KR102084003B1 - Method for preparing nucleotides of lactic acid bacteria inclusion-complexed with low-molecular functional biomaterial and Cubisome prepared thereby - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 피부 및 화장품 분야에서 유용성을 갖는 저분자 기능성 생물소재와 유산균 뉴클레오티드를 동시에 제조하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 하나의 세포파쇄 공정에 의해 고분자 기능성 생물소재에서 저분자 기능성 생물소재로의 전환 및 유산균 뉴클레오티드 성분 용출이라는 2가지 과제를 동시에 해결하는(2-in-1 제조법) 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드(큐비솜)의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for simultaneously preparing a low molecular weight functional biomaterial and a lactic acid bacterium nucleotide having utility in the field of skin and cosmetics, and more specifically, to a low molecular weight functional biomaterial from a high molecular weight functional biomaterial by one cell disruption process. And a method for producing a lactic acid bacterium nucleotide (cubisome) encapsulated with a low molecular weight functional biomaterial which simultaneously solves two problems of eluting bacterial nucleotide components (2-in-1 production method).
피부(Skin)는 상층부인 표피(epidermis)와 그 아래에 진피 (dermis), 하부의 피하지방으로 나눌 수 있으며 각 층마다 서로 다른 기능을 가지고 있다. 표피의 기능은 투과 장벽, 선청성 면역, 자외선에 대한 보호, 상처 회복, 비타민 D 합성 등이 있으며, 진피층은 병원체 침입 억제, 상처회복, 피부의 구조 및 탄력 유지 등의 기능이 있다. Skin can be divided into the epidermis, the epidermis, the dermis and the subcutaneous fat underneath, and have different functions for each layer. The epidermis functions include a permeation barrier, sensitizing immunity, protection against ultraviolet rays, wound recovery, and vitamin D synthesis. The dermal layer has functions such as inhibiting pathogen invasion, wound recovery, and maintaining skin structure and elasticity.
피부는 외부로부터 오는 물리적·화학적 자극으로부터 인체를 보호하는 역할을 하지만, 자외선은 피부 세포의 DNA를 손상시키고 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 생성하여 피부의 콜라겐의 합성을 억제시키고 분해를 촉진하여 피부를 노화시켜 주름을 생성한다.While the skin protects the body from physical and chemical stimuli from the outside, ultraviolet rays damage the DNA of skin cells and produce reactive oxygen species (ROS) to inhibit the synthesis of collagen in the skin and Promotes aging of the skin, creating wrinkles.
자외선은 피부표피의 경계에서 직접 반사되거나, 피부조직 내에서 세포, 섬유아 입자에 부딪힌 후 산란된거나, 흡수, 투과되는 경로를 거치는데 흡수된 자외선만이 광화학 반응을 일으켜 피부병변을 일으킨다. 파장에 따라 피부의 침투 정도가 달라지는데 파장이 긴 UVA는 진피 깊숙이 침투하나 UVB, UVC는 파장이 짧아 피부 표피에서의 피부병변을 심하게 일으킨다. 이 가운데 UVB는 파장이 280~320 nm로 대부분 오존층에 흡수되지만 일부는 지표면에 도달하고 짧은 파장의 고에너지 광선으로 UVA보다 세기가 훨씬 강해 단시간에 화상(solar scar)을 입히게 된다. 지속적인 UVB에 의한 노출은 피부암을 유발시키는 원인으로 지목되고 있다. Ultraviolet rays are directly reflected at the boundary of the skin epidermis, or scattered after striking the cells and fibroblast particles in the skin tissue, or are absorbed and transmitted through the path. Only the absorbed ultraviolet rays cause a photochemical reaction to cause skin lesions. The degree of penetration of the skin varies depending on the wavelength. UVA, which has a long wavelength, penetrates deep into the dermis, but UVB and UVC have short wavelengths, causing severe skin lesions on the epidermis. Among them, UVB has a wavelength of 280-320 nm, but most of it is absorbed by the ozone layer. However, some of them reach the earth's surface and are shorter in intensity than UVA with high energy rays, causing a solar scar in a short time. Prolonged exposure to UVB has been identified as a cause of skin cancer.
지역과 인종 그리고 연령에 따른 피부상태와 유형이 상이함은 통계적으로 확인된 보고가 있다. Kompaore 등(Skin Pharmacol.,1993;6: 200-207) 은 아시아인, 백인, 흑인에 대해서 경피 수분 손실량을 측정한 결과, 백인보다 아시아인과 흑인이 더 높게 나타났다. Man 등(Skin Pharmacol. Physiol.,200;22:190-199)은 중국인 남성과 여성의 연령대별 피지량을 측정한 결과, 여성의 이마가 남성의 이마보다 피지량이 낮았으며 여성의 경우 30대 이후 크게 감소하는 경향을 보였으나 남성의 경우 50대까지 비슷한 경향을 보이다가 점차 감소하였다. Marrakchi 등(Contact dermatitis, 2007;57:28-34) 은 24~34세로 이루어진 청년층과 66~83세로 이루어진 노년층의 수분량, 피지량 등을 비교한 결과 청년층의 수분량이 전박을 제외하고 이마, 뺨에서 노년층보다 높았으며, 피지량은 청년층과 노년층에서 큰 차이가 없었다. There are statistically confirmed reports of differences in skin condition and type by region, race and age. Kompaore et al. (Skin Pharmacol., 1993; 6: 200-207) measured transdermal moisture loss in Asians, Caucasians, and blacks, and found that Asians and blacks were higher than whites. Man et al. (Skin Pharmacol. Physiol., 200; 22: 190-199) measured sebum levels of Chinese males and females according to age groups. Males tended to decrease, but showed similar trends in their 50s and then gradually decreased. Marrakchi et al. (Contact dermatitis, 2007; 57: 28-34) compared the moisture content and sebum content of young people aged 24 to 34 years old with those aged 66 to 83 years. Sebum volume was not significantly different between the young and the elderly.
국가별 피부특성은행 구축 사업보고서에 따르면, 한국인의 경우 여성 피부 유형은 복합성>건성>중성>지성 순이며, 남성 피부 유형은 지성>복합성>중성>건성 순으로 차이를 보였다. According to the report on the establishment of skin characteristics banks by country, for Koreans, female skin types differed in the order of complex> dry> neutral> oily, and male skin types differed in the order of oily> complex> neutral> dry.
종래의 통계적 방법에서 인종과 사는 지역 그리고 성별, 나이에 의한 차이가 있음을 확인하였으나, UVB와 같은 광학적 원인이 경피 수분손실량과 피부 주름등의 피부노화를 일으키는 상관관계가 명확하지 않고 과학적인 증명이 어려웠다. In the conventional statistical methods, there are differences according to race, region of living, gender, and age. However, there is no clear correlation between optical causes such as UVB causing skin aging such as transdermal moisture loss and skin wrinkles. It was difficult.
피부 마이크로바이옴(Skin microbiome)은 피부에 분포하는 상재균총의 생태계를 의미하며 주로 Staphylococcus 속, Propionibacterium 속등이 균형을 이루어 건강한 피부상태를 유지하고 있다. 피부 마이크로바이옴을 구성하는 상재균총은 연령대, 여자와 남자, 인종, 사는 지역에 따라 상이하다. 특히 연령대별 피부 우점종이 피부건강을 유지시키는 것으로 통계적 방법으로 분석하기 때문에 최근 장내 미생물을 피부에 사용하는 것은 과학적 근거가 없다고 할 수 있다. Skin microbiome refers to the ecosystem of the flora of the genus flora distributed on the skin. Mainly, Staphylococcus genus and Propionibacterium genus maintain a healthy skin condition. The flora of the skin microbiome differs according to age group, women and men, race and region of residence. In particular, since skin dominant species by age group are analyzed by a statistical method to maintain skin health, the use of intestinal microorganisms on the skin can be said to have no scientific basis.
최근에는 특허 10-2017-0125755에서는 피부 광손상 판단용 장내 미생물 또는 내인성 대사체 마커의 이의 용도에 대한 특허에서 UVB에 의해 피부 광손상 된 마우스의 분변 균총과 광손상 유도되지 않은 마우스의 장내 상재균총이 다름을 제시하며 UVB에 의한 피부손상을 장내 상재균총인 장 마이크로바이옴(gut microbiome)으로 간접 해석하였다. 그러나 이 선행 연구는 나이, 성별, 인종등이 식이(diet)에 따른 장 마이크로바이옴을 구성하는 장내 상재균총이 상이하고 피부손상이 아닌 다른 원인으로도 Allobaculum, Lachnoclostridium, Parvibacter, Lactobacillus 등이 감소할 수 있으므로 이를 피부 상재균총으로의 원인과 해결방안으로는 한계점을 나타냈다. 또한 장내 상재균총을 피부상재균총에 접종하여 그 균형을 유지하는데는 장내 상재균총은 대부분 혐기성 미생물이고 피부상재균총은 통성 또는 호기성 미생물로 산소의 기호도가 상이한 바, 장내 상재균총 중 식품 미생물로 사용할 수 있는 장 서식 유산균을 피부에 직접 사용하여 그 유효성을 나타낸다는 선행연구는 과학적 근거가 불명확하다. Recently, Patent No. 10-2017-0125755 discloses a fecal flora of mice that have been skin-damaged by UVB and an intestinal flora of non-photo-induced mice in a patent for its use of enteric microorganisms or endogenous metabolite markers for judging skin photodamage. This difference was suggested and the skin damage caused by UVB was indirectly interpreted as gut microbiome. However, this previous study showed that the intestinal flora of the intestinal microbiome according to diet, such as age, sex, and race is different, and allobaculum, Lachnoclostridium, Parvibacter, Lactobacillus, etc. may be reduced by other causes than skin damage. As the cause and solution for the skin flora, it showed its limitations. In addition, the intestinal flora is inoculated into the skin flora and the balance is maintained. The intestinal flora is mostly anaerobic and the skin flora is an aerobic or aerobic microorganism with different degrees of oxygen. Previous studies showing the effectiveness of using enteric Lactobacillus bacteria directly on the skin are unclear.
또한 현재 비피도박테리움(Bifidobacterium)속이나 락토바실러스(Lactobacillus)속의 유산균을 피부에 사용하는 원료들이 시판되고 있다. 그 중, 비피다발효농축물 등이 대표적인 예로 세포 파쇄물을 주성분으로 하고 있다. 그러나 세포 구성성분 중 피부와 면역반응을 일으키는 것으로 알려져 있는 리포다당(LPS, lipopolysaccharide)이 세포벽에 존재하는데 이 성분이 과다할 경우 아토피, 홍반, 발진등의 피부 트러블을 일으킬 수 있다.In addition, raw materials using lactic acid bacteria of the genus Bifidobacterium or Lactobacillus are currently on the market. Among them, Bifido fermentation concentrates and the like are the cell lysates as a main component. However, lipopolysaccharide (LPS), which is known to cause an immune reaction with the skin, is present in the cell wall. Excess of this component can cause skin problems such as atopy, erythema and rash.
피부보호작용을 위한 미생물 소재의 응용에서 문제점 중 다른 하나는 세포 파쇄물을 피부에 적용시, 피부 상재균총에게는 생장에 필요한 단백질원(proteins)이기 때문에 피부 유해균이 이를 생장요소로 사용한다면 건강한 피부 마이크로바이옴의 균형이 깨지게 된다. 현재 국제화장품 원료로 등재되어 있는 각종 미생물 세포 파쇄물은 인간의 피부 마이크로바이옴에 영향을 미칠 수 있는 단백질 성분들이 많이 함유되어 있기때문에 이를 제조공정상에서 미생물 세포내의 단백질 성분은 최소화 하고 기능성 유효성분은 늘릴 수 있는 공정상의 전략이 요구되어진다.One of the problems in the application of microbial materials for skin protection is that when the cell lysate is applied to the skin, the skin flora is a protein necessary for growth. Ohm's balance is broken. Since various microbial cell debris currently listed as international cosmetic raw materials contain many protein components that can affect human skin microbiome, this can minimize the protein components in the microbial cells and increase the functional active ingredients in the manufacturing process. Certain process strategies are required.
또한, 화장품 분야에서 히알루론산, 베타글루칸 등와 같은 다당체, 및 콜라겐 등과 같은 단백질을 포함하는 다양한 생물소재가 이용되고 있다. 예컨대, 히알루론산은 수분을 흡수하는 성질이 있어 피부 보습 및 탄력효과를 줄 뿐만 아니라 자외선에 의한 염증이나 피부손상을 억제하는 효과가 있다고 알려져 있으며, 베타글루칸은 항산화 효과 및 항염 효과를 나타낼 뿐만 아니라 피부 보습력을 증가시켜 주고 피부 주름 개선효과가 있다고 알려져 있으며, 콜라겐은 피부 주름을 개선하고 피부탄력을 증가시킬 뿐만 아니라 피부 노화를 방지하는 효과가 있다고 알려져 있다. 그러나, 상기 생물소재는 고분자로 되어 있어서 피부흡수가 잘되지 않는다. 따라서, 최근에는 생물소재의 피부흡수를 높이고 피부미용효과도 증대시키기 위해 이들 생물소재를 저분자화로 만드는 공정이 별도로 개발되고 있다.In addition, various biological materials including polysaccharides such as hyaluronic acid, beta glucan, and proteins such as collagen are used in the cosmetic field. For example, hyaluronic acid has a property of absorbing moisture, which is known to not only moisturize and elasticity of the skin, but also to inhibit inflammation and skin damage caused by ultraviolet rays. Beta-glucan not only exhibits antioxidant and anti-inflammatory effects, It is known to increase moisturizing and improve skin wrinkles. Collagen is known to improve skin wrinkles and increase skin elasticity as well as to prevent skin aging. However, since the biological material is made of a polymer, the skin is not absorbed well. Therefore, in recent years, in order to increase skin absorption of biological materials and increase skin beauty effects, processes for making these biological materials into low molecular weight have been separately developed.
본 발명에서는 선행연구에서의 나이, 성별, 인종, 사는 지역 등의 제한 사항을 극복하고 피부 마이크로바이옴에 범용으로 적용가능한 유산균 뉴클레오티드의 제조공정법을 발명완성하였다. 보다 상세하게는 유산균 세포의 구성성분 중 피부적용시 피부 마이크로바이옴에 영향을 미치는 단백질 성분을 최소화하고 피부미용효과가 우수한 뉴클레오티드(nucleotide)부분을 고농도화하는 유산균 뉴클레오티드 제조방법을 최적화함으로써 미생물 자원의 인간 피부 적용시 피부트러블 원인성분인 리포다당과 단백질의 영향을 최소화하였다. 또한, 유산균 뉴클레오티드 성분과 피부친화적 생물소재를 한 공정으로 준비될 수 있도록, 하나의 세포파쇄 공정에 의해 고분자 생물소재에서 저분자 생물소재로의 전환과 유산균 뉴클레오티드 성분 용출이라는 2가지 제조문제를 해결하는 2-in-1 제조법을 완성시켜 큐비솜(Cubisome)이란 유산균 뉴클레오티드 원료를 제조하는 본 발명을 최종완성하였다.The present invention overcomes limitations such as age, sex, race, living area, etc. in the previous studies and has completed the process for producing lactic acid bacterium nucleotides applicable to the skin microbiome. More specifically, by minimizing the protein component affecting the skin microbiome among the components of the lactic acid bacteria cells and optimizing the production method of lactic acid bacteria nucleotides to increase the concentration of nucleotides having excellent skin beauty effect, In skin application, the effects of lipopolysaccharide and protein, which are the source of skin problems, were minimized. In addition, in order to prepare lactic acid bacteria nucleotide components and skin-friendly biomaterials in one process, one cell crushing process solves two manufacturing problems: the conversion of polymer biomaterials to low molecular weight biomaterials and the leaching of lactic acid bacteria nucleotide components. By completing the -in-1 preparation method, the present invention was completed to prepare a lactic acid bacterium nucleotide raw material called cubisome.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 하나의 공정으로 피부미용 및 화장품 분야에서 유용성을 갖는 저분자 기능성 생물소재와 유산균 뉴클레오티드를 동시에 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.Accordingly, the main object of the present invention is to provide a method for simultaneously producing a low molecular weight functional biomaterial and lactic acid bacteria nucleotide having utility in the field of skin care and cosmetics in one process.
본 발명의 다른 목적은 상기 제조방법으로 제조된 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드인 큐비솜(Cubisome)이란 화장품, 식품 및 의약품 분야의 새로운 바이오 소재를 제공하는 데 있다.Another object of the present invention is to provide a new bio material in the field of cosmetics, food and pharmaceuticals, called Cubisome, which is a lactic acid bacterium nucleotide encapsulated with a low molecular weight functional biomaterial prepared by the above-described manufacturing method.
본 발명의 명세서에 있어서, '기능성 생물소재'란 종래 화장품, 식품 및 의약품 분야에서 유용한 기능성을 갖는 생물체에서 유래된 물질을 의미하며, 고분자가 분해되어 저분화화 될 수 있는 한 어떤 기능성 생물소재도 포함할 수 있으며, 예컨대 히알루론산, 베타글루칸과 같은 다당체 및 콜라겐과 같은 단백질 등을 포함한다. 이러한 '기능성 생물소재'는 뉴클레오티드를 용출하려고 하는 해당 유산균에서 유래되지 않고 외부에서 도입된(예컨대, 다른 미생물에서 유래된) 것을 특징으로 한다. 또한, '고분자'란 기능성 생물소재가 본 발명의 방법을 통해 저분자화되기 전의 고분자 상태를 의미하며, '저분자'란 상기 고분자 기능성 생물소재가 본 발명의 방법을 통하여 분해되어 저분화화 된 상태를 의미한다. 상기 '고분자' 및 '저분자'는 서로 상대적인 개념으로 특정 분자량으로 제한되지는 않는다. 또한, '포접'이란 저분자 기능성 생물소재가 유산균 뉴클레오티드와 혼합되거나 둘러싸서 복합체를 이루고 있는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명에서 저분자 기능성 생물소재는 유산균 뉴클레오티드의 담체(carrier)로서의 역할을 한다.In the specification of the present invention, 'functional biological material' means a substance derived from an organism having a functional function useful in the field of conventional cosmetics, foods and pharmaceuticals, and any functional biological material as long as the polymer can be degraded and differentiated And, for example, hyaluronic acid, polysaccharides such as betaglucan, proteins such as collagen, and the like. Such 'functional biomaterials' are not derived from the corresponding lactic acid bacteria to elute nucleotides, but are introduced from the outside (eg, derived from other microorganisms). In addition, the 'polymer' refers to the polymer state before the functional biological material is low molecular weight through the method of the present invention, the 'low molecule' refers to the state in which the polymer functional biomaterial is decomposed and low-differentiated through the method of the present invention it means. The 'polymer' and 'low molecule' are not limited to a specific molecular weight as a concept relative to each other. In addition, the term "inclusion" means that the low molecular weight functional biomaterial is complexed with or mixed with lactic acid bacteria nucleotides. Therefore, the low molecular weight functional biomaterial in the present invention serves as a carrier of the lactic acid bacteria nucleotides.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 다음 단계들을 포함하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법를 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a method for preparing lactic acid bacteria nucleotides enclosed with a low molecular weight functional biomaterial comprising the following steps.
(a) 유산균을 영양배지에서 증식시키는 전발효 단계;(a) pre-fermentation step of propagating lactic acid bacteria in nutrient medium;
(b) 상기 (a) 단계에서 증식시킨 유산균체를 분리하여 고분자 기능성 생물소재가 함유된 제한배지에서 배양하는 후발효 단계; (b) a post-fermentation step of separating the lactic acid bacteria grown in step (a) and culturing in a restriction medium containing a high molecular weight biological material;
(c) 상기 (b) 단계의 유산균 후발효액을 열압축조건으로 유산균 세포를 파쇄하여 유산균 뉴클레오티드를 용출시키는 단계;(c) lysing the lactic acid bacteria nucleotides by lysing the lactic acid bacteria post-fermentation solution of step (b) under heat compression conditions;
(d) 상기 (c) 단계의 파쇄된 발효액으로 부터 세포벽 및 세포질 단백질 성분을 제거하고 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드를 회수하는 단계.(d) removing the cell wall and cytoplasmic protein components from the crushed fermentation broth of step (c) and recovering the lactic acid bacterium nucleotides in contact with the low molecular weight functional biomaterial.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계의 '영양배지'란 미생물의 증식을 위해 필요한 영양소인 탄소원, 질소원, 비타민류와 같은 생육인자, 무기염류를 함유하는 배지를 의미하며, 예컨대, MRS 액상배지. BL Agar, Todd Hewitt 액상배지 등의 배지를 포함할 수 있으며, 본 발명의 실시예에서는 MRS 액상배지를 사용하였다. 또한, 상기 (b) 단계의 '제한배지'란 증식에 요구하는 영양소를 충분히 포함하고 있지 않고 성분이 한정되어 있는 배지를 의미하며, 본 발명의 실시예에서는 고분자 다당체나 콜라겐 및 글루코스를 증류수에 녹인 배지를 사용하였다.In the present invention, the 'nutritive medium' of the step (a) means a medium containing carbon sources, nitrogen sources, growth factors such as vitamins, inorganic salts, nutrients necessary for the growth of microorganisms, for example, MRS liquid medium . It may include a medium such as BL Agar, Todd Hewitt liquid medium, MRS liquid medium was used in the embodiment of the present invention. In addition, the "limiting medium" of the step (b) means a medium that does not contain enough nutrients required for proliferation and the ingredients are limited. In the embodiment of the present invention, the polymer polysaccharide or collagen and glucose are dissolved in distilled water. Medium was used.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 상기 (b) 단계의 후발효 및 (c) 단계의 열압축조건의 결과로 고분자 기능성 생물소재가 저분자화되는 것을 특징으로 하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 제공한다. 본 발명에 따르면, 상기 (b) 단계의 후발효 공정에서는 제한배지의 영양소가 충분하지 않아서 고분자 생물소재가 분해될 가능성이 높아지며, 또한, 상기 (c) 단계의 열압축조건에서는 하나의 공정에 의해 고분자 생물소재에서 저분자 생물소재로의 전환과 유산균 뉴클레오티드 성분 용출이라는 2가지 과제를 동시에 해결하는 2-in-1 제조법이 가능하다.In the present invention, preferably, as a result of the post-fermentation of the step (b) and the heat compression conditions of the step (c), the high molecular weight functional biological material is characterized in that the low molecular weight of the functional biomaterial and lactic acid bacteria nucleotides included It provides a manufacturing method. According to the present invention, in the post-fermentation step of step (b), the nutrients of the restriction medium are not sufficient, so that the polymer biomaterial is more likely to be decomposed, and in the step (c) of the thermal compression conditions, by one step It is possible to prepare a 2-in-1 method that simultaneously solves two problems: the conversion from a polymeric biomaterial to a low molecular biomaterial and the dissolution of lactic acid bacteria nucleotide components.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계의 유산균은 세포파쇄에 의해 뉴클레오티드가 유출될 수 있는 한, 화장품 분야 등에 이용될 수 있고 어떤 유산균도 가능하나, 바람직하게는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 비피도박테리움 속 (Bifidobacterium sp.), 스트렙토코커스 속 (Streptococcus sp.), 락토코커스 속 (Lactococcus sp), 엔테로코커스 속 (Enterococcus sp), 페디오코커스 속 (Pediococcus sp), 바이셀라 속 (Weissella sp)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 제공한다.In the present invention, the lactic acid bacteria of step (a) can be used in the cosmetic field and so on as long as nucleotides can be leaked by cell disruption, but any lactic acid bacteria can be used, preferably, Lactobacillus sp. Bifidobacterium sp., Streptococcus sp., Lactococcus sp, Enterococcus sp, Pediococcus sp, Weissella genus It provides a method for producing lactic acid bacteria nucleotides and low molecular weight functional biological material characterized in that at least one selected from the group consisting of sp).
본 발명에 있어서, 전발효 배양은 유산균을 MRS 액상배지를 사용하여 1~10%(v/v)되게 접종한 후 30~45도에서 12~48시간동안 배양한다. 보다 바람직하게는 유산균 2~5%(v/v)를 MRS 액상배지에 접종한 후 37도에서 15~24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. In the present invention, the pre-fermentation culture is inoculated lactic acid bacteria to 1 ~ 10% (v / v) using MRS liquid medium and then incubated for 12 to 48 hours at 30 ~ 45 degrees. More preferably, 2-5% (v / v) of lactic acid bacteria were inoculated in MRS liquid medium and then incubated for 15 to 24 hours at 37 degrees. After incubation, the culture was centrifuged (4,000 rpm, 10 min), only the cells were recovered, washed twice with sterile distilled water, and suspended in final sterile distilled water.
본 발명에 있어서, 상기 (b) 단계의 고분자 기능성 생물소재는 피부 또는 화장품 분야 등에 이용될 수 있는 어떤 고분자 기능성 생물소재도 가능하나, 바람직하게는 해당 유산균에서 유래하지 않은 고분자 기능성 생물소재인 히알루론산(hyaluronic acid), 베타글루칸(beta glucan), 또는 콜라겐(collagen)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 한다. 본 발명의 실시예에서는, 유산균의 뉴클레오티드의 세포 내에서의 원활한 용출과 용출 후 세포질내의 환경과 유사한 환경을 조성하여 그 안정성을 유지하기 위해 미생물 유래의 고분자 생물소재 중에 최적 담체(carrier)로 선발하였다.In the present invention, the polymer functional biomaterial of step (b) may be any polymer functional biomaterial that can be used in the skin or cosmetic field, but is preferably a hyaluronic acid which is a polymer functional biomaterial not derived from the lactic acid bacteria. (hyaluronic acid), beta glucan (beta glucan), or collagen (collagen) is characterized in that at least one selected from the group consisting of. In an embodiment of the present invention, in order to maintain the stability of the nucleotides of lactic acid bacteria in the cell after the smooth elution and elution to maintain an environment similar to the environment in the cytoplasm, it was selected as the best carrier (carrier) in the microbial polymer material derived from microorganisms. .
본 발명에 있어서, 상기 (b)단계의 제한배지는 고분자 기능성 생물소재외에 영향성분이 제한된 어떤 제한배지도 가능하나, 바람직하게는 고분자 기능성 생물소재외에 물과 글루코스만 함유하는 것을 특징으로 하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 제공한다. 구체적으로, 상기 제한 배지는 증류수에 0.1~10%(w/v)의 고분자 기능성 생물소재와 0.1~10%(w/v) 의 글루코스를 함유할 수 있다. In the present invention, the limiting medium of step (b) may be any limiting medium in which the influence component is limited in addition to the polymeric functional biological material, but preferably, the low molecular weight functional material comprises only water and glucose in addition to the polymeric functional biological material. It provides a method for producing lactic acid bacteria nucleotides enclosed with a biological material. Specifically, the restriction medium may contain 0.1-10% (w / v) of the polymeric functional biomaterial and 0.1-10% (w / v) of glucose in distilled water.
본 발명에 있어서, 후발효 배양은 전발효를 통해 회수한 현탁된 균체를 제한배지에 접종 후 30~45도에서 12~48시간동안 배양하였다. 보다 바람직하게는 균체를 접종한 후 37도에서 15~24시간 동안 배양하였다.In the present invention, the post-fermentation culture was incubated for 12-48 hours at 30-45 degrees after inoculating the suspended cells recovered through pre-fermentation in a restriction medium. More preferably, after inoculating the cells were incubated at 37 degrees for 15 to 24 hours.
본 발명에 있어서, 상기 (c)단계의 열압축조건은 유산균 세포를 파쇄하고 고분자 기능성 생물소재를 분해할 수 있는 어떤 조건도 가능하나, 바람직하게는 80~130도의 온도 및 0.01~0.30MPa의 압력 조건인 것을 특징으로 하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 제공한다.In the present invention, the thermal compression conditions of the step (c) may be any condition that can break the lactic acid bacteria cells and decompose the polymer functional biological material, preferably a temperature of 80 to 130 degrees and a pressure of 0.01 to 0.30 MPa It provides a method for producing a low molecular weight functional biological material and lactic acid bacteria nucleotides, characterized in that the conditions.
종래 유산균 뉴클레오티드를 분리하기 위해서는 증식된 세포 배양액을 원심분리하여 상층액의 배양액은 버리고 펠렛의 세포만을 모아서 파쇄하는 데 반하여, 본 발명은 유산균 후발효공정의 배양액과 함께 유산균 세포를 파쇄하는 것을 기술적 특징으로 한다. 이로 인해, 자연스럽게 하나의 공정으로 생물소재의 저분자화 및 유산균 뉴클레오티드 용출을 이루어낼 수 있으며, 저분자 생물소재와 복합된 유산균 뉴클레오티드의 새로운 바이오 소재를 제조할 수 있다.In order to separate the conventional lactic acid bacterium nucleotides, the grown cell culture solution is centrifuged to discard the supernatant culture medium, and only the cells of the pellet are collected and crushed. It is done. As a result, it is possible to achieve low molecular weight and lactic acid bacteria nucleotide dissolution of biomaterials in one process, and to prepare a new biomaterial of lactic acid bacteria nucleotides complexed with a low molecular weight biomaterial.
본 발명에 있어서, 상기 (d)단계에서 세포벽과 세포질 단백질을 제거하는 것은 종래 생물기술에 알려진 어떤 방법도 사용할 수 있으나, 바람직하게는 원심분리를 통해 세포벽이 포함된 펠렛을 제거하고 냉각 및 여과를 통해 세포질 단백질을 제거하는 것을 특징으로 하는 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 제공한다. 상기 원심분리는 파쇄된 세포벽이 포함된 펠렛을 제거할 수 있는 어떤 원심분리, 예컨대 3,000 ~ 5,000 rpm이 사용될 수 있으며, 상기 냉각은 고온고압에 의해 변성된 단백질들이 응집되거나 다운될 수 있는 어떤 온도, 예컨대 0 내지 +25도가 사용될 수 있으며, 상기 여과는 세포질 단백질과 뉴클레오티드가 분리될 수 이는 어떤 필터, 예컨대 0.20 내지 20 um의 필터가 사용될 수 있다. 상기와 같이 유산균 고유의 세포벽과 세포질 단백질을 제거함으로써, 원료의 발효취 생성 및 피부 트러블을 억제할 뿐만 아니라 피부 마이크로바이옴에의 악영향을 방지할 수 있다.In the present invention, removing the cell wall and the cytoplasmic protein in step (d) may be any method known in the prior art, but preferably, centrifugation to remove the pellet containing the cell wall, cooling and filtration Provided is a method for producing a low molecular weight functional biomaterial and lactic acid bacteria nucleotides clathrate to remove cytoplasmic protein. The centrifugation may use any centrifugation, such as 3,000 to 5,000 rpm, to remove the pellet containing the crushed cell wall, the cooling may be any temperature at which the denatured proteins can be aggregated or down by high temperature and high pressure, For example, 0 to +25 degrees may be used, and the filtration may separate cytoplasmic protein and nucleotides, which may be used, such as a filter of 0.20 to 20 um. By removing the cell wall and the cytoplasmic protein inherent in the lactic acid bacteria as described above, not only the production of fermentation odor and skin trouble of the raw material can be suppressed, but also the adverse effects on the skin microbiome can be prevented.
구체적으로, 종래에는 유산균을 파쇄하여 뉴클레오티드를 용출시키는 열압과정으로 발생하는 배지성분 중 포함되어 있는 당성분과 세포질 내 단백질의 비가역적 반응인 밀라드 반응으로 변성 당단백 성분이 발생하고 이상 발효취를 유발하는 관능적 품질을 저해시키는 요인이 되었다. 그러나, 본 발명에 따르면, 이러한 제조과정 중 발생되는 품질 저해요인인 유산균 고유의 세포질 단백질과 세포벽 성분을 효과적으로 제거하고, 담체를 포접시켜 외인성 고분자에서 저분자로 변환하여 그 안정성을 증대시킬 수 있다. Specifically, denatured glycoprotein components are generated by a millard reaction, which is an irreversible reaction between sugar components and proteins in the cytoplasm, which are generated in the thermocompression process by crushing lactic acid to elute nucleotides, and cause abnormal fermentation odor. It has become a factor that impairs the sensory quality. However, according to the present invention, it is possible to effectively remove the cytoplasmic protein and cell wall components inherent in the lactic acid bacteria that are the quality inhibitors generated during the manufacturing process, and to increase the stability of the exogenous polymer by converting the carrier into low molecules.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 본 발명의 제조방법으로 제조된 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명에 따르면, 화장품 분야 등에서 유용한 저분자 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드를 복합체로 한꺼번에 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 저분자 생물소재가 자연스럽게 유산균 뉴클레오티드를 감쌈으로써 그 안정성을 증대시킬 수 있다. 본 발명의 저분자 기능성 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드는 종래에 없던 새로운 바이오 소재로서 큐비솜(Cubisome)이라 일컫는다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a lactic acid bacterium nucleotide encapsulated with a low molecular weight functional biological material prepared by the method of the present invention. According to the present invention, not only the low molecular weight biomaterial useful in the field of cosmetics and the lactic acid bacterium encapsulated in complex can be provided at a time, but also the low molecular weight biomaterial naturally increases the stability by wrapping the lactic acid bacterium nucleotide. The lactic acid bacterium nucleotide encapsulated with the low molecular weight functional biomaterial of the present invention is referred to as Cubisome as a new biomaterial that has not existed before.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명은 유산균 유래 뉴클레오티드의 안정적인 피부미백효과와 원료조제상에서 발생되는 균체 유래 단백질 및 세포벽 성분의 제거에 기초로 한 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 피부 마이크로바이옴과 원료의 발효취 생성에 영향을 미치는 유산균 고유의 세포질 단백질과 세포벽 성분을 고분자 다당체 후발효과정을 통해 상쇄시키고 자외선 흡수효과를 가진 유산균 유래의 뉴클레오티드를 고농도로 생산하여 이를 화장품, 식품 및 의약품에서 이용 가능한 바이오 소재 개발 목적으로 미생물 유래의 고분자 다당체를 포접시켜 그 안정성을 증대시킨 큐비솜(Cubisome)의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a production method based on the stable skin whitening effect of lactic acid bacteria-derived nucleotides and the removal of cell-derived proteins and cell wall components generated in the raw material preparation. More specifically, the present invention is to cancel the lactic acid bacteria unique cellular protein and cell wall components affecting the production of fermentation odor of skin microbiome and raw materials through the polymer polysaccharide latex effect tablet and high concentration of nucleotides derived from lactic acid bacteria having UV absorption effect The present invention relates to a method for producing a cubisome by encapsulating a polymer polysaccharide derived from microorganisms for the purpose of developing a bio-material which can be used in cosmetics, foods and medicines, thereby increasing its stability.
본 발명자들은 유산균을 증식시키기 위한 전발효를 진행 한 후, 발효취와 색상 그리고 피부 적용시 유효성분의 안정성 유지를 위해 미생물 유래의 고분자 다당체와 치환배양의 기법을 적용하여 후발효를 진행하고 자외선 파장의 흡광도가 가장 높은 세포구성성분인 세포 내 뉴크레오티드를 온도와 압력 그리고 시간의 변수를 파쇄조건을 최적화한 큐비솜 원료의 조제방법을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors proceed with pre-fermentation to propagate lactic acid bacteria, fermentation odor and color, and in order to maintain the stability of the active ingredient when applying the skin to the post-fermentation by applying the technique of the polysaccharide derived from microorganisms and substitution culture and UV wavelength The present invention was completed by developing a method for preparing cubicsome raw materials in which intracellular nucleotides, which have the highest absorbance of C, were optimized for crushing conditions with temperature, pressure, and time variables.
본 발명의 저분자 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드(큐비솜) 원료의 제조방법은 다음 단계들을 포함한다.The method for preparing a lactic acid bacterium nucleotide (cubisome) raw material enclosed with the low molecular weight biomaterial of the present invention includes the following steps.
(a) 유산균체를 증식시키는 전발효 단계;(a) pre-fermentation step of propagating lactic acid cells;
(b) 상기 (a)단계로부터 증식시킨 유산균체를 고분자 기능성 생물소재 함유 배지에서 증식시키는 후발효 단계;(b) a post-fermentation step of propagating the lactic acid bacteria grown from step (a) in a medium containing a polymeric functional biomaterial;
(c) 상기 (b)단계의 유산균 후발효액을 열압농축조건에서 락토바실러스 파라카제이의 뉴클레오티드를 용출시켜 피부흡수도가 높고 보존성이 우수한 저분자 생물소재와 포접된 유산균 뉴클레오티드를 제조하는 단계.(c) eluting the nucleotides of the lactobacillus post-fermentation solution of step (b) under heat pressure concentration conditions to produce lactic acid bacteria nucleotides in contact with low molecular weight biomaterials having high skin absorption and excellent preservation.
(a) 유산균의 전발효 단계:(a) Prefermentation stage of lactic acid bacteria:
유산균 전발효 단계는 균체를 최대한 증식시키고 발효취를 유발시키는 대사산물을 최소화하는 발효조건을 설정하였다. 전발효 조건으로는 미생물 생육곡선(microbial growth curve)상의 대수증식기(exponential phase) 상태의 균체로 생균수 및 pH의 2차 변수구간으로 제한을 두어 관능적 검사에서 발효취를 배제하였다.Lactic acid bacteria pre-fermentation step was set to the fermentation conditions to maximize the growth of cells and minimize the metabolites that cause the fermentation odor. Pre-fermentation conditions excluded the fermentation odor from the sensory test by limiting the secondary variable intervals of viable cell number and pH as the cells in the exponential phase state on the microbial growth curve.
(b) 유산균의 후발효 단계:(b) Post-fermentation stage of lactic acid bacteria:
유산균 전발효에서 회수한 균체로부터 발효취 제거와 피부 표피층(skin epidermis)에서의 지속적 기능작용을 위한 피부 친화적인 구조체형성을 위해 미생물 유래 고분자 생물소재를 기본 배지로 하여 후발효하였다.To ferment odor from cells recovered from pre-fermentation of lactic acid bacteria and to form a skin-friendly structure for continuous functioning in the skin epidermis, the microbial-derived polymer biomaterial was post-fermented.
상기 미생물 유래 고분자 생물소재는 구체적으로 이에 한정되지는 않지만, 히알루론산, 베타글루칸 등의 고분자 다당체 뿐만 아니라, 콜라겐 등의 단백질도 포함되며, 바람직하게는 히알루론산, 베타글루칸일 수 있으며 더욱 바람직하게는 히알루론산이 포함되는 후발효 배지 조성물을 말한다.The microorganism-derived polymer biomaterial is not particularly limited thereto, but may include not only polymer polysaccharides such as hyaluronic acid and beta glucan, but also proteins such as collagen, preferably hyaluronic acid and beta glucan, and more preferably. Refers to a post-fermentation medium composition containing hyaluronic acid.
(c) 피부친화적 저분자 생물소재에 포접된 기능성 유산균 뉴클레오티드의 큐비솜 생산:(c) Cubisome production of functional lactic acid bacteria nucleotides entrapped in skin-friendly low molecular biomaterials:
유산균 후발효액을 특정 온도와 압력의 2가지 변수를 최적화하여 고분자 다당체는 피부흡수가 용이한 형태의 저분자 다당체로 전환되고 유산균은 세포질 내에 존재하는 뉴클레오티드를 세포질 밖으로 용출시켜 저분자 다당체와 포접된 형태의 큐비솜을 생산하였다.The lactic acid bacteria after fermentation solution is optimized for two parameters of specific temperature and pressure, so that the polymer polysaccharide is converted into a low molecular weight polysaccharide which is easily absorbed by the skin, and the lactic acid bacteria elute nucleotides present in the cytoplasm out of the cytoplasm to be enclosed with the low molecular polysaccharide. Cotton was produced.
화장품 원료로 사용하고 있는 미생물 세포 파쇄물은 조성에 따른 작용을 명시하고 있지 않아 세포 내 단백질과 숙주의 피부 면역반응인 아토피, 홍반, 발진등을 일으키고 나아가 일부 단백질은 피부 유해균이 상대적으로 우세한 피부 마이크로바이옴에서 생장 질소원으로 사용되어 피부건강을 위협하는 잠재적인 인자가 될 수 있다. 따라서, 본 발명에서는 실시예에서 도출된 결과로부터 유산균을 활용하여 세포 내의 뉴클레오티드를 대량으로 수득할 수 있는 제조공정을 확립하였다[도 1]. 유산균이 발효하면서 세포 밖으로 분비하는 단백질을 후발효 과정을 통해 제거하고 후발효 과정에서 사용되는 배지성분으로 사용되는 고분자 다당체는 열과 압력을 가해 유산균 뉴클레오티드를 용출하는 과정에서 저분자 다당체로 전환되어 피부 흡수가 용이한 제제로 사용가능 할 뿐만 아니라, 유산균 뉴클레오티드를 포접하여 그 안정성을 유지시키는 이중 기능성을 나타내며, 후발효 공정에서 질소원을 배제한 배지에서 단백질 생성을 억제시켜 최종 제품에서의 발효취를 제거하여 기존의 세포벽 성분을 사용하는 공정 대비 관능적 상품성을 개선시키고 품질 또한 향상시켰다.The microbial cell debris used as a cosmetic ingredient does not specify the action according to the composition, causing atopic dermatitis, erythema, rash, etc., which are the skin immune reactions of intracellular proteins and hosts. It can be used as a source of growth nitrogen in scabies and can be a potential threat to skin health. Therefore, in the present invention, the production process that can be obtained in a large amount of nucleotides in the cell utilizing the lactic acid bacteria from the results obtained in the Example [Fig. 1]. As the lactic acid bacteria ferment, the protein secreted out of the cell is removed through the post-fermentation process, and the polymer polysaccharide used as a medium component used in the post-fermentation process is converted into a low molecular polysaccharide in the process of eluting the lactobacillus nucleotide by applying heat and pressure. Not only can it be used as an easy preparation, it also shows the dual function of encapsulating lactic acid bacteria nucleotides to maintain its stability, and by inhibiting the production of protein in the medium excluding nitrogen sources in the post-fermentation process, it removes the fermentation odor from the final product. Sensory merchandise and quality were also improved compared to the process using cell wall components.
본 발명에 따르면, 피부 마이크로바이옴과 원료의 발효취 생성에 영향을 미치는 유산균 고유의 세포질 단백질과 세포벽 성분을 효과적으로 제거하고, 저분자 기능성 생물소재와 포접시켜 그 안정성을 증대시킨 유산균 유래의 뉴클레오티드를 고농도로 생산하여, 이를 화장품, 식품 및 의약품 분야의 바이오 소재로 효과적으로 이용할 수 있다.According to the present invention, high concentrations of nucleotides derived from lactic acid bacteria, which effectively removes cellular proteins and cell wall components unique to lactic acid bacteria that affect the production of fermentation odors of skin microbiomes and raw materials, and are enclosed with low molecular weight functional biological materials to increase their stability. It can be effectively used as a bio material in the cosmetic, food and pharmaceutical fields.
도 1은 본 발명에 따른 고농도 유산균 뉴클레오티드의 제조방법을 나타내는 공정도이다.
도 2은 본 발명의 제조방법으로 제조한 유산균 뉴클레오티드 원료를 나타낸 사진이다.
도 3은 종래 방법으로 제조된 유산균 파쇄물 원료를 나타낸 사진이다.
도 4a는 전발효-후발효(담체 유)로 생산된 유산균 뉴클레오티드의 UV 파장 흡수도를 나타내는 사진이다.
도 4b는 전발효-후발효(담체 무)로 생산된 유산균 뉴클레오티드의 UV 파장 흡수도를 나타내는 사진이다.
도 5는 유산균 뉴클레오티드의 용출을 핵산 분석을 통해 나타내는 사진이다. 도 5a는 핵산 standard의 크로마토그램이고, 도 5b는 유산균 뉴클레오티드의 크로마토코그램이다.
도 6은 고분자 생물소재의 저분자화를 나타내는 사진이다. 도 6a는 저분자화되기전의 고분자 생물소재의 크로마토그램이고, 도 6b는 저분자화된 생물소재의의 크로마토코그램이다. 1 is a process chart showing a method for producing a high concentration of lactic acid bacteria nucleotides according to the present invention.
Figure 2 is a photograph showing the lactic acid bacteria nucleotide raw material prepared by the production method of the present invention.
Figure 3 is a photograph showing the lactic acid bacteria lysate raw material prepared by a conventional method.
Figure 4a is a photograph showing the UV wavelength absorbance of lactic acid bacteria nucleotides produced by pre-fermentation and post-fermentation (carrier oil).
Figure 4b is a photograph showing the UV wavelength absorbance of lactic acid bacteria nucleotides produced by pre-fermentation and post-fermentation (carrier free).
Figure 5 is a photograph showing the elution of lactic acid bacteria nucleotides through nucleic acid analysis. Figure 5a is a chromatogram of nucleic acid standard, Figure 5b is a chromatogram of lactic acid bacteria nucleotides.
6 is a photograph showing the low molecular weight of the polymeric biomaterial. FIG. 6A is a chromatogram of a polymeric biomaterial prior to low molecular weight, and FIG. 6B is a chromatogram of a biomolecule being low molecular weight.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
실시예 1: 저분자 생물소재(히알루론산)와 포접된 유산균 뉴클레오티드(큐비솜)의 제조Example 1 Preparation of Lactic Acid Bacteria Nucleotide (Cubisome) Entrapped with Low Molecular Weight Biomaterial (Haluronic Acid)
장내 유산균(Lactobacillus)을 MRS 액상배지를 사용하여 3% (v/v) 되게 접종한 후, 37도에서 15~24시간 전배양 후 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체 만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. 회수한 현탁된 균체를 증류수에 글루코오스 1%(w/v) 및 히알루론산 1%(w/v)를 첨가한 제한배지에 접종 후 37도에서 15~24시간 동안 후배양하였다. 배양 후 121도, 0.15MPa, 30분간 세포를 파쇄시키고 유산균 파쇄액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하여 최종 상등액만을 회수하였다. 회수한 상등액을 4도에서 칠링(chilling)후에 0.45 um의 필터로 최종 여과하였다. 여과 후 냉장에서 1주일간 보관 후 상태를 확인하였다. 도 2은 본 발명의 제조방법으로 제조한 유산균 뉴클레오티드(큐비솜)를 나타낸 사진이다.After inoculating Lactobacillus to 3% (v / v) using MRS liquid medium, centrifugation (4,000 rpm, 10 min) after 15-24 hours pre-cultivation at 37 ° C, and only cells were recovered and sterilized distilled water. Wash twice with and suspend in final sterile distilled water. The collected suspended cells were post-incubated at 37 ° C. for 15-24 hours after inoculation into the restriction medium to which
실시예 2: 저분자 생물소재(베타글루칸)와 포접된 유산균 뉴클레오티드(큐비솜)의 제조Example 2: Preparation of Lactic Acid Bacteria Nucleotide (Cubisome) Enclosed with Small Molecular Biomaterial (Betaglucan)
장내 유산균(Lactobacillus)을 MRS 액상배지를 사용하여 3% (v/v) 되게 접종한 후, 37도에서 15~24시간 전배양 후 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체 만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. 회수한 현탁된 균체를 증류수에 글루코오스 1%(w/v) 및 베타글루칸 1%(w/v)를 첨가한 제한배지에 접종 후 37도에서 15~24시간 동안 후배양하였다. 배양 후 121도, 0.15MPa, 30분간 세포를 파쇄시키고 유산균 파쇄액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하여 최종 상등액만을 회수하였다. 회수한 상등액을 4도에서 칠링(chilling)후에 0.45 um의 필터로 최종 여과하였다. 여과 후 냉장에서 1주일간 보관 후 상태를 확인하였다. After inoculating Lactobacillus to 3% (v / v) using MRS liquid medium, centrifugation (4,000 rpm, 10 min) after 15-24 hours pre-cultivation at 37 ° C, and only cells were recovered and sterilized distilled water. Wash twice with and suspend in final sterile distilled water. The recovered suspended cells were post-incubated at 37 degrees for 15-24 hours after inoculation into the restriction medium to which
실시예 3: 저분자 생물소재(콜라겐)와 포접된 유산균 뉴클레오티드(큐비솜)의 제조Example 3: Preparation of Lactic Acid Bacteria Nucleotide (Cubisome) Enclosed with Small Molecular Biomaterial (Collagen)
장내 유산균(Lactobacillus)을 MRS 액상배지를 사용하여 3% (v/v) 되게 접종한 후, 37도에서 15~24시간 전배양 후 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체 만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. 회수한 현탁된 균체를 증류수에 글루코오스 1%(w/v) 및 콜라겐 1%(w/v)(실시예 3)를 첨가한 제한배지에 접종 후 37도에서 15~24시간 동안 후배양하였다. 배양 후 121도, 0.15MPa, 30분간 세포를 파쇄시키고 유산균 파쇄액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하여 최종 상등액만을 회수하였다. 회수한 상등액을 4도에서 칠링(chilling)후에 0.45 um의 필터로 최종 여과하였다. 여과 후 냉장에서 1주일간 보관 후 상태를 확인하였다. After inoculating Lactobacillus to 3% (v / v) using MRS liquid medium, centrifugation (4,000 rpm, 10 min) after 15-24 hours pre-cultivation at 37 ° C, and only cells were recovered and sterilized distilled water. Wash twice with and suspend in final sterile distilled water. The recovered suspended cells were post-incubated at 37 ° C. for 15-24 hours after inoculation into the restriction medium to which
비교예 1: 유산균 파쇄물의 제조Comparative Example 1: Preparation of Lactic Acid Bacteria Crushed Material
장내 유산균을 MRS 액상배지를 사용하여 3% (v/v) 되게 접종한 후, 37도에서 15~24시간 배양 후 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체 만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. 유산균 현탁액을 121℃, 0.15 MPa, 30분간 세포를 파쇄시키고 유산균 파쇄액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하여 상등액만을 회수하였다. 도 3은 종래 방법으로 제조된 유산균 파쇄물 원료를 나타낸 사진이다.Inoculate the intestinal lactic acid bacteria to 3% (v / v) using MRS liquid medium, incubate at 37 ° C for 15 ~ 24 hours, centrifuge (4,000 rpm, 10 min), and recover only the cells and wash them twice with sterile distilled water. were washed and suspended in final sterile distilled water. Lactic acid bacteria suspension was 121 ℃, 0.15 MPa, cells were disrupted for 30 minutes and the lactic acid bacteria lysate was centrifuged (4,000 rpm, 10 min) to recover only the supernatant. Figure 3 is a photograph showing the lactic acid bacteria lysate raw material prepared by a conventional method.
비교예 2: 유산균 뉴클레오티드의 제조Comparative Example 2: Preparation of Lactobacillus Nucleotide
장내 유산균을 MRS 액상배지를 사용하여 3% (v/v) 되게 접종한 후, 37도에서 15~24시간 배양 후 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하고 균체 만을 회수하여 멸균 증류수로 2회 세척(washing)하고 최종 멸균 증류수에 현탁하였다. 회수한 현탁된 균체를 글루코오스 1%(w/v)만을 이용해 만든 제한배지를 이용해 접종 후 37도에서 15~24시간 동안 후배양하였다. 배양 후 121도, 0.15MPa, 30분간 세포를 파쇄시키고 유산균 파쇄액을 원심분리 (4,000 rpm, 10 min)하여 최종 상등액만을 회수하였다. 회수한 상등액을 4도에서 칠링(chilling)후에 0.45 um의 필터로 최종 여과하였다. 여과 후 냉장에서 1주일간 보관 후 상태를 확인하였다.Inoculate the intestinal lactic acid bacteria to 3% (v / v) using MRS liquid medium, incubate at 37 ° C for 15 ~ 24 hours, centrifuge (4,000 rpm, 10 min), and recover only the cells and wash them twice with sterile distilled water. were washed and suspended in final sterile distilled water. The recovered suspended cells were post-cultured at 37 ° C. for 15-24 hours using a limiting medium made with only 1% glucose (w / v). After incubation, cells were crushed at 121 degrees, 0.15 MPa and 30 minutes, and the lactic acid bacteria lysate was centrifuged (4,000 rpm, 10 min) to recover only the final supernatant. The recovered supernatant was finally filtered through a 0.45 um filter after chilling at 4 degrees. After filtration and storage for 1 week in refrigeration was confirmed the state.
실험예 1: 유산균 뉴클레오티드 포접 최적 담체(carrier)의 선발Experimental Example 1 Selection of Lactic Acid Bacterial Nucleotide Inclusion Optimal Carrier
유산균의 뉴클레오티드의 세포 내에서의 원활한 용출과 용출 후 세포질내의 환경과 유사한 환경을 조성하여 그 안정성을 유지하기 위해 미생물 유래의 고분자 기능성 생물소재 중에 최적 담체(carrier)로 선발하였다. 이를 위해 본 실험에 사용한 고분자 다당체 기반의 담체로는 히알루론산, 베타글루칸, 및 단백질 기반의 담체로서 콜라겐을 사용하였으며, 유산균 뉴클레오티드를 용출시키는 조건에서 고분자에서 저분자 변환 시 발생되는 이상 취(냄새)를 관능적 요소로 두고 평가하였다[표 1]. 유산균의 세포질 속 뉴클레오티드를 분리하는 과정에서 일정 조건의 열과 압력이 가해지고 고분자 다당 성분이 유산균의 세포벽을 구성하는 구조단백질과 반응하여 카라멜당이 되는 밀라드 반응이 일어나 후 발효액의 색상이 짙어지거나 비가역적인 당단백(변성 단백질)등으로 인해 투명하지 않고 뿌옇게 흐려지는 현상을 나타내고 이는 이상 발효취를 발생시킨다. 따라서 담체 중 열압공정 후 1주일간 냉각과정을 관찰해 뿌옇게 흐려지지 않고 투명상태를 유지하며 이상 발효취가 발생하지 않는 군이 당단백 성분을 유발하지 않는 안정한 담체임을 확인하였으며, 이를 관능검사를 통해 당단백 침전물에 의해 콜로이드 형태로 뿌옇게 흐려지고 이상 발효취가 나는 경우 +++로 나타냈고, 당단백 침전물이 생성되며 바닥에 가라앉고 침전물이 생성되며 바닥에 가라앉고 이상 발효취가 나는 경우 ++로 나타냈으며, 당단백 침전물이 발생하지 않고 투명하며 이상 발효취가 나지 않는 경우는 +로 나타냈다. 배양과정은 <실시예 1>과 동일하게 진행하였으며, 유산균 세포 파쇄 전 단계에서 최종 현탁액으로 고분자 다당체 기반의 액제를 사용하였으며 이후 분석과정은 동일하게 진행하였다. In order to maintain the stability of the nucleotides of the lactic acid bacteria in the cell after elution and elution to maintain an environment similar to the environment in the cytoplasm was selected as the optimum carrier (carrier) in the polymer functional biological material derived from microorganisms. For this purpose, collagen was used as a carrier based on hyaluronic acid, beta glucan, and protein as the polymer polysaccharide-based carrier, and the abnormal odor (odor) generated during low molecular conversion in the polymer under conditions that elute the lactic acid bacteria nucleotides was used. It was evaluated as a sensory element [Table 1]. In the process of separating nucleotides of lactic acid bacteria, heat and pressure under certain conditions are applied, and the polymer polysaccharide component reacts with the structural protein constituting the cell wall of lactic acid bacteria, resulting in a millard reaction that becomes a caramel sugar, resulting in a dark or irreversible color of the fermentation broth. Glycoprotein (denatured protein), etc. due to the opaque and cloudy phenomena, which causes abnormal fermentation odor. Therefore, the cooling process was observed for one week after the thermo-pressure process in the carrier to confirm that the group was not cloudy and kept transparent and that no abnormal fermentation odor occurred was a stable carrier that did not induce glycoprotein components. It is indicated as +++ when it becomes cloudy in the colloidal form and has an abnormal fermentation odor, and a glycoprotein precipitate is formed and sinks to the bottom, and a precipitate is formed and sinks to the bottom and has an abnormal fermentation odor. Glycoprotein precipitate did not occur, was transparent, and no abnormal fermentation odor was indicated by +. The culturing process was performed in the same manner as in <Example 1>, and the polymer polysaccharide-based solution was used as the final suspension in the step of lactic acid bacteria cell disruption, and the analysis was then performed in the same manner.
생성여부Denatured protein
Creation
여부Fermentation odor generation
Whether
실험예 2: 포접 담체로 인한 유산균 뉴클레오티드의 안정성 평가Experimental Example 2: Evaluation of the Stability of Lactic Acid Bacteria Nucleotide Due to Inclusion Carrier
실험예 1 에서 이용한 기능성 생물소재중, 피부 친화적이면서 제조 공정에 유리한 히알루론산을 이용하여 담체로 인한 유산균의 뉴클레오티드의 안전성을 평가하였다 실시예 1에 따라 전발효-후발효(담체 유)로 생산된 유산균 뉴클레오티드의 UV 파장 흡수도와 비교예 2에 따라 전발효-후발효(담체 무)로 생산된 유산균 뉴클레오티드의 UV 파장 흡수도를 평가하였다. 그 결과 도 4a, b에서 보여지듯이, 실시예 1의 UV 파장 흡수도가 비교예 2의 UV 파장 흡수도보다 높은 것을 확인할 수 있었다. 이는 담체로 인하여 유산균 뉴클레오티드가 분해되지 않고 오랫동안 안정하게 유지된다는 것을 나타낸다.In the functional biological material used in Experimental Example 1, hyaluronic acid, which is skin-friendly and favorable to the manufacturing process, was used to evaluate the safety of nucleotides of lactic acid bacteria due to a carrier. According to Example 1, produced by pre-fermentation and post-fermentation (carrier oil). UV wavelength absorption of the lactic acid bacteria nucleotides was evaluated UV absorption of the lactic acid bacteria nucleotides produced by pre-fermentation and post-fermentation (carrier free) according to Comparative Example 2. As a result, as shown in Figure 4a, b, it was confirmed that the UV wavelength absorbance of Example 1 is higher than the UV wavelength absorbance of Comparative Example 2. This indicates that the carrier does not degrade the lactic acid bacteria nucleotides and remains stable for a long time.
실험예 3: 담체로 포접된 유산균 뉴클레오티드의 핵산 분석Experimental Example 3: Nucleic Acid Analysis of Lactobacillus Nucleotide Entrapped with Carrier
실험예 1로부터 선발된 미생물 유래의 고분자 생물소재 중, 피부 친화적이면서 제조 공정에 유리한 히알루론산을 기반으로 포접시킨 유산균 뉴클레오티드의 핵산을 분석하였다. 샘플 5 ml을 취하여 5 mM ZnCl2 1 ml과 50 mM sodium acetate(pH5.5) 1.5 ml을 첨가한 후 Nuclease P1 (136 ppm in 0.1 M ammonium acetate pH 4.50) 100 μl를 첨가하고 60℃, 2시간 효소분해한 후 냉각하였다. 그 후 0.45 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 사용하였다. Luna C18 (3μm, 4.6mm*150mm) 컬럼을 장착한 HPLC를 이용하여 dAMP, dCMP, dGMP, dTMP를 확인하였다. 이동상은 용매A (DW 1000ml + TBA-OH(40%) 5ml + H3PO4(85%) 1ml) 및 용매B: 80% MeOH + TBA-OH(40%) 5ml + H3PO4(85%) 1ml)을 이용하였고, 검출기는 UV detector를 이용하였다. 도 5는 유산균 뉴클레오티드의 용출을 핵산 분석을 통해 나타내는 사진이다. 도 5a는 핵산 standard의 크로마토그램이고, 도 5b는 유산균 뉴클레오티드의 크로마토코그램이다. Nucleic acid of the lactic acid bacterium nucleotide contained in the hyaluronic acid which is skin-friendly and favorable to a manufacturing process was analyzed among the polymer biological material derived from microorganisms selected from Experimental Example 1. Take 5 ml of the sample, add 1 ml of 5 mM ZnCl2 and 1.5 ml of 50 mM sodium acetate (pH5.5), add 100 μl of Nuclease P1 (136 ppm in 0.1 M ammonium acetate pH 4.50), and then heat the enzyme at 60 ° C for 2 hours. After disassembly and cooling. Thereafter, the resultant was filtered with a 0.45 μm filter and used as a test solution. DAMP, dCMP, dGMP, dTMP were identified using HPLC equipped with a Luna C18 (3 μm, 4.6 mm * 150 mm) column. Mobile phase using solvent A (DW 1000ml + TBA-OH (40%) 5ml + H3PO4 (85%) 1ml) and solvent B: 80% MeOH + TBA-OH (40%) 5ml + H3PO4 (85%) 1ml) The detector was a UV detector. Figure 5 is a photograph showing the elution of lactic acid bacteria nucleotides through nucleic acid analysis. Figure 5a is a chromatogram of nucleic acid standard, Figure 5b is a chromatogram of lactic acid bacteria nucleotides.
실험예 4: 후발효를 통한 고분자 생물소재의 저분자화 확인Experimental Example 4: Confirmation of Low Molecular Weight of Polymeric Biomaterials through Post-fermentation
실험예 1로부터 선발된 고분자 생물소재 중 다당체인 히알루론산을 기반으로 후발효를 통한 고분자 생물고분자의 저분자화를 확인하였다. 후발효 공정에 투입하기 전의 고분자 히알루론산 원료(도 6a)와 후발효를 포함한 실시예1의 결과물인 저분자 히알루론산과 포접된 유산균 뉴클레오티드(도 6b)를 시료로 사용하여 히알루론산의 분자량을 측정하였다. 저분자: TOSOH G3000PWXL, 고분자: Viscotek GMPWxl 칼럼이 장착된 GPC (겔투과크로마토그라피)를 이용하여 분자량을 측정하였다. 용매는 저분자: D.W.:Acetic acid(3930:70), 고분자: 200mM NaCl(in 0.1% Sodium Azide) 를 이용하였고, 검출기는 RI detector를 이용하였다. 도 6은 고분자 생물소재의 저분자화를 나타내는 사진이다. 도 6a는 저분자화되기전의 고분자 생물소재의 크로마토그램이고, 도 6b는 저분자화된 생물소재의의 크로마토코그램이다. 저분자화되기전의 고분자 히알루론산의 분자량(Mw)은 1.385 x 106 달톤이었으나, 본발명을 통해 저분자하된 히알루론산의 분자량(Mw)은 422 달톤임을 알 수 있다.Based on the polysaccharide hyaluronic acid among the polymer biomaterials selected from Experimental Example 1, the low molecular weight of the polymer biopolymers was confirmed. The molecular weight of hyaluronic acid was measured using a high molecular weight hyaluronic acid raw material (FIG. 6A) and a low molecular weight hyaluronic acid and a lactic acid bacterium entrapped (FIG. 6B) as a sample, which were the result of Example 1 including the post-fermentation process. . Low molecular weight: TOSOH G3000PWXL, polymer: molecular weight was measured using GPC (gel permeation chromatography) equipped with Viscotek GMPWxl column. The solvent was a low molecular weight: DW: Acetic acid (3930: 70), a polymer: 200mM NaCl (in 0.1% Sodium Azide), RI detector was used. 6 is a photograph showing the low molecular weight of the polymeric biomaterial. FIG. 6A is a chromatogram of a polymeric biomaterial prior to low molecular weight, and FIG. 6B is a chromatogram of a biomolecule being low molecular weight. The molecular weight (Mw) of the high molecular weight hyaluronic acid before the low molecular weight was 1.385 x 10 6 Daltons, it can be seen from the present invention that the molecular weight (Mw) of the low molecular weight hyaluronic acid is 422 daltons.
본 발명에 대해 상기 실시예를 참조하고 설명하였으나, 이는 예시적인 것에 불과하며, 본 발명에 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호범위는 첨부된 특허 청구 범위의 기술적 사항에 의해 정해져야 할 것이다.Although the present invention has been described and described with reference to the above embodiments, these are merely exemplary, and those skilled in the art will understand that various modifications and equivalent other embodiments are possible therefrom. . Therefore, the true technical protection scope of the present invention will be defined by the technical details of the appended claims.
Claims (8)
(a) 유산균을 탄소원, 질소원, 비타민류 및 무기염류를 함유하는 영양배지에서 증식시키는 전발효 단계;
(b) 상기 (a) 단계에서 증식시킨 유산균체를 분리하여, 히알루론산, 베타글루칸, 또는 콜라겐으로 이루어진 군에서 선택된 고분자 기능성 생물소재와 글루코스 및 물로만 이루어진 제한배지에서 배양하는 후발효 단계;
(c) 상기 (b) 단계의 유산균 후발효액에 열압축조건을 가하여 그안의 유산균 세포가 파쇄되어 유산균 뉴클레오티드가 용출되도록 하는 단계;
(d) 상기 (c) 단계에서 얻어진 결과물 발효액으로 부터 세포벽 및 세포질 단백질 성분을 제거하고, 상기 (b) 단계의 고분자 기능성 생물소재보다 상대적으로 분자량이 작은 저분자 기능성 생물소재와 유산균 뉴클레오티드의 복합체를 회수하는 단계.
A method of preparing a complex of low molecular weight functional biomaterials and lactic acid bacteria nucleotides selected from the group consisting of hyaluronic acid, beta glucan, or collagen, comprising the following steps:
(a) a pre-fermentation step of propagating lactic acid bacteria in a nutrient medium containing a carbon source, nitrogen source, vitamins and inorganic salts;
(B) the post-fermentation step of separating the lactic acid bacteria grown in the step (a), incubated in a limited medium consisting of glucose and water with a polymeric functional biomaterial selected from the group consisting of hyaluronic acid, beta glucan, or collagen;
(c) subjecting the lactic acid bacteria post-fermentation solution of step (b) to thermal compression conditions so that the lactic acid bacteria cells are crushed to elute the lactic acid bacteria nucleotides;
(d) removing the cell wall and cytosolic protein components from the resultant fermentation broth obtained in step (c), and recovering a complex of a low molecular weight functional biomaterial and a lactic acid bacterium nucleotide having a lower molecular weight than the polymer functional biomaterial of step (b). Steps.
According to claim 1, wherein the lactic acid bacteria of step (a) is Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp., Streptococcus sp., Lactococcus sp. , Enterococcus sp, Pediococcus sp, Bisella sp. (Weissella sp) is a method for producing a complex of low molecular weight functional biomaterials and lactic acid bacteria nucleotides, characterized in that at least one selected from the group consisting of.
According to claim 1, wherein the thermal compression conditions of step (c) is a low molecular weight functional biomaterial and the production of a complex of lactic acid bacteria nucleotides, characterized in that the temperature of 80-130 degrees ( o C) and pressure conditions of 0.01 ~ 0.3MPa Way.
According to claim 1, wherein the step (d) in the step of centrifugation to remove the pellet containing the cell wall and the cytoplasmic protein by cooling and filtration characterized in that the manufacturing method of the complex of low molecular weight functional biomaterials and lactic acid bacteria nucleotides. .
A low molecular weight functional biomaterial selected from the group consisting of hyaluronic acid (hyaluronic acid), beta glucan, or collagen (collagen) prepared by the method according to claim 1, a complex of lactic acid bacteria nucleotides.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102405050B1 (en) * | 2021-07-19 | 2022-06-02 | 주식회사 현대바이오랜드 | Detection method for dermabiotics in microbiome of cosmetics sample |
| KR102587940B1 (en) | 2023-03-02 | 2023-10-11 | 주식회사 현대바이오랜드 | Bifidobacterium breve HDB7040 strain for preventing or treating female menopausal syndrome via estrogen receptor-beta specific activation |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114736941B (en) * | 2021-12-30 | 2024-03-29 | 云南白药集团健康产品有限公司 | Sodium hyaluronate fermented product, external preparation containing the same for skin, and preparation method and application thereof |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070099450A (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-09 | 닛세이 바이오 카부시키 가이샤 | Compounding ingredients for basic cosmetics and basic cosmetics |
| KR20080092090A (en) | 2007-04-11 | 2008-10-15 | 주식회사 두산 | Whitening composition containing lactobacillus lysate |
| JP2009526529A (en) * | 2006-02-15 | 2009-07-23 | ノボザイムス バイオポリマー アクティーゼルスカブ | Formation of low molecular weight hyaluronic acid |
| KR20130115943A (en) * | 2012-04-13 | 2013-10-22 | 주식회사 알엔에이 | Compisitiom for anti-inflammation, skin whitening and anti-aging comprising of supernatant of lactic acid bacteria lysate |
| KR101426191B1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-31 | (주)미애부생명과학 | Cosmetic Composition Having Culture Fluid of Lactobacillus sp. and Stem cells |
| KR20140135210A (en) * | 2012-02-21 | 2014-11-25 | 블루메이지 프레다 바이오팜 컴퍼니 리미티드 | Bacillus, hyaluronic acid enzyme, and uses thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101588809B (en) * | 2006-12-26 | 2013-04-24 | 株式会社明治 | Fermented milk for improving and/or treating skin and method for producing the same |
| KR101754218B1 (en) * | 2016-02-19 | 2017-07-06 | (주)진셀팜 | Composition for improving skin conditions and preventing or treating proliferative skin diseases containing fermented extracts of lactic acid bacteria complex and portulaca oleracea as active ingredient |
-
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009526529A (en) * | 2006-02-15 | 2009-07-23 | ノボザイムス バイオポリマー アクティーゼルスカブ | Formation of low molecular weight hyaluronic acid |
| KR20070099450A (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-09 | 닛세이 바이오 카부시키 가이샤 | Compounding ingredients for basic cosmetics and basic cosmetics |
| KR20080092090A (en) | 2007-04-11 | 2008-10-15 | 주식회사 두산 | Whitening composition containing lactobacillus lysate |
| KR20140135210A (en) * | 2012-02-21 | 2014-11-25 | 블루메이지 프레다 바이오팜 컴퍼니 리미티드 | Bacillus, hyaluronic acid enzyme, and uses thereof |
| KR20130115943A (en) * | 2012-04-13 | 2013-10-22 | 주식회사 알엔에이 | Compisitiom for anti-inflammation, skin whitening and anti-aging comprising of supernatant of lactic acid bacteria lysate |
| KR101426191B1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-31 | (주)미애부생명과학 | Cosmetic Composition Having Culture Fluid of Lactobacillus sp. and Stem cells |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102405050B1 (en) * | 2021-07-19 | 2022-06-02 | 주식회사 현대바이오랜드 | Detection method for dermabiotics in microbiome of cosmetics sample |
| KR102587940B1 (en) | 2023-03-02 | 2023-10-11 | 주식회사 현대바이오랜드 | Bifidobacterium breve HDB7040 strain for preventing or treating female menopausal syndrome via estrogen receptor-beta specific activation |
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