KR102030639B1

KR102030639B1 - Pharmaceutical composition for radioprotection or mitigation, and prevention or treatment of pulmonary fibrosis

Info

Publication number: KR102030639B1
Application number: KR1020170175870A
Authority: KR
Inventors: 이윤진; 서행란; 이해준; 김아람; 최인희; 강선희; 남재경
Original assignee: 한국원자력의학원
Priority date: 2017-12-20
Filing date: 2017-12-20
Publication date: 2019-10-10
Also published as: KR20190074480A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 방사선 유발 손상에 대한 방사선 보호 또는 완화용 약학 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 폐섬유화 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for radiation protection or alleviation of radiation-induced damage, including a compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof. In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating pulmonary fibrosis, which comprises a compound of formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.

Description

방사선 손상 보호 또는 완화, 및 폐섬유화 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물 {Pharmaceutical composition for radioprotection or mitigation, and prevention or treatment of pulmonary fibrosis}Pharmaceutical composition for radioprotection or mitigation, and prevention or treatment of pulmonary fibrosis

본 발명은 방사선 보호용 또는 완화용 약제학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 방사선 피폭에 의해 유발될 수 있는 임의의 손상, 예를 들면 혈관 손상, 피부 손상, 위장관 손상, 조직 염증, 또는 조직 섬유화를 예방 또는 치료하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 폐섬유화를 예방 또는 치료할 수 있는 약제학적 조성물에 관한 것이다. FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to pharmaceutical compositions for radiation protection or alleviation, specifically to preventing any damage that may be caused by radiation exposure, such as vascular damage, skin damage, gastrointestinal damage, tissue inflammation, or tissue fibrosis, or A pharmaceutical composition is treated. The present invention also relates to pharmaceutical compositions capable of preventing or treating pulmonary fibrosis.

방사선을 다루는 산업현장에서의 방사선 노출사고 및 방사선 치료시 생기는 정상조직에 대한 부작용 등 방사선 피폭에 의한 생체 손상의 사례는 다양하다.There are many examples of biological damage from radiation exposure, such as accidental exposure to radiation in industrial sites dealing with radiation and adverse effects on normal tissues from radiation therapy.

방사선은 주로 세포독성으로 인해서 세포 및 조직에 역효과를 미친다. 인간이 이온화 방사선에 노출되는 것은 주로 항암 방사선 치료, 또는 직업상 혹은 환경 노출을 통하여 발생한다Radiation adversely affects cells and tissues, mainly due to cytotoxicity. Human exposure to ionizing radiation occurs mainly through chemotherapy or occupational or environmental exposure

방사선 노출은 직업상의 환경에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 원자력 혹은 핵무기 산업에서 방사선에 노출(혹은 잠재적 노출)될 수 있다. 현재 미국에는 상업적으로 허가를 받은 104개의 원자력 발전소가 있다. 세계적으로, 총 430개의 원자력 발전소가 32 개국에서 작동되고 있다. 이러한 원자력 발전소에 고용된 모든 직원들은 그 할당된 의무를 수행함에 있어 방사선에 노출될 수 있다. 원자로 빌딩 및 주위 환경내로 방사능 물질이 방출된 1979년 3월 28일에 일어난 Three Mile Island 원자력 발전소 사고는 매우 위험하게 노출된 경우의 잠재성을 보여주고 있다. 이러한 대형 사고 없이도, 원자력 산업에 종사하는 근무자는 민간인들 보다 더 높은 수준의 방사선에 노출된다.Radiation exposure can occur in occupational settings. For example, it may be exposed (or potentially exposed) to radiation in the nuclear or nuclear weapons industry. There are currently 104 commercially licensed nuclear power plants in the United States. Globally, a total of 430 nuclear power plants operate in 32 countries. All employees employed in these nuclear power plants may be exposed to radiation in carrying out their assigned duties. The Three Mile Island nuclear plant incident on March 28, 1979, when radioactive material was released into the reactor building and surrounding environment, shows the potential for very dangerous exposure. Even without these major accidents, workers in the nuclear industry are exposed to higher levels of radiation than civilians.

직업상 노출의 다른 원인은 기계 부품, 플라스틱 및 방사성 의료 생성물의 제조시 남는 용매, 스모크 경보, 응급 사인 및 다른 소비물자로부터 발생할 수 있다. Other causes of occupational exposure may arise from solvents, smoke alarms, emergency signs and other consumer products remaining in the manufacture of mechanical parts, plastics and radioactive medical products.

또한, 방사선 피폭에 의한 생체 손상은 방사선 치료시 만성 부작용으로서 발생되는 경우가 많으며, 이는 방사선 치료의 완치율을 저하시키게 된다. 최근, 방사선 치료 기술의 발달에 따라 방사선 치료를 받은 암환자의 생존률이 높아지고 있으나, 방사선에 의한 부작용으로서 발생되는 생체 손상, 특히 폐섬유화는 암 환자의 삶의 질을 저하시키는 큰 문제로서 제기되고 있다. 최근 방사선치료 장비 및 소프트웨어의 발달, 그리고 방사선 생물학적 개념의 진화에 힘입어 1 ~ 수회(5회 내외)의 방사선 치료로 정상조직을 보호하면서 암 병소만 효과적으로 제어할 수 있는 방사선치료 기법이 개발되고 있으나, 암 진행 단계 및 암 생성부위 등에 따라 아직 제한적으로 이용되고 있다. In addition, injuries caused by radiation exposure often occur as chronic side effects during radiation treatment, which lowers the cure rate of radiation treatment. Recently, the survival rate of cancer patients undergoing radiation therapy is increasing with the development of radiation therapy technology. However, biological damage, especially pulmonary fibrosis, which is caused as a side effect of radiation, has been raised as a major problem to deteriorate the quality of life of cancer patients. . Recently, due to the development of radiotherapy equipment and software, and the evolution of the radiobiological concept, radiotherapy techniques have been developed that can effectively control only cancer lesions while protecting normal tissues with one to several radiation treatments. However, it is still limitedly used depending on the cancer progression stage and the cancer generation site.

이러한 방사선 치료기술의 발달에도 불구하고, 방사선 치료시 불가피하게 발생하는 폐섬유화와 같은 부작용은 흉부방사선 치료환자에게 흔히 나타나는 부작용이다. 폐암, 유방암, 또는 호치킨림프종의 치료를 위해, 흉부에 방사선 치료를 받은 환자들의 10-15%에서 2-3 개월 후 방사선 폐렴이 발생하고 6 개월 후에는 만성 부작용인 섬유화 질환으로 발전하게 된다. 이와 같이 진행된 폐섬유화는 2년 정도의 기간이 경과되어도 여전히 유지되어 폐 기능 저하 및 환자의 고통과 생활의 불편함을 수반하게 된다(Xie H et.al., Exp Biol Med (Maywood):238(9):1062-8. 2013.). Despite these advances in radiotherapy, side effects such as pulmonary fibrosis, which are inevitably encountered during radiation therapy, are common side effects in patients with chest radiation therapy. For the treatment of lung cancer, breast cancer, or Hodgkin's lymphoma, radiation pneumonia develops after 2-3 months in 10-15% of patients who have received radiation therapy to the chest and develops into fibrotic disease, a chronic side effect after 6 months. Pulmonary fibrosis thus progressed is still maintained after a period of about two years, accompanied by deterioration of lung function, pain and discomfort of the patient (Xie H et.al., Exp Biol Med (Maywood): 238 ( 9): 1062-8. 2013.).

현재 폐섬유화증의 치료는 면역억제제가 주로 사용된다. 스테로이드나 세포독성약물 등을 사용할 수 있는데 스테로이드가 우선 사용되며, 방사선 피폭에 의한 폐섬유화의 치료제로는 현재 스테로이드와 아자티오프린 또는 사이클로포스파미드의 병합요법을 사용하고 있다(Ochoa et al., Journal of Medical Case Reports, 6:413.2012). 하지만, 이와 같은 치료법이 환자의 생존율이나 삶의 질을 향상시킨다는 명확한 근거는 없으며 지금까지 여러가지 섬유화 억제제가 동물 실험 및 소규모의 환자들에게 시도됐지만 뚜렷한 효과가 입증된 것은 없다.Currently, immunosuppressive drugs are mainly used for the treatment of pulmonary fibrosis. Steroids and cytotoxic drugs can be used, but steroids are used first, and currently, a combination therapy of steroids and azathioprine or cyclophosphamide is used as a therapeutic agent for pulmonary fibrosis due to radiation exposure (Ochoa et al., Journal of Medical Case Reports, 6: 413.2012). However, there is no clear evidence that such therapies improve patient survival or quality of life, and so far several fibrosis inhibitors have been tried in animal experiments and small-scale patients, but no clear effects have been demonstrated.

따라서, 방사선에 의한 폐섬유화를 포함한 방사선에 의한 조직의 손상을 예방하거나 완화할 수 있는 방사선 보호제 또는 방사선 완화제용 의약품의 개발이 시급하다.Therefore, there is an urgent need to develop a radioprotectant or a medicament for a radiomitigator that can prevent or mitigate tissue damage caused by radiation, including pulmonary fibrosis caused by radiation.

본 발명자들은 이러한 방사선 보호제 또는 방사선 완화제용 의약품을 개발하는 가운데, GSK3 억제제로 알려져 있는 화합물(6-[[2-[[4-(2,4-디클로로페닐)-5-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-2-피리미디닐]아미노]에틸]아미노]-3-피리딘카르보니트릴)이 우수한 방사선 보호 또는 완화 효과를 갖는 것을 발견하였다. 즉, 상기 화합물은 GSK3 억제제로 뇌종양, 폐종양을 치료하는 등 과다증식성 질환의 치료용도로 알려져 있었으나, 방사선 보호제 및 완화제의 용도로 전혀 공지된 바가 없었다.The present inventors are developing such a radioprotectant or radiopharmaceutical drug, and known as a GSK3 inhibitor (6-[[2-[[4- (2,4-dichlorophenyl) -5- (5-methyl-1H) -Imidazol-2-yl) -2-pyrimidinyl] amino] ethyl] amino] -3-pyridinecarbonitrile) have been found to have excellent radiation protection or mitigating effect. That is, the compound has been known for the treatment of hyperproliferative diseases such as the treatment of brain tumors and lung tumors with GSK3 inhibitors, but is not known at all as a radioprotectant and a palliative.

대한민국 등록특허 제10-1667362호Republic of Korea Patent No. 10-1667362

미국특허 공개번호 제2009-0041863호United States Patent Publication No. 2009-0041863

미국특허 공개번호 제2014-0288178호United States Patent Publication No. 2014-0288178

(비특허문헌 0001) Benjamin M et al., Chest.111(4):1061-1076. 1997(Non-Patent Document 0001) Benjamin M et al., Chest. 111 (4): 1061-1076. 1997

(비특허문헌 0002) Ochoa et al., Journal of Medical Case Reports, 6:413.2012(Non-Patent Document 0002) Ochoa et al., Journal of Medical Case Reports, 6: 413.2012

본 발명은 방사선 보호용 또는 완화용 약물을 제공하고자 한다. 구체적으로 방사선 피폭 전 또는 후에 인체에 적용하여 방사선으로 인한 생체의 손상을 예방하거나 치료할 수 있는 약물을 제공하고자 한다. 특히, 암 환자의 방사선 치료시 발생할 수 있는 혈관 손상, 피부 손상, 위장관 손상, 조직 염증, 조직 섬유화 등의 부작용을 예방 또는 치료하는 우수한 약제학적 조성물을 제공하고자 한다.The present invention seeks to provide a drug for radiation protection or alleviation. Specifically, to provide a drug that can be applied to the human body before or after radiation exposure to prevent or treat damage to the living body due to radiation. In particular, the present invention seeks to provide an excellent pharmaceutical composition for preventing or treating side effects such as vascular damage, skin damage, gastrointestinal tract damage, tissue inflammation, tissue fibrosis, etc., which may occur during radiation treatment of cancer patients.

또한, 본 발명은 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법 등으로 발생하는 심각한 부작용인 폐섬유화 질환을 예방 또는 치료하는 약물을 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide a drug for preventing or treating pulmonary fibrosis disease, which is a serious side effect caused by radiation therapy or drug therapy for chemotherapy.

본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 방사선 유발 손상에 대한 방사선 보호 또는 완화용 약학 조성물을 제공한다:The present invention provides a pharmaceutical composition for radiation protection or alleviation of radiation-induced damage, including a compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:

[화학식 1][Formula 1]

상기 화학식 I의 화합물의 화학명은 6-[[2-[[4-(2,4-디클로로페닐)-5-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-2-피리미디닐]아미노]에틸]아미노]-3-피리딘카르보니트릴이며, “CHIR-99021”로도 기재된다.The chemical name of the compound of formula I is 6-[[2-[[4- (2,4-dichlorophenyl) -5- (5-methyl-1H-imidazol-2-yl) -2-pyrimidinyl] Amino] ethyl] amino] -3-pyridinecarbonitrile, also described as "CHIR-99021".

본 발명자들은 상기 화학식 1의 화합물을 방사선 피폭 전 또는 후에 투여할 경우, 방사선 피폭에 의해 유발되는 여러가지 생체 손상을 현저히 감소시키는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors have completed the present invention by confirming that when the compound of Formula 1 is administered before or after radiation exposure, various biological damages caused by radiation exposure are significantly reduced.

즉, 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 염 또는 용매화물은, 방사선 피폭에 의해 유발되는 생체 손상, 예를 들면 방사선 피폭에 의한 혈관 손상, 피부 손상, 위장관 손상, 조직 염증, 또는 조직 섬유화를 감소시킴으로써, 상기 증상을 예방 또는 치료하는 효과를 갖는다.That is, the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof of the present invention is a biological damage caused by radiation exposure, for example, blood vessel damage by skin exposure, skin damage, gastrointestinal damage, tissue By reducing inflammation or tissue fibrosis, it has the effect of preventing or treating the above symptoms.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 폐섬유화 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating pulmonary fibrosis, comprising the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.

상기 폐섬유화는 다양한 원인에 의해 발생되는 폐섬유화일 수 있으며, 특히 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법에 의해 유발된 것일 수 있다. The pulmonary fibrosis may be pulmonary fibrosis caused by various causes, and in particular, may be caused by pharmacotherapy for radiation exposure or chemotherapy.

본 발명자는 상기 화학식 1의 화합물을 방사선 피폭 전 또는 후에 투여할 경우, 방사선 피폭에 의해 유발되는 폐조직의 염증 및 섬유화를 감소시킴으로써, 폐조직의 염증 및 폐섬유화 증상을 예방 또는 치료할 수 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.The present inventors found that when the compound of Formula 1 is administered before or after radiation exposure, inflammation and fibrosis of lung tissue caused by radiation exposure can be reduced, thereby preventing or treating symptoms of inflammation and lung fibrosis of lung tissue. The present invention was completed.

또한, 본 발명자는 상기 화학식 1의 화합물이 방사선에 의한 DNA 손상을 저해할 수 효과를 갖는 것을 확인하였다.In addition, the inventors confirmed that the compound of Formula 1 has an effect of inhibiting DNA damage caused by radiation.

따라서, 본 발명은 화학식 1의 화합물이 방사선에 의한 DNA 손상을 억제함으로써, 방사선 보호 또는 완화 효과를 가지는 약학 조성물을 제공한다. Accordingly, the present invention provides a pharmaceutical composition having a compound of formula (1) having a radiation protection or mitigating effect by inhibiting DNA damage by radiation.

또한, 본 발명은 화학식 1의 화합물이 방사선에 의한 DNA 손상을 억제함으로써, 폐섬유화를 치료 또는 예방하는 약학 조성물을 제공한다. The present invention also provides a pharmaceutical composition wherein the compound of formula 1 inhibits DNA damage by radiation, thereby treating or preventing pulmonary fibrosis.

본 발명은 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물의 신규한 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 상기 화합물은 방사선 피폭시 나타나는 혈관손상, 피부손상, 위장관 손상, 조직 염증, 및 조직 섬유화 등을 포함한 부작용인, 방사선 유발 손상을 예방 또는 완화시키는 우수한 효과를 갖는다.The present invention relates to novel uses of the compounds of formula (1), or pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof. Specifically, the compound has an excellent effect of preventing or alleviating radiation-induced damage, which is a side effect including blood vessel damage, skin damage, gastrointestinal damage, tissue inflammation, tissue fibrosis, and the like, which occur during radiation exposure.

또한, 본 발명의 화학식 1의 화합물, 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물은 폐섬유화, 특히 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법에 의한 폐섬유화를 예방 또는 치료하는 우수한 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법에 의해 유발된 폐섬유화의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있을 것으로 기대된다. In addition, the compounds of formula 1, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof of the present invention have an excellent effect of preventing or treating pulmonary fibrosis, in particular pulmonary fibrosis by pharmacotherapy for radiation exposure or chemotherapy. Therefore, it is expected that the pharmaceutical composition of the present invention can be effectively used for the prevention or treatment of pulmonary fibrosis caused by radiation therapy or pharmacotherapy for chemotherapy.

뿐만 아니라, 본 발명의 화학식 1의 화합물, 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물은 DNA 손상을 억제함으로써, 방사선 치료시 나타날 수 있는 생체 손상을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 효과를 갖는다.In addition, the compound of formula 1, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof of the present invention have the effect of effectively preventing or treating biological damage that may occur during radiation therapy by inhibiting DNA damage.

<도면의 기호에 대한 설명>
No. IR : 대조군 (방사선 미조사군)
IR : 방사선 조사군
IR + CHIR-99021 : 방사선 조사 및 CHIR-99021 처리군
도 1a는 마우스 동물모델에서 CHIR-99021를 방사선 조사 1시간 전 30 mg/kg의 농도로 처리 또는 미처리 후 폐 부위에 90 Gy의 세기로 방사선을 조사한 다음, 조직 손상 부위의 염증 반응 및 섬유화를 헤마톡실린 및 에오신 염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다.
도 1b는 도 1a에서의 염증반응의 정도를 등급화하여 통계적으로 나타낸 그래프이다.
도 2는 마우스 동물모델에서 흉부에 대한 방사선 조사와 함께 CHIR-99021를 처리했을 때, 미처리군(IR)과 비교한 혈관벽 두께의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3a는 마우스 동물모델에 CHIR-99021를 처리 또는 미처리 후 폐부위에 방사선을 조사한 다음, 폐의 혈관내피 부위의 콜라겐을 트라이크롬 염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다.
도 3b는 도 3a에서 폐섬유화 관련 분자인 콜라겐의 발현정도를 트라이크롬 염색법을 실시하여 통계적으로 나타낸 그래프이다.
도 4는 마우스 동물모델에서 CHIR-99021를 방사선 조사 1시간 전 30 mg/kg의 농도로 처리 또는 미처리 후 폐 부위에 90 Gy의 세기로 방사선을 조사한 다음, DNA 손상을 γH2AX 면역염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다.
도 5는 마우스 동물모델에서 블레오마이신 주입 전 CHIR-99021을 30mg/Kg의 농도로 처리 또는 미처리 후 폐 조직을 헤마톡실린 및 에오신 염색과 트라이크롬 염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다. <Description of Symbols in Drawing>
No. IR: control group (non-irradiated group)
IR: Irradiation group
IR + CHIR-99021: Irradiation and CHIR-99021 treatment group
Figure 1a is irradiated with 90 Gy intensity to the lung area after treatment or untreated CHIR-99021 at a concentration of 30 mg / kg 1 hour before irradiation in a mouse animal model, and the inflammatory response and fibrosis of the tissue damage site It is a photograph taken with the results confirmed by the methoxylin and eosin staining method.
FIG. 1B is a graph statistically showing the degree of inflammatory response in FIG. 1A.
Figure 2 is a graph showing the change in the thickness of the blood vessel wall compared to the untreated group (IR) when treated with CHIR-99021 with irradiation to the chest in a mouse animal model.
Figure 3a is a photograph of the results obtained by irradiating the lung area after treatment or untreated CHIR-99021 in the mouse animal model, the collagen of the vascular endothelial region of the lung by trichrome staining method.
FIG. 3b is a graph showing the expression level of collagen, a pulmonary fibrosis-related molecule in FIG. 3a, by trichrome staining.
FIG. 4 shows that after irradiating CHIR-99021 with a concentration of 30 mg / kg 1 hour before irradiation in a mouse animal model or irradiating the lung area with an intensity of 90 Gy, DNA damage was confirmed by γH2AX immunostaining. This picture was taken.
5 is a photograph showing the results of confirming the lung tissues treated with hematoxylin and eosin and trichrome staining after treatment or untreatment of CHIR-99021 at a concentration of 30 mg / Kg before bleomycin injection in a mouse animal model.

본 발명에서 사용되는 모든 용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다.　 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료 등이 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.　All terms used in the present invention, unless defined otherwise, are used in the meaning as commonly understood by those skilled in the art. In the present specification, a preferred method, a sample, and the like are described, but those similar or equivalent are included in the scope of the present invention.

[화학식 1][Formula 1]

본 명세서에서 “방사선 보호(radioprotection)”란 방사선 피폭 전에 생체에 적용하여 방사선 피폭에 의해 유발되는 임의의 방사선 유발 손상을 억제 또는 경감하는 것을 의미한다.By “radioprotection” is meant herein, applied to a living body prior to radiation exposure to inhibit or mitigate any radiation induced damage caused by radiation exposure.

본 명세서에서 “방사선 완화(radiomitigation)”란 방사선 피폭의 분명한 징후가 나타나기 전에 방사선 피폭 후 단기간 내에 생체에 적용하여 방사선 피폭에 의해 유발되는 임의의 방사선 유발 손상을 억제 또는 경감하는 것을 의미한다. By “radiomitigation” is meant herein to apply to a living body within a short period of time after radiation exposure before clear signs of radiation exposure appear to inhibit or mitigate any radiation induced damage caused by radiation exposure.

상기 “단기간 내”란 방사선 피폭에 의한 분명한 손상 징후가 나타나기 전에 적용하여 임의의 방사선 유발 손상을 억제 또는 경감할 수 있는 정도의 기간을 의미한다. 일 구체예에서, 상기 단기간 내는 방사선 조사 후 36시간 이내, 또는 24시간 이내, 또는 12시간 이내이며, 이에 한정되는 것은 아니다.The term “in a short period of time” means a period of time that can be applied prior to the appearance of obvious signs of damage by radiation exposure to suppress or reduce any radiation induced damage. In one embodiment, the short period of time is within 36 hours, or within 24 hours, or within 12 hours after irradiation, but is not limited thereto.

상기 “방사선 유발 손상”은 방사선 피폭에 의해 유발되는 임의의 생체 손상을 의미하며, 예를 들면 방사선 피폭에 의한 혈관 손상, 피부 손상, 위장관 손상, 조직 염증, 또는 조직 섬유화를 포함하며, 이에 한정되는 것은 아니다.The term "radiation-induced injury" means any biological damage caused by radiation exposure, and includes, for example, blood vessel damage, skin damage, gastrointestinal damage, tissue inflammation, or tissue fibrosis caused by radiation exposure. It is not.

상기 용어 "약제학적으로 허용가능한 염”이란 염산염, 브롬화 수소산염, 요오드화 수소산염, 불화 수소염, 황산염, 설폰산염, 시트르산염, 캄포린산염, 말레산염, 아세트산염, 락트산염, 니키틴산염, 질산염, 숙신산염, 인산염, 말론산염, 말린산염, 살리실산염, 페닐아세트산염, 스테아르산염, 포른산염, 푸마르산염, 우레아, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 아연, 리튬, 신남산염, 메틸아미노, 메탄설폰산염, 피크린산염, p-톨루엔설폰산염, 나프탈렌설폰산염, 타르타르산염, 트리에틸아미노, 디메틸아미노 및 트리(하이드록시메틸)아미노메탄과 같은 제약분야에서 통상 사용되는 염을 말한다. 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염은 염산염일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The term "pharmaceutically acceptable salts" means hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, hydrogen fluoride, sulfate, sulfonate, citrate, camphorate, maleate, acetate, lactate, nikitinate, Nitrate, Succinate, Phosphate, Malonate, Dried Salt, Salicylate, Phenyl Acetate, Stearate, Formate, Fumarate, Urea, Sodium, Potassium, Calcium, Magnesium, Zinc, Lithium, Cinnamic Acid, Methylamino, Methane Salts commonly used in the pharmaceutical arts, such as sulfonates, picric acid salts, p-toluenesulfonic acid salts, naphthalenesulfonic acid salts, tartaric acid salts, triethylamino, dimethylamino and tri (hydroxymethyl) aminomethane. Scientifically acceptable salts may be, but are not limited to, hydrochloride.

상기 용어 "용매화물" 또는 "약학적으로 허용가능한 용매화물"은 하나 이상의 용매 분자와 화학식 I의 화합물의 결합으로부터 형성된 용매화물이다. 용매화물이란 용어는 수화물(예를 들어, 헤미수화물, 일수화물, 이수화물, 삼수화물, 사수화물 등)을 포함한다.The term "solvate" or "pharmaceutically acceptable solvate" is a solvate formed from the combination of one or more solvent molecules with a compound of formula (I). The term solvate includes hydrates (eg hemihydrate, monohydrate, dihydrate, trihydrate, tetrahydrate, etc.).

상기 폐섬유화는 다양한 원인에 의해 발생되는 폐섬유화일 수 있으며, 특히 방사선 피폭, 항암치료를 위한 약물요법, 흡연 또는 분진이 많은 작업환경 등에 의해 유발된 것일 수 있다. 또한, 상기 폐섬유화는 암에 대한 방사선 치료 시, 정상조직까지 피폭되어 발생된 방사선 치료 부작용이거나 항암치료를 위한 약물요법의 부작용일 수 있다. 상기 폐섬유화를 유발할 수 있는, 암에 대한 방사선 치료 또는 약물요법은 폐암, 유방암, 또는 호치킨림프종 등에 대한 치료를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.The pulmonary fibrosis may be pulmonary fibrosis caused by various causes, and in particular, may be caused by radiation exposure, drug therapy for anticancer treatment, smoking or dusty work environment. In addition, the pulmonary fibrosis may be a side effect of radiation therapy caused by exposure to normal tissue during radiation therapy for cancer, or may be a side effect of drug therapy for anticancer therapy. Radiation therapy or pharmacotherapy for cancer, which may cause pulmonary fibrosis, includes, but is not limited to, treatment for lung cancer, breast cancer, or Hodgkin's lymphoma and the like.

구체적으로, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법에 의해 유발된 폐섬유화인 것을 특징으로 하는 약학 조성물에 관한 것이다.Specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition, characterized in that the pulmonary fibrosis induced by radiation therapy or pharmacotherapy for anticancer treatment comprising the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof. will be.

또한, 본 발명의 약학 조성물은 방사선 피폭 전 또는 후에 투여될 수 있으며, 바람직하게는 암에 대한 방사선 치료 전에 투여될 수 있다.In addition, the pharmaceutical compositions of the present invention may be administered before or after radiation exposure, preferably before radiation treatment for cancer.

또한, 본 발명의 약학 조성물은 항암치료를 위한 약물요법 전, 후 또는 동시에 투여될 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered before, after or simultaneously with pharmacotherapy for anticancer therapy.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물이 DNA 손상을 저해함으로써 방사선 보호 또는 완화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 약학 조성물에 관한 것이다.In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition, characterized in that the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, exhibits a radioprotective or alleviating effect by inhibiting DNA damage.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물이 DNA 손상을 저해함으로써 폐섬유화 예방 또는 치료 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 약학 조성물에 관한 것이다.In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition, characterized in that the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof exhibits preventive or therapeutic effect of pulmonary fibrosis by inhibiting DNA damage.

상기 본 발명에 따른 약학 조성물은 방사선 보호 또는 완화 효과를 획득하기 위해, 성인을 기준으로 1 일 총 투여량이 화학식 1의 화합물로서 약 0.1-100 mg/kg 이 되도록 임의로 수회 나누어서 투여할 수 있다. 상기 투여량은 손상을 유발하는 방사선의 세기, 방사선 유발 손상의 종류 또는 진행 정도, 투여 경로, 성별, 나이, 체중 등에 따라 적절히 증감될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered in several divided doses so that the total daily dose based on an adult is about 0.1-100 mg / kg as the compound of Formula 1 in order to obtain a radiation protection or alleviating effect. The dosage may be appropriately increased or decreased depending on the intensity of radiation causing damage, the type or extent of radiation induced damage, route of administration, sex, age, weight, and the like.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention and the scope of the present invention is not limited thereto.

[실시예]EXAMPLE

실험방법Experiment method

(1) 생체조직에 대한 헤마톡실린(hematoxilin) 및 에오신(Eosin) 염색법 (H&E staining)(1) Hematoxylin and Eosin staining on biological tissues (H & E staining)

마우스의 조직은 10 % 의 중성포르말린(neutral formalin)으로 하루 동안 고정시키고 파라핀 섹션을 만들었다. 조직 주변의 파라핀을 제거하기 위해 자일렌(xylene), 95, 90, 70 % 에탄올 용액에 각각 5 분씩 순서대로 반응시켰으며, 헤마톡실린 용액에 1 분간 담궈 핵을 염색하고 흐르는 물에 10분간 세척하였다. 그 다음 에오신 용액에 30 초간 담궈 세포질을 염색하고 50, 70, 90, 및 95 % 에탄올 용액, 자일렌 용액에 순서대로 담근 후 마운팅 용액(mounting solution)을 한 방울 떨어뜨린 후 커버 슬라이드(cover slide)를 덮고 현미경 (Carl Zeiss Vision)으로 관찰하였다.Tissues of mice were fixed for 10 days with 10% neutral formalin and paraffin sections were made. In order to remove paraffin around the tissues, each reaction was carried out in xylene, 95, 90, and 70% ethanol solution in order for 5 minutes, soaked in hematoxylin solution for 1 minute, stained nuclei and washed in running water for 10 minutes. It was. Subsequently, immerse in eosin solution for 30 seconds to stain the cytoplasm, soak in 50, 70, 90, and 95% ethanol solution, xylene solution in order, drop a drop of mounting solution, and cover slide Covered and observed under a microscope (Carl Zeiss Vision).

(2) 생체조직에 대한 트라이크롬(Trichrome) 염색법(2) Trichrome staining method for living tissue

마우스의 조직은 10 % 의 중성포르말린(neutral formalin)으로 하루 동안 고정시키고 파라핀 섹션을 만들었다. 조직 주변의 파라핀을 제거하기 위해 자일렌(xylene), 95, 90, 70 % 에탄올 용액에 각각 5 분씩 순서대로 반응시켰으며, 조직의 항원활성화를 위하여 0.1 M 농도의 시트르산 (pH 6.0) 용액에 조직을 담가 20 분 동안 끓였다. 그 다음 Bouin's solution에 1분, Weigert's hematoxylin 10분, Phosphotunstic / phosphomolydic acid에 10분, 아닐린 블루(aniline blue)에 5분, 1% 아세트산에 1 분 동안 순차적으로 반응시킨 다음, 탈수과정을 진행 후 커버글라스로 봉입하여 현미경 (Carl Zeiss Vision)으로 관찰하였다.Tissues of mice were fixed for 10 days with 10% neutral formalin and paraffin sections were made. In order to remove paraffin around the tissues, each reaction was performed in order of xylene, 95, 90, 70% ethanol solution for 5 minutes, and the tissues were dissolved in 0.1 M citric acid (pH 6.0) solution for antigen activation. Soak it and boil for 20 minutes. Then 1 minute in Bouin's solution, 10 minutes in Weigert's hematoxylin, 10 minutes in Phosphotunstic / phosphomolydic acid, 5 minutes in aniline blue, 1 minute in 1% acetic acid, then proceed with dehydration and cover It was encapsulated in glass and observed under a microscope (Carl Zeiss Vision).

(3) γH2AX 면역염색법(3) γH2AX immunostaining

마우스의 조직은 10% 의 중성포르말린(neutral formalin)으로 하루 동안 고정시키고 파라핀섹션을 만들었다. 조직 주변의 파라핀 제거를 위해 자일렌(xylene) 및 100, 95, 90, 70% 에탄올 용액을 순서대로 담갔다. 조직의 항원활성화를 위해 0.1 M 농도의 시트르산 (pH 6.0) 용액에 조직을 담가 30 분간 끓이고, 3% 과산화수소에 15 분간 반응시켰다. PBS (phosphate based saline buffer, 0.1% triton x-100 포함) 용액에 1:200 비율로 희석한 γH2AX (abcam)을 섭씨 4도에서 16 시간동안 반응시켰다. PBS로 세척 후, 비오틴이 결합된 이차 항체를 1:200 비율로 희석하여 실온에서 30 분간 반응시켰다. ABC(Avidin biotin complex)에 30 분 동안 실온에서 반응시키고 3,3'-DAB (3,3'-diaminobenzidine)를 발색시킨 후, 헤마톡실린으로 대조염색하였다. 그 다음 50, 70, 90, 95, 100% 에탄올 용액, 자일렌 용액에 순서대로 담근 후 마운팅 용액(mounting solution)을 한 방울 떨어뜨려 커버 슬라이드(cover slide)를 덮고 현미경(Carl Zeiss Vision)으로 관찰하였다.Tissues of mice were fixed for 10 days with 10% neutral formalin and paraffin sections were made. Xylene and 100, 95, 90, 70% ethanol solution were soaked in order to remove paraffin around the tissue. For antigen activation of the tissues, the tissues were immersed in 0.1 M citric acid (pH 6.0) solution and boiled for 30 minutes, and reacted with 3% hydrogen peroxide for 15 minutes. ΓH2AX (abcam) diluted 1: 200 in PBS (phosphate based saline buffer, 0.1% triton x-100) solution was reacted for 16 hours at 4 degrees Celsius. After washing with PBS, biotin-bound secondary antibody was diluted 1: 200 and reacted at room temperature for 30 minutes. After reacting with ABC (Avidin biotin complex) at room temperature for 30 minutes, 3,3'-DAB (3,3'-diaminobenzidine) was developed and counterstained with hematoxylin. Then immerse in 50, 70, 90, 95, 100% ethanol solution and xylene solution in order, then drop a drop of mounting solution to cover the cover slide and observe it under a microscope (Carl Zeiss Vision). It was.

[실시예 1] Example 1

CHIR-99021의 방사선에 의한 조직 손상 저해 시험 Tissue damage inhibition test by CHIR-99021

마우스의 흉부에 3mm의 크기로 방사선 90Gy를 조사한 마우스 동물모델의 폐 조직을 10% 포르말린으로 고정 후 파라핀 섹션을 만들어서 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin) 염색법을 이용하여 조직 염증반응 및 섬유화를 확인하였다. 이 염색법으로 조직을 관찰하면 세포핵은 파란색, 세포질은 분홍색으로 관찰된다. 마우스 동물모델에게 방사선을 조사 1 시간 전에, CHIR-99021 30mg/kg을 복강주사 투여하였으며, 방사선 조사 2 주 후에 조직 손상 부위의 염증 반응, 섬유화를 헤마톡실린 및 에오신 염색법으로 확인하였다. Lung tissue of a mouse animal model irradiated with 90 Gy of 3 mm to the chest of the mouse was fixed with 10% formalin, and then paraffin sections were prepared for tissue inflammation and fibrosis using hematoxylin and eosin staining. Confirmed. When the tissue is observed with this staining method, the cell nucleus is blue and the cytoplasm is pink. The mouse animal model was intraperitoneally injected with CHIR-99021 30 mg / kg 1 hour prior to irradiation, and 2 weeks after the irradiation, hematoxylin and eosin staining confirmed the inflammatory response and fibrosis of the tissue injury site.

[도 1a]에 마우스 동물모델에서 CHIR-99021를 방사선 조사 1시간 전 30mg/kg의 농도로 처리 또는 미처리 후 폐 부위에 90Gy의 세기로 방사선을 조사한 다음, 조직 손상 부위의 염증 반응 및 섬유화를 헤마톡실린 및 에오신 염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진으로 나타내었다.In FIG. 1A, after irradiating CHIR-99021 with a concentration of 30 mg / kg or 1 hour before irradiation in a mouse animal model at 90 Gy intensity, the lung area was irradiated with inflammatory response and fibrosis. The photograph confirmed the results confirmed by the methoxylin and eosin staining method.

도 1a에서 보는 바와 같이, 헤마톡실린 및 에오신 염색을 통해 정상조직(No IR)과 비교했을 때 90Gy 방사선 조사군(IR)의 조직에서는 염증 세포가 침윤되는 것을 확인 할 수 있다. 또한, 90Gy 방사선 조사군(IR)의 조직에서는 정상조직 대비 손상된 혈관 주위에 섬유화 기질이 나타나는 것을 알 수 있다. 이에 반해, CHIR-99021를 처리한 마우스(IR+CHIR-99021)의 조직에서는 염증 세포의 침윤과 혈관 주위 섬유화 기질이 미처리군(IR)에 비해 현저히 감소한 것을 확인할 수 있었다. As shown in Figure 1a, compared with normal tissue (No IR) through hematoxylin and eosin staining it can be seen that the inflammatory cells infiltrate in the tissue of the 90Gy irradiation group (IR). In addition, it can be seen that in the tissues of the 90 Gy irradiation group (IR), fibrous substrates appear around damaged blood vessels compared to normal tissues. In contrast, in the tissues of mice treated with CHIR-99021 (IR + CHIR-99021), the infiltration of inflammatory cells and the perivascular fibrous matrix were significantly reduced compared to the untreated group (IR).

[도 1b]은 도 1a에 나타낸 염증반응의 정도를 등급화하여 통계적으로 나타낸 그래프이다. FIG. 1B is a graph statistically showing the degree of inflammatory response shown in FIG. 1A.

상기 [도 1]의 결과로부터 CHIR-99021의 처리는 방사선에 의한 조직손상을 현저히 감소시키는 것을 알 수 있다.It can be seen from the results of FIG. 1 that the treatment of CHIR-99021 significantly reduces tissue damage caused by radiation.

[실시예 2]Example 2

CHIR-99021의 방사선에 의한 in vivo 혈관 손상 저해 시험Inhibition of Vascular Injury In Vivo by CHIR-99021

마우스의 흉부에 3mm의 크기로 방사선 90Gy를 조사한 마우스 동물모델의 폐 조직을 10% 포르말린으로 고정 후 파라핀 섹션을 만들어서 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin) 염색을 하였다. 이 염색법으로 조직을 관찰하면 세포핵은 파란색, 세포질은 분홍색으로 관찰된다. 마우스 동물모델에게 방사선을 조사 1 시간 전에, CHIR-99021 30mg/kg을 복강주사 투여하였으며, 방사선 조사 2 주 후에 폐 조직에서 혈관 손상에 따른 혈관벽 두께의 변화를 헤마톡실린 및 에오신 염색법으로 확인하였다. 결과를 도 2에 통계적으로 나타내었다. Lung tissues of a mouse animal model irradiated with 90 Gy of 3 mm to the chest of the mouse were fixed with 10% formalin and paraffin sections were made for hematoxylin and eosin staining. When the tissue is observed with this staining method, the cell nucleus is blue and the cytoplasm is pink. The mouse animal model was intraperitoneally injected with CHIR-99021 30 mg / kg 1 hour prior to irradiation, and 2 weeks after irradiation, changes in vascular wall thickness due to vascular damage in lung tissues were confirmed by hematoxylin and eosin staining. The results are shown statistically in FIG.

도 2에 나타내 바와 같이, 방사선 조사에 따른 혈관 손상으로 방사선 조사군(IR)의 혈관벽 두께가 정상조직(No IR)과 비교했을 때 상당하게 증가하였고, CHIR-99021를 처리(IR+CHIR-99021) 했을 때, 미처리 군(IR)에 비해 혈관벽의 두께가 현저히 감소한 것으로 관찰되었다. 따라서, 도 2의 결과에 따르면, 마우스에 방사선 조사 후, 혈관 손상이 진행되며, CHIR-99021 처리에 의해 방사선 조사에 의한 혈관 손상이 현저히 저해되는 것으로 확인되었다.As shown in FIG. 2, the vascular wall thickness of the irradiated group (IR) increased considerably compared to normal tissue (No IR) due to vascular damage following irradiation, and treated with CHIR-99021 (IR + CHIR-99021). ), It was observed that the thickness of the vessel wall was significantly reduced compared to the untreated group (IR). Therefore, according to the result of FIG. 2, after the irradiation to the mouse, blood vessel damage progresses, and it was confirmed that the blood vessel damage due to irradiation was significantly inhibited by CHIR-99021 treatment.

[실시예 3] Example 3

실험동물모델에서의 폐섬유화 현상 억제 시험Pulmonary Fibrosis Inhibition in Laboratory Animal Models

방사선 치료 후 발생되는 폐섬유화 증상에서 혈관내피세포의 폐섬유화 현상이 나타나는지를 관찰하기 위하여, C57BL/6 마우스의 폐 부위에 90 Gy의 국소 방사선을 조사하였다. 마우스로부터 폐를 적출한 다음 폐조직의 대동맥 단면에 대해, 폐 혈관내피세포의 섬유화시 나타나는 단백질인 콜라겐을 트라이크롬 염색법으로 확인하였다. CHIR-99021 처리군은 방사선 조사 1 시간 전에 CHIR-99021 30 mg/kg의 양으로 복강 내 투여하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.In order to observe whether pulmonary fibrosis of vascular endothelial cells was observed in pulmonary fibrosis after radiation treatment, 90 Gy of local radiation was irradiated to the lung region of C57BL / 6 mice. After the lungs were removed from the mice, collagen, a protein that appears upon fibrosis of pulmonary vascular endothelial cells, was confirmed on aortic cross sections of lung tissues by trichrome staining. The CHIR-99021 treatment group was administered intraperitoneally in an amount of 30 mg / kg CHIR-99021 1 hour prior to irradiation. The results are shown in FIG.

도 3a는 마우스 동물모델에서 CHIR-99021를 처리 또는 미처리 후 폐 부위에 방사선을 조사한 다음, 폐의 혈관내피 부위의 콜라겐을 트라이크롬염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다.Figure 3a is a photograph of the results obtained by irradiating the lung area after treatment or untreated CHIR-99021 in the mouse animal model, the collagen of the vascular endothelial region of the lung by trichrome staining method.

도 3a에서 보는 바와 같이, 방사선을 조사하지 않은 대조군의 대동맥 내벽에서는 콜라겐 염색부위인 파란색 부위가 거의 관찰되지 않았으나, 방사선조사군(IR)의 대동맥 내벽에는 파란색이 상대적으로 현저히 증가한 것으로 관찰되었다. 따라서, 마우스의 폐 부위에 방사선 조사 후, 폐섬유화가 진행된 것을 확인하였다. 이에 반해, CHIR-99021 처리군(IR+CHIR-99021)에서는 폐섬유화 관련 단백질인 콜라겐의 파란색 부위가 방사선 조사군(IR)에 비해 현저히 감소되는 것으로 나타났다. As shown in FIG. 3A, the blue area, which is the collagen staining site, was hardly observed in the aortic lining of the control group, but the blue color was relatively increased in the aortic wall of the irradiated group (IR). Therefore, it was confirmed that pulmonary fibrosis progressed after irradiation to the lung site of the mouse. On the other hand, in the CHIR-99021 treated group (IR + CHIR-99021), the blue site of collagen, a pulmonary fibrosis-related protein, was significantly reduced compared to the irradiated group (IR).

도 3b는 도 3a에서 폐 섬유화 관련 분자인 콜라겐의 발현 정도를 트라이크롬 염색법을 실시하여 통계적으로 나타낸 그래프이다. 또한 방사선 조사로 인하여 섬유화 현상이 증가된 실험군과, CHIR-99021를 처리함에 따라 증가되었던 섬유화 현상이 감소된 실험군 사이의 효과가 통계적 유의성이 있음을 확인하였다.FIG. 3B is a graph showing the expression level of collagen, a pulmonary fibrosis-related molecule in FIG. 3A, by trichrome staining. In addition, it was confirmed that there was a statistically significant effect between the experimental group in which fibrosis increased due to irradiation and the experimental group in which fibrosis decreased by treatment with CHIR-99021.

도 3의 결과로부터, CHIR-99021이 방사선에 의한 폐혈관내피세포의 섬유화 현상을 현저히 저해하는 것을 알 수 있다.From the results in FIG. 3, it can be seen that CHIR-99021 significantly inhibits the fibrosis of pulmonary vascular endothelial cells caused by radiation.

[실시예 4] Example 4

CHIR-99021 의 방사선에 의한 DNA 손상 저해 시험Inhibition of DNA Damage by Radiation of CHIR-99021

방사선 치료 후 발생되는 부작용 중의 하나는 방사선 조사 부위 주변의 정상 세포의 DNA 손상이다. DNA가 손상을 받게 되면 γH2AX의 인산화가 진행되어 손상된 DNA를 인지하고 복구신호기전이 활성화되기 때문에 이 단백질을 염색함으로써 DNA 손상을 확인할 수 있다. 따라서 DNA 손상 정도를 측정하기 위하여 표지자로 알려져 있는 γH2AX를 염색하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.One of the side effects that occur after radiation treatment is DNA damage in normal cells around the radiation site. When DNA is damaged, phosphorylation of γH2AX proceeds, recognizing the damaged DNA and activating a repair signal mechanism, so that DNA damage can be identified by staining this protein. Therefore, γH2AX, known as a marker, was stained to measure the degree of DNA damage. The results are shown in FIG.

도 4는 마우스 동물모델에서 CHIR-99021를 방사선 조사 1시간 전 30 mg/kg의 농도로 처리 또는 미처리 후 폐 부위에 90 Gy의 세기로 방사선을 조사한 다음, DNA 손상을 γH2AX 면역염색법으로 확인한 결과를 촬영한 사진이다.FIG. 4 shows that after irradiating CHIR-99021 with a concentration of 30 mg / kg 1 hour before irradiation in a mouse animal model at 90 Gy intensity after irradiating the lung area, DNA damage was confirmed by γH2AX immunostaining. This picture was taken.

도 4에 따르면, γH2AX 면역염색을 통해 정상조직(No IR)과 비교했을 때 90Gy 방사선 조사군(IR)의 조직에서는 DNA 손상이 상당하게 나타나는 것을 확인 하였다. 이에 반해, CHIR-99021를 처리한 마우스(IR+CHIR-99021)의 조직에서는 DNA 손상에 따른 γH2AX의 발현이 미처리군(IR)에 비해 현저히 감소한 것으로 나타났다. According to Figure 4, γH2AX immunostaining compared to the normal tissue (No IR) as compared to the tissue of the 90Gy irradiation group (IR) it was confirmed that the DNA damage is significant. In contrast, in the tissues of mice treated with CHIR-99021 (IR + CHIR-99021), the expression of γH2AX due to DNA damage was significantly reduced compared to the untreated group (IR).

이러한 도 4의 결과로부터 CHIR-99021의 처리는 방사선에 의한 DNA 손상을 현저히 감소시키는 것을 알 수 있다. The results of FIG. 4 show that the treatment of CHIR-99021 significantly reduces DNA damage caused by radiation.

[실시예 5] Example 5

CHIR-99021 의 블레오마이신에 의한 조직 손상 저해 시험 CHIR-99021 Inhibition of Tissue Damage by Bleomycin

림프종을 비롯한 다양한 종양에 대한 치료제로 흔히 쓰이는 블레오마이신(bleomycin)은 중대한 부작용 중 하나로 조직의 폐손상 및 폐섬유화를 발생시키며, 이를 이용하여 실험동물에서 급성 폐손상과 폐섬유화의 모델로 널리 사용하고 있다. 따라서 블레오마이신 유도 폐섬유화 모델을 제작하여 CHIR-99021의 폐손상 및 폐섬유화 억제 효과를 확인하였다. Bleomycin, which is commonly used as a treatment for various tumors including lymphoma, is one of the major side effects. It causes lung damage and pulmonary fibrosis of tissues, and it is widely used as a model for acute lung injury and pulmonary fibrosis in experimental animals. have. Therefore, the bleomycin-induced pulmonary fibrosis model was constructed to confirm the effects of CHIR-99021 on lung damage and pulmonary fibrosis.

1.25U/kg의 블레오마이신을 50 μL의 생리식염수에 섞어 마우스의 기도 내로 주입하였다. 블레오마이신 주입 1시간 전에, CHIR-99021 30mg/kg을 복강주사 투여하였으며, 블레오마이신 주입 3 주 후에 폐 조직을 10% 포르말린으로 고정 후 파라핀 섹션을 만들어서 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin) 염색과 트라이크롬 염색법으로 확인하였다. 1.25 U / kg of bleomycin was mixed in 50 μL of saline and injected into the airways of mice. 1 hour prior to bleomycin injection, CHIR-99021 30 mg / kg was intraperitoneally injected, and 3 weeks after bleomycin injection, lung tissue was fixed with 10% formalin and paraffin sections were made to hematoxylin and eosin staining. And trichrome staining method.

도 5에 나타내 바와 같이, 블레오마이신을 투여한 3주 후 조직에서 특히 기관지 주변을 비롯하여 광범위한 염증세포의 침윤, 콜라겐의 침착, 섬유화 결절 및 블레오마이신 유도 폐섬유화 모델의 대표적 특징인 국소적인 벌집모양의 간질 비후를 확인하였다. 이에 반해, CHIR-99021를 처리한 마우스의 조직에서는 염증 세포의 침윤, 콜라겐의 침착, 섬유화 결절 및 간질 비후 등의 병리학적 특징이 미처리군에 비해 현저히 저해되는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 5, after 3 weeks of bleomycin administration, the tissues in the form of a local honeycomb, a representative feature of a widespread inflammatory cell infiltration, collagen deposition, fibrotic nodules, and bleomycin-induced pulmonary fibrosis model, especially around the bronchi. Epilepsy thickening was confirmed. In contrast, it was confirmed that in the tissues of mice treated with CHIR-99021, pathological characteristics such as infiltration of inflammatory cells, deposition of collagen, fibrotic nodules, and epileptic thickening were significantly inhibited compared with the untreated group.

Claims

하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 방사선 유발 손상에 대한 방사선 보호 또는 완화용 약학 조성물로서,
상기 방사선 유발 손상은 방사선 피폭에 의한 혈관 손상, 피부 손상, 폐조직 염증 또는 폐조직 섬유화인 것을 특징으로 하는 약학 조성물:
[화학식 1]

A pharmaceutical composition for radiation protection or alleviation of radiation-induced damage, including a compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof,
The radiation-induced damage is vascular damage, skin damage, lung tissue inflammation or lung tissue fibrosis by radiation exposure:
[Formula 1]

삭제delete

하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물을 포함하는, 방사선 피폭 또는 항암치료를 위한 약물요법에 의해 유발된 급성 폐섬유화 예방 또는 치료용 약학 조성물:
[화학식 1]

A pharmaceutical composition for preventing or treating acute pulmonary fibrosis induced by pharmacotherapy for radiation exposure or chemotherapy, comprising a compound of formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:
[Formula 1]

삭제delete

제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 약학 조성물은 방사선 피폭 전 또는 후에 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
4. The pharmaceutical composition of claim 1 or 3, wherein the pharmaceutical composition is administered before or after radiation exposure.

제5항에 있어서, 상기 약학 조성물은 방사선 치료시 방사선 피폭 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
6. The pharmaceutical composition of claim 5, wherein the pharmaceutical composition is administered prior to radiation exposure during radiation treatment.

삭제delete

제3항에 있어서, 상기 약학조성물은 항암치료를 위한 약물요법 전, 후 또는 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
The pharmaceutical composition of claim 3, wherein the pharmaceutical composition is administered before, after or simultaneously with pharmacotherapy for anticancer therapy.

제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염은 염산염인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
The pharmaceutical composition of claim 1 or 3, wherein the pharmaceutically acceptable salt of the compound of Formula 1 is a hydrochloride salt.

제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물이 DNA 손상을 저해함으로써 방사선 보호 또는 완화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, exhibits a radioprotective or alleviating effect by inhibiting DNA damage.

제3항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물이 DNA 손상을 저해함으로써 폐섬유화 예방 또는 치료 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 3, wherein the compound of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, exhibits pulmonary fibrosis prophylaxis or therapeutic effect by inhibiting DNA damage.