KR101893812B1 - 13가지 글리세리드를 포함한 의이인오일, 제제 및 그 응용 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 한가지 의이인중에서 추출한 의이인오일, 제제 및 항암 혹은 염증치료에서의 응용과 유관하다. 구체적으로 말하자면 본 의이인오일 중에는 다음과 같은 질량백분율함량의 5가지 디글리세라이드류 성분과 8가지 트리글리세라이드류 성분이 포함된다. 각각 1,3-디올레인 0.40~0.58%, 1-리놀레인 -3-올레인 0.91~1.31%, 1, 2-디올레인 0.24~0.35%, 1-올레인-2-리놀레인0.66~0.95%, 1, 2-디리놀레인 0.33~0.47%, 트리리놀레인 4.87~6.99%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 13.00~18.69%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.25~7.54%, 1,3-디올레인-2-리놀레인13.23~19.02%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인 10.26~14.75%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.28~3.28%, 트리올레인 14.44~20.76% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 8.06~11.58%이다.
Description
본 발명은 약학분야에 관련되고 구체적으로 말하면 본 발명은 한가지 의이인오일, 제제, 조제방법 및 항암약물을 조제할 때 응용된다.
의이인은 화본과 식물 율무 Coix lacryma - jobi L. var ma- yuen (Roman.) Stapf의 성숙 건조된 종자이다. 의이인은 이수삼습 약재이고 오랫동안 약식양용으로 사용된 품종이다. 현재 연구 발전으로 부터 보면 의이인은 통증을 멎게 하고 염증을 해소시키며 면역조절, 항궤양, 강혈지, 다이어트 등 약리작용이 있다. 근년래 국내외 학자들은 TLC, HPLC-MS, GC등 방법을 통하여 의이인의 화학성분에 대해 연구한 결과 의이인은 여러가지 활성성분을 포함하고 있다고 밝혔다. 활성성분은 바로 코이키세놀라이드, 트리글리세라이드,지방산류, 락탐류, 코이키락톤류, 당류, 스테롤류 및 트리테르페노이드 등 화학물질이다. 그 중 에스터류는 제일 먼저 발견 된 항암활성작용을 가지고 있는 성분이다. 그리고 또 제일 많이 보도되고 제일 주목된 화학성분이다.지금 중국 임상에서는 의이인오일을 유효성분으로 하여 조제된 Kanglaite주사제는 이미 광범위하게 응용되었지만 이미 사용된 의이인오일의 성분이 비교적 복잡하되 트리글리세라이드성분을 제외하고도 또 모노글리세리드, 디글리세라이드 및 지방산 에스테르 등이 포함된다. 실제 생산 과정에서 이는 기필코 품질보증과 임상용약 안전에 대하여 큰 도전을 직면하게 한다.
본 발명은 의이인분말을 원료로 하여 초임계 이산화탄소 추출, 알칼리화, 중성 알루미나 정제 및 고령토 젱제 등 작업 순서를 통해 한가지 의이인오일의 유효부위를 얻었다. 그리고 그 활성성분에 대한 분리 및 감정을 통해 8가지의 트리글리세라이드 성분과 다섯 가지의 디글리세라이드 성분으로 구성되었다는 것을 명확히 하였고 진일보 이 성분에 대하여 물리화확상수를 측정하였다. 이에 따라 각각 대응되는 최적화 산가, 아이오딘가, 비누화 값, 상대밀도 등을 확정하였다. 본 발명은 상술한바와 같이 의이인을 약재로 하여 성분과 구성을 확정하였고, 공업 생신시 여러개 배치사이의 품질 안정성을 확보하였다.
본 발명은 의이인에서 추출된 한가지 의이인오일의 제공을 목적으로 하되 그 특징은 이 의이인오일중에는 다음과 같은 질량백분율함량의 5가지 디글리세라이드류 성분과 8가지 트리글리세라이드류 성분이 포함된다.바로 1,3-디올레인 0.40~0.58%, 1-리놀레인 -3-올레인 0.91~1.31%, 1, 2-디올레인 0.24~0.35%, 1-올레인-2-리놀레인0.66~0.95%, 1, 2-디리놀레인 0.33~0.47%, 트리리놀레인 4.87~6.99%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 13.00~18.69%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.25~7.54%, 1,3-디올레인-2-리놀레인13.23~19.02%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인 10.26~14.75%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.28~3.28%, 트리올레인 14.44~20.76% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 8.06~11.58%이다.
선호하자면 상술한 5가지 디글리세라이드 성분과 8가지 트리글리세라이드 성분의 질량백분율 함량은 :1,3-디올레인 0.45~0.55%, 1-리놀레인 -3-올레인 1.03~1.25%, 1, 2-디올레인 0.27~0.33%, 1-올레인-2-리놀레인0.75~0.91%, 1, 2-디리놀레인 0.37~0.45%, 트리리놀레인 5.47~6.69%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 14.63~17.88%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.9~7.21%, 1,3-디올레인-2-리놀레인14.88~18.19%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인 11.55~14.11%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.57~3.14%, 트리올레인 16.25~19.86% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 9.07~11.08%이다;
그리고 더욱 선호하는 상술한 5가지 디글리세라이드 성분과 8가지 트리글리세라이드 성분의 질량백분율 함량은1,3-디올레인 0.49~0.51%, 1-리놀레인 -3-올레인 1.12~1.16%, 1, 2-디올레인 0.29~0.31%, 1-올레인-2-리놀레인0.81~0.85%, 1, 2-디리놀레인 0.40~0.42%, 트리리놀레인 5.96~6.20%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 15.93~16.58%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.43~6.69%, 1,3-디올레인-2-리놀레인16.20~16.87%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.57~13.09%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.79~2.91%, 트리올레인 17.69~18.42% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 9.87~10.27%이다.
상술한 바와 같이 디글리세라이드 혹은 트리글리세라이드 화합물의 함량은 모두 의이인중에서의 질량백분율 함량을 가르키며 본 발명에 기술된 방법으로 조제된 의이인오일를 원료로 하여 조제용 크로마토그래피의 분리를 통해 5개의 디글리세라이드 단위체 화합물과 8개 트리글리세라이드 단위체 화합물을 획득한 후 칭량 및 계산을 통해 그 함량을 구해냈다. 그리고 또 본 분야에서의 일반 분석 방법으로도 구해낼 수 있다.
그중 서술한 바와 같이 측정 된 의이인오일의 물리화학상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.916~0.920, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.471~1.474,산가<0.2, 아이오딘가는 100~106, 비누화 값은 186~195이다.
본 발명에서 서술한 바와 같이 의이인오일은 다음과 같은 방법을 통하여 획득하였다.
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여 10메시~80메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각 33~45℃와 30~45℃에 도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각 20~50℃과 15~35℃이고 액체CO2는 1~3 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 19~23 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 7~10 Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 5~7 Mpa와 4~6 Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속2~3 h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 60℃-90℃) 넣고 산치에 따라 36%~56% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 18~24 h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 18~24h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 40~50 h 방치한 뒤 아랫층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여 70%~90% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 2~4 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 3%~8%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 그리고 여액을 취하여 가열한 뒤 2%~6%오일비중의 고령토를 가하여 혼합하고 40~50℃하에서 30 min간 보온시킨후 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1~2 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다. 그 다음 웃층 오일을 취하여 질소환경에서 가열 진공 건조를 행한후 또 다시 8%~12% 오일비중의 활성화된 중성 알루미나를 가하여 혼합한 후 서늘한 곳에 방치시켜 여과한다. 그리고 여과한 후의 오일을 질소환경 하에서 가열하여 진공 농축한 후 160~170℃하에서 1~2 h 감압 건열멸균을 진행한다. 그 다음 랭각하되 0.2 μm멤브레인필터로 여과하여 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소을 넣어 밀봉한다.
선호하자면 서술된 정제순서는 다음과 같다.
초임계 CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 60℃-90℃) 넣고 산치에 따라 36%~56% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 20 h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 22h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 46 h 방치한 뒤 아릿 층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여 70%~90% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 3 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 5%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 여액을 가열한 후 4% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 40~50℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다. 그 다음 웃층 오일을 취하여 질소환경에서 가열 진공 건조를 행한후 또 다시 8%~12% 오일비중의 활성화된 중성 알루미나를 가하여 혼합한 후 서늘한 곳에 방치시켜 여과한다. 그리고 여과한 후의 오일을 질소환경 하에서 가열하여 진공 농축한 후 160~170℃하에서 2h 감압 건열멸균을 진행한다. 그 다음 랭각하되 0.2 μm멤브레인필터로 여과하여 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소을 넣어 밀봉한다.
본 발명에서 서술 된 의이인오일은 미황색 투명 액체이고 기가 약하며 냄새가 연하다. 그리고 석유에테르 혹은 클로로폼에서는 매우 잘 용해되고 아세톤에서는 잘 용해되며 알콜중에서는 조금 용해되고 물에서는 용해되지 않는다.
본 발명에 따라 서술한 방법대로 조제하여 얻은 의이인오일을 중국약전 2010년 버전 중 부록 방업에 의하여 분석하였다. 그 결과 물리화학상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.916~0.920, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.471~1.474,산가<0.2, 아이오딘가는 100~106, 비누화 값은 186~195이다. 그중 약전에서 서술한 바와 같이 산치는 매그램 지방, 지방유 및 기타 유사물에 함유하는 유리지방산이 소요하는 산화칼륨(밀리그램당)의 중량이다. 오일 제품의 품질연구에서 산치는 한가지 중요한 평가수치이고 본 신청에서 서설한 의이인을 놓고 논하자면 그 대응하는 산치느 모두 0.2이하이다. 즉 조제공정 중에서 초임계 추출인가와 알칼리화 등 정제공정의 최적화를 통하여 얻은 의이인오일은 다음과 같은 장점을 구비하고 있다. 우선은 불순물인 유리지방산 함량이 극도로 낮고 제품의 품질이 우수하다. 리고 대량의 디글리세라이드, 트리글리세라이드 성분이 농축되어 순도가 비교적 높고 또 그중의 디글리세라이드와 트리글리세라이드 성분의 종류가 명확하며 함량이 안정적이다. 그외에 기타 물리화학상수, 예를 들면 비누화 값, 아이오딘가 등 여러 배치의 샘플에서 분석한 이 수치는 변화범위가 모두 비교적 작고 이는 본 발명에서 서술된 의이인오일의 품질이 더욱 더 안정하고 임상용약으로 하여 사용할 때 더욱 안전함을 설명할수 있다. 본 발명에서 서술된 조제방법의 수율은 높고 코스트가 낮으며 제품 안정성이 높으므로 공업화생산에 적용되고 안전 제어가 가능하다.
본 발명의 또 하나의 목적은 바로 한가지의 의이인오일을 함유한 약물제제를 제공함에 있고 구체적으로는 본 발명에서 서술된 의이인오일 및 한가지 또는 몇가지의 약학방면에서 접수 가능한 담체를 포함한다.
그중 서술된 약학상에서의 사용가능한 담체는 약학분야에서의 통상적으로 사용되는 희석제, 부형제, 충전제, 유화제, 결합제, 윤활제, 흡수촉진제, 계면활성제, 붕괴제, 윤활제 혹은 산화 방지제를 포함하고 필요 시에는 향미료, 감미료, 방부제 혹은 착색제를 가할수 있다.
서술된 바와 같이 약학상에서 사용가능한 담체는 마니톨, 소르비톨, 메타중아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, 시스테인히드로클로라이드, 치오글라이콜릭애씨드, 메티오닌, 대두 레시틴, 비타민C, 비타민E, EDTA2나트륨, EDTA칼슘2나트륨, 1가 알칼리 금속의 탄산염, 아세트산염, 인산염 혹은 그 물용액, 염산, 아세트산, 황산, 인산, 아미노산, 염화나트륨, 염화칼륨, 젖산나트륨, 에칠파라벤 용액, 벤조산, 포타슘소르베이트, 클로르헥시딘아세테이트, 자일리톨, 맥아당, 포도당, 과당, 덱스트란, 글리신, 전분, 자당, 유당, 만니톨, 규질파생물, 섬유소 및 그 파생물, 알긴산 염류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 글리세린, 트윈 80, 한천, 탄산칼슘, 중탄산칼슘, 계면활성제, 폴리에틸렌글리콜, 사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 인지질류 자재, 고령토, 활석분말, 칼슘스테아레이트 혹은 마그네슘스테아레이트 중에서 선택할수 있다.
본 발명에서 서술된 약학제제는 경구 고체제제, 경구 액체제제 혹은 주사제이다.
선호하자면
본 발명에서 서술된 경구 고체제제는 캡슐제, 정제, 드리핑 정제, 정제, 농축환중의 한가지이고 경구 액체제제는 수성 혹은 유성 현탁액, 용액, 유제, 시럽제 혹은 엘릭시르제, 혹은 일종의 사용전에 물 또는 기타 적당한 담체를 사용하여 재구성한 건조제품이며, 주사제는 나노현탁액, 리포솜, 유제, 동결건조분말과 수성주사제중의 한가지이다.
더욱 선호하자면
본 발명에서 서술된 주사제는 다음과 같은 배합 성분을 포함한다. 바로 의이인오일 50~350 g, 주사용 대두 레시틴 혹은 자수용으로 가능한 대두 레시틴 10~40 g, 주사용 글리세린 혹은 주사용으로 사용 가능한 글리세린 15~50 g 및 주사용 물로 1000 ml까지 표선을 맞춘다.
이는 다음과 같은 방법을 통해 조제되었다.
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴 혹은 주사용으로 사용 가능한 대두 레시틴를 정밀히 취한 후 적당량의 주사용 물을 가한다. 그 다음 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린 혹은 주사용으로 사용 가능한 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 60~70℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 5~12 MPa이고 고압은 25~50 MPa이며 3~6번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2 μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 4.8~8.5범위에 있도록 조절하되 선호하는 수치는 6.8~7.0이고 그중 최적화 수치는 6.8이다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
본 발명에서 서술된 캡슐제는 다음과 같은 배합 성분을 포함한다. 바로 의이인오일 200~800 g, 산화 방지제/혹은 유화제 0.20~0.60 g를 사용하여 1000알을 조제한다.
이는 다음과 같은 방법을 통해 조제되었다.
젤용액 조제: 중량비1:0.6~1.2:0.3~0.8:0.0001~0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 방부제를 취하여 글리세린, 정제수, 방부제(10%에칠파라벤 용액, 벤조산, 소르브산칼륨 와 클로르헥시딘아세테이트에서 한가지를 선택한다. 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 70℃~90℃에까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 56~62℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 산화 방지제/혹은 유화제(산화 방지제는 비타민E이고 유화제는 트윈 80이다.)를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 15~30℃, 상대습도가 35%이하인 조건하에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
본 발명은 약효 실험을 통해 본 발명에서 서술된 의이인오일 및 그제제는 여러가지 인체 종양 세포계에 대해 서로 다른 수준의 억제작용을 발휘하기에 종양의 치료약으로 사용 가능하다.
이로서 본 발명의 목적은 상술한 바와 같이 한가지 의이인오일을 제공하여 단일 약물제제 혹은 백금류, 알킬화제류, 디플루오로뉴클레오시드, 항생제류, 세포독성제류 혹은 호루몬류 화학항암약과 함께 항암 혹은 염증 치료약물로서 응용하는데에 있다.
그중 본 발명에서 서술된 바와 같이 선호하는 백금류는 시스플라틴과 카보플라틴이고 선호하는 알킬화제류는 시클로포스파미드이며 선호하는 디플루오로뉴클레오시드류는 염산젬시타빈이고 선호하는 항생제류는 미톡산트론과 미토마이신이며 선호하는 세포독성제류는 도세탁셀과 파클리탁셀이고 선호하는 호르몬류는 류프로렐린엣트산염이다. 그리고 본 발명에서의 종양은 조기, 중기 혹은 말기에 처한 폐암, 간암, 췌장암, 전립선암, 난소암, 유방암, 육종성 암, 암육종을 가르키고 염증은 전립선비대증을 가르킨다.
이하는 실험수치에 의해 본 발명에서 서술된 구성물 및 그 제제가 항암 혹은 염증치료방면에서 얻은 유익한 효과를 설명한다.
가.
체외MTT방법으로
의이인오일
및 그 제제가 8가지 인체 종양
세포계에
대한 억제작용을 분석
1. 실험자재 및 조제
(1) 세포계: PANC-1(인체 췌장암세포), SKOV3(인체 난소암세포), MCF-7(인체 유방암세포), Bcap-37(인체 유방암세포), SMMC-7721(인체 간암세포), HepG-2(인체 간암세포), A549(인체 폐암세포), H460(인체 폐암세포), 이상의 세포계는 상해 의약품 공업 연구 약리 평가 연구 센터에서 보존하고 계대배양을 유지한다.
(2) DMEM완전 배양기(배지): 10%신생송아지혈청(GIBCO BRL)를 1% 페니실린 (100 U/mL) + 페니실린 (100 μg/mL)을 첨가한다.
(3) 0.25%트립신 용액(Trypsin): Invitrogen회사에서 구매하여 -20℃에서 보존한다.
(4) 인산 완충액(PBS): NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.15 g, KH2PO4 0.2 g를 칭량하여 1 L 이차 증류수를 넣어 녹인다. 그리고 121℃ 하에서 20 min동안 고온멸균하고 4℃에서 보존하다.
(5) MTT(AMRESCO)용액: PBS를 사용하여 농도가 5 mg/ml 되게 조제한다.
(6) 용해액: 매100 ml의 탈이온이차증류수는 SDS 10 g, 아이소뷰탄올 5 ml, 농염산 0.1 ml을 함유한다.
2. 실험방법
검체가 상술한 세포계에 대한 억제작용은 MTT법을 통해 분석하였다.
세부적인 순서는 다음과 같다.
(1) 세포배양: ① 세포를 저장된 액체질소에서 꺼내어 37℃수욕하에서 재빨리 해동시킨다. 그리고 세포를 무균 작업 카운터에서 10 ml 무균 코니컬 튜브에 6 ml의세포배양배지를 가하여 1000rpm/min조건하에서 5분간 원심분리시킨다. 그 다음 상층액을 버리고 남은 침전에 5~6 ml 세포배양지를 가하여 스포이드로 현탁시킨 후 세포배양용 플라스크로 이동시키고 37℃ 세포배양 인큐베이터에 보존한다. ② 다음날 인큐베이터에서 세포를 꺼내여 세포플라시크 안의 세포배양배지를 제거하고 또 5~6 ml의 세포배양배지를 넣어 37℃ 세포배양 인큐베이터에 보존한다. ③ 격일, 인큐베이터에서 세포를 꺼내여 세포플라시크 안의 세포배양배지를 제거하고 PBS(pH 7.4)를 2~3 ml 가하여 흔들며 씻는다. 그 다음 PBS용액을 버리고 또 다시 반복하여 ?는다. 그리고 배양플라스크에 3~5방울의 0.25%트립신 용액을 가하여 흔들어 충분히 섞은 후 덮개를 닫고 37℃ 세포배양 인큐베이터안에 3분가량 방치한다. 그 후 현미경 하에서 관찰한 결과 세포가 배양플라스크의 벽에서 이탈되기 시작하였고, 세포배양배지를 2ml를 넣고 벽에서 완전히 이탈될까지 스포이드로 현탁시킨후 각각 2개 깨끗한 세포배양용 플라스크로 이동시키고 세포배양배지를 5~6 ml 가하여 스포이드로 충분히 섞은 뒤 37℃ 세포배양 인큐베이터에 보존한다. ④ 격일 ③의 순서대로 반복 작업한다. 전부 배양과정에서는 접착세포의 생장이 지나치게 밀집하면 안되고 현탁세포는 항상 대수생장기를 유지해야 한다.
(2) 검체 및 표준액의 조제: 적당량의 의이인오일을 정밀하게 취햐여 DMSO에 용해시켜 농도를 10 mg/ml로 한다. 그리고 PBS로 그래디언트로 DMSO용액을 희석하여 각각 농도가 10 mg /ml, 5000 μg/ml, 2500 μg/ml, 1250 μg/ml, 625 μg/ml, 312.5 μg/ml인 희석된 검체를 조제한다.
(3) 희석시킨 검체를 96 well flat-bottom microplate)에 넣고 매개 구멍에 10 μl, 매 농도마다 두개의 평행실험을 행한다. 그리고 DMSO와 대응하는 그래디언트대로 희석한 용액을 구멍에 넣고 대조로 사용한다.
(4) 대수생장기에 처한 세포를 취하여 트립신으로 소화 처리와 세척한 후 10% 송아지혈청의 배양배지 안에 넣어 현탁상태에 처해 있게 한다. 그 다음 트리판블루 색소배제시험방법을 통하여 생세포를 카운트하고 세포현탁액의 밀도가 2×105개세포/ml가 되게 조절한다.
(5) 세포를 이미 가한 96 well flat-bottom microplate는 37℃, 5% CO2인 세포배양 인큐베이터에서 48시간 배양한다.
(6) 매 구멍에 20 μl의 5 mg/ml MTT용액을 가하여 계속 인큐베이터에서 3~4시간 보온시킨다.
(7) 매 구멍에 100 μl의 용해액을 가하여 계속 인큐베이터에서 보온시키고 하루밤을 보낸다. 이로하여 생성된 포르마잔 결정체를 충분히 용해시킨다. 그리고 570nm에서의 흡광도 값을 분석한다.
(8) 흡광도 값에 의하여 각 검체의 농도별에 따라 세포생장억제율을 산출한다. 산출 공식은 다음과 같다.
(1-실험구멍 평균 흡광도 값/대조구멍 평균 흡광도 값)×100%
3. 실험결과
세포계 | 농도 검체 |
1000 μg/ml |
500 μg/ml |
250 μg/ml |
125 μg/ml |
62.5 μg/ml |
31.25 μg/ml |
PANC-1 | 의이인오일 | 98.77 | 73.83 | 26.24 | 18.93 | 15.96 | 2.95 |
SKOV3 | 의이인오일 | 98.85 | 59.52 | 26.70 | 16.43 | 3.43 | 1.31 |
MCF-7 | 의이인오일 | 98.47 | 65.68 | 23.29 | 11.85 | 7.02 | 0.42 |
Bcap-37 | 의이인오일 | 99.63 | 73.03 | 36.34 | 17.34 | 2.29 | 1.40 |
SMMC-7721 | 의이인오일 | 98.54 | 70.73 | 39.44 | 22.37 | 14.70 | 3.12 |
HepG-2 | 의이인오일 | 98.47 | 65.35 | 38.30 | 26.22 | 16.02 | 1.07 |
A549 | 의이인오일 | 99.02 | 74.97 | 56.85 | 42.61 | 22.00 | 1.48 |
H460 | 의이인오일 | 97.16 | 73.47 | 56.36 | 44.13 | 18.45 | 7.14 |
검체 세포계 |
의이인오일 | 양성대조(택솔) |
PANC-1 | 213.1 | 0.44 |
SKOV3 | 262.8 | 0.22 |
MCF-7 | 275.5 | 0.18 |
Bcap-37 | 220.7 | 0.28 |
SMMC-7721 | 205.9 | 0.41 |
HepG-2 | 222.5 | 0.45 |
A549 | 173.2 | 0.46 |
H460 | 166.9 | 0.49 |
4. 결론
농도별로 본 발명중의 의이인오일이 체외에서 상술 한 8가지 암 세포주에 서로 다른 수준의 억제작용을 발휘하고 있다.
나. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된
인체종양폐암
A549에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 시스플라틴(치루제약유한공사), 공백 지방 유제, 생리식염수
2. 실험방법
액제질소로 냉동 보관한 인체종양 폐암 A549세포계를 취하여 회복한 후 37℃, 5% CO2조건에서 배양한다. 이로서 계대배양 후 대수생장기에 처한 세포를 취하여 생리식염수로 (1~2)×107 cell/ml 농도의 세포현탁액을 조제하여 BALB/C누드마우스(SPF급, 18~20 g, 6주령, 수컷)의 오른쪽 겨드랑이 피하조직에 접종한다. 무균조건 하에서 체내 생장이 왕성한 인체종양 폐암 A549 제2대 이종이식 모델의 종양조직을 취하여 1~2 mm3 크기의 균일한 작은 덩어리로 자른다. 그리고 투관침으로 매 누드마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하조직에 한 덩어리씩 접종한다. 접종된 종양이 접착된 후 무작위배정으로 군을 나누고실험 설계 방안에 따라 약물을 투여한다. 그리고 사용된 사료, 충전물, 사융상 및 접촉가능한 설비 등은 모두 고압소독 순서를 거친 후 사용하며 누드마우스는 층류랙에 가두어 기른다. 이와 동시에 동적상태를 관찰하고 종양크기와 동물체중을 분석한다. 3주후 각 시험군의 동물을 희생시켜 시술을 통해 종양부위를 취하여 다음과 같은 공식으로 종양 엑제율를 산출한다.
종양억제율%= [(대조군의 평균 종양 중량 - 약물 투여군의 평균 종양 중량) / (대조군의 평균 종양 중량)]×100%
합병투약시의 역가는 Kim’s 공식에 따라 Q값을 산출한다.
Q=Ea +b/(Ea+Eb-Ea×Eb)
그중 Ea +b는 합병투약시의 종약억제율이고 Ea과 Eb는 각각 A약과 B약의 종양억제율이다. 예로 Q값이0.85-1.15이면 상가(+)작용이고 1.15이상이면 상승(++)작용이다.
3. 실험결과
검체군별 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
동물체중 (g) 시작/종료 |
종양중량 (g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.2/24.3 | 0.623±0.19** | 52.87 | |
본발명 주사액 | 12.5ml/kg | iv×10qd | /6 | 20.1/25.2 | 0.788±0.19** | 40.39 | |
본발명 주사액 | 6.25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.6/25.3 | 0.845±0.15** | 36.08 | |
본발명 주사액+시스플라틴 | (25ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.1/25.3 | 0.458±0.10** | 65.36 | 0.8987 |
본발명 주사액+시스플라틴 | (12.5ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.2/24.5 | 0.501±0.11** | 62.10 | 0.9480 |
본발명 주사액+시스플라틴 | (6.25ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.1/25.4 | 0.558±0.11** | 57.79 | 0.9172 |
시스플라틴 | 1mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 20.2/24.0 | 0.765±0.11** | 42.13 | |
시스플라틴 | 2mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 20.4/23.1 | 0.181±0.06** | 86.31 | |
공백 지방 유제 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.1/26.5 | 1.325±0.34 | -- | |
음성대조(생리식염수) | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.3/26.6 | 1.322±0.32 | -- |
생리식염수 음성대조군과 비교하면 *P<0.05,**P<0.01이다.
4. 실험결론
본 발명 주사제의 용량은 각각 25 ml/kg, 12.5 ml/kg, 6.25 ml/kg이고 iv×10qd방안에 따라 투약하였으며 누드마우스에 이식된 인체 폐암 A549의 생장에 대한 억제작용은 유의하였다.
본 발명 주사액과 시스플라틴을 합병투여 시에는 누드마우스에 이식된 인체 폐암 A549의 생장에 대한 종양 억제 작용은 본 발명 주사액과 시스플라틴을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
다. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체 종양 간암세포
QGY
생장에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 아드리아마이신(Pfizer Italia S.r.l), 공백 지방 유제, 생리식염수
2. 실험방법
액제질소로 냉동보관한 인체종양 간암 QGY세포계를 취하여 회복한 후 37℃, 5% CO2조건에서 배양한다. 기타 작업 순서는 “나, 2”와 같다.
3. 실험결과
검체군별 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
동물체중 (g) 시작/종료 |
종양중량 (g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 21.4/25.6 | 0.680±0.18** | 41.18 | |
본발명 주사액 | 12.5ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 21.4/25.2 | 0.787±0.15** | 31.92 | |
본발명 주사액 | 6.25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 21.5/24.9 | 0.790±0.18* | 31.66 | |
본발명 주사액+아드리아마이신 | (25ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 21.8/24.9 | 0.502±0.16** | 56.57 | 0.8870 |
본발명 주사액+아드리아마이신 | (12.5ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 21.5/24.7 | 0.598±0.15** | 48.27 | 0.8312 |
본발명 주사액+아드리아마이신 | (6.25ml+1mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 21.8/24.7 | 0.627±0.12** | 45.76 | 0.7902 |
아드리아마이신 | 1mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 21.3/24.6 | 0.712±0.18** | 38.41 | |
아드리아마이신 | 2mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 21.8/23.1 | 0.338±0.17** | 70.76 | |
공백 지방 유제 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 21.6/26.9 | 1.125±0.15 | -- | |
음성대조 생리식염수 |
25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 21.5/26.7 | 1.156±0.24 | -- |
생리식염수 음성대조군과 비교하면 *P<0.05,**P<0.01이다.
4、실험결론
본 발명 주사제의 용량은 각각 25 ml/kg, 12.5 ml/kg, 6.25 ml/kg이고 iv×10qd계획서에 따라 투약하였으며 누드마우스에 이식된 인체 폐암 QGY의 생장에 대한 억제작용은 유의하였다.
본발명 주사액과 아드리아마이신을 합병투여 시에는 누드마우스에 이식된 인체 간암 A549에 대한 종양 억제 작용은 본발명 주사액과 아드리아마이신을 단독 투여 할 때보다 강하고 유의하였다.
라. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체
종양간암
LM-
3대한
억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 시클로포스파미드(쟝쑤헝루이의약 주식회사), 공백 지방 유제, 생리식염수
2. 실험방법
액제질소로 냉동보관한 인체종양 간암LM-3세포계를 취하여 회복한 후 37℃, 5% CO2조건에서 배양한다. 기타 작업 순서는 “나, 2”와 같다.
3. 실험결과
검체군별 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
동물체중 (g) 시작/종료 |
종양중량 (g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.2/26.3 | 1.043±0.16** | 32.05 | |
본발명 주사액 | 12.5ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.3/26.2 | 1.092±0.28** | 28.86 | |
본발명 주사액 | 6.25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.4/27.0 | 1.251±0.27** | 18.50 | |
본발명 주사액+시클로포스파미드 | (25ml+15mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.4/26.6 | 0.755±0.13** | 50.81 | 0.9972 |
본발명 주사액+시클로포스파미드 | (12.5ml+15mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.3/28.1 | 0.778±0.17** | 49.32 | 1.0137 |
본발명 주사액+시클로포스파미드 | (6.25ml+15mg)/kg | iv×10qd +ip×7qd | 6/6 | 20.4/25.8 | 0.862±0.19** | 43.84 | 1.0648 |
시클로포스파미드 | 15mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 20.7/24.8 | 1.108±0.09** | 27.82 | |
시클로포스파미드 | 30mg/kg | ip×7qd | 6/6 | 20.5/25.0 | 0.265±0.12** | 82.74 | |
공백 지방 유제 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.4/27.8 | 1.557±0.30 | -- | |
음성대조 생리식염수 |
25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.6/28.0 | 1.535±0.28 | -- |
생리식염수 음성대조군과 비교하면 *P<0.05,**P<0.01이다.
4、실험결론
본 발명 주사제의 용량은 각각 25 ml/kg, 12.5 ml/kg, 6.25 ml/kg이고 iv×10qd방안에 따라 투약하였으며 누드마우스에 이식된 인체 폐암LM-3의 생장에 대한 억제작용은 유의하였다.
본 발명 주사액과 시클로포스파미드을 합병투여 시에는 누드마우스에 이식된 인체 간암 LM-3에 대한 종양 억제 작용은 본 발명 주사액과 시클로포스파미드을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
마. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된
인체종양간암
SMMC
-
7721생장에
대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 염산젬시타빈(LILLY FRANCE), 공백 지방 유제, 생리식염수
2. 실험방법
액제질소로 냉동보관한 인체종양 간암SMMC-7721세포계를 취하여 회복한 후 37℃, 5% CO2조건에서 배양한다. 기타 작업 순서는 “나, 2”와 같다.
3. 실험결과
검체군별 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
동물체중 (g) 시작/종료 |
종양중량 (g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.4/25.1 | 0.876±0.13** | 49.71 | |
본발명 주사액 | 12.5ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.4/25.6 | 0.942±0.21** | 45.92 | |
본발명 주사액 | 6.25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.1/24.8 | 1.041±0.23** | 40.24 | |
본발명 주사액+염산젬시타빈 | (25ml+25mg)/kg | iv×10qd +iv×3q3d | 6/6 | 20.5/26.1 | 0.610±0.09** | 64.98 | 0.8731 |
본발명 주사액+염산젬시타빈 | (12.5ml+25mg)/kg | iv×10qd +iv×3q3d | 6/6 | 20.9/26.5 | 0.632±0.14** | 63.72 | 0.8790 |
본발명 주사액+염산젬시타빈 | (6.25ml+25mg)/kg | iv×10qd +iv×3q3d | 6/6 | 20.4/26.4 | 0.661±0.16** | 62.06 | 0.8916 |
염산젬시타빈 | 25mg/kg | iv×3q3d | 6/6 | 20.1/25.1 | 0.886±0.24** | 49.14 | |
염산젬시타빈 | 50mg/kg | iv×3q3d | 6/6 | 20.4/24.2 | 0.215±0.11** | 87.66 | |
공백 지방 유제 | 25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.2/26.1 | 1.765±0.19 | ||
음성대조 생리식염수 |
25ml/kg | iv×10qd | 6/6 | 20.8/26.9 | 1.742±0.24 |
생리식염수 음성대조군과 비교하면 *P<0.05,**P<0.01이다.
본 발명 주사제의 용량은 각각 25 ml/kg, 12.5 ml/kg, 6.25 ml/kg이고 iv×10qd방안에 따라 투약하였으며 누드마우스에 이식된 인체 폐암SMMC-7721의 생장에 대한 억제작용은 유의하였다.
본 발명 주사액과 염산젬시타빈을 합병투여 시에는 누드마우스에 이식된 인체 간암 AMMC-7721에 대한 종양 억제 작용은 본 발명 주사액과 화학치료약물을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
바 . 본 발명 주사액이 마우스에 이식된 LM-3 육종에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 시클로포스파미드(CTX), 미톡산트론(DHAD), 미토마이신(MMC), 생리식염수
S180육종: 곤명종 마우스에 접종한다. 19-21 g, 암컷
2. 실험방법
생장양호한 S180 복수를 취하여 생리식염수를 사용하여 1:4비례로 희석시켜 농도가 약 (1-2)×107 cell /ml되는 세포현탁액을 조제한다. 그리고 매개 마우스의 겨드랑이 피하조직에 0.2 ml씩 접종한 후 무작위배정으로 군을 나누고 표7에서와 같이 다음날부터 투약한다. 접종한 십일 후에 경추파열 희생방법으로 동물을 죽이고 해부하여 종양 덩어리를 꺼낸다. 그 다음 용량 별도의 종양 크기를 비교하여 억제율을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
억제율 % |
Q |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×7 | 10/10 | 1.18±0.23 | 25.32* | |
본발명 주사액+CTX | 25ml/kg+30mg/kg | iv×7+ ip×2(1,3) | 10/10 | 0.79±0.14 | 50.00** | 0.8847 |
CTX | 30mg/kg | ip×2(1,3) | 10/10 | 0.92±0.21 | 41.77* | |
본발명 주사액+DHAD | 25ml/kg+2mg/kg | iv×7+ ip×2(1,3) | 10/10 | 0.52±0.13 | 67.09** | 1.0627 |
DHAD | 2mg/kg | ip×2(1,3) | 10/10 | 0.78±0.20 | 50.63** | |
본발명 주사액+MMC | 25ml/kg+1.5mg/kg | iv×7+ ip×2(1,3) | 10/10 | 0.62±0.12 | 60.76** | 1.1220 |
MMC | 1.5mg/kg | ip×2(1,3) | 10/10 | 0.97±0.19 | 38.61* | |
대조(생리식염수) | 25ml/kg | iv×7 | 10/10 | 1.58±0.36 | -- |
대조군과 비교하면 **P<0.01,*P<0.05이다.
4. 실험결론
본 발명 주사액이 각각 CTX, DHAD와 MMC를 합병투여 시에는 종양 억제 작용이 본 발명 주사액과 화학치료약물을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
사. 본 발명 주사액이
랫드에
이식된
W256암육종에
대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 시클로포스파미드(CTX), 생리식염수
W256암육종: Wistar큰 쥐에 접종한다. 50-60 g, 암컷
2. 실험방법
생장양호한 랫드의 W256 복수를 취하여 생리식염수로 희석시켜 농도가 약 (1-2)×107 cell /ml되는 세포현탁액을 조제한다. 그리고 매개 랫드의 겨드랑이 피하조직에 0.2 ml/마리씩 접종한 후 익일에 무작위배정으로 군을 나누고 투약을 시작한다. 그 다음 2주 후에 동물을 해부하여 종양 덩어리를 꺼내어 실험군과 대조군의 차이를 비교하고 종양 중량 억제율을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
억제율 % |
Q |
CTX | 30mg/kg | iv×7 | 10/8 | 0.42±0.85 | 87.68** | |
CTX | 10mg/kg | iv×2(3,5) | 10/10 | 2.12±1.22 | 37.83* | |
본발명 주사액 | 20ml/kg | iv×10 | 10/10 | 1.44±0.72 | 57.78** | |
본발명 주사액+CTX | 20ml/kg+10mg/kg | iv×10+iv×2(3,5) | 10/10 | 0.94±0.32 | 72.43** | 0.9821 |
본발명 주사액 | 10ml/kg | iv×10 | 10/10 | 1.88±0.71 | 44.87** | |
본발명 주사액+CTX | 10ml/kg+10mg/kg | iv×10+iv×2(3,5) | 10/10 | 1.02±0.58 | 70.09** | 1.0664 |
본발명 주사액 | 5ml/kg | iv×10 | 10/9 | 2.13±1.19 | 37.54* | |
본발명 주사액+CTX | 5ml/kg+10mg/kg | iv×10+iv×2(3,5) | 10/10 | 1.68±0.98 | 50.73** | 0.8293 |
대조(생리식염수) | 20ml/kg | iv×10 | 10/10 | 3.41±1.16 | -- |
대조군과 비교하면 **P<0.01,*P<0.05이다.
4. 실험결론
본발명 주사액과 CTX를 합병투여 시에는 종양 억제 작용은 본발명 주사액과 화학치료약물을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
아. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체췌장암
PENC
-1에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 염산젬시타빈, 생리식염수
PENC-1인체 췌장암세포: BALB/C누드마우스에 접종한다. 16-18 g, 암컷
2. 실험방법
생장양호한 PENC-1 인체 췌장암 종양 덩어리를 취하여 4주령 된 암컷BALB/C 누드마우스의 피하에 접종한다. 그 다음 무작위배정으로 군을 나누고 투약을 시작하여 투약주기 완료후 일주일 뒤에 누드마우스르 희생시키고 종양을 꺼내어 중량을 칭량한 후 실험군과 대조군의 차이를 비교하고 종양 중량 억제율을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
억제율 % |
Q |
염산젬시타빈 | 60mg/kg | iv×1 | 6/6 | 0.1443±0.081 | 24.61 | |
본발명 주사액 | 50ml/kg | iv×10 | 6/6 | 0.1491±0.013 | 22.10 | |
본발명 주사액+염산젬시타빈 | 50ml/kg+60mg/kg | iv×10+iv×1 | 6/6 | 0.0921±0.043 | 51.88 | 1.2570 |
대조(생리식염수) | 50ml/kg | iv×10 | 6/6 | 0.1914±0.087 | -- |
본 발명 주사액과 염산젬시타빈을 합병투여 시에는 종양 억제 작용은 본 발명 주사액과 화학치료약물을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
자. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체전립선암
FC
-3M에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 류프로렐린엣트산염(Lupron), 생리식염수
FC-3M인체 전립선암: BALB/C누드마우스에 접종한다. 17-21 g, 수컷
2. 실험방법
생장양호한 FC-3M 종양 덩어리를 취하여 생리식염수를 사용하여 1:4의 비례로 균질액을 조제한다. 그리고 매개 마우스의 겨드랑이 피하조직에 0.2 ml씩 접종한 후 무작위배정으로 군을 나누고 다음날부터 투약한다. 접종 21일 후 마우스르 희생시키고 종양을 꺼내어 중량을 칭량한 후 실험군과 대조군의 차이를 비교하고 종양 중량 억제율을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
억제율 % |
Q |
Lupron | 0.75ml/kg | iv×1 | 6/6 | 0.98±0.23 | 36.36** | |
Lupron | 1.5ml/kg | iv×1 | 6/6 | 0.76±0.14 | 50.65** | |
본발명 주사액 | 12.5ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.12±0.24 | 27.27 | |
본발명 주사액+Lupron | 12.5ml/kg+0.75ml/kg | iv×10+iv×1 | 6/6 | 0.52±0.13 | 66.23** | 1.2330 |
본발명 주사액 | 25ml/kg | iv×10 | 6/6 | 0.77±0.15 | 50.00** | |
본발명 주사액+Lupron | 25ml/kg+1.5ml/kg | iv×10+iv×1 | 6/6 | 0.45±0.16 | 70.78** | 0.9397 |
대조 (생리식염수) | 25ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.54±0.20 | -- |
대조군과 비교하면 **P<0.01,*P<0.05이다.
본 발명 주사액과 Lupron을 합병투여 시에서의 종양 억제 작용은 본발명 주사액과 화학치료약물을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 상가작용이 유의하였다.
차 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체유방암
Bcap37에
대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 도세탁셀주사액(Taxotere,규격: 20 mg/병), 생리식염수
인체유방암Bcap-37: BALB/C누드마우스(SPF급)에 접종한다. 18-20 g, 암컷
2. 실험방법
생장양호한 Bcap-37 종양 덩어리를 취하여 생리식염수를 사용하여 농도가 약 (1-2)×107 cell /ml되는 세포현탁액을 규질 조제한다. 그리고 매개 마우스의 겨드랑이 피하조직에 0.2 ml씩 접종한 후 무작위배정으로 군을 나누고 일주일 투약한다. 접종한 20일 후에 마우스를 희생시키고 종양을 꺼내어 중량을 칭량한 후 실험군과 대조군의 차이를 비교하고 종양 중량 억제율 및 합병투약의 역가 Q값을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
음성대조(NS) | 25 ml/kg | iv×10 | 10/10 | 2.94±0.81 | ||
도세탁셀주사액 | 25mg/kg | ip×1 | 6/6 | 1.27±0.88** | 56.80 | |
본발명 주사액 | 6.25 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.86±0.32** | 36.73 | |
12.5 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.41±0.65** | 52.04 | ||
25 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.18±0.59** | 59.86 | ||
본발명 주사액 +도세탁셀주사액 |
6.25 ml/kg +25mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.87±0.45** | 70.41 | 0.9689 |
본발명 주사액 +도세탁셀주사액 |
12.5 ml/kg +25mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.94±0.98** | 68.03 | 0.8581 |
본발명 주사액 +도세탁셀주사액 |
25 ml/kg +25mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.72±0.36** | 75.51 | 0.9135 |
음성대조군과 비교하면 *P<0.05, **P<0.01이다.
본발명 주사액과 도세탁셀주사액을 합병투여 시에서의 인체유방암 Bcap-37를 이식한 누드마우스에 대한 종양 억제 작용은 본발명 주사액과 도세탁셀주사액을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 본 실험을 통해 본발명 주사액과 도세탁셀주사액을 합병투여 시에서 상가작용이 유의하다는 것을 확보하였다
카. 본 발명 주사액이 누드마우스에 이식된 인체유방암
MDA
-MB-435에 대한 억제율을 분석
1. 실험자재
본 발명 주사제(규격:100 ml:10 g), 파클리탁셀주사액(30 mg/5 ml), 생리식염수
인체유방암MDA-MB-435: BALB/C누드마우스(SPF급)에 접종한다. 18-20 g, 암컷
2. 실험방법
생장양호한MDA-MB-435 종양 덩어리를 취하여 생리식염수를 사용하여 농도가 약 (1-2)×107 cell /ml되는 세포현탁액을 규질 조제한다. 그리고 매개 마우스의 겨드랑이 피하조직에 0.2 ml씩 접종한 후 무작위배정으로 군을 나누고 일주일 투약한다. 접종한18일 후에 마우스를 희생시키고 종양을 꺼내어 중량을 칭량한 후 실험군과 대조군의 차이를 비교하고 종양 중량 억제율 및 합병투약의 역가 Q값을 산출한다.
3. 실험결과
검체 | 용량 | 투약방안 | 동물수량(마리) 시작/종료 |
종양중량(g) ±SD |
종양엑제율 % |
Q |
음성대조(NS) | 25 ml/kg | iv×10 | 12/12 | 2.72±0.39 | ||
파클리탁셀주사액 | 50mg/kg | ip×1 | 6/6 | 1.01±0.33** | 62.87 | |
본발명 주사액 | 6.25 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.53±0.26** | 43.75 | |
12.5 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 1.22±0.25** | 55.15 | ||
25 ml/kg | iv×10 | 6/6 | 0.66±0.07** | 75.74 | ||
본발명 주사액 +파클리탁셀주사액 |
6.25 ml/kg+50mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.93±0.48** | 65.81 | 0.8318 |
본발명 주사액 +파클리탁셀주사액 |
12.5 ml/kg+50mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.76±0.45** | 72.06 | 0.8646 |
본발명 주사액 +파클리탁셀주사액 |
25 ml/kg+50mg/kg | iv×10+ip×1 | 6/6 | 0.48±0.32** | 82.35 | 0.9050 |
음성대조군과 비교하면 *P<0.05, **P<0.01이다.
본 발명 주사액과 파클리탁셀주사액을 합병투여 시에서의 인체유방암 MDA-MB-435를 이식한 누드마우스에 대한 종양 억제 작용은 본발명 주사액과 파클리탁셀주사액을 단독 투여 할 때보다 확연히 강하였고 본 실험을 통해 본발명 주사액과 파클리탁셀주사액을 합병투여 시에서 상가작용이 유의하다는 것을 확보하였다.
타. 본 발명 캡슐과 항암화학요법을 합병투여 하여
란소암
치료에 대한
임상
효과를 분석
1. 임상자료 및 치료방법
58명의 말기 란소암 환자를 무작위배정하여 본발명군과 대조군으로 나눈다. 그중 본발명군 30명은 TC방안(택솔+카보플라틴)와 본 발명캡슐를 연합하여 치료하였고 대조군 28명은 그냥 TC방안만 진행하며, 또 두군의 환자 기본정보는 모두 균일하다(p>0.05). 파클리탁셀175 mg/m2(첫날), 카보플라틴AUC=5 (첫날,매 3주 반복), 환자의 이득상황에 따라 4~6주기의 항암화학치료를 진행하고 본발명 캡슐을 매번 6알, 매일 3번씩 지속적으로 복용하되 병세가 엄중해지거나 견딜수 없는 독부작용이 일어날 때까지 복용한다.
2. 치료 효과 평가
2.1 유효율과 질병제어율: 매 두번 화학치료시마다 가까운 시일내에 치료 효가 평가를 한번씩 진행한다. 그리고 RECIST기준에 따라 분석하고 각각 완전반응(CR), 부분반응(PR), 안정(SD)과 질병 진행(PD)으로 나누어 CR+PR로 유효율(RR)을 산출하고 CR+PR+SD로 질병제어율(DCR)을 산출한다.
2.2 독부작용: 불량반응 통용전문용어기준(NCI-CTC AE)3.0 버전에 따라 분석하고 독성반응은 0~Ⅴ등급으로 나눈다.
3. 결과
3.1 근래 치료 효과: 본발명군은 각각 CR 0건, PR 14건, SD 8건, PD 8건이고 유효율은 46.7%, 질병제어율은 73.3%이다. 대조군은 각각 CR 0건, PR 11건, SD 6건, PD 11건이고 유효율은 39.3%, 질병제어율은 60.7%이다.
3.2 독부작용: 58명 환자에 대한 독부작용 평가를 통해 제일 흔히 나타나는 독부작용은 위장관반응, 골수억제, 신경독성, 근육관절통증 등이다. 본발명군과 대조군에서 3등급/4등급의 골수억제 발생율은 각각 42.5%, 54%이고 3등급/4등급의 발열성 중성립세포 감소/ 감염발생율은 각각 12%, 19%이며 이 두개군의 환자중 모두 사망한 사례가 없다.그리고 오심, 구토, 신경독성 및 그육관절통증은 대조군에서 더욱 흔히 나타나는 증상이다. 본발명군에서 나타나는 기진증상은 대조군보다 낮고 유의하다.
이로부터 본발명 갭슐과 파클리탁셀 및 카보플라틴을 연합하여 말기 란소암을 치료하면 유효율이 높고 항암화학치료 관련된 독부작용은 경미하며 유효적으로 환자의 생활질량을 제고할수 있다.
파.
본발명
캡슐이
비뇨생식동
임플란트방법을 통해 얻은 마우스의 전립선비대증에 대한 영향을 분석
1. 실험자재
본발명 캡슐, 써닐톤 프라스타드정(규격: 꽃가루추출물P5 70mg, EA10 4mg), 염화나트륨주사액(규격250 ml: 2.25 g, 250 ml/병), 펜토바르비탈 나트륨, 올리브유, 주사용 페니실린나트륨(규격 80만단위/병)
동물:ICR마우스, 청결급, 하루밤 금식 후 사용한다.
2. 실험방법:
비뇨생식동의 준비: 체중이 25~30 g되는 성성숙된 20마리 암컷과 10마리 수컷의 ICR마우스를 취하여 암컷과 수컷의 비례가 2:l되게 한개 사육상에 합친다. 매일 아침 질전을 분석하되 즉 작은 핀셋으로 음문을 열어보면 만일 교배한 후이면 정액이 질에서 하얀색의 질전을 형성하여 질을 막히게 하였으면 교배하였음을 설명한다. 질전이 형성된 날을 임신 첫날로 하여 16일 후에 임신한 암컷 마우스를 희생시켜 무균조건 하에서 16일 된 배아를 취한다. 그리고 비뇨생식동도 취하여 생리식염수를 담은 유리 페트리 디쉬에 넣고 사용을 위해 준비한다.
모델링: 체중이 25~30 g되는 성성숙된 60마리의 수컷 ICR마우스를 취하여 복강에 펜토바르비탈 나트륨을 주입하여 마취시킨다. 그리고 무균조건 하에서 복부를 절개하여 유심히 복측전립선를 분리한다. 그 다음 복측전립선에 3개의 16d 된 동일 품종의 배아의 비뇨생식동 조직을 이식한다. 그중 10마리는 천자시술만 하고 조직을 이식하지 않고 가짜 수술군으로 사용한다. 시술후 연속 3일동안 매개 마우스 복강에 페니실린을 2만단위씩 주사한다.
군별투약: 시술후 3일간 이상반응이 나타나지 않으면 각각 가짜 수술군, 모델군, 양성 대조군(써닐톤 60mg/kg), 본발명 캡슐 고용량군(9g/kg), 중용량군(3g/kg)과 저용량군(1g/kg)으로 나누어 군별로 투약을 진행한다. 연속적으로 위내투약을 28일 실시하고 약물투여량은 0.1 ml/l0g이며 가짜 수술군과 모델군은 동일량의 올리브유를 위내에 투여한다.
검출지표: ①체중, ②복측 전립선 습중량 및 전립선지수(전립선 습중량/마우스 체중), ③복측 전립선 조직 병리 변화(평점기준은 표13 참조.)
(1) 전립선 선강의 크기 및 선강내 분비물의 량에 따라 평가한다. | |
- | 전립선 선강의 크기가 불균일 하고 선강이 불규칙적이며 내강에 핑크색으로 염색된 분비물이 있다. |
+ | 일부 전립선 선강의 확장해 커지고 배열이 긴밀하며 선강내의 분비물이 증가되고 색갈도 짙어졌다. |
++ | 전립선 선강의 확정이 유의하고 배열이 긴밀하며 선강내 분비물이현저하게 증가되고 색갈도 분명하게 짙어졌다. |
(2) 전립선 간질에서 섬유세포의 증생 수준에 따라 평가한다. | |
- | 간질에서 섬유아세포의 증생을 발견하지 못하거나 가끔씩 발견하였다. |
+ | 간질에 소량의 섬유아세포가 증생되고 산란 분포를 유지했다. |
++ | 간질에 섬유아세포의 증생이 비교적 많다. |
+++ | 간질에 대량의 섬유아세포가 증생되고 무리 분포 혹은 덩어리 분포를 유지했다. |
(3) 선상피의 형태, 배열규칙 및 증생 수준에 따라 평가한다. | |
- | 선상피가단층 주상이나 단층 입방상을 나타나고 선상피는 선강내의 돌출에 대해 습벽을 형성하였다. 그리고 세포핵은 기저부에 위치하고 배열이 |
+ | 선상피의 형태가 정상적이지만 배열이 정렬하지 않다. |
++ | 일부 선상피는 단층으로부터 이중층으로 증식되었고 배열이 불규칙적이다. |
+++ | 대다수 선상피는 단층 증식으로부터 이중층으로 되었고 심지어 3-4층으로도 되었으며배열이 분명히 불규칙적이다. |
3. 실험결과:
군별 | 용량 | 복측전립선 습중량(mg) | 복측전립선 지수(mg/10g체중) |
가짜수술 | - | 17.8 ± 7.0 | 4.16 ± 1.60 |
모델 | - | 50.1 ± 14.0 ### | 12.18 ± 3.74 ### |
써닐톤 | 60 mg/kg | 30.7 ± 9.0 ** | 7.30 ± 2.11 ** |
본발명 갭슐 | 9 g/kg | 30.9 ± 14.2 * | 7.25 ± 3.25 * |
본발명 갭슐 | 3 g/kg | 32.3 ± 6.2 ** | 7.47 ± 2.42 ** |
본발명 갭슐 | 1 g/kg | 36.5 ± 8.8* | 8.50 ± 2.08 * |
### P < 0.001 vs 가짜 수술군 , * P < 0.05, ** P < 0.01 vs모데군 , t-test.
군별 | 용량 | 전립선 선강의 크기 및 분비물분비물의 량이 어떠한가. | ||
- | + | ++ | ||
가짜수술 | - | 10 | 0 | 0 |
모델 | - | 1 | 5 | 4 |
써닐톤 | 60 mg/kg | 4 | 5 | 1 |
본발명 갭슐 | 9 g/kg | 4 | 5 | 0 |
본발명 갭슐 | 3 g/kg | 3 | 4 | 2 |
본발명 갭슐 | 1 g/kg | 2 | 3 | 2 |
n=10,표에서 본 등급 병리변화의 동물수량을 분류함.
군별 | 용량 | 전립선 간질에서 섬유아세포의 증생 수준 | |||
- | + | ++ | +++ | ||
가짜수술 | - | 5 | 4 | 1 | 0 |
모델 | - | 0 | 5 | 3 | 2 |
써닐톤 | 60 mg/kg | 2 | 8 | 0 | 0 |
본발명 갭슐 | 9 g/kg | 8 | 4 | 0 | 0 |
본발명 갭슐 | 3 g/kg | 2 | 6 | 0 | 0 |
본발명 갭슐 | 1 g/kg | 2 | 6 | 1 | 2 |
n=10,표에서 본 등급 병리변화의 동물수량을 분류함.
군별 | 용량 | 전립선 상피 형태, 배열 규칙 및 증생수준 | |||
- | + | ++ | +++ | ||
가짜수술 | - | 6 | 3 | 1 | 0 |
모델 | - | 0 | 1 | 6 | 3 |
써닐톤 | 60 mg/kg | 2 | 6 | 2 | 0 |
본발명 갭슐 | 9 g/kg | 4 | 3 | 3 | 0 |
본발명 갭슐 | 3 g/kg | 0 | 8 | 4 | 0 |
본발명 갭슐 | 1 g/kg | 0 | 0 | 9 | 2 |
n=10,표에서 본 등급 병리변화의 동물수량을 분류함.
군별 | 용량 | 선강면적 (×104 μm2) | 선상피 높이 (μm) |
가짜수술 | - | 2.53 ± 1.11 | 11.70 ± 3.17 |
모델 | - | 6.46 ± 3.40 ## | 22.44 ± 4.46 ### |
써닐톤 | 60 mg/kg | 2.72 ± 0.92 ** | 15.19 ± 4.18 *** |
본발명 갭슐 | 9 g/kg | 2.12 ± 1.11 ** | 13.25 ± 3.24 *** |
본발명 갭슐 | 3 g/kg | 2.29 ± 1.04 ** | 15.12 ± 3.32 *** |
본발명 갭슐 | 1 g/kg | 3.63 ± 1.26 * | 18.52 ± 5.22 *** |
### P < 0.001 vs 가짜 수술군 , * P < 0.05, ** P < 0.01 vs모데군 , t-test.
본 발명 캡슐을 1~9 g/kg의 투약용량으로 연속 28일간 위내투여하면 비뇨생식동을 이식하여 전립선비대증을 일으킨 마우스의 복측전립선 습중량을 경감하고 복측전립선 지수를 상승시키며 그 수치가 모두 유의하다. 그리고 비뇨생식동을 이식하여 전립선비대증을 일으킨 마우스의 전립선 간질중 섬유아세포의 증생, 선강 확장, 선상피 증생 및 선강내 분비물 증가 등 병리학지수를 개선하고 그 수치가 유의하다. 이와 동시에 비뇨생식동을 이식하여 전립선비대증을 일으킨 마우스의 복측 전립선 선강내 면적 및 선상피 높이를 경감하고 그 수치가 유의하다. 이로부터 본발명 캡슐은 비뇨생식동 이식방법으로 유도한 마우스의 전립선비대증에 대한 치료작용은 유의하다.
상술한 바를 종합하면 본발명에서의 의이인오일은 누드마우스에 이식된 인체폐암 A549, 간암 QGY, LM-3, SMMC-7721, S180육종, W256암육종 등 생장에 대해 일정한 억제작용이 있다. 본발명 주사액 및 캡슐과 저용량의 시스플라틴, 시클로포스파미드, 염산젬시타빈, 미톡산트론, 미토마이신, Lupron, 도세탁셀, 파클리탁셀, 카보플라틴을 합병 투여 시 인체폐암A549, 인체간암 LM-3, SMMC-7721, S180육종, W256암육종, 췌장암, 전립선암, 유방암과 란소암의 생장억제에 대해 유의한 상가작용을 일으키고 투약 합동작용이 있다. 그리고 본발명 캡슐은 마우스의 전립선증생에 대한 치료작용은 유의하다.
본 실험을 통해 본발명중 서술된 의이인오일 및 그 제제는 전부 상술 시험 사례에서 서술한 바와 같이 동일한 효과를 얻었음을 증명하였다.
본발명은 다음과 같은 세부적인 실시 사례로 진일보 본발명에 대해 설명하였지만 본발명의 제한성에 대한 규명은 아니다.
실시 사례1 의이인오일의 조제
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여60메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각40℃와45℃에 도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각50℃와35℃이고 액체CO2는 2 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 20 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 7 Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 7 Mpa와 6 Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속2.5h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 60℃) 넣고 산치에 따라 45% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 20h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 22h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 46h 방치한 뒤 아릿 층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여 80% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 3 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 5%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다.
여액을 가열한 후 4% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 45℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다.상층 오일이 질소환경의 조건하에서 가열 감압 건조를 진행한다. 그리고 오일 비중이 10%인 활성화한 중성알루미나를 가하여 충분히 교반한 후 서늘한 곳에 방치한다. 그 다음 여과시켜 여과후의 오일을 취하여 질소환경에서 가열 농축하되 그 다음 165℃ 하에서 진공 감압 건열멸균을 1.5 h 진행하고 냉각후 0.2 μm멤브레인필터로 여과한다. 그리고 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소를 충전하되 밀본시키면 바로 의이인오일 완제품이다. 본 의이인오일의 수율은 4.5%이고 측정된 물리 화학 상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.915, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.471,산가는 0.18, 아이오딘가는 102, 비누화 값은 190이다.
실시 사례2 의이인오일의 조제
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여80메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각40℃와40℃에 도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각20℃와15℃이고 액체CO2는 1 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 22 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 8Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 6 Mpa와 5 Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속2h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 90℃) 넣고 산치에 따라 56% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 22h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 20h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 48h 방치한 뒤 아렛 층의 폐수를 제거한다.
웃층을 취하여 90% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 2 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 8%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 여액을 가열한 후 6% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 42℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 2 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다.상층 오일이 질소환경의 조건하에서 가열 감압 건조를 진행한다.
그리고 오일 비중이8%인 활성화한 중성알루미나를 가하여 충분히 교반한 후 서늘한 곳에 방치한다. 그 다음 여과시켜 여과후의 오일을 취하여 질소환경에서 가열 감압 농축하되 그 다음 170℃ 하에서 감압 건열멸균을 1.5 h 진행하고 냉각후 0.2 μm멤브레인필터로 여과한다. 그리고 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소를 충전하되 밀본시키면 바로 의이인오일 완제품이다. 본 의이인오일의 수율은 4.9%이고 측정된 물리 화학 상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.920, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.473,산가는 0.19, 아이오딘가는 104, 비누화 값은 186이다.
실시 사례3 의이인오일의 조제
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여10메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각33℃와39℃와도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각30℃와20℃이고 액체CO2는 3 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 19 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 9Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 5 Mpa와 4 Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속3h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 80℃) 넣고 산치에 따라 36% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 18h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 18h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 42h 방치한 뒤 아렛 층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여 75% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 2 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 3%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 여액을 가열한 후 2% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 47℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다.상층 오일이 질소환경의 조건하에서 가열 감압건조를 진행한다. 그리고 오일 비중이12%인 활성화한 중성알루미나를 가하여 충분히 교반한 후 서늘한 곳에 방치한다. 그 다음 여과시켜 여과후의 오일을 취하여 질소환경에서 가열 감압 농축하되 그 다음 160℃ 하에서 감압 건열멸균을 2 h 진행하고 냉각후 0.2 μm멤브레인필터로 여과한다. 그리고 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소를 충전하되 밀본시키면 바로 의이인오일 완제품이다. 본 의이인오일의 수율은 4.7%이고 측정된 물리 화학 상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.918, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.474,산가는 0.15, 아이오딘가는 100, 비누화 값은 194이다.
실시 사례4 의이인오일의 조제
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여50메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각35℃와42℃에 도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각40℃와30℃이고 액체CO2는 1.5 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 21 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 10Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 7 Mpa와 5Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속2h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 70℃) 넣고 산치에 따라 50% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 19h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 21h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 50h 방치한 뒤 아렛 층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여 85% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 4 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 6%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 여액을 가열한 후 5% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 50℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다.상층 오일이 질소환경의 조건하에서 가열 감압건조를 진행한다. 그리고 오일 비중이11%인 활성화한 중성알루미나를 가하여 충분히 교반한 후 서늘한 곳에 방치한다. 그 다음 여과시켜 여과후의 오일을 취하여 질소환경에서 가열 진공 농축하되 그 다음 162℃ 하에서 감압 건조멸균을 2 h 진행하고 냉각후 0.2 μm멤브레인필터로 여과한다. 그리고 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소를 충전하되 밀본시키면 바로 의이인오일 완제품이다. 본 의이인오일의 수율은 4.0%이고 측정된 물리 화학 상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.920, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.471,산가는 0.16, 아이오딘가는 105, 비누화 값은 192이다.
실시 사례5 의이인오일의 조제
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여30메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출한다. 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각42℃와45℃에 도달하게 한다. 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각35℃와25℃이고 액체CO2는 2.5 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 23 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출한다. 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 8Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리한다.그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입한다. 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 6 Mpa와 4Mpa를 유지한다. 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있다. 이렇게 연속2h추출하여 조의이인오일을 획득한다.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 80℃) 넣고 산치에 따라 40% 오일비중의 2% NaOH용액을 가한다. 그 다음 10 min가량 혼합한 후 24h 방치시킨다. 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 24h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거한다. 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 44h 방치한 뒤 아렛 층의 폐수를 제거한다. 웃층을 취하여70% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 3 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거한다. 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 4%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과한다. 여액을 가열한 후 3% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 40℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과한다. 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1.5 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거한다.상층 오일이 질소환경의 조건하에서 가열 감압 건조를 진행한다. 그리고 오일 비중이9%인 활성화한 중성알루미나를 가하여 충분히 교반한 후 서늘한 곳에 방치한다. 그 다음 여과시켜 여과후의 오일을 취하여 질소환경에서 가열 감압 농축하되 그 다음 165℃ 하에서 감압 건열멸균을 1.5 h 진행하고 냉각후 0.2 μm멤브레인필터로 여과한다. 그리고 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소를 충전하되 밀본시키면 바로 의이인오일 완제품이다. 본 의이인오일의 수율은 4.3%이고 측정된 물리 화학 상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.916, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.473,산가는 0.14, 아이오딘가는 101, 비누화 값은 192이다.
실시 사례6
8000 mg 의이인오일을 취하여 10 ml 노멀 헥산을 가해 초음파로 용해시킨 후 이동상 아세톤을 사용하여 농도가 50 mg/mL 되는 의이인 오일을 조제한다. CHEETAH-HP100액체 크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상은 노멀 헥산: 아세톤 =94:6(v/v), 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Venusil XBP silica(20*250mm, 10μm), 유속은 18 mL/min, ELSD검출기를 사용하고 검출기의 드리프트 관 온도는 45℃로 하고 캐리어 가스의 유속은 2.0 L/min이다. 크로마토그래프중 유지시간이 15.8 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 30℃하에서 감압 농축을 진행한 후 10 ml 샘플병에 전이시켜 질소환경과 실온에서 질소로 풍건하면 완성이다. 이 물질은 바로 1, 3-디올레인이다.
실온에서는 투명색 유성물질이다.
Q-TOF/MS:유사분자이온 피크[M+Na]+=m/z 643.5277(Calcd .=643.5272, C39H72O5Na), 불포화도= 4,
1H NMR데이터와 13C NMR데이터는 표3과 같다.
Position | 1H NMR | 13 C NMR |
C-1', 1'' | 174.0 | |
C-2', 2'' | 2.33 (4H, t, J = 5.0 Hz) | 34.3 |
C-3', 3'' | 25.0 | |
C-4', 4'' | 29.3 | |
C-5', 5'' | 29.3 | |
C-6', 6'' | 29.3 | |
C-7', 7'' | 29.8 | |
C-8', 8'' | 27.3 | |
C-9', 9'' | 5.34 (2H, m) | 129.9 |
C-10', 10'' | 5.34 (2H, m) | 130.2 |
C-11', 11'' | 27.3 | |
C-12', 12'' | 29.9 | |
C-13', 13'' | 29.5 | |
C-14', 14'' | 29.7 | |
C-15', 15'' | 29.5 | |
C-16', 16'' | 32.1 | |
C-17', 17'' | 22.8 | |
C-18', 18'' | 0.87 (6H, t, J = 5 Hz) | 14.3 |
C-1 | 4.19 (2H, dd, J = 11.6, 4.8 Hz) 4.13 (2H, dd, J = 11.6, 5.7 Hz) |
65.2 |
C-2 | 4.08 (1H, m) | 68.6 |
C-3 | 4.19 (2H, dd, J = 11.6, 4.8 Hz) 4.13 (2H, dd, J = 11.6, 5.7 Hz) |
65.2 |
실시 사례7
8000 mg 의이인오일을 취하여 10 ml 노멀 헥산을 가해 초음파로 용해시킨 후 이동상 아세톤을 사용하여 농도가 50 mg/mL 되는 의이인 오일을 조제한다. CHEETAH-HP100액체 크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상은 노멀 헥산: 아세톤 =94:6(v/v), 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Venusil XBP silica(20*250mm, 10μm), 유속은 18 mL/min, ELSD검출기를 사용하고 검출기의 드리프트 관 온도는 45℃로 하고 캐리어 가스의 유속은 2.0 L/min이다.크로마토그래프중에서 유지시간이 17min 인 유분을 수집한다. 그리고 그 수집액을 취하여 30℃하에서 진공 농축을 진행한 후 10 ml 샘플병에 전이시켜 질소환경과 실온에서 질소로 풍건하여 얻은 물질은 바로 1-리놀레인-3-올레인이다.
실온에서는 투명색 유성물질이다.
Q-TOF/MS:유사분자이온 피크[M+Na]+=m/z 641.5121 (Calcd .= 641.5115, C39H72O5Na), 불포화도= 5,
1H NMR데이터와 13C NMR데이터는 표4과 같다.
Position | 1H NMR | 13 C NMR | Position | 1H NMR | 13 C NMR |
C-1' | 174.8 | C-1'' | 174.8 | ||
C-2' | 2.35 (4H, t, J = 7.6 Hz) | 35.1 | C-2'' | 2.35 (4H, t, J = 7.6 Hz) | 35.1 |
C-3' | 25.9 | C-3'' | 25.9 | ||
C-4' | 30.1 | C-4'' | 30.1 | ||
C-5' | 30.1 | C-5'' | 30.1 | ||
C-6' | 30.1 | C-6'' | 30.1 | ||
C-7' | 30.7 | C-7'' | 30.7 | ||
C-8' | 28.2 | C-8'' | 28.2 | ||
C-9' | 5.39 (1H, m) | 131.0 | C-9'' | 5.39 (1H, m) | 130.7 |
C-10' | 5.39 (1H, m) | 129.1 | C-10'' | 5.39 (1H, m) | 131.0 |
C-11' | 2.80 (2H, t, J = 6.6 Hz) | 26.6 | C-11'' | 28.2 | |
C-12' | 5.39 (1H, m) | 128.9 | C-12'' | 30.8 | |
C-13' | 5.39 (1H, m) | 131.2 | C-13'' | 30.3 | |
C-14' | 28.2 | C-14' | 30.6 | ||
C-15' | 30.5 | C-15'' | 30.3 | ||
C-16' | 32.5 | C-16'' | 32.9 | ||
C-17' | 23.6 | C-17'' | 23.7 | ||
C-18' | 0.91 (3H, t, J = 5.0 Hz) | 15.0 | C-18'' | 0.92 (3H, t, J = 5.0 Hz) | 15.1 |
C-1 | 4.21 (2H, dd, J = 11.5, 4.3 Hz) 4.16 (2H, dd, J = 11.5, 5.7 Hz) |
66.0 | |||
C-2 | 4.11 (1H, m) | 69.4 | |||
C-3 | 4.21 (2H, dd, J = 11.5, 4.3 Hz) 4.16 (2H, dd, J = 11.5, 5.7 Hz) |
66.0 |
실시 사례8
8000 mg 의이인오일을 취하여 10 ml 노멀 헥산을 가해 초음파로 용해시킨 후 이동상 아세톤을 사용하여 농도가 50 mg/mL 되는 의이인 오일을 조제한다. CHEETAH-HP100액체 크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상은 노멀 헥산: 아세톤 =94:6(v/v), 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Venusil XBP silica(20*250mm, 10μm), 유속은 18 mL/min, ELSD검출기를 사용하고 검출기의 드리프트 관 온도는 45℃로 하고 캐리어 가스의 유속은 2.0 L/min이다.크로마토그래프중에서 유지시간이 23min 인 유분을 수집한다. 그리고 그 수집액을 취하여 30℃하에서 진공 농축을 진행한 후 10 ml 샘플병에 전이시켜 질소환경과 실온에서 질소로 풍건하여 얻은 물질은 바로 1, 2-디올레인이다.
실온에서는 투명색 유성물질이다.
Q-TOF/MS:유사분자이온 피크[M+Na]+=m/z 643.5277 (Calcd .= 643.5272, C39H72O5Na), 불포화도= 4,
1H NMR데이터와 13C NMR데이터는 표5과 같다.
1, 2-디올레인 | ||
Position | 1H NMR | 13 C NMR |
C-1' C-1'' |
173.9 173.5 |
|
C-2' C-2'' |
2.33 (4H, t, J = 5.0 Hz) | 34.2 34.4 |
C-3' C-3'' |
25.0 25.1 |
|
C-4', 4'' | 29.3 | |
C-5', 5'' | 29.3 | |
C-6', 6'' | 29.3 | |
C-7', 7'' | 29.8 | |
C-8', 8'' | 27.3 | |
C-9', 9'' | 5.35 (2H,m) | 129.8 |
C-10', 10'' | 5.35 (2H,m) | 130.2 |
C-11', 11'' | 27.3 | |
C-12', 12'' | 29.9 | |
C-13', 13'' | 29.5 | |
C-14', 14'' | 29.7 | |
C-15', 15'' | 29.5 | |
C-16', 16'' | 32.1 | |
C-17', 17'' | 22.7 | |
C-18', 18'' | 0.88 (6H, t, J = 5 Hz) | 14.3 |
C-1 | 4.32 (2H, dd, J = 12.0, 4.6 Hz) 4.24 (2H, dd, J = 12.0, 5.6 Hz) |
62.1 |
C-2 | 5.08 (1H, m) | 72.3 |
C-3 | 3.73 (2H, d, J = 3.2 Hz) | 61.8 |
실시 사례9
8000 mg 의이인오일을 취하여 10 ml 노멀 헥산을 가해 초음파로 용해시킨 후 이동상 아세톤을 사용하여 농도가 50 mg/mL 되는 의이인 오일을 조제한다. CHEETAH-HP100액체 크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상은 노멀 헥산: 아세톤 =94:6(v/v), 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Venusil XBP silica(20*250mm, 10μm), 유속은 18 mL/min, ELSD검출기를 사용하고 검출기의 드리프트 관 온도는 45℃로 하고 캐리어 가스의 유속은 2.0 L/min이다.크로마토그래프중에서 유지시간이 24.5min 인 유분을 수집한다. 그리고 그 수집액을 취하여 30℃하에서 진공 농축을 진행한 후 10 ml 샘플병에 전이시켜 질소환경과 실온에서 질소로 풍건하여 얻은 물질은 바로 1-올레인-2-리놀레인이다.
실온에서는 투명색 유성물질이다.
Q-TOF/MS:유사분자이온 피크[M+Na]+=m/z 641.5121 (Calcd .= 641.5115, C39H70O5Na), 불포화도= 5,
1H NMR데이터와 13C NMR데이터는 표6과 같다.
Position | 1H NMR | 13 C NMR | Position | 1H NMR | 13 C NMR |
C-1' | 173.9 | C-1'' | 173.5 | ||
C-2' | 2.33 (2H, t, J = 5.0 Hz) | 34.2 | C-2'' | 2.33 (2H, t, J = 5.0 Hz) | 34.4 |
C-3' | 25.0 | C-3'' | 25.1 | ||
C-4' | 29.3 | C-4'' | 29.3 | ||
C-5' | 29.3 | C-5'' | 29.5 | ||
C-6' | 29.3 | C-6'' | 29.3 | ||
C-7' | 29.8 | C-7'' | 29.9 | ||
C-8' | 27.3 | C-8'' | 27.4 | ||
C-9' | 5.37 (1H, m) | 129.8 | C-9'' | 5.37 (1H, m) | 130.2 |
C-10' | 5.37 (1H,m) | 130.2 | C-10'' | 5.37 (1H, m) | 128.2 |
C-11' | 25.8 | C-11'' | 2.77 (2H, t, J = 6.5 Hz) | 25.8 | |
C-12' | 29.9 | C-12'' | 5.37 (1H, m) | 128.0 | |
C-13' | 29.5 | C-13'' | 5.37 (1H, m) | 130.4 | |
C-14' | 27.4 | C-14' | 27.4 | ||
C-15' | 29.5 | C-15'' | 29.8 | ||
C-16' | 32.1 | C-16'' | 31.7 | ||
C-17' | 22.8 | C-17'' | 22.7 | ||
C-18' | 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz ) | 14.3 | C-18'' | 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz ) | 14.2 |
C-1 | 4.32 (1H, dd, J = 11.9, 4.5 Hz) 4.23 (1H, dd, J = 11.9, 5.6 Hz) |
62.1 | |||
C-2 | 5.08 (1H, m) | 72.3 | |||
C-3 | 3.73 (2H, d, J = 3.2 Hz) | 61.8 |
실시 사례10
8000 mg 의이인오일을 취하여 10 ml 노멀 헥산을 가해 초음파로 용해시킨 후 이동상 아세톤을 사용하여 농도가 50 mg/mL 되는 의이인 오일을 조제한다. CHEETAH-HP100액체 크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상은 노멀 헥산: 아세톤 =94:6(v/v), 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Venusil XBP silica(20*250mm, 10μm), 유속은 18 mL/min, ELSD검출기를 사용하고 검출기의 드리프트 관 온도는 45℃로 하고 캐리어 가스의 유속은 2.0 L/min이다.크로마토그래프중에서 유지시간이 27min 인 유분을 수집한다. 그리고 그 수집액을 취하여 30℃하에서 진공 농축을 진행한 후 10 ml 샘플병에 전이시켜 질소환경과 실온에서 질소로 풍건하여 얻은 물질은 바로 1, 2-디리놀레인이다.
실온에서는 투명색 유성물질이다.
Q-TOF/MS:유사분자이온 피크[M+Na]+=m/z 639.4964 (Calcd .= 639.4959, C39H68O5Na), 불포화도= 6,
1H NMR데이터와 13C NMR데이터는 표7과 같다.
Position | 1H NMR | 13 C NMR | Position | 1H NMR | 13 C NMR |
C-1' | 173.9 | C-1'' | 173.5 | ||
C-2' | 2.32 (4H, t, J = 5.0 Hz) | 34.2 | C-2'' | 2.35 (2H, t, J = 5.0 Hz) | 34.4 |
C-3' | 25.0 | C-3'' | 25.1 | ||
C-4' | 29.3 | C-4'' | 29.3 | ||
C-5' | 29.5 | C-5'' | 29.5 | ||
C-6' | 29.3 | C-6'' | 29.3 | ||
C-7' | 29.9 | C-7'' | 29.9 | ||
C-8' | 27.4 | C-8'' | 27.4 | ||
C-9' | 5.37 (1H, m) | 130.2 | C-9'' | 5.37 (1H, m) | 130.2 |
C-10' | 5.37 (1H, m) | 128.2 | C-10'' | 5.37 (1H, m) | 128.2 |
C-11' | 2.77 (4H, t, J = 6.5 Hz) | 25.8 | C-11'' | 2.77 (2H, t, J = 6.5 Hz) | 25.8 |
C-12' | 5.37 (1H, m) | 128.0 | C-12'' | 5.37 (1H, m) | 128.0 |
C-13' | 5.37 (1H, m) | 130.4 | C-13'' | 5.37 (1H, m) | 130.4 |
C-14' | 27.4 | C-14' | ' | 27.4 | |
C-15' | 29.8 | C-15'' | 29.8 | ||
C-16' | 31.7 | C-16'' | 31.7 | ||
C-17' | 22.7 | C-17'' | 22.7 | ||
C-18' | 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz ) | 14.2 | C-18'' | 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz ) | 14.2 |
C-1 | 4.32 (1H, dd, J = 11.9, 4.6 Hz) 4.24 (1H, dd, J = 12.0, 5.6 Hz) |
62.1 | |||
C-2 | 5.08 (1H, m) | 72.3 | |||
C-3 | 3.73 (2H, d, J = 3.2 Hz) | 61.8 |
실시 사례11 트리리놀레인 의 분리와 감정
P3000A고성능액체크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 12.6~14.2 min인 유분을 수집하고 질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압 농축을 진행한 후클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로 트리리놀레인이다.
HR-EI-MS:m/z = 878.7344(Calcd .=878.7363, C57H98O6),불포화도=9.
IR(KBr film):1746、1170、1098;2928、2856、724;3008、1655 cm-1(약함)。
IR(KBr film):1746、1170、1098;2928、2856、724;3008、1655 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
표8 실시 사례 11-18에서 서술한 화합물의 1H-NMR그래프 데이터
그중에서 A: 트리리놀레인, B: 1-올레인-2,3 -디리놀레인, C: 1-팔미틴-2,3-디리놀레인, D: 1,3-디올레인-2-리놀레인, E: 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인, F: 1,3-디팔미틴-2-리놀레인, G: 트리올레인, H: 1-팔미틴-2,3-디올레인이다.
표9 실시 사례 11-18에서 서술한 화합물의13C-NMR그래프 데이터
그중에서 A: 트리리놀레인, B: 1-올레인-2,3 -디리놀레인, C: 1-팔미틴-2,3-디리놀레인, D: 1,3-디올레인-2-리놀레인, E: 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인, F: 1,3-디팔미틴-2-리놀레인, G: 트리올레인, H: 1-팔미틴-2,3-디올레인이다.
실시 사례12 1-올레인-2,3 -디리놀레인의 분리와 감정
P3000A 고성능액체크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 15.4~17.3 min인 유분을 수집하고질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압 농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로1-올레인-2,3 -디리놀레인이다.
HR-EI-MS:m/z=880.7518(Calcd .= 880.7520, C55H98O6),불포화도=7.
IR(KBr film):1747,1164,1098;2925,2854,723;3008,1655 cm-1(약함)。
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NM데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례13 1-팔미틴-2,3-디리놀레인 의 분리와 감정
P3000A 고성능액체크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 17.4~18.1 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소화경의 보호하에서 회전증발기로 진공 농축을 진행한 후 조제품을 얻는다.
제2차 정제의 실시는 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 상술한 조제품을 이동상 B로 농도가 20 mg/mL되는 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(10 mm×250 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~23 min 에서는 50%~60%, 32~43 min에서는 60%~90%, 43~60 min에서는 100%, 유속은 3mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 31.2~34.7 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동 보존시킨다. 이 물질은 바로 1-팔미틴-2,3-디리놀레인 단위체이다.
HR-EI-MS:m/z=854.7370(Calcd .=854.7363, C55H98O6),불포화도=7。
IR(KBr Flim):1746,1165,1095;2926,2854,722;3009,1648 cm-1(약함)。
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례14 1,3-디올레인-2-리놀레인의 분리와 감정
P3000A 고성능액체크로마토그래프를 사용하여 분리하고 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 18.4~20.2 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로1-올레인-2,3 -디리놀레인이다.
HR-EI-MS:m/z=882.7678(Calcd .=882.7672, C57H102O6),불포화도=7.
IR(KBr Flim):1747、1163、1097;2925、2855、723;3007、1655 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례15 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인의 분리와 감정
P3000A고성능액체크로마토그래프를 사용하여 먼저 초보적으로 분리한다. 이동상A: 는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 20.3~21.4 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인이다.
HR-EI-MS:m/z=856.7519(Calcd .=856.7513, C55H100O6),불포화도=6.
IR(KBr Flim):1747、1164、1098;2925、2854、723;3008、1655 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례16 1,3-디팔미틴-2-리놀레인의 분리와 감정
P3000A 고성능액체크로마토그래프를 사용하여 먼저 초보적으로 분리한다. 이동상A: 는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 20.3~21.4 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로1,3-디팔미틴-2-리놀레인이다.
HR-EI-MS:m/z=830.7371(Calcd .= 830.7363, C53H98O6),불포화도=5.
IR(KBr film): 1747、1164、1098;2925、2854、723;3008、1655 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례17 트리올레인의 분리와 감정
P3000A 고성능액체크로마토그래프를 사용하여 초보적인 분리한다. 이동상A: 는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이26.6~27.7min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조 완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다. 이 물질은 바로트리올레인이다.
HR-EI-MS:m/z=884.7851(Calcd .=884.7833, C57H104O6),불포화도=6.
IR(KBr film):1749,1165,1095;2925,2854,723;3004,1654 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례18 1-팔미틴-2,3-디올레인이다의 분리와 감정
P3000A고성능액체크로마토그래프를 사용하여 초보적인 분리하고 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 이동상 B로 농도가 50 mg/mL되는 의이인오일 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(20 mm×150 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~27 min 에서는 50%~60%, 27~35 min에서는 90%, 35~45 min에서는 100%, 유속은 18 mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 17.4~18.1 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소화경의 보호하에서 회전증발기로 진공 농축을 진행한 후 조제품을 얻는다.
제2차 정제의 실시는 이동상A는 아세토니트릴, 이동상B는 아세토니트릴: 테트라히드로푸란(1:1), 그리고 상술한 조제품을 이동상 B로 농도가 20 mg/mL되는 용액을 조제하고, 주입량은 1.5ml, 칼럼은 Superstar BenetnachTM C18(10 mm×250 mm, 5 μm), 그래디언트조건은 이동상B가 0~23 min 에서는 50%~60%, 32~43 min에서는 60%~90%, 43~60 min에서는 100%, 유속은 3mL/min, 자외선 분석 파장은 208 nm이다. 크로마토그래프중 유지시간이 32.9~35.1 min인 유분을 수집하고 수집액을 취하여 질소환경 보호하에서 회전증발기로 감압농축을 진행한 후 클로로포름을 사용하여10 ml 샘플병에 전이시켜 진공건조기에 넣어 35℃하에서 6 h 건조한 후 질소를 충전하여 건조완성한 샘플을 냉장고에 냉동보존시킨다.
이 물질은 바로1-팔미틴-2,3-디올레인이다단위체이다.
HR-EI-MS:m/z=858.7672(Calcd .= 858.7676, C55H102O6),불포화도=5.
IR(KBr film): 1747,1166,1095;2926,2854,722;3003,1654 cm-1(약함).
1H-NMR데이터는 표8에서와 같다.
13C-NMR데이터는 표9에서와 같다.
실시 사례 19 본 발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 100 g
주사용 대두 레시틴 10 g
주사용 글리세린 15 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.50%
1-리놀레인 -3-올레인 1.31%
1-올레인-2-리놀레인0.95%
1, 2-디리놀레인0.41%
트리리놀레인6.10%
1-올레인-2,3-디리놀레인16.18%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.56%
1,3-디올레인-2-리놀레인16.69%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.96%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.88%
트리올레인18.30%
1-팔미틴-2,3-디올레인10.18%
프로세스:
처방에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀하게 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방 배합량에 따라 주상용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 60℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 6 MPa이고 고압은 30 MPa이며 4번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 8.5되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.40%
1-리놀레인 -3-올레인 1.05%
1, 2-디올레인0.24%
1-올레인-2-리놀레인0.76%
1, 2-디리놀레인0.33%
트리리놀레인4.87%
1-올레인-2,3-디리놀레인13.00%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.25%
1,3-디올레인-2-리놀레인15.13%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인10.26%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.05%
트리올레인20.46%
1-팔미틴-2,3-디올레인11.50%
프로세스:
처방에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 70℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 12MPa이고 고압은 45 MPa이며 3번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 7.1되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례 21 본 발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 200 g
주사용 대두 레시틴 25 g
주사용 글리세린 30 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.45%
1-리놀레인 -3-올레인 1.18%
1, 2-디올레인0.27%
1-올레인-2-리놀레인0.86%
1, 2-디리놀레인0.37%
트리리놀레인5.47%
1-올레인-2,3-디리놀레인14.75%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.01%
1,3-디올레인-2-리놀레인18.19%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인14.11%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.60%
트리올레인16.25%
1-팔미틴-2,3-디올레인9.11%
프로세스:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 65℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 10MPa이고 고압은 30 MPa이며 5번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 4.8되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례 22 본 발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 150 g
주사용 대두 레시틴 35 g20
주사용 글리세린혹은 30 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.49%
1-리놀레인 -3-올레인 1.28%
1, 2-디올레인0.29%
1-올레인-2-리놀레인0.93%
1, 2-디리놀레인0.40%
트리리놀레인5.96%
1-올레인-2,3-디리놀레인15.93%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.43%
1,3-디올레인-2-리놀레인16.20%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.57%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.79%
트리올레인17.69%
1-팔미틴-2,3-디올레인9.87%
프로세스:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀하게 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 68℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 7MPa이고 고압은 35 MPa이며 3번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 6.8되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례23 본 발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 200 g
비타민E 0.20 g
1000알 조제한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.51%
1-리놀레인 -3-올레인 1.34%
1, 2-디올레인0.31%
1-올레인-2-리놀레인0.97%
1, 2-디리놀레인0.42%
트리리놀레인6.20%
1-올레인-2,3-디리놀레인16.58%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.69%
1,3-디올레인-2-리놀레인16.87%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인13.09%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.91%
트리올레인18.42%
1-팔미틴-2,3-디올레인10.27%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:1.2:0.8:0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 10% 에칠파라벤 용액을 취하여 글리세린, 정제수, 10%에칠파라벤 용액 이 순서에 따라 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 70℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 60℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 비타민E를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 26℃, 상대습도가 35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 24 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 800 g
트윈 80 0.60 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.55%
1-리놀레인 -3-올레인 1.44
1, 2-디올레인0.33%
1-올레인-2-리놀레인1.05%
1, 2-디리놀레인0.45%
트리리놀레인6.69%
1-올레인-2,3-디리놀레인17.88%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인7.21%
1,3-디올레인-2-리놀레인14.92%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인11.55%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.14%
트리올레인19.86%
1-팔미틴-2,3-디올레인11.08%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:1.2:0.8:0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 벤조산을 취하여 글리세린, 정제수, 벤조산 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 90℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 56℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 트윈 80을 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 28℃, 상대습도가 35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 25 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 500 g
비타민E 0.40 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.58%
1-리놀레인 -3-올레인 1.14%
1, 2-디올레인0.35%
1-올레인-2-리놀레인0.83%
1, 2-디리놀레인0.47%
트리리놀레인6.99%
1-올레인-2,3-디리놀레인18.69%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인7.54%
1,3-디올레인-2-리놀레인19.02%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인14.75%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.28%
트리올레인15.96%
1-팔미틴-2,3-디올레인9.70%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:0.9:0.6:0.005에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 소르브산칼륨를 취하여 글리세린, 정제수, 소르브산칼륨 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 80℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 62℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 비타민E를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 28℃, 상대습도가35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 26 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 600 g
트윈 80 0.3 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.45%
1-리놀레인 -3-올레인 1.26%
1, 2-디올레인0.27%
1-올레인-2-리놀레인0.88%
1, 2-디리놀레인0.36%
트리리놀레인6.15%
1-올레인-2,3-디리놀레인16.31%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.66%
1,3-디올레인-2-리놀레인16.77%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.89%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.88%
트리올레인18.30%
1-팔미틴-2,3-디올레인10.18%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:1.0:0.5:0.008에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 클로르헥시딘아세테이트를 취하여 글리세린, 정제수, 클로르헥시딘아세테이트 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 85℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 56℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 트윈 80을 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 30℃, 상대습도가35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 27 본발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 100 g
주사용 대두 레시틴 10 g
주사용 글리세린 15 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.42%
1-리놀레인 -3-올레인 1.25%
1, 2-디올레인0.25%
1-올레인-2-리놀레인0.81%
1, 2-디리놀레인0.35%
트리리놀레인5.13%
1-올레인-2,3-디리놀레인14.09%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.74%
1,3-디올레인-2-리놀레인15.01%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인10.95%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.88%
트리올레인20.75%
1-팔미틴-2,3-디올레인8.69%
프로세스:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀하게 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 60℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 7 MPa이고 고압은 26 MPa이며 5번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 6.8되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례 28 본발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 300 g
주사용 대두 레시틴 40 g
주사용 글리세린 50 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.46%
1-리놀레인 -3-올레인 1.20%
1, 2-디올레인0.28%
1-올레인-2-리놀레인0.90%
1, 2-디리놀레인0.38%
트리리놀레인5.71%
1-올레인-2,3-디리놀레인15.11%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.02%
1,3-디올레인-2-리놀레인15.45%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인14.20%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.20%
트리올레인17.14%
1-팔미틴-2,3-디올레인9.22%
프로세스:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀하게 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 70℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 11 MPa이고 고압은 48MPa이며 6번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 7.5되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례 29 본발명 의이인오일 주사액의 조제
처방정보:
의이인오일 200 g
주사용 대두 레시틴 25 g
주사용 글리세린 30 g
주사용 물을 1000 ml되게 가한다.
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.50%
1-리놀레인 -3-올레인 1.31%
1, 2-디올레인0.30%
1-올레인-2-리놀레인0.95%
1, 2-디리놀레인0.41%
트리리놀레인6.18%
1-올레인-2,3-디리놀레인16.03%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.51%
1,3-디올레인-2-리놀레인16.30%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.83%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.81%
트리올레인18.10%
1-팔미틴-2,3-디올레인9.95%
프로세스:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀하게 칭량하여 적당량의 주사용물을 가하여 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산한다. 그리고 처방배합량에 따라 주상용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비한다.
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 65℃까지 가열한다. 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시킨다. 유화 시 균질기의 저압은 8 MPa이고 고압은 40MPa이며 4번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 한다. 그리고 필요 시에는 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 6.5되게 조절하도록 한다.
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성된다.
실시 사례 30 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 200 g
비타민E 0.20 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.52%
1-리놀레인 -3-올레인 1.40%
1, 2-디올레인0.32%
1-올레인-2-리놀레인1.01%
1, 2-디리놀레인0.43%
트리리놀레인6.51%
1-올레인-2,3-디리놀레인17.26%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.84%
1,3-디올레인-2-리놀레인17.65%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인13.56%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.07%
트리올레인19.33%
1-팔미틴-2,3-디올레인10.80%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:1.2:0.8:0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 10%에칠파라벤 용액을 취하여 글리세린, 정제수, 10%에칠파라벤 용액 이 순서에 따라 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 70℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 59℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 비타민E를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 온도가 16℃, 상대습도가35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 31 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 800 g
트윈 80 0.60 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.56%
1-리놀레인 -3-올레인 1.11%
1, 2-디올레인0.34%
1-올레인-2-리놀레인0.91%
1, 2-디리놀레인0.46%
트리리놀레인6.71%
1-올레인-2,3-디리놀레인18.01%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인7.25%
1,3-디올레인-2-리놀레인18.50%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인11.90%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.63%
트리올레인19.91%
1-팔미틴-2,3-디올레인11.21%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:1.2:0.8:0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 벤조산을 취하여 글리세린, 정제수, 벤조산 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 90℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 60℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 트윈 80을 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 26℃, 상대습도가35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
실시 사례 32 본발명 의이인오일 캡슐제의 조제
처방정보:
의이인오일 500 g
비타민E 0.40 g
1000알 조제한다
그중, 의이인오일은 다음과 같은 성분을 함유하고 있다.
1,3-디올레인0.57%
1-리놀레인 -3-올레인 1.21%
1, 2-디올레인0.34%
1-올레인-2-리놀레인0.86%
1, 2-디리놀레인0.46%
트리리놀레인6.85%
1-올레인-2,3-디리놀레인18.24%
1-팔미틴-2,3-디리놀레인7.25%
1,3-디올레인-2-리놀레인18.61%
1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.03%
1,3-디팔미틴-2-리놀레인3.01%
트리올레인18.60%
1-팔미틴-2,3-디올레인11.21%
프로세스:
젤용액 조제: 중량비1:0.9:0.6:0.005에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 소르브산칼륨를 취하여 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 80℃까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때 까지 교반시킨다. 그리고 젤용액을 여과시키고 62℃하에서 보관하여 예비용으로 준비한다.
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 비타민E를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반한다.
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 20℃, 상대습도가35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시킨다. 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 ?는다. 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하되 인자하고 포장한다.
Claims (19)
- 하기의 질량백분율의 5가지 디글리세라이드류 성분과 8가지 트리글리세라이드류의 성분으로 구성되며,
초임계 CO2추출 및 알칼리 정제를 포함하는 정제 공정의 단계를 포함하는 공정에 의하여 얻어지는 의이인오일:
1,3-디올레인 0.40~0.58%, 1-리놀레인 -3-올레인 0.91~1.31%, 1, 2-디올레인 0.24~0.35%, 1-올레인-2-리놀레인0.66~0.95%, 1, 2-디리놀레인 0.33~0.47%, 트리리놀레인 4.87~6.99%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 13.00~18.69%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.25~7.54%, 1,3-디올레인-2-리놀레인13.23~19.02%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인 10.26~14.75%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.28~3.28%, 트리올레인 14.44~20.76% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 8.06~11.58%. - 제1항에 있어서,
상기 의이인오일을 지방오일로 하여 분석한 결과 즉 물리화학상수는 각각 온도가 20℃일 때 상대밀도는 0.916~0.920, 온도가 20℃일 때 굴절률은 1.471~1.474,산가<0.2, 아이오딘가는 100~106, 비누화 값은 186~195이고,
상기 디글리세라이드성분과 트리글리세라이드의 질량백분율 함량은 1,3-디올레인 0.45~0.55%, 1-리놀레인 -3-올레인 1.03~1.25%, 1, 2-디올레인 0.27~0.33%, 1-올레인-2-리놀레인0.75~0.91%, 1, 2-디리놀레인 0.37~0.45%, 트리리놀레인 5.47~6.69%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 14.63~17.88%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인5.9~7.21%, 1,3-디올레인-2-리놀레인14.88~18.19%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인 11.55~14.11%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인 2.57~3.14%, 트리올레인 16.25~19.86% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 9.07~11.08%인, 의이인오일. - 제1항에 있어서,
상기 디글리세라이드성분과 트리글리세라이드의 질량백분율 함량은 1,3-디올레인 0.49~0.51%, 1-리놀레인 -3-올레인 1.12~1.16%, 1, 2-디올레인 0.29~0.31%, 1-올레인-2-리놀레인0.81~0.85%, 1, 2-디리놀레인 0.40~0.42%, 트리리놀레인 5.96~6.20%, 1-올레인-2,3-디리놀레인 15.93~16.58%, 1-팔미틴-2,3-디리놀레인6.43~6.69%, 1,3-디올레인-2-리놀레인16.20~16.87%, 1-팔미틴-2-리놀레인-3-올레인12.57~13.09%, 1,3-디팔미틴-2-리놀레인2.79~2.91%, 트리올레인 17.69~18.42% 및 1-팔미틴-2,3-디올레인 9.87~10.27%인, 의이인오일. - 하기의 순서를 포함하는, 제1항 기재의 의이인오일의 조제방법:
초임계 이산화탄소 추출: 적당량의 의이인을 취하여 10메시~80메시 규격으로 부순 후 600 L×2 초임계 이산화탄소 추출기를 사용하여 추출하고, 먼저 의이인분말을 추출기에 가하고 재킷형 순환 온수를 이용하여 CO2예열기, 추출기, 분리탑을 히팅하여 추출온도와 분리온도가 각각 33~45℃와 30~45℃에 도달하게 하고, 그리고 세퍼레이터 I 과 세퍼레이터 II의 출구온도는 각각 20~50℃과 15~35℃이고 액체CO2는 1~3 t/h의 유속으로 고압 펌프를 통해 CO2예열기로 진입하여 초임계 상채의 유체로 추출기에 진입한 후 19~23 Mpa압력을 유지하여 의이인오일을 추출하고, 의이인오일이 용해된 CO2유체가 분리탑에 진입됨에 따라 분리탑의 압력을 7~10 Mpa로 제어하여 의이인오일를 분리하고, 그리고 분리탑에서 분리되여 흘러나온 CO2기체는 순서대로 세퍼레이터 I, 세퍼레이터 II에 진입하고, 이때 세퍼레이터 I과 세퍼레이터 II의 압력은 각각 5~7 Mpa와 4~6 Mpa를 유지하고, 그 후 분리하여 얻은 물과 불순물등은 버리고 CO2기체는 응축기를 통해 액체CO2로 변하여 재활용 되고 있고, 이렇게 연속2~3 h추출하여 조의이인오일을 획득함.
정제: 초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 60℃-90℃) 넣고 산치에 따라 36%~56% 오일비중의 2% NaOH용액을 가하고, 그 다음 10 min가량 혼합한 후 18~24 h 방치시키고, 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 18~24h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거하고, 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 40~50 h 방치한 뒤 아렛층의 폐수를 제거하고, 웃층을 취하여 70%~90% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 2~4 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거하고, 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 3%~8%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과하고, 그리고 여액을 취하여 가열한 뒤 2%~6%오일비중의 고령토를 가하여 혼합하고 40~50℃하에서 30 min간 보온시킨후 여과하고, 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1~2 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거하고, 그 다음 웃층 오일을 취하여 질소환경에서 가열 진공 건조를 행한후 또 다시 8%~12% 오일비중의 활성화된 중성 알루미나를 가하여 혼합한 후 서늘한 곳에 방치시켜 여과하고, 그리고 여과한 후의 오일을 질소환경 하에서 가열하여감압 농축한 후 160~170℃하에서 1~2 h 건열멸균을 진행하고, 그 다음 랭각하되 0.2 μm멤브레인필터로 여과하여 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소을 넣어 밀봉함. - 제4항에 있어서,
상기 정제순서는 다음과 같은, 의이인오일의 조제방법:
초임계CO2추출을 통하여 얻은 조의이인오일을 취하여 60% 오일비중의 석유에테르 (bp. 60℃-90℃) 넣고 산치에 따라 36%~56% 오일비중의 2% NaOH용액을 가하고, 그 다음 10 min가량 혼합한 후 20 h 방치시키고, 그 후 아랫 층의 니제르를 제거하고 웃층을 취하여 정제수로 ?어낸 후 22h 방치하여 아랫 층의 폐수를 제거하고, 그리고 웃층을 취하여 재차 정제수로 ?어 46 h 방치한 뒤 아렛 층의 폐수를 제거하고, 웃층을 취하여 70%~90% 오일비중의 아세톤을 가하여 유화파괴하고 3 h 방치한 뒤 쓸모없는 아랫 층의 아세톤을 제거하고, 그리고 웃층 오일용액을 취하여 오일비중이 5%이고 활성화된 중성 알루미나를 가하여 30 min간 혼합한 후 여과하고, 여액을 가열한 후 4% 오일비중의 활성화 한 고령토을 가하여 혼합하고 40~50℃하에서 30 min가량 보온을 유지한 뒤 여과하고, 그리고 여액을 취하여 감압하에서 용제를 회수한 뒤 다시 정제수를 가하여 ?어낸 후 1 h 방치시킨 다음 아랫 층의 폐물을 제거하고, 그 다음 웃층 오일을 취하여 질소환경에서 가열 진공 건조를 행한후 또 다시 8%~12% 오일비중의 활성화된 중성 알루미나를 가하여 혼합한 후 서늘한 곳에 방치시켜 여과하고, 그리고 여과한 후의 오일을 질소환경 하에서 가열하여 감압 농축한 후 또160~170℃하에서 2h 감압 건열멸균을 진행하고, 그 다음 랭각하되 0.2 μm멤브레인필터로 여과하여 500 ml 유리 수액병에 분할 충전한 후 질소을 넣어 밀봉함. - 치료 유효용량을 함유하는 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 기재된 임의의 한가지 의이인오일 및 한가지 혹은 여러가지의 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약물제제이며,
상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 약학분야에서의 통상적으로 사용되는 희석제, 부형제, 충전제, 유화제, 결합제, 윤활제, 흡수촉진제, 계면활성제, 붕괴제 혹은 산화 방지제를 포함하는, 약물제제. - 제6항에 있어서,
상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 향미료, 감미료, 방부제 혹은 착색제를 더 포함하는, 약물제제. - 제6항에 있어서,
상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 마니톨, 소르비톨, 메타중아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, 시스테인히드로클로라이드, 치오글라이콜릭애씨드, 메티오닌, 대두 레시틴, 비타민C, 비타민E, EDTA2나트륨, EDTA칼슘2나트륨, 1가 알칼리 금속의 탄산염, 아세트산염, 인산염 혹은 그 물용액, 염산, 아세트산, 황산, 인산, 아미노산, 염화나트륨, 염화칼륨, 젖산나트륨, 에칠파라벤 용액, 벤조산, 포타슘소르베이트, 클로르헥시딘아세테이트, 자일리톨, 맥아당, 포도당, 과당, 덱스트란, 글리신, 전분, 자당, 유당, 만니톨, 규질파생물, 섬유소 및 그 파생물, 알긴산 염류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 글리세린, 트윈 80, 한천, 탄산칼슘, 중탄산칼슘, 계면활성제, 폴리에틸렌글리콜, 사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 인지질류 자재, 고령토, 활석분말, 칼슘스테아레이트 혹은 마그네슘스테아레이트 중에서 선택할 수 있는, 약물제제. - 제6항에 있어서,
상기 약물제제는 경구 고체약물제제, 경구 액체약물제제 혹은 주사제 모두 가능하고,
상기 경구 고체제제는 캡슐제, 정제, 드리핑 정제, 농축환중의 한가지이고, 상기 경구 액체제제는 수성 혹은 유성 현탁액, 용액, 유제, 시럽제 혹은 엘릭시르제, 혹은 사용전에 상기 수성 혹은 유성 현탁액, 용액, 유제, 시럽제 혹은 엘릭시르제로 제제될 수 있는 건조제품이며, 상기 주사제는 나노현탁액, 리포솜, 유제, 동결건조분말과 수성주사제에서 임의의 한 가지를 선택할 수 있는, 약물제제. - 제9항에 있어서,
상기 주사제가 하기의 성분을 함유하고 있는, 약물제제:
의이인오일 50~350 g
주사용 대두 레시틴 10~40 g
주사용 글리세린 15~50 g
주사용 물로 1000 ml까지 표선을 맞춘다. - 하기의 순서를 포함하는, 제10항 기재의 약물제제의 조제방법:
처방정보에 따라 배합량의 주사용 대두 레시틴을 정밀히 취한 후 적당량의 주사용 물을 가하고, 그 다음 고전단력 분산유화용 믹서기를 사용하여 덩어리 혹은 과립고체가 사라질 때까지 분산하고, 그리고 처방배합량에 따라 주사용 글리세린을 정밀하게 취한 뒤 주사용물로 배합량의 표선을 맞춘 후 충분히 혼합하여 예비용으로 준비하고,
별도로 의이인오일을 취해 바로 칭량된 오일과 물을 각각 60~70℃까지 가열하고, 그 다음 고압균질기에 넣어 고압 유화시키고, 유화 시 균질기의 저압은 5~12 MPa이고 고압은 25~50 MPa이며 3~6번의 재순환 균질화를 수행하여 분석시 2 μm이하의 과립이 95%이상이고 5 μm이상의 과립이 점검되지 말아야 하고, 그리고 NaOH혹은 HCl를 사용하여 pH가 4.8~8.5범위에 있도록 조절하고,
그 다음 조제된 균일한 유제를 가압 질소환경에서 3 μm보다 크지 않은 마이크로포러스 필터기를 사용하여 여과시킨 뒤 질소환경에서 충전 포장한 후 멸균, 냉각하면 완성됨. - 제11항에 있어서,
NaOH 혹은 HCl를 사용하여 pH가 6.8~7.0에 있도록 조절하는, 약물제제의 조제방법. - 제11항에 있어서,
NaOH 혹은 HCl를 사용하여 pH가 6.8에 있도록 조절하는, 약물제제의 조제방법. - 제9항에 있어서,
상기 캡슐제가 하기의 성분을 함유하고 있는, 약물제제:
의이인오일 200~800 g
산화 방지제 및 유화제 0.20~0.60 g
1000알을 조제한다. - 하기의 순서를 포함하는, 제14항에 기재된 약물제제의 조제방법:
젤용액 조제: 중량비1:0.6~1.2:0.3~0.8:0.0001~0.01에 따라 적당량의 젤라틴, 정제수, 글리세린과 방부제를 취하여 글리세린, 정제수, 방부제 이 순서대로 젤멜팅탱크안에 가한 뒤 70℃~90℃에까지 가열한 후 또 젤라틴을 넣어 진공 조건하에서 젤라틴이 충분히 혼합될 때까지 교반시키고, 그리고 젤용액을 여과시키고 56~62℃하에서 보관하여 예비용으로 준비하고,
약액 조제: 처방 배합량의 의이인오일, 산화 방지제 및 유화제를 취하여 도징탱크에 가하여 충분히 혼합될 때까지 계속 교반하고,
캡슐 압축 성형: 캡슐 크기에 따라 적당한 펠렛다이를 선택하여 온도가 15~30℃, 상대습도가 35%이하인 조건에서 압축 성형한 후 건조시키고, 그 다음 불량크기의 반성품을 제거하고 95%약용 알콜로 반성품을 씻고, 그리고 계속 건조시켜 수분함량을 12%이하로 하고 육안으로 불량 캡슐을 제거하고 포장하고,
상기 방부제는 10%에칠파라벤 용액, 벤조산, 소르브산칼륨와 클로르헥시딘아세테이트에서 한가지를 선택하고,
상기 산화 방지제는 비타민E이고 유화제는 트윈 80임. - 제1항 기재의 의이인오일을 항종양제 혹은 염증치료제로의 조제에 사용하는 방법.
- 제16항에 있어서,
상기 항종양제는 상기 의이인오일과 백금류, 알킬화제류, 디플루오로뉴클레오시드, 항생제류, 세포독성제류 및 호르몬류에서 선택되는 하나 이상의 화학약물의 조합인, 방법. - 제16항에 있어서,
상기 항종양제는 상기 의이인오일과 시스플라틴, 카보플라틴, 시클로포스파미드, 염산젬시타빈, 미톡산트론, 미토마이신, 류프로렐린엣트산염, 도세탁셀 및 파클리탁셀에서 선택되는 하나 이상의 화학약물의 조합인, 방법. - 제16항에 있어서,
종양은 조기, 중기 혹은 말기에 처한, 폐암, 간암, 췌장암, 전립선암, 난소암, 유방암, 육종성 암, 또는 암육종을 가리키고,염증은 전립선염증 혹은 전립선비대증을 가리키는, 방법.
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