KR102070970B1 - 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 단풍나무 추출물을 인간을 제외하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료방법 및 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 단풍나무 추출물은 장내 밀착 연접을 구성하는 ZO-1 및 오클루딘 단백질의 합성을 촉진시킴으로 장내 투과성을 증가시키고, 장 질환에 의한 체중 감소 및 대장 길이 감소를 저해시키는 효과를 보이므로, 장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는, 예방 또는 개선용 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 단풍나무 추출물을 인간을 제외하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료방법 및 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
장 질환은 복통을 동반하며 소화 장애를 유발하고 다양한 원인에 의해 발생하는 현대인에게서 흔히 나타나는 질환으로, 대표적으로 과민성 장 증후군과 염증성 장 증후군으로 나뉜다.
과민성 장 증후군 (IBS)은 기질적 원인이 없이 장기간 반복되는 복부팽만감 등의 복부 불편감 및 복통과 더불어, 설사, 변비 등의 배변 습관의 변화를 동반하는 만성 질환이며, 그 증상이 정신적인 요인이나 스트레스에 의해서 악화하기도 한다. 증상에 따라 설사 우세형, 변비 우세형, 및 통증 우세형으로 구분하여 약물 치료가 되고 있으며, 한국 국내 환자 중 설사형이 30.8%, 변비형이 24.6%, 설사와 변비 교대형이 44.6%를 차지한다.
과민성 장 증후군의 치료를 위한 약물요법은 과민성 장 증후군의 전반적인 증상을 개선하는 약제와 단일 증상에 대한 약제로 나눌 수 있다. 복통에 관한 약물로는 평활근 이완제, 항우울제, 오피오이드 작용제(Opioid agonist) 등이 사용되고, 변비 우세형 과민성 장 증후군에 관한 약제로는 섬유제제, 완화제, 5-HT4 작용제 등이 사용되고 있으며, 설사 우세형 과민성 장 증후군에 관한 약제로는 지사제, 5-HT3 길항제 등이 사용된다. 그러나 기존 5-HT 계열 약물들은 부작용으로 인해 그 사용이 제한되고 있기 때문에 현재까지 과민성 장 증후군에 대한 약물요법은 매우 제한적이고, 따라서 대증요법에 대한 의존도가 높아 만족스럽지 못한 실정이다
한편, 궤양성 대장염이나 크론병은 아직 원인이 불분명한 염증성 장 질환 (IBD)으로서, 치유와 재발을 반복하는 만성 난치성 질환이다. 이들 질환의 병인으로서는 유전적 요인이나 면역 이상뿐만 아니라, 식사 등의 환경인자가 관여한다는 지적이 있지만 원인은 아직 불분명하다. 궤양성 대장염은 대장의 점막에 짓무름이나 궤양이 연속적으로 형성되는 염증성 질환으로, 혈변, 점혈변, 설사, 복통이 일어나고, 중증인 경우에는 발열, 체중감소, 빈혈 등의 전신성의 증상이 나타난다. 또한, 크론병은 입에서 항문에 이르는 소화기관의 어느 부위에나 염증이나 궤양 등의 병변이 비연속적으로 발생하는 것을 특징으로 하며, 복통, 설사, 혈변과 더불어, 중증의 경우에는 발열, 하혈, 체중감소, 전신권태감, 빈혈 등의 증상이 나타난다.
종래에는 이들 염증성 장 질환의 발병율은 서구권에서 높다고 알려져 있었지만, 최근, 한국에서도 식습관 등의 생활습관의 변화와 함께 환자 수가 급증하고 있다. 그렇지만, 원인이 불분명한 이유도 있어 근본적 치료법은 확립되어 있지 않다. 그 때문에 현재의 치료는, 완치를 목표로 하는 것이 아닌, 증상의 개선을 도모하고, 그것을 장기간 유지하는 것을 목표로 한다. 이러한 치료을 위한 약제로서, 주로 아미노살리실산제제, 부신피질 스테로이드제, 면역억제제 등이 사용되지만, 이들의 부작용은 임상적으로 커다란 문제점을 가지고 있다. 예를 들면, 아미노살리실산제제로서 자주 사용되는 살라조설파피리딘의 부작용에는 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등이 보고되고 있다. 또한, 부신피질스테로이드제는 일반적으로는 프레드니솔론의 경구투여, 관장, 좌약, 정맥 주사 등으로 사용되지만, 위궤양이나 장기사용에 의한 대퇴골두 괴사 등의 부작용이 존재한다. 그러나 투약의 중단은 증상의 재발을 불러오기 때문에, 이들 약제는 계속적으로 사용하지 않을 수 없다.
이에, 본 발명자들은 상기와 같은 장 질환에 효과적인 동시에 부작용이 작은 천연물을 개발하기 위해 예의 연구 노력한 결과, 단풍나무 추출물의 장내 밀착 연접(tight junction)을 구성하는 ZO-1 및 오클루딘(occludin) 단백질의 합성을 촉진하여 장내 투과성을 증가시키고, 염증성 장 질환에 의한 체중 감소 및 대장 길이 감소를 저해시키는 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
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본 발명의 하나의 목적은 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 단풍나무 추출물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 장 질환 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는, 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서의 용어, "단풍나무(Acer palmatum)"는 무환자나무과(Sapindaceae)의 식물로 산지의 계곡에서 자란다. 높이는 10m에 달하고, 작은 가지는 털이 없으며 붉은빛을 띤 갈색이다. 잎은 마주나고 손바닥 모양으로 5∼7개로 깊게 갈라진다. 갈라진 조각은 넓은 바소 모양이고 끝이 뾰족하며 가장자리에 겹톱니가 있고 길이가 5∼6cm이다. 잎자루는 붉은 색을 띠고 길이가 3∼5cm이다. 단풍나무는 주로 관상용으로 심으며 땔감으로 쓰인다. 한방에서 뿌리 껍질과 가지를 계조축(鷄爪)이라는 약재로 쓰는데, 무릎관절염으로 통증이 심할 때, 물에 넣고 달여서 복용하고, 골절상을 입었을 때 오가피를 배합해서 사용하며, 소염 작용과 해독 효과가 있다. 한국(제주, 전남, 전북) 및 일본에 분포한다.
본 발명에서의 단풍나무는 추출물 생성을 위해 그의 잎, 가지 또는 뿌리를 모두 사용할 수 있고, 구체적으로는 잎과 가지를 포함한 지상부를 각각 사용할 있으며, 보다 구체적으로는 잎을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 아울러, 상기 단풍나무는 채취한 것, 재배한 것 또는 시판되는 것 등의 제한이 없이 사용 가능하다.
상기 단풍나무 추출물은 단풍나무 조추출물뿐 아니라 추출물의 추가적인 가공에 의한 모든 형태를 의미한다.
상기 단풍나무 추출물은 단풍나무 그 자체 또는 이의 분쇄물이거나, 추출공정을 통해 수득한 추출물일 수 있다. 상기 추출공정은 당해 기술분야에서 이용되는 통상의 방법에 따라 실시될 수 있다.
상기 추출 용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물, 구체적으로는 C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 단풍나무의 건조 중량의 2 내지 20 배로 하는 것일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
상기 추출 방법은 열수추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등 의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 침지 추출방법으로 추출될 수 있다. 추출시 온도는 구체적으로 10℃ 내지 100℃일 수 있으며, 보다 구체적으로 상온일 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 구체적으로 6시간 내지 7일일 수 있고, 보다 구체적으로 12시간 내지 3일일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에서, 상기 단풍나무 추출물은 KIOM-2015E와 혼용하여 사용될 수 있다.
상기 장 질환은 과민성 장 증후군 또는 염증성 장 질환일 수 있다.
상기 과민성 장 증후군 (IBS)은 기질적 원인이 없이 장기간 반복되는 복부팽만감 등의 복부 불편감 및 복통과 더불어, 설사, 변비 등의 배변 습관의 변화를 동반하는 만성 질환이며, 그 증상이 정신적인 요인이나 스트레스에 의해서 악화하기도 한다. 증상에 따라 설사 우세형, 변비 우세형, 및 통증 우세형으로 구분할 수 있다.
상기 염증성 장 질환은 장 내에 염증이 발생함으로써 장내 기능에 장애가 생기는 질환으로, 치유와 재발을 반복하는 만성 난치성 질환이다. 이들 질환의 병인으로서는 유전적 요인이나 면역 이상뿐만 아니라, 식사 등의 환경인자가 관여한다는 지적이 있지만 원인은 아직 불분명하다. 염증성 장 질환은 대표적으로 궤양성 대장염 및 크론병이 있으며, 궤양성 대장염은 대장의 점막에 짓무름이나 궤양이 연속적으로 형성되는 염증성 질환으로, 혈변, 점혈변, 설사, 복통이 일어나고, 중증인 경우에는 발열, 체중감소, 빈혈 등의 전신성의 증상이 나타난다. 또한, 크론병은 입에서 항문에 이르는 소화기관의 어느 부위에나 염증이나 궤양 등의 병변이 비연속적으로 발생하는 것을 특징으로 하며, 복통, 설사, 혈변과 더불어, 중증의 경우에는 발열, 하혈, 체중감소, 전신권태감, 빈혈 등의 증상이 나타난다.
본 발명에 따른 조성물은 체중 감소를 억제하여 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, DSS로 염증성 장 질환을 유도한 마우스 중 대조군을 제외한 실험군에 단풍나무 추출물을 처리하고 체중의 변화를 측정한 결과, 장 질환 유도 마우스는 정상군 대비 체중의 감소가 나타났으나, 단풍나무 추출물을 투여한 집단은 정상군과 유사한 수준까지 체중의 감소가 완화된 것을 확인하였다 (도 1).
본 발명에 따른 조성물은 대장의 길이 감소를 억제하여 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구체적인 일 실시예에서는, 염증성 장 질환을 유도한 마우스 중 대조군을 제외한 실험군에 단풍나무 추출물을 처리하고 대장을 적출하여 조직의 대장의 길이를 측정한 결과, 장 질환 유도 마우스는 정상군 대비 매우 짧은 길이의 대장을 갖는 것을 확인하였고, 단풍나무 추출물 투여군은 장 질환 유도군과 비교하여 대장의 길이 감소가 완화된 것을 확인하였다 (도 2).
본 발명에 따른 조성물은 염증을 감소시켜 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 일 실시예에서는, 염증성 장 질환을 유도한 마우스 중 대조군을 제외한 실험군에 단풍나무 추출물을 처리하고 대장을 적출하여 대장 조직 병변을 확인한 결과, 장 질환 유도 마우스는 정상군 대비 대장 조직의 염증이 많이 발생한 것을 확인한 반면, 단풍나무 추출물 투여군은 장 질환 유도군과 비교하여 조직의 염증이 감소된 것을 확인하였다 (도 3).
본 발명에 따른 조성물은 대식세포의 침투 억제를 통해 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 일 실시예에서는, 염증성 장 질환을 유도한 마우스 중 대조군을 제외한 실험군에 단풍나무 추출물을 처리하고 루시퍼레이즈를 포함하는 대식세포를 혈관주입으로 마우스에 침투시켜 대장 조직으로의 침투를 확인한 결과, 장 질환 유도군은 정상군과 비교하여 대장 조직의 대식세포 침투가 증가한 것을 확인하였으나, 단풍나무 추출물 투여군은 장 질환 유도군과 비교하여 대식세포의 침투가 감소한 것을 확인하였다 (도 4).
본 발명에 따른 조성물은 염증성 사이토카인의 분비 억제를 통해 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 일 실시예에서는, 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 혈액을 채취하여 염증성 사이토카인의 분비량을 측정한 결과, 장 질환 유도군에서는 정상군과 비교하여 사이토카인의 분비량이 증가하였으나, 단풍나무 추출물 투여군은 장 질환 유도군과 비교하여 사이토카인의 분비량이 감소한 것을 확인하였다 (도 5).
본 발명에 따른 조성물은 장내 밀착 연접을 보호하여 장 질환 치료를 달성하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체적인 일 실시예에서는, 장 질환을 유도한 마우스의 대장조직에서 밀착 연접과 관련된 단백질의 발현량을 측정한 결과, 장 질환 유도군에서는 정상군과 비교하여 상기 단백질의 발현량이 감소하였으나, 단풍나무 추출물 투여군은 장 질환 유도군과 비교하여 상기 단백질의 발현량이 증가한 것을 확인하였다 (도 6).
본 발명에서의 용어 "예방"이란, 본 발명에 따른 단풍나무 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 장 질환의 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.
본 발명에서의 용어 "치료"란, 본 발명에 따른 단풍나무 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 상기 장 질환의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.
본 발명에서 사용된 용어 "약학 조성물"이란, 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각의 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 점안투여하기 적합한 형태, 예를 들어, 점안제, 크림제, 연고제, 겔제 또는 로션제로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 창상 예방 또는 치료용 약학 조성물의 형태로 제조될 수 있는데, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 상엽 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여할 수 있으며, 약학 조성물의 유효성분은 투여받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1 mg/g/일 내지 100 mg/g/일, 보다 구체적으로는 5 mg/g/일 내지 50 mg/g/일이 될 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 다른 하나의 양태는, 단풍나무 추출물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명에서의 용어, "개체"란, 장 질환이 발병하었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 상기 예방 또는 치료방법은 구체적으로, 장 질환이 발병하였거나 발병할 위험이 있는 개체에 상기 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서의 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 목적하는 바에 따라 점안 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피패치투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 투여 될 수 있고, 구체적으로 경구 투여의 경로를 통해 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는, 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에서의 용어, "개선"은 상기 조성물을 경구투여하여 골다공증이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
건강기능식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 암 전이 억제에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 식품학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 단풍나무 추출물을 포함하는 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다. 상기 식품 조성물에는 암 전이 억제 효과에 방해가 되지 않는 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기 식품보조첨가제는 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 예를 들어 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 그 종류가 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 식품에 포함되는 추출물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있다.
식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 30g, 바람직하게는 3 내지 20g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.
본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는, 단풍나무 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
상기 사료 조성물은 사료 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다.
본 발명에서 용어, "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다.
상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 단풍나무 추출물은 장내 밀착 연접을 구성하는 ZO-1 및 오클루딘 단백질의 합성을 촉진시킴으로 장내 투과성을 증가시키고, 염증성 장 질환에 의한 체중 감소 및 대장 길이 감소를 저해시키는 효과를 보이므로, 염증성 장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는, 예방 또는 개선용 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 체중을 확인한 그래프이다.
도 2는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 대장 길이를 확인한 이미지 및 그래프이다
도 3은 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 내시경 및 대장 조직을 염색한 이미지이다.
도 4는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 염증성 대식세포의 침투를 확인한 이미지이다.
도 5는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 염증성 사이토카인의 양을 확인한 그래프이다.
도 6은 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 ZO-1의 발현 증가를 보여주는 이미지 및 ZO-1 및 오클루딘의 발현양을 보여주는 웨스턴 블롯 이미지이다.
도 2는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 대장 길이를 확인한 이미지 및 그래프이다
도 3은 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 내시경 및 대장 조직을 염색한 이미지이다.
도 4는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 염증성 대식세포의 침투를 확인한 이미지이다.
도 5는 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 염증성 사이토카인의 양을 확인한 그래프이다.
도 6은 본 발명 단풍나무 추출물을 5% DSS로 대장염을 유도한 마우스에 경구 투여한 후 ZO-1의 발현 증가를 보여주는 이미지 및 ZO-1 및 오클루딘의 발현양을 보여주는 웨스턴 블롯 이미지이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1: 단풍나무 에탄올 추출물(KIOM-2015E)의 제조
단풍나무 잎 분쇄물 1700g을 17ℓ의 25% 에탄올에 넣고 24시간 실온 침적하여 추출하였다. 그 후, 상기 추출물을 감압농축하고 동결건조하여 단풍나무 잎 25% 에탄올 추출물 78.57g을 수득하였다.
실시예 1: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 체중 측정
C57BL/6 마우스에 염증성 장 질환을 유도하기 위하여 5% DSS(Dextran sodium sulfate)를 6일 동안 급수하였다. 마우스에 생리식염수 또는 생리식염수에 녹인 KIOM-2015E (100 mg/kg) 또는 5-Amino-salacylic acid (5-ASA, 100 mg/kg)를 9일 동안 경구 투여하였으며, 7일째에 5% DSS를 물로 바꾸어 주었다.
염증성 장 질환을 유도한 마우스의 체중을 측정한 결과 도 1과 같이, 물을 급수한 마우스에 비해서 염증성 장 질환이 유도된 5% DSS 투여 마우스에서는 체중 감소가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 반면 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg, 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 체중 감소가 상대적으로 경미하게 일어나는 것을 확인할 수 있었다.
이는, 염증성 장 질환에 의해 소화 장애가 생기면서 유발되는 체중 감소를 단풍나무 추출물에 의해 완화시킨 것으로 판단할 수 있다.
실시예 2: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대장 길이 측정
상기 실시예 1에서 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대장을 적출하여 대장 길이를 측정하였다.
그 결과 도 2과 같이, 물을 급수한 마우스에 비해서 염증성 장 질환이 유도된 5% DSS 투여 마우스는 매우 짧은 대장의 길이를 갖는 것을 확인하였다. 반면 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg, 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 장 질환 유도 마우스와 비교하여 대장의 길이 감소가 완화된 것을 확인할 수 있었다.
이는, 장 질환에 의해 유발되는 증상 중 하나인 대장의 길이 감소를 단풍나무 추출물이 저해함으로써 단풍나무 추출물이 장 질환 관련 증상을 억제할 수 있음을 시사한다.
실시예 3: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대장 조직 병변 확인
상기 실시예 1에서 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대장을 내시경을 통해 병변을 확인하였으며, 적출한 대장 조직을 파라포름알데하이드로 고정 시킨 후, H&E, Alcian blue, PAS 염색을 통하여 대장 조직 병변을 확인하였다.
조직 병변을 확인한 결과, 도 3과 같이, 물을 급수한 마우스에서는 대장 조직이 정상인 것을 확인한 반면, 5% DSS 투여 마우스에서는 대장 조직에 염증이 많이 발생한 것을 확인하였다. 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg 및 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 조직에 염증이 감소되어 있는 것을 확인하였다.
이는, 단풍나무 추출물이 장내 염증반응을 억제하여 염증성 장 질환을 치료할 수 있음을 시사한다.
실시예 4: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대식세포의 침투 확인
상기 실시예 1에서 염증성 장 질환을 유도한 마우스에 luciferase를 포함하는 대식세포를 tail vein injection을 통해 침투시킨 후, in vivo image system으로 대식세포의 침투를 확인하였으며 대장 조직에서 F4-80을 염색한 후 대식세포의 침투를 확인하였다.
대식세포의 침투를 확인한 결과, 도 4와 같이 물을 급수한 마우스에서는 대식세포의 침투가 적은 반면, 5% DSS 투여 마우스에서는 대식세포의 침투가 많이 발생한 것을 확인하였다. 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg 및 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 대식세포의 침투가 감소되어 있는 것을 확인하였다.
이는, 단풍나무 추출물이 염증 반응에 관여하는 대식세포의 침투를 감소시킴으로써 대장 조직 내 염증반응을 억제할 수 있음을 시사한다.
실시예 5: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 염증성 사이토카인 분비 확인
상기 실시예 1에서 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 혈액을 채취하여 염증성 사이토카인인 Interleukin(IL)-6 및 Tumor necrosis factor (TNF)-α의 분비양을 확인하였다.
염증성 사이토카인의 분비양을 확인한 결과, 도 5와 같이 물을 급수한 마우스에서는 염증성 사이토카인의 분비양이 적은 반면, 5% DSS 투여 마우스에서는 염증성 사이토카인의 분비양이 증가한 것을 확인하였다. 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg 및 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 염증성 사이토카인의 분비양이 감소되어 있는 것을 확인하였다.
이는, 단풍나무 추출물이 염증반응에 직접적으로 관여하는 염증성 사이토카인의 분비를 감소시킴으로써 염증반응을 억제하는 효과가 있음을 시사한다.
실시예 6: 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 장내 밀착 연접 보호효과
상기 실시예 1에서 염증성 장 질환을 유도한 마우스의 대장 조직을 파라포름알데하이드로 고정시킨 후, ZO-1 1차 항체를 이용하여 대장조직내 발현되는 ZO-1의 양을 측정하였으며, 또한 대장 조직으로부터 단백질을 추출하여 ZO-1 및 오클루딘의 발현양을 웨스턴 블롯법으로 확인하였다.
밀착 연접 단백질인 ZO-1 및 오클루딘의 발현양을 확인한 결과, 도 6과 같이 5% DSS 투여 마우스에서 ZO-1 및 오클루딘의 발현양의 감소로 밀착 연접이 손상되어 있는 것을 확인하였다. 반면, 5% DSS를 투여하며 KIOM-2015E 100mg/kg 및 5-ASA 100mg/kg을 경구 투여한 마우스에서는 ZO-1 및 오클루딘의 발현양의 증가로 밀착 연접이 회복되어 있는 것을 확인하였다.
이는, 단풍나무 추출물이 염증성 장 질환에 의해 유발되는 증상 중 하나인 밀착 연접의 기능 장애를 회복하는 효과를 가져 장 질환에 대한 치료 효과가 있음을 시사한다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (7)
- 삭제
- 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 장 질환은 과민성 장 증후군 또는 염증성 장 질환인 것인, 약학 조성물.
- 단풍나무 잎 추출물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 장 질환 예방 또는 치료방법.
- 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 단풍나무 잎 추출물을 포함하는 장 질환 예방 또는 개선용 사료 조성물.
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