KR102408968B1 - 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물 - Google Patents

Abstract

개시되는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물은, 프로폴리스 45-55 중량% 및 티트리 추출물 45-55 중량%를 포함하되, 상기 프로폴리스는 에탄올 추출 공정을 통해 수득되고, 상기 티트리 추출물은 열수 추출 공정 또는 유기용매 추출 공정을 통해 수득됨으로써, 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 수 있다.

Description

프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물{COMPLEX ANTIBACTERIAL COMPOSITION CONTAINING PROPOLIS AND TEE TREE EXTRACT}

본 발명(Disclosure)은, 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 에탄올 추출법을 통해 추출된 프로폴리스과 열수 추출법 또는 유기용매 추출법을 통해 추출된 티트리 추출물을 함유하는 복합 항균 조성물을 제공함으로써, 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에 관한 것이다.

여기서는, 본 발명에 관한 배경기술이 제공되며, 이들이 반드시 공지기술을 의미하는 것은 아니다(This section provides background information related to the present disclosure which is not necessarily prior art).

프로폴리스는 이미 B.C. 300년 전에 아프리카, 유럽지방을 중심으로 민간 의약으로 널리 사용되었던 천연 물질이었으나, 근세기에 들어 페니실린, 마이신 등의 의약품이 발명되면서 많이 잊혔는데, 화학약품들의 독성과 부작용을 알게 되면서 다시 세계적으로 주목을 받고 있다.

이러한 프로폴리스의 주요 작용으로서는 항염증, 항균, 항산화, 국소마취, 항바이러스, 세포부활, 조직 재생작용 등이 있으며, 최근 제암 및 항암작용도 있는 것으로 연구, 발표되고 있다.

상술한 바와 같은 프로폴리스는 약 50% 이상이 왁스성분으로 구성되어 있는데, 탄소가 수십 개 이상 단단히 결합된 구조를 가지고 있고, 이 결합조직에 유효성분인 플라보노이드류가 단단히 결합된 지용성 상태이기 때문에, 온도조건과 용매조건이 맞지 않으면 추출이 쉽지 않다.

종래에 알려진 프로폴리스의 추출법으로는 에탄올 추출법, 미셀화 추출법, 물 추출법, 초임계 추출법 등이 있는데, 특히, 에탄올 추출법은 가장 보편적으로 사용되고 있으며, 다른 방법에 비해 플라보노이드가 가장 많이 추출되는 방법으로 국제적으로 인정을 받아 가장 널리 사용되는 방법이다.

한편, 상술한 바와 같은 프로폴리스의 각종 항균 작용을 이용하면서 다른 천연 물질들을 함유한 복합 조성물에 대한 연구 개발이 지속적으로 진행되고 있다.

1. 한국등록특허공보 제10-1919499호(2018.11.12.등록)

본 발명(Disclosure)은, 에탄올 추출법을 통해 추출된 프로폴리스과 열수 추출법 또는 유기용매 추출법을 통해 추출된 티트리 추출물을 함유하는 복합 항균 조성물을 제공함으로써, 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물의 제공을 일 목적으로 한다.

그리고, 본 발명(Disclosure)은, 프로폴리스 분말에 대해 에탄올을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 프로폴리스에 대한 에탄올 추출 공정을 수행함으로써, 프로폴리스에 함유된 플라보노이드를 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물의 제공을 일 목적으로 한다.

한편, 본 발명(Disclosure)은, 티트리 분말에 대해 물을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 티트리에 대한 열수 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물의 제공을 일 목적으로 한다.

또한, 본 발명(Disclosure)은, 티트리 분말에 대해 메탄올을 가하여 기 설정된 시간범위 동안 교반 및 혼합하는 방식으로 1차 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수한 후 농축하며, 농축액에 다이클로로메테인 또는 에틸아세테이트를 첨가하여 분획하는 방식으로 2차 추출하고, 각각의 분획물을 혼합 농축하는 방식으로 티트리에 대한 유기용매 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물의 제공을 일 목적으로 한다.

여기서는, 본 발명의 전체적인 요약(Summary)이 제공되며, 이것이 본 발명의 외연을 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다(This section provides a general summary of the disclosure and is not a comprehensive disclosure of its full scope or all of its features).

상기한 과제의 해결을 위해, 본 발명을 기술하는 여러 관점들 중 어느 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물은, 프로폴리스 45-55 중량% 및 티트리 추출물 45-55 중량%를 포함하되, 상기 프로폴리스는 에탄올 추출 공정을 통해 수득되고, 상기 티트리 추출물은 열수 추출 공정 또는 유기용매 추출 공정을 통해 수득된다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 에탄올 추출 공정은, 프로폴리스 분말 100중량부에 대해 에탄올 1800-2200중량부를 가하여 20-60℃에서 5.5-6.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 에탄올 추출 공정은, 상기 상등액의 회수를 위해 2800-3200rpm에서 8-12분동안 원심 분리할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 에탄올 추출 공정은, 상기 상등액의 회수한 후 -22 내지 -18℃에서 45-50시간동안 냉동 보관한 후 왁스를 제거할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 열수 추출 공정은, 티트리 분말 100중량부에 대해 물 450-550중량부를 가하여 80-90℃에서 3.5-4.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 열수 추출 공정은, 상기 상등액의 회수를 위해 7500-8500rpm에서 15-25분동안 원심 분리할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 유기용매 추출 공정은, 티트리 분말 100중량부에 대해 메탄올(methanol) 450-550중량부를 가하여 45-50시간동안 교반 및 혼합하는 방식으로 1차 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수한 후 농축하며, 농축액에 다이클로로메테인(dichloromethane) 또는 에틸아세테이트(ethyl acetate)을 첨가하여 분획하는 방식으로 2차 추출하고, 각각의 분획물을 혼합 농축할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 유기용매 추출 공정은, 상기 다이클로로메테인을 첨가할 경우 멸균증류수 100중량부에 대해 상기 다이클로로메테인 100중량부를 첨가하여 분획할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기 유기용매 추출 공정은, 상기 에틸아세테이트를 첨가할 경우 멸균증류수 100중량부에 대해 상기 에틸아세테이트 100중량부를 첨가하여 분획할 수 있다.

발명의 일 관점(aspect)에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물에서, 상기유기용매 추출 공정은, 상기 상등액의 회수를 위해 7500-8500rpm에서 15-25분동안 원심 분리할 수 있다.

본 발명에 따르면, 에탄올 추출법을 통해 추출된 프로폴리스과 열수 추출법 또는 유기용매 추출법을 통해 추출된 티트리 추출물을 함유하는 복합 항균 조성물을 제공함으로써, 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

그리고, 본 발명에 따르면, 프로폴리스 분말에 대해 에탄올을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 프로폴리스에 대한 에탄올 추출 공정을 수행함으로써, 프로폴리스에 함유된 플라보노이드를 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

한편, 본 발명에 따르면, 티트리 분말에 대해 물을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 티트리에 대한 열수 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

또한, 본 발명에 따르면, 티트리 분말에 대해 메탄올을 가하여 기 설정된 시간위 동안 교반 및 혼합하는 방식으로 1차 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수한 후 농축하며, 농축액에 다이클로로메테인 또는 에틸아세테이트을 첨가하여 분획하는 방식으로 2차 추출하고, 각각의 분획물을 혼합 농축하는 방식으로 티트리에 대한 유기용매 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따라 프로폴리스의 에탄올 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이며,
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 플라보노이드 분석에 대응하는 흡광도 검량선을 나타낸 도면이고,
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 플라보노이드 추출 수율을 설명하기 위한 도면이며,
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 항균 활성을 설명하기 위한 도면이고,
도 5는 본 발명의 실시예에 따라 티트리의 열수 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이며,
도 6은 본 발명의 실시예에 따라 티트리의 유기용매 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이다.

이하, 본 발명에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물은 구현한 실시형태를 도면을 참조하여 자세히 설명한다.

다만, 본 발명의 본질적인(intrinsic) 기술적 사상은 이하에서 설명되는 실시형태에 의해 그 실시 가능 형태가 제한된다고 할 수는 없고, 본 발명의 본질적인(intrinsic) 기술적 사상에 기초하여 통상의 기술자에 의해 이하에서 설명되는 실시형태를 치환 또는 변경의 방법으로 용이하게 제안될 수 있는 범위를 포섭함을 밝힌다.

또한, 이하에서 사용되는 용어는 설명의 편의를 위하여 선택한 것이므로, 본 발명의 본질적인(intrinsic) 기술적 사상을 파악하는 데 있어서, 사전적 의미에 제한되지 않고 본 발명의 기술적 사상에 부합되는 의미로 적절히 해석되어야 할 것이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세히 설명하기로 한다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따라 프로폴리스의 에탄올 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이며, 도 2는 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 플라보노이드 분석에 대응하는 흡광도 검량선을 나타낸 도면이고, 도 3은 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 플라보노이드 추출 수율을 설명하기 위한 도면이며, 도 4는 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스의 항균 활성을 설명하기 위한 도면이고, 도 5는 본 발명의 실시예에 따라 티트리의 열수 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이며, 도 6은 본 발명의 실시예에 따라 티트리의 유기용매 추출 방식을 개념적으로 예시한 도면이다.

도 1 내지 도 6을 참조하면, 본 발명의 실시예에 따른 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물은 프로폴리스 45-55 중량% 및 티트리 추출물 45-55 중량%를 포함하되, 프로폴리스는 에탄올 추출 공정을 통해 수득될 수 있고, 티트리 추출물은 열수 추출 공정 또는 유기용매 추출 공정을 통해 수득될 수 있다.

여기에서, 프로폴리스 추출에 대해 설명하면, 도 1에 도시한 바와 같이 에탄올 추출 공정에서는 프로폴리스 분말 100중량부에 대해 에탄올 1800-2200중량부를 가하여 20-60℃에서 5.5-6.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축할 수 있다.

이러한 에탄올 추출 공정에서는 상등액의 회수를 위해 2800-3200rpm에서 8-12분동안 원심 분리할 수 있고, 상등액의 회수한 후 -22 내지 -18℃에서 45-50시간동안 냉동 보관한 후 왁스를 제거(여과)할 수 있다.

상술한 바와 같이 본 발명의 실시예에서는 프로폴리스 분말에 대해 에탄올을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 프로폴리스에 대한 에탄올 추출 공정을 수행함으로써, 프로폴리스에 함유된 플라보노이드를 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

예를 들어 상술한 바와 같은 프로폴리스의 추출 및 항균 활성의 특성에 대해 구체적으로 설명하면, 프로폴리스 원괴를 에탄올 추출법을 이용하여 추출 온도, 시간, 용매의 총량, 용매의 비율 등을 변화시키면서 최적 추출조건을 도출하고, 추출 용매의 비율에 따른 항균 특성을 조사하기 위해 디스크확산검사법(paper disc method)을 이용하여 추출된 프로폴리스의 성능을 확인하고자 한다.

먼저, 프로폴리스 원괴에서 이물질을 제거하고, 9메쉬(mesh)(2mm)의 체를 통해 거른 후 암소 냉동(예를 들면, -20℃)으로 보관화여 사용하였으며, 프로폴리스 분말 5g에 온도조건(예를 들면, 20, 40, 60, 80℃), 시간조건(예를 들면, 0.5, 1, 2, 4, 6, 12, 24h), 용매의 총량조건(예를 들면, 3, 5, 10, 15, 20배), 용매의 농도조건(예를 들면, water, 에탄올 50, 60, 70, 80, 90, 99.99%)을 달리하여 추출한 후, 원심분리기(예를 들면, 3000rpm, 10min)로 분리하여 상등액을 취하고, 냉동 보관(예를 들면, -20℃, 48h)한 후 여과지로 왁스를 제거하였다.

그리고, 왁스가 제거된 프로폴리스 추출액을 진공농축기를 이용하여 농축하였는데, 농축된 프로폴리스의 플라보노이드 측정을 위해 UV분광기(UV Spectrophotometer)를 이용하여 분석하였다. 여기에서, 플라보노이드 분석은 케르세틴(quercetin)을 이용하여 각 농도(예를 들면, 0.01, 0.02, 0.04, 0,06, 0.08, 0.1mg/ml)에 에탄올을 희석하여 조제하고, 흡광도를 구하여 얻은 검량선은 도 2에 도시한 바와 같이 나타나는 것을 확인하였다.

상술한 바와 같은 추출조건의 최적화를 상세하게 설명하면, 도 3에 도시한 바와 같이 온도에 따른 프로폴리스의 추출 수율은 20℃에서 가장 큰 수율을 나타내는 것을 확인할 수 있었는데, 이는 온도가 증가함에 따라 왁스 성분의 추출량이 증가되어 나타난 결과로 판단된다.

또한, 프로폴리스 중에 함유된 플라보노이드를 기준으로 할 경우 에탄올 추출 시 60℃에서 최적 추출 온도로 적합한 것으로 나타나는 것을 확인할 수 있었고, 이에 따라 20-60℃의 추출 온도범위가 최적온도조건으로 설정될 수 있다.

그리고, 추출 시간에 따른 추출물의 추출 수율, 플라보노이드 함량은 시간에 따라 증가된 양을 보이다가 일정 시간 이후 증가폭이 크게 감소되는 것으로 나타나는 것을 확인할 수 있는데, 본 실험에서 최적추출 시간은 6시간 동안 추출 하였을 경우 최대값을 나타내는 것을 알 수 있었고, 이에 따라 5.5-6.5시간의 추출 시간범위가 최적시간조건으로 설정될 수 있다.

한편, 용매의 총량에 따른 추출물은 프로폴리스에 대한 에탄올의 비가 3배와 5배일 때는 용매의 양이 지나치게 적어 플라보노이드 성분이 충분히 추출되지 못하였으나, 20배로 증가하였을 때는 추출 수율, 플라보노이드 함량이 모두 최적조건으로 나타내는 것을 확인할 수 있었고, 이에 따라 프로폴리스 분말 100중량부에 대해 에탄올 1800-2200중량부를 첨가하는 중량범위가 최적중량조건으로 설정될 수 있다.

또한, 프로폴리스를 물로 추출하였을 때는 플라보노이드 성분의 추출이 거의 이루어 지지 않고 수율도 매우 낮았는데, 이는 프로폴리스에 함유되어 있는 플라보노이드가 난수용성이고 에탄올에 쉽게 용출되기 때문이며 결과적으로 프로폴리스의 물 추출은 적합하지 않는 것으로 판단된다.

반면에, 실험에서 70% 농도의 에탄올에서 가장 높은 플라보노이드 함량을 나타내었고, 수율도 높게 유지되는 것을 확인할 수 있었고, 이에 따라 65-75% 농도의 에탄올을 이용하는 농도범위가 최적농도조건으로 설정될 수 있다.

한편, 황색 포도상구균은 호기성 혹인 통성혐기성 그람양성 세균으로 사람의 피부나 점막에 집락을 형성하며, 높은 보균율로 인해 인체에 매우 흔한 감염증을 일으키는데, 세균은 MHA(Mueller Hinton Agar) 사면배지에서 배양한 후, 각 균주의 균총을 백금이로 취하여 100ml MHB(Muller-Hinton broth)에 접종하여 37℃에서 2시간 배양하여 활성화시키고, 660nm에서 투과도가 10%가 되도록 MHB로 희석한 것을 시험용 균주로 사용하였다.

또한, 항균 활성 시험방법 중 디스크확산검사법(disc diffusion method)은 페트리디시(petri dish)에 MHA를 4mm 정도 부어서 굳힌 후, 한천(agar) 및 각 시험용 균주를 각각 0.7%, 1%로 첨가한 한천배지에 4-5mm두께로 도말하여 굳히며, 페이퍼디시(paper dish, 직경 8mm)에 추출된 분획물을 50㎕씩 흡수시킨 후 용매를 완전히 증발시키고, 페트리디시에 밀착시킨 후 37℃에서 24시간 배양하여 균의 증식이 억제된 클리어존(clear zone)을 조사하여 항균성을 측정하였다.

상술한 바와 같은 항균성 측정 결과에 대해 상세히 설명하면, 도 4에 도시한 바와 같이 황색 포도상구균에 대한 프로폴리스의 디스크확산검사법(disc diffusion method)에서 에탄올 추출물에 대한 항균 활성의 경우 50%에서 가장 높은 감수성을 나타내었고, 농도가 높아질수록 감수성이 감소하였음을 확인할 수 있었고, 24h보다 48h동안 실험값이 감수성이 높게 나왔으며, 이는 시간이 지날수록 높은 항균활성을 가지고, 프로폴리스의 항균활성 지속성이 있음을 알 수 있었다. 한편, 물(water) 추출물에 의한 경우에는 감수성을 나타내지 않았음을 확인하였다.

한편, 티트리 (Melaleuca alternifolia , Tea tree)는 4-터피놀(terpineol-4), 시놀(cineol), 시멘(cymene), 세스퀴테르펜(sesquiterpenes) 등을 함유하여 살균 효과와 피부 보습효과를 지니고 있으며, 여드름 염증 완화, 비듬 치료, 통증 완화, 우울증 해소 등의 특성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.

상술한 바와 같은 티트리 추출에 대해 설명하면, 도 5에 도시한 바와 같이 열수 추출 공정에서는 티트리 분말 100중량부에 대해 물 450-550중량부를 가하여 80-90℃에서 3.5-4.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축할 수 있다.

이러한 열수 추출 공정에서는 상등액의 회수를 위해 7500-8500rpm에서 15-25분동안 원심 분리할 수 있다.

상술한 바와 같이 본 발명의 실시예에서는 티트리 분말에 대해 물을 가하여 기 설정된 온도범위에서 기 설정된 시간범위 동안 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 방식으로 티트리에 대한 열수 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

한편, 도 6에 도시한 바와 같이 상기 유기용매 추출 공정에서는 티트리 분말 100중량부에 대해 메탄올(methanol) 450-550중량부를 가하여 45-50시간동안 교반 및 혼합하는 방식으로 1차 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수한 후 농축하며, 농축액에 다이클로로메테인(dichloromethane) 또는 에틸아세테이트(ethyl acetate)을 첨가하여 분획하는 방식으로 2차 추출하고, 각각의 분획물을 혼합 농축할 수 있다.

이러한 유기용매 추출 공정에서는 다이클로로메테인을 첨가할 경우 멸균증류수 100중량부에 대해 다이클로로메테인 100중량부를 첨가하여 분획할 수 있고, 에틸아세테이트를 첨가할 경우 멸균증류수 100중량부에 대해 에틸아세테이트 100중량부를 첨가하여 분획할 수 있다.

또한, 유기용매 추출 공정에서는 상등액의 회수를 위해 7500-8500rpm에서 15-25분동안 원심 분리할 수 있다.

상술한 바와 같이 본 발명의 실시예에서는 티트리 분말에 대해 메탄올을 가하여 기 설정된 시간범위 동안 교반 및 혼합하는 방식으로 1차 추출하고, 원심 분리를 통해 상등액을 회수한 후 농축하며, 농축액에 다이클로로메테인 또는 에틸아세테이트을 첨가하여 분획하는 방식으로 2차 추출하고, 각각의 분획물을 혼합 농축하는 방식으로 티트리에 대한 유기용매 추출 공정을 수행함으로써, 티트리에 함유된 4-터피놀 성분을 효과적으로 추출 및 농축하여 그 항균 작용을 통해 항균 조성물의 항균 효능을 향상시킬 수 있다.

예를 들어 상술한 바와 같은 티트리 추출물의 추출에 대해 구체적으로 설명하면, 열수 추출 공정을 이용한 티트리 열수추출물은 티트리 분말 중량의 5배의 물을 가하고 85 ℃에서 4시간씩 3회 반복 추출하였다.

또한, 유기용매 추출 공정을 이용한 티트리 추출물은 티트리 분말에 추출용매인 메탄올을 시료 중량의 5배(w/v)를 가하여 실온에서 혼합교반기(orbital shaker)로 48시간 동안 1차 추출하였으며, 추출액 회수를 위하여 8.000rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 회수하고, 여과지로 여과한 후 회전감압농축기를 이용하여 농축하였으며, 농축액에 500mL의 멸균증류수와 동량의 다이클로로메테인을 첨가하여 분획하였다.

한편, 같은 방법으로 메탄올을 이용하여 1차 추출한 후 에틸아세테이트를 첨가하여 분획물을 획득하였고, 분획이 끝난 각각의 유기용매 추출물은 함께 회전감암농축기를 이용하여 농축하여 수득할 수 있다.

이 후, 그 농축액을 동결건조하여 분말화한 후 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 이용하여 10mg/mL 농도로 제조하여 항균특성 실험에 사용한 결과, 열수추출물 및 유기용매 분획추출물에서 그람(gram) 양성균인 장염비브리오(vibrio parahaemolyticus)의 생장 억제를 확인할 수 있었고, 추출물의 장염비브리오에 대한 억제능을 확인한 결과, 10mg/mL 농도에서 99.9% 이상의 억제능이 나타남을 확인할 수 있었으며, 추출물의 항진균 활성 연구 결과, 최소 45시간까지 아스페르길루스 니제르(aspergillus niger), 케토미움속(chaetomium globosum), 페니실리움 피노피룸(penicillium pinophilum) 의 성장 억제를 확인할 수 있었고, 처리 농도를 높일 경우 더 좋은 활성 특성을 기대할 수 있음을 알 수 있었다.

따라서, 본 발명은 에탄올 추출법을 통해 추출된 프로폴리스과 열수 추출법 또는 유기용매 추출법을 통해 추출된 티트리 추출물을 함유하는 복합 항균 조성물을 제공함으로써, 항균 조성물의 항균 효능을 더욱 더 향상시킬 수 있다.

Claims (10)

1. 에탄올 추출 공정을 통해 수득되는 45 중량%의 프로폴리스 및 열수 추출 공정을 통해 수득되는 55 중량%의 티트리 추출물을 포함하되,
   상기 에탄올 추출 공정은, 프로폴리스 분말 100중량부에 대해 에탄올 2200중량부를 가하여 60℃에서 6.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 3200rpm에서 12분동안 원심 분리하여 상등액을 회수 한 후, -18℃에서 50시간동안 냉동 보관한 후 왁스를 제거하며,
   상기 열수 추출 공정은, 티트리 분말 100중량부에 대해 물 550중량부를 가하여 90℃에서 4.5시간동안 추출하고, 원심 분리를 통해 8500rpm에서 25분동안 원심 분리하여 상등액을 회수 및 여과한 후 농축하는 프로폴리스 및 티트리 추출물을 함유한 복합 항균 조성물.
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