenteroids ( Leuconostoc mesenteroides ), Bifidobacterium bifidum ( Bifidobacterium bifidum ) and the like may be used. The lactic acid bacteria that can be used are not limited to the lactic acid bacteria exemplified above, and the lactic acid bacteria culture medium may also be selected from MRS (Man-Rogosa Sharpe), lactose, M17, and APT medium (Asparagine Enrichment Broth) according to each lactic acid bacteria, but is limited thereto. it is not going to be In the examples, Lactobacillus plantarum , Lactobacillus casei and Lactobacillus rhamnosus were used.
상기 영지버섯균사체 배양액은 상기 영지버섯균사체를 25 내지 37℃에서 3 내지 10일간 배양하여 제조된 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. The ganoderma lucidum mycelium culture solution may be prepared by culturing the ganoderma lucidum mycelium at 25 to 37 ° C for 3 to 10 days, but is not limited thereto.
상기 상황버섯균사체 배양액는 상기 영지버섯균사체를 25 내지 37℃에서 3 내지 10일간 배양하여 제조된 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.The situation mushroom mycelium culture solution may be prepared by culturing the ganoderma lucidum mycelium at 25 to 37 ° C for 3 to 10 days, but is not limited thereto.
상기 발효는 통상적인 방법으로 수행될 수 있으나, 상기 바람직하게는 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액을 상기 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되어 제조된 것일 수 있다. The fermentation may be carried out in a conventional manner, but preferably, the extract of the stem and leaf of watermelon is inoculated with the culture solution of the lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium, and the mycelium of the Phellinus Phellinus Linteus, and the extract is inoculated at 30 to 37 ° C. and 140 to 200 rpm. It may be prepared by performing for 24 to 48 hours.
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대해서 0.01 내지 5 중량%로 포함되는 것일 수 있으나 더욱 구체적으로는 0.3 내지 5 중량% 포함할 수 있으나, 제조되는 화장료 조성물의 제형 및 화장료 조성 물의 사용 목적 등에 따라 달라질 수 있다. The fermented product of the stem and leaf extract of the watermelon may be included in 0.01 to 5% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, but more specifically, 0.3 to 5% by weight, but the formulation of the cosmetic composition to be prepared And it may vary depending on the purpose of use of the cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 수분크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 마스크팩 및 바디클렌저로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The cosmetic composition is skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, moisture cream, nutrient cream, sunscreen cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, nutrient essence, pack , It may be any one formulation selected from the group consisting of soap, cleansing foam, mask pack and body cleanser, but is not limited thereto.
본 발명은 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법으로서,The present invention is a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics,
a) 세척한 수박 부산물을 동결 건조하여 분말화 하는 단계; a) freeze-drying the washed watermelon by-product to make powder;
b) 상기 a)의 분말화된 상기 수박 부산물을 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하는 단계; 및b) extracting the powdered watermelon by-product of a) by adding water or any one or a mixture of two or more selected from C1 to C4 lower alcohols as an extraction solvent; and
c) 상기 b) 단계의 추출물을 복합 균주로 발효시키는 단계;c) fermenting the extract of step b) into a complex strain;
를 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법을 제공한다. It provides a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics comprising a.
상기 제조방법에 있어 상기 c) 단계의 발효는 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액을 상기 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되는 것 일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. In the above manufacturing method, the fermentation in step c) is carried out by inoculating the culture solution of the lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium and the mycelium of the Phellinus Phellinus Phellinus in the stem and leaf extracts of the watermelon to inoculate the extracts at 30 to 37 ° C. at 140 to 200 rpm for 24 hours to 24 hours. It may be performed for 48 hours, but is not limited thereto.
상기 제조방법에 있어서, 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액은 전체 부피에 대하여 각각의 배양액을 1.0~4.0(v/v)로 접종할 수 있으며, 바람직하게는 바람직하게는 2.0~4.0%(v/v)로 접종할 수 있다. 상기 접종범위 내에서는 발효가 더욱 잘 되어, 발효에 의한 상승효과가 우수할 수 있다. In the above production method, the culture solution of the lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium and mycelium of Phellinus Phellinus Phellinus may be inoculated with each culture solution at 1.0 to 4.0 (v / v), preferably 2.0 to 4.0 It can be inoculated as % (v/v). Fermentation is better within the inoculation range, and the synergistic effect by fermentation may be excellent.
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법으로 제조된 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 피부의 항산화 또는 항염증용 효과가 우수한 장점이 있다. The fermented product of the stem and leaf extract of watermelon prepared by the method for preparing the fermented product of the stem and leaf extract of watermelon has an excellent antioxidant or anti-inflammatory effect on the skin.
이하, 본 발명을 제조예, 실시예 및 시험예를 통하여 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않으며, 본 발명의 사상과 범위 내에서 여러 가지 변형 또는 수정할 수 있음은 당업자에게 자명한 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through preparation examples, examples and test examples. However, these examples are intended to illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples, and various changes or modifications can be made to those skilled in the art within the spirit and scope of the present invention. It is self-evident.
제조예 1: 유산균 배양액 제조 Preparation Example 1: Preparation of lactic acid bacteria culture solution
락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei) 및 락토바실러스 람노우수스(Lactobacillus rhamnosus)를 멸균된 250 ml의 삼각플라스크에 100 ml의 멸균된 MRS 배지 접종하고, 37℃에서 24시간 동안 혐기성 조건에서 진탕 배양하였다. Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ), Lactobacillus casei ( Lactobacillus casei ) and Lactobacillus rhamnosus ( Lactobacillus rhamnosus ) were inoculated with 100 ml of sterilized MRS medium in a sterilized 250 ml Erlenmeyer flask and incubated at 37 ° C for 24 It was cultured with shaking under anaerobic conditions for a period of time.
제조예 2: 영지버섯 균사체 배양액 제조 Preparation Example 2: Preparation of ganoderma lucidum mycelium culture solution
영지버섯 균사체를 Potato Dextrose Agar(PDA, DIFCO, USA) 평판배지에 계대 배양하여 사용하였다. 그 다음 상기 균사체를 PDA 배지에서 30℃정도의 온도에서 10일간 배양하였다. 얻어진 상기 영지버섯 균사체를 접종용 칼로 잘라 250 ml의 멸균된 삼각플라스크에 100 ml 의 멸균된 Potato Dextrose Broth (PDB, DIFCO, USA) 배지에 접종하여 28℃에서 7일간 140 rpm으로 5일간 진탕배양 하였다.Ganoderma lucidum mycelium was subcultured and used on Potato Dextrose Agar (PDA, DIFCO, USA) plate medium. Then, the mycelium was cultured for 10 days at a temperature of about 30 ℃ in PDA medium. The obtained Ganoderma lucidum mycelium was cut with an inoculation knife, inoculated into 100 ml of sterilized Potato Dextrose Broth (PDB, DIFCO, USA) medium in a 250 ml sterilized Erlenmeyer flask, and cultured with shaking at 28 ° C for 7 days and 140 rpm for 5 days. .
제조예 3: 상황버섯 균사체 배양액 제조 Preparation Example 3: Manufacturing Phellinus Phellinus mycelium culture solution
상황버섯 균사체를 Potato Dextrose Agar(PDA, DIFCO, USA) 평판배지에 계대 배양하여 사용하였다. 그 다음 상기 균사체를 PDA 배지에서 30℃정도의 온도에서 10일간 배양하였다. 얻어진 상기 상황버섯 균사체를 접종용 칼로 잘라 250 ml의 멸균된 삼각플라스크에 100 ml 의 멸균된 Potato Dextrose Broth (PDB, DIFCO, USA) 배지에 접종하여 28℃에서 7일간 140 rpm으로 5일간 진탕 배양 하였다.Phellinus Phellinus mycelium was subcultured and used on Potato Dextrose Agar (PDA, DIFCO, USA) plate medium. Then, the mycelium was cultured for 10 days at a temperature of about 30 ℃ in PDA medium. The obtained Phellinus Phellinus mycelium was cut with an inoculation knife, inoculated into 100 ml of sterilized Potato Dextrose Broth (PDB, DIFCO, USA) medium in a 250 ml sterilized Erlenmeyer flask, and cultured with shaking at 28 ° C for 7 days and 140 rpm for 5 days. .
실시예 1: 수박 줄기 및 잎 추출물의 발효물(PWM)Example 1: Fermentation product of watermelon stem and leaf extract (PWM)
수박 부산물인 수박 줄기와 잎을 세척 한 후 멸균 하였다. 그 다음 동결건조 한 후 분말하여 50g을 500ml의 물을 가하여 90℃에서 6시간 열수 추출하였다. 그 다음 여과하여 수박의 줄기 및 잎 열수 추출물을 수득하였다. 그 다음, 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물을 상기 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체의 배양액은 전체 부피에 대하여 각각의 배양액을 3.0%(v/v)로 상기 추출물에 접종 하고 30℃에서 24시간 동안 200rpm에서 진탕 배양함으로써 발효하였다. 발효가 완료되면, 85 ℃에서 1시간 동안 가열하여 반응을 종료시켰다. 수득된 반응용액을 여과하여 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물을 수득하였다. Watermelon stems and leaves, which are watermelon by-products, were washed and sterilized. Then, after lyophilization, powder was added to 50 g of 500 ml of water, followed by hot water extraction at 90 ° C. for 6 hours. It was then filtered to obtain hot-water extracts of watermelon stems and leaves. Then, the stem and leaf extracts of the watermelon were inoculated into the culture solution of the lactic acid bacteria, ganoderma lucidum mycelium, and the mycelium of the Phellinus Phellinus Phellinus Phellinus Phellinus Phellinus, and each culture solution was inoculated into the extract at 3.0% (v / v) with respect to the total volume, and incubated at 30 ° C for 24 hours. Fermented by shaking culture at 200 rpm during. Upon completion of fermentation, the reaction was terminated by heating at 85 °C for 1 hour. The obtained reaction solution was filtered to obtain fermented watermelon stem and leaf extracts.
비교예 1 : 수박 줄기 및 잎 추출물(WM)Comparative Example 1: Watermelon stem and leaf extract (WM)
수박 부산물인 수박 줄기와 잎을 세척 한 후 멸균 하였다. 그 다음 동결건조 한 후 분말하여 50g을 500ml의 물을 가하여 90℃에서 6시간 열수 추출하였다. 그 다음 여과하여 수박의 줄기 및 잎 열수 추출물을 수득하였다. Watermelon stems and leaves, which are watermelon by-products, were washed and sterilized. Then, after lyophilization, powder was added to 50 g of 500 ml of water, followed by hot water extraction at 90 ° C. for 6 hours. It was then filtered to obtain hot-water extracts of watermelon stems and leaves.
시험예 1: 세포 독성 측정 Test Example 1: Measurement of cytotoxicity
동결된 RAW 264.7 세포를 50 ㎖ 튜브에 옮기고 PBS 9㎖을 넣어 세포를 부유시킨 뒤 1,200 rpm에서 5분간 원심분리 하여 상층액을 제거하였다. 세포는 10% fetal bovine serum(FBS)와 1% penicillin/streptomycin으로 조성된 DMEM 배지 1 ㎖을 넣어 부유시켜 세포 배양기(37℃, 5% CO2)에서 배양하였다. 계대배양 횟수는 5회 이상으로 하였고, 시료들을 처리하기 전에 24시간을 적응시켰다.The frozen RAW 264.7 cells were transferred to a 50 ml tube, 9 ml of PBS was added to suspend the cells, and the supernatant was removed by centrifugation at 1,200 rpm for 5 minutes. The cells were suspended in 1 ml of DMEM medium composed of 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin/streptomycin, and cultured in a cell incubator (37°C, 5% CO 2 ). The number of subcultures was 5 or more, and the samples were allowed to acclimate for 24 hours before processing.
실험이 가능한 농도 선택을 위해 세포 독성 측정을 다음과 같이 진행하였다. RAW 264.7 세포를 96 well plate에 1.5×105 cells/well로 분주하여 세포 배양기(37℃, 5% CO2)에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 새로운 배양액으로 교체하였으며, 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 각각 50, 100, 200 (㎍/㎖) 농도로 처리한 후, 다시 24시간 동안 세포 배양기에서 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 세포 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 450㎚에서 흡광도를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 또한 상기 대조군은 세포 배양액만 처리한 시험군이다. In order to select a concentration that can be tested, cytotoxicity was measured as follows. RAW 264.7 cells were dispensed in a 96 well plate at 1.5×10 5 cells/well and cultured for 24 hours in a cell incubator (37° C., 5% CO 2 ). After culturing, it was replaced with a new culture medium, and the PWM sample of Example 1 and the WM sample of Comparative Example 1 were treated at concentrations of 50, 100, and 200 (μg/ml), respectively, and then cultured in a cell incubator for 24 hours. After incubation, 10 μl of WST solution was added and reacted for 30 minutes in a cell incubator (37° C., 5% CO 2 ). After the reaction, absorbance was measured at 450 nm, and cell viability for the control group was expressed as a percentage. In addition, the control group is a test group treated with only the cell culture medium.
RAW 264.7 세포를 통해 실시예 1의 PWM 및 비교예 1의 WM을 세포 독성을 측정한 결과 하기 표 1과 같이 각 농도에서 세포 생존율이 100% 이상으로 확인되어, 세포독성이 없는 것으로 나타났다.As a result of measuring the cytotoxicity of PWM of Example 1 and WM of Comparative Example 1 through RAW 264.7 cells, cell viability was confirmed to be 100% or more at each concentration as shown in Table 1 below, indicating no cytotoxicity.
시험예 2 : 항산화 효능 측정Test Example 2: Measurement of antioxidant efficacy
시험예 2-1 : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging 측정Test Example 2-1: Measurement of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging
실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 25, 50, 100, 200 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석한 용액 100 ㎕와 에탄올에 용해시킨 0.2 mM의 DPPH 용액 150 ㎕를 혼합하여 세포 배양기(37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시킨 후 517 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 대조군에 증류수를 넣었고 DPPH 용액의 대조군으로써는 에탄올을 넣어 보정값을 얻은 후 DPPH 자유라디칼 소거율(%)을 ((대조군의 흡광도-시료 첨가군의 흡광도)/대조군의 흡광도)x100 식에 따라 계산하여 백분율로 나타내었다. 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 DPPH radical scavenging로 측정한 결과는 표 2 및 도 1과 같다. 실시예1의 PWM 시료 시험군에서 농도 의존적으로 효능이 증가하였다. 또한 DPPH radical scavenging로 측정한 결과에 있어서, 비교예 1의 WM 시료 시험군의 IC50(Half maximal inhibitory concentration)이 101.12ug/ml인 반면, 실시예 1의 PWM 시료 시험군의 IC50이 45.41ug/ml로 확인되어 실시예 1의 PWM 시료의 시험군의 항산화 효과가 비교예 1의 WM 시료 시험군 보다 2배 이상 더 우수함을 확인하였다. 100 μl of a solution diluted to a concentration of 25, 50, 100, or 200 (μg/ml) of the PWM sample of Example 1 and the WM sample of Comparative Example 1 was mixed with 150 μl of a 0.2 mM DPPH solution dissolved in ethanol. After reacting for 30 minutes in a cell incubator (37°C, 5% CO 2 ), absorbance was measured at 517 nm. At this time, distilled water was added to the control group and ethanol was added as a control group of the DPPH solution to obtain a correction value, and then the DPPH free radical scavenging rate (%) was expressed in the formula ((absorbance of the control group-absorbance of the group added to the sample)/absorbance of the control group) x 100 It was calculated accordingly and expressed as a percentage. The results of measuring the PWM samples of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 by DPPH radical scavenging are shown in Table 2 and FIG. 1. The efficacy increased in a concentration-dependent manner in the PWM sample test group of Example 1. In addition, in the results measured by DPPH radical scavenging, the half maximal inhibitory concentration (IC50) of the WM sample test group of Comparative Example 1 was 101.12ug/ml, whereas the IC50 of the PWM sample test group of Example 1 was 45.41ug/ml. It was confirmed that the antioxidant effect of the PWM sample test group of Example 1 was more than twice as good as that of the WM sample test group of Comparative Example 1.
시험예 2-2 : 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) radical scavenging 측정 Test Example 2-2: Measurement of 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) radical scavenging
실시예 1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 25, 50, 100, 200 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석한 용액 5㎕와 7.4mM ABTS(2,2-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))와 2.6 mM potassium persulphate를 제조한 후, 암소에 하루 동안 방치하여 양이온(ABTS+)을 형성시킨 다음 732 ㎚에서 흡광도를 측정하여 흡광도 값이 1.5 이하가 나오도록 희석한 ABTS+ 용액 95 ㎕를 혼합하여 실온에서 10분간 반응시킨 후, 732 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 대조군에 증류수를 넣었으며, 대조군에 대한 ABTS 라디칼 소거율(%)을 ((대조군의 흡광도-시료 첨가군의 흡광도)/ 대조군의 흡광도))x100 의 식에 따라 계산하여 백분율로 나타내었다. The PWM of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 were diluted to a concentration of 25, 50, 100, and 200 (μg/ml), and 5 μl of a solution and 7.4 mM ABTS (2,2-azino-bis-( After preparing 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) and 2.6 mM potassium persulphate, leave it in the dark for a day to form positive ions (ABTS+), then measure the absorbance at 732 nm and dilute it so that the absorbance value is less than 1.5. After mixing 95 μl of one ABTS+ solution and reacting at room temperature for 10 minutes, absorbance was measured at 732 nm. At this time, distilled water was added to the control group, and the ABTS radical scavenging rate (%) for the control group was calculated according to the formula ((absorbance of the control group-absorbance of the sample-added group)/absorbance of the control group))x100 and expressed as a percentage.
실시예 1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 ABTS radical scavenging로 측정한 결과는 하기 표 3 및 도 2와 같다. 실시예 1의 PWM의 시료에서 농도 의존적으로 효능이 증가하였다.The results of measuring the PWM samples of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 by ABTS radical scavenging are shown in Table 3 and FIG. 2 below. The efficacy increased in a concentration-dependent manner in the sample of PWM of Example 1.
시험예 2-3 : DCFH-DA법을 이용한 Reactive oxygen species (ROS) 생성량 측정Test Example 2-3: Measurement of reactive oxygen species (ROS) production using DCFH-DA method
RAW 264.7 세포를 12 well plate에 2×105 cells/well로 분주하여 세포 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 새로운 배양액으로 교체하였으며, WM와 PWM 시료는 50, 100, 200(㎍/㎖)의 농도에 LPS를 1 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후, 다시 24시간 동안 세포 배양기에서 배양하였다. 이후, 1,200rpm에서 5분간 원심 분리하여 모은 세포를 차가운 PBS로 2회 세척하고 DCFH-DA를 20 μM이 되도록 첨가하여 15분 동안 세포 배양기에서 염색시켰다. 염색 후 차가운 PBS를 넣어 1,200 rpm에서 5분간 원심분리 한 다음 상청액을 제거하고 다시 PBS 400㎕를 부유시켜 유세포 분석기(flow cytometry)를 이용하여 형광강도의 세기에 따른 변화를 측정하여 대조군에 대한 ROS 생성량을 백분율로 나타내었다.RAW 264.7 cells were dispensed in a 12 well plate at 2×10 5 cells/well and cultured for 24 hours in a cell incubator (37° C., 5% CO 2 ). After culturing, it was replaced with a new culture medium, and the WM and PWM samples were treated with LPS at a concentration of 50, 100, and 200 (μg/ml) at a concentration of 1 μg/ml, and then cultured in a cell incubator for 24 hours. Thereafter, the collected cells were centrifuged at 1,200 rpm for 5 minutes, washed twice with cold PBS, and DCFH-DA was added to a concentration of 20 µM and stained in a cell incubator for 15 minutes. After staining, cold PBS was added and centrifuged at 1,200 rpm for 5 minutes, then the supernatant was removed, and 400 μl of PBS was suspended again to measure the change according to the intensity of fluorescence intensity using flow cytometry to measure the ROS generation amount for the control group was expressed as a percentage.
RAW 264.7 세포를 통해 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 ROS 생성량을 측정한 결과는 하기 표 4와 도3과 같다. 하기 표 4와 도 3에서 정상군은 세포에 세포 배양액만 처리한 군이며, 대조군은 LPS를 1 ㎍/㎖만 처리한 시험군이다. 하기 표 4와 도 3와 같이 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료의 시험군은 농도 의존적으로 유의성 있는 감소를 나타내었다. 또한 실시예1의 PWM 시료의 시험군에서 대조군 및 비교예 1의 WM 시료 시험군 보다 ROS 생성량이 100ug/ml 및 200ug/ml에서 신뢰도 95% 또는 신뢰도 99%로 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다. The results of measuring the amount of ROS generated in the PWM of Example 1 and the WM sample of Comparative Example 1 through RAW 264.7 cells are shown in Table 4 and FIG. 3 below. In Table 4 and FIG. 3, the normal group is a group treated only with cell culture medium, and the control group is a test group treated with only 1 μg/ml of LPS. As shown in Table 4 and FIG. 3, the test groups of the PWM samples of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 showed a significant decrease in a concentration-dependent manner. In addition, it was confirmed that ROS production in the test group of the PWM sample of Example 1 was significantly reduced with a reliability of 95% or 99% at 100 ug / ml and 200 ug / ml, compared to the control group and the WM sample test group of Comparative Example 1.
시험예 3 : 항염증 효능 측정Test Example 3: Measurement of anti-inflammatory efficacy
시험예 3-1: Nitric oxide (NO) 생성량 측정Experimental Example 3-1: Nitric oxide (NO) production measurement
RAW 264.7 세포를 96 well plate에 1.5×105 cells/well로 분주하여 세포 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 새로운 배양액으로 교체하고 실시예 1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 항산화 효능 측정에서 효과가 좋았던 100 및 200 (㎍/㎖)의 농도에 LPS를 1 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후, 다시 24시간 동안 세포 배양기에서 배양하였다. 이후, Nitric oxide assay kit에 구성된 N1 buffer 및 N2 buffer를 10분 단위로 순차적으로 50㎕씩 첨가하고 10분간 반응시켜 540 ㎚에서 흡광도를 측정하여 대조군에 대한 생성량을 백분율로 표시하였다. RAW 264.7 cells were dispensed in a 96 well plate at 1.5×10 5 cells/well and cultured for 24 hours in a cell incubator (37° C., 5% CO 2 ). After incubation, the culture medium was replaced with a new culture medium, and the PWM of Example 1 and the WM sample of Comparative Example 1 were treated with LPS at a concentration of 1 μg/ml at concentrations of 100 and 200 (μg/ml), which were effective in measuring antioxidant efficacy. , and cultured in a cell incubator for another 24 hours. Thereafter, 50 μl of N1 buffer and N2 buffer configured in the Nitric oxide assay kit were sequentially added every 10 minutes and reacted for 10 minutes to measure absorbance at 540 nm, and the amount of production for the control group was expressed as a percentage.
RAW 264.7 세포를 통해 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료의 NO 생성량을 측정한 결과는 하기 표 5 및 도4와 같다. 하기 표 5 및 도 4에서, 정상군은 세포에 세포 배양액만 처리한 군이며, 대조군은 LPS를 1 ㎍/㎖만 처리한 시험군이다. 실시예1의 PWM 시료의 시험군에서 농도 의존적으로 유의성 있는 감소를 나타내었다. 또한 실시예1의 PWM 시료의 시험군에서 대조군 및 비교예 1의 WM 시료 시험군 보다 NO 생성량이 100ug/ml 및 200ug/ml에서 신뢰도 95% 또는 신뢰도 99%로 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다. 또한 실시예 1의 PWM 시료의 시험군은 대조군 대비하여 100ug/ml에서는 1.4배 감소, 200ug/ml에서는 1.6배 감소 양상이 나타났다. The results of measuring the amount of NO production of the PWM of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 through RAW 264.7 cells are shown in Table 5 and FIG. 4 below. In Table 5 and FIG. 4, the normal group is a group treated with only cell culture medium, and the control group is a test group treated with only 1 μg/ml of LPS. In the test group of the PWM sample of Example 1, a significant decrease was shown in a concentration-dependent manner. In addition, it was confirmed that the NO production in the test group of the PWM sample of Example 1 was significantly reduced with a reliability of 95% or 99% at 100 ug / ml and 200 ug / ml, compared to the control group and the WM sample test group of Comparative Example 1. In addition, the test group of the PWM sample of Example 1 showed a 1.4-fold decrease in 100ug/ml and a 1.6-fold decrease in 200ug/ml compared to the control group.
시험예 3-2: RAW 264.7 세포를 이용한Test Example 3-2: Using RAW 264.7 cells Cytokine (IL-1β, TNF-α) 생성량 측정Cytokine (IL-1β, TNF-α) production measurement
RAW 264.7 세포를 12 well plate에 2×105 cells/well로 분주하여 세포 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 새로운 배양액으로 교체하고 실시예 1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료를 25, 50, 100, 200 (㎍/㎖)의 농도에 LPS를 1 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후, 다시 24시간 동안 세포 배양기에서 배양하였다. 세포를 trypsin/EDTA로 분리 및 원심 분리하여 상층액을 획득하여 Milliplex map mouse cytokine/chemokine magnetic bead panel-immunology multiplex assay kit에 구성된 물품을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 96 well plate에 상층액 25 ㎕씩 분주하고 assay buffer 및 matrix buffer, antibody-immobilized beads를 각 25 ㎕씩 가하여 혼합한 후 2시간 동안 실온에서 반응시키고 washing 완충 용액을 이용하여 2회 세척하였다. 이를 다시 25 ㎕의 detection antibody을 가하여 1시간 동안 실온에서 암소 반응시키고 추가로 25 ㎕의 Streptavidin-Phycoerythrin을 가하여 30분 동안 실온에서 반응시킨 후 washing 완충 용액을 이용하여 2회 세척하였다. 세척 후 PBS를 150 ㎕ 넣고 5분 간 shaking한 후 Luminex를 이용하여 측정하였다.RAW 264.7 cells were dispensed in a 12 well plate at 2×10 5 cells/well and cultured for 24 hours in a cell incubator (37° C., 5% CO 2 ). After culturing, it was replaced with a new culture medium, and the PWM samples of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 were treated with LPS at concentrations of 25, 50, 100, and 200 (μg/ml) at a concentration of 1 μg/ml, and then again at 24 It was cultured in a cell incubator for a period of time. Cells were separated and centrifuged with trypsin/EDTA to obtain a supernatant, and measured as follows using items configured in a Milliplex map mouse cytokine/chemokine magnetic bead panel-immunology multiplex assay kit. 25 μl of the supernatant was dispensed into a 96 well plate, each 25 μl of assay buffer, matrix buffer, and antibody-immobilized beads were added and mixed, reacted at room temperature for 2 hours, and washed twice using washing buffer solution. 25 μl of the detection antibody was added thereto, reacted in the dark at room temperature for 1 hour, additionally 25 μl of Streptavidin-Phycoerythrin was added and reacted at room temperature for 30 minutes, and then washed twice using a washing buffer solution. After washing, 150 μl of PBS was added, shaken for 5 minutes, and then measured using Luminex.
RAW 264.7 세포를 통해 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료의 IL-1β 생성량을 측정한 결과는 하기 표 6과 같다. IL-1β 생성량은 하기 표 6에서 정상군은 세포에 세포 배양액만 처리한 군이며, 대조군은 LPS를 1 ㎍/㎖만 처리한 시험군이다. 하기 표 6 과 같이 대조군과 대비하여 유의성 있는 생성량 감소가 확인되었다.The results of measuring the IL-1β production of the PWM of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 through RAW 264.7 cells are shown in Table 6 below. In Table 6 below, the amount of IL-1β production is shown in Table 6. The normal group is a group treated only with cell culture medium, and the control group is a test group treated with only 1 μg/ml of LPS. As shown in Table 6 below, a significant decrease in production was confirmed compared to the control group.
(Normal)Normal group
(Normal)
(Control)control group
(Control)
RAW 264.7 세포를 통해 실시예1의 PWM 및 비교예 1의 WM 시료의 TNF-α 생성량을 측정한 결과는 하기 표 7 및 도 4와 같다. 실시예 1의 PWM 시료의 시험군의 모든 농도에서 신뢰도 95% 또는 신뢰도 99%로 유의성 있는 생성량 감소가 확인되었다. 또한 LPS만 처리한 대조군 및 비교예 1의 WM 시험군보다 TNF-α 생성량이 훨씬 더 감소하는 것이 확인되었다. 실시예 1의 PWM 시료의 시험군은 대조군 대비하여 TNF-α 생성량이 100ug/ml에서는 1.4배 감소, 200ug/ml에서는 1.6배 감소하는 것이 확인되었다. The results of measuring the amount of TNF-α produced in the PWM of Example 1 and the WM samples of Comparative Example 1 through RAW 264.7 cells are shown in Table 7 and FIG. 4 below. A significant decrease in production was confirmed with a reliability of 95% or 99% in all concentrations of the test group of the PWM sample of Example 1. In addition, it was confirmed that the amount of TNF-α production was significantly reduced compared to the control group treated with only LPS and the WM test group of Comparative Example 1. It was confirmed that the test group of the PWM sample of Example 1 reduced the TNF-α production by 1.4 times at 100 ug/ml and 1.6 times at 200 ug/ml, compared to the control group.
Claims (10)
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물은 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하여 수득된 것인 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 1,
The stem and leaf extract of the watermelon is an antioxidant or anti-inflammatory cosmetic composition obtained by extracting by adding any one or a mixture of two or more selected from water or C1 to C4 lower alcohol as an extraction solvent.
상기 추출용매는 80 내지 120℃의 열수인 것인 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 2,
The extraction solvent is a cosmetic composition for antioxidant or anti-inflammatory that is hot water of 80 to 120 ℃.
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물을 복합 균주로 발효시켜 수득된 것인, 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 1,
The fermented product of the stem and leaf extract of the watermelon is obtained by fermenting the stem and leaf extract of the watermelon with a complex strain, antioxidant or anti-inflammatory cosmetic composition.
상기 복합 균주는 유산균, 영지버섯균사체 및 상황버섯균사체로 이루어진 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 4,
The composite strain is a cosmetic composition for antioxidant or anti-inflammatory consisting of lactic acid bacteria, Ganoderma lucidum mycelium and Phellinus linteus mycelium.
상기 발효는 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 복합 균주의 배양액을 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되어 제조된 것인 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 4,
The fermentation is an anti-oxidant or anti-oxidation agent prepared by inoculating the stem and leaf extract of the watermelon with the culture medium of the complex strain to the stem and leaf extract of the watermelon and performing it at 30 to 37 ° C. at 140 to 200 rpm for 24 to 48 hours. Anti-inflammatory cosmetic composition.
상기 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대해서 0.01 내지 5 중량%로 포함되는 것인 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물. According to claim 1,
The fermented product of the stem and leaf extract of the watermelon is contained in 0.01 to 5% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, which is an antioxidant or anti-inflammatory cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 수분크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 마스크팩 및 바디클렌저로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인, 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물.According to claim 1,
The cosmetic composition is skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrient lotion, moisture cream, nutrient cream, sunscreen cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, nutrient essence, pack , Soap, cleansing foam, mask pack and any one formulation selected from the group consisting of body cleanser, antioxidant or anti-inflammatory cosmetic composition.
a) 세척한 수박의 줄기와 잎을 동결 건조하여 분말화 하는 단계;
b) 상기 a)의 분말화된 상기 수박의 줄기와 잎을 물 또는 C1 내지 C4의 저급 알코올에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 추출용매로 가하여 추출하여 추출물을 수득하는 단계; 및
c) 상기 b) 단계의 추출물을 복합 균주로 발효시키는 단계;
를 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법. As a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics,
a) freeze-drying the washed watermelon stems and leaves to make powder;
b) extracting the stems and leaves of the powdered watermelon of a) by adding water or any one or a mixture of two or more selected from C1 to C4 lower alcohols as an extraction solvent to obtain an extract; and
c) fermenting the extract of step b) into a complex strain;
Method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for antioxidant or anti-inflammatory cosmetics comprising a.
상기 c) 단계의 발효는 상기 수박의 줄기 및 잎 추출물에 상기 복합 균주의 배양액을 상기 b) 단계의 추출물에 접종하여 30 내지 37℃에서 140 내지 200rpm에서 24시간 내지 48시간 동안 수행되는 것인 항산화 또는 항염증용 화장료용 수박의 줄기 및 잎 추출물의 발효물의 제조방법. According to claim 9,
The fermentation in step c) is carried out at 30 to 37 ° C. at 140 to 200 rpm for 24 to 48 hours by inoculating the culture broth of the complex strain into the extract of the stem and leaf of the watermelon in the extract of step b). Or a method for producing a fermented product of stem and leaf extracts of watermelon for anti-inflammatory cosmetics.
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