KR101908150B1 - 프로테아제 및 셀룰라제를 함유하는 저장-안정성 액상 세척 또는 세정제 - Google Patents
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Abstract
본 발명에 따라, 프로테아제 및 셀룰라제를 포함하는 액상 세척 또는 세정제에서 셀룰로스 분해 활성과 관련하여 저장 안정성이 개선된다. 이는 서열 1에 특정된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D) 또는 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q) 또는 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)을 갖는 프로테아제의 사용에 의해 달성된다.
Description
본 발명은 액상 세척 및 세정제 분야에 관한 것이다. 본 발명은 특히 특정 프로테아제와 셀룰라제의 조합을 포함하는 액상 효소-함유 세척 및 세정제에 관한 것이고, 또한 이러한 세척 및 세정제를 사용하는 방법을 제시한다. 본 발명은 또한 셀룰라제를 포함하는 액상 세척 및 세정제에 있어서의 특정 프로테아제의 용도에 관한 것이다.
서브틸리신 유형의 프로테아제는 바람직하게는 세척 및 세정제에서 사용된다. 종래기술에 공지된 세척 또는 세정제에 포함되는 프로테아제는 원래 미생물, 예컨대 바실루스(Bacillus), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 휴미콜라(Humicola), 또는 슈도모나스(Pseudomonas) 속으로부터 유래되고/되거나, 적합한 미생물, 예를 들어 바실루스 속의 트랜스제닉 발현 숙주 또는 사상균을 사용하는 공지된 생물공학적 공정에 따라 제조된다.
근래의 액상 세정제는 특히, 추가의 효소, 그 중에서도 특히 셀룰라제(엔도글루카나제)를 점점 더 많이 포함한다. 셀룰라제는 셀룰로스 내의 1,4-β-D-글루코시드 결합(셀로비오스) 및/또는 리케닌 및/또는 β-D-글루칸의 가수분해를 촉매하는 효소이다. 이것은 종종, 1,4-결합 외에도 1,3-결합을 갖는 β-D-글루칸 내의 1,4-결합을 가수분해할 수도 있다. 효소의 EC 분류에서, 효소에 대한 디지털 분류 시스템에서, 셀룰라제는 EC 번호("효소 위원회 번호(Enzyme Commission Number)") 3.2.1.4를 갖고, 따라서 이것은 효소의 6개의 주요 분류군들 중에 3번째인 가수분해효소(E.C.3._._._), 그 아래의 글리코실라제(E.C.3.2._._), 다시 그 아래의 글리코시다제(E.C.3.2.1._), 즉 O- 및/또는 S-글리코실 화합물을 가수분해하는 효소에 속한다. 셀룰라제는 셀룰로스를 β-글루코스로 분해시킬 수 있다. 따라서, 셀룰라제는 특히 세척물 내의 셀룰로스-함유 또는 셀룰로스 유도체-함유 잔류물에 대해 작용하고 그의 가수분해를 촉진한다.
국제특허출원 WO 95/23221에는 세척 또는 세정제에 사용되기에 적합한 바실루스 렌투스(Bacillus lentus) DSM 5483으로부터 유래된 서브틸리신 유형의 프로테아제 또는 프로테아제 변이체가 개시되어 있다. 그 중에서도, 프로테아제는 아미노산 교환기 R99E, A, S 또는 G를 가질 수 있는 것이다. 세척제는 추가의 효소, 그 중에서도 셀룰라제를 포함할 수 있다는 것도 개시되어 있다. 세척제는 고체 또는 액체일 수 있다. 그러나, 이러한 문헌에는 99번 위치에 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D) 또는 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q) 또는 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)을 갖는 프로테아제와 셀룰라제의 조합을 포함하는 액상 세척제가 직접적으로 명확하게 개시되어 있지 않다. 이는 유럽특허출원 EP 1 921 147에 대해서도 사실이다.
종래기술의 프로테아제-함유 및 셀룰라제-함유 액상 세척 및 세정제의 단점은 이것들이 충분히 저장 안정하지가 않고, 따라서, 심지어는 짧은 시간 후에도, 상당량의 셀룰로스 분해 활성 및/또는 단백질 분해 활성, 특히 셀룰로스 분해 활성이 손실된다는 것이다. 프로테아제는 셀룰라제를 불활성화시키기 때문에, 프로테아제의 존재는 흔히는 셀룰로스 분해 활성의 손실을 초래한다. 따라서 세척 또는 세정액은 최적의 세정력을 나타내지 않는다.
본 발명은, 언급된 단점을 극복하고, 특히 그의 셀룰로스 분해 활성과 관련해서, 적당하게 또는 보다 더 저장 안정한 프로테아제-함유 및 셀룰라제-함유 액상 세척 또는 세정제를 제공하려는 목적에 기초한다.
따라서 본 발명의 대상은
(a1) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)을 갖는 프로테아제, 또는
(a2) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q)을 갖는 프로테아제, 또는
(a3) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)을 갖는 프로테아제, 및
(b) 셀룰라제
를 함유하는 액상 세척 또는 세정제이다.
놀랍게도, 이러한 프로테아제와 셀룰로스의 조합을 포함하는 액상 세척 또는 세정제는 유리하게도 저장 안정하다는 것이 밝혀졌다. 특히 이것은, 각각의 세척 또는 세정제 내에 존재하는 프로테아제에 대해서만 본 발명의 세척 또는 세정제와 상이한 세척 또는 세정제에 비해, 보다 높은 저장 후 셀룰로스 분해 활성을 나타내며, 여기서 저장의 시작 즈음에, 프로테아제는, 활성 효소에 대해, 비교되는 세척 또는 세정제 내에 동일한 농도로 존재한다. 따라서 본 발명의 문맥에서 제공되는 프로테아제는 셀룰라제의 불활성화의 감소를 초래한다. 그러나, 본 발명의 문맥에서 제공되는 프로테아제에 의한 셀룰라제의 불활성화의 감소는 부적당한 프로테아제 활성으로 인한 것은 아니다.
이와 관련해서 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 프로테아제-민감성 오물에 대해 우수한, 특히 유리한 세정력을 갖고 바람직하게는 여전히 갖는다. 하나 이상의 프로테아제-민감성 오물과 관련해서 이러한 유형의 세정력은 또한 특히 저온, 예를 들어 10℃ 내지 50℃, 바람직하게는 10℃ 내지 40℃, 또는 20℃ 내지 40℃에서 일어난다. 따라서, 이러한 세척 또는 세정제는 직물 및/또는 경질 표면, 예를 들어 식기 상의 하나 이상, 바람직하게는 다수의 프로테아제-민감성 오물의 적당한 또는 개선된 제거를 가능하게 한다.
따라서, 서두에서 언급된 국제특허출원 WO 95/23221과 관련해서, 본 발명은, 특히 세척제의 단백질 분해 활성 및/또는 셀룰로스 분해 활성 및 저장 후 잔여 활성과 관련해서, 매우 생산적이고 저장 안정한 액상 세척제를 제공하는 특히 유리한 선택과 관계가 있다.
본 발명의 문맥에서, 세정력은 하나 이상의 오물, 특히 세척 오물을 경감시키는 능력을 의미하는 것으로 이해하도록 한다. 이러한 얼룩의 예는, 특히 하기에 열거된 유형의, 목면 상의 혈액-우유/잉크, 목면 상의 전란/안료, 목면 상의 초콜렛-우유/잉크, 폴리에스테르/목면 상의 땅콩 오일-안료/잉크, 목면 상의 목초 또는 목면 상의 코코아이다. 본 발명의 문맥에서, 프로테아제 및 셀룰라제를 함유하는 세척 또는 세정제 또는 이러한 세척 또는 세정제에 의해 형성된 세척 또는 세정액 뿐만 아니라, 프로테아제 또는 셀룰라제 그 자체는 특정한 세정력을 갖는다. 따라서, 효소의 세정력은 세척 또는 세정제 및 세척 또는 세정제에 의해 형성된 세척 또는 세정액의 세정력에 기여한다. 세정력은 바람직하게는 하기에 기술되는 바와 같이 결정된다.
"세척 또는 세정액"은 섬유 또는 직물에 대해 작용하거나(세척액) 또는 경질 표면에 대해 작용하는(세정액), 그리고 그럼으로써 섬유 및/또는 직물 또는 경질 표면 상에 존재하는 얼룩과 접촉하는 세척 또는 세정제를 포함하는 용액을 의미하는 것으로 이해하도록 한다. 세척 또는 세정액은 통상적으로, 예를 들어 세척기 또는 또 다른 적합한 용기에서, 세척 또는 세정 공정이 시작되고 세척 또는 세정제가 물에 용해되거나 물로써 희석될 때에, 형성된다.
본 발명의 문맥에서, 저장 안정성은, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제가, 대조용 조성물 내에 포함된 프로테아제에 관해서만 본 발명에 따른 세척 또는 세정제와 상이한 대조용 조성물에 비해 보다 높은 저장 후 셀룰라제 활성을 나타낼 때에 존재한다. 따라서, 저장 후, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 대조용 조성물에 비해 보다 높은 셀룰라제 잔여 활성을 나타낸다. 따라서, 저장 시작 즈음에, 비교되는 두 세척 또는 세정제들은 동일한 양 또는 농도의 셀룰라제 및/또는 초기 셀룰라제 분해 활성을 나타낸다. 더욱이, 저장 시작 즈음에, 두 세척 또는 세정제들은 활성 효소를 기준으로 동일한 농도의 프로테아제를 갖고, 두 세척 또는 세정제들은, 특히 저장 조건 및 효소 활성의 결정과 관련해서, 동일한 방식으로 처리된다. 저장은, 점점 바람직하게는, 적어도 24시간, 48시간, 72시간, 5일, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일 또는 8주일 동안 일어난다. 더욱이, 저장은 바람직하게는 20℃, 25℃ 또는 30℃, 특히 바람직하게는 30℃의 온도에서 일어난다.
이와 관련해서, 특정한 효소 유형에 부합되는 표준 방법을 사용하여 효소 활성을 결정할 수 있다. 효소 활성의 결정 방법은 효소 공학 분야의 숙련자에게 충분히 공지되어 있고 그에 의해 통상적으로 사용된다. 예를 들어, 프로테아제 활성의 측정 방법은, 문헌[Tenside, vol.7(1970), pp. 125-132]에 개시되어 있다. 단백질 분해 활성을, 기질 suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-니트로아닐리드(suc-AAPF-pNA)로부터의 발색단 파라-니트로아닐린(pNA)의 방출로부터 결정할 수도 있다. 프로테아제는 기질을 분해하고 pNA를 방출한다. 방출된 pNA는 410 ㎚에서의 흡광도를 증가시키므로, 시간의 함수로서의 흡광도의 변화는 효소 활성의 척도이다(문헌[Del Mar et al., 1979]을 참고). 측정을 25℃의 온도, pH 6 및 410 ㎚의 파장에서 수행한다. 측정 시간은 5분이고 측정 간격은 20초 내지 60초이다. 프로테아제 활성은 바람직하게는 PU(프로테아제 단위)로서 주어진다.
셀룰라제 활성을 표준 방법을 사용하여 측정한다. 셀룰라제 활성을 바람직하게는 하기와 같이 결정한다. 셀룰라제는 CMC(카르복시메틸 셀룰로스)로부터 글루코스를 방출한다. 샘플을 특정 반응 조건(100 mM 인산나트륨 완충제 pH 7.5, 40℃, 15 분)에서 기질(1.25% CMC)과 함께 인큐베이션한다. 비스무스의 존재 하에서 p-히드록시벤조산 히드라지드(PAHBAH)와 반응시켜 410 ㎚에서 측광법으로 결정될 수 있는 황색 염료를 수득한다. 조건은 색 반응 동안에 알칼리성 pH이다. 변색에 상응하여 방출된 당의 양은 효소 활성의 척도이다(문헌[Lever, Anal. Biochem., 1972, 47 & 1977, 81]을 참고).
본 발명의 문맥에서, 효소 안정화의 존재를, 특히 바람직하게는 상기에 열거된 바와 같이, 30℃의 온도에서 4주일 이상 내지 8주일 이하 동안 저장된 프로테아제-함유 및 셀룰라제-함유 액상 세척 또는 세정제를 사용하여 결정하며, 여기서 단백질 분해 활성을 기질 suc-AAPF-pNA로부터의 파라-니트로아닐린 발색단(pNA)의 방출로부터 결정하고, 셀룰로스 분해 활성을 상기에 기술된 바와 같이 결정한다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제 내에 포함된 프로테아제는 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D) 또는 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q) 또는 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)을 갖는다. 아미노산 서열의 동일성(identity)은, 점점 바람직하게는, 적어도 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 및 매우 특히 바람직하게는 100%로 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 일치한다. 서열 1은, 그 개시내용이 본원에서 명백히 참고되는, 국제특허출원 WO 92/21760에 개시된 바실루스 렌투스 DSM 5483으로부터 유래된 성숙한 알칼리성 프로테아제의 서열이다.
이러한 프로테아제를, 셀룰라제를 포함하는 액상 세척 또는 세정제에 첨가함으로써, 특히 저장 후, 특히 점점 바람직하게는 적어도 24시간, 48시간, 72시간, 5일, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일 또는 8주일 저장 후 잔여 셀룰로스 분해 활성과 관련해서, 특히 저장 안정한 액상 세척제를 수득한다는 것이 본 발명에 따라 입증되었다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제 내에 포함된 프로테아제는 단백질 분해 활성을 나타내고, 즉 폴리펩티드 또는 단백질의 펩티드 결합을 가수분해할 수 있다. 따라서, 이것은 펩티드 결합의 가수분해를 촉진하고 따라서 펩티드 또는 단백질을 분해할 수 있는 효소이다. 특히 이것은 서브틸라제 및 특히 바람직하게는 서브틸리신이다.
셀룰라제는 서두에서 기술된 바와 같은 효소이다. 셀룰라제에 대해서 동의어, 특히 엔도글루카나제, 엔도-1,4-베타-글루카나제, 카르복시메틸셀룰라제, 엔도-1,4-베타-D-글루카나제, 베타-1,4-글루카나제, 베타-1,4-엔도글루칸히드롤라제, 셀루덱스트리나제 또는 아비셀라제가 사용될 수 있다. 본 발명의 문맥에서 효소가 셀룰라제인지 아닌지를 결정하는 인자는 셀룰로스 내의 1,4-β-D-글루코시드 결합을 가수분해하는 그의 능력이다.
본 발명에 따라 컨디셔닝될 수 있는 셀룰라제(엔도글루카나제, EG)는 예를 들어 노보자임즈 캄파니(Novozymes Company)에 의해 셀루자임(Celluzyme)®이라는 상표명으로서 제공되는 진균성 엔도글루카나제(EG)-농후 셀룰라제 제제 또는 그의 추가의 개발품을 포함한다. 각각 휴미콜라 인솔렌스(Humicola insolens) DSM 1800으로부터 유래된 50 kD-EG 및 43 kD-EG를 기재로 하는 엔돌라제(Endolase)® 및 카레자임(Carezyme)®이라는 제품도 노보자임즈 캄파니로부터 입수가능하다. 이 회사로부터 입수가능한 추가의 사용가능한 상업적 제품은 셀루소프트(Cellusoft)®, 레노짐(Renozyme)® 및 셀루클린(Celluclean)®이다. 예를 들어, 핀란드 소재의 에이비 엔자임즈(AB Enzymes)로부터 에코스톤(Ecostone)® 및 바이오터치(Biotouch)®라는 상표명으로서 입수가능한 셀룰라제도 사용될 수 있고, 이것은 적어도 부분적으로 멜라노카르푸스(Melanocarpus)로부터 유래된 20 kD-EG를 기재로 한다. 에이비 엔자임즈 캄파니로부터 입수가능한 추가의 셀룰라제는 에코나제(Econase)® 및 에코펄프(Ecopulp)®이다. 추가의 적합한 셀룰라제는 바실루스 종 CBS 670.93 및 CBS 669.93으로부터 유래되고, 바실루스 종 CBS 670.93은 다니스코/제넨코르 캄파니(Danisco/Genencor Company)로부터 푸라닥스(Puradax)®라는 상표명으로서 입수가능하다. 다니스코/제넨코르 캄파니의 추가의 사용가능한 상업적 제품은 "제넨코르 세제 셀룰라제 L" 및 인디에이지(IndiAge)®뉴트라(Neutra)이다.
점 돌연변이에 의해 수득된 이러한 효소의 변이체도 본 발명에 따라 포함될 수 있다. 특히 바람직한 셀룰라제는, 국제출원 WO 98/12307에 개시된 티엘라비아 테레스트리스(Thielavia terrestris) 셀룰라제 변이체, 국제출원 WO 97/14804에 개시된, 멜라노카르푸스, 특히 멜라노카르푸스 알보마이세스(Melanocarpus albomyces)로부터 유래된 셀룰라제, 유럽특허출원 EP 1 305 432에 개시된 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei)로부터 유래된 EGIII 유형의 셀룰라제, 또는 이로부터 수득될 수 있는 변이체, 특히 유럽특허출원 EP 1 240 525 및 EP 1 305 432에 개시된 것, 뿐만 아니라 국제특허출원 WO 1992006165, WO 96/29397 및 WO 02/099091에 개시된 셀룰라제이다. 따라서 그의 각각의 개시내용은 명백히 참고되거나, 이와 관련한 그의 개시내용은 본 특허출원에 명백히 참고로 포함된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 세척 또는 세정제는, 프로테아제가 서열 1에 따른 계수에서 하기 아미노산들:
(a) 3번 위치에 트레오닌(3T),
(b) 4번 위치에 이소류신(4I),
(c) 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
(d) 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
(e) 188번 위치에 프롤린(188P),
(f) 193번 위치에 메티오닌(193M),
(g) 199번 위치에 이소류신(199I),
(h) 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
(i) 아미노산 (a) 내지 (h)의 조합
중 하나 이상을 추가로 포함하는 것이다.
따라서, 프로테아제는, 99번 위치의 언급된 아미노산 외에도, 각각의 위치에서 전술된 아미노산들 중 하나 이상을 갖는다. 이러한 아미노산은 추가의 유리한 성질을 부여할 수 있고/있거나 심지어는 이미 존재하는 성질을 강화시킬 수 있다. 특히, 전술된 아미노산은, 액상 세척 또는 세정제 또는 이러한 세척 또는 세정제에 의해 형성된 세척액 내의 프로테아제의 단백질 분해 활성 및/또는 안정성을 증가시킨다. 이러한 프로테아제를, 셀룰라제를 포함하는 액상 세척 또는 세정제에 첨가함으로써, 마찬가지로, 특히 점점 바람직하게는 적어도 24시간, 48시간, 72시간, 5일, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일 또는 8주일 동안 저장 후의, 특히 저장 후 잔여 셀룰로스 분해 활성 뿐만 아니라, 바람직하게는 또한 저장 후 잔여 단백질 분해 활성과 관련해서, 특히 저장 안정한 액상 세척 또는 세정제를 수득한다. 이러한 세척 또는 세정제는 또한 프로테아제-민감성 및/또는 셀룰라제-민감성 오물에 대해 개선된 세정력을 나타낸다.
아미노산 위치는 본원에서는, 서열 1에 열거된 바와 같은, 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제의 아미노산 서열을 갖는, 첨가될 프로테아제의 아미노산 서열의 정렬에 의해 정의된다. 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제는 종래기술에서 프로테아제 및 아미노산 변형을 기술하는 중요한 참고 분자를 대표하기 때문에, 아미노산 위치의 정렬에 있어서 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제(서열 1)의 계수를 언급하는 것이 유리하다. 또한, 이러한 계수는 성숙한 단백질에 상응한다. 이러한 분류는, 첨가될 프로테아제의 아미노산 서열이, 서열 1에 따른 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제보다 더 많은 개수의 아미노산 잔기를 함유하는 경우에 사용되어야 한다.
바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제의 아미노산 서열 내의 언급된 위치로부터 출발해서, 본 발명에 따라 첨가될 프로테아제 내의 아미노산 위치는 정렬 내의 동일한 위치에 기인한 것이다.
따라서, 99번 위치 외에도, 특히 유리한 위치는, 서열 1에 따른 정렬에 기인한, 따라서 서열 1에 따른 계수에서, 3, 4, 61, 154, 188, 193, 199 및 211 위치이다. 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제의 야생형(wild type) 분자에서 하기 아미노산 잔기들은 언급된 위치에서 발견된다: S3, V4, G61, S154, A188, V193, V199, 및 L211. 본 발명에 따라 첨가될 프로테아제 내의 상응하는 위치가 이러한 바람직한 아미노산들 중 하나에 의해 이미 점유되지 않는 한, 아미노산 3T, 4I, 61A, 154D, 154E, 211D, 211G 및 211E가 특히 바람직하다. 예를 들어, 치환기 3T 및 4I는 분자에 안정화 효과를 부여하고, 프로테아제의 개선된 저장 안정성 및 세정력을 초래하여, 프로테아제를 포함하는 본 발명의 액상 세척 또는 세정제의 개선된 세정력을 초래한다.
전술된 아미노산들 중 하나 이상이 각각의 위치에서 실현되면, 99번 위치 외에도, 추가의, 서열 1로부터의 서열 편차가 일어나는데, 왜냐하면 서열 1은 각각의 위치에서 또 다른 아미노산을 갖기 때문이다. 심지어 모든 기타 아미노산에서 서열 1과 일치했다 하더라도, 서열 1로부터의 서열 편차의 개수에 따라, 본 발명에 따라 첨가될 프레테아제가 가질 수 있는 서열 1과의 상이한 최대 동일성 값이 초래된다. 이러한 상황은 각각의 개별적인 경우에 제시된 아미노산들의 모든 가능한 조합에 대해 고려되어야 하며, 더욱이 프로테아제의 아미노산 서열의 길이에 따라서도 달라진다. 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 개의 서열 변형에 대한 최대 동일성은 269개의 아미노산의 아미노산 서열 길이의 경우 99.63%, 99.26%, 98.88%, 98.51%, 98.14%, 97.77%, 97.40%, 97.03% 또는 96.65%이고, 275개의 아미노산의 아미노산 서열 길이의 경우 99.64%, 99.27%, 98.91%, 98.55%, 98.18%, 97.82%, 97.45%, 97.09% 또는 96.73%이다.
핵산 또는 아미노산 서열의 동일성은 서열 비교에 의해 결정된다. 이러한 비교는 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열 내의 유사한 서열들을 서로 정렬시킴에 의해 수행된다. 이러한 서열 비교는 바람직하게는, 종래기술에서 확립되고 통상적으로 사용되는 블라스트(BLAST) 알고리즘(예를 들어 문헌[Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, DJ. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215: 403-410] 및 [Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, pp. 3389-3402]을 참고)을 기초로 하여, 주로 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열 내의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 유사한 서열들을 서로 정렬시킴에 의해 수행된다. 위치를 표에 할당하는 것을 정렬이라고 한다. 종래기술로부터 이용할 수 있는 또 다른 알고리즘은 파스타(FASTA) 알고리즘이다. 서열 정렬, 특히 다중 서열 정렬은 통상적으로 컴퓨터 프로그램에 의해 생성된다. 클러스탈(Clustal) 시리즈(예를 들어 문헌[Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Research 31, 3497-3500]을 참고), 티-커피(T-Coffee)(예를 들어 문헌[Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217]을 참고) 또는 이러한 프로그램 또는 알고리즘에 기초하는 프로그램이 흔히 사용된다. 본 발명의 문맥에서, 서열 비교 및 정렬은 바람직하게는 표준 디폴트 매개변수를 사용하는 컴퓨터 프로그램인 벡터 엔티아이(Vector NTI)® 슈트(Suite) 10.3(미국 캘리포니아주 칼즈배드 파라데이 애브뉴 1600 소재의 인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corporation))에 의해 생성된다.
이러한 유형의 비교는 비교되는 서열들의 서로간의 유사성을 기술할 수 있게 해 준다. 이것은 통상적으로 % 동일성, 즉 동일하거나 정렬 내의 서로 상응하는 위치에 있는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산기의 백분율로 표현된다. 보다 넓은 개념인, 아미노산 서열에 대한 "상동성(homology)"은, 보존적 아미노산 교환, 즉 아미노산들이 단백질 내에서 대체로 유사한 활성 또는 기능을 하기 때문에 아미노산들이 유사한 화학적 활성을 가짐을 고려한다. 따라서, 비교되는 서열들의 유사성은 % 상동성 또는 % 유사성으로 표현될 수도 있다. 동일성 및/또는 상동성 데이터는 완전한 폴리펩티드 또는 유전자에 대해 또는 단지 개별적인 영역에 대해서만 수집될 수 있다. 따라서 다양한 핵산 또는 아미노산 서열의 상동성 또는 동일성 영역은 서열의 일치에 의해 정해진다. 이것들은 종종 동일하거나 유사한 기능을 갖는다. 이것들은 작을 수 있고 단지 몇 개의 뉴클레오티드 또는 아미노산을 포함한다. 흔히 이러한 작은 영역은 단백질의 총 활성을 위한 필수적인 기능을 한다. 따라서, 단지 개별적인, 임의로 작은 영역에 대해서만 서열 일치를 달성할 가치가 있을 수 있다. 그러나, 달리 언급되지 않는 한, 본 출원에서 동일성 또는 상동성 데이터는 열거된 관련 핵산 또는 아미노산 서열의 총 길이를 지칭한다.
본 발명의 대상의 또 다른 실시양태에서, 세척 또는 세정제는, 프로테아제가 상기에 언급된 바와 같은 서열 1에서 열거된 아미노산 서열과 동일한, 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해 서열 1에 따른 프로테아제로부터 수득되거나 수득될 수 있는 아미노산 서열을 함유하고, 프로테아제가 99번 위치에서 여전히 상기에 기술된 바와 같은 이러한 위치에 대해 표시된 아미노산들 중 하나를 갖는 것이다. "보존적 아미노산 치환"이라는 용어는, 하나의 아미노산 잔기가 또 다른 아미노산 잔기에 의해 교환(치환)되고, 이러한 치환으로 인해 교환된 아미노산의 위치에서 극성 또는 전하의 변화가 초래되지 않음, 예를 들어 비-극성 아미노산 잔기가 또 다른 비-극성 아미노산 잔기에 의해 치환됨을 의미한다. 본 발명의 문맥에서, 보존적 아미노산 치환은 예를 들어 G=A=S, I=V=L=M, D=E, N=Q, K=R, Y=F, S=T, G=A=I=V=L=M=Y=F=W=P=S=T를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 그의 세정력이 적어도, 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8, 특히 바람직하게는 서열 2에 열거된 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제를 포함하는 세척 또는 세정제의 세정력에 상응하는 것이다. 세정력을, 세척액 1 리터 당 2.0 내지 9.0 그램 용량의 셀룰라제-함유 세척제 뿐만 아니라 프로테아제를 포함하는 세척 시스템에서 결정하고, 여기서 비교할 프로테아제를 (활성 단백질을 기준으로) 동일한 농도로 첨가하고, 목면 상의 혈액-우유/잉크, 목면 상의 전란/안료, 폴리에스테르/목면 상의 땅콩 오일-안료/잉크 및 목면 상의 목초 오물 중 하나 이상에 대해, 특히
- 목면 상의 혈액-우유/잉크: 네덜란드 블라르딘젠 소재의 CFT(센터 포 테스트머터리얼즈(Center For Testmaterials)) 비.브이.(B.V.)로부터 입수가능한 제품 번호 C-05;
- 목면 상의 전란/안료(전란/그을음): 독일 브뤼겐-브라히트 소재의 베에프카 테스트게베게 게엠베하(wfk Testgewebe GmbH) 사로부터 입수가능한 제품 번호 10N, 또는 네덜란드 블라르딘젠 소재의 CFT(센터 포 테스트머터리얼즈) 비.브이.로부터 입수가능한 제품 C-S-37;
- 폴리에스테르/목면 상의 땅콩 오일-안료/잉크: 네덜란드 블라르딘젠 소재의 CFT(센터 포 테스트머터리얼즈) 비.브이.로부터 입수가능한 제품 번호 PC-10; 및
- 목면 상의 목초: 스위스 장크트 갈렌 소재의 아이트게뇌시스헤 마터리알-운트 프뤼판스탈트(EMPA) 테스트마터리알리엔 아게(Eidgenoessische Material- und Pruefanstalt(EMPA) Testmaterialien AG)로부터 입수가능한 제품 번호 164
의 오물 중 하나 이상에 대해, 세척된 직물의 백도를 측정함으로써 세정력을 결정하며, 여기서 세척 공정은 30 분 이상, 임의로 60 분 동안, 20℃의 온도에서 지속되며, 물의 경도는 15.5 및 16.5(독일 경도)이다.
세척 시스템을 위한 세척제는 하기와 같이 배합된 액상 세척제이다(모든 수치는 중량%로 나타내어짐): 0.3 내지 0.5% 크산탄, 0.2 내지 0.4% 소포제, 6 내지 7% 글리세린, 0.3 내지 0.5% 에탄올, 4 내지 7% 파에오스(FAEOS)(지방 알콜 에테르 술페이트), 24 내지 28% 비-이온성 계면활성제, 1% 붕산, 1 내지 2% 시트르산나트륨(이수화물), 2 내지 4% 소다, 14 내지 16% 코코넛 지방산, 0.5% HEDP(1-히드록시에탄-(1,1-디포스폰산)), 0 내지 0.4% PVP(폴리비닐 피롤리돈), 0 내지 0.5% 형광증백제, 0 내지 0.001% 착색제, 0.0002 내지 0.06% 셀룰라제(활성 단백질), 바람직하게는 에코스톤 N400®(에이비 엔자임즈 캄파니로부터 입수가능한 셀룰라제 제제), 잔여량의 탈염수. 프로테아제는, 활성 단백질을 기준으로, 0.001 내지 0.1%, 바람직하게는 0.01 내지 0.06%의 농도로 세척제 내에 포함된다. 액상 세척제는 바람직하게는 세척액 1 리터 당 2.0 내지 9.0, 바람직하게는 3.0 내지 8.2, 4.0 내지 7.5, 특히 바람직하게는 4.7 그램으로 투입된다.
세척을 바람직하게는 pH 8 내지 pH 10.5, 바람직하게는 pH 8 내지 pH 9의 pH 범위에서 수행한다. 세척액 내의 프로테아제 활성과 셀룰라제 활성은 둘 다 세척 시작 즈음에 0이 되지 않는다.
세정력의 척도로서의 백도, 즉 오물의 경감 정도를 광학측정법, 바람직하게는 측광법을 사용하여 결정한다. 이를 위한 적합한 장치는, 예를 들어, 미놀타(Minolta) CM508d 분광기이다. 측정에 사용되는 장치를, 통상적으로 백색 표준물, 바람직하게는 장치와 함께 전달된 백색 표준물을 사용하여 보정한다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 그의 저장 안정성이 역시 적어도, 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8, 특히 바람직하게는 서열 2에 열거된 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제를 포함하는 세척 또는 세정제의 것에 상응하는 것이다. 이러한 저장 안정성은, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제가, 30℃에서 8주일 동안 저장 후에, 비교용 세척 또는 세정제와 동일하거나 그보다 더 높은 셀룰라제 활성을 나타낼 때에 존재하며, 여기서 본 발명의 세척 또는 세정제는 비교용 세척 또는 세정제와는 포함된 프로테아제만 상이하다.
비교용 세척 또는 세정제는 특히 바람직하게는 하기 조성을 갖는 액상 세척제이다(모든 양은 중량%로 나타내어짐): 0.3 내지 0.5% 크산탄검, 0.2 내지 0.4% 소포제, 6 내지 7% 글리세린, 0.3 내지 0.5% 에탄올, 4 내지 7% 파에오스(지방 알콜 에테르 술페이트), 24 내지 28% 비-이온성 계면활성제, 1% 붕산, 1 내지 2% 시트르산나트륨(이수화물), 2 내지 4% 소다, 14 내지 16% 코코넛 지방산, 0.5% HEDP(1-히드록시에탄-(1,1-디포스폰산)), 0 내지 0.4% PVP(폴리비닐 피롤리돈), 0 내지 0.05% 형광증백제, 0 내지 0.001% 착색제, 0.0002 내지 0.06% 셀룰라제(활성 단백질), 바람직하게는 에코스톤 N400®(에이비 엔자임즈 캄파니로부터 입수가능한 셀룰라제 제제), 잔여량의 탈염수. 프로테아제는, 활성 단백질을 기준으로, 0.001 내지 0.1%, 바람직하게는 0.01 내지 0.06%의 농도로 세척제 내에 포함된다.
저장 시작 즈음에, 비교되는 두 세척 또는 세정제들은 동일한 초기 셀룰로스 분해 활성을 나타내고, 활성 효소에 대해 동일한 농도의 프로테아제를 포함하고, 두 세척 또는 세정제들은 동일한 방식으로 처리된다. 세척 또는 세정제 내의 단백질 분해 활성은, 기질 suc-AAPF-pNA로부터의 발색단 파라-니트로아닐린(pNA)의 방출에 기초하여 결정되고, 그의 셀룰로스 분해 활성은 상기에 기술된 바와 같이 결정된다. 각각의 세척 또는 세정제 내의 프로테아제 및 셀룰라제를 위한 초기 활성은 0이 아니다.
동일한 활성, 및 활성 단백질에 대해 동일한 프로테아제 농도에서 셀룰라제를 첨가하면, 활성 물질 대 총 단백질의 비(비활성값)이 상이할 수 있는 경우에서도, 진정한 효소 성질을 비교하는 것이 보장된다.
본 발명의 문맥에서, 달리 언급이 없는 한, 액상 세척제의 중량을 기준으로 하며, 즉 데이터는 그의 중량을 기준으로 한다.
수많은 프로테아제 및 특히 서브틸리신이 소위 전-단백질로서, 즉 프로-펩티드 및 신호 펩티드와 함께 형성되고, 여기서 신호 펩티드의 기능은 통상적으로, 프로테아제를 이것을 생성하는 세포로부터 주변세포질 또는 세포 주변의 매체 내로 제거하는 것을 보장하는 것으로 이루어지며, 프로-펩티드는 통상적으로 프로테아제의 올바른 접힘(folding)을 위해 필요하다. 신호 펩티드 및 프로-펩티드는 일반적으로 전-단백질의 N-말단 부분에 존재한다. 자연적인 조건에서, 신호 펩티드는 신호 펩티다제에 의해 잔여 프로테아제로부터 분리된다. 이어서 프로-펩티드에 의해 지지된, 프로테아제의 올바른 최종 접힘이 일어난다. 이어서 프로테아제는 그의 활성 형태로 존재하게 되며, 이것은 프로-펩티드 자체를 분리한다. 이어서 프로-펩티드의 분리 후, 성숙한 프로테아제, 특히 서브틸리신은 원래 존재했던 N-말단 아미노산 없이 그의 촉매 활성을 수행한다. 일반적으로, 특히 본 발명의 문맥에서의 기술적 응용의 경우, 성숙한 프로테아제, 즉 제조 후에 가공된 효소는 전-단백질보다 바람직하다. 더욱이, 프로테아제는 폴리펩티드쇄의 제조 후에, 예를 들어 당 분자의 부착, 포르밀화, 아미노화 등에 의해, 프로테아제를 생성하는 세포로부터 변형될 수 있다. 이러한 변형은 번역-후 변형이고, 비록 그럴 필요는 없지만, 프로테아제의 기능에 영향력을 발휘할 수 있다.
더욱이, 성숙한 프로테아제를 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 단축시킬 수도 있어서, 서열 1 또는 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8에 비해 보다 짧은 프로테아제, 즉 절편(fragment)이 본 발명에 따른 세척 또는 세정제 내에 포함된다. 이러한 경우에, 모든 동일성 데이터는 문제의 절편이 정렬 서열 1에서 일치하는 영역을 지칭한다. 그러나, 각각의 경우에, 문제의 절편은 서열 1에 따른 정렬에서 99번 위치와 일치하는 위치를 갖고, 이러한 위치에서 상응하는 아미노산을 갖는다.
유리하게는, 이것은 또한 상기에 기술된 추가의 위치들 중 하나 이상을 갖고 이러한 위치에서 상응하는 아미노산을 갖는다. 더욱이, 이러한 절편은 단백질 분해 활성을 갖는다. 이와 관련해서, 추가의 바람직한 절편은 적어도 50 또는 적어도 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 265, 266, 267 또는 268 개의 연결된 아미노산 길이에 걸쳐 위치가 서열 1 또는 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8과 일치하고, 99번 위치 및 임의로 또한 3번 및/또는 4번 및/또는 61번 및/또는 154번 및/또는 188번 및/또는 193번 및/또는 199번 및/또는 211번에 대해서는 전술된 아미노산에 따른 아미노산 서열을 함유한다. 이러한 절편을 갖는, 본 발명의 세척 또는 세정제의 세정력 및/또는 저장 안정성은 적어도, 각각 상기에 열거된 바와 같이 결정된, 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8에 열거된 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제를 포함하는 세척 또는 세정제의 것에 상응한다.
본 발명의 또 다른 대상은
(a) a. 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8에 따른 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제;
b. 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8 내의 하나 이상의 위치에 변경된 아미노산 서열을 함유하고, 여기서 서열 1에 따른 계수에서의 변경은
i. 3번 위치에 트레오닌(3T),
ii. 4번 위치에 이소류신(4I),
iii. 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
iv. 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
v. 188번 위치에 프롤린(188P),
vi. 193번 위치에 메티오닌(193M),
vii. 199번 위치에 이소류신(199I),
viii. 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
ix. 아미노산 (i) 내지 (viii)의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 프로테아제
로 이루어진 군으로부터 선택된 프로테아제, 및
(b) 셀룰라제
를 함유하는 액상 세척 또는 세정제이다.
이러한 프로테아제는 매우 특히 바람직하게는 본 발명에 따른 액상 세척 또는 세정제에 포함된다. 서열 1로부터 출발하여, 99번 위치에 있는 아미노산 아르기닌을, 서열 1에 따른 계수에서, 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D) 또는 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q) 또는 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)으로 치환함으로써, 이것을 수득한다. 이러한 아미노산 서열은 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 및 서열 8로서 서열 프로토콜에 열거되어 있다. 더욱이, 이러한 프로테아제는, 99번 위치에 제공된 아미노산 외에도, 정렬 서열 1과 일치하는, 및 따라서 서열 1에 따른 계수에서, 3, 4, 61, 154, 188, 193, 199 및 211 번 위치에 전술된 아미노산들 중 하나 이상을 가질 수 있다. 이러한 위치에 대해 언급된 아미노산은 또한 추가의 이로운 성질을 제공하고/하거나 심지어는 이러한 프로테아제와 함께 이미 존재하는 성질을 강화시킨다. 특히, 이것은 액상 세척 또는 세정제 또는 이러한 세척 또는 세정제에 의해 형성된 세척액에서의 프로테아제의 단백질 분해 활성 및/또는 안정성을 증가시킨다. 모든 상기 실시양태는, 해당된다면, 이러한 특히 바람직한 프로테아제에 상응하게 적용된다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제는, 프로테아제를, 활성 단백질을 기준으로, 점점 바람직하게는, 1 × 10-8 내지 5 중량%, 0.0001 내지 1 중량%, 0.0005 내지 0.5 중량%, 0.001 내지 0.1 중량%, 특히 바람직하게는 0.001 내지 0.06 중량%의 양으로 포함한다. 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는, 셀룰라제를, 활성 단백질을 기준으로, 점점 바람직하게는, 1 × 10-8 내지 5 중량%, 0.0001 내지 1 중량%, 0.00005 내지 0.5 중량%, 0.0001 내지 0.1 중량%, 특히 바람직하게는 0.0001 내지 0.065 중량%의 양으로 포함한다. 단백질 농도를, 공지된 방법, 예를 들어 BCA 공정(비신코닌산; 2,2'-비퀴놀릴-4,4'-디카르복실산) 또는 비우레트 공정(문헌[A. G. Gornall, C. S. Bardawill and M. M. David, J. Biol. Chem., 177 (1948), pp. 751-766])을 사용하여 결정할 수 있다. 이와 관련해서, 활성 단백질 농도를, 적합한 비가역적 억제제(프로테아제의 경우, 예를 들어 페닐 메틸 술포닐 플루오라이드(PMSF))의 존재 하에서 활성 중심을 적정하고, 잔여 활성을 측정함으로써, 결정한다(문헌[M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24(1966), pp. 5890-5913]을 참고).
프로테아제 및/또는 셀룰라제를 조기 분해로부터 보호하기 위해서, 운반체 상에 흡착시키고/시키거나 캡슐 내에 넣을 수도 있다. 그러면, 세척액 내에서, 즉 사용 조건에서, 효소는 방출되고 그의 촉매 활성을 발달시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 세척 또는 세정제는 추가로,
i. 음이온성 및/또는 다중음이온성(polyanionic) 물질, 및/또는
ii. 양이온성 및/또는 다중양이온성(polycationic) 물질, 및/또는
iii. 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 갖는 물질
로부터 선택된 성분을 포함한다.
이러한 물질의 첨가로 인해, 특히 비교적 저온에서, 특히 10℃ 내지 50℃, 10℃ 내지 40℃, 10℃ 내지 30℃ 및/또는 20℃ 내지 40℃에서, 세척 및 세정제, 특히 프로테아제 및 셀룰라제를 포함하는 액상 세척 또는 세정제, 특히 상기에서 기술된 바와 같은 세척 또는 세정제의 세정력이 더욱 개선된다고 결정되었다. 특히 본 발명에 따라 포함될 수 있는 프로테아제와 조합 시에, 특히 하나 이상의 프로테아제-민감성 오물, 특히 상기에 열거된 것의 제거와 관련해서, 상승효과가 일어난다.
상기 i.에서 열거된 물질은 음이온성 또는 다중음이온성 물질과 관계가 있고, 즉 이러한 물질은 하나 이상, 바람직하게는 다수의 음전하를 갖는다. 이것은 바람직하게는 하나 이상의 음으로 하전된 단량체, 바람직하게는 다수의 음으로 하전된 단량체를 함유하는 중합체와 관계가 있다. 따라서, 이러한 본 발명에 따라 바람직한 중합체는 음으로 하전된 중합체이다. 바람직한 예는 유기 산 또는 그의 염의 중합체, 특히 폴리아크릴레이트 및/또는 폴리슈가(polysugar) 산 및/또는 폴리아크릴레이트 공중합체 및/또는 폴리슈가 공중합체이다. 이와 관련해서, 추가의 바람직한 화합물은 폴리아크릴릭 술포네이트 또는 폴리카르복실레이트 및 그의 염, 공중합체 또는 공중합체의 염이다.
특히 바람직하게 첨가되는 예시적인 물질은 아쿠솔(Acusol) 587D(폴리아크릴릭 술포네이트; 롬 앤드 하스(Rohm & Haas)/다우 케미칼(Dow Chemical)), 아쿠솔 445N(폴리카르복실레이트 나트륨 염; 롬 앤드 하스/다우 케미칼), 아쿠솔 590(폴리아크릴레이트 공중합체; 롬 앤드 하스/다우 케미칼), 아쿠솔 916(폴리아크릴레이트 나트륨 염; 롬 앤드 하스/다우 케미칼), 소칼란(Sokalan) CP42(개질된 폴리카르복실레이트 나트륨 염; BASF), 소칼란 PA 30CL(폴리카르복실레이트 나트륨 염; BASF), 데퀘스트(Dequest) P 9000(폴리말레산; 썸포스(Thermphos)), 알긴산, 폴리-2-아크릴아미도-2-메틸-1-프로판 술폰산, 폴리-4-스티렌 술폰산 코-말레산 나트륨 염, 폴리아크릴아미드 코-아크릴산 나트륨 염, 폴리메타크릴산 나트륨 염, 폴리메틸 비닐 에테르-알트-말레산 또는 폴리비닐술폰산 나트륨 염이다.
ii.에서 열거된 물질은 양이온성 또는 다중양이온성 물질과 관계가 있고, 즉 이러한 물질은 하나 이상, 바람직하게는 다수의 양전하를 갖는다. 이것은 바람직하게는 하나 이상의 양으로 하전된 단량체, 바람직하게는 다수의 양으로 하전된 단량체를 함유하는 중합체와 관계가 있다. 따라서, 이러한 본 발명에 따라 바람직한 중합체는 양으로 하전된 중합체이다. 이와 관련해서 예시적인 바람직한 화합물은 폴리아민, 폴리에틸렌 이민 또는 그의 공중합체의 염, 폴리알릴아민의 염, 폴리디알릴디메틸암모늄 화합물 또는 폴리(아크릴아미드-코-디알릴디메틸암모늄 화합물)의 염이다.
iii.에서 열거된 물질은 하나 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기를 갖는 물질, 바람직하게는 다수의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기를 갖는 물질과 관계가 있다. 이와 관련해서, 예를 들어 폴리비닐 알콜, 예를 들어 모위올(Mowiol)(크레머 피그멘테 게엠베하 운트 코 카게(Kremer Pigmente GmbH & Co. KG))이라는 상표명으로서 입수가능한 것이 바람직하다.
이 때, 실제 물질은 상기에 언급된 i. 내지 iii. 군들 중 하나 이상에 속할 수 있다는 것이 명백히 지적된다. 예를 들어, 물질은 하나 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 갖는 음이온성 중합체와 관계가 있을 수 있다. 그러면 이러한 유형의 물질은 i. 및 iii. 군에 속한다. 마찬가지로, 하나 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 갖는 양이온성 중합체는 ii. 및 iii. 군에 속한다.
본 발명의 문맥에서, 마찬가지로, i. ii. 또는 iii.에 속하는 전술된 물질의 유도체를 첨가할 수 있다. 본 출원의 문맥에서, 유도체는, 상기에 언급된 물질들 중 하나로부터 출발해서, 예를 들어 측쇄를 전환시킴 또는 이러한 물질에 또 다른 화합물을 공유결합시킴에 의해 화학적으로 개질된 물질을 의미하는 것으로 이해하도록 한다. 이러한 화합물은 예를 들어 저분자량 화합물, 예컨대 지질 또는 단당류, 올리고당류 또는 다당류, 또는 아민 또는 아민 화합물과 관계가 있을 수 있다. 더욱이, 물질은 당분해, 가수분해, 산화, N-메틸화, N-포르밀화, N-아세틸화될 수 있거나, 메틸, 포르밀, 에틸, 아세틸, t-부틸, 아니실, 벤질, 트리플루오로아세틸, N-히드록시숙신이미드, t-부틸옥시카르보닐, 벤조일, 4-메틸벤질, 티오아니실, 티오크레실, 벤질옥시메틸, 4-니트로페닐, 벤질옥시카르보닐, 2-니트로벤조일, 2-니트로페닐술페닐, 4-톨루엔술포닐, 펜타플루오로페닐, 디페닐메틸, 2-클로로벤질옥시카르보닐, 2,4,5-트리클로로페닐, 2-브로모벤질옥시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 트리페닐메틸, 2,2,5,7,8-펜타메틸-크로만-6-술포닐을 포함할 수 있다. 마찬가지로, 유도체는, 물질이 거대분자 운반체에 공유결합 또는 비-공유결합된 것, 예컨대 적합한 거대분자 케이지(cage) 구조물 내의 비-공유결합 봉입체를 의미하는 것으로 이해하도록 한다. 기타 거대분자 화합물, 예컨대 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜과의 커플링도 수행할 수 있다. 추가의 바람직한 화학적 개질은 -COOH, -OH, =NH, -NH2, -SH 내지 -COOR, -OR, -NHR, -NR2, -NHR, -NR, -SR 화학기들 중 하나 이상의 개질이고, 여기서
R은 -CH=CH-R2, -C=C-R2, -C(R2)=CH2, -C(R2)=C(R3), -CH=NR2, -C(R2)=N-R3, 치환기를 갖거나 갖지 않는 4-7 탄소 고리 시스템, 치환기를 갖거나 갖지 않는 4-7 질소 헤테로사이클, R1, R2 또는 R3으로부터 선택된 치환기를 갖는 1 내지 5 개의 이중 또는 삼중 결합을 갖는 C2 내지 C8 탄소쇄이고, 여기서
-R1은 H, -R, -NO2, -CN, 할라이드 치환기, -N3, -C1 -8 알킬, -(CH2)nCO2R2, -C2-8 알케닐-CO2R2, -O(CH2)nCO2R2, -C(O)NR2R3, -P(O)(OR2)2, 알킬 치환된 테트라졸-5-일, -(CH2)nO(CH2)n아릴, -NR2R3, -(CH2)nOR2, -(CH2)nSR2, -N(R2)C(O)R3, -S(O2)NR2R3, -N(R2)S(O2)R3, -(CHR2)nNR2R3, -C(O)R3, (CH2)nN(R3)C(O)R3, -N(R2)CR2R3, 치환되거나 치환되지 않은 (CH2)n-시클로알킬, 치환되거나 치환되지 않은 (CH2)n-페닐, 또는 -고리이고; 여기서 n은 1 초과의 수이고;
-R2는 H, 할라이드 치환기, -알킬, -할로알킬, -(CH2)n-페닐, -(CH2)1-3-비페닐, -(CH2)1-4-Ph-N(SO2-C1 -2-알킬)2, -CO(CHR1)n-OR1, -(CHR1)n-헤테로사이클, -(CHR1)n-NH-CO-R1, -(CHR1)n-NH-SO2R1, -(CHR1)n-Ph-N(SO2-C1 -2-알킬)2, -(CHR1)n-C(O)(CHR1)-NHR1, -(CHR1)n-C(S)(CHR1)-NHR1, -(CH2)nO(CH2)nCH3, -CF3, -C2-C5 아실, -(CHR1)nOH, -(CHR1)nCO2R1, -(CHR1)n-O-알킬, -(CHR1)n-O-(CH2)n-O-알킬, -(CHR1)n-S-알킬, -(CHR1)n-S(O)-알킬, -(CHR1)n-S(O2)-알킬, -(CHR1)n-S(O2)-NHR3, -(CHR3)n-N3, -(CHR3)nNHR4, 1 내지 5 개의 이중결합을 갖는 C2 내지 C8 쇄 알켄, 1 내지 5 개의 삼중결합을 갖는 C2 내지 C8 쇄 알킨쇄, 치환되거나 치환되지 않은 -(CHR3)n 헤테로사이클, 치환되거나 치환되지 않은 포화 또는 불포화 -(CHR3)n 시클로알킬이고; 여기서 n은 1 초과의 수이고, R1 및 R3은 동일하거나 상이할 수 있고;
-R3은 H, -OH, -CN, 치환된 알킬, -C2 내지 C8 알케닐, 치환되거나 치환되지 않은 시클로알킬, -N(R1)R2, 4 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 C5 내지 C7 헤테로사이클 또는 헤테로바이사이클, 4 내지 7개의 탄소 원자의 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 헤테로바이사이클로 이루어진 -NR1, -NR2, -NR1R2이고;
-R4는 H, -(CH2)nOH, -C(O)OR5, -C(O)SR5, -(CH2)nC(O)NR6R7, -O-C(O)-O-R6, 아미노산 또는 펩티드이고; 여기서 n은 0 내지 4의 수이고;
-R5는 H이고;
-R6는 -C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-R8, -(CH2)n-C(R7)-O-C(O)R8, -(CH2)n-C(R7)-O-C(O)-O-R8, 또는 -C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-O-R8이고; 여기서 n은 0 내지 4의 수이고;
-R7 및 R8은 각각 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 알킬아릴, 치환된 알킬아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 또는 CH2CO2알킬이고, 여기서 R7 및 R8은 동일하거나 상이할 수 있다.
본 발명에 따라 i. ii. 또는 iii.에 속하는 상기에 언급된 물질 및/또는 그의 유도체의 모든 가능한 조합을 사용할 수도 있다.
본 발명에 따른 액상 세척 또는 세정제를 그대로 사용하거나, 특히 직물 및/또는 경질 표면의 세정을 위해서는, 물로써 희석한 후에 사용할 수 있다. 이러한 희석액을, 측정된 양의 세척 또는 세정제를 세척 또는 세정제:물의 특정 중량비로 추가량의 물에 희석시키고, 세척 또는 세정제가 물에 균일하게 분포되는 것을 보장하기 위해서 임의로 진탕함으로써, 용이하게 제조할 수 있다. 희석액을 위한 가능한 중량 또는 부피 비는 1:0 세척 또는 세정제:물 내지 1:10000 또는 1:20000 세척 또는 세정제:물, 바람직하게는 1:10 내지 1:2000 세척 또는 세정제:물이다.
모든 액상 또는 자유-유동 제형이 액상 세척 또는 세정제로서 사용될 수 있다. 본 출원의 문맥에서, "자유-유동"은, 제제가 유동성이고 수 10,000 mPas 이하의 점도를 가질 수 있음을 의미하는 것으로 이해하도록 한다. 점도를 표준 방법을 사용하여 측정할 수 있고(예를 들어 20 rpm 및 20℃에서 브룩필드-비스코시메터(Brookfield-Viscosimeter) LVT-II, 스핀들 3을 사용함), 점도는 바람직하게는 5 내지 10,000 mPas의 범위이다. 바람직한 세척 또는 세정제는 10 내지 8000 mPas, 특히 바람직하게는 120 내지 3000 mPas의 점도를 갖는다. 따라서 본 발명의 문맥에서, 액상 세척 또는 세정제는 겔 형태 또는 패이스트 형태일 수도 있고, 균질한 용액 또는 현탁액일 수 있고, 이것을 예를 들어 분무할 수 있거나 기타 통상적인 제형으로 포장할 수 있다. 세척제는 모든 고려될 수 있는 유형의 세척제, 특히 직물, 카페트 또는 천연섬유를 위한 세척제를 포함한다. 이것을 수동 및/또는 자동 사용을 위해 제공할 수 있다. 세척제는, 또 다른 효과를 달성하기 위해서, 수동 또는 자동 직물 세척의 과정에서 실제 세척제 내에 계량 투입되는 세척 보조제를 추가로 포함한다. 세정제는 마찬가지로, 경질 표면을 세정 및/또는 살균하기 위한 임의의 언급된 제형의 모든 세정제, 수동 및 자동 식기세척기 세제, 카페트 세정제, 정련제, 유리 세정제, WC-방향 린스 등을 포함한다. 직물 전- 및 후-컨디셔너는, 한편으로는, 예를 들어 처리가 어려운 오물을 부분적으로 용해시키기 위해서, 실제 세척 전에 세척물과 접촉하는 물질이고, 다른 한편으로는 실제 직물 세척 후의 단계에서 세척물에 추가의 바람직한 성질, 예컨대 좋은 감촉, 구김 없음 또는 낮은 잔여 정전기를 부여하는 물질이다. 마지막으로 언급된 컨디셔너는 특히 직물 유연제를 포함한다. 살균제는 예를 들어 임의의 언급된 제형일 수도 있는 손 살균제, 표면 살균제 및 장비 살균제를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 세척 또는 세정제는 하나 이상의 추가의 성분, 특히 포스포네이트, 계면활성제, 빌더(builder), 비-수성 용매, 산, 수용성 염, 증점제 뿐만 아니라 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 함유한다.
포스포네이트는 포스폰산의 염 및 유기 화합물, 특히 에스테르이다. 염은 1급 포스포네이트(M'H2PO3 또는 HP(O)(OH)(OM')) 및 2급 포스포네이트(M'2HPO3 또는 HP(O)(OM')2)(여기서 M'은 1가 금속을 나타냄)로서 존재한다. 이러한 무기 포스포네이트는 1급 또는 2급 포스파이트라고도 불린다. 예를 들어 포스폰산 HP(O)(OH)2, 특히 아인산의 안정한 호변이성질체 형태를 1당량의 (1급) 염기 또는 2당량의 (2급) 염기, 예를 들어 알칼리금속 수산화물과 반응시킴으로써, 무기 포스포네이트를 제조한다. 본 발명의 문맥에서, 인-탄소 결합을 갖는 유기 P-치환된 포스포네이트가 바람직하다(유기인 화합물). 그의 일반식은 R1P(O)(OR2)2(여기서 R1 및/또는 R2는 알킬, 아릴 또는 H이고, 여기서 알킬 또는 아릴 기는 추가로 치환되거나 추가의 화학기를 가질 수 있음)이다. 유기 P-치환된 포스포네이트를 예를 들어 미카엘리스-아르부소브(Michaelis-Arbusov) 반응을 통해 형성한다. 이러한 포스포네이트들 중 많은 것들이 수용성이다. 몇몇 산업적으로 중요한 포스포네이트는 NR-(CH2)x-PO(OH)2(R은 알킬, 아릴 또는 H임)의 유형의 추가의 아미노기(들)를 갖는다. 이러한 아미노 포스포네이트들 중 몇몇은 EDTA, NTA 또는 DTPA와 같은 착물과 구조적으로 유사하고 유사한 기능을 갖는다. 본 발명의 문맥에서, 특히 바람직한 포스포네이트는 특히, 주로 암모늄 또는 알칼리금속 염의 형태로 첨가되는, 오르가노포스포네이트, 예컨대, 예를 들어, 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산(HEDP), 아미노트리(메틸렌 포스폰산)(ATMP, 아미노-트리스(메틸렌 포스폰산) 또는 니트롤로트리스(메틸렌 포스폰산)(NTMP)이라고도 불림), 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌 포스폰산)(DTPMP 또는 DETPMP 또는 DTPNT), 에틸렌디아민테트라(메틸렌 포스폰산)(EDTMP, 에틸렌디아민테트라(메틸렌 포스폰산)이라고도 불림) 및 2-포스포노부탄-1,2,4-트리카르복실산(PBS-AM, 2-포스포노부탄-1,2,4-트리카르복실산 또는 3-카르복시-3-포스포노아디프산이라고도 불림)을 포함한다. 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌 포스폰산) 나트륨 염이 특히 바람직하다. 이러한 포스포네이트는 예를 들어 데퀘스트® 2066(썸포스 캄파니)이라는 상표명으로서 입수가능하다.
포스포네이트는 바람직하게는 세척 또는 세정제 내에 0.01 내지 2.5 중량%, 점점 바람직하게는 0.02 내지 2 중량%, 0.03 내지 1.5 중량%, 특히 0.05 내지 1 중량%의 양으로 포함된다.
음이온성, 비-이온성, 쯔비터이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제를 계면활성제(들)로서 첨가할 수 있다. 음이온성 계면활성제와 비-이온성 계면활성제의 혼합물이 산업적 응용이라는 관점에서 바람직하다. 액상 세척 또는 세정제의 총 계면활성제 함량은, 총 액상 세척 또는 세정제를 기준으로, 바람직하게는 60 중량% 미만, 특히 바람직하게는 45 중량% 미만이다.
적합한 비-이온성 계면활성제는 알콕실화 지방 알콜, 알콕실화 지방산 알킬 에스테르, 지방산 아미드, 알콕실화 지방산 아미드, 폴리히드록시지방산 아미드, 알킬페놀 폴리글리콜 에테르, 아민 옥시드, 알킬 폴리글루코시드 및 이들의 혼합물을 포함한다.
바람직한 비-이온성 계면활성제는, 바람직하게는 8 내지 18 개의 탄소 원자 및 평균적으로 알콜 1 몰당 1 내지 12 몰의 에틸렌 옥시드(EO)를 함유하는 알콕실화된, 유리하게는 에톡실화된, 특히 1급 알콜이고, 여기서 알콜기는 선형일 수 있거나, 바람직하게는 2번 위치에 메틸-분지화될 수 있거나, 예를 들어 전형적으로 옥소 알콜 잔기 내에 존재하는 혼합물 형태의 선형 및 메틸-분지화 기를 함유할 수 있다. 그러나, 특히, 평균적으로 알콜 1몰 당 2 내지 8 개의 EO를 갖는, 천연물로부터 유래된, 예를 들어 코코-, 팜-, 탈로우- 또는 올레일 알콜로부터 유래된, 12 내지 18 개의 탄소 원자를 갖는 선형 알콜기를 갖는 알콜 에톡실레이트가 바람직하다. 예시적인 바람직한 에톡실화 알콜은 3개의 EO 또는 4개의 EO를 갖는 C12-14 알콜, 7개의 EO를 갖는 C9-11 알콜, 3개의 EO, 5개의 EO, 7개의 EO 또는 8개의 EO를 갖는 C13-15 알콜, 3개의 EO, 5개의 EO 또는 7개의 EO를 갖는 C12-18 알콜 및 이들의 혼합물, 예컨대 3개의 EO를 갖는 C12-14 알콜과 5개의 EO를 갖는 C12-18 알콜의 혼합물을 포함한다. 언급된 에톡실화도는 특정 생성물에 대한 정수 또는 분수일 수 있는 통계학적 평균값이다. 바람직한 알콜 에톡실레이트는 좁은 상동체 분포를 갖는다(좁은 범위 에톡실레이트, NRE). 이러한 비-이온성 계면활성제 외에도, 12개 초과의 EO를 갖는 지방 알콜도 사용될 수 있다. 이것의 예는 14개의 EO, 25개의 EO, 30개의 EO 또는 40개의 EO를 갖는 탈로우 지방 알콜이다. 또한, 분자 내에 EO 기와 PO 기를 함께 포함하는 비-이온성 계면활성제가 본 발명에 따라 사용될 수 있다. (고도로) 분지화된 에톡실화 지방 알콜과 선형 에톡실화 지방 알콜의 혼합물, 예컨대 예를 들어 7개의 EO를 갖는 C16-18 지방 알콜과 7개의 EO를 갖는 2-프로필헵탄올의 혼합물도 추가로 적합하다. 세척제, 세정제, 후처리제 또는 보조 세척제는 특히 바람직하게는 비-이온성 계면활성제로서 7개의 EO를 갖는 C12-18 지방 알콜 또는 7개의 EO를 갖는 C13-15 옥소 알콜을 포함한다.
세척 또는 세정제 내의 비-이온성 계면활성제의 함량은, 각각의 경우에 총 세척 또는 세정제를 기준으로, 바람직하게는 3 내지 40 중량%, 유리하게는 5 내지 30 중량%, 특히 7 내지 20 중량%이다.
비-이온성 계면활성제 외에도, 세척 또는 세정제는 음이온성 계면활성제도 포함할 수 있다. 술포네이트, 술페이트, 비누, 알킬 포스페이트, 음이온성 실리코-계면활성제 및 이들의 혼합물이 바람직하게는 음이온성 계면활성제로서 사용된다.
술포네이트 유형의 적합한 계면활성제는 유리하게는 C9-13 알킬벤젠 술포네이트, 올레핀 술포네이트, 즉 예를 들어 말단 또는 내부 이중결합을 갖는 C12-18 모노올레핀으로부터, 기체상 삼산화황에 의한 술폰화 및 이어서 술폰화물의 알칼리성 또는 산성 가수분해에 의해 수득된 바와 같은, 알켄 및 히드록시알칸 술포네이트 및 디술포네이트의 혼합물이다. C12-18 알칸 술포네이트의 에스테르 및 α-술포지방산의 에스테르(에스테르 술포네이트), 예를 들어 수소화 코코-, 팜너트- 또는 탈로우 산의 α-술폰화 메틸 에스테르도 마찬가지로 적합하다.
바람직한 알킬(알케닐) 술포네이트는 C12-C18 지방 알콜, 예를 들어 코코넛 버터 알콜, 탈로우 알콜, 라우릴, 미리스틸, 세틸 또는 스테아릴 알콜 또는 C10-C20 옥소 알콜로부터 유도된 황산 절반-에스테르의 알칼리금속염 및 특히 나트륨염, 및 이러한 쇄 길이를 갖는 2급 알콜의 절반-에스테르이다. C12-C16 알킬 술페이트 및 C12-C15 알킬 술페이트 뿐만 아니라 C14-C15 알킬 술페이트는 세척 성능을 갖기 때문에 바람직하다. 2,3-알킬 술페이트도 적합한 음이온성 계면활성제이다.
1 내지 6 몰의 에틸렌 옥시드로써 에톡실화된 직쇄 또는 분지화 C7-21 알콜, 예를 들어 평균 3.5 몰의 에틸렌 옥시드(EO)를 갖는 2-메틸-분지화 C9-11 알콜 또는 1 내지 4 개의 EO를 갖는 C12-18 지방 알콜로부터 유도된 황산 모노-에스테르도 적합하다.
비누도 바람직한 음이온성 계면활성제이다. 포화 및 불포화 지방산 비누, 예컨대 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, (수소화) 에루스산 및 베헨산의 염, 및 특히 천연 지방산, 예컨대 코코넛 오일 지방산, 팜커널 오일 지방산, 올리브 오일 지방산 또는 탈로우 지방산으로부터 유도된 비누 혼합물이 적합하다.
비누를 포함하여, 음이온성 계면활성제가, 그의 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 암모늄 염의 형태로 존재할 수 있다. 음이온성 계면활성제는 바람직하게는 그의 나트륨 염의 형태로 존재한다. 음이온성 계면활성제를 위한 추가의 바람직한 상대이온은 콜린, 트리에틸아민 또는 메틸에틸아민의 양성자화된 형태이다.
세척 또는 세정제 내의 음이온성 계면활성제의 함량은, 각각의 경우에 총 세척 또는 세정제를 기준으로, 1 내지 40 중량%, 유리하게는 5 내지 30 중량%, 매우 특히 바람직하게는 10 내지 25 중량%이다.
규산염, 규산알루미늄(특히 제올라이트), 탄산염, 유기 디- 및 폴리카르복실산의 염 뿐만 아니라 이러한 물질들의 혼합물이 특히 세척 또는 세정제 내에 포함되는 빌더로서 언급될 수 있다.
세척 또는 세정제 내에 존재할 수 있는 유기 빌더는, 예를 들어, 나트륨염의 형태로 사용가능한 폴리카르복실산이고, 이러한 문맥에서 폴리카르복실산은 하나 초과의 산 관능기를 갖는 카르복실산인 것으로 이해하도록 한다. 이것은, 예를 들어, 시트르산, 아디프산, 숙신산, 글루타르산, 말산, 타르타르산, 말레산, 푸마르산, 슈가 산, 아미노 카르복실산, 니트릴로트리아세트산(NTA), 메틸글리신 디아세트산(MGDA) 및 이들의 유도체 및 혼합물을 포함한다. 바람직한 염은 시트르산, 아디프산, 숙신산, 글루타르산, 타르타르산, 슈가 산 및 이들의 혼합물과 같은 폴리카르복실산의 염이다.
중합체성 폴리카르복실레이트도 빌더로서 적합하다. 이것은 예를 들어 폴리아크릴산 또는 폴리메타크릴산의 알칼리금속염, 예를 들어 600 내지 750,000 g/mol의 상대분자량을 갖는 것이다.
특히 적합한 중합체는 바람직하게는 1000 내지 15,000 g/mol의 분자량을 갖는 폴리아크릴레이트이다. 그의 탁월한 용해도 덕분에, 이러한 군의 바람직한 대표물은 역시 1000 내지 10,000 g/mol, 특히 바람직하게는 1000 내지 5000 g/mol의 분자량을 갖는 단쇄 폴리아크릴레이트일 수 있다.
추가의 적합한 공중합체성 폴리카르복실레이트는 특히 아크릴산과 메타크릴산의 공중합체성 폴리카르복실레이트 및 아크릴산 또는 메타크릴산과 말레산의 공중합체성 폴리카르복실레이트이다. 수용해도를 개선하기 위해서, 중합체는 단량체로서 알릴 술폰산, 예컨대 알릴옥시벤젠 술폰산 및 메탈릴 술폰산을 포함할 수도 있다.
그러나, 가용성 빌더, 예컨대 예를 들어 시트르산이 바람직하고, 또는 1000 내지 5000 g/mol의 분자량을 갖는 아크릴성 중합체가 액상 세척 또는 세정제 내로 바람직하게 첨가된다.
본 명세서의 문맥에서 중합체성 폴리카르복실레이트에 대해 언급된 분자량은 근본적으로 자외선 검출기를 사용한 겔 투과 크로마토그래피(GPC)에 의해 결정된 특정 산 형태의 중량-평균분자량 Mw이다. 측정을 외부 폴리아크릴산 표준물에 대해 수행하였고, 폴리아크릴산 표준물은 연구된 중합체와 구조적으로 유사하기 때문에 실제적인 분자량값을 제공한다. 이러한 값은 표준물로서 폴리스티렌 술폰산에 대해 측정된 분자량과 상당히 상이하다. 폴리스티렌 술폰산에 대해 측정된 분자량은 일반적으로 본 명세서에서 언급된 분자량보다 훨씬 더 높다.
이러한 유형의 유기 빌더는 40 중량% 이하, 특히 25 중량% 이하, 바람직하게는 1 중량% 내지 8 중량%의 양으로 원하는 대로 포함될 수 있다. 언급된 상한에 가까운 양이 바람직하게는, 패이스트질 또는 액상의, 특히 수성인 조성물 내로 포함된다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 액상이고 바람직하게는 주용매로서 물을 포함한다. 또한, 비-수성 용매를 세척 또는 세정제에 첨가할 수 있다. 적합한 비-수성 용매는, 이것이 특정 농도 범위 내에서 물과 혼화되는 한, 1가 또는 다가 알콜, 알칸올아민 또는 글리콜 에테르를 포함한다. 용매는 바람직하게는 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, 부탄올, 글리콜, 프로판 디올, 부탄 디올, 글리세린, 디글리콜, 프로필 디글리콜, 부틸 디글리콜, 헥실렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메틸 에테르, 에틸렌 글리콜 에틸 에테르, 에틸렌 글리콜 프로필 에테르, 에틸렌 글리콜 모노-n-부틸 에테르, 디에틸렌 글리콜 메틸 에테르, 디에틸렌 글리콜에틸 에테르, 프로필렌글리콜메틸 에테르, 프로필렌 글리콜 에틸 에테르, 프로필렌 글리콜 프로필 에테르, 디프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 디프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르, 디-이소프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 디-이소프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르, 메톡시트리글리콜, 에톡시트리글리콜, 부톡시트리글리콜, 1-부톡시에톡시-2-프로판올, 3-메틸-3-메톡시부탄올, 프로필렌 글리콜 t-부틸 에테르, 디-n-옥틸 에테르 뿐만 아니라 이러한 용매들의 혼합물로부터 선택된다. 그러나, 세척 또는 세정제는 비-수성 용매로서 폴리올을 포함하는 것이 바람직하다. 특히, 폴리올은 글리세린, 1,2-프로판 디올, 1,3-프로판 디올, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜 및/또는 디프로필렌 글리콜을 포함할 수 있다. 세척 또는 세정제는 특히 바람직하게는 폴리올과 1가 알콜의 혼합물을 포함한다. 비-수성 용매를 0.5 내지 15 중량%, 그러나, 바람직하게는, 12 중량% 미만의 양으로 세척 또는 세정제에 첨가할 수 있다.
통상적인 성분들의 혼합으로부터 초래된 pH를 원하는 수준으로 조절하기 위해서, 세척 또는 세정제는 시스템 및 환경과 상용성인 산, 특히 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 말산, 락트산, 글리콜산, 숙신산, 글루타르산 및/또는 아디프산 뿐만 아니라, 무기 산, 특히 황산, 또는 염기, 특히 수산화암모늄 또는 알칼리금속 수산화물을 포함할 수 있다. 이러한 유형의 pH 조절제는 바람직하게는 20 중량% 이하, 특히 1.2 중량% 내지 17 중량%의 양으로 세척 또는 세정제 내에 포함된다.
본 발명의 문맥에서, 세척 또는 세정제는 예를 들어 점도를 조절하는 역할을 하는 하나 이상의 수용성 염을 추가로 포함할 수 있다. 이와 관련해서 이것은 무기 또는 유기 염일 수 있다. 여기서, 포함될 수 있는 무기 염은 바람직하게는 알칼리금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및/또는 전이금속의 무색 수용성 할라이드, 황산염, 아황산염, 탄산염, 탄산수소, 질산염, 아질산염, 인산염 및/또는 산화물을 포함하는 군으로부터 선택되고, 또한 암모늄염이 포함될 수 있다. 이와 관련해서, 알칼리금속의 할라이드 및 황산염이 특히 바람직하고, 따라서, 무기 염은 바람직하게는 염화나트륨, 염화칼륨, 황산나트륨, 황산칼륨 뿐만 아니라 이들의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된다. 포함될 수 있는 예시적인 유기 염은 카르복실산의 무색 수용성 알칼리금속, 알칼리토금속, 암모늄, 알루미늄 및/또는 전이금속 염이다. 염은 바람직하게는 포름산염, 아세트산염, 프로피온산염, 시트르산염, 말레산염, 타르타르산염, 숙신산염, 말론산염, 옥살산염, 락트산염 뿐만 아니라 이들의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 그것을 증점시키는 하나 이상의 증점제를 포함할 수 있다. 증점제는 바람직하게는 크산탄, 구아, 카라기난, 아가 아가, 겔란, 펙틴, 로커스트콩 가루 및 이들의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된다. 이러한 화합물은 무기 염의 존재하에서 효과적인 증점제이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 세척 또는 세정제는 크산탄을 증점제로서 포함하는데, 왜냐하면 크산탄은 심지어는 높은 염 농도에서도 효과적으로 증점시키고 연속상의 거시적 분리를 방지하기 때문이다. 또한, 증점제는 계면활성제를 적게 갖는 연속상을 안정화시키고 거시적 상분리를 방지한다.
또 다르게는, (메트)아크릴산 (공)중합체도 증점제로서 사용할 수 있다. 예시적인 적합한 아크릴성 및 메타크릴성 공중합체는, 카르복시비닐 중합체라고도 불리는, 폴리알케닐 폴리에테르로써 가교된, 특히 자당, 펜타에리트리톨 또는 프로필렌의 알릴 에테르로써 가교된, 아크릴산의 고분자량 단독중합체를 포함한다(미국화장품협회(The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association(CTFA))의 국제화장품원료집("International Dictionary of Cosmetic Ingredients")에 따른 INCI명: 카르보머(Carbomer)). 이러한 유형의 폴리아크릴산은 특히 폴리겔(Polygel)® 및 카르보폴(Carbopol)®이라는 상표명으로서 입수가능하다. 또한, 하기 아크릴산 공중합체, 예를 들어 (i) 예를 들어, 아쿨린(Aculyn)®, 아쿠솔(Acusol)® 또는 테고(Tego)® 폴리머(Polymer)라는 상표명으로서 입수가능한, 아크릴산, 메타크릴산, 및 그의 단순 에스테르, 바람직하게는 C1-4 알칸올과의 그의 단순 에스테르의 군으로부터 선택된 둘 이상의 단량체들의 공중합체(INCI 아크릴레이트 공중합체); (ii) 예를 들어, 카르보폴®이라는 상표명으로서 입수가능한, 자당 또는 펜타에리트리톨의 알릴 에테르로써 가교된, 아크릴산, 메타크릴산, 및 그의 단순 에스테르, 바람직하게는 C1-4 알칸올과의 그의 단순 에스테르의 군으로부터 선택된 하나 이상의 단량체와 C10-30 알킬 아크릴레이트의 공중합체(INCI 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머)가 속하는, 가교된 고분자량 아크릴산 공중합체가 적합하다. 추가의 적합한 중합체는 소칼란® 유형의 (메트)아크릴산 (공)중합체이다.
본 발명의 세척 또는 세정제는 (메트)아크릴산 (공)중합체와 또 다른 증점제, 바람직하게는 크산탄의 조합을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 세척 또는 세정제는 각각 총 세척 또는 세정제를 기준으로, 0.05 내지 1.5 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%의 증점제를 포함할 수 있다. 이와 관련해서, 첨가되는 증점제의 양은 증점제의 유형 및 원하는 증점 정도에 따라 달라진다.
표준 용매 중의 용액의 형태로서의, 본 발명의 액상 또는 패이스트질 세척 또는 세정제를, 일반적으로는, 그대로 또는 용액으로서 자동 혼합기에 첨가될 수 있는 성분들을 단순히 혼합함으로써 제조한다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 오로지 기술된 바와 같은 프로테아제 및 셀룰라제만을 포함할 수 있다. 또 다르게는, 이것은 세척 또는 세정제의 활성에 적당한 농도의 추가의 가수분해 효소 또는 기타 효소도 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 대상은 추가로 하나 이상의 추가의 효소를 함유하는 세척 또는 세정제에 의해 예시되며, 여기서 원칙적으로는 종래기술에서 이러한 목적을 위해 발견된 모든 효소를 첨가할 수 있다. 본 발명에 따른 세척 또는 세정제에서 촉매 활성을 발달시킬 수 있는 모든 효소, 특히 프로테아제, 아밀라제, 셀룰라제, 헤미셀룰라제, 만난아제, 탄나제, 크실라나제, 크산타나제, β-글루코시다제, 펙티나제, 카라기나제, 퍼히드롤라제, 옥시다제, 옥시도리덕타제 또는 리파제 뿐만 아니라 이들의 혼합물이 바람직하게는 추가의 효소로서 포함될 수 있다. 추가의 효소는 각각 유리하게는 활성 단백질을 기준으로 1 × 10-8 내지 5 중량%의 총량으로 세척 또는 세정제 내에 포함된다. 각각의 추가의 효소는, 활성 단백질을 기준으로, 점점 바람직하게는, 1 × 10-7 내지 3 중량%, 0.00001 내지 1 중량%, 0.00005 내지 0.5 중량%, 0.0001 내지 0.1 중량%, 특히 바람직하게는 0.0001 내지 0.05 중량%의 양으로 본 발명에 따른 세척 또는 세정제 내에 포함된다. 효소는 특히 바람직하게는 특정 오물 또는 얼룩에 대해 상승효과적 세정력을 나타내는데, 즉 세척 또는 세정 조성물 내에 포함된 효소들은 그의 세정력에 있어서 서로 돕는다. 이러한 상승효과는 매우 특히 바람직하게는 본 발명에 따라 포함된 프로테아제와 본 발명에 따른 세척 또는 세정제의 또 다른 효소 사이에, 특히 언급된 프로테아제와 셀룰라제 및/또는 리파제 및/또는 만난아제 및/또는 아밀라제 및/또는 펙티나제 사이에 존재한다. 상승효과는 다양한 효소들 사이에서 뿐만 아니라, 하나 이상의 효소와, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제의 추가의 성분 사이에서도 나타날 수 있다.
본 발명의 또 다른 대상은, 직물 또는 경질 표면 상의 오물, 특히 프로테아제-민감성 및/또는 셀룰라제-민감성 오물의 제거, 즉 직물 또는 경질 표면의 세정에 있어서의, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제의 용도로서 나타내어진다. 특히, 포함된 프로테아제와 셀룰라제의 조합으로 인해, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제는 직물 또는 경질 표면으로부터 상응하는 오염을 제거하기 위해 상기 목적을 위해 유리하게 사용될 수 있다. 손으로써 세척함으로써, 직물 또는 경질 표면으로부터 얼룩을 수동 제거하거나 자동 공정과 함께 사용하는 것은, 본 발명의 이러한 대상의 예시적인 실시양태이다. 본 발명에 따른 세척 또는 세정제에 대해 기술된 모든 사실, 대상 및 실시양태가 본 발명의 이러한 대상에도 적용될 수 있다. 따라서, 개시내용은, 이것이 본 발명에 따른 상기 용도에 대해서도 들어맞는다고 언급된 적당한 부분에서, 본원에서 명백히 참고된다.
본 발명의 또 다른 대상은, 본 발명에 따른 세척 또는 세정제를 하나 이상의 공정 단계에서 사용하는, 직물 또는 경질 표면을 세정하는 방법으로서 나타내어진다.
이러한 방법은 수동 방법과 자동 방법 둘 다를 포함하고, 자동 방법이 예를 들어 첨가량 및 접촉 시간과 관련해서 보다 정밀하게 제어가능하기 때문에 바람직하다. 직물의 세정 공정은 일반적으로, 다양한 세정-활성 물질을 다수의 공정 단계에서 세정될 물질에 도포하고, 접촉 시간 후, 씻어 없애거나, 세정될 물질을 임의의 기타 방식으로 세척제 또는 이러한 세척제의 용액 또는 희석액으로써 처리하는 세정 공정이다. 이는 직물 외의 모든 물질, 특히 경질 표면을 세정하는 방법에서도 그러하다. 본 발명에 따른 세척 또는 세정제를 모든 고려할 수 있는 세척 또는 세정 공정의 공정 단계들 중 하나 이상에서 첨가할 수 있고, 따라서, 이러한 공정은 본 발명의 실시양태가 된다. 본 발명에 따른 세척 또는 세정제에 대해 기술된 모든 사실, 대상 및 실시양태가 본 발명의 이러한 대상에도 적용될 수 있다. 따라서, 개시내용은, 이것이 본 발명에 따른 상기 방법에 대해서도 들어맞는다고 언급된 적당한 부분에서, 본원에서 명백히 참고된다.
바람직한 실시양태에서, 방법은, 셀룰라제가 세척액 내에 0.0000004 내지 0.0006 중량%, 바람직하게는 0.0000008 내지 0.00048 중량%의 농도로 존재하고/하거나, 프로테아제가 세척액 내에 0.00009 내지 0.0005 중량%, 바람직하게는 0.00015 내지 0.00035 중량%의 농도로 존재하고, 여기서 데이터는 세척액 내의 활성 단백질을 기준으로 한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 방법을 10℃내지 50℃, 바람직하게는 10℃ 내지 40℃, 특히 바람직하게는 20℃ 내지 40℃의 온도에서 수행한다.
상기 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 세척 및 세정제에 포함되는 프로테아제를 유리하게는 본 발명에 따른 세척 및 세정제에서 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 방법, 특히 세척 및 세정 방법에서 사용할 수 있다. 따라서 이것을 유리하게는 상응하는 세척 및 세정제에 단백질 분해 활성을 제공하기 위해 사용할 수 있다.
따라서, 또 다른 대상은, 추가로 셀룰라제를 함유하는 액상 세척 또는 세정제에 단백질 분해 활성을 제공하는데 있어서,
(a1) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)을 갖는 프로테아제, 또는
(a2) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 아스파라긴(N) 또는 글루타민(Q)을 갖는 프로테아제, 또는
(a3) 서열 1에 열거된 아미노산 서열과 80% 이상 동일한 아미노산 서열을 함유하고 서열 1에 따른 계수에서 99번 위치에 아미노산 알라닌(A) 또는 글리신(G) 또는 세린(S)을 갖는 프로테아제
의 용도이다.
또 다른 실시양태에서, 이러한 용도는, 프로테아제가 서열 1에 따른 계수에서 하기 아미노산들:
(a) 3번 위치에 트레오닌(3T),
(b) 4번 위치에 이소류신(4I),
(c) 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
(d) 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
(e) 188번 위치에 프롤린(188P),
(f) 193번 위치에 메티오닌(193M),
(g) 199번 위치에 이소류신(199I),
(h) 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
(i) 아미노산 (a) 내지 (h)의 조합
중 하나 이상을 추가로 포함하는 것인 용도이다.
본 발명의 또 다른 대상은, 추가로 셀룰라제를 함유하는 액상 세척 또는 세정제에 단백질 분해 활성을 제공하는데 있어서,
a. 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8에 따른 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제;
b. 서열 2 또는 서열 3 또는 서열 4 또는 서열 5 또는 서열 6 또는 서열 7 또는 서열 8 내의 하나 이상의 위치에 변경된 아미노산 서열을 함유하고, 여기서 서열 1에 따른 계수에서의 변경은
i. 3번 위치에 트레오닌(3T),
ii. 4번 위치에 이소류신(4I),
iii. 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
iv. 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
v. 188번 위치에 프롤린(188P),
vi. 193번 위치에 메티오닌(193M),
vii. 199번 위치에 이소류신(199I),
viii. 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
ix. 아미노산 (i) 내지 (viii)의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 프로테아제
로 이루어진 군으로부터 선택된 프로테아제의 용도이다.
본 발명에 따른 세척 또는 세정제에 대해 기술된 모든 사실, 대상 및 실시양태가 이러한 언급된 용도에도 적용될 수 있다. 따라서, 개시내용은, 이것이 본 발명에 따른 상기 용도에 대해서도 들어맞는다고 언급된 적당한 부분에서, 본원에서 명백히 참고된다.
<실시예: 본 발명에 따른 액상 세척제의 저장 안정성의 결정>
세척제 기본 배합물은
a) 하기 조성의 제1 액상 세척제(모든 데이터는 중량%로 나타내어짐): 0.3 내지 0.5% 크산탄, 0.2 내지 0.4% 소포제, 6 내지 7% 글리세린, 0.3 내지 0.5% 에탄올, 4 내지 7% 파에오스(FAEOS)(지방 알콜 에테르 술페이트), 24 내지 28% 비-이온성 계면활성제, 1% 붕산, 1 내지 2% 시트르산나트륨(이수화물), 2 내지 4% 소다, 14 내지 16% 코코넛 지방산, 0.5% HEDP(1-히드록시에탄-(1,1-디포스폰산)), 0 내지 0.4% PVP(폴리비닐 피롤리돈), 0 내지 0.5% 형광증백제, 0 내지 0.001% 착색제, 잔여량의 탈염수(포함된 셀룰라제는 0.15 중량%의 에코스톤 N400®(에이비 엔자임즈 캄파니로부터 입수가능한 셀룰라제 제제)였음),
b) 하기 조성의 제2 액상 세척제:
였다.
다양한 실험적 방안을 위해, 세척제 기본 배합물에 하기 프로테아제를 첨가하였고, 여기서 데이터는 활성 단백질을 기준으로 한다:
방안 1: WO 95/23221에 따른 바실루스 렌투스로부터 유래된 프로테아제의 성능-개선 변이체 F49(99번 위치에 Arg를 함유(99R)): a) 및 b)에 따른 액상 세척제에 0.4 ㎎/㎖(0.04 중량%)의 양으로 첨가.
방안 2: 국제특허출원 WO 03/057713의 도 2에 개시되거나 서열 3에 따른 프로테아제(99번 위치에 Ser을 함유(99S); 서열 1에 대한 동일성 < 80%): a)에 따른 액상 세척제에 0.4 ㎎/㎖(0.04 중량%)의 양으로 첨가하고, b)에 따른 액상 세척제에 0.3 ㎎/㎖(0.03 중량%)의 양으로 첨가.
방안 3: 서열 2에 따른 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제(99번 위치에 Glu를 함유(99E)): a)에 따른 액상 세척제에 0.4 ㎎/㎖(0.04 중량%)의 양으로 첨가하고, b)에 따른 액상 세척제에 0.3 ㎎/㎖(0.03 중량%)의 양으로 첨가.
각 방안 1, 2 및 3에 따른 세척제의 저장 안정성을 시험하였다. 세척제를 30℃의 온도에서 관련 시간 동안 저장하고, 각각의 잔여 셀룰로스 분해 활성을 결정하였다. 시험 샘플을 특정 반응 조건(100 mM 인산나트륨 완충제 pH 7.5, 40℃, 15 분)에서 기질(1.25% 카르복시메틸 셀룰로스)과 함께 인큐베이션하였다. 알칼리성 조건에서 비스무스의 존재 하에서 p-히드록시벤조산 히드라지드(PAHBAH)와 반응시켜, 410 ㎚의 파장에서 측광법으로 결정된 황색 염료를 수득하였다. 변색에 상응하여 방출된 당의 양은 효소 활성의 척도이다(문헌[Lever, Anal. Biochem., 1972, 47 & 1977, 81]을 참고). 측정된 잔여 셀룰로스 분해 활성은 표 1에 열거되어 있다.
세척제에 해당하는 방안 | a) | b) | ||||
초기 | 4주일 | 8주일 | 초기 | 4주일 | 8주일 | |
방안 1 | 100% | 42% | 27% | 100% | 33% | 21% |
방안 2 | 100% | 36% | 24% | 100% | 42% | 24% |
방안 3 | 100% | 46% | 32% | 100% | 49% | 26% |
본 발명의 세척제는 방안 1 내지 2의 세척제에 비해 현저하게 개선된 잔여 셀룰로스 분해 활성 및 따라서 저장 안정성을 나타낸다는 것은 명백하다.
SEQUENCE LISTING
<110> Henkel AG & Co. KGaA
<120> Lagerstabiles fl?siges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend
Protease und Cellulase
<130> H 09326 (PT018971)
<150> DE 102010063457.3
<151> 2010-12-17
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> Bacillus lentus
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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180 185 190
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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<213> Bacillus lentus
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Claims (14)
- 삭제
- 삭제
- (a) a. 서열 2에 따른 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제;
b. 서열 2 내의 하나 이상의 위치에 변경된 아미노산 서열을 함유하고, 여기서 서열 1에 따른 계수에서의 변경은
i. 3번 위치에 트레오닌(3T),
ii. 4번 위치에 이소류신(4I),
iii. 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
iv. 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
v. 188번 위치에 프롤린(188P),
vi. 193번 위치에 메티오닌(193M),
vii. 199번 위치에 이소류신(199I),
viii. 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
ix. 아미노산 (i) 내지 (viii)의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 프로테아제
로 이루어진 군으로부터 선택된 프로테아제, 및
(b) 셀룰라제
를 함유하는 액상 세척 또는 세정제. - 제3항에 있어서, 셀룰라제가 활성 단백질을 기준으로 1 × 10-8 내지 5 중량%의 양으로 포함되고/되거나, 프로테아제가 활성 단백질을 기준으로 1 × 10-8 내지 5 중량%의 양으로 포함되는 것인 세척 또는 세정제.
- 제3항에 있어서,
i. 음이온성 및/또는 다중음이온성 물질, 및/또는
ii. 양이온성 및/또는 다중양이온성 물질, 및/또는
iii. 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 갖는 물질
로부터 선택된 성분을 추가로 함유하는 세척 또는 세정제. - 제3항에 있어서, 하나 이상의 추가의 성분을 함유하는 세척 또는 세정제.
- 제3항에 있어서, 하나 이상의 추가의 효소를 함유하는 세척 또는 세정제.
- 제3항에 있어서, 직물 또는 경질 표면 상의 프로테아제-민감성 오물을 제거하는데 사용되는 세척 또는 세정제.
- 제3항에 따른 세척 또는 세정제를 하나 이상의 공정 단계에서 사용하는, 직물 또는 경질 표면의 세정 방법.
- 제9항에 있어서, 셀룰라제가 세척액 내에 0.0000004 내지 0.0006 중량%의 농도로 존재하고/하거나, 프로테아제가 세척액 내에 0.00009 내지 0.0005 중량%의 농도로 존재하는 것인 방법.
- 제9항에 있어서, 10℃ 내지 50℃의 온도에서 수행하는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 셀룰라제를 함유하는 액상 세척 또는 세정제에 단백질 분해 활성을 제공하기 위해,
a. 서열 2에 따른 아미노산 서열을 함유하는 프로테아제;
b. 서열 2 내의 하나 이상의 위치에 변경된 아미노산 서열을 함유하고, 여기서 서열 1에 따른 계수에서의 변경은
i. 3번 위치에 트레오닌(3T),
ii. 4번 위치에 이소류신(4I),
iii. 61번 위치에 알라닌, 트레오닌 또는 아르기닌(61A, 61T 또는 61R),
iv. 154번 위치에 아스파르트산 또는 글루탐산(154D 또는 154E),
v. 188번 위치에 프롤린(188P),
vi. 193번 위치에 메티오닌(193M),
vii. 199번 위치에 이소류신(199I),
viii. 211번 위치에 아스파르트산, 글루탐산 또는 글리신(211D, 211E 또는 211G),
ix. 아미노산 (i) 내지 (viii)의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 프로테아제
로 이루어진 군으로부터 선택된 프로테아제를 사용하는 방법.
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KR1020137015336A KR101908150B1 (ko) | 2010-12-17 | 2011-12-13 | 프로테아제 및 셀룰라제를 함유하는 저장-안정성 액상 세척 또는 세정제 |
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