KR102460484B1 - 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집하는 화장료 조성물 및 그 방법에 관한 것으로, 해조류에 대하여 고순도발효유화제를 사용하여 추출물을 제조함으로써 유기용매를 사용하는 추출법에 비하여 공정을 단순화할 수 있으므로 효율성을 개선할 수 있고, 활성물질을 안정적으로 포집하는 조성물을 제공할 수 있다. 또한, 특정 해조류 추출물을 포함함으로써 염증으로 인한 피부 노화 방지 효과를 극대화하여 피부를 건강하게 유지할 수 있다.
Description
본 발명은 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집하는 화장료 조성물 및 그 방법에 관한 것이다.
인간의 피부는 크게 표피와 진피, 피하지방으로 나누어지고 다시 표피는 각질층, 투명층, 과립층, 유극층, 기저층으로 세분화되어 있다. 피부의 최외각층인 각질층은 죽은 케라틴세포 덩어리로 이루어져 있으며, 주로 단백질로 이루어져 있는 각질 세포로 구성되고, 각질 세포 간의 사이를 세라마이드, 콜레스테롤, 유리지방산 등의 지질이 채우고 있는 구조를 가진다. 이 지질층은 체내 수분이 증발되는 것을 방지하며, 외부 침입에 대해 신체를 보호하는 건강학적 기능과 동시에, 피부를 윤택하고 매끄럽게 보이게 하는 심미적 기능을 가지고 있다.
피부는 시간이 지남에 따라 나이가 들면서 외부환경 및 스트레스에 노출되어 염증반응에 의해 노화가 발생하게 된다. 염증에 의한 노화는 인플라메이션(inflammation)과 에이징(aging)의 합성어인 인플라메이징(inflammaging)이라고도 한다. 인간은 나이가 들어감에 따라 만성 염증 반응에 노출되기 쉽고, 만성 염증은 노화와 밀접한 관계가 있으며, 생물학적 노화 과정으로부터 나타나는 면역 노화에 노출되기 쉽다.
피부 내에 유효 물질을 투과시키기 위한 경로는 intrapathway, interpathway, transcelluar pathway 등이 있다. 이 중, 피부 내로의 물질 투과효율은 interpathway가 높다. 한편, 피부 각질층은 친수성 물질보다 소수성 물질이 흡수 및 투과되기 용이하다.
약물의 피부 흡수에 영향을 미치는 요인은 입자의 크기, 모양, 표면 전하, 친유성, 투과 촉진제, 제형의 형태 그리고 각질층의 상태 등이다. 유효 성분을 피부에 자연스럽게 통과시키기 위해서는 소수성 혹은, 친수성과 소수성이 결합된 담체를 이용해야 하며 특히, 수용성 활성물질을 피부에 전달하기 위해 미셀(micelle) 혹은 리포좀(liposome)과 같은 형태의 담체를 이용하는 것이 일반적이다.
그러나 이러한 미셀 혹은 리포좀의 형태는 피부의 지질층을 통과하여 유효물질을 흡수시키기에는 한계가 있다. 이는 피부의 최외각층인 각질층이 각질세포들로 쌓여있고, 그 사이 사이가 지질성분으로 이루어진 구조이므로 구조적으로 친수성의 물질보다는 소수성의 물질이 각질세포 사이로 투과시키는 것이 용이하기 때문이다.
한편, 역미셀이란, 계면활성제의 활성에 의해 유기용매 안에 나노미터 사이즈(1~10 nm)의 둥근 형태의 입자가 분산되어 있는 것을 의미한다. 역미셀계(reverse micelle system)는 비극성용매의 환경에서 계면활성제의 소수성 부분(tail)이 외부로 향하고, 친수성 부분(head)이 내부로 향하도록 자발적으로 배열되는 응집체이다.
역미셀은 나노크기의 입자로 분산될 수 있으므로 피부의 최외곽층으로부터 유효물질을 침투시키기에 용이하다.
그러므로, 역미셀을 적용하여 산화 및 분해에 취약한 활성물질을 포집함으로써 안정성을 향상시키고, 피부 내에 유효성분을 효과적으로 전달할 수 있는 방법의 연구가 필요하다.
본 발명의 목적은 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은
참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물; 및
고순도 발효유화제를 포함하고,
상기 고순도 발효유화제가
Candida bombicola UA-06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 미생물을 활성화시키는 종균배양 단계;
상기 종균배양한 미생물 및 식물성 오일을 발효하는 발효 단계;
발효 단계로부터 얻어진 발효물 중의 수분, 지방산 및 불순물을 제거하여 정제하는 단계; 및
정제된 발효물에 에탄올을 혼합하여 상층액을 분리 회수하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 정제하는 단계는 상기 발효물을 pH 3 내지 6으로 조정하고, 5 내지 30시간 동안 정치하여 수층과 유층을 분리하는 단계;
MgSO4, 제올라이트, 규조토, 활성알루미나, 황산칼슘 및 염화칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 10 내지 30g/L 첨가하고, 1 내지 5 bar에서 필터프레스로 여과한 후 유층을 수득하는 단계;
규산마그네슘, 활성탄, 백도토, 산성백토 및 펄라이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상이 충진된 컬럼으로 정제하는 단계; 및
여과하는 단계를 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 회수하는 단계는 정제된 발효물과 70 내지 95% 에탄올을 1:5 내지 1:20(w/w)의 부피비로 혼합하고, 3 내지 10시간 동안 교반하여 하층액과 상층액을 분리하는 단계; 및
상기 상층액으로부터 에탄올을 휘발시킨 후, 발효계면활성제를 회수하는 단계를 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3 및 MgSO4를 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 글루쿠로노락톤 및 식물성 오일을 포함할 수 있다.
구체적인 일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물 0.5 내지 30g/L, 글리세린 10 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L 및 MgSO4 0.5 내지 5g/L를 포함하고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물 0.5 내지 3g/L, 글리세린 1 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L, MgSO4 0.5 내지 5g/L, 글루쿠로노락톤 40 내지 200g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계는 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행되고,
상기 발효 단계는 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm의 혼합 조건으로 진행될 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 해조류 추출물의 제조방법이 참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 분말 0.5kg 당 상기 고순도 발효유화제를 0.1 내지 3L 첨가하고,
30 내지 80℃에서 교반하여 추출하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기한 바와 같은 방법으로 제조되는 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물을 제공한다.
기타 본 발명의 구현예들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.
본 발명은 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물을 제공함으로써 활성물질을 안정적으로 포집하는 조성물을 제공할 수 있다. 또한, 특정 해조류 추출물을 포함함으로써 염증으로 인한 피부 노화 방지 효과를 극대화하여 피부를 건강하게 유지할 수 있다.
도 1은 산화질소 생성량을 나타내는 그래프이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예를 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
계면활성제(유화제)는 서로 다른 두 액체의 계면에 흡착하여 계면장력을 저하시켜 두 상을 서로 잘 섞이게 하는 역할을 한다. 구조적인 특징으로는 비극성 꼬리(non-polar)부분은 친유성을 가지는 알킬(alkyl)기, 극성 머리(polar)부분은 친수성을 가지는 물질로 구성되어 있다.
계면활성제는 합성유화제, 천연유화제로 구분할 수 있으며, 이 중 천연유화제의 일종으로 효모, 곰팡이, 세균 등 미생물에 의해 생산되는 미생물 유래의 발효계면활성제가 있다. 미생물에 의해 생산되는 계면활성제는 양친매성을 띄는 물질로 화장품, 식품, 의약품, 세제 등의 다양한 산업에 이용될 수 있다. 미생물 유래의 발효계면활성제는 기존의 화학 합성 계면활성제에 비하여 독성이 낮고, 극한 조건에 대해 안정성이 클 뿐만 아니라, 생분해가 가능하여 매우 환경 친화적이다.
미생물로부터 생산되는 발효계면활성제의 종류는 크게 당지질(glycolipids), 인지질(phospholipid)과 지방산(fatty acids), 지단백질(lipopeptides and lipoproteins), 고분자 생물 계면활성제(polymeric surfactants)로 구분할 수 있다.
이하, 본 발명의 구현예에 따른 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물 및 그 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은,
참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물; 및
고순도 발효유화제를 포함하고,
상기 고순도 발효유화제가
Candida bombicola UA-06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 미생물을 활성화시키는 종균배양 단계;
상기 종균배양한 미생물 및 식물성 오일을 발효하는 발효 단계;
발효 단계로부터 얻어진 발효물 중의 수분, 지방산 및 불순물을 제거하여 정제하는 단계; 및
정제된 발효물에 에탄올을 혼합하여 상층액을 분리 회수하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
해조류의 주요 성분은 다당류, 색소, 폴리페놀류 등의 다양한 활성성분이 포함되어있다. 이러한 활성성분은 항산화, 항염, 항균, 항알러지 등의 활성을 가지는 성분으로 알려져 있으며, 화장품 원료로써의 이용가치가 높다.
그러나, 대부분의 활성성분들을 추출하기 위해서는 극성이 5 내지 7인 용매에서 용해하는 단계가 필요하므로 주로 화학 유기용매를 사용해야 한다는 단점이 있다. 또한, 유기용매 추출법은 추출, 휘발, 여과, 농축 등 3 내지 4가지 이상의 공정 단계를 필요로 하므로, 공정에 소요되는 시간이 길다. 또한, 유기용매로 추출한 농축액은 유기용매가 잔존할 수 있기 때문에 피부자극을 유발할 수 있고, 화장품 제형 내에 적용하기가 용이하지 못하고, 적용할 수 있는 용량이 제한적이다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 고순도발효유화제를 이용하여 해조류를 추출하고, 추출한 유효성분을 오일 내에 안정하게 포집할 수 있다. 또한, 오일 내에 포집함으로써 피부친화력이 높고, 피부의 표피층에 침투가 용이하여 유효성분의 효능을 극대화할 수 있다. 또한, 해조류를 발효유화제로 추출함으로써 휘발, 농축 등의 과정을 필요로하지 않으므로 공정을 단순화할 수 있고, 유효성분들의 손상을 최소화하여 안정하게 추출할 수 있으며, 유기용매의 사용을 배제하여 피부에 안전하게 사용할 수 있다.
참미역(Undaria pinnatifida)은 황산다당류(sulfated polysaccharide, fucoidan)와 폴리페놀류인 플로토탄닌(phlorotannins)을 포함하고, 항산화, 항염, 항광노화, 미백, 피부 면역, 자외선으로부터의 피부 손상 방지, 피부결 개선 등에 사용된다.
다시마(Saccharina japonica)는 푸코잔틴(fucoxanthin)과 폴리페놀류인 플로토탄닌(phlorotannins)을 포함하고, 항산화, 항염, 항바이러스, 피부 면역 증강에 사용된다.
블래더랙(Fucus Vesiculosus)은 해초의 한 종류로, 질긴 잎에 공기주머니를 가지며, 폴리페놀류인 플로토탄닌(phlorotannins) 및 알루미늄, 바륨, 칼슘, 비타민류, 글루타치온, 아연 등을 함유하여 항산화, 피부 수분 유지 등에 사용된다.
모자반(Sargassum fulvellum)은 점액 성분인 후코이단(fucoidan)을 포함하고, 사가퀴노익산(sargaquinoic acid), 사가크로메놀(sargachromenol), 사가하이드로퀴노익산(sargahydroquinoic acid), 알긴산, 미네랄, 폴리페놀, 비타민 K 등을 포함하여 항산화, 항염, 항노와, 미백에 사용된다.
통위드(Himanthalia Elongata)는 지방산, 휘발성 화합물을 포함하며, 항산화, 항균, 피부보호, 보습, 탄력에 사용된다.
자이언트켈프(Macrocystis pyrifera)는 바다해초의 제왕으로도 알려져 있으며, 폴리페놀류인 플로토탄닌(phlorotannins), 알긴산(alginate), 킬레이트 성분, 요오드, 미네랄 등을 포함하여 안정화, 항산화, 항염, 항노화, 보습, 피부결 개선에 사용된다.
톳(Sargassum fusiforme)은 폴리페놀의 일종인 플로토탄닌(phlorotannins)을 포함하고, 4-하이드록시페네틸 알코올(4-hydroxyphenethyl alcohol), 다량의 요오드, 비타민A, 철, 칼슘을 포함하며, 항염, 항산화, 수분 공급, 보습력 유지, 피부 톤 개선, 미백에 사용된다.
일구현예에 따르면, 해조류 추출물의 제조방법은 건조 해조류 분말 0.5kg 당 고순도 발효유화제를 0.1 내지 3L, 예를 들면 1.5 내지 2.5L 첨가하여, 30 내지 80℃, 예를 들면 40 내지 70℃에서 1 내지 20시간, 예를 들면 5 내지 20시간, 예를 들면 5 내지 10시간 동안 교반 추출하는 단계를 포함하는 방법으로 제조할 수 있고, 고순도 발효유화제의 함량, 추출 온도 및 추출 시간은 적절하게 조절할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 정제하는 단계는 상기 발효물을 pH 3 내지 6, 예를 들면, pH 3.5 내지 4.5로 조정하고, 5 내지 30시간, 예를 들면, 10 내지 20시간, 예를 들면 15 내지 20시간 동안 정치하여 수층과 유층을 분리하는 단계를 포함할 수 있다. 이 때, 상기 수층은 미생물 및 배지를 포함하고, 상기 유층은 발효유화물을 포함한다.
또한, 분리된 수층을 제거하고, 발효물유화물에 남아있는 수분을 제거하기 위하여 MgSO4, 제올라이트, 규조토, 활성알루미나, 황산칼슘 및 염화칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들면 MgSO4를 10 내지 30g/L, 예를 들면 15 내지 25g/L 첨가할 수 있다.
그 후, 예를 들면 필터프레스를 이용하여 MgSO4를 여과하여 투명한 유층을 수득하는 단계를 포함할 수 있다. 필터프레스는 1 내지 5 bar, 예를 들면 2bar 내지 3 bar의 압력, 예를 들면 2bar로 수행할 수 있다.
또한, 발효유화물로부터 지방산 및 불순물을 제거하기 위하여 규산마그네슘, 활성탄, 백도토, 산성백토 및 펄라이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들면 규산마그네슘이 충진된 컬럼으로 정제하는 단계를 포함할 수 있다.
또한, 발효유화물에 포함된 불순물, 예를 들면 MgSO4와 같은 입자를 완전히 제거하기 위하여 필터, 예를 들면 0.45㎛ 필터로 여과하는 단계를 포함할 수 있다. 여과하는 단계는 예를 들면, 하우징여과, 감압여과 등을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 회수하는 단계는 정제된 발효물과 70 내지 95%, 예를 들면 80 내지 90% 에탄올을 1:5 내지 1:20(w/w), 예를 들면 1:5 내지 1:10(w/w)의 부피비로 혼합하고, 3 내지 10시간, 예를 들면 5 내지 8시간 동안 교반한 후, 하루 동안(overnight) 정치하여 하층액과 상층액을 분리하는 단계를 포함할 수 있다. 이 때, 하층액은 중성지방을 포함하고, 상층액은 유효성분을 포함한다. 또한, 상기 상층액으로부터 예를 들면, 감압농축으로 에탄올을 휘발시킨 후, 발효유화제를 회수하는 단계를 포함할 수 있다. 에탄올은 상기한 감압농축 외에 일반적인 방법으로 휘발시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3 및 MgSO4를 포함할 수 있다.
또한, 상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 글루쿠로노락톤 및 식물성 오일을 포함할 수 있다.
구체적으로 예를 들면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물 0.5 내지 30g/L, 예를 들면 1 내지 10g/L, 글리세린 10 내지 40g/L, 예를 들면 15 내지 30g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, 예를 들면 20 내지 30g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, 예를 들면 5 내지 10g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L, 예를 들면 1 내지 5g/L 및 MgSO4 0.5 내지 5g/L, 예를 들면 1 내지 3g/L를 포함하고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물 0.5 내지 3g/L, 예를 들면 0.5 내지 2g/L, 글리세린 1 내지 40g/L, 예를 들면 15 내지 30g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, 예를 들면 20 내지 30g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, 예를 들면 5 내지 10g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L, 예를 들면 1 내지 5g/L, MgSO4 0.5 내지 5g/L, 예를 들면 1 내지 3g/L, 글루쿠로노락톤 40 내지 200g/L, 예를 들면 50 내지 150g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L, 예를 들면 300 내지 700g/L을 포함할 수 있다.
또한, 일구현예에 따르면 상기 종균배양 단계는 15 내지 30℃, 예를 들면 18 내지 25℃에서 100 내지 500rpm, 예를 들면 200 내지 400rpm, 0.5 내지 2vvm, 예를 들면 0.5 내지 1.5vvm 호기 조건으로 진행되고,
상기 발효 단계는 20 내지 35℃, 예를 들면 20 내지 30℃에서 50 내지 200rpm, 예를 들면 80 내지 150rpm의 혼합 조건으로 진행될 수 있다.
또한, 상기 종균배양 단계는 균의 지수생장 종말점 시점에서 종료할 수 있다. 구체적으로 상기 지수생장 종말점은 40 내지 120시간일 수 있으며, 예를 들면 50 내지 100시간, 예를 들면 배양 후 60시간이 되는 시점에서 종균배양을 종료시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 식물성 오일은 예를 들면, 해바라기씨, 포도씨, 카놀라, 쌀눈, 올리브, 대두, 아르간, 현미, 들깨, 참깨, 아몬드, 땅콩, 옥수수, 홍삼, 아보카도, 마카다미아, 코코넛, 로즈힙, 비타민나무씨, 시어나무열매, 기름야자, 베르가모트열매, 동백씨, 홍화씨, 살구씨, 양귀비씨, 달맞이꽃씨, 피마자씨, 녹차씨, 메도우폼씨, 아마씨 및 햄프씨로 이루어지는 군으로부터 추출된 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기한 바와 같은 방법으로 제조되는 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되며, 피부학적으로 적용이 가능한 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다.
피부학적으로 적용이 가능하다는 것은 적용 대상에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 할 수 있는 조성물로서, 피부에 적용할 수 있는 외용제를 포함할 수 있으며, 상기 조성물로부터 기인하는 부작용이 유효 성분의 효능을 저하시키기 않고, 적용 대상에 심각한 자극을 유발하지 않으면서 유효성분들의 활성 및 물성을 손상시키지 않는다는 것을 의미할 수 있다. 본 발명의 피부학적으로 적용이 가능한 화장료 조성물로는 예를 들면, 용액, 현탁액, 유액, 유탁액, 페이스트, 겔, 팩, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 모발 화장료 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 구체적으로, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 겔, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 엠플, 영양에센스, 팩, 비누, 헤어샴푸, 풋샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저의 제형 등을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
제조예 1: 참미역 고순도발효유화제 추출물
건조한 참미역 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬(mesh)로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 2: 다시마 고순도발효유화제 추출물
건조한 다시마 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 3: 블래더랙 고순도발효유화제 추출물
건조한 블래더랙 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 4: 모자반 고순도발효유화제 추출물
건조한 모자반 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 5: 통위드 고순도발효유화제 추출물
건조한 통위드 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 6: 자이언트켈프 고순도발효유화제 추출물
건조한 자이언트켈프 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 7: 톳 고순도발효유화제 추출물
건조한 톳 분말 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 8: 7종의 해조류 혼합 고순도발효유화제 추출물
참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳의 각각의 7종 해조류 분말을 동일한 중량 비율(1:1:1:1:1:1:1)로 혼합한 혼합물 0.5kg을 고순도발효유화제 2.0L에 투입하여 60℃에서 8시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과한 후 0.45um 필터로 여과하였다.
제조예 9: 7종의 해조류 혼합 에탄올 추출물
참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳의 각각의 7종 해조류 분말을 동일한 중량 비율(1:1:1:1:1:1:1)로 혼합한 혼합물 0.5kg을 70% 에탄올 2L에 4시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출액은 300메쉬로 여과하여 감압농축하여 10배 농축물을 수득하였다.
제조예 10: 고순도 발효유화제
Candida bombicola UA 06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 균체 수득
Candida bombicola UA 06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원)을 이스트 추출물(yeast extract) 1.0 g/L, 글리세린(glycerin) 20 g/L, K2HPO4 25 g/L, KH2PO4 7 g/L, NH4NO3 3 g/L, MgSO4 2 g/L 및 증류수 933 g/L로 구성된 배지에 접종하여 20℃, 300rpm, 1NL/min(1vvm)의 호기적인 조건에서 종균배양을 진행하였다. 배양은 분광광도계(Epoch2, BioTek)로 600nm에서 흡광도를 측정하여 균의 지수생장 종말점인 60시간 시점에서 종료하였다. 배양액을 원심분리(16,000g, 30분)하여 균체를 침전시키고 인산 버퍼로 수 회 세척하여 균체를 수득하였다.
오일의 발효
오일 발효를 위하여 이스트 추출물(yeast extract) 1.0 g/L, 글리세린(glycerin) 20 g/L, K2HPO4 25 g/L, KH2PO4 7 g/L, NH4NO3 3 g/L, MgSO4 2 g/L, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 100 g/L, 식물성오일 500 g/L 및 증류수 333 g/L 로 구성된 발효액을 5 L 발효조에 25℃, 100rpm 조건으로 발효액을 혼합 제조하였다. 상기 발효액의 온도가 25℃일 때, 균체 2.5 g/L를 투입하고, 3일 동안 발효를 진행하였다. 식물성 오일로는 해바라기씨유를 사용하였다.
정제
발효 3일 후, 발효물의 잔존하는 효소활성을 90℃고온으로 활성 상실시킨 후, 1N HCl로 pH를 4로 조정하고, 발효물을 18시간 동안 정치하여 수층(미생물 및 배지)과 유층(발효유화물)을 분리하여 수층을 제거하였다. 발효유화물에 남아있는 수분을 제거하기 위하여 MgSO4를 20 g/L 첨가하고, 필터프레스를 이용하여 2bar~3bar로 여과한 투명한 유층(발효유화물)을 수득하였다. 또한, 상기 발효유화물의 지방산 및 불순물을 규산마그네슘이 충진된 컬럼으로 정제한 후, 잔존하는 작은 입자의 MgSO4를 완전히 제거하기 위하여 0.45 ㎛ 필터로 여과시켜 발효유화물을 수득하였다.
추출
상기 수득한 발효물을 80% 에탄올로 추출하였다. 구체적으로, 발효물과 에탄올 용매의 비율을 1:9(w/w) 비율로 투입하여 6시간 동안 교반하고, 발효물에 포함되어있는 중성지방과 유효성분(천연계면활성제)을 하루 동안(overnight) 정치하여 하층액(중성지방)과 상층액(유효성분)을 분리하였다. 하층액(중성지방, Triglyceride)층은 제거하고, 상층액을 회수하여 감압농축하여 에탄올을 휘발시키고, 고순도 발효유화제 부분을 수득하였다.
실시예 1 내지 8 및 비교예 1: 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물
해조류 추출물을 안정적으로 포집하기 위하여 표 1과 같은 조성으로 화장료 조성물을 제조하였다. 표 1의 함량 단위는 중량%이다.
구체적으로, 실시예 1 내지 8은 하기 표 1의 1 내지 8번 원료를 10번 원료에 투명하게 용해 및 혼합하여 시킨 후, 50℃까지 승온시킨 12번 원료에 투입하여 포집하여 제조하였다. 포집은 아지 믹서(agi mixer)를 이용하여 500 ~ 1000 rpm, 30분 ~ 1시간 동안 포집하는 방법으로 진행하였다. 이후, 25℃까지 냉각하여 각각의 조성물의 투명도와 장기적인 안정도를 관찰하였다.
비교예 1은 7종의 해조류 에탄올 추출물(제조예 9)을 10번 원료에 용해시킨 후, 11번 원료를 투입 및 혼합하고, 12번 원료를 투입하면서 최종적으로 포집하여 제조하였다.
| 원료명 | 실시예 | 비교예 | ||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 1 | ||
| 1 | 참미역 고순도발효유화제 추출물(제조예 1) | 20.0 | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 2 | 다시마 고순도발효유화제 추출물(제조예2) | - | 20.0 | - | - | - | - | - | - | - |
| 3 | 블래더랙 고순도발효유화제 추출물(제조예3) | - | - | 20.0 | - | - | - | - | - | - |
| 4 | 모자반 고순도발효유화제 추출물(제조예4) | - | - | - | 20.0 | - | - | - | - | - |
| 5 | 통위드 고순도발효유화제 추출물(제조예5) | - | - | - | - | 20.0 | - | - | - | - |
| 6 | 자이언트켈프 고순도발효유화제 추출물(제조예6) | - | - | - | - | - | 20.0 | - | - | - |
| 7 | 톳 고순도발효유화제 추출물(제조예7) | - | - | - | - | - | - | 20.0 | - | - |
| 8 | 7종 해조류 고순도발효유화제 추출물(제조예8) | - | - | - | - | - | - | - | 20.0 | - |
| 9 | 7종 해조류 에탄올 추출물(제조예9) | - | - | - | - | - | - | - | - | 1.0 |
| 10 | 디프로필렌글라이콜 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 | 30.0 |
| 11 | 고순도발효유화제 (제조예10) |
- | - | - | - | - | - | - | - | 19.0 |
| 12 | 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 50.0 |
| 합계 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
실시예 9 및 비교예 2: 에센스 제조
표 2의 조성에 따라 에센스를 제조하였다. 구체적으로, 표 2의 A상과 B상의 원료를 순차적으로 투입하고, 혼합 및 용해하였다. 이후 B상을 A상에 투입하여 70℃에서 호모믹서로 3000rpm에서 10분간 혼합하였다. C상을 용해시킨 후 A 및 B상이 혼합된 상에 투입하고, 3000rpm에서 3분간 혼합하였다. D상은 A 내지 C상이 혼합된 용기에 투입하여, 호모믹서로 3500rpm으로 3분간 혼합하였다. 그 후 탈포 및 30℃까지 냉각을 실시하였다.
단, 비교예 2는 7종의 해조류 추출물이 포집된 조성물이 아니며, 제조예 9에 따른 7종의 해조류 에탄올 추출물을 포함하는 것이다. 에탄올 추출물은 포집한 조성물이 현탁하기 때문에 제조예 9를 폴리올 용매(디프로필렌글라이콜)에 용해 후 여과하여 사용하였다. 가용할 수 있는 최대 농도는 1(w/w)%였으며, 1% 농도의 용액을 7중량% 투입하였다. 제조예 9 자체는 감압농축한 상태이므로 용매에 용해하여 사용해야 한다.
| 원료명 | 실시예 9 | 비교예 2 | |
| 중량 (%) | |||
| A | 정제수 | 71.5 | 71.5 |
| 카보머 | 0.15 | 0.15 | |
| 디프로필렌글라이콜 | 5.00 | 5.00 | |
| 글리세린 | 3.00 | 3.00 | |
| 1,2-헥산다이올 | 1.50 | 1.50 | |
| 잔탄검 | 0.20 | 0.20 | |
| B | 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 | 4.00 | 4.00 |
| 트리에칠헥사노인 | 2.00 | 2.00 | |
| 폴리글리세릴-10스테아레이트 | 1.50 | 1.50 | |
| 글리세릴스테아레이트 | 1.00 | 1.00 | |
| 세테아릴알코올 | 1.00 | 1.00 | |
| C | 실시예 8 | 7.00 | - |
| 1% 농도의 제조예 9 용액 | - | 7.00 | |
| E | 정제수 | 2.00 | 2.00 |
| 트로메타인 | 0.15 | 0.15 | |
| 합계 | 100 | ||
실험예 1: 항산화 평가
제조예 1 내지 9에 따른 활성성분 추출효율을 확인하기 위하여 DPPH assay 시험방법으로 각각의 추출물에 대한 항산화력을 평가 비교하였다.
DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)는 0.2mM 농도로 에탄올에 용해하여 사용하였다. 시료 200㎕에 DPPH 시약 800㎕를 첨가하여 15분간 반응 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 표 3에 나타내었다.
제조예 9(7종의 해조류 에탄올 추출물)는 농축물이므로 에탄올에 농축물을 가용 가능한 최대농도 1(w/w)%로 용해하여 사용하였다. 또한, 제조예 1 내지 8과 용매 농도를 동일하게 하여 농도를 맞추어 주었다. 추출물의 농도는 10%로 동일하게 측정하였다.
| 시료 | 라디칼 소거능 (%) |
| 제조예 1 | 54.1 |
| 제조예 2 | 63.2 |
| 제조예 3 | 77.1 |
| 제조예 4 | 50.2 |
| 제조예 5 | 82.1 |
| 제조예 6 | 69.4 |
| 제조예 7 | 59.1 |
| 제조예 8 | 97.3 |
| 제조예 9 | 43.4 |
표 3의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 8에 따른 라디칼 소거능이 가장 우수함을 확인할 수 있다.
실험예 2: 해조류 추출물을 포집한 조성물의 포집여부
실시예 1 내지 8 및 비교예 1에 따른 조성물의 해조류 추출물 포집 여부를 확인하였다. 그 결과는 표 4에 나타내었다. 조성물의 투명도는 고순도 발효유화제가 해조류 추출물을 100% 포집함을 나타내는 것이다.
| 구분 | 실시예 | 비교예 | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 1 | |
| 투명도 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 불투명 |
표 4의 결과와 같이, 실시예 1 내지 8는 투명하게 포집된 상태를 관찰할 수 있다.
반면, 비교예 1은 불투명하고, 현탁된 포집 조성물 상태로 나타났으며, 역미셀 형성이 100% 되지 않고, 불안정한 상태임을 확인할 수 있다. 이는 해조류 에탄올 추출물이 폴리올(디프로필렌글라이콜) 용매에서 투명하게 용해하기 어렵고, 추출물 내 불순물이 포함되어 있어 안정하게 포집하기 어려움을 보여주는 결과이다.
실험예 3: 장기 보관 온도 별 안정성
보관 온도 조건에 따른 안정성을 평가하기 위하여, 표 3의 결과에 따라 해조류 추출물이 포집됨이 확인된 실시예 1 내지 8의 조성물에 대하여 조건 별 안정성을 확인하였다. 각각의 조성물을 실온, 25℃ 조건에서 1개월 동안, 저온(-5℃), 고온(50℃), 순환(-5 내지 40℃/12 hr) 조건에서 3개월 동안 보관하여 성상을 관찰하였다. 평가 결과는 표 5 및 6에 나타내었다.
| 구분 | 실시예 | ||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | ||
| 실온 | 투명도 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 |
| 침전 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | |
| 25℃ | 투명도 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 |
| 침전 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | |
| 구분 | 실시예 | ||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | ||
| -5℃ | 투명도 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 |
| 침전 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | |
| 50℃ | 투명도 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 |
| 침전 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | |
| 순환 (-5~40℃ /12hr |
투명도 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 | 투명 |
| 침전 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | 변화없음 | |
표 5 및 6의 결과로부터 실시예 1 내지 8은 보관 조건에 따른 투명도 및 침전 상태에 따른 안정도가 우수함을 확인하였다. 이는 실시예 1 내지 8의 조성물이 매우 안정적으로 해조류 추출물을 포집할 수 있는 조건을 가짐을 알 수 있는 결과이다.
실험예 4: 항염 효과
실시예 1 내지 8의 항염증 효능을 평가하기 위하여 산화질소(nitric oxide) 생성 저해능을 측정하였다. 산화질소는 면역세포에서 생성되어 외부 혹은 내부 유해물질에 대항하여 면역 시스템을 조절하는 화학분자로 알려져 있다. 마우스 유래의 대식세포주인 Raw264.7 세포를 12 well culture plate에 5x104 cells/well 농도로 24시간 배양하고 2시간 동안 각각의 샘플을 농도 별(0~0.5%)로 처리한 후, Lipopolysaccharide(0.1μg/ml)를 처리하여 24시간 배양하였다. 배양액을 수득하여 원심분리(3,000 rpm, 5분)하고, 상층액 100μl를 griess시약(1% sulfanilamide와 0.1% N-(1-naphthyl)ethylene diamine dihydrochloride 혼합용액) 100μl와 혼합하여 빛을 차단한 상태로 15분 동안 반응시켰다. 생성된 반응물은 microplate reader로 450nm 흡광도로 측정하였다.
또한, 샘플로는 실시예 1 내지 8을 70% 에탄올로 추출하여 수득한 농축물을 DMSO에 용해한 것을 사용하였으며, 각각의 샘플을 동일한 농도로 세포에 처리했을 때의 항염증 효과를 비교하였다. 단, 독성이 없는 농도에서 실험하였다.
산화질소 저해율은 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1 내지 8의 농도에 따라 산화질소 생성량이 저해된 것을 확인할 수 있다. 실시예 8에 따른 산화질소 생성율이 73% 감소하였으므로, 가장 우수한 항염효과를 나타내었다. 이로부터 7종의 해조류 추출물이 단독의 해조류 추출물에 비하여 시너지 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
실험예 5: 실시예 9 및 비교예 2에 따른 조성물의 피부효능 비교
실시예 9 및 비교예 1에 따른 조성물의 피부효능 효과를 평가하기 위하여 인체피부에 대한 시험을 진행하였다. 단, 비교예 1에서 7종의 해조류 혼합 추출물의 함량은 실시예 9와 동일한 농도가 되도록 계산하여 투입하였다.
실시예 9는 7종의 해조류 추출물을 역미셀에 포집시킨 조성물을 제형에 투입한 것이며, 비교예 2는 7종의 해조류 추출물을 역미셀로 포집하지 않고, 제조예 9에 따른 7종의 해조류 에탄올 추출물을 직접 제형에 투입한 것이다.
구체적으로, 주름이 생기기 시작하거나 이미 생성된 성인남녀 10명씩을 대상으로 시험군과 비교군으로 나눈 후, 시험군은 실시예 9를, 비교군은 비교예 1을 각각 1일에 아침 저녁으로 2회, 4주간 도포하였다. 피부상태는 안면분석기(야누스)를 이용하여 얼굴 전체를 일반광, 편광, 자외선광으로 정밀측정하였다. 일반광은 피부결 및 모공, 주름 등 굴곡을 분석하고, 편광은 색소침착 및 여드름 등의 염증성 발현을 분석하며, 자외선광은 피지 및 색소침착, 각질 등을 분석할 수 있다. 이를 종합적으로 평가하여 피부효능을 도출하였으며, 그 결과는 표 7 및 8에 나타내었다.
| 시료/평가 | 피부톤 및 색소침착 개선 | ||
| 우수 | 보통 | 변화없음 | |
| 실시예 9 | 8 | 2 | - |
| 비교예 1 | - | 6 | 4 |
| 시료/평가 | 주름 및 피부결 개선 | ||
| 우수 | 보통 | 변화없음 | |
| 실시예 9 | 9 | 1 | - |
| 비교예 1 | - | 3 | 7 |
표 7 및 8에 나타난 바와 같이, 비교예 2 보다 실시예 9의 제형이 피부노화 및 피부톤 개선에 훨씬 우수한 효과를 나타냄을 확인할 수 있다. 이는 7종의 해조류 추출물을 동일한 농도로 적용하는 경우, 소수성 오일에 역미셀로 포집한 것과 포집하지 않은 것의 차이로 피부효능 효과에 미치는 차이가 극명함을 확인한 결과이다.
이와 같은 결과는, 피부에 침투되기 어려운 유효성분 또는 수용성 물질들을 역미셀로 포집함으로써 피부 지질층에 융합 및 흡수율을 높여 효능물질의 효과를 극대화시킬 수 있음을 보여준다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 또한, 본 발명에 개시된 실시 예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (9)
1) Candida bombicola UA-06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 미생물을 활성화시키는 종균배양 단계;
상기 종균배양한 미생물 및 식물성 오일을 발효하는 발효 단계;
발효 단계로부터 얻어진 발효물 중의 수분, 지방산 및 불순물을 제거하여 정제하는 단계;
정제된 발효물에 에탄올을 혼합하여 상층액을 분리 회수하는 단계를 포함하는 방법으로 발효유화제를 제조하는 단계; 및
2) 참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 분말 0.5kg 당, 상기 발효유화제를 0.1 내지 3L 첨가하여 30 내지 80℃에서 1 내지 20시간 동안 교반 추출하는 단계를 포함하는 방법으로 해조류 추출물을 제조하는 단계를 포함하고,
상기 1) 단계의 회수하는 단계가 정제된 발효물과 에탄올을 1:5 내지 1:20(w/w)의 부피비로 혼합하고, 3 내지 10시간 동안 교반하여 하층액과 상층액을 분리하는 단계; 및
상기 상층액으로부터 에탄올을 휘발시킨 후, 발효유화제를 회수하는 단계를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 종균배양한 미생물 및 식물성 오일을 발효하는 발효 단계;
발효 단계로부터 얻어진 발효물 중의 수분, 지방산 및 불순물을 제거하여 정제하는 단계;
정제된 발효물에 에탄올을 혼합하여 상층액을 분리 회수하는 단계를 포함하는 방법으로 발효유화제를 제조하는 단계; 및
2) 참미역, 다시마, 블래더랙, 모자반, 통위드, 자이언트켈프 및 톳으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 분말 0.5kg 당, 상기 발효유화제를 0.1 내지 3L 첨가하여 30 내지 80℃에서 1 내지 20시간 동안 교반 추출하는 단계를 포함하는 방법으로 해조류 추출물을 제조하는 단계를 포함하고,
상기 1) 단계의 회수하는 단계가 정제된 발효물과 에탄올을 1:5 내지 1:20(w/w)의 부피비로 혼합하고, 3 내지 10시간 동안 교반하여 하층액과 상층액을 분리하는 단계; 및
상기 상층액으로부터 에탄올을 휘발시킨 후, 발효유화제를 회수하는 단계를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 정제하는 단계가 상기 발효물을 pH 3 내지 6으로 조정하고, 5 내지 30시간 동안 정치하여 수층과 유층을 분리하는 단계;
MgSO4, 제올라이트, 규조토, 활성알루미나, 황산칼슘 및 염화칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 10 내지 30g/L 첨가하고,
1 내지 5 bar에서 필터프레스로 여과한 후 유층을 수득하는 단계;
규산마그네슘, 활성탄, 백도토, 산성백토 및 펄라이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상이 충진된 컬럼으로 정제하는 단계; 및
여과하는 단계를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 정제하는 단계가 상기 발효물을 pH 3 내지 6으로 조정하고, 5 내지 30시간 동안 정치하여 수층과 유층을 분리하는 단계;
MgSO4, 제올라이트, 규조토, 활성알루미나, 황산칼슘 및 염화칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 10 내지 30g/L 첨가하고,
1 내지 5 bar에서 필터프레스로 여과한 후 유층을 수득하는 단계;
규산마그네슘, 활성탄, 백도토, 산성백토 및 펄라이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상이 충진된 컬럼으로 정제하는 단계; 및
여과하는 단계를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
삭제
제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3 및 MgSO4를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3 및 MgSO4를 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 글루쿠로노락톤 및 식물성 오일을 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물, 글리세린, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 글루쿠로노락톤 및 식물성 오일을 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물 0.5 내지 30g/L, 글리세린 10 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L 및 MgSO4 0.5 내지 5g/L를 포함하고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물 0.5 내지 3g/L, 글리세린 1 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L, MgSO4 0.5 내지 5g/L, 글루쿠로노락톤 40 내지 200g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L을 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물 0.5 내지 30g/L, 글리세린 10 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L 및 MgSO4 0.5 내지 5g/L를 포함하고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물 0.5 내지 3g/L, 글리세린 1 내지 40g/L, K2HPO4 10 내지 50g/L, KH2PO4 3 내지 15g/L, NH4NO3 1 내지 10g/L, MgSO4 0.5 내지 5g/L, 글루쿠로노락톤 40 내지 200g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L을 포함하는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계가 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행되고,
상기 발효 단계가 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm의 혼합 조건으로 진행되는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
상기 종균배양 단계가 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행되고,
상기 발효 단계가 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm의 혼합 조건으로 진행되는 것인, 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물의 제조방법.
삭제
제1항, 제2항, 및 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조되는 해조류 추출물이 포집된 화장료 조성물.
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| KR1020200052274A KR102460484B1 (ko) | 2020-04-29 | 2020-04-29 | 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물 및 그 제조방법 |
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| KR1020200052274A KR102460484B1 (ko) | 2020-04-29 | 2020-04-29 | 고순도 발효유화제를 이용하여 해조류 추출물을 포집한 화장료 조성물 및 그 제조방법 |
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| KR20210133549A KR20210133549A (ko) | 2021-11-08 |
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| KR20090092899A (ko) * | 2008-02-28 | 2009-09-02 | 이병수 | 해조류를 이용한 두피의 항균작용 및 모발의 성장을촉진하는 발모제 조성물 |
| KR102087123B1 (ko) * | 2017-04-21 | 2020-03-10 | 유씨엘 주식회사 | 펩타이드와 해조류 추출물을 함유하는 나노에멀젼 및 그를 이용한 화장료 조성물 |
| KR102057022B1 (ko) * | 2018-03-21 | 2019-12-19 | (주)일진코스메틱 | 화장료 조성물 및 이의 제조 방법 |
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