KR101951893B1

KR101951893B1 - 전통발효식품 유래의 프로바이오틱스활성 락토바실러스 파라카제이 srcm102343 균주의 고농도 제조 방법

Info

Publication number: KR101951893B1
Application number: KR1020180147967A
Authority: KR
Inventors: 김인; 박덕모; 김명찬; 이형규; 조성호; 박해석; 심상협
Original assignee: 주식회사 셀로닉스
Priority date: 2018-11-27
Filing date: 2018-11-27
Publication date: 2019-02-25

Abstract

본 발명은 최적 배지 조성물을 이용한 전통발효식품인 배추김치 유래의 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 배지 조성물을 이용하면, 프로바이오틱스 특징이 우수한 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343(KFCC11797P) 균주의 성장을 현저하게 증진시킬 수 있고, 이를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스를 제조할 수 있으므로, 본 발명의 배지 조성물 및 이를 이용한 배양 방법은 산업적으로 유용하게 이용될 수 있을 것이다.

Description

전통발효식품 유래의 프로바이오틱스활성 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주의 고농도 제조 방법{Method for producing high concentration of probiotic active Lactobacillus paracasei SRCM102343 strain derived from traditional fermented food}

본 발명은 최적 배지 조성물을 이용한 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법에 관한 것이다.

프로바이오틱스는 장내 해로운 세균 및 효모균의 성장 및 활동을 억제하고 적절하게 조절하는 기능뿐만 아니라 체내 면역기능을 향상시키므로 많은 관련 연구가 진행되어 왔고 다양한 형태의 제품으로 소비자에게 공급되고 있다. 최근에는 이러한 기능을 극대화하여 암을 포함한 다양한 질환 치료용 의약품 소재로 적용하기 위한 연구도 활발히 진행되고 있는 추세이다. 프로바이오틱스는 적당량의 섭취로 숙주(host)에게 생리학적으로 유익한 영향을 주는 살아있는 미생물로 정의되며, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 루테리(L. reuteri), 비피도박테리아(Bifidobacteria), 락토바실러스 카제이(L. casei), 락토바실러스 애시도필러스(L. acidophilus) 등 매우 다양하다. 프로바이오틱스는 섭취된 후, 위(pH 1~3), 소장(pH 6~7.5) 및 대장(pH 5~7)의 생리학적 환경을 견뎌야 하며, 장 내벽에 있는 미세융모에 부착하여 번식하면서 면역력 향상에 관계하는 대사물질의 생성을 도모한다. 이러한 기능성 프로바이오틱스는 강산성의 위산과 담즙산 환경에서 생존해야만 장 내에서 기능을 발휘하기 때문에 생존율이 매우 중요하며 이를 극복하기 위해 프로바이오틱스를 코팅(coating) 또는 미세캡슐화(micro-encapsulation)하여 보호하는 방법 등 다양한 연구가 세계적으로 활발히 진행 중이다. 현재 출시되고 있는 대부분의 프로바이오틱스 원료도 매트릭스 또는 미세 캡슐 형태로 보호재료에 감싸져서 공급되고 있고, 점점 그 효과에 대한 기술적인 기대 수준이 높아지고 있으나 불필요한 코팅재료의 섭취와 생산비용 증가를 고려하지 않을 수 없다. 코팅 방법 외에 원균 자체의 생존력이 강한 균주를 이용하는 것이 하나의 방법이 될 수 있으며, 이를 위해 수많은 프로바이오틱스 미생물을 각각 동정하고 기능성을 분석하여 선발하는 수고가 필수적으로 수반되지만 기능성 균주 확보를 위해서는 감수해야 한다.

지금까지 식품으로 허가된 프로바이오틱스 제품은 대부분 유제품 유래 동물성 유산균이 대부분이며, 고유의 기능성을 인증받은 약 10여 종의 동물성 유래 유산균이 균주별로 혼합된 제품이므로 기능성 다양화와 생존율 향상을 위한 최적 배합비 도출에는 한계가 있다. 그러므로 동물성에 비해 종류가 다양하고 기능성 및 생존율이 우수한 식물성 프로바이오틱스의 선호도가 증가하고 있고, 특히 식물성 유산균이 위산과 담즙산에 대한 저항력이 높아 장 부착능이 우수하다는 많은 연구결과도 발표되고 있다.

이러한 식물성 및 동물성 프로바이오틱스가 건강기능식품으로 사업화되기 위해서는 기능성 균주를 선발하고 대용량 고농도 배양기술을 확보하는 것이 중요하다. 고농도 배양을 위한 발효 및 공정 조건은 각 균주특이성에 의존하기 때문에 각각 다르며 생산 시스템 및 배양 환경 변화에 민감하므로 선정된 유산균주의 특성을 파악하여 최고 효율의 배양조건을 확립하는 것도 사업화에 매우 중요하다.

국내의 경우, 마늘, 고춧가루 등 다양한 종류와 성분의 양념이 혼합 및 함유된 우리 고유의 김치 및 장류에는 원래부터 염분이 많고 강산성 환경에서 서식하여 위나 소장의 산성 소화액에서도 생존력이 강한 살아있는 식물성 유산균이 존재하며, 이 식물성 유산균은 동물성 유산균 대비 생존력은 400배 이상이며 칼로리는 절반 이하라는 보고 자료도 있다. 특히, 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum), 락토바실러스 카제이(L. casei) 및 락토바실러스 파라카제이(L. paracasei)는 김치 및 절임에서 생식하는 대표적인 식물성 유산균에 속하며 위산과 담즙산 환경에서 높은 생존성과 항균 활성을 보이며 담즙산 분해, 혈중 콜레스테롤 수치 감소, 장 세포 보호, 대장염 및 과민성 대장증후군 억제, 면역력 증가 등의 효과로 동물성 유래 유산균보다 프로바이오틱 효과가 우수함이 확인되었다. 락토바실러스 파라카제이의 경우, 최근 항헬리코박터균의 기능이 확인되어 장에만 좋은 것이 아니라 위암 유발균 제거에도 효과적이라고 보고되었다. 하지만 현재까지 프로바이오틱스 시장의 주류는 유제품 유래 동물성 프로바이오틱스이며, 이에 비해 김치를 포함하는 전통발효식품 유래 식물성 유산균은 다양한 기능성으로 높은 상품화 가능성이 있음에도 불구하고 아직 상업화 속도는 매우 느린 수준이며 아울러 세계 시장에서 인정받고 있지 못하는 추세이다. 오히려 해외 유명 기업 및 연구소에서 우리나라의 김치를 포함하는 전통식품에 대한 프로바이오틱스 미생물 관련 연구가 활발히 진행 중인 추세를 고려하면 전통식품 유래 기능성 프로바이오틱 균주를 선발하고 이를 제품화하는 기술 확보가 시급한 실정이다. 더 나아가 국내외 소비자의 건강 증진에도 많은 기여를 할 수 있을 것으로 기대된다.

한편, 한국등록특허 제0467806호에는 '제지 슬러지를 이용하여 락토바실러스 파라카제이 KLB58 균주를 대량으로 생산하는 방법'에 대해 개시하고 있고, 한국등록특허 제1737812호에는 '락토바실루스 살리바리우스 LDTM7701(KCTC18437P) 신균주 맞춤형 최적 배지조성물 및 이를 이용한 배양 방법'에 대해 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 '최적 배지 조성물을 이용한 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법'에 대해 아직까지 개시된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 김치에서 분리한 식물성 프로바이오틱스 특징이 우수한 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주(KFCC11797P)를 배지 조성 및 배양 조건을 다양하게 실험한 결과, SRCM102343 균주의 성장이 현저하게 증진되는 최적의 배지 조성을 확인하였고, 상기 배지 조성을 이용하여 배양한 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 기능성 프로바이오틱스를 제조함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 유효성분으로 포도당·1수화물(C₆H₁₂O₆·H₂O), 효모 추출물(Yeast extract), 황산망간·1수화물(MnSO₄·H₂O), 황산마그네슘·7수화물(MgSO₄·7H₂O), 인산이암모늄((NH₄)₂HPO₄)을 포함하는, 기탁번호가 KFCC11797P인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주의 성장을 증진시키기 위한 배지 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 배지 조성물을 이용하여 제조한 액체 배지를 제공한다.

또한, 본 발명은 1) 기탁번호가 KFCC11797P인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주를 제3항의 액체 배지를 이용하여 배양하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 균주 배양액을 원심분리한 후, 획득한 균주 응집체 100 중량부에 대하여 10~30 중량부의 동결보호제를 첨가하여 혼합하는 단계; 3) 상기 단계 2)의 균주 응집체 및 동결보호제의 혼합물을 진공동결건조하는 단계; 4) 상기 단계 3)의 진공동결건조한 균주 건조물을 분쇄하는 단계; 5) 상기 단계 4)의 분쇄된 균주 분말을 다른 유산균 균주의 건조 분말과 혼합하는 단계; 및 6) 상기 단계 5)의 혼합된 복합 유산균을 포장하는 단계;를 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 우수한 생존율과 장 부착능을 가지는 김치에서 분리된 신규한 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343(KFCC11797P) 균주의 고농도 생산방법을 제공함으로써 유산균 90%가 살아있는 상태로 장에 도달하여 대사물질 분비를 활성화시켜 장 기능 향상을 도모할 수 있는 고기능성 식물성 프로바이오틱스의 대용량 생산이 가능하게 되고, 이로써 국내외 소비자가 건강에 유익한 고농도의 프로바이오틱 유산균을 섭취로 건강향상에 일조할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 배지 조성물은 사용원료의 종류 및 함량을 최소화하고, 배양 시 필수적으로 사용되는 소포제 및 pH 조절제 등의 첨가제를 사용하지 않으므로 불필요한 성분의 섭취를 줄일 수 있고, 최종 생산물의 유산균 농도를 극대화할 수 있는 이점이 있다.

도 1은 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 대상으로 표 1과 같이 탄소원 및 질소원 함량을 변화시켜 제조한 배지에서 각각 배양한 후, 생균수를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 배양 온도를 변화시켜 배양한 후, 생균수를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 대상으로 표 2와 같이 기타 영양분 첨가에 따라 제조한 배지에서 배양한 후, 생균수를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 김치에서 분리한 신규한 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법에 대한 모식도이다.
도 5는 본 발명의 방법으로 제조된 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 고농도로 포함하는 프로바이오틱스의 유산균 건조 분말의 시험성적서이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 유효성분으로 포도당·1수화물(C₆H₁₂O₆·H₂O), 효모 추출물(Yeast extract), 황산망간·1수화물(MnSO₄·H₂O), 황산마그네슘·7수화물(MgSO₄·7H₂O), 인산이암모늄((NH₄)₂HPO₄)을 포함하는, 기탁번호가 KFCC11797P인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주의 성장을 증진시키기 위한 배지 조성물을 제공한다.

본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주는 전통발효식품인 김치로부터 분리되었고, 이를 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주로 동정하여 한국미생물보존센터에 2018년 10월 25일에 기탁하였다(기탁번호: KFCC11797P).

본 발명의 일 구현 예에 따른 배지 조성물에 있어서, 상기 유효성분은 바람직하게는, 배지 조성물 100 중량부에 대하여 0.4~0.6 중량부의 포도당·1수화물, 0.7~1.2 중량부의 효모 추출물, 0.04~0.06 중량부의 황산망간·1수화물, 0.05~0.15 중량부의 황산마그네슘·7수화물 및 0.1~0.3 중량부의 인산이암모늄을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 배지 조성물 100 중량부에 대하여 0.5 중량부의 포도당·1수화물, 1 중량부의 효모 추출물, 0.05 중량부의 황산망간·1수화물, 0.1 중량부의 황산마그네슘·7수화물 및 0.2 중량부의 인산이암모늄을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은

1) 기탁번호가 KFCC11797P인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주를 상기 액체 배지를 이용하여 배양하는 단계;

2) 상기 단계 1)의 균주 배양액을 원심분리한 후, 획득한 균주 응집체 100 중량부에 대하여 10~30 중량부의 동결보호제를 첨가하여 혼합하는 단계;

3) 상기 단계 2)의 균주 응집체 및 동결보호제의 혼합물을 진공동결건조하는 단계;

4) 상기 단계 3)의 진공동결건조한 균주 건조물을 분쇄하는 단계;

5) 상기 단계 4)의 분쇄된 균주 분말을 다른 유산균 균주의 건조 분말과 혼합하는 단계; 및

6) 상기 단계 5)의 혼합된 복합 유산균을 포장하는 단계;를 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 프로바이오틱스의 제조 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 종 배양(seed culture), 1차 본 배양(main cluture) 및 2차 본 배양 순으로 이루어지는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 단계 1)의 배양은 28~32℃에서 60~80 rpm 조건으로 16~26시간 동안 수행될 수 있으며, 바람직하게는 30℃에서 70 rpm 조건으로 18시간 동안 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 1차 및 2차 본 배양에서는 소포체 및 pH 조절제를 사용하지 않는 특징이 있다.

상기 단계 2)에서 동결보호제는 트레할로오스(trehalose) 또는 말토오스(maltose)일 수 있으며, 바람직하게는 말토오스일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 단계 3)의 진공동결건조는 -45℃ 내지 -30℃에서 5 내지 50 mTorr의 압력 조건에서 65 내지 75시간 동안 수행되는 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

상기 단계 4)의 분쇄된 분말의 균주 농도는 1×10¹⁴ 내지 2×10¹⁶ cfu/㎖인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

상기 단계 5)의 다른 유산균은 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum)인 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

상기 단계 6)에서 포장은 캡슐 또는 Blister일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 배지 조성 및 배양 조건 최적화

김치 시료로부터 분리한 식물성 유산균인 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주(KFCC11797P)의 성장을 증진시키기 위해, 배지 조성별 및 배양 조건별로 SRCM102343 균주를 배양하여 이의 생균수를 측정하여 최적 조건을 도출하였다. 먼저, MRS 액체배지 10mL를 멸균하여 준비한 뒤 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주를 1 백금이 접종하여 24시간 동안 배양하여 균주의 종 배양액을 제조하였다.

1) 탄소원 및 질소원 함량별 조건

하기 표 1과 같이 탄소원 및 질소원 함량별로 제조한 배지(M1~M16 및 C0) 100 중량부에 대하여 1 내지 3 중량부의 종 배양액을 접종한 뒤 18 내지 24시간 동안 배양한 후 SRCM102343 균주의 생육 여부를 확인하였다. 그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 M4, M8, M12 및 M16 배지에서 SRCM102343 균주의 생육이 우수하였으며, 이 중에 배지 원료의 사용을 최소화하면서 균주의 생육을 증진시킬 수 있는 탄소원의 함량이 가장 적게 첨가된 M4(탄소원 0.5% 및 질소원 1%) 배지를 최종 선발하였다.

탄소원 및 질소원 함량별 배지에서 SRCM102343 균주의 생균수 측정 결과

구성	함량	M1	M2	M3	M4	M5	M6	M7	M8	M9	M10	M11	M12	M13	M14	M15	M16	C0
글루코오스	0.5%	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	MRS 액체배지
	1%	-	-	-	-	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-
	2%	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+	+	-	-	-	-
	3%	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+	+
효모 추출물	0.2%	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-
	0.5%	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-
	0.7%	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-
	1%	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+	-	-	-	+

+; 양성 효과, -; 음성 효과

2) 배양 온도별 조건

SRCM102343 균주의 생육이 우수하여 선발한 M4 배지 100 중량부에 대하여 1 내지 3 중량부의 종 배양액을 접종한 뒤 18 내지 24시간 동안 25℃, 30℃, 35℃ 및 40℃에서 각각 배양한 후 생균수를 측정하였다. 배양 온도에 따른 생균수를 측정한 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 30℃의 배양 조건에서 18~24시간 동안 배양 시 안정적으로 생균수가 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

3) 기타 영양원 첨가 조건

하기 표 2와 같이 기타 영양원 첨가 유무에 따라 제조한 배지(E1~E8) 100 중량부에 대하여 1 내지 3 중량부의 종 배양액을 접종한 뒤 18 내지 24시간 동안 배양한 후 생균수를 측정하였다. 그 결과, 기타 영양원으로 황산망간1수화물(MnSO₄·H₂O), 황산마그네슘7수화물(MgSO₄·7H₂O) 및 인산이암모늄((NH₄)₂HPO₄)이 포함된 E5 배지와 트윈 80을 더 포함하는 E8 배지에서 SRCM102343 균주의 성장이 가장 우수하였으나, 배지 원료의 사용을 최소화하면서 균주의 생육을 증진시킬 수 있는 E5 배지를 최종 선발하였다(도 3).

기타 영양원 첨가 유무에 따른 SRCM102343 균주의 생균수 측정 결과

	E1	E2	E3	E4	E5	E6	E7	E8
Glucose	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
Yeast extract	1	1	1	1	1	1	1	1
Manganese sulfate monohydrate	-	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
Magnesium sulfate heptahydrate	-	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
Ammonium sulfate	-	-	0.2	-	-	-	0.2	-
Potassium phosphate monobasic	-	-	-	0.2	-	-	0.2	-
Ammonium phosphate dibasic	-	-	-	-	0.2	-	-	0.2
Tween 80	-	-	-	-	-	0.1	0.1	0.1

4) 동결보호제 종류별 조건

SRCM102343 균주의 성장이 우수하여 선발한 E5 배지 100 중량부에 대하여 1 내지 3 중량부의 종 배양액을 접종한 뒤 18 내지 24시간 동안 배양한 후 10,000×g에서 5분간 원심분리하여 상층액을 버리고 균체를 얻었다. 상기 균체 100 중량부에 대하여 10 내지 30 중량부의 동결보호제를 첨가하였고, -45℃ 내지 -30℃에서 5 내지 50 mTorr의 압력 조건에서 65 내지 75시간 동안 진공동결건조한 후 생균수를 측정하였다. 그 결과, 7종의 동결보호제 중에 트레할로오스 및 말토오스를 각각 첨가하여 진공동결건조하였을 때 1주차 및 2주차까지 생균수가 높게 측정되었으며, 특히 말토오스의 경우, 4주차까지도 생균수가 높게 유지되는 것을 확인할 수 있었다(표 3).

실시예 2. 식물성 프로바이오틱스의 제조

락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주(KFCC11797P)를 종 배양(seed culture)하기 위해, 배지 조성물 100 중량부에 대하여 0.5 중량부의 포도당·1수화물(Dextrose monohydrate; C₆H₁₂O₆·H₂O), 1 중량부의 효모 추출물(Yeast extract), 0.05 중량부의 황산망간·1수화물(Manganese sulfate monohydrate; MnSO₄·H₂O), 0.1 중량부의 황산마그네슘·7수화물(Magnesium sulfate heptahydrate; MgSO₄·7H₂O) 및 0.2 중량부의 인산이암모늄(Ammonium phosphate dibasic; (NH₄)₂HPO₄)을 포함하도록 10.5L의 배지에 접종하여 30℃에서 24시간 동안 배양하였다. 다음으로, 1차 본 배양을 위해, 상기 종 배양액과 동일한 조성으로 배지 350L를 배양조에서 제조한 후, 상기 종 배양액 10.5L를 투입하여 교반 혼합하여 30℃에서 18시간 동안 배양하였다. 이어서, 2차 본 배양을 위해, 상기 종 배양액과 동일한 조성으로 배지 2,650L를 배양조에서 제조한 후, 상기 1차 본 배양액 360.5L를 투입하여 교반 혼합하여 30℃에서 18시간 동안 배양하였다.

이후에, 상기 2차 본 배양액 3,000L를 원심분리기에 연속투입하여 수분을 최대한 제거한 후 획득한 유산균 응집체 100 중량부에 대하여 동결보호제인 말토오스(maltose)를 10~30 중량부 첨가하여 교반 혼합하였으며, 유산균 응집체 및 말토오스의 혼합물을 -45℃ ~ -30℃ 및 진공도 5~50 mTorr의 조건에서 65~75시간 동안 진공동결건조하였다. 진공동결건조한 건조물을 회수한 후 균일 분쇄하여 분말을 획득하고, 이를 장 건강에 유익한 고시형 5종 유산균(Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus bulgaricus, Bifidobacterium lactis 및 Bifidobacterium bifidum) 건조분말과 일정 비율로 혼합하여, 유산균 복합제 조성물 100 중량부에 대하여 5~10 중량부의 락토바실러스 애시도필러스, 10~15 중량부의 락토바실러스 람노서스, 10~15 중량부의 락토바실러스 불가리쿠스, 20~25 중량부의 비피도박테리움 락티스, 6~10 중량부의 비피도박테리움 비피둠 및 20~25 중량부의 락토바실러스 파라카제이 SRCM102343 균주가 포함되도록 기능성 복합 프로바이오틱스를 제조하고, 이를 캡슐 및 Blister 포장하여 제품화하였으며(도 4), 이의 제품시험성적서를 도 5에 개시하였다.

한국미생물보존센터(국내)

KFCC11797P

20181025

Claims

삭제
삭제
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1) 기탁번호가 KFCC11797P인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) SRCM102343 균주를 액체 배지를 이용하여 배양하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 균주 배양액을 원심분리한 후, 획득한 균주 응집체 100 중량부에 대하여 10~30 중량부의 말토오스(maltose)를 첨가하여 혼합하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 균주 응집체 및 말토오스의 혼합물을 진공동결건조하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 진공동결건조한 균주 건조물을 분쇄하는 단계;
5) 상기 단계 4)의 분쇄된 균주 분말을 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum) 균주의 건조 분말과 혼합하는 단계; 및
6) 상기 단계 5)의 혼합된 복합 유산균을 포장하는 단계;를 포함하는 프로바이오틱스의 제조 방법으로서,
상기 단계 1)에서 액체 배지는 배지 조성물 100 중량부에 대하여 유효성분으로 0.4~0.6 중량부의 포도당·1수화물, 0.7~1.2 중량부의 효모 추출물, 0.04~0.06 중량부의 황산망간·1수화물, 0.05~0.15 중량부의 황산마그네슘·7수화물 및 0.1~0.3 중량부의 인산이암모늄으로 이루어진 것을 특징으로 하는 프로바이오틱스의 제조 방법.
제4항에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 28~32℃에서 16~26시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는 프로바이오틱스의 제조 방법.
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