KR102261326B1 - 오르니틴 생성능이 우수한 웨이셀라 컨퓨사 wikim29를 이용한 마늘 발효 조성물 - Google Patents

오르니틴 생성능이 우수한 웨이셀라 컨퓨사 wikim29를 이용한 마늘 발효 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 김치로부터 분리된 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29; 수탁번호 KCCM12602P)로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 오르니틴 및 시트룰린을 함유함으로써 사람 또는 동물의 간 건강, 피로 개선, 피부 재생, 혈압조절 또는 혈행 개선, 또는 간질환 또는 동맥경화 예방 또는 치료 등의 용도를 위해 다양하게 활용될 수 있다.

Description

오르니틴 생성능이 우수한 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29를 이용한 마늘 발효 조성물 {GARLIC FERMENTATION COMPOSITION USING WEISSELLA CONFUSA WIKIM29 WITH SUPERIOR ORNITHINE PRODUCTIVITY}
본 발명은 마늘로부터 오르니틴과 시트룰린 생성능이 우수한 김치유래의 유산균인 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 및 이의 조성물에 관한 것이다.
김치는 대표적인 발효식품으로서 김치의 재료에서 유래하는 다양한 미생물에 의해 자연발효가 일어나며, 이러한 미생물의 종류와 분포는 김치의 원부재료, 온도, 염도 및 산도 등 다양한 발효 환경에 의해 결정된다. 김치의 맛과 풍미는 김치의 원부재료, 온도, 염도 및 산도 등의 다양한 발효 환경에 의해 결정된다. 김치의 맛과 풍미는 김치 미생물로부터 생성되는 대사물질들에 의해 달라지기 때문에 김치의 품질을 안정적으로 유지하기 위해서는 김치 미생물의 역할이 중요하다.
오르니틴(ornithine)과 시트룰린(citrulline)은 요소 회로(urea cycle)에서 오르니틴 트랜스카르바밀라제(ornithine transcarbamylase, OTC) 작용에 의해 아르기닌(arginine)으로부터 생성되는 비단백질성 아미노산이다. 또한 고등동물의 생체 내 대사에서 오르니틴 회로를 통해 아미노산 또는 암모니아로부터 요소를 생성하여 체외로 배출하는 경로에서 중요한 역할을 한다. 오르니틴은 근육 생성과 체지방 감소에 효과가 있기 때문에, 영양보충제로 사용되고 있고, 간경화와 간기능 장애를 개선하는 의약품으로도 이용되고 있다. 유럽에서는 L-오르니틴-L-아스파라긴산염의 형태로 간장 장애를 개선하는 의약품으로 이용되고 있으며, L-오르니틴-알파-케토그루타릴산염의 형태로 운동수행능력 증강, 비만 예방 및 면역증강 소재로 폭넓게 이용되고 있다(특허문헌 1). 또한 미생물이 생성하는 오르니틴은 장점막의 향상성 유지에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며(비특허문헌 1), 시트룰린은 혈장내 아르기닌의 농도를 높이고, 동맥의 활성 유지, 리포프로데인의 산화를 감소시켜 혈압을 낮추는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 2 및 3).
한편, 김치의 김치의 중요한 원재료 중 하나인 마늘은 기능성과 더불어 세계적으로 소비가 증가하고 있다. 마늘에 함유된 다양한 아미노산 중 가장 높은 비율을 차지하는 아르기닌(arginine)은 총 아미노산의 40% 이상을 차지하고 있는 것으로 보고되어 있다. 또한 미생물에서의 오르니틴 및 시트룰린 생성은 아르기닌 분해능과 높은 상관관계를 보이고 있다.
따라서, 본 발명은 아르기닌 분해활성이 높은 김치미생물을 이용하여 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린이 함유된 조성물을 제공하고자 한다.
KR 10-1678952
Lactobacillus maintains healthy gut mucosa by producing L-Ornithine. Commun Biol, 2, 171. Qi, H., et al. (2019). Short-term effects of l-citrulline supplementation on arterial stiffness in middle-aged men. International Journal of Cardiology, 155(2), 257-261. Ochiai, M. et al. (2012). Effects of Oral L-Citrulline Supplementation on Lipoprotein Oxidation and Endothelial Dysfunction in Humans with Vasospastic Angina. Immunology, Endocrine & Metabolic Agents in Medicinal Chemistry (Under Re-organization), 13(3), 214-220.Masahiko, M. et al. (2013). Effect of supplemental ornithine on wound healing. J Surg Res, 106(2), 299-302., Shi, H. P., et al. (2002).
이에, 본 발명자들은 전통발효식품으로부터 우수한 오르니틴 생성능을 나타내는 균주를 찾고자 노력한 결과, 오르니틴(ornithine) 생성능을 갖는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29)를 분리, 동정하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 미늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 간질환 또는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29)로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29)는 KR 10-2015-0190029 특허에서 전통발효식품인 김치에서 분리 및 동정하여 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29)으로 명명되고, 2015년 12월 16일 한국미생물보존센터에 최초 기탁하였으며(KFCC11638P), 2019년 10월 08일에 국제 기탁으로 전환 기탁한 균주이다(수탁번호 KCCM12602P).
본 발명의 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29는 그람양성균이고 호기적 조건과 혐기적 조건에서 모두 성장이 가능한 통성 혐기성(facultative anaerobe)이며, 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며 간균의 형태를 취하고 있다.
본 발명의 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29는 유산균의 일반적인 정장 효과 및 면역 증강 효과를 갖는다. 웨이셀라 속의 유산균이 정장 효과 면역 증강 효과를 갖는다는 것은 잘 알려져 있는 사실이다.
하기 실시예에서는, 본 발명의 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29가 마늘로부터 높은 오르니틴 및 시트룰린 생성능을 보이는 것을 확인하였다.
이에 본 발명의 한 구체예에서는 오르니틴과 시트룰린에 의한 간 건강, 피로 개선, 혈압조절 또는 혈행 개선을 위한 것인 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품 등의 형태를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 균주로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 포함하는 오르니틴 또는 시트룰린 함유 식품 조성물은 발효유 등의 음료를 포함할 수 있다. 이에, 본 발명은 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 마늘 발효물로 이루어지는 발효용 유산균 스타터를 제공할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서는 오르니틴에 의한 피부 재생용 식품인, 식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린을 함유한다.
따라서, 상기 발효물은 본 발명의 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 108 cfu를 기준으로 마늘파쇄액 10g을 첨가하여 배양된 것인, 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물에 포함되는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29은 생균체 또는 사균체로서 존재할 수 있으며, 또한 건조 또는 동결건조된 형태로 존재할 수도 있다. 다양한 조성물 내에 포함시키기 적합한 유산균의 형태 및 제제화 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물로 활용될 경우, 본 발명의 약학 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연당, 옥수수감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐아세테이트, 소듐 클로라이드등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용가능한 약학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
나아가 해당 분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 간질환 또는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
한 구체예에서, 상기 간질환은 간염, 간경변 또는 간성뇌증일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "유효량"은 목적하는 치료되어야 할 특정 질환의 발병 또는 진행을 지연하거나 전적으로 중지시키는 데 필요한 양을 의미하며, 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29의 유효량은 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료 효과를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 상기 유효량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 다른 성분의 종류 및 함량, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다.
본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
본 명세서에서, “치료”는 이롭거나 바람직한 임상적 결과를 수득하기 위한 접근을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로, 증상의 완화, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감(부분적이거나 전체적으로), 검출 가능하거나 또는 검출되지 않거나의 여부를 포함한다. 또한, “치료”는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. “치료”는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방 조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다. 질병을 “완화”하는 것은 치료를 하지 않은 경우와 비교하여, 질병 상태의 범위 및/또는 바람직하지 않은 임상적 징후가 감소되거나 및/또는 진행의 시간적 추이(time course)가 늦춰지거나 길어지는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 상기 약학 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 비타민복합제, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 식품 제조시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아추출물 (예를 들어 레바우디오시드A, 글리시르히진 등]) 및 합성향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종식물추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
상기 본 발명에 따른 조성물은 사료첨가제 또는 사료로서 이용될 수 있다.
사료 첨가제로서 이용될 경우, 상기 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립 형태로 제조될 수 있다. 상기 사료첨가제는 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산등의 유기산이나 인산 나트륨, 인산 칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 사료로서 이용될 경우, 상기 조성물은 통상의 사료 형태로 제제화 될 수 있으며, 통상의 사료성분을 함께 포함할 수 있다.
상기 사료첨가제 및 사료는 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩, 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분 등을 더 포함할 수 있으며, 이외에도 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 사료첨가제는 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료첨가제와 조합하여 투여할 수도 있다. 또한, 상기 사료첨가제는 탑드레싱으로서 또는 이들을 동물사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다. 상기 사료첨가제를 동물사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약학적으로 허용가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수전분, 락토오스, 수크로오스, 콩플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 사료첨가제는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 사료첨가제는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있다.
상기 사료는 동물의 식이욕구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기곡분을 포함할 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩곡분, 또는 옥수수/콩곡분믹스로 주로 구성되어 있다.
또한, 상기 사료첨가제 및 사료는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액촉진제 등을 함유할 수 있다. 상기 사료첨가제는 침주, 분무 또는 혼합하여 동물의 사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
상기 포유류로서 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치동물, 및 실험용 설치동물뿐만 아니라, 애완동물(예: 개, 고양이) 등에게 사용할 수 있으며, 상기 가금류로서 닭, 칠면조, 오리, 거위, 꿩, 및 메추라기 등에도 사용할 수 있고, 상기 어류로서 송어 등에 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물에 포함되는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29; 수탁번호 KCCM12602P) 균주의 양은 1회를 기준으로 약 106 내지 1012 cfu/ml일 수 있으며, 예컨대 107 내지 1011 cfu/ml, 108 내지 1010 cfu/ml일 수 있다. 균주를 투여할 경우에는, 섭취 전에 사멸시키거나 감쇄(attenuation) 상태로 투여할 수 있다. 또한, 배양 상등액 등을 사용하여 제조할 경우에는 열처리 과정을 통한 멸균화 과정을 추가적으로 거칠 수 있다. 최소의 효능을 가지는데 필요한 균주량 및 일일 섭취 정도는 섭취자의 신체 또는 건강상태에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 약 106 내지 1012 cfu/ml일 수 있으며, 예컨대 107 내지 1011 cfu/ml, 108 내지 1010 cfu/ml일 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
본 발명에 따른 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 조성물은 피부 재생 용도, 간 건강, 피로 개선 또는 간질환 예방 또는 치료 용도를 위해 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주에 의한 마늘파쇄물의 아르기닌(argignine) 감소 효과를 확인한 결과를 보여준다.
도 2는 본 발명에 따른 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주에 의한 마늘파쇄물의 오르니틴 및 시트룰린 증가 효과를 확인한 결과를 보여준다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29의 ADI 시스템
균주의 ADI, OTC 및 CK의 분포를 조사하기 위하여, ADI 및 OTC의 아미노산 및 유전자 서열을 UniProt Protein Database로부터 수득하고, CLC 게놈 워크 벤치 프로그램의 버전 7.5를 사용하여 비교하였다.
웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주에서의 ADI 및 OTC 분포는 표 1에 기재하였다.
[표 1] 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주의 ADI 시스템에 관여하는 단백질 및 유전자
Figure 112019114224020-pat00001
-ADI: 아르기닌 데이미나제(arginine deiminase), OTC: 오르니틴 트랜스카바미라제(ornithine transcarbamylase), CK: 카바메니트 키나아제(carbamate kinase).
따라서, 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29가 아르기닌 분해를 위한 ADI 시스템에 관련된 유전자들을 가지고 있음을 확인하였다(표 1).
실시예 2: 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주의 아르기닌 이화 작용
본 발명에서 사용되는 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주는 KR 10-2015-0190229 특허에서 분리 및 동정하여 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29)으로 명명되고, 2015년 12월 16일 한국미생물보존센터에 최초 기탁하고(KFCC11638P), 2019년 10월 08일에 국제기탁으로 전환 기탁한 (수탁번호 KCCM12602P) 균주를 이용하여 실시예를 진행하였다.
웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29에 의한 아르기닌의 이용을 확인하기 위하여 상기 WIKIM29 균주를 MRS 배지 및 아르기닌에 접종하고, WIKIM29 균주의 성장 동안에 그 함량을 측정하였다.
MRS 배지 시료는 초반에 200 내지 300 μg/mL (약 1.1 내지 1.7 mM)의 아르기닌을 함유했다. 이 농도는 3시간 후에 67±1.8 μg/mL으로 감소되었다(도 1).
<서열번호: 1> Weissella confusa WIKIM29의 16S rRNA
TTTGAATCATGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGCTTTGTGGTTCAACTGATTTGAAGAGCTTGCTCAGATATGACGATGGACATTGCAAAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTACCTCTTAGCAGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGTATAACAATGACAACCGCATGGTTGTTATTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTAAGAGATGGTCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAATGGCTTACCAAGGCGATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACAATGGGACTGAGACACGGCCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGTGTGATGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACACTGTTGTAAGAGAAGAATGACATTGAGAGTAACTGTTCAATGTGTGACGGTATCTTACCAGAAAGGAACGGCTAAATACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTATGTTCCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGACGGTTATTTAAGTCTGAAGTGAAAGCCCTCAGCTCAACTGAGGAATTGCTTTGGAAACTGGATGACTTGAGTGCAGTAGAGGAAAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGACTGTAACTGACGTTGAGGCTCGAAAGTGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTTGAGGGTTTCCGCCCTTAAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTTGACAACTCCAGAGATGGAGCGTTCCCTTCGGGGACAAGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTACTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTATACAACGAGTTGCCAACCCGCGAGGGTGAGCTAATCTCTTAAAGTACGTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTTGGAATACGTTTCCCCGGGTCTTGTACACACCCGCCCGTCACACCATGAGGAGTTTGTAACACCCAAAGCCCGGTGGGGTAACCTTCCGGGAGCCAGCCGTCTAAGGTGGGACAGATGATTAGGGTGAAGTCG
실시예 3: 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 및 마늘 파쇄액 배양 후 아르기닌 및 오르니틴의 농도 변화 확인
선발된 균주 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29의 아르기닌 분해능을 조사하기 위하여, 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29 균주를 MRS 배지에서 24 시간 배양하고, 균체를 회수하여 증류수를 이용하여 3회 세척 후 균체와 동량의 증류수에 희석하여 마늘 파쇄액과 상온에서 정치 반응을 시켰다.
24시간 반응 후 반응액의 아르기닌과 오르니틴 농도 분석은 LC-MS/MS를 이용하였다. LC-MS/MS 분석은 AB SCIEX analyst 소프트웨어를 장착한 AB SCIEX TripleTOF® 5600+ 시스템 (AB SCIEX)를 사용하여 electro spray ionization (negative) 모드에서 실시하였다. ACQUITY UPLC BEH Amide 컬럼 (130Å, 1.7 μX 에서 아세트산 암모늄 10mM을 포함한 물과 아세토나이트릴을 사용하였으며, 95 내지 60% water (v/v)를 17분 동안, 45 내지 10% water (v/v)를 8분 동안, 95% water (v/v)를 5분 동안 진행하여 0.4 ml/분의 유속으로 분리하였다. multiquant (AB SCIEX) 소프트웨어를 이용하여 아르기닌 및 오르니틴 농도를 정량하였다.
정량 결과, 시트룰린의 농도 증가 및 오르니틴의 농도가 1.5mg/ml 이상의 농도로 증가하는 것을 확인할 수 있었다(도 2).
한국미생물보존센터(국외) KCCM12602P 20151216
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Claims (9)

  1. 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29; 수탁번호 KCCM12602P)로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 오르니틴에 의한 간 건강 또는 피로 개선을 위한 것인 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 시트룰린에 의한 혈압조절 또는 혈행 개선을 위한 것인 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 오르니틴에 의한 피부 재생을 위한 것인 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 건강기능식품인, 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 음료인, 오르니틴 및 시트룰린 함유 식품 조성물.
  7. 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29; 수탁번호 KCCM12602P)로 발효된 마늘 발효물을 포함하는 오르니틴 및 시트룰린 함유 간질환 또는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 간질환은 간염, 간경변 또는 간성뇌증을 포함하는 것인 오르니틴 및 시트룰린 함유 간질환 또는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 웨이셀라 컨퓨사 WIKIM29(Weissella confusa WIKIM29; 수탁번호 KCCM12602P)로 마늘을 발효시키는 것을 포함하는 마늘 발효물 내 오르니틴 및 시트룰린의 농도를 증가시키는 방법.
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