KR102271480B1 - Method for culture of Cordyceps militaris containing high concentration cordycepin - Google Patents

Abstract

본 발명은 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 과일 또는 약용식물을 착즙하고 남은 고형물에 균사체를 접종하고, 균사체 발달을 위한 적색파장 및 코디세핀 분비를 촉진하는 청색파장에 노출하는 것을 통해 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초를 배양하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin. More specifically, a method of culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin by inoculating the mycelium on the solid material remaining after squeezing fruit or medicinal plants, and exposing to a red wavelength for mycelium development and a blue wavelength to promote the secretion of cordycepin is about

Description

고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법{Method for culture of Cordyceps militaris containing high concentration cordycepin}Method for culture of Cordyceps militaris containing high concentration cordycepin

본 발명은 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 과일 또는 약용식물을 착즙하고 남은 고형물에 배양된 동충하초 균사체를 접종하고, 균사체 생장을 위한 적색파장 및 코디세핀 합성을 촉진하는 청색파장에 노출하는 것을 통해 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초를 배양하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin. More specifically, by inoculating the cultured Cordyceps mycelium in the solid material remaining after squeezing fruit or medicinal plants, and exposing to a red wavelength for mycelium growth and a blue wavelength to promote the synthesis of cordycepin, Cordyceps containing a high concentration of cordycepin It relates to a method of culturing.

동충하초는 겨울에는 곤충의 몸에 있다가 여름에는 풀처럼 나타난다는 데서 이름지어진 일종의 버섯으로, 곰팡이의 일종인 동충하초균이 살아있는 곤충의 몸속으로 들어가 발생하는 곤충기생성 약용버섯이다. 동충하초로는 코디셉스 시네시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀리타리스 동충하초(Codyceps militaris, 번데기 동충하초), 눈꽃동충하초(Paecilomyces japonica) 등이 잘 알려져 있다.Cordyceps Cordyceps is a kind of mushroom named because it stays in the body of insects in winter and appears like grass in summer. Cordyceps sinensis ( Cordyceps sinensis ), Cordyceps militaris Cordyceps Cordyceps ( Codyceps militaris , Pupa Cordyceps Cordyceps ), Snow Flower Cordyceps ( Paecilomyces japonica ) and the like are well known.

동충하초는 동의보감을 통해서 오랫동안 많은 효능이 인정되어 각종 성인병 질환의 치료 및 건강유지를 위하여 사용되어왔다. 중국에서는 육상선수들이 동충하초를 복용하고 기적의 기록들을 나타낸다고 하여 동충하초를 3대 천연식품 건강 명약으로 인정하고 있다.Cordyceps has long been recognized for its efficacy through Donguibogam, and has been used to treat various adult diseases and maintain health. In China, Cordyceps is recognized as one of the top three natural food health medicines because it is said that track and field athletes take it and show miraculous records.

동충하초는 작물들 중 단백질 함량이 가장 높은 (건조함량의 28%이상) 군에 속하고, 면역력을 강화시키는 물질이 다량 함유되어 있다. 동충하초의 면역활성물질 중에는 '코디세핀(Cordycepin :3'-deoxy-adenosine)'이 포함되어 있으며, 동충하초 중에서도 밀리타리스 동충하초가 다른 동충하초에 비하여 코디세핀 함량이 월등히 높다. 코디세핀은 핵산 물질로서 세포의 저하된 면역기능을 활성화하며 정상세포가 암세포로 전환되는 것을 방지하는 작용을 한다. 동충하초를 투입한 임상실험에서 암세포를 죽이는 면역세포인 NK세포(natural killer cell/자연살해세포)와 면역세포에서 분비되는 사이토카인의 함량이 18%~25% 증가되는 것으로 확인되어 혈액암치료용으로 활용되고, 건강기능식품으로서도 많은 관심을 받고 있다. 이러한 결과를 토대로 국내에서는 코디세핀이 함유된 동충하초가 버섯으로는 유일하게 건강기능식품으로 식약처 인증을 받았다. 또한, 동충하초는 혈압과 당뇨를 조절하는 효능과 폐와 간 기능 등에도 많은 도움을 주는 것으로 임상연구결과가 발표되었다.Cordyceps cordyceps belongs to the group with the highest protein content (more than 28% of dry content) among crops, and contains a large amount of substances that strengthen immunity. Among the immunoactive substances of Cordyceps Cordyceps, 'Cordycepin (3'-deoxy-adenosine)' is included, and among cordyceps, Militaris Cordyceps has a significantly higher content of cordycepin than other Cordyceps. Cordycepin is a nucleic acid substance that activates the reduced immune function of cells and prevents normal cells from being converted into cancer cells. In a clinical trial using Cordyceps Cordyceps, it was confirmed that the content of NK cells (natural killer cells) and cytokines secreted from immune cells, which are immune cells that kill cancer cells, increased by 18% to 25%, so that it can be used for the treatment of blood cancer. It is used as a health functional food and is receiving a lot of attention. Based on these results, Cordyceps mushrooms containing cordycepin are the only ones to be certified by the Ministry of Food and Drug Safety as a health functional food in Korea. In addition, the results of a clinical study were announced that Cordyceps Cordyceps is effective in regulating blood pressure and diabetes, as well as helping lung and liver functions.

동충하초는 버섯류 중에서도 많은 소비가 이루어지고 있지만 천연에서 채집되는 양은 매우 적어서 수요를 충당할 수 없으므로 전 세계의 많은 농가들이 인공재배법으로 재배사를 만들어서 대량 재배하고 있다. 그러나 동충하초는 식물에 비해 성장속도가 느리고, 외부환경에 민감하여 농약을 살포할 수 없는 균류이어서 재배가 매우 까다롭다. 대량재배에 성공하기는 하였으나 오랫동안 재배를 해온 농가에서도 오염으로 인하여 동충하초 재배의 수확률은 저조한 것으로 알려져 있다. 즉, 10개를 배양하여 수확하면 1~2개 정도가 오염되거나 이상 균주가 성장하여 수확율이 낮아진다.Cordyceps is consumed a lot among mushrooms, but the amount collected from nature is very small and cannot meet the demand, so many farms around the world are mass-cultivating growers using artificial cultivation methods. However, cordyceps has a slower growth rate than plants, and is very difficult to cultivate because it is a fungus that cannot spray pesticides because it is sensitive to the external environment. Although it succeeded in mass cultivation, it is known that the yield of cordyceps cultivation is low due to contamination even in farms that have been cultivated for a long time. That is, if 10 are cultivated and harvested, about 1 or 2 are contaminated or abnormal strains grow, which lowers the yield.

현재 한국등록특허 제10-1446001호, 한국공개특허 제10-2009-0054114호 등 코디세핀의 함량을 증가시키기 위한 동충하초의 재배방법에 관한 연구가 많이 이루어지고 있지만, 기존의 코디세핀의 함량에 비해 크게 증가하는 효과를 나타내지 않아 고농도 코디세핀을 생산하는 기술이 절실히 요구되고 있다.Currently, a lot of research is being done on methods of cultivation of Cordyceps Cordyceps to increase the content of cordycepin, such as Korean Patent No. 10-1446001 and Korean Patent Publication No. 10-2009-0054114, but compared to the existing content of cordycepin, Since it does not show a significantly increasing effect, a technology for producing high-concentration cordycepin is urgently required.

이에 본 발명자는 과일 또는 약용식물에서 동충하초를 배양하는 방법을 연구하던 중, 빛의 파장을 다르게 조사하여 동충하초를 배양하면 코디세핀의 함량이 증가하는 것을 확인하여 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초를 배양하는 방법을 완성하였다.Accordingly, the present inventors confirmed that the content of cordycepin increases when culturing Cordyceps by irradiating different wavelengths of light while researching a method of culturing Cordyceps Cordyceps in fruits or medicinal plants. Culturing Cordyceps containing high concentration Cordyceps method was completed.

한국등록특허 제10-1446001호(발명의 명칭 : 코디세핀 함량이 향상된 동충하초 콩 및 그 제조방법, 출원인 : 황화석, 등록일자 : 2014.09.23.)Korean Patent Registration No. 10-1446001 (Title of the invention: Cordyceps bean with improved cordycepin content and manufacturing method thereof, Applicant: Hwanghwaseok, Registration date: September 23, 2014) 한국공개특허 제10-2009-0054114호(발명의 명칭 : 번데기동충하초버섯의 인공재배시 고함량의 코디세핀을 안정적으로 생산하는 방법, 출원인 : 예산군농업기술센터, 공개일자 : 2009.05.29.)Korean Patent Laid-Open Patent No. 10-2009-0054114 (Title of the invention: Method for stably producing high content of cordycepin in artificial cultivation of Pupa Cordyceps Cordyceps mushroom, Applicant: Yesan-gun Agricultural Technology Center, Publication date: 2009.05.29.) 한국공개특허 제10-2017-0121866호(발명의 명칭 : 밀리타리스 동충하초 추출물, 그 제조방법 및 이로부터 분리된 코디세핀을 유효성분으로 포함하는 간암 예방 또는 치료용 조성물, 출원인 : 주식회사머쉬텍, 공개일자 : 2017.11.03.)Korean Patent Laid-Open Patent No. 10-2017-0121866 (Title of the invention: Militaris Cordyceps extract, preparation method thereof, and composition for preventing or treating liver cancer comprising cordycepin isolated therefrom as an active ingredient, Applicant: Mershtech Co., Ltd., Release date: 2017.11.03.)

본 발명의 목적은 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법을 제공하는 데에 있다. 보다 상세하게는 과일 또는 약용식물을 착즙하고 남은 고형물에 동충하초 균사체를 접종하고, 배양시 적색파장 및 청색파장을 조사하는 것을 통해 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법을 제공하는 데에 있다.It is an object of the present invention to provide a method for culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin. More specifically, it is to provide a method of culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin by inoculating the solid material remaining after squeezing fruit or medicinal plants, and irradiating red and blue wavelengths during culture.

본 발명은 (제1단계) 과일 또는 약용식물을 착즙하고 착즙 고형물을 제조하는 단계;The present invention comprises the steps of (first step) squeezing a fruit or a medicinal plant and preparing a juiced solid;

(제2단계) 제1단계의 착즙 고형물에 동충하초 균주를 접종하는 단계;(Second step) inoculating the Cordyceps Cordyceps strain into the juiced solid of the first step;

(제3단계) 제2단계의 동충하초 균주를 접종한 고형물을 암배양하며 적색파장을 조사하는 단계; 및(Step 3) Cancer-culturing the solid inoculated with the Cordyceps Cordyceps strain of the second step and irradiating with a red wavelength; and

(제4단계) 제3단계의 암배양 후 명배양하며 청색파장을 조사하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법에 관한 것이다.(Step 4) It relates to a method of culturing Cordyceps Cordyceps containing high concentration cordycepin, characterized in that it comprises a; light culture after dark culture of the third step and irradiating a blue wavelength.

상기 제1단계의 과일 또는 약용식물은 사과, 복분자, 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 아로니아(Aronia melanocarpa)인 것일 수 있다.The fruits or medicinal plants of the first step may be apples, bokbunja, deodeok ( Codonopsis lanceolata ) or aronia ( Aronia melanocarpa ).

상기 제2단계의 동충하초 균주는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)인 것일 수 있다.The cordyceps strain of the second step may be Cordyceps militaris.

상기 제3단계의 적색파장은 2~5일간 640~700㎚의 파장으로 조사하는 것일 수 있다.The red wavelength of the third step may be irradiated with a wavelength of 640 to 700 nm for 2 to 5 days.

상기 제4단계의 청색파장은 20~40일간 400~500㎚의 파장으로 조사하는 것일 수 있다.The blue wavelength of the fourth step may be irradiated with a wavelength of 400 to 500 nm for 20 to 40 days.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

상기 제2단계의 동충하초 균주는 먼저 고체배지에서 균사체를 배양한 후 배양된 균사체를 분쇄할 수 있고, 이후 분쇄된 균사체를 YM 액체배지에서 배양한 것일 수 있다. 이때 고체배지는 용매 1ℓ를 기준으로 Yeast extract 2.0~4.0g, Malt extract 2.0~4.0g, Peptone 3.0~7.0g, Glucose 5.0~15.0g 및 Agar 15.0~25.0g을 함유하는 것일 수 있다. 또한, 상기 YM 액체배지는 용매 1ℓ를 기준으로 Yeast extract 2.0~4.0g, Malt extract 2.0~4.0g, Peptone 3.0~7.0g, 및 Glucose 5.0~15.0g을 함유하는 것일 수 있다.In the second step, the Cordyceps cordyceps strain may first be cultured in a solid medium, then the cultured mycelium may be crushed, and then the crushed mycelium may be cultured in a YM liquid medium. At this time, the solid medium may contain 2.0 ~ 4.0 g of yeast extract, 2.0 ~ 4.0 g of malt extract, 3.0 ~ 7.0 g of Peptone, 5.0 ~ 15.0 g of glucose and 15.0 ~ 25.0 g of Agar based on 1 liter of solvent. In addition, the YM liquid medium may contain 2.0 to 4.0 g of yeast extract, 2.0 to 4.0 g of malt extract, 3.0 to 7.0 g of Peptone, and 5.0 to 15.0 g of glucose based on 1 liter of solvent.

상기 제2단계의 착즙 고형물에 동충하초 균주를 접종하는 것은 상기 제1단계의 착즙 고형물과 아스파테이트를 첨가한 YM 액체배지를 혼합하여 배지를 제조한 후 코디셉스 밀리타리스 균주를 배양할 수 있다. 상기 아스파테이트는 YM 액체배지에 1.0~10.0g이 첨가될 수 있다. 아스파테이트가 1.0g 미만이면 동충하초 균주가 충분히 배양되지 않거나 코디세핀이 충분히 분비되지 않을 수 있으며, 10.0g 초과이면 코디세핀 함량의 큰 차이가 없어 경제적으로 바람직하지 못하다.Inoculating the Cordyceps Cordyceps strain into the juiced solids of the second step may be performed by mixing the juiced solids of the first step with the YM liquid medium containing aspartate to prepare a medium, and then culturing the Cordyceps militaris strain. 1.0 to 10.0 g of the aspartate may be added to the YM liquid medium. If the amount of aspartate is less than 1.0 g, the Cordyceps strain may not be sufficiently cultured or cordycepin may not be sufficiently secreted, and if it exceeds 10.0 g, there is no significant difference in the content of cordycepin, which is not economically preferable.

상기 제3단계의 암배양시 적색파장은 1~5일간 620~720㎚으로 조사하여 배양하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는 2~3일간 640~700㎚으로 조사하는 것이 좋다. 이때 암배양은 빛이 없는 조건에서 적색파장을 조사하여 배양하는 것일 수 있다.It is preferable to irradiate the red wavelength at 620 to 720 nm for 1 to 5 days during dark culture in the third step. More preferably, it is good to irradiate with 640-700 nm for 2-3 days. In this case, the dark culture may be culturing by irradiating a red wavelength in the absence of light.

상기 제4단계의 명배양시 청색파장은 20~40일간 380~520㎚으로 조사하여 배양하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는 25~30일간 400~500㎚으로 조사하는 것이 좋다. 청색파장 조사기간이 20일 미만이면 충분히 코디세핀이 분비되지 않을 수 있으며, 40일 초과이면 경제적으로 바람직하지 못하다.In the light culture of the fourth step, it is preferable to irradiate with a blue wavelength of 380 to 520 nm for 20 to 40 days and culture. More preferably, it is good to irradiate with 400-500 nm for 25-30 days. If the blue wavelength irradiation period is less than 20 days, cordycepin may not be sufficiently secreted, and if it exceeds 40 days, it is economically undesirable.

또한, 상기 명배양은 광조사량 800~1300 Lux의 조건 하 10~30℃에서 배양하는 것일 수 있다.In addition, the bright culture may be cultured at 10 to 30 ℃ under conditions of 800 to 1300 Lux of light irradiation.

상기 제4단계 이후 배양된 배양물은 착즙하여 착즙 배양물을 제조할 수 있으며, 상기 제1단계에서 과일 또는 약용식물을 착즙한 착즙액과 혼합하여 건강기능식품을 제조할 수 있다. 상기 착즙액 100 중량부 기준 착즙 배양물 1~10 중량부를 혼합하여 제조할 수 있다.The cultured culture after the fourth step may be juiced to prepare a juice culture, and a health functional food may be prepared by mixing the juice obtained by squeezing the fruit or medicinal plant in the first step. It can be prepared by mixing 1 to 10 parts by weight of the juice culture based on 100 parts by weight of the juice.

본 발명은 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법에 관한 것으로, 동충하초 균주를 접종한 후 적색파장 및 청색파장에 노출시킴으로써 균사체의 발달과 코디세핀 분비를 촉진하여 고농도의 코디세핀을 함유하는 동충하초를 수득할 수 있다.The present invention relates to a method for culturing Cordyceps cordyceps containing a high concentration of cordycepin, and after inoculation of a Cordyceps strain, exposure to red and blue wavelengths to promote the development of mycelium and secretion of cordycepin to obtain Cordyceps containing a high concentration of cordycepin can do.

도 1은 본 발명에 따른 동충하초 배양방법의 순서도를 나타낸 것이다.1 shows a flow chart of a method for culturing Cordyceps according to the present invention.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. Rather, it is provided so that this disclosure will be thorough and complete, and will fully convey the spirit of the invention to those skilled in the art.

실시예 1. 과일 또는 약용식물의 착즙Example 1. Juice of fruits or medicinal plants

본 실시예에서는 사과, 복분자, 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 아로니아(Aronia melanocarpa)를 이용하였으며 이를 각각 착즙하였다. 착즙한 후 남은 사과, 복분자, 더덕 또는 아로니아의 착즙 고형물을 본 발명에서 이용하였다.In this example, apples, bokbunja, deodeok ( Codonopsis lanceolata ) or aronia ( Aronia melanocarpa ) were used and each was juiced. The juiced solids of apple, bokbunja, deodeok or aronia remaining after juicing were used in the present invention.

실시예 2. 동충하초 균사체 배양Example 2. Cordyceps mycelium culture

실시예 2-1. 동충하초 균사체의 고체배지 배양Example 2-1. Solid medium culture of Cordyceps mycelium

본 발명에서는 강원도 횡성군 병지방계곡 근처에서 산누에번데기 동충하초를 채집하여 상기 동충하초로부터 분리한 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris) 균주를 고체배지에서 배양하여 사용하였다. In the present invention, Cordyceps militaris was used by culturing Cordyceps militaris strains isolated from Cordyceps Cordyceps collected near the Byeongji Valley in Hoengseong-gun, Gangwon-do in a solid medium.

상기 고체배지는 YM(Yeast Mold) 한천배지를 이용하였다. Yeast extract 3.0g, Malt extract 3.0g, Peptone 5.0g, Dextrose 10.0g 및 Agar 20.0g을 증류수 1ℓ에 혼합하고, 고압증기멸균법(autoclave, 121℃, 1.2기압, 20분간)을 사용하여 멸균하였다. 멸균한 배지를 식히고 고화시켜 고체배지를 제조하였다.As the solid medium, YM (Yeast Mold) agar medium was used. Yeast extract 3.0g, Malt extract 3.0g, Peptone 5.0g, Dextrose 10.0g and Agar 20.0g were mixed in 1 liter of distilled water, and sterilized using autoclave (121°C, 1.2 atm, 20 minutes). The sterilized medium was cooled and solidified to prepare a solid medium.

상기 고체배지에 동충하초 균주인 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris) 균주를 도말하여 25℃에서 7일간 배양하였다. Cordyceps militaris , a Cordyceps militaris strain, was streaked on the solid medium and cultured at 25° C. for 7 days.

실시예 2-2. 동충하초 균사체의 분쇄Example 2-2. Crushing of Cordyceps mycelium

상기 실시예 2-1에서 배양한 동충하초 균사체를 균질기(homogenizer)를 통해 균사체 콜로니의 조직을 분쇄하였다.The mycelium mycelium cultured in Example 2-1 was crushed with the mycelium colony tissue through a homogenizer.

실시예 2-3. 동충하초 균사체의 액체배지 배양Example 2-3. Liquid medium culture of Cordyceps mycelium

상기 실시예 2-2에서 분쇄된 균사체 조직을 YM(Yeast Mold) 액체배지에서 배양을 하였다.The mycelium tissue pulverized in Example 2-2 was cultured in YM (Yeast Mold) liquid medium.

상기 YM 액체배지는 Yeast extract 3.0g, Malt extract 3.0g, Peptone 5.0g, Dextrose 10.0g 및 Vegetable oil 0.15g을 증류수 1ℓ에 혼합하고 고압증기멸균법(autoclave, 121℃, 1.2기압, 20분간)을 사용하여 멸균하여 액체배지를 제조하였다.The YM liquid medium is mixed with Yeast extract 3.0g, Malt extract 3.0g, Peptone 5.0g, Dextrose 10.0g, and Vegetable oil 0.15g in 1 liter of distilled water and autoclave (121°C, 1.2 atm, 20 minutes) is used. and sterilized to prepare a liquid medium.

상기 액체배지에 실시예 2-2에서 분쇄된 균사체 조직(직경 10㎜)을 접종하고 25℃에서 3일간 배양하였다.The mycelium tissue (diameter 10 mm) crushed in Example 2-2 was inoculated into the liquid medium and cultured at 25° C. for 3 days.

실시예 3. 착즙 고형물의 동충하초 배양Example 3. Cordyceps culture of juiced solids

상기 실시예 1에서 제조한 착즙 고형물에 실시예 2에서 배양한 동충하초 균사체를 접종하여 배양하였다.The juiced solids prepared in Example 1 were inoculated with the Cordyceps mycelium cultured in Example 2 and cultured.

먼저, 배양은 상기 실시예 1의 착즙 고형물 100g과 상기 실시예 2의 YM 액체배지에 1, 5, 10g씩 아스파테이트(Aspartate)를 추가로 각각 첨가해 제조한 액체배지와 혼합하여 제조하였고, 상기 실시예 2-3에서 액체배양한 동충하초 균사체 현탁액 15㎖을 혼합하여 배양하였다.First, the culture was prepared by mixing 100 g of the juice solids of Example 1 and the liquid medium prepared by adding 1, 5, and 10 g of aspartate to the YM liquid medium of Example 2, respectively, and the In Example 2-3, 15 ml of the liquid-cultured Cordyceps mycelium suspension was mixed and cultured.

배양조건은 암배양 조건과 명배양 조건으로 나누어 배양하였다. 먼저 암배양 조건은 빛이 없는 25℃ 암조건에서 3일간 640~700㎚의 적색파장을 조사하여 배양하였다. 이후 명배양을 실시하였으며 광조사량 1,000 Lux의 조건에서 30일간 400~500㎚의 청색파장을 조사하여 배양하였다.Culture conditions were divided into dark culture conditions and light culture conditions. First, the dark culture conditions were irradiated with a red wavelength of 640-700 nm for 3 days in a dark condition at 25° C. without light. After that, light culture was carried out and cultured by irradiating a blue wavelength of 400 to 500 nm for 30 days under the condition of light irradiation dose of 1,000 Lux.

구분division 내용Contents 실시예 3-1Example 3-1 아스파테이트 1g을 추가한 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in medium supplemented with 1 g of aspartate 실시예 3-2Example 3-2 아스파테이트 5g을 추가한 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in medium supplemented with aspartate 5g 실시예 3-3Example 3-3 아스파테이트 10g을 추가한 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in medium supplemented with aspartate 10g

비교예 1. 배양 조건을 다르게 하여 배양한 동충하초 균사체Comparative Example 1. Cordyceps mycelium cultured under different culture conditions

상기 실시예 3과 같이 동충하초를 배양하되 배양조건을 다르게 하여 배양하였다. 더욱 상세하게는 적색파장 및 청색파장 조사유무를 다르게 하여 배양하였으며, 또한 암배양시 청색파장을 조사하고, 명배양시 적색파장을 조사하여 배양하였으며 이를 하기 표 2에 나타내었다.Cordyceps was cultured as in Example 3, but under different culture conditions. In more detail, the culture was performed with different irradiation with red and blue wavelengths, and the culture was performed by irradiating a blue wavelength during dark culture and irradiating with a red wavelength during light culture, which is shown in Table 2 below.

구분division 배양조건incubation conditions 암배양Cancer culture 명배양bright culture 비교예 1-1Comparative Example 1-1 적색파장red wavelength 백색파장white wavelength 비교예 1-2Comparative Example 1-2 파장 조사 없음No wavelength irradiation 백색파장+청색파장White Wave + Blue Wave 비교예 1-3Comparative Example 1-3 파장 조사 없음No wavelength irradiation 파장 조사 없음No wavelength irradiation 비교예 1-4Comparative Example 1-4 청색파장blue wavelength 백색파장+적색파장White Wave + Red Wave 비교예 1-5Comparative Example 1-5 적색파장red wavelength 백색파장+적색파장White Wave + Red Wave 비교예 1-6Comparative Example 1-6 청색파장blue wavelength 백색파장+청색파장White Wave + Blue Wave

비교예 2. 아스파테이트 함량을 다르게 하여 배양한 동충하초 균사체Comparative Example 2. Cordyceps mycelium cultured with different aspartate content

상기 실시예 3과 같은 방법으로 동충하초를 배양하되 배지에 첨가되는 아스파테이트 함량을 다르게 하여 배양하였다. 아스파테이트 함량을 다르게 한 배지에서 배양한 동충하초 균사체를 하기 표 3에 나타내었다.Cordyceps was cultured in the same manner as in Example 3, but the aspartate content added to the medium was varied. Cordyceps mycelium cultured in a medium with different aspartate content is shown in Table 3 below.

구분division 내용Contents 비교예 2-1Comparative Example 2-1 아스파테이트를 추가하지 않은 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in aspartate-free medium 비교예 2-2Comparative Example 2-2 아스파테이트 0.5g을 추가한 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in medium supplemented with aspartate 0.5 g 비교예 2-3Comparative Example 2-3 아스파테이트 15g을 추가한 배지에서 배양한 동충하초 균사체Cordyceps mycelium cultured in medium supplemented with aspartate 15g

실험예 1. 코디세핀 함량 측정Experimental Example 1. Cordycepin content measurement

본 실험예에서는 상기 실시예 3 및 비교예 1, 2에서 배양한 동충하초 균사체의 코디세핀 함량을 측정하였다.In this experimental example, the cordycepin content of the cordyceps mycelium cultured in Example 3 and Comparative Examples 1 and 2 was measured.

코디세핀 함량 측정은 고속액체크로마토그래피(HPLC, Agilent 1100, series, 미국)를 사용하였으며, 실험조건은 이동상(Mobil phase) : 아세토나이트릴(Acetonitrile) : 물(water) = 10 : 90 유속 : 0.8㎖/min 온도 : 25℃ 파장 : 260㎚ Collumn : ODS-C₁₈, 250ㅧ4㎜ 검측기 : SPD-10A로 하였다. 이를 통해 측정된 코디세핀 함량을 하기 표 4에 나타내었다.Cordycepin content was measured by high-performance liquid chromatography (HPLC, Agilent 1100, series, USA), and the experimental conditions were Mobile phase: Acetonitrile: Water = 10: 90 Flow rate: 0.8 mL/min Temperature: 25°C Wavelength: 260 nm Column: ODS-C ₁₈ , 250 × 4 mm Detector: SPD-10A. Cordycepin content measured through this is shown in Table 4 below.

구분division 코디세핀 함량(mg/g)Cordycepin content (mg/g) 실시예 3-1Example 3-1 2.42.4 실시예 3-2Example 3-2 2.52.5 실시예 3-3Example 3-3 2.42.4 비교예 1-1Comparative Example 1-1 1.51.5 비교예 1-2Comparative Example 1-2 1.71.7 비교예 1-3Comparative Example 1-3 1.21.2 비교예 1-4Comparative Example 1-4 1.31.3 비교예 1-5Comparative Example 1-5 1.31.3 비교예 1-6Comparative Example 1-6 1.51.5 비교예 2-1Comparative Example 2-1 1.01.0 비교예 2-2Comparative Example 2-2 1.31.3 비교예 2-3Comparative Example 2-3 2.02.0

표 4를 참고하면, 실시예 3-1 내지 3-3에서 배양한 동충하초의 코디세핀의 함량이 2.4㎎/g 이상을 나타내는 것을 확인할 수 있다. 반면, 조사하는 파장을 다르게 하여 배양한 비교예 1-1 내지 1-6은 코디세핀의 함량이 1.7㎎/g 이하로 실시예 3-1 내지 3-3의 코디세핀 함량보다 낮은 것을 알 수 있다. 따라서 조사하는 파장에 따라 코디세핀 함량이 달라질 수 있다는 것을 확인할 수 있다.Referring to Table 4, it can be seen that the content of cordycepin in the Cordyceps Cordyceps cultured in Examples 3-1 to 3-3 is 2.4 mg/g or more. On the other hand, it can be seen that Comparative Examples 1-1 to 1-6 cultured with different wavelengths of irradiation had a content of cordycepin of 1.7 mg/g or less, which was lower than that of Examples 3-1 to 3-3. . Therefore, it can be confirmed that the content of cordycepin may vary depending on the wavelength to be irradiated.

또한, 아스파테이트를 추가하지 않은 비교예 2-1의 코디세핀 함량은 1.0㎎/g으로 가장 낮았으며, 아스파테이트를 5g 또는 15g을 추가하여 배양한 비교예 2-2 및 2-3 또한, 코디세핀의 함량이 2.0㎎/g 이하로 보다 낮은 것을 확인하였다.In addition, the cordycepin content of Comparative Example 2-1 in which aspartate was not added was the lowest at 1.0 mg/g, and Comparative Examples 2-2 and 2-3, in which 5 g or 15 g of aspartate was added and cultured. It was confirmed that the content of sepin was lower than 2.0 mg/g.

Claims (6)

(제1단계) 사과, 복분자, 더덕 또는 아로니아를 착즙하고 남은 착즙 고형물을 얻는 단계;
(제2단계) 제1단계의 착즙 고형물을 함유하는 배지에 동충하초 균주를 접종하는 단계;
(제3단계) 제2단계의 동충하초 균주를 접종한 고형물을 암배양하며 2~5일간 640~700㎚의 적색파장을 조사하는 단계; 및
(제4단계) 제3단계의 암배양 후 명배양하며 20~40일간 400~500㎚의 청색 파장을 조사하는 단계;를 포함하면서,
상기 제2단계의 착즙 고형물을 함유하는 배지는,
착즙 고형물, YM 액체배지와 아스파테이트가 혼합된 것이고,
상기 아스파테이트는 YM 액체배지 제조용 물 1ℓ 기준으로 1~10g이 혼합되는 것이 특징인 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법.(1st step) obtaining the remaining juiced solids after squeezing apples, bokbunja, deodeok or aronia;
(Second step) inoculating the Cordyceps Cordyceps strain into the medium containing the juiced solids of the first step;
(3rd step) irradiating a red wavelength of 640~700nm for 2~5 days while culturing the solid inoculated with the Cordyceps Cordyceps strain of the second step; and
(Step 4) After dark culture of the third step, light culture and irradiating a blue wavelength of 400 to 500 nm for 20 to 40 days; while including,
The medium containing the juiced solids of the second step,
It is a mixture of juiced solids, YM liquid medium and aspartate,
The aspartate is a method of culturing Cordyceps Cordyceps containing high concentration cordycepin, characterized in that 1 to 10 g is mixed based on 1 liter of water for preparing YM liquid medium. 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 제2단계의 동충하초 균주는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)인 것을 특징으로 하는 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법.According to claim 1,
Cordyceps culturing method containing a high concentration of cordyceps, characterized in that the cordyceps strain of the second step is Cordyceps militaris. 제1항에 있어서,
상기 제2단계의 동충하초 균주는 고체배지 배양 후 균사체를 분쇄하고 YM 액체배지에서 배양하여 균사체를 배양하는 것을 특징으로 하는 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법.According to claim 1,
The cordyceps strain of the second step is a method of culturing cordyceps containing high concentration cordycepin, characterized in that the mycelium is crushed after culturing in a solid medium and cultured in a YM liquid medium to culture the mycelium. 삭제delete 삭제delete

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