KR101976043B1 - Method for Producing Leaf Hyponasty Phenotype Plant Using AS1 Gene - Google Patents

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Abstract

본 발명은 AS1 유전자를 이용하여 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 광신호전달에 관여하는 AS1 단백질을 과발현시켜 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 AS1을 과발현시켜 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체는 좁은 공간에서 보다 많은 식물체의 재배가 가능할 뿐 아니라, 광주기 조절을 통해 AS1의 발현을 보다 증가시킬 수 있으므로, 작물 생산량을 증대시킬 수 있는 효과가 있다.The present invention relates to a method for producing a plant in which a leaf hyponosis phenotype is induced using an AS1 gene, and more particularly, to a method for producing a plant in which a leaf hyponosis phenotype is induced by overexpressing an AS1 protein involved in optical signal transmission . As a result of overexpression of AS1 according to the present invention, a plant in which a leaf hyponosis phenotype is induced can grow more plants in a narrow space and can further increase the expression of AS1 through photoperiodic regulation, There is an effect.

Description

AS1 유전자를 이용한 잎 하이포내스티 (hyponasty) 표현형이 유도된 식물체의 제조방법 {Method for Producing Leaf Hyponasty Phenotype Plant Using AS1 Gene}FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a method for producing a hyponasty phenotype of a leaf hypoxia using an AS1 gene,

본 발명은 AS1 (asymmetric leaf 1) 유전자를 이용하여 잎 하이포내스티 (hyponasty) 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 광신호전달에 관여하는 AS1 단백질을 과발현시켜 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체의 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method for producing a hyponasty phenotype induced by an asymmetric leaf 1 (AS1) gene. More particularly, the present invention relates to a method for overexpressing an AS1 protein involved in optical signal transduction, And a method for producing the induced plant.

2025년까지 80억명에 달할 것으로 예상되는 빠르게 성장하는 전세계 인구를 뒷받침하기 위하여 (Sakamoto and Matsuoka, 2004), 식량 생산 증가 및 곡물 생산성 향상이 요구되고 있다. 고등 식물에서, 녹색 잎은 광합성을 하지 않는 저장 조직으로 전달되는 당을 합성하는 광합성을 하는 공급 조직으로써 기능한다. 저장 조직은 전달된 당을 탄소와 에너지원으로 이용한다. 결과적으로, 잎에서의 광합성 및 탄소 대사는 식물 공급 능력 및 생산성의 결정인자인 것으로 여겨지고 있다.To support the rapidly growing global population expected to reach 8 billion by 2025 (Sakamoto and Matsuoka, 2004), increased food production and improved grain productivity are required. In higher plants, green leaves function as a photosynthetic feeding organism that synthesizes sugars that are transported to non-photosynthetic storage tissues. Storage tissues use the transferred sugars as carbon and energy sources. As a result, photosynthesis and carbon metabolism in the leaves are thought to be determinants of plant availability and productivity.

이와 관련하여, 잎에서 주된 탄소 대사에 관여하는 대사 유전자의 조작을 통한 식물 공급 능력을 향상시키고자 하는 많은 연구가 있어 왔다. 시아노박테리아 유전자를 담배 식물체에 도입하여 그들의 광합성 능력을 향상시킨 예가 보고된 바 있다 (Miyagawa et al., 2001). In this regard, there have been many studies to improve the ability of plants to manipulate metabolic genes involved in the main carbon metabolism of leaves. It has been reported that cyanobacteria genes are introduced into tobacco plants to improve their photosynthesis capacity (Miyagawa et al., 2001).

또한, 잎 하이포내스티 (hyponasty)는 식물들 간의 빛에 대한 경쟁을 감소시켜 좁은 공간에 보다 많은 식물체 재배를 가능하게 하여 작물 생산량을 늘릴 수 있는 중요한 형질이다. 잎 hyponasty는 청색광, 적색광/원적색광의 비율, 식물호르몬인 옥신 또는 지베렐린 (GA) 및 에틸렌 등에 의해 유도되는 것으로 알려져 있다 (Polko et al., AoB Plants, doi:10.1093/aobpla/plr031, 2011; Pierik and Wik, J. Exp. Bot. 65:2815-2824, 2014).In addition, leaf hyponasty is an important trait to increase crop production by reducing competition for light between plants, allowing more plants to grow in a narrow space. Leaf hyponasty is known to be induced by the ratio of blue light, red light / red light, plant hormone auxin or gibberellin (GA) and ethylene (Polko et al. , AoB Plants , doi: 10.1093 / aobpla / plr031, 2011; Pierik and Wik, J. Exp. Bot., 65: 2815-2824, 2014).

한편, 애기장대에서 잎 발달에 관여하는 유전자인 AS1 (Asymmetric Leaf1)는 지베렐린 생합성을 촉진하는 것으로도 알려져 있으며 (Hay and Tsiantis, Development, 137:3153-3165, 2010), 광주기에 의한 개화조절에 중요한 기능을 수행한다고 보고되어 있다 (Song et al., Plant J. 69:332-342, 2012). 또한, AS1은 주로 핵 내에서 발견된다 (Iwakawa et al., Plant Cell Physiol . 43:467-478, 2002; Ueno et al., Arabidopsis . Plant Cell, 19, 445-457, 2007).Asymmetric Leaf1, a gene involved in leaf development in Arabidopsis thaliana, is also known to promote gibberellin biosynthesis (Hay and Tsiantis, Development , 137: 3153-3165, 2010) (Song et al. , Plant J. 69: 332-342, 2012). In addition, AS1 is mainly found in the nucleus (Iwakawa et al., Plant Cell Physiol . 43: 467-478, 2002; Ueno et al., Arabidopsis . Plant Cell , 19, 445-457, 2007).

이에, 본 발명자들은 작물 생산량을 증대시킬 수 있는 잎 hyponasty 표현형이 유도된 형질전환 식물체를 제작하고자 예의 노력한 결과, AS1 유전자를 과발현시켜 식물체의 잎 hyponasty 표현형을 유도할 수 있고, AS1의 발현을 광주기 조절을 통해 증가시킬 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors have made intensive efforts to produce a transgenic plant in which a leaf hyponosis phenotype capable of increasing crop yield has been extensively studied. As a result, it has been shown that overexpression of the AS1 gene can induce leaf hyponosis phenotype of the plant, And the present invention has been completed.

본 발명의 목적은 식물체에 AS1 단백질을 과발현시켜 작물 생산량을 증가시킬 수 있는 주요 형질인 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제공하는데 있다.The object of the present invention is to provide a method for producing a plant inducing a leaf hyponosis phenotype, which is a major trait capable of increasing crop yield by overexpressing an AS1 protein in a plant, and a plant in which a leaf hyponasty phenotype produced by the above method is induced have.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 식물체에 애기장대 유래 AS1을 암호화하는 유전자를 과발현시키는 단계를 포함하는 식물체의 잎 hyponasty 표현형을 유도하는 방법을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a method for inducing leaf hyponasty phenotype of a plant comprising overexpressing a gene encoding Arabidopsis thaliana AS1 in a plant.

본 발명은 또한, 애기장대 유래 AS1을 암호화하는 유전자를 식물세포에 도입하는 단계; 및 상기 식물세포로부터 식물을 재분화하는 단계를 포함하는 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법을 제공한다.The present invention further provides a method for producing a plant cell, comprising the steps of: introducing a gene encoding Arabidopsis thaliana AS1 into a plant cell; And regenerating the plant from the plant cell. The present invention also provides a method for producing a plant derived from a leaf hyponasty phenotype.

본 발명은 또한, 상기 방법에 의해 제조된 잎 hyponasty 표현형이 유도된 형질전환 식물체를 제공한다.The present invention also provides a transgenic plant in which the leaf hyponasty phenotype produced by the above method is induced.

본 발명에 따른 AS1을 과발현시켜 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체는 좁은 공간에서 보다 많은 식물체의 재배가 가능할 뿐 아니라, 광주기 조절을 통해 AS1의 발현을 보다 증가시킬 수 있으므로, 작물 생산량을 증대시킬 수 있는 효과가 있다.As a result of overexpression of AS1 according to the present invention, a plant in which a leaf hyponosis phenotype is induced can grow more plants in a narrow space and can further increase the expression of AS1 through photoperiodic regulation, There is an effect.

도 1은 AS1 과발현 식물체의 hyponasty 표현형을 보여주는 것이다.
도 2는 다양한 광에 대한 AS1 단백질의 안정화를 비교한 것이다.
도 3은 광주기 변화에 따른 AS1 단백질의 발현 양상을 나타낸 것이다.
도 4는 적색광 조사 정도에 따른 AS1의 하배축 신장 조절 기능을 확인한 것이다.Figure 1 shows the hyponasty phenotype of AS1 overexpressing plants.
Figure 2 compares the stabilization of the AS1 protein for various light.
Fig. 3 shows the expression pattern of AS1 protein according to the photoperiod changes.
FIG. 4 is a graph showing a control function of hypocotyl stretching of AS1 according to the degree of red light irradiation.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In general, the nomenclature used herein is well known and commonly used in the art.

본 발명에서는 청색광, 적색광/원적색광의 비율, 식물호르몬 옥신 및 지베렐린 등에 의해 유도되는 것으로 알려진 잎 아리포내스티 (hyponasty) 표현형이 AS1 (asymmetric leaf 1) 과발현체에서 유도되는 것을 확인하였다. 본 발명의 일 실시예에서는 AS1 과발현체인 pSUC2:AS1-HA와 야생형 애기장대 (Arabidopsis)를 일반적인 장일조건에서 생육 후, 백색광, 적색광, 원적색광, 청색광 조건에서 3일간 배양 후 표현형 변화를 비교한 결과, 두 식물체의 표현형은 백색광과 적색광에서는 뚜렷한 차이가 나지만 원적색광과 청색광에서는 큰 차이가 나지 않는 것을 확인하였다. 이는 AS1 단백질이 원적색광 및 청색광에 의해 안정화되고, 그 결과 잎 hyponasty를 유도하는 것으로 추측할 수 있다. 즉, AS1은 광주기에 의한 개화조절에 중요한 기능을 수행하므로, AS1이 광신호전달에 관련되어 있음을 알 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명에서는 as1 돌연변이를 다양한 광에 노출시켜 하배축 길이 변화를 측정한 결과, 적색광에서 하배축이 신장되어 있음을 발견하였는데 이는 AS1 단백질이 광신호전달에서 중요한 역할을 수행함을 의미한다. 이러한 결과는 AS1 단백질을 주요 작물에 형질전환시켜 잎 hyponasty를 유도한다면 작물 생산량을 증가시킬 것으로 예상할 수 있다.In the present invention, it was confirmed that a leaf hypocotyledonous strain known to be induced by the ratio of blue light, red light / red light, plant hormone auxin and gibberellin is induced in AS1 (asymmetric leaf 1) overexpressor. In one embodiment of the present invention, pSUC2: AS1-HA, which is an overexpressed AS1-HA, and Arabidopsis were cultured under general daylight conditions and then phenotypic changes were observed after culturing for 3 days under the conditions of white light, red light, red light and blue light , Phenotypes of the two plants differ markedly in white light and red light but not in red light and blue light. It can be assumed that the AS1 protein is stabilized by the primary red light and the blue light, resulting in leaf hyponasty. That is, since AS1 performs an important function for regulation of flowering by light period, AS1 is related to optical signal transmission. In addition, in the present invention, when the as1 mutation was exposed to various light to measure the hypocotyl length change, it was found that the hypocotyl was extended in the red light, which means that the AS1 protein plays an important role in the optical signal transmission. These results suggest that if the AS1 protein is transfected into major crops to induce leaf hyponasty, the crop yield will be increased.

따라서, 본 발명은 일 관점에서, 식물체에 애기장대 유래 AS1을 암호화하는 유전자를 과발현시키는 단계를 포함하는 식물체의 잎 hyponasty 표현형을 유도하는 방법에 관한 것이다.Accordingly, the present invention, in one aspect, relates to a method for inducing leaf hyponasty phenotype of a plant comprising overexpressing a gene encoding Arabidopsis thaliana AS1 in plants.

본 발명은 다른 관점에서, 애기장대 유래 AS1을 암호화하는 유전자를 식물세포로 도입하는 단계; 및 상기 식물세포로부터 식물을 재분화하는 단계를 포함하는 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법에 관한 것이다.In another aspect, the present invention provides a method for producing a plant cell, comprising the steps of: introducing a gene encoding Arabidopsis thaliana AS1 into a plant cell; And regenerating the plant from the plant cell. The present invention also relates to a method for producing a plant derived from a leaf hyponasty phenotype.

본 발명에 있어서, 상기 방법은 원적색광 또는 청색광을 조사하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the method may further include the step of irradiating primary red light or blue light.

본 발명에 있어서, 상기 AS1은 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the AS1 is preferably represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 AS1의 범위는 애기장대 (Arabidopsis thaliana)로부터 분리된 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다. "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.The range of AS1 according to the present invention includes proteins having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 isolated from Arabidopsis thaliana and functional equivalents of the proteins. Is at least 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, still more preferably 90% or more, more preferably 90% or more, Is not limited to, but has a sequence homology of 95% or more.

본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 애기장대 유래 AS1을 암호화하는 유전자를 식물체에 도입하고 과발현시켜 잎 hyponasty 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법에 의해 제조된 잎 hyponasty 표현형이 유도된 형질전환 식물체에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a transgenic plant derived from a leaf hyponosis phenotype produced by a method of introducing and overexpressing a gene encoding the Arabidopsis thaliana AS1 gene into a plant to produce a leaf hyponasty phenotype-induced plant will be.

본 발명에 있어서, 상기 식물체로는 쌍자엽 식물 또는 단자엽 식물일 수 있다. 쌍자엽 식물의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 애기장대, 가지, 담배, 고추, 토마토, 우엉, 쑥갓, 상추, 도라지, 시금치, 근대, 고구마, 샐러리, 당근, 미나리, 파슬리, 배추, 양배추, 갓무, 수박, 참외, 오이 호박, 박, 딸기, 대두, 녹두, 강낭콩 및 완두가 있다. 단자엽 식물의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 벼, 보리, 밀 그리고 옥수수가 있다. 상기 식물체는 바람직하게는 애기장대(Arabidopsis thaliana)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the plant may be a dicotyledonous plant or a monocotyledonous plant. Examples of dicotyledonous plants include, but are not limited to, Arabidopsis thaliana, eggplant, cigarette, red pepper, tomato, burdock, ciliaceae, lettuce, bellflower, spinach, modern sweet potato, celery, carrot, parsley, parsley, cabbage, cabbage, Watermelon, melon, cucumber pumpkin, pak, strawberry, soybean, mung bean, kidney bean and pea. Examples of monocotyledonous plants include, but are not limited to, rice, barley, wheat, and corn. The plant may be, but is not limited to, Arabidopsis thaliana.

본 발명의 잎 하이포내스티 (hyponasty)는 "하편 생장(下偏生長)" 또는 "하위 생장성"을 말하며, 잎 밑면의 생장이 윗면보다 왕성하여 식물이 잎이 지면과 수평이 아닌 상향의 배열을 가지는 표현형을 의미한다. 잎 하이포내스티는 (hyponasty) 잎몸 (leaf blades) 및 잎자루 (leaf petioles) 에 의해 유도된다.The leaf hyponasty of the present invention refers to "undergrowth" or "subgrowth", and the growth of the underside of the leaf is greater than that of the upper surface, ≪ / RTI > Leaf hypoesthesia is induced by hyponasty leaf blades and leaf petioles.

식물의 형질전환은 DNA를 식물에 전이시키는 임의의 방법을 의미한다. 그러한 형질전환 방법은 반드시 재생 및(또는) 조직 배양기간을 가질 필요는 없다. 식물 종의 형질전환은 이제는 쌍자엽 식물뿐만 아니라 단자엽 식물 양자를 포함한 식물 종에 대해 일반적이다. 원칙적으로, 임의의 형질전환 방법은 본 발명에 따른 잡종 DNA를 적당한 선조 세포로 도입시키는데 이용될 수 있다. 방법은 원형질체에 대한 칼슘/폴리에틸렌 글리콜 방법 (Krens, F.A. et al., 1982, Nature 296, 72-74; Negrutiu I. et al., June 1987, Plant Mol. Biol. 8, 363-373), 원형질체의 전기천공법 (Shillito R.D. et al., 1985 Bio/Technol. 3, 1099-1102), 식물 요소로의 현미주사법(Crossway A. et al., 1986, Mol. Gen. Genet. 202, 179-185), 각종 식물 요소의 (DNA 또는 RNA-코팅된) 입자충격법(Klein T.M. et al., 1987, Nature 327, 70), 식물의 침윤 또는 성숙 화분 또는 소포자의 형질전환에 의한 아그로박테리움 투머파시엔스 매개된 유전자 전이에서 (비완전성) 바이러스에 의한 감염(EP 0 301 316호) 등으로부터 적당하게 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 바람직한 방법은 아그로박테리움 매개된 DNA 전달을 포함한다. 특히 바람직한 것은 EP A 120 516호 및 미국 특허 제4,940,838호에 기재된 바와 같은 소위 이원 벡터 기술을 이용하는 것이다.Transformation of a plant means any method of transferring DNA to a plant. Such transformation methods do not necessarily have a regeneration and / or tissue culture period. Transformation of plant species is now common for plant species, including both terminal plants as well as dicotyledonous plants. In principle, any transformation method can be used to introduce the hybrid DNA according to the present invention into suitable progenitor cells. The method is based on the calcium / polyethylene glycol method for protoplasts (Krens, FA et al., 1982, Nature 296, 72-74; Negrutiu I. et al., June 1987, Plant Mol. Biol. 8, 363-373) (Shillito RD et al., 1985 Bio / Technol. 3, 1099-1102), microinjection into plant elements (Crossway A. et al., 1986, Mol. Gen. Genet. 202,179-185 (Klein et al., 1987, Nature 327, 70), the infiltration of plants or the transformation of mature pollen or vesicles into Agrobacterium tumefaciens Infection by viruses (non-integrative) in virus-mediated gene transfer (EP 0 301 316), and the like. A preferred method according to the present invention comprises Agrobacterium mediated DNA delivery. Particularly preferred is the use of so-called binary vector techniques as described in EP A 120 516 and U.S. Pat. No. 4,940,838.

본 발명의 방법은 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 형질전환은 예를 들면, 아그로박테리움 튜머파시엔스(Agrobacterium tumefiaciens)에 의해 매개될 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 상기 형질전환된 식물 세포로부터 형질전환 식물을 재분화하는 단계를 포함한다. 형질전환 식물 세포로부터 형질전환 식물을 재분화하는 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다.The method of the present invention may comprise the step of transforming a plant cell with a recombinant vector. The transformation may be mediated, for example, by Agrobacterium tumefaciens. In addition, the method of the present invention comprises regenerating a transgenic plant from the transformed plant cell. Any of the methods known in the art can be used for regeneration of transgenic plants from transgenic plant cells.

형질전환된 식물세포는 전식물로 재분화되어야 한다. 캘러스 또는 원형질체 배양으로부터 성숙한 식물의 재분화를 위한 기술은 수많은 여러 가지 종에 대해서 당업계에 주지되어 있다(Handbook of Plant Cell Culture, 1-5권, 1983-1989 Momillan, N.Y.).Transformed plant cells must be regenerated into whole plants. Techniques for the regeneration of mature plants from callus or protoplast cultures are well known in the art for a number of different species (Handbook of Plant Cell Culture, Vol. 1-5, 1983-1989, Momillan, N. Y.).

본 발명의 용어 "재조합"은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하거나 또는 펩티드, 이종의 펩티드 또는 이종의 핵산에 의해 암호된 단백질을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다. 재조합 세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는 유전자 또는 유전자 절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한 재조합 세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는 유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기 유전자는 변형된 것으로서 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.The term " recombinant " of the present invention refers to a cell in which a cell replicates a heterologous nucleic acid, expresses the nucleic acid, or expresses a protein encoded by a peptide, heterologous peptide or heterologous nucleic acid. The recombinant cell can express a gene or a gene fragment that is not found in the natural form of the cell in one of the sense or antisense form. In addition, the recombinant cell can express a gene found in a cell in its natural state, but the gene has been modified and reintroduced intracellularly by an artificial means.

본 발명에서, 상기 AS1을 암호화하는 유전자 서열은 재조합 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다. 용어 "재조합 발현 벡터"는 세균 플라스미드, 파아지, 효모 플라스미드, 식물 세포 바이러스, 포유동물 세포 바이러스, 또는 다른 벡터를 의미한다. 대체로, 임의의 플라스미드 및 벡터는 숙주 내에서 복제 및 안정화할 수 있다면 사용될 수 있다. 상기 발현 벡터의 중요한 특성은 복제 원점, 프로모터, 마커 유전자 및 번역 조절 요소(translation control element)를 가지는 것이다.In the present invention, the gene sequence encoding the AS1 can be inserted into a recombinant expression vector. The term " recombinant expression vector " means a bacterial plasmid, a phage, a yeast plasmid, a plant cell virus, a mammalian cell virus, or other vector. In principle, any plasmid and vector can be used if it can replicate and stabilize within the host. An important characteristic of the expression vector is that it has a replication origin, a promoter, a marker gene and a translation control element.

AS1 유전자 서열 및 적당한 전사/번역 조절 신호를 포함하는 발현 벡터는 당업자에 주지된 방법에 의해 구축될 수 있다. 상기 방법은 시험관 내 재조합 DNA 기술, DNA 합성 기술 및 생체 내 재조합 기술 등을 포함한다.Expression vectors comprising AS1 gene sequences and appropriate transcription / translation control signals can be constructed by methods known to those skilled in the art. Such methods include in vitro recombinant DNA technology, DNA synthesis techniques, and in vivo recombination techniques.

상기 DNA 서열은 mRNA 합성을 이끌기 위해 발현 벡터 내의 적당한 프로모터에 효과적으로 연결될 수 있다. 또한 발현 벡터는 번역 개시 부위로서 리보좀 결합 부위 및 전사 터미네이터를 포함할 수 있다.The DNA sequence can be effectively linked to appropriate promoters in the expression vector to drive mRNA synthesis. The expression vector may also include a ribosome binding site and a transcription terminator as a translation initiation site.

본 발명의 재조합 벡터의 바람직한 예는 아그로박테리움 투머파시엔스와 같은 적당한 숙주에 존재할 때 그 자체의 일부, 소위 T-영역을 식물 세포로 전이시킬 수 있는 Ti-플라스미드 벡터이다. 다른 유형의 Ti-플라스미드 벡터 (EP 0 116 718 B1호 참조)는 현재 식물 세포, 또는 잡종 DNA를 식물의 게놈 내에 적당하게 삽입시키는 새로운 식물이 생산될 수 있는 원형질체로 잡종 DNA 서열을 전이시키는데 이용되고 있다. Ti-플라스미드 벡터의 특히 바람직한 형태는 EP 0 120 516 B1호 및 미국 특허 제4,940,838호에 청구된 바와 같은 소위 바이너리(binary) 벡터이다. 본 발명에 따른 DNA를 식물 숙주에 도입시키는데 이용될 수 있는 다른 적합한 벡터는 이중 가닥 식물 바이러스(예를 들면, CaMV) 및 단일 가닥 바이러스, 게미니 바이러스 등으로부터 유래될 수 있는 것과 같은 바이러스 벡터, 예를 들면 비완전성 식물 바이러스 벡터로부터 선택될 수 있다. 그러한 벡터의 사용은 특히 식물 숙주를 적당하게 형질전환하는 것이 어려울 때 유리할 수 있다.A preferred example of the recombinant vector of the present invention is a Ti-plasmid vector capable of transferring a so-called T-region to a plant cell when present in a suitable host, such as Agrobacterium tumefaciens. Other types of Ti-plasmid vectors (see EP 0 116 718 B1) are currently used to transfer hybrid DNA sequences to plant cells or protoplasts in which new plants capable of properly inserting hybrid DNA into the plant's genome can be produced have. A particularly preferred form of the Ti-plasmid vector is a so-called binary vector as claimed in EP 0 120 516 B1 and U.S. Patent No. 4,940,838. Other suitable vectors that can be used to introduce the DNA according to the invention into the plant host include viral vectors such as those that can be derived from double-stranded plant viruses (e. G., CaMV) and single- For example, from non -complete plant virus vectors. The use of such vectors may be particularly advantageous when it is difficult to transform the plant host properly.

발현 벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 것이다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질전환된 세포를 비형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당된다. 그 예로는 글리포세이트(glyphosate) 또는 포스피노트리신(phosphinothricin)과 같은 제초제 저항성 유전자, 카나마이신(kanamycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The expression vector will preferably comprise one or more selectable markers. The marker is typically a nucleic acid sequence having a property that can be selected by a chemical method, and includes all genes capable of distinguishing a transformed cell from a non-transformed cell. Examples include herbicide resistance genes such as glyphosate or phosphinothricin, antibiotics such as kanamycin, G418, Bleomycin, hygromycin, chloramphenicol, Resistant genes, but are not limited thereto.

본 발명의 재조합 벡터에서, 프로모터는 CaMV 35S, 액틴, 유비퀴틴, pEMU, MAS, SUC2 (애기장대 sucrose transporter 2) 또는 히스톤 프로모터일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. "프로모터"란 용어는 구조 유전자로부터의 DNA 업스트림의 영역을 의미하며 전사를 개시하기 위하여 RNA 폴리머라아제가 결합하는 DNA 분자를 말한다. "식물 프로모터"는 식물 세포에서 전사를 개시할 수 있는 프로모터이다. "지속적(constitutive) 프로모터"는 대부분의 환경 조건 및 발달 상태 또는 세포 분화하에서 활성이 있는 프로모터이다. 형질전환체의 선택이 각종 단계에서 각종 조직에 의해서 이루어질 수 있기 때문에 지속적 프로모터가 본 발명에서 바람직할 수 있다. 따라서, 지속적 프로모터는 선택 가능성을 제한하지 않는다.In the recombinant vector of the present invention, the promoter may be CaMV 35S, actin, ubiquitin, pEMU, MAS, SUC2 (Arabidopsis sucrose transporter 2) or a histone promoter, but is not limited thereto. The term " promoter " refers to the region of DNA upstream from the structural gene and refers to a DNA molecule to which an RNA polymerase binds to initiate transcription. A " plant promoter " is a promoter capable of initiating transcription in plant cells. A " constitutive promoter " is a promoter that is active under most environmental conditions and developmental status or cell differentiation. A continuous promoter may be preferred in the present invention, since the choice of transformants can be made by various tissues at various stages. Thus, a persistent promoter does not limit selectivity.

본 발명의 재조합 벡터에서, 통상의 터미네이터를 사용할 수 있으며, 그 예로는 노팔린 신타아제(NOS), 벼 α-아밀라아제 RAmy1 A 터미네이터, 파세올린(phaseoline) 터미네이터, 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)의 옥토파인(Octopine) 유전자의 터미네이터 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 터미네이터의 필요성에 관하여, 그러한 영역이 식물 세포에서의 전사의 확실성 및 효율을 증가시키는 것으로 일반적으로 알려져 있다. In the recombinant vector of the present invention, conventional terminators can be used. Examples thereof include nopaline synthase (NOS), rice α-amylase RAmy1 A terminator, phaseoline terminator, Agrobacterium tumefaciens (Agrobacterium tumefaciens ) Octopine gene terminator, but the present invention is not limited thereto. Regarding the need for terminators, it is generally known that such regions increase the certainty and efficiency of transcription in plant cells.

[실시예][Example]

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for illustrating the present invention and that the scope of the present invention is not construed as being limited by these embodiments.

실시예Example 1: AS1 과발현에 의한 식물체의  1: expression of AS1 overexpressed plant hyponastyhyponasty 표현형 유도 Induction of phenotype

애기장대의 야생형과 AS1 과발현 식물체 pSUC2:AS1 -HA (Song et al., Plant J. 69:332-342, 2012)를 장일조건 (광주기: 낮 16시간/밤 8시간, 온도: 22℃, 빛 세기: 약 80 μmol·m-2·S-1의 white light)에서 10일간 생육 후, 3일 동안 백색광 (white, 빛 세기: 약 80 μmol·m-2·S-1), 적색광 (red, 파장: 660 nm, 빛 세기: 약 30 μmol·m-2·S-1), 원적색광 (far-red, 파장: 730 nm, 빛 세기: 약 10 μmol·m-2·S-1) 및 청색광 (blue light, 파장: 450 nm, 빛 세기: 약 30 μmol·m-2·S-1)을 각각 낮에만 처리하였다.(Day 16 hours / night 8 hours, temperature 22 [deg.] C), and the AS1 overexpressed plant pSUC2: AS1- HA (Song et al. , Plant J. 69: 332-342, 2012) (Light intensity: about 80 μmol · m -2 · S -1 white light) for 10 days after growth for 3 days, white light (about 80 μmol · m -2 · S -1 ) and red light , wavelength: 660 nm, light intensity: approx. 30 μmol · m -2 · S -1 ), the red light source (far-red, wavelength: 730 nm, light intensity: approx. 10 μmol · m -2 · S -1 ) and Blue light (wavelength: 450 nm, light intensity: about 30 μmol · m -2 · S -1 ) was treated only during daytime.

그 결과, 야생형 (WT)과 비교했을 때 AS1 과발현체인 pSUC2:AS1 -HA는 백색광 및 적색광 조건에서 잎 hyponasty 표현형을 보였다 (도 1). 또한 원적색광 및 청색광에서는 야생형에서도 약간의 잎 hyponasty 표현형이 유도되었다. 이는 원적색광 및 청색광에 의해 애기장대 야생형의 잎 hyponasty 표현형이 유도되는 것을 의미하며, 즉 AS1 단백질이 광에 의해 조절되고 있음을 알 수 있다.As a result, AS1 overexpression pSUC2: AS1- HA showed a leaf hyponasty phenotype when white light and red light conditions were compared with wild type (WT) (Fig. 1). In the red and blue light, some leaf hyponasty phenotype was also induced in the wild type. This means that the leaf hyponasty phenotype of Arabidopsis wild type is induced by the red and blue light, that is, AS1 protein is regulated by light.

잎 hyponasty 표현형은 식물호르몬인 옥신 또는 GA에 의해서도 유도되므로, AS1 과발현체에 옥신 및 GA 저해제를 처리하여 확인한 결과, AS1 과발현체서 잎 hyponasty 표현형이 유지되었다. 즉, AS1 과발현체의 잎 hyponasty 표현형은 식물호르몬에 의한 반응이 아닌 AS1 단백질에 의한 것임을 의미한다.Since the leaf hyponasty phenotype is also induced by the plant hormone auxin or GA, AS1 overexpression was treated with auxin and GA inhibitor. As a result, AS1 overexpression leaf hyponosis phenotype was maintained. That is, the leaf hyponasty phenotype of the AS1 overexpressant is due to the AS1 protein, not the plant hormone response.

실시예Example 2: 다양한 광에 대한 AS1 단백질의 변화 확인 2: Identification of AS1 protein changes in various light

AS1 과발현체 (35S:AS1 - GFP) 애기장대 (Song et al., Plant J. 69:332-342, 2012)를 0.5x MS salt (with vitamins)/ 2% sucrose/ 0.7% bacto agar 고체배지 위에서 10일간 장일조건으로 생육 후, 지속적으로 백색광 (W, white), 암처리 (D, dark), 적색광 (R, red), 원적색광 (Fr, far-red) 및 청색광 (B, blue light)을 16시간 및 24시간 처리 후 각 조건에서 식물전체를 약 200 개체씩 샘플링 하였다. 그 다음 식물체를 액체질소에 파쇄하고 핵단백질을 추출하여 약 50 μg의 핵단백질을 12% 아크릴아마이드 SDS 겔에 로딩하여 웨스턴 블롯을 실시하였다. 초록색형광단백질 GFP 표지가 융합되어 있는 AS1 단백질은 GFP 항체를 이용하여 확인하였으며, 각 조건마다 동일한 양의 단백질을 사용했는지를 판정하기 위해 internal control로 사용된 Histone H3 단백질은 Histone H3 자체 항체를 이용하여 확인하였다.AS1 overexpression ( 35S: AS1 - GFP ) Arabidopsis thaliana (Song et al. , Plant J. 69: 332-342, 2012) was suspended in 0.5x MS salt (with vitamins) / 2% sucrose / 0.7% bacto agar solid medium (W, white), cancer treatment (D, dark), red light (R, red), far-red light (Fr, far-red) and blue light (B, blue light) After the treatment for 24 hours, approximately 200 whole plants were sampled under each condition. Next, the plant was disrupted in liquid nitrogen, and the nuclear protein was extracted, and about 50 μg of the nuclear protein was loaded on a 12% acrylamide SDS gel to perform Western blotting. The AS1 protein fused with the green fluorescent protein GFP tag was identified using GFP antibody and the Histone H3 protein used as an internal control was used to determine whether the same amount of protein was used under each condition using Histone H3 self- Respectively.

그 결과, AS1 단백질이 원적색광 및 청색광에서 안정화되어 있음을 확인하였다 (도 2). 이는 원적색광 및 청색광 조건에서 아생형 애기장대가 잎 hyponasty 표현형을 나타내는 도 1의 결과와 일치하며, 이러한 결과는 원적색광 및 청색광에서 AS1 단백질 양이 증가하는 것에 기인한다. 다만, 도 1에서 AS1 과발현체인 pSUC2:AS1 -HA의 잎 hyponasty가 원적색광 및 청색광에서 야생형과 큰 차이가 없는 것은 AS1 단백질의 AS1 단백질의 양적 증가가 잎 hyponasty를 직접 유도하는 원인임을 의미하는 것이다.As a result, it was confirmed that the AS1 protein was stabilized in the primary red light and the blue light (Fig. 2). This is in agreement with the results of FIG. 1 showing the leaf hyponasty phenotype in wild-type and blue light conditions, and this result is due to the increase in the amount of AS1 protein in the primary red and blue light. However, in Fig. 1, the AS1 overexpression chain pSUC2: AS1- HA leaf The absence of significant difference in hyponasty between wild type and red light and blue light indicates that the quantitative increase of AS1 protein in AS1 protein is the direct cause of leaf hyponasty.

실시예Example 3: 광주기 변화에 따른 AS1 단백질의 발현 확인 3: Expression of AS1 protein by photoperiod changes

AS1 단백질의 광반응성을 살펴보기 위해, AS1 유전자의 발현이 자체 프로모터에 의해 조절되는 형질전환체 (pAS1:AS1 -HA/ as1 -21) (Song et al., Plant J. 69:332-342, 2012)를 장일조건 (LD)에서 10일 그리고 단일조건 (SD, 광주기: 낮 8시간/밤 16시간, 온도: 22℃, 빛 세기: 약 80 μmol·m-2·S-1의 white light)에서 14일간 생육 후 샘플링 하였다. 조직 파쇄 후 핵단백질을 추출하고 약 50 μg의 핵단백질을 12% 아크릴아마이드 SDS 겔에 로딩하여 웨스턴 블롯을 실시하였다. HA 에피토프 표지가 융합된 AS1 단백질은 HA 항체로 확인하고 HA 항체에 의한 non-specific band들을 internal control로 사용하였다. In order to examine the photoreactivity of the AS1 protein, the transformant ( pAS1: AS1- HA / as1 -21 ) (Song et al. , Plant J. 69: 332-342), in which the expression of the AS1 gene is regulated by its own promoter, 2012) was irradiated with a white light of about 80 μmol · m -2 · S -1 at 10 days in long day condition (LD) and single condition (SD, light period: 8 hours / ) After 14 days of growth. After the tissue rupture, the nuclear protein was extracted and about 50 μg of the nuclear protein was loaded on a 12% acrylamide SDS gel to perform Western blotting. AS1 protein fused with HA epitope tag was identified as HA antibody and non-specific bands by HA antibody were used as internal control.

그 결과, 장일조건 (LD)에서 AS1 단백질은 낮과 밤에 큰 차이를 보이지 않는 반면 단일조건 (SD) 에서는 오전 (ZT 4)에 발현이 증가된 것을 확인하였다 (도 3). 이는 AS1 단백질의 발현이 광주기에 따라 다르게 조절됨을 의미한다.As a result, it was confirmed that expression of AS1 protein in day long condition (LD) was not significantly different between day and night, whereas expression in morning (ZT 4) was increased in single condition (SD) (FIG. This means that the expression of AS1 protein is regulated differently depending on the light period.

실시예Example 4: AS1 단백질의 광신호전달 기능 4: Optical signal transfer function of AS1 protein

AS1 단백질의 광신호전달 기능 유무를 검정하기 위해, as1 돌연변이체 (as1 -21) (Song et al., Plant J. 69:332-342, 2012)를 0.5x MS salt (with vitamins)/ 1% sucrose/ 0.7% bacto agar 고체배지 위에서 5일간 연속된 적색광을 처리하여 하배축 (hypocotyl) 길이 변화를 관찰하였다. 일반적으로 광을 처리하면 애기장대의 하배축 길이는 짧아지는데, 적색광 수용체인 phytochrome B의 돌연변이체 (phyB)는 적색광 처리에도 하배축 길이 변화가 매우 적은 편이므로 phyB를 대조군으로 사용하였다.In order to test whether the AS1 protein has an optical signal transfer function, as1 The mutant ( as1 -21 ) (Song et al. , Plant J. 69: 332-342, 2012) was incubated for 5 consecutive days with 0.5 x MS salt (with vitamins) / 1% sucrose / 0.7% bacto agar solid medium And hypocotyl length changes were observed. In general, processes the optical length of hypocotyl of Arabidopsis thaliana is makin shorter, mutant (phyB) of the red light receptor phytochrome B because it is a very small change in the length of hypocotyl piece was used for processing the red light phyB as a control.

그 결과, dark 상태 (빛 세기: 0 μmol·m-2·S- 1)에서는 야생형과 as1 돌연변이체의 하배축 길이에 차이가 없으나, 보다 더 강한 적색광 조사에 의해 야생형 (Col)에 비해 as1 돌연변이체의 하배축 길이가 짧아지는 것을 확인하였다 (도 4). 이는 AS1 단백질이 광신호전달에 관여하여 식물의 발달을 조절하고 있음을 의미한다.As a result, dark state: - compared to the (light intensity 0 μmol · m -2 · S 1 ) in the wild-type (Col), but by the difference between the wild type and hypocotyl length of the as1 mutant, stronger than the red light irradiation as1 mutant (Fig. 4). This means that the AS1 protein is involved in the optical signal transduction and regulates plant development.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the present invention is not limited thereto will be. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.

<110> AJOU UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Method for Producing Leaf Hyponasty Phenotype Plant Using AS1 Gene <130> P17-B248 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 367 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 1 Met Lys Glu Arg Gln Arg Trp Ser Gly Glu Glu Asp Ala Leu Leu Arg 1 5 10 15 Ala Tyr Val Arg Gln Phe Gly Pro Arg Glu Trp His Leu Val Ser Glu 20 25 30 Arg Met Asn Lys Pro Leu Asn Arg Asp Ala Lys Ser Cys Leu Glu Arg 35 40 45 Trp Lys Asn Tyr Leu Lys Pro Gly Ile Lys Lys Gly Ser Leu Thr Glu 50 55 60 Glu Glu Gln Arg Leu Val Ile Arg Leu Gln Glu Lys His Gly Asn Lys 65 70 75 80 Trp Lys Lys Ile Ala Ala Glu Val Pro Gly Arg Thr Ala Lys Arg Leu 85 90 95 Gly Lys Trp Trp Glu Val Phe Lys Glu Lys Gln Gln Arg Glu Glu Lys 100 105 110 Glu Ser Asn Lys Arg Val Glu Pro Ile Asp Glu Ser Lys Tyr Asp Arg 115 120 125 Ile Leu Glu Ser Phe Ala Glu Lys Leu Val Lys Glu Arg Ser Asn Val 130 135 140 Val Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Val Val Met Ala Asn Ser Asn 145 150 155 160 Gly Gly Phe Leu His Ser Glu Gln Gln Val Gln Pro Pro Asn Pro Val 165 170 175 Ile Pro Pro Trp Leu Ala Thr Ser Asn Asn Gly Asn Asn Val Val Ala 180 185 190 Arg Pro Pro Ser Val Thr Leu Thr Leu Ser Pro Ser Thr Val Ala Ala 195 200 205 Ala Ala Pro Gln Pro Pro Ile Pro Trp Leu Gln Gln Gln Gln Pro Glu 210 215 220 Arg Ala Glu Asn Gly Pro Gly Gly Leu Val Leu Gly Ser Met Met Pro 225 230 235 240 Ser Cys Ser Gly Ser Ser Glu Ser Val Phe Leu Ser Glu Leu Val Glu 245 250 255 Cys Cys Arg Glu Leu Glu Glu Gly His Arg Ala Trp Ala Asp His Lys 260 265 270 Lys Glu Ala Ala Trp Arg Leu Arg Arg Leu Glu Leu Gln Leu Glu Ser 275 280 285 Glu Lys Thr Cys Arg Gln Arg Glu Lys Met Glu Glu Ile Glu Ala Lys 290 295 300 Met Lys Ala Leu Arg Glu Glu Gln Lys Asn Ala Met Glu Lys Ile Glu 305 310 315 320 Gly Glu Tyr Arg Glu Gln Leu Val Gly Leu Arg Arg Asp Ala Glu Ala 325 330 335 Lys Asp Gln Lys Leu Ala Asp Gln Trp Thr Ser Arg His Ile Arg Leu 340 345 350 Thr Lys Phe Leu Glu Gln Gln Met Gly Cys Arg Leu Asp Arg Pro 355 360 365 <110> AJOU UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Method for Producing Leaf Hyponasty Phenotype Plant Using AS1          Gene <130> P17-B248 <160> 1 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 367 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 1 Met Lys Glu Arg Gln Arg Trp Ser Gly Glu Glu Asp Ala Leu Leu Arg   1 5 10 15 Ala Tyr Val Arg Gln Phe Gly Pro Arg Glu Trp His Leu Val Ser Glu              20 25 30 Arg Met Asn Lys Pro Leu Asn Arg Asp Ala Lys Ser Cys Leu Glu Arg          35 40 45 Trp Lys Asn Tyr Leu Lys Pro Gly Ile Lys Lys Gly Ser Leu Thr Glu      50 55 60 Glu Glu Gln Arg Leu Val Ile Arg Leu Gln Glu Lys His Gly Asn Lys  65 70 75 80 Trp Lys Lys Ile Ala Ala Glu Val Pro Gly Arg Thr Ala Lys Arg Leu                  85 90 95 Gly Lys Trp Trp Glu Val Phe Lys Glu Lys Gln Gln Arg Glu Glu Lys             100 105 110 Glu Ser Asn Lys Arg Val Glu Pro Ile Asp Glu Ser Lys Tyr Asp Arg         115 120 125 Ile Leu Glu Ser Phe Ala Glu Lys Leu Val Lys Glu Arg Ser Asn Val     130 135 140 Val Pro Ala Ala Ala Ala Thr Val Val Met Ala Asn Ser Asn 145 150 155 160 Gly Gly Phe Leu His Ser Glu Gln Gln Val Gln Pro Pro Asn Pro Val                 165 170 175 Ile Pro Pro Trp Leu Ala Thr Ser Asn Asn Gly Asn Asn Val Val Ala             180 185 190 Arg Pro Pro Ser Val Thr Leu Thr Leu Ser Pro Ser Thr Val Ala         195 200 205 Ala Ala Pro Gln Pro Pro Ile Pro Trp Leu Gln Gln Gln Gln Pro Glu     210 215 220 Arg Ala Glu Asn Gly Pro Gly Gly Leu Val Leu Gly Ser Met Met Pro 225 230 235 240 Ser Cys Ser Gly Ser Ser Glu Ser Val Phe Leu Ser Glu Leu Val Glu                 245 250 255 Cys Cys Arg Glu Leu Glu Glu Gly His Arg Ala Trp Ala Asp His Lys             260 265 270 Lys Glu Ala Ala Trp Arg Leu Arg Arg Leu Glu Leu Gln Leu Glu Ser         275 280 285 Glu Lys Thr Cys Arg Gln Arg Glu Lys Met Glu Glu Ile Glu Ala Lys     290 295 300 Met Lys Ala Leu Arg Glu Glu Gln Lys Asn Ala Met Glu Lys Ile Glu 305 310 315 320 Gly Glu Tyr Arg Glu Gln Leu Val Gly Leu Arg Arg Asp Ala Glu Ala                 325 330 335 Lys Asp Gln Lys Leu Ala Asp Gln Trp Thr Ser Arg His Ile Arg Leu             340 345 350 Thr Lys Phe Leu Glu Gln Gln Met Gly Cys Arg Leu Asp Arg Pro         355 360 365

Claims (8)

식물체에 애기장대 유래 AS1 (asymmetric leaf 1)인 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 암호화하는 유전자를 과발현시키는 단계를 포함하는 식물체의 잎 하이포내스티 (hyponasty) 표현형을 유도하는 방법.
1. A method for inducing a hyponasty phenotype in a leaf hypothermic plant comprising the step of overexpressing a gene encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, which is AS1 (asymmetric leaf 1), to a plant.
삭제delete 제1항에 있어서, 원적색광 또는 청색광을 조사하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
2. The method of claim 1, further comprising the step of irradiating primary red or blue light.
애기장대 유래 AS1 (asymmetric leaf 1)인 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 암호화하는 유전자를 식물세포에 도입하는 단계; 및
상기 식물세포로부터 식물을 재분화하는 단계를 포함하는 잎 하이포내스티 (hyponasty) 표현형이 유도된 식물체를 제조하는 방법.
Introducing into the plant cell a gene encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 which is Arabidopsis originated AS1 (asymmetric leaf 1); And
And regenerating the plant from the plant cell. &Lt; RTI ID = 0.0 &gt; 21. &lt; / RTI &gt;
삭제delete 제4항에 있어서, 상기 식물체에 원적색광 또는 청색광을 조사하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
5. The method according to claim 4, further comprising the step of irradiating the plant with a primary red light or a blue light.
제4항의 방법에 의해 제조된 잎 하이포내스티 (hyponasty) 표현형이 유도된 형질전환 식물체.
A transgenic plant wherein the hyponasty phenotype of the leaf hypo produced by the method of claim 4 is induced.
제7항에 있어서, 상기 식물체는 애기장대, 담배, 상추, 고추, 토마토, 콩, 배추, 벼, 보리, 밀 또는 옥수수인 것을 특징으로 하는 식물체.


8. The plant according to claim 7, wherein the plant is a Arabidopsis thaliana, a tobacco, a lettuce, a pepper, a tomato, a soybean, a cabbage, a rice, a barley, a wheat or a corn.


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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Plant and Cell Physiology. Vol. 51, No. 10, 페이지 1661-1673 (2010.)*

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