KR102051581B1 - 프리카 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 프리카(Freekeh) 추출물 또는 분획물을 유효 성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 피부 미백 효과, 항산화 및 MMP-1 발현 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과에 의한 주름 개선 효과, 및 보습 효과를 갖는다. 본 발명은 기존에 주로 식품 소재로 사용되던 프리카를 화장료 신소재로 사용함으로서 우수한 피부 개선 효능을 얻어 내어, 화장품 시장 및 소비자의 만족도가 높을 것으로 기대된다.

Description

프리카 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition For Skin Improvement Comprising Freekeh Extracts And Fractions As Active Component}

본 발명은 프리카 추출물 또는 분획물을 유효 성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 프리카 추출물 또는 분획물을 유효 성분으로 함유하여 피부 미백, 항산화, 피부 주름 개선 및 보습 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 고령화 사회가 진행됨에 따라 피부에 대한 관심이 더욱 높아지고 있다. 피부 미백, 탄력, 주름 개선, 보습 개선을 위한 새로운 화장료 소재들이 개발되고 있으며, 안전성 측면과 함께 환경 친화적인 소비 추세에 따라 다양한 천연 소재를 이용한 화장품 개발이 트렌드가 되고 있다.

자외선 노출로 인한 피부의 흑화는 주로 티로시나제 활성화로 의한 멜라닌의 과다 합성에 의한다. 멜라닌은 인체에 필수적인 자외선 방어제이며, 라디칼 제거에도 효과적이나, 국소적으로 과도하게 합성되거나 피부병변 및 노화에 따른 피부 생리기능 저하시, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소침착을 유발한다.

이에 따라, 멜라닌을 감소시켜 피부 미백 효과를 갖는 물질이 개발되고 있으며, 대표적으로 알부틴, 아스코르빈산, 히드로퀴논, 상백피추출물 및 감초추출물 등의 식물 추출물이 있다. 그러나, 알부틴은 우수한 티로시나제 활성 저해효과를 갖는 반면, 화장품에 배합 시 변색 및 경시변화에 따른 역가 저하 등 안정성에 문제점이 있고, 피부 자극이 커 사용시 한계가 있었다. 아스코르빈산은 티로시나제 활성 저해효과 및 분자 안정성이 낮아 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않았다. 또한, 히드로퀴논은 피부 자극이 높아 안전성 문제로 현재 화장품 배합시에 그 사용이 제한되는 문제가 있다. 대부분의 식물 추출물들은 고농도에서만 비교적 높은 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내고, 저농도에서는 저해 효과가 거의 나타나지 않는 등의 문제점이 있었다. 특히, 기존 멜라닌 생성 억제제들은, 실제 사람 피부에 대한 임상적인 실험시 미백효과가 미약하다는 것이 가장 큰 문제점이었다.

피부 노화는 내인성 노화와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다. 산화적 스트레스는 노화의 중요한 원인으로 알려져 있다. 특히 피부가 자외선에 지속적으로 노출되면 높은 수준으로 활성산소종[H₂O₂, 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion), 하이드록시 라디칼(hydroxyl radical) 포함]이 발생되고, 이로 인해 광산화적 손상, 염증반응, 면역억제, 홍반 및 암 유발의 우려가 있었다.

따라서, 피부에는 산화적 스트레스에 완화시키기 위해 카탈라아제 (catalase), 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제(superoxide dismutase), 글루타티온 퍼옥시다아제(glutathione peroxidase) 등의 효소적 항산화제, 및 비타민 E 및 C, 카로티노이드, 글루타치온과 같은 비효소적 항산화제들이 존재하여, 세포 및 조직을 보호한다. 일반적으로, 높은 항산화력을 갖는 BHA(butylated hydroxyanisole)와 BHT(butylated hydroxytoluene) 등의 물질이 합성 항산화제로 주로 이용되어 왔으나, 안정성으로 인해 사용 규제를 받고 있는 실정이다.

한편, 사람의 피부는 외부 요인에 대한 보호 장벽 역할을 하며, 체온과 수분 보유량 등을 조절 한다. 과도한 자외선에 노출되면 피부 각질층의 지질이 산화되어 피부장벽이 손상되고, 피부의 유수분 밸런스가 깨져서 피부노화를 유발한다. 일반적으로, 건강한 피부를 유지하기 위해서는 각질층이 약 30%의 수분을 함유해야 하고, 또한 피지, 천연보습인자(NMF) 및 각질세포간 지질이 관여한다. 낮은 기온, 찬 바람 및 자외선 등으로 상기 요소들의 균형이 깨지게 되면, 수분부족형 건조 피부가 유발될 수 있으며, 심한 경우 아토피 피부염, 건피증 및 만성 습진이 생기게 된다. 따라서, 피부의 유수분 밸런스 유지 및 보습에 초점을 맞춘 화장품이 개발되고 있다.

한편, 콜라겐은 피부 진피층의 매트릭스를 이루는 성분 중 가장 많은 성분으로, 콜라게나아제(collagenase) 작용이 증가하여 콜라겐의 가교된 형태가 감소하면 보습, 매끄러움 및 탄력이 감소함으로써 피부 주름이 형성된다. 이외에도, 자외선에 의해 기질 단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)의 발현에 의해 콜라겐 합성과 분해가 조절되어 주름생성에 관여한다는 보고가 있었다 [So SH 등: J. Ginseng Res., 32, 39-47(2008)]. 따라서, 피부노화의 억제를 위해 MMP의 활성을 조절하는 물질을 개발하는 연구가 진행되고 있다.

프리카(Freekeh)는 덜 익은 듀럼밀(green durum wheat)을 뜻하는 곡물로, 요르단, 레바논, 시리아와 같은 중동 지역이 원산지이다. 듀럼밀은 흔히 알려져 있는 밀(Triticum aestivum)과는 다른 종류로 일반적인 밀이 제과 및 제빵에 쓰이는 것에 비해, 듀럼밀은 마카로니와 스파게티에 쓰인다. 또한 듀럼밀은 보통의 밀에 비해 단백질 함량이 높은 경질 밀로 면역력 향상, 근육 손실 방지, 혈액 유지 등에 도움을 주며 칼륨, 철분, 칼슘이 함유되어 있어 골다공증과 골연화증 완화에 효과적이라고 알려져 있다. 프리카는 덜 익은 상태에서 수확되기 때문에 껍질을 벗긴 낟알의 색이 연두빛 초록색이며 일반 듀럼밀에 비해서 엽록소의 함량이 높은 편이다. 또한 칼슘, 마그네슘인, 아연 등 다량의 미네랄을 함유하고 있다.

기존에 듀럼밀 또는 프리카 추출물은 주로 듀럼밀을 이용한 스낵의 제조(대한민국 등록특허 제10-0296470호), 듀럼밀 스파게티 라면(대한민국 특허출원 제10-2017-0105151호) 등의 식품 가공물 또는 영양학적 연구가 진행되어있으나, 화장료 소재로 개발된 적은 없었다.

대한민국 등록특허 제10-0296470호 대한민국 특허출원 제10-2017-0105151호

본 발명자들은 여러 천연물에 대한 화장료로서의 가능성을 연구한 결과, 프리카 추출물 및 이의 분획물이 미백, 항산화 및 MMP-1 생성 억제, 콜라겐 합성 증진 및 보습 효과가 매우 우수한 점을 확인하였고, 이에 착안하여 프리카 추출물을 미백 및 주름 개선용 화장료 재료로서 사용하고자 본 발명에 이르렀다.

따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 프리카 추출물 및 이의 분획물을 유효 성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 프리카 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공한다.

일 실시예에서, 상기 프리카 추출물 또는 분획물은 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.001~30.0 중량% 함유될 수 있다.

일 실시예에서, 상기 프리카 추출물은 물, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상의 추출 용매를 이용한 용매 추출법; 초임계 추출법; 및 초음파 추출법으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 추출 방법에 의해 추출될 수 있다.

일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선, 미백, 보습 및 항산화로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 피부 개선 효과를 갖는 것일 수 있다.

일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 프리카 추출물 및 이의 분획물은 멜라닌 생성 억제와 티로시나제(tyrosinase) 활성 억제 효과로 미백 효과가 있으며, 또한 우수한 항산화 효과를 갖고, MMP-1 생성 억제, 콜라겐 합성 증진 효과 및 보습 효과를 나타내어 피부 주름 개선에도 효과가 있다. 본 발명은 기존에 주로 식품에 사용되었던 프리카 추출물을 화장료 신소재로 사용함으로써, 우수한 미백, 주름 개선 및 보습 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하였다.

도 1은 본 발명의 프리카 추출물의 실제 사진이다.
도 2는 본 발명의 프리카 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 시제품 사진이다.

본 발명은 프리카 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

프리카(Freekeh)는 덜 익은 듀럼밀을 말하는 곡물로, 지방 함량은 낮고 단백질은 풍부하며, 식이섬유가 현미의 4배, 퀴노아의 2배 이상으로 섬유질이 풍부하다. 또한, 염록소 함량이 높고, 칼슘, 마그네슘인, 아연 등 다량의 미네랄을 함유하고 있는 등, 혈당 지수가 낮고 다이어트에 좋은 식재료로 최근 각광받고 있다.

일 실시예에서, 상기 프리카 추출물 또는 분획물은 트리티컴 듀럼(Triticum durum)의 종자, 바람직하게는 트리티컴 듀럼의 덜 익은 종자로부터 수득될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

프리카는 덜 익은 상태에서 수확되기 때문에 껍질을 벗긴 낟알의 색이 연두빛 초록색이며 일반 듀럼밀에 비해서 엽록소의 함량이 높다.

일 실시예에서, 상기 프리카 추출물은 물, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상의 추출 용매를 이용한 용매 추출법; 초임계 추출법; 및 초음파 추출법으로 이루어지는 군에서 선택된 1 이상의 추출 방법에 의해 추출될 수 있고, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 추출하고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 추출한다. 그러나, 본 발명의 프리카 추출물은 상기한 추출 용매 이외의 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 프리카 추출물은 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 추출법에 의해 추출될 수 있다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것인데, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고, 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면, 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

상기 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체로는, 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합 유체를 사용할 수 있고, 이에 의해 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다.

이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있으나, 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로, 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

또한, 본 발명의 프리카 추출물은 초음파를 이용하여 추출될 수 있다.

상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부 온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 높이기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격 효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출 효율을 증가시키게 된다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출 용매는, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조 방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 상기 프리카 추출물은 미생물 발효 추출물, 바람직하게는 효모 또는 유산균 발효 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예를 들어, 약 100~500 메쉬의 크기로 미세하게 파쇄한 프리카를 통상의 미생물 배지(바실러스 배양액: Tryptic soy Broth, 아큐메디아; 효모 배양액: Potato Dextrose Broth, 아큐메디아)에 1~50g/ℓ의 양으로 되도록 첨가한 후, 이에 효모 또는 유산균 등의 미생물 균주를 10,000~100,000 cfu/ℓ가 되도록 접종하여, 통상의 미생물 배양조건으로 배양한다. 즉, 배양 온도는 30~37℃로 하고, pH는 5~7로 하며, 호기성 또는 통상 혐기성 조건하에 약 5~10 일간 배양한 후, 숙성 및 여과하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 프리카 추출물은 상술한 방법에 추가하여, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막 또는 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성 크로마토그래피)에 의해 분리 및 정제될 수 있다.

또한, 본 발명의 프리카 추출물은 상기 추출법에 의한 조추출물을 추가로 상온에서 냉침, 가열 여과하여 액상 형태로 수득하거나, 또는 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 고형으로 수득할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 프리카 추출물 또는 분획물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.001~30.0 중량%, 바람직하게는 0.01~10 중량% 함유될 수 있다.

화장료에 포함된 상기 프리카 추출물 또는 분획물의 함량이 0.001 중량% 미만이면 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형 안정성에 문제가 발생할 우려가 있으며, 비용 증가로 경제적이지 못하게 된다.

일 실시예에서, 상기 화장료 조성물에는 상기 유효 성분 이외에, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 담체 등의 화장품 제조에 통상 사용되는 화장료 첨가제가 포함될 수 있다.

일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 페이스트, 크림 또는 겔 제형인 경우, 담체로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 용액 또는 에멀젼 제형인 경우, 담체로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있는데, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

상기 화장료 조성물이 현탁액(suspension)인 경우, 담체로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이 제형인 경우, 담체로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우 추가로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물이 계면활성제 함유 클렌징 제형인 경우, 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누나, 계면활성제 함유 또는 비함유 클렌징 제형인 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼어내거나 물로 씻어낼 수 있다. 구체적으로, 상기 비누는 액상 비누, 분말 비누, 고형 비누 및 오일 비누일 수 있으며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 사용하거나, 또는 다른 화장료 조성물과 병행하여 사용될 수 있다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으나, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선, 미백, 보습 및 항산화로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 효과를 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 포함하는 화장료 조성물은, 멜라닌 생성억제, 티로시나제 활성 억제 효과를 통해 피부 미백 효과를 얻을 수 있다. 또한, 피부 항산화, MMP-1 생성 억제, 콜라겐 합성 증진, 보습 개선 효과를 통하여, 피부 주름 개선 효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시할 뿐 본 발명의 권리범위를 제한하지 않는다.

<실시예>

[ 실시예 1: 프리카 추출물 제조]

음건한 프리카 1kg 분쇄한 후 70% 에탄올 5ℓ를 첨가하여, 80℃에서 3시간 동안 환류 추출하고 냉침하였다. 상기 추출물을 400 메쉬 여과포로 여과한 후, 여과지 No.2(Whatman)로 다시 한번 여과하였다. 그 후, 상기 여과물을 감압 농축하여 프리카 추출물 40g을 수득하였다.

[ 실시예 2~5: 프리카 추출물의 분획물 제조]

상기 실시예 1의 프리카 에탄올 추출물 20g에 추가로 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올에 의한 용매 분획을 실시한 후 감압 농축하여, 실시예 2의 헥산 분획물 1.12g, 실시예 3의 클로로포름 분획물 2.3g, 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물 0.4g, 실시예 5의 부탄올 분획물 4.92g을 수득하였다.

상기 실시예 1 내지 5의 프리카 추출물 또는 분획물을 이하의 표 1에 간략히 정리하였다.

구분	처리 방법
실시예 1	프리카의 에탄올 추출물
실시예 2	프리카의 에탄올 추출물의 헥산 분획물
실시예 3	프리카의 에탄올 추출물의 클로로포름 분획물
실시예 4	프리카의 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물
실시예 5	프리카의 에탄올 추출물의 부탄올 분획물

<실험예>

[ 실험예 1: 실시예 1~5에 의한 프리카 추출물 또는 분획물의 피부개선 효과]

티로시나제 활성 저해 효과

티로시나제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되도록 하는 효소이며, 실험예 1에서는 상기 실시예 1~5의 프리카 추출물에 의한 티로시나제 활성 저해 효과를 확인하였다.

구체적으로, 티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(Sigma) 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신은 0.05M 인산나트륨 완충 용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1㎎/㎖ 용액으로 만들고, 상기 실시예 1~5의 프리카 추출물을 0.05M 인산나트륨 완충 용액(pH 6.8)에 0.05%, 0.1%, 및 0.2% 농도로 용해하였다. 그 다음, L-티로신 용액 0.5㎖에 상기 실시예 1~5의 프리카 추출물 시료액 0.5㎖를 각각 가하여, 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후, 200 유닛/㎖의 티로시나제 0.5㎖를 첨가하여, 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액을 급냉시켜 반응을 중단한 후, 분광광도계로 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는, 프리카 추출물 대신 피부 미백제로 잘 알려진 알부틴을 사용하였다.

티로시나제 활성 저해율(%)은 하기 수학식 1에 의하여 계산하였고, 그 결과를 하기의 표 1에 나타내었다.

시료	농도(%)	티로시나제 저해 활성(%)
실시예 1	0.20	59.2
	0.10	24.8
	0.05	11.2
실시예 2	0.20	75.2
	0.10	54.8
	0.05	37.2
실시예 3	0.20	45.5
	0.10	23.2
	0.05	13.2
실시예 4	0.20	49.7
	0.10	29.2
	0.05	12.4
실시예 5	0.20	53.1
	0.10	31.2
	0.05	16.4
알부틴	0.20	74.2
	0.10	34.8
	0.05	23.4

표 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1~5의 프리카 추출물 또는 분획물은 티로시나제 활성을 농도의존적으로 저해하였다. 특히, 실시예 2의 프리카 추출물의 헥산 분획물은 양성 대조군인 알부틴보다 우수한 저해능을 나타내어, 티로시나제 활성 억제 효과가 가장 뛰어난 것을 확인하였다.

멜라닌 생성 억제 효과

실시예 1~5에 의한 프리카 추출물 또는 분획물의 미백 효과를 확인하기 위해, B16F1 멜라닌 형성 세포에서의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하였다.

구체적으로, B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포군으로, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. 상기 B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2×10⁵ 세포의 농도로 분주하고, 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 사용하였다. 이후, 상기 실시예 1~5의 프리카 추출물을 농도별로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 멜라닌 형성 세포에 트립신-EDTA을 처리하여 바닥에서 떼어내고, 세포수를 측정한 후, 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄의 방법을 변형하여 실시하였다(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후, 균질화 완충액(50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖를 첨가하고, 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음, 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 2에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

	처리 농도(㎍/㎖)	멜라닌 함량(pg/세포)
무처리군	0	4.41
실시예 1	200	0.92
	100	1.42
	50	2.61
실시예 2	200	1.11
	100	1.64
	50	2.48
실시예 3	200	1.79
	100	2.34
	50	3.28
실시예 4	200	1.21
	100	2.02
	50	2.52
실시예 5	200	2.28
	100	2.91
	50	3.92
알부틴	200	1.07
	100	1.61
	50	2.12

상기 표 3에서 나타난 바와 같이, 실시예 1~5의 프리카 추출물 또는 분획물은 멜라닌 생성을 농도의존적으로 저해하였다. 특히, 실시예 1, 실시예 2 및 실시예 4의 멜라닌 생성 억제 효과는 미백제로 알려진 알부틴과 유사하였고, 특히 프리카 추출물의 에탄올 분획물인 실시예 1이 가장 우수한 효과를 나타내었다. 이로부터, 프리카 추출물 또는 분획물이 미백 효능을 갖는 것을 확인하였다.

항산화 효과

상기 실시예 1~5에서 수득한 프리카 추출물 또는 분획물의 농도별(50, 100, 200 ㎍/㎖) 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)은 대표적인 항산화 측정법인 DPPH 라디칼 방법에 의해 평가하였다.

사용한 시약으로서는, 2,2-디(4-터트-옥틸페닐)-1-피크릴히드라질[2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl] 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., M_W=618.76)의 0.1mM 용액 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100㎖로 하였다.

측정 방법으로서, 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15㎖ 및 시료 용액 0.15㎖를 가하여 신속히 교반하고, 25℃에서 10분간의 배양을 개시한 후, 560nm에서의 흡광도 St를 측정하였다. 시료 용액의 블랭크(Blank)는, 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는, 상기 흡광도 St를 측정할 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정하였다. 공시험은, 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는, 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정하였다. 공시험의 블랭크(Blank)는, 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는, 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정하였다.

자유라디칼 소거율(%)은 수학식 3에 의하여 산출하였으며, 결과는 이하의 표 4와 같다.

St: 시험 시료의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt: 공시험 용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So: 시험 시료의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo: 공시험 용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

시료	농도(㎍/㎖)	항산화 활성(%)
실시예 1	200	62.46
	100	48.98
	50	32.58
실시예 2	200	82.97
	100	71.59
	50	58.72
실시예 3	200	12.45
	100	8.14
	50	2.98
실시예 4	200	45.82
	100	34.48
	50	14.25
실시예 5	200	47.12
	100	32.45
	50	11.79
비타민 C	100	79.96

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물은 농도의존적으로 자유라디칼 소거활성을 나타내었는데, 특히 프리카 추출물의 헥산 분획물인 실시예 2가 가장 높은 자유라디칼 소거 활성을 나타내었다. 자유라디칼 소거활성이 높을수록 항산화 효과가 뛰어난 것이므로, 상기 프리카 추출물의 헥산 분획물이 가장 항산화능이 뛰어난 것을 확인하였다.

콜라겐 합성 증진 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로플레이트에 각 웰당 1×10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma)에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 실시예 1~5에 의해 제조된 프리카 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지, 및 대조군으로 프리카 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에 첨가한 후, 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 타입 I C-펩타이드 효소 면역시험(EIA) 키트(Takara)를 이용하여 합성된 콜라겐의 양을 측정하였다.

시료	농도(㎍/㎖)	콜라겐 합성율 (%)
실시예 1	200	72.21
	100	56.86
	50	32.62
실시예 2	200	64.73
	100	45.27
	50	37.35
실시예 3	200	32.85
	100	26.16
	50	13.86
실시예 4	200	32.25
	100	15.48
	50	7.82
실시예 5	200	54.84
	100	38.29
	50	23.37
비타민 C	100	82.32

상기 표 5에 따르면, 본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물에 의해 콜라겐 생합성율이 농도의존적으로 증가하며, 특히 실시예 1 및 실시예 2의 프리카 추출물 또는 분획물의 콜라겐 합성 증진 효과가 가장 뛰어난 것을 확인하였다.

MMP -1 발현 저해 효과

상기 실시예 1~5 에서 수득한 프리카 추출물 또는 분획물의 MMP-1(콜라겐 분해효소) 생성 억제 효과를 측정하였다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행)를 24-웰 마이크로플레이트(Nunc)에 각 웰당 1×10⁵ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1 및 2의 프리카 추출물 또는 분획물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지와 대조군으로 프리카 추출물 또는 분획물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 기준 물질로는 주름 개선 고시 물질인 아데노신을 사용하였다.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 4에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하여 그 결과를 이하의 표 6에 나타내었다.

시료	농도(㎍/㎖)	억제 활성 (%)
실시예 1	200	56.61
	100	44.27
	50	33.56
실시예 2	200	65.12
	100	54.51
	50	47.27
실시예 3	200	16.41
	100	13.12
	50	10.54
실시예 4	200	57.25
	100	49.86
	50	21.25
실시예 5	200	18.42
	100	15.21
	50	11.79
아데노신	100 nM	79.96

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 실시예 1~5의 프리카 추출물 또는 분획물은 농도의존적으로 MMP-1 발현 저해능을 나타내었고, 특히 프리카 추출물의 헥산 분획물인 실시예 2가 가장 높은 MMP-1 발현 저해능을 나타내었다. 일반적으로 MMP-1 발현 저해능이 높을수록 피부 주름 개선 효과가 있으므로, 상기의 결과로 볼 때 프리카 추출물의 헥산 분획물이 피부 주름 개선 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다.

제형예 : 프리카 추출물 또는 분획물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 효능을 검증하기 위해, 이하 표 7의 조성을 갖는 제형예 및 비교제형예를 제조하였다. 구체적으로, 제형예 1 및 2는 상기 실시예 1 및 2의 프리카 추출물 또는 분획물을 각각 포함하는 화장료 조성물이고, 비교제형예 1은 프리카 추출물 대신에 미백 성분인 알부틴을 포함하는 화장료 조성물이며, 비교제형예 2는 보습제로서 글리세린 및 부틸렌글라이콜을 포함하는 화장료 조성물이고, 비교제형예 3은 주름 개선 성분인 아데노신을 포함하는 화장료 조성물이다.

구분	성분	제형예 1	제형예 2	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3
A	세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
B	향, 방부제	적량	적량	적량	적량	적량
C	실시예 1	5.0	-	-	-	-
	실시예 2	-	5.0	-	-	-
	알부틴	-	-	2.0	-	-
	글리세린	-	-	-	5.0	-
	부틸렌글라이콜	-	-	-	5.0	-
	아데노신	-	-	-	-	3.0
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	100까지	100까지	100까지	100까지	100까지

[ 실험예 2: 본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 피부 개선 효과]

미백 개선 효과

본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 미백 효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료 조성물의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

임상 실험은 상기 실험예에서 효능을 나타낸 실시예 1의 프리카 추출물을 함유하는 제형예 1의 화장료 조성물, 실시예 2의 프리카 추출물의 헥산 분획물을 함유하는 제형예 2의 화장료 조성물, 및 비교제형예 1의 알부틴을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 미백 효과를 각각 확인 및 비교 평가하였다.

임상 실험을 위하여, 색소침착증을 갖는 건강한 성인 여성 30명을 무작위로 10명씩 3개 그룹(A, B, C)으로 나눈 후, A 그룹을 대상으로 제형예 1의 화장료 조성물을, B 그룹을 대상으로 제형예 2의 화장료 조성물을, C 그룹을 대상으로 비교제형예 1의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 도포하였다. 이후, 피부색의 변화를 분광광도계(spectrophotometer, Minolta CM600-d)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피험자에 의한 주관적 육안 관찰을 실시하여, 미백 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었으며, 미백 효능의 정도를 이하의 미백 효능 평가 기준에 따라 평가하였다.

<미백효능 평가 기준>

-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선

피험자	피부색의 밝기변화 (ΔL)			숙련자의 객관적평가 (ΔL)			피험자의 주관적평가 (ΔL)
	A 그룹	B 그룹	C 그룹	A 그룹	B 그룹	C 그룹	A 그룹	B 그룹	C 그룹
1	3.4	3.1	1.7	2	1	0	2	2	1
2	2.0	4.2	1.9	0	2	1	1	0	1
3	2.9	2.7	1.5	1	2	1	1	1	0
4	3.2	3.5	1.7	2	1	0	1	2	0
5	3.7	3.7	2.1	2	2	1	2	1	1
6	3.1	3.1	2.0	1	0	0	1	2	1
7	4.0	4.3	2.4	2	2	1	2	1	1
8	3.4	2.1	1.7	1	1	1	0	1	0
9	2.8	3.8	1.1	1	2	1	1	2	1
10	3.1	3.4	1.8	1	2	0	1	1	0
평균	3.16	3.39	2.03	1.3	1.5	0.6	1.2	1.3	0.6

실험 결과, 제형예 1의 프리카 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 도포한 A 그룹은 평균 ΔL 값이 3.16 (p<0.05)이고, 제형예 2의 프리카 추출물의 헥산 분획물을 함유하는 화장료 조성물을 도포한 B 그룹은 평균 ΔL 값이 3.39 (p<0.05)이고, 비교제형예 1의 알부틴을 함유한 화장료 조성물을 도포한 C그룹은 평균 ΔL 값이 2.03 (p<0.05)이었다.

또한, 숙련자에 의한 미백 평가에서는 A 그룹이 1.3이고, B 그룹이 1.50이고, C 그룹이 0.6이었으며, 피험자에 의한 미백 평가에서는 A그룹이 1.2이고, B 그룹이 1.3이며, C 그룹이 0.6이었다. 이 결과로 볼 때, 본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물은, 미백 기능성 고시 물질인 알부틴보다 미백 효능이 더욱 우수한 것으로 나타났다.

보습 개선 효과

상기 제형예 1 및 2의 화장료 조성물에 대한 보습 효과는 이하와 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 60명을 무작위로 20명씩 3개 그룹 (A, B, C)으로 나눈 후, A 및 B 그룹에는 제형예 1 및 2의 화장료 조성물을, C 그룹에는 프리카 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 부틸렌글라이콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2)을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 수분측정기(Corneometer CM 820, Corage +Khazaka)를 이용하여 평가하였고, 실험 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

프리카 추출물의 피부 보습 효과
구분	사용전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	24.5	39.1	45.2
제형예 2	23.3	45.8	63.3
비교제형예 2	23.3	35.9	40.5

상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 일반적인 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 2)와 비교하여도 본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 함유한 화장료(제형예 1 및 2)의 보습 효과가 우수하며, 특히 제형예 2가 가장 보습 효과가 우수하였다.

피부 주름 개선 효과

본 발명의 프리카 추출물 또는 분획물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선 효과에 대한 임상실험을 실시하고, 임상실험은 각 화장료 조성물을 실제 사용 테스트를 통해 평가하였다.

즉, 임상실험은 상기 실험예에서 효능을 나타내었던 실시예 1 및 2의 프리카 추출물 또는 분획물을 각각 포함하는 제형예 1 및 2와, 프리카 추출물 대신에 주름 개선 기능성 고시 물질인 아데노신을 포함하는 비교제형예 3의 화장료 조성물에 의한 피부 주름 개선 효과를 확인 및 비교 평가하였다.

20~35 세의 여성 피험자 40명을 대상으로 각 20명씩 두 실험군으로 나누고, 이들에 대하여 좌측 얼굴에는 프리카 추출물을 포함하는 제형예 1 및 2의 화장료 성물을 도포하게 하고, 우측 얼굴에는 아데노신(3%)을 포함하는 비교제형예 3의 화장료 조성물을 도포하게 하여, 피험자의 피부 주름 개선 효과를 살폈다.

피부 주름 개선 효과는 사용 전과 8주간 사용 후의 각 피험자의 주름 개선 상태를 비교하여 숙련된 의사의 육안 관찰 및 기기 측정(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co.)을 통하여 평가하였으며, 실험 결과는 하기의 표 10에 나타내었다.

프리카 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 주름 개선 효과 (육안 평가 및 기기 평가)
구분	주름 개선 효과			유효율 (%)
	우수	약간	없음
제형예 1	14	2	4	75.0
제형예 2	16	2	2	85.0
비교제형예 3 (아데노신 3%)	15	3	2	82.5

상기 표 10의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 프리카 추출물을 함유한 제형예 1 및 2의 화장료 조성물은, 주름 개선 기능성 고시 물질인 아데노신을 함유하는 비교 제형예 3과 유사한 효능을 나타내었다. 특히, 제형예 2의 화장료 조성물이 가장 우수한 주름개선 효과를 보여주었다. 또한, 본 발명의 프리카 추출물을 함유하는 화장료를 피부에 도포한 대부분의 피험자들에서 피부 자극은 관찰되지 않았다.

Claims (5)

1. 프리카의 에탄올 추출물의 헥산 분획물을 유효성분으로 함유하는, 피부 주름 개선, 미백, 보습 및 항산화 효과로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 효과인 것을 특징으로 하는 피부 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 프리카 추출물 또는 분획물은 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.001~30.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 삭제
5. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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