KR101841238B1 - Pharmaceutical Composition Comprising Inhibitor of TRPC3 for Treating Itch - Google Patents

Abstract

본 발명은 TRPC3(transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3)의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 미토콘드리아 기능 장애로 인한 mROS 과잉생성으로부터 유도된 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 만성 가려움증을 억제하고 치료하는 신규한 방법을 제공할 수 있다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 (transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3) as an active ingredient.
According to the present invention, it is possible to provide a novel method for suppressing and treating chronic itching caused by itching induced by mROS excess production due to mitochondrial dysfunction or dry skin.

Description

TRPC3의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물{Pharmaceutical Composition Comprising Inhibitor of TRPC3 for Treating Itch}[0001] The present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 as an active ingredient.

본 발명은 TRPC3(transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3)의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 (transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3) as an active ingredient.

미토콘드리아(mitochondria)는 세포 호흡에 관여하는 세포 소기관의 하나로서, 뉴런을 포함하는 진핵세포에서 대부분 발견되며, 에너지 전환, 지질대사, 세포소멸, 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 생성과 같은 다양한 필수적인 작용을 수행한다. 미토콘드리아는 어디에나 분포되어 있고 세포 생리학에서 중요한 역할을 하고 있기 때문에, 미토콘드리아의 기능 장애는 다양한 질병의 중요한 요소 중 하나로 작용한다. Mitochondria are one of the organelles involved in cell respiration. They are found mostly in eukaryotic cells including neurons, and they are involved in various processes such as energy conversion, lipid metabolism, cell extinction, reactive oxygen species (ROS) generation Perform the necessary action. Because mitochondria are distributed everywhere and play an important role in cell physiology, mitochondrial dysfunction is one of the important components of various diseases.

미토콘드리아 기능 장애는 종종 미토콘드리아 전자 전달 복합 단지(mitochondrial electron transport complex; mETC)로부터 생성되는 미토콘드리아 활성산소종(mROS)이 유전적 결함이나 다양한 질병에 의한 손상으로 인하여 과잉 생성되는 현상을 포함한다. Mitochondrial dysfunction often involves overproduction of mitochondrial reactive oxygen species (mROS) generated from the mitochondrial electron transport complex (mETC) due to genetic defects or damage by various diseases.

미토콘드리아 기능 장애 및 mROS는 최근 감각 이상과도 관련되고 있다. 예를 들어, 미토콘드리아 기능 장애는 유전적 결함, 당뇨병 및 암과 HIV를 위한 화학요법 등에 의한 고통스러운 말초신경증의 중요한 원인 중 하나이다. 척수 내의 mROS 생성이 척수후뿔(dorsal horn) 뉴런의 스냅스 변화를 야기하여 통증 과민증을 유발하고, 평범한 쥐에 mETC III 억제제를 척수관 주사로 주입했을 때 용량 의존적으로 기계적 통각과민을 발생한다는 것이 보고된 바 있다. 이는 mROS가 통증 프로세스에서 중요한 역할을 한다는 것을 의미한다. 그러나, 지금까지 미토콘드리아 기능 장애 및 mROS 과잉생성이 가려움증에 미치는 영향에 대해서는 연구된 바가 없다. Mitochondrial dysfunction and mROS have recently been linked to sensory abnormalities. For example, mitochondrial dysfunction is one of the major causes of painful peripheral neuropathy caused by genetic defects, diabetes, and chemotherapy for cancer and HIV. It has been reported that mROS production in the spinal cord induces pain hypersensitivity by causing a synapse change in the dorsal horn neuron, and when the mETC III inhibitor is injected into the normal mouse by spinal tube injection, mechanical hyperalgesia occurs in a dose-dependent manner have. This means that mROS plays an important role in the pain process. However, the effect of mitochondrial dysfunction and mROS overproduction on itching has not been studied so far.

한편, TRP(transient receptor potential) 패밀리는 이온 채널 유전자의 그룹이며, TRPC(canonical), TRPV(vallinoid), TRPM(melastatin), TRPA(ankyrin), TRPP(polycystin) 및 TRPML(mucolipin)을 포함하는 6개의 서브 패밀리로 나누어진다. 이들 중에서 TRPC는 비선택적 Ca^{2 +}-투과성 양이온 채널로서 7개의 채널(TRPC1-TRPC7)을 가지고 있다. 최근 TRPC 채널이 평활근의 기능 조절에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려지면서, 다양한 질환의 병태생리학적 기전에서 TRPC 채널의 관련성과 중요성이 제시되고 있다. On the other hand, the transient receptor potential (TRP) family is a group of ion channel genes and is composed of 6 members including TRPC (canonical), TRPV (vallinoid), TRPM (melastatin), TRPA (ankyrin), TRPP (polycystin) and TRPML (mucolipin) Subgroups. Among these are non-selective TRPC Ca ^{2 +} - has seven channels (TRPC1-TRPC7) a permeable cation channel. Recently, TRPC channels have been shown to play an important role in the regulation of smooth muscle function, suggesting the relevance and importance of TRPC channel in the pathophysiological mechanism of various diseases.

이와 관련하여, 가려움 또는 소양감은 긁고 싶은 충동을 일으키는 불쾌한 감각으로서 피부과 환자들의 가장 평범한 증상이다. 종래 대부분의 연구들은 이와 같은 가려움증을 유발하는 물질로서 히스타민을 특정하였고, 만성 가려움증의 치료를 위하여 항-히스타민제를 사용함으로써 제한적인 효능을 나타내고 있다.  In this regard, itching or bulimia is the most common symptom of dermatologists as an unpleasant sensation that causes a urge to scratch. Most studies have identified histamine as a substance that causes such itching and have shown limited efficacy by using an anti-histamine agent for the treatment of chronic itching.

그러나, 본 발명의 발명자들은 미토콘드리아 기능 장애로 인한 국지적인 mROS 증가가 피부의 가려움증을 유발한다는 것을 새롭게 발견하였으며, 더 나아가 TRPC3 채널을 억제함으로써 이와 같은 가려움증을 치료할 수 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.However, the inventors of the present invention have newly found that an increase in local mROS due to mitochondrial dysfunction induces itching of the skin, and furthermore, it is possible to treat such itching by inhibiting the TRPC3 channel, and completed the present invention .

본 발명의 목적은 TRPC3의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 as an active ingredient.

이와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 TRPC3(transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3)의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 (transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3) as an active ingredient.

본 발명의 일 구현예는, 상기 TRPC3의 억제제가 에틸-1-(4-(2,3,3-트리클로로아크릴아미드)페닐)-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카복실레이트(ethyl-1-(4-(2,3,3-trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxylate)인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.One embodiment of the present invention is a method of inhibiting TRPC3 in which the inhibitor of TRPC3 is ethyl-1- (4- (2,3,3-trichloroacrylamide) phenyl) -5- (trifluoromethyl) (Trifluoromethyl) -1H-pyrazole-4-carboxylate), characterized in that it is a pharmaceutical composition for the treatment of pruritus, to provide.

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]페닐]-4-메틸-벤젠술폰아미드(N-[4-[3,5-Bis(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]phenyl]-4-methyl-benzenesulfonamide)인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. An embodiment of the present invention also relates to the use of the TRPC3 inhibitor wherein the inhibitor of TRPC3 is N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methyl- Amide (N- [4- [3,5-Bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4-methyl-benzenesulfonamide.

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 하기 화학식 1로 표현되는 아닐리노-트리아졸계 화합물인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다:An embodiment of the present invention also provides a pharmaceutical composition for the treatment of itch, wherein the inhibitor of TRPC3 is an anilino-triazole-based compound represented by the following formula 1:

[화학식 1][Chemical Formula 1]

상기 화학식 1에서, In Formula 1,

R¹은 4-Me, 4-Cl, 4-OMe, 2-Cl, 2-F,4-Cl, 3,4-(O-CH₂-O) 또는 2-F-4,5-(O-CH₂-O)이고, R ¹ is 4-Me, 4-Cl, 4-OMe, 2-Cl, 2-F, 4-Cl, 3,4- (O-CH 2 -O) or 2-F-4,5- (O -CH ₂ -O), and

R²는 H, Me 또는 Cl이며, R ² is H, Me or Cl,

R³은 4-Me, 2-Ph, 4-사이클로헥실, 2,3-diMe, (S,S)-2,3-diMe 또는 (R,R)-2,3-diMe이다.R ³ is 4-Me, 2-Ph, 4-cyclohexyl, 2,3-diMe, (S, S) -2,3-diMe or (R, R) -2,3-diMe.

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 하기 화학식 2로 표현되는 아닐리노-트리아졸계 화합물인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다:An embodiment of the present invention also provides a pharmaceutical composition for the treatment of itch, wherein the inhibitor of TRPC3 is an anilino-triazole compound represented by the following formula 2:

[화학식 2](2)

상기 화학식 2에서, In Formula 2,

R¹은 4-OMe, 3,4-(O-CH₂-O) 또는 2-F,4-Cl이고,R ¹ is 4-OMe, 3,4- (O-CH ₂ -O) or 2-F, 4-Cl,

R²는 H 또는 Me이며, R ² is H or Me,

R³은 H 또는 Me이고, R ³ is H or Me,

X는 CH 또는 N이다.X is CH or N;

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 2-아미노에톡시다이페닐보란(2-aminoethoxydiphenylborane; 2-APB)인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. An embodiment of the present invention also provides a pharmaceutical composition for the treatment of itch, characterized in that the inhibitor of TRPC3 is 2-aminoethoxydiphenylborane (2-APB).

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 1-[2-(4-메톡시페닐)-2-[3-(4-메톡시페닐)프로폭시]에틸-1H-이미다졸 하이드로클로라이드](1-[2-(4-methoxyphenyl)-2-[3-(4-methoxyphenyl)propoxy]ethyl-1H-imidazole hydrochloride])인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. An embodiment of the present invention also relates to the use of an inhibitor of TRPC3 wherein the inhibitor of TRPC3 is 1- [2- (4-methoxyphenyl) -2- [3- (4-methoxyphenyl) propoxy] ethyl-1H-imidazole hydrochloride A pharmaceutical composition for the treatment of itch is provided which is characterized in that it is 1- [2- (4-methoxyphenyl) -2- [3- (4-methoxyphenyl) propoxy] ethyl-1H-imidazole hydrochloride].

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 La^{3 +} 또는 Gd^{3 +}를 포함하는 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. In one embodiment of the present invention also provides a pharmaceutical composition for application to, itching treatment, characterized in that the inhibitor of the TRPC3 including La ^{+ 3,} or Gd ^{+ 3.}

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)피라졸-1-일]페닐]-4-메틸티아다이아졸-5-카르복사미드(N-[4-[3,5-bis(trifluoromethyl)pyrazol-1-yl]phenyl]-4-methylthiadiazole-5-carboxamide) 인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. An embodiment of the present invention is also directed to a method of inhibiting TRPC3, wherein the inhibitor of TRPC3 is N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methylthiadiazole- The present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of itch, characterized in that the compound is N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) pyrazol-1-yl] phenyl] -4-methylthiadiazole-5-carboxamide .

본 발명의 일 구현예는 또한, 상기 TRPC3의 억제제가 암모니아화 루테늄 옥시클로라이드(ammoniated ruthenium oxychloride)인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물.An embodiment of the present invention is also the pharmaceutical composition for the treatment of itching, wherein the inhibitor of TRPC3 is ammoniated ruthenium oxychloride.

본 발명에 있어서, 상기 가려움증은 미토콘드리아의 기능 장애로 유도된 가려움증인 것을 특징으로 할 수 있으며, 또한, 상기 가려움증은 미토콘드리아의 활성산소종(ROS) 과잉 생성으로 인한 가려움증인 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the itching may be characterized by itching induced by dysfunction of the mitochondria, and the itching may be an itch caused by overproduction of reactive oxygen species (ROS) of the mitochondria.

본 발명에 있어서, 상기 가려움증은 건조한 피부로 인하여 유도된 만성 가려움증인 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the itching may be a chronic itch induced by dry skin.

상기와 같은 과제해결수단에 의한 본 발명은 미토콘드리아 기능 장애로 인하여 유도된 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 만성 가려움증을 억제하고 치료하는 신규한 방법을 제공할 수 있다. The present invention provides a novel method for suppressing and treating chronic itching caused by itching induced by mitochondrial dysfunction or dry skin.

본 발명에 따르면 TRPC3의 억제제는 mROS 과잉생성으로 인한 가려움증 또는 건조한 피부로 인하여 유도된 만성 가려움증의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.According to the present invention, the inhibitor of TRPC3 may be useful for the treatment of itching due to mROS excess production or chronic itching induced by dry skin.

도 1은 정상 실험쥐에 안티마이신 A(AA)을 주입한 경우의 긁음 행동 그래프를 나타낸다.
도 2는 정상 실험쥐에 AA를 투여한 이후 시간에 따른 긁음 행동의 빈도수 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 정상 실험쥐에 AA를 투여한 이후 시간에 따른 문지름 행동의 빈도수 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 AA-주입된 실험쥐에 Pyr10을 주입한 경우의 긁음 행동 그래프를 나타낸다.
도 5는 건조한 피부에 의해 생성된 만성 가려움증 모델 실험쥐에 Pyr10을 주입한 경우의 긁음 행동 그래프를 나타낸다.Figure 1 shows a graph of scraping behavior when antimycin A (AA) is injected into normal experimental rats.
FIG. 2 is a graph showing changes in the frequency of scratching behavior with time after administration of AA to normal experimental rats.
FIG. 3 is a graph showing changes in the frequency of rubbing behavior with time after administration of AA to normal experimental rats.
FIG. 4 shows a graph of scraping behavior when Pyr 10 is injected into AA-injected experimental rats.
Figure 5 shows a graph of scraping behavior when Pyr 10 is injected into a model of chronic itching model produced by dry skin.

이하, 본 발명의 구체적인 양태에 대해서 보다 상세히 설명한다. Hereinafter, specific embodiments of the present invention will be described in more detail.

가려움증과 관련된 종래의 대부분의 연구들은 히스타민이 가려움증을 유발하는 것으로 특정하고, 항-히스타민제를 사용하여 가려움증을 치료하고자 하였다. 그러나, 본 발명의 발명자들은 미토콘드리아 기능 장애로 인한 국지적인 mROS 증가가 피부의 가려움증을 유발한다는 것을 새롭게 발견하였으며, 더 나아가 TRPC3 채널을 억제함으로써 이와 같은 가려움증을 치료할 수 있다는 것을 발견하였다.Most conventional studies related to itching have identified histamine as causing itch, and tried to treat itching with anti-histamine. However, the inventors of the present invention have newly discovered that an increase in local mROS due to mitochondrial dysfunction causes skin itching, and furthermore, it has been found that such an itch can be treated by inhibiting TRPC3 channel.

본 발명의 일 실시예에서는, 안티마이신 A(AA)의 피부내 주사가 건강한 실험쥐의 mETC III를 억제함으로써 긁기 행동을 유도한다는 것을 행동 실험을 통하여 확인하였다. 이는 미토콘드리아 기능 장애로 인하여 국지적으로 증가된 mROS 생성이 일차 구심 뉴런을 자극하여 가려움증을 유발하는 것으로 이해된다. 미토콘드리아가 1차 구심 뉴런의 말초 종단에 밀집되어 있다는 것과 미토콘드리아 기능 장애의 가장 흔한 증상이 mETC로부터 mROS가 과잉 생산되는 것이라는 것은 이미 알려져 있다. 또한, mROS의 과잉 생산으로 인한 1차 구심 뉴런의 활성은 문헌[L. Nesuashvili, et al., Sensory nerve terminal mitochondrial dysfunction activates airway sensory nerves via transient receptor potential (TRP) channels, Mol Pharmacol 83 (2013) 1007-1019] 등을 통하여 확인된 바 있다.In one embodiment of the present invention, behavioral studies have confirmed that intradermal injection of antimycin A (AA) induces scraping behavior by inhibiting mETC III in healthy rats. It is understood that locally increased mROS production due to mitochondrial dysfunction induces itching by stimulating primary centric neurons. It is already known that mitochondria are clustered at the distal end of primary centric neurons and that the most common symptom of mitochondrial dysfunction is the overproduction of mROS from mETC. In addition, the activity of primary centriocyte neurons due to the overproduction of mROS is described in L. Nesuashvili, et al., Sensory nerve terminal mitochondrial dysfunction activates airway sensory nerve transient receptor potential (TRP) channels, Mol Pharmacol 83 (2013) 1007-1019.

비록, AA로 활성화된 외상수용기-같은 미주신경의 감각 뉴런 및 AA의 척추강내 주입이 건강한 실험쥐의 통증 과민증을 유발한다는 실험 결과는 보고된 바 있지만, AA의 말초신경 적용에 따른 행동 실험 결과는 보고된 바 없다. 본 발명의 실시예에서는, AA의 피내(intradermal) 주사가 가려움증만을 배타적으로 유발시키고, 캡사이신과 같은 통증 유발 물질을 주입할 때 관측되는 명백한 통증의 표지인 앞발을 이용한 한쪽 측면 문지름 행동을 보이지 않는다는 것을 확인하였다. 이와 같은 실험 결과와, H₂O₂ 및 tBHP(tert-butyl hydroperoxide)와 같은 산화제의 피내 주사가 통증보다 훨씬 더 두드러진 가려움증을 나타낸다는 것을 참고할 때, 말초 조직에서 mROS 생성 증가로 인한 가장 주요한 행동적 반응이 가려움증이라는 것을 알 수 있다. Although experimental results have been reported that intrathecal injections of sensory neurons and AA of the vagus nerve, such as the AA-activated traumatic receptor-like neurons, induce pain hypersensitivity in healthy rats, behavioral results from AA peripheral nerve application Not reported. In the examples of the present invention, intradermal injections of AA exclusively induce itching and do not exhibit one-side rubbing action using the forehead, which is a sign of obvious pain observed when injecting a pain-inducing substance such as capsaicin Respectively. The results of these experiments and the fact that intradermal injections of oxidants such as H ₂ O ₂ and tBHP (tert-butyl hydroperoxide) exhibit much more pronounced itching than pain suggests that the most important behavioral consequences of increased mROS production in peripheral tissues It can be seen that the reaction is itching.

본 발명의 실시예를 통하여 증명된 바와 같이, 미토콘드리아 기능 장애가 다양한 만성 가려움증의 중요한 원인 중 하나라는 것을 뒷받침하는 몇 가지 추가적인 증거가 있다. 첫째, 미토콘드리아 기능 장애는 건선 및 아토미성 피부염과 같은 만성 가려움을 동반하는 피부 질환을 수반한다. 두 번째로, 미토콘드리아 기능 장애와 관련되지만 피부 질환과 직접적으로 관련이 없는 당뇨병, 만성 간질환, 담즙울혈 및 말초신경병증과 같은 다른 질병들 또한 빈번하게 만성 가려움증을 동반한다. 세 번째로, 가려움증은 특히 나이가 많은 사람에게서 예상되는 피부 질환이다. 나이가 들수록 미토콘드리아에 기능 장애가 발생하고 조직 ROS 생성을 증가시킨다는 것은 이미 널리 알려져 있다. As evidenced by the examples of the present invention, there is some additional evidence to support that mitochondrial dysfunction is one of the major causes of various chronic itching. First, mitochondrial dysfunction accompanies skin disorders with chronic itching, such as psoriasis and atopic dermatitis. Second, other diseases associated with mitochondrial dysfunction, but not directly related to skin disease, such as diabetes, chronic liver disease, bile congestion, and peripheral neuropathy are also frequently accompanied by chronic itching. Third, itching is an expected skin condition, especially in older people. It is well known that older people develop malfunctions in mitochondria and increase tissue ROS production.

본 발명의 발명자들은, 미토콘드리아의 기능 장애로 인한 mROS 과잉생성으로부터 유도된 가려움증 및 건조한 피부로부터 유래된 가려움증을 TRPC3(transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3)를 억제함으로써 치료할 수 있다는 것을 발견하였다. TRPC3는 ROS 민감성인 비선택적 양이온 투과성 채널로서, 대부분 비-펩타이드성 C-섬유 개체군에 선택적으로 발현되어 있다.The inventors of the present invention have found that the itch induced from mROS excess production due to dysfunction of mitochondria and the itch derived from dry skin can be treated by inhibiting TRCP3 (transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3) . TRPC3 is a non-selective cation-permeable channel that is ROS-sensitive, mostly expressed selectively in non-peptide C-fiber populations.

본 발명의 일 실시예에서는, AA 피내주사로 인하여 가려움증이 유도된 실험쥐에 대하여 TRPC3 채널 억제제를 주입하는 경우, 가려움증 증상이 현저히 완화된다는 것을 확인하였다. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that when the TRPC3 channel inhibitor was injected into the rat induced by itching due to AA intradermal injection, symptoms of itching were remarkably alleviated.

또한, 본 발명의 일 실시예에서는, 건조한 피부에 의해 생성되는 만성 가려움증 모델의 실험쥐에 TRPC3 채널 억제제를 주입함으로써, 역시 가려움증 증상이 억제될 수 있다는 것을 확인하였다. In addition, in one embodiment of the present invention, it was confirmed that the itching symptom can be suppressed by injecting TRPC3 channel inhibitor into a mouse of a chronic itching model produced by dry skin.

이와 같은 관점에서, 본 발명은 TRPC3의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. 앞서 상세히 설명한 바와 같이, TRPC3 채널을 억제함으로써 미토콘드리아 기능 장애로 인한 가려움증 및 건조한 피부에 의해 생성된 만성 가려움증을 치료할 수 있으므로, TRPC3 채널 억제제를 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 경우 가려움증을 치료하기 위하여 유용하게 사용될 수 있다. In view of the above, the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 as an active ingredient. As described in detail above, it is possible to treat itch caused by mitochondrial dysfunction and chronic itch caused by dry skin by suppressing TRPC3 channel. Therefore, when a pharmaceutical composition comprising TRPC3 channel inhibitor as an active ingredient is provided, And the like.

본 발명에 있어서, TRPC3의 억제제는 선택적 또는 비선택적으로 TRPC3 채널을 억제할 수 있는 물질을 사용할 수 있으며, 바람직하게는, 에틸-1-(4-(2,3,3-트리클로로아크릴아미드)페닐)-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카복실레이트(ethyl-1-(4-(2,3,3-trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxylate) 또는 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]페닐]-4-메틸-벤젠술폰아미드(N-[4-[3,5-Bis(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]phenyl]-4-methyl-benzenesulfonamide)를 사용할 수 있다. In the present invention, the inhibitor of TRPC3 may be a substance capable of selectively or non-selectively inhibiting TRPC3 channel, preferably ethyl-1- (4- (2,3,3-trichloroacrylamide) Phenyl) -5- (trifluoromethyl) -1H-pyrazole-4-carboxylate (ethyl- 4-carboxylate or N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methyl- 3,5-Bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4-methyl-benzenesulfonamide.

본 발명에서 TRPC3 억제제로서 사용가능한 화합물인 에틸-1-(4-(2,3,3-트리클로로아크릴아미드)페닐)-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카복실레이트는 Sigma-Aldrich에서 Pyr3이라는 상품명으로 상업상 이용가능한 화합물로서, 선택적 TRPC3 채널 억제제로 알려져 있으나, 지금까지 Pyr3을 가려움증 치료에 이용한 연구는 없었다. In the present invention, ethyl-1- (4- (2,3,3-trichloroacrylamide) phenyl) -5- (trifluoromethyl) -1H-pyrazole-4-carboxylate Is a commercially available compound with the trade name Pyr3 in Sigma-Aldrich and is known to be a selective TRPC3 channel inhibitor, but there have been no studies using Pyr3 in the treatment of itch.

본 발명에서 TRPC3 억제제로서 사용가능한 화합물인 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]페닐]-4-메틸-벤젠술폰아미드은 Sigma-Aldrich에서 Pyr10이라는 상품명으로 상업상 이용가능한 화합물로서, 선택적 TRPC3 채널 억제제로 알려져 있으나, 지금까지 Pyr10을 가려움증 치료에 이용한 연구는 없었다.The compound used as a TRPC3 inhibitor in the present invention, N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methyl-benzenesulfonamide was obtained from Sigma-Aldrich Is known as a selective TRPC3 channel inhibitor. However, there have been no studies using Pyr10 for the treatment of itching.

본 발명의 일 실시예에서는 Pyr10을 선택적 TRPC3 채널 억제제로서 사용하여, TRPC3 채널을 억제하는 경우 미토콘드리아 기능 이상으로 인한 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 만성 가려움증을 치료할 수 있다는 것을 확인하였다. In one embodiment of the present invention, Pyr10 was used as a selective TRPC3 channel inhibitor, and it was confirmed that inhibition of TRPC3 channel can treat itching due to mitochondrial dysfunction or chronic itching due to dry skin.

상기 Pyr3 및 Pyr10은 선택적 TRPC3 채널 억제제로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 유효성분으로서 포함되어 다른 부작용 없이 TRPC3 채널을 억제함으로써 가려움증 치료에 유용하게 사용될 수 있다. The Pyr3 and Pyr10 are selective TRPC3 channel inhibitors and can be usefully used in the treatment of itch by inhibiting the TRPC3 channel by being included as an active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention without any adverse side effects.

본 발명의 일 구현예에 있어서, TRPC3의 억제제로서 사용가능한 화합물은 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표현되는 아닐리노-트리아졸계 화합물일 수 있다:In one embodiment of the present invention, the compound which can be used as an inhibitor of TRPC3 may be an anilino-triazole-based compound represented by the following formula (1) or (2)

[화학식 1][Chemical Formula 1]

(상기 화학식 1에서, (In the formula 1,

R¹은 4-Me, 4-Cl, 4-OMe, 2-Cl, 2-F,4-Cl, 3,4-(O-CH₂-O) 또는 2-F-4,5-(O-CH₂-O)이고, R ¹ is 4-Me, 4-Cl, 4-OMe, 2-Cl, 2-F, 4-Cl, 3,4- (O-CH 2 -O) or 2-F-4,5- (O -CH ₂ -O), and

R²는 H, Me 또는 Cl이며, R ² is H, Me or Cl,

R³은 4-Me, 2-Ph, 4-사이클로헥실, 2,3-diMe, (S,S)-2,3-diMe 또는 (R,R)-2,3-diMe이다.)R ³ is 4-Me, 2-Ph, 4-cyclohexyl, 2,3-diMe, (S, S) -2,3-diMe or (R, R) -2,3-diMe.

[화학식 2](2)

(상기 화학식 2에서, (In the formula (2)

R¹은 4-OMe, 3,4-(O-CH₂-O) 또는 2-F,4-Cl이고,R ¹ is 4-OMe, 3,4- (O-CH ₂ -O) or 2-F, 4-Cl,

R²는 H 또는 Me이며, R ² is H or Me,

R³은 H 또는 Me이고, R < ³ > is H or Me,

X는 CH 또는 N이다.)X is CH or N.)

상기 화학식에서, Me는 메틸기를 의미하고, Ph는 페닐기를 의미하며, (S,S)-2,3-diMe 및 (R,R)-2,3-diMe는 2,3-diMe의 거울상 이성질체를 의미한다.(S, S) -2,3-diMe and (R, R) -2,3-diMe refer to an enantiomer of 2,3-diMe .

본 발명의 바람직한 구현예에 있어서, 상기 TRPC3의 억제제로서 사용가능한 화합물은 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표현되는 아닐리노-트리아졸계 화합물일 수 있다:In a preferred embodiment of the present invention, the compound which can be used as an inhibitor of TRPC3 may be an anilino-triazole-based compound represented by the following formula (1) or (2)

[화학식 1][Chemical Formula 1]

(상기 화학식 1에서, (In the formula 1,

R¹은 4-Me, 3,4-(O-CH₂-O), 2-F-4,5-(O-CH₂-O) 또는 2-F,4-Cl이고,R ¹ is 4-Me, 3,4- (O-CH ₂ -O), 2-F-4,5- (O-CH ₂ -O)

R²는 H, Me 또는 Cl이며, R ² is H, Me or Cl,

R³은 2,3-diMe 또는 (S,S)-2,3-diMe이다.)R ³ is 2,3-diMe or (S, S) -2,3-diMe.)

[화학식 2](2)

(상기 화학식 2에서, (In the formula (2)

R¹은 3,4-(O-CH₂-O)이고, R ¹ is _{3,4- (O-CH 2 -O)} ,

R²는 H 또는 Me이며, R ² is H or Me,

R³은 Me이다.)R ³ is Me.)

본 발명에 있어서, TRPC3의 억제제로서 사용가능한 바람직한 아닐리노-트리아졸계 화합물의 예를 아래의 표 1에 기재하였다.In the present invention, examples of preferred anilino-triazole compounds which can be used as an inhibitor of TRPC3 are shown in Table 1 below.

상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표현되는 아닐리노-트리아졸계 화합물은 문헌[David G. Washburn, et al., The discovery of potential blockers of the canonical transient receptor channels, TRPC3 and TRPC 6, based on an anilino-thiazole pharmacophore, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 23, Issue 17, 1 September 2013, pages 4979-4984]에서 선택적으로 TRPC3 채널을 억제할 수 있는 화합물로서 기재하고 있으나, 지금까지 이들 화합물을 가려움증 치료에 이용한 연구는 없었다. The anilino-triazole-based compounds represented by Formula 1 or Formula 2 can be prepared according to David G. Washburn, et al., The discovery of potential blockers of the canonical transient receptor channels, TRPC3 and TRPC6, based on an anilino-thiazole Pharmacophore, Bioorganic & amp ; Medicinal Chemistry Letters , Vol. 23, Issue 17, 1 September 2013, pages 4979-4984], there have been no studies on the use of these compounds in the treatment of itch.

본 발명의 일 구현예에 있어서, TRPC3의 억제제로서 사용가능한 화합물은 2-아미노에톡시다이페닐보란(2-aminoethoxydiphenylborane; 2-APB) 또는 1-[2-(4-메톡시페닐)-2-[3-(4-메톡시페닐)프로폭시]에틸-1H-이미다졸 하이드로클로라이드](1-[2-(4-methoxyphenyl)-2-[3-(4-methoxyphenyl)propoxy]ethyl-1H-imidazole hydrochloride])일 수 있다. In one embodiment of the invention, the compound that can be used as an inhibitor of TRPC3 is 2-aminoethoxydiphenylborane (2-APB) or 1- [2- (4-methoxyphenyl) -2- (4-methoxyphenyl) propoxy] ethyl-1H-imidazole hydrochloride was obtained in the same manner as in [1- (2- imidazole hydrochloride]).

상기 2-APB는 문헌[Jean-Philippe Lievremont, et al., Mechanism of Inhibition of TRPC Cation Channels by 2-Aminoethoxydiphenylborane, Molecular Pharmacology, September 2005, Vol. 68, no.3, pages 758-762]에서 TRPC3 채널을 억제할 수 있는 화합물로서 기재되어 있고, 상기 1-[2-(4-메톡시페닐)-2-[3-(4-메톡시페닐)프로폭시]에틸-1H-이미다졸 하이드로클로라이드]는 문헌[Biochimica et Biophysica Acta ( BBA ) - Molecular Cell Research, Vol. 1742, Issues 1-3, 6 December 2004, pages 21-36]에서 TRPC3 채널 억제제로서 기재되어 있다. 지금까지 이들 화합물을 가려움증 치료에 이용한 예는 없었다. 상기 화합물들은 본 발명의 약제학적 조성물의 유효성분으로 포함되어 TRPC3를 억제함으로써 미토콘드리아 기능 장애로 인한 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 가려움증을 치료하기 위해 사용될 수 있다.The 2-APB can be prepared according to the method described in Jean-Philippe Lievremont, et al., Mechanism of Inhibition of TRPC Cation Channels by 2-Aminoethoxydiphenylborane, Molecular Pharmacology , September 2005, Vol. 68, no. 3, pages 758-762], and it has been reported that the 1- [2- (4-methoxyphenyl) -2- [3- (4-methoxyphenyl ) Propoxy] ethyl-1H-imidazole hydrochloride is described in Biochimica et Biophysica Acta ( BBA ) - Molecular Cell Research , Vol. 1742, Issues 1-3, 6 December 2004, pages 21-36. Until now, none of these compounds have been used to treat itch. Such compounds may be used as an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention to inhibit itching caused by mitochondrial dysfunction or itching caused by dry skin by inhibiting TRPC3.

본 발명은 또한, TRPC3 억제제로서 La^{3 +} 또는 Gd^{3 +}를 이용할 수 있다. La^{3 +} 또는 Gd^{3 +}는 문헌[Biochimica et Biophysica Acta ( BBA ) - Molecular Cell Research, Vol. 1742, Issues 1-3, 6 December 2004, pages 21-36]에서 HEK293 세포 등에서 고농도로 사용되어 TRPC3를 억제하는 것으로 알려져 있으며, 본 발명의 약제학적 조성물의 유효성분으로 포함되어 TRPC3를 억제함으로써 미토콘드리아 기능 장애로 인한 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 가려움증을 치료하기 위해 사용될 수 있다. The present invention can also utilize La ^{3 +} or Gd ^{3 +} as a TRPC3 inhibitor. La ^{+ 3,} or Gd ^{+ 3} are described [Biochimica et Biophysica Acta ( BBA ) - Molecular Cell Research , Vol. 1742, Issues 1-3, 6 December 2004, pages 21-36], which is known to inhibit TRPC3 by being used at a high concentration in HEK293 cells and the like, and is included as an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention to inhibit TRPC3, It can be used to treat itching caused by disorders or itching due to dry skin.

본 발명의 일 구현예에 있어서, TRPC3의 억제제로서 사용가능한 화합물은 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)피라졸-1-일]페닐]-4-메틸티아다이아졸-5-카르복사미드(N-[4-[3,5-bis(trifluoromethyl)pyrazol-1-yl]phenyl]-4-methylthiadiazole-5-carboxamide) 또는 암모니아화 루테늄 옥시클로라이드(ammoniated ruthenium oxychloride)을 사용할 수 있다. In one embodiment of the invention, the compound that can be used as an inhibitor of TRPC3 is N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methylthiadiazole 5-carboxamide or ammoniated ruthenium oxychloride was used as the starting material for the preparation of the compound of the present invention. Can be used.

상기 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)피라졸-1-일]페닐]-4-메틸티아다이아졸-5-카르복사미드는 BTP2 또는 YM58483이라는 상품명으로 상업상 이용가능하고, 상기 암모니아화 루테늄 옥시클로라이드는 ruthenium red라는 상품명으로 상업상 이용가능한 화합물로서, 둘 모두 비선택적 TRPC3 억제제로 알려져 있다. 상기 화합물을 본 발명의 약제학적 조성물의 유효성분으로 포함함으로써, TRPC3를 억제하여 미토콘드리아 기능 장애로 인한 가려움증 또는 건조한 피부로 인한 가려움증을 치료하기 위해 사용될 수 있다. Yl] phenyl] -4-methylthiadiazole-5-carboxamide is commercially available under the trade name BTP2 or YM58483. ≪ RTI ID = 0.0 & And the above-mentioned ammoniated ruthenium oxychloride is a commercially available compound under the trade name of ruthenium red, both of which are known as nonselective TRPC3 inhibitors. By incorporating the compound as an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, it can be used to inhibit TRPC3 and treat itching caused by mitochondrial dysfunction or itching caused by dry skin.

본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 사이클로덱스트린, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 레밍턴의 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)]에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutically acceptable carriers to be contained in the pharmaceutical composition of the present invention are those conventionally used in the present invention and include saline, sterilized water, Ringer's solution, buffered saline, cyclodextrin, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol , Liposomes, and the like, but are not limited thereto. The pharmaceutical composition of the present invention may further contain a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, etc. in addition to the above components. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations can be suitably formulated according to the respective ingredients using the method disclosed in Remington ' s Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 모두 가능하며, 비경구 투여는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학 조성물은 음경해면체에 직접 주입하여 투여할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and parenteral administration includes intravenous injection, subcutaneous injection, muscle injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, and the like. Preferably, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by direct injection into the corpus cavernosum.

본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, “약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The composition according to the invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, " pharmaceutically effective amount " means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dosage level is determined depending on the type of disease, severity, , Sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including co-administered drugs, and other factors well known in the medical arts. The composition according to the present invention can be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and can be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and can be administered singly or in multiple doses. It is important to take into account all of the above factors and to administer the amount in which the maximum effect can be obtained in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01 내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.Specifically, the effective amount of the composition according to the present invention may vary depending on the age, sex, and body weight of the patient. Generally, 0.001 to 150 mg, preferably 0.01 to 100 mg per kg of body weight is administered daily or every other day, Three doses can be administered. However, the dose may be increased or decreased depending on the route of administration, sex, body weight, age, etc., and therefore the dose is not limited to the scope of the present invention by any means.

본 발명의 조성물은 만성 가려움증 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있으며, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태로 사용할 수 있다. The composition of the present invention can be used variously for medicines, foods and beverages for prevention and improvement of chronic itching diseases, and can be used in powder, granule, tablet, capsule or beverage form.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위하여 일부 실험방법과 조성을 나타낸 것으로, 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 제한되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. It should be noted, however, that these examples are illustrative of some experimental methods and compositions in order to illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

하기 실시예에 있어서, 모든 동물 실험은 서울대학교 치의과대학의 동물실험윤리위원회(Institutional Animal Care and Use Committee; IACUC)의 승인 하에서 진행되었다. 세계통증연구학회(international association for the study of pain; IASP)의 지침에 따라, 동물의 고통을 최소화하고 사용된 동물의 수를 줄이기 위한 모든 노력을 기울였다.In the following examples, all animal experiments were conducted under the approval of the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) of the University of Seoul School of Dentistry. In accordance with the guidelines of the International Association for the Study of Pain (IASP), every effort has been made to minimize animal suffering and reduce the number of animals used.

실험 준비 및 방법Experimental preparation and method

수컷 C57BL/6 실험쥐(6주)들을 3 내지 5개체씩 그룹으로 나누어, 물과 음식이 자유롭게 제공되는 12시간의 빛/어둠 사이클 하에서 격리하였다. Male C57BL / 6 mice (6 weeks) were divided into groups of 3-5 individuals and isolated under a 12 hour light / dark cycle of free access to water and food.

본 실시예에서 사용된 모든 화학제품들은 Sigma-Aldrich에서 상업적으로 이용가능한 것들이다. All chemicals used in this example are those commercially available from Sigma-Aldrich.

AA는 에탄올에 25mM 저장 용액을 만들 놓고, 인산완충생리식염수(PBS)에 희석하여 최종 작업 농도를 만들었다. AA was made into 25 mM stock solution in ethanol and diluted in phosphate buffered saline (PBS) to make the final working concentration.

선택적 TRPC3 억제제인 Pyr10을 디메틸 술폭사이드(DMSO)에 용해하여 10mM 저장용액을 만들고, 그 후 PBS로 최종 농도로 희석하였다.The selective TRPC3 inhibitor, Pyr10, was dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) to make a 10 mM stock solution, which was then diluted to the final concentration in PBS.

대응되는 부형제를 약물의 첨가를 제외하고는 동일하게 제조하였다. 모든 약물-함유 저장 용액은 -20℃ 냉동고에서 보관되었고, 행동 실험에 사용되기 직전에 사용 농도로 희석되었다. Corresponding excipients were prepared identically except for the addition of the drug. All drug-containing stock solutions were stored in a -20 ° C freezer and diluted to the working concentration immediately prior to use in behavioral studies.

실험쥐들은 약물 처치를 위하여 마취 없이 손으로 약하게 잡아서 제압하였다. 모든 약물들은 31-G 인슐린 주사기를 이용하여 면도된 오른쪽 볼의 피부층에 주입하였다. Experimental rats were hand held weakly without anesthesia for drug treatment. All drugs were injected into the skin layer of the right shaved ball using a 31-G insulin syringe.

건조한 피부 가려움증 모델을 형성하기 위하여, 면도된 오른쪽 볼을 하루에 2번씩(9AM 및 5PM) 5일간, 아세톤과 에터의 1:1 혼합물로 15초간 처리한 직후, 증류수로 30초 처리(이하, "AEW 처리") 하였다. 용액들은 약간의 아이소프루란(1.5%) 마취제 하에서 면봉으로 피부 위로 부드럽게 도포되었다. 실험쥐들은 각 처리 이후 회복을 위하여 즉시 그들의 우리로 되돌아갔다. To form a dry skin itching model, the shaved right ball was treated for 15 seconds with distilled water immediately after treating the shaved right ball twice a day (9 AM and 5 PM) for 5 days with a 1: 1 mixture of acetone and ether for 15 seconds (hereinafter " AEW treatment "). Solutions were gently applied onto the skin with a cotton swab under slight isoflurane (1.5%) anesthetics. Experimental rats immediately returned to their care for recovery after each treatment.

행동 실험을 위해, 모든 실험쥐들은 면도되고, 실험일 전에 2일간(2시간/일) 적응기간을 가졌다. 실험 당일, 정상 실험쥐는 1시간의 적응기간을 거친 후 약물을 주입하였다. 건조한 피부 모델 실험을 위해서는, 실험쥐는 5일째의 두 번째 AEW 처리 전에 1시간 동안 적응시키고, AEW 처리 10분 후에 약물 주입을 하였다. For behavioral experiments, all experimental mice were shaved and had a 2 day (2 h / day) adaptation period prior to the experiment. On the day of the experiment, the mice were injected after 1 hour of adaptation period. For dry skin model experiments, mice were adapted for 1 hour before the second AEW treatment on day 5 and injected 10 minutes after AEW treatment.

모든 실험쥐는 그들의 관측 챔버로 돌아가서 약물 주입 직후 30분간 비디오 촬영을 함으로써, 가려움 및 통증 행동이 평가되었다. 행동 실험은, 가려움 행동은 약물 주입 부위를 뒷다리로 긁은 후 다시 다리를 땅에 놓거나 입으로 핥는 행동을 카운트하여 측정하였다. 통증 행동은 약물 주입 부위를 그들의 한쪽 앞다리로 문지르는 행동으로 측정하였다. 모든 행동 실험은 약물 실험을 블라인드 처리한 실험자가 평가하였다. All experimental mice were evaluated for their itching and pain behavior by returning to their observation chambers and taking a 30 minute video immediately after drug injection. Behavioral tests were conducted by measuring the behavior of licking the legs on the ground or licking the mouth after scratching the area of the drug injection with the hind legs. Pain behaviors were measured by rubbing the site of injection with one of their forelimbs. All behavioral tests were evaluated by the blinded experimenter.

실험의 통계는 unpaired t-test 또는 일원분산분석(one-way ANOVA) 이후 터키 사후 검정(tukey post hoc test)을 사용하여 수행하였다. P<0.05가 통계적 의의로 고려되었다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로서 나타내었다. Statistics of the experiment were performed using unpaired t-test or one-way ANOVA followed by a tukey post hoc test. P <0.05 was considered statistically significant. Data are presented as mean ± standard error (SEM).

실시예 1: 정상 실험쥐의 가려움증 유발 실험Example 1: Experiments to induce itching in normal experimental rats

미토콘드리아로부터 형성된 활성산소종(ROS)이 가려움증을 유발하는지에 대한 실험을 진행하였다. Experiments were conducted to determine whether reactive oxygen species (ROS) formed from mitochondria cause itching.

본 실시예에서는, mROS 과잉 생산을 위하여 AA를 사용하였다. AA는 뉴런을 포함하는 다양한 세포 내에서 mETC III를 억제함으로써 mROS 과잉 생산을 유도하는 것으로 알려져 있다. In this example, AA was used for mROS overproduction. AA is known to induce mROS overproduction by inhibiting mETC III in a variety of cells including neurons.

정상쥐에 대하여 각각 부형제, AA 10μM, AA 25μM, AA 50μM 및 AA 100μM을 피내 주사한 다음 30분간 긁음 행동을 카운트하였다. 실험 결과를 도 1에 도시하였다. Normal rats were injected intradermally with vehicle, 10 μM AA, 25 μM AA, 50 μM AA and 100 μM AA, respectively, and scraping behavior was counted for 30 minutes. The experimental results are shown in Fig.

도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, AA의 피내 주입은 다른 가려움증 유발 물질들에서 관측되는 경향성과 유사하게, 역 U 형상의 약물 반응 곡선으로 격렬한 긁음 행동을 유발하였다. 즉, AA를 주입하여 mROS를 과잉 생산하는 경우 피부의 가려움증이 유도된다는 것을 확인할 수 있었다. AA의 복용량에 있어서, 50μM의 AA가 긁음 행동을 유발하는 가장 효율적인 복용량이었다. As can be seen in FIG. 1, intradermal injection of AA resulted in violent scraping behavior in the inverted U-shaped drug response curve, similar to the tendency observed in other itching-inducing substances. In other words, it was confirmed that when AA was injected to overproduce mROS, skin itching was induced. For doses of AA, 50 μM of AA was the most effective dose to induce scrape behavior.

도 2는 50μM의 AA를 주입한 실험쥐의 시간에 따른 긁음 행동의 변화를 도시한 것이다. AA가 주입된 경우 처음 10분간은 가려움이 발생하지 않다가, 10 내지 20분 사이에 가장 격렬한 가려움증이 발생하고, 그 후 20 내지 30분 사이에 점차 가려움의 정도가 약해진다는 것을 확인할 수 있다. Figure 2 shows changes in scraping behavior with time in experimental rats injected with 50 [mu] M of AA. When AA is injected, the itching does not occur for the first 10 minutes, the most intense itching occurs between 10 and 20 minutes, and gradually it becomes weaker between 20 and 30 minutes.

도 3은 50μM의 AA를 주입한 실험쥐의 시간에 따른 문지름 행동의 변화를 도시한 것이다. 흥미롭게도, AA를 주입한 실험쥐들은 본 실시예에서 투입된 복용량 농도 범위 내에서는 어떠한 문지름 행동도 보이지 않고, 오직 가려움 증상만이 배타적으로 발생하였다. FIG. 3 shows changes in rubbing behavior with time in experimental rats injected with 50 μM of AA. Interestingly, experimental rats injected with AA did not exhibit any rubbing behavior within the dose concentration range injected in this example, and only the itching symptoms exclusively occurred.

한편, 도 2 및 도 3에서, 부형제(에탄올 0.4%)는 긁음 또는 문지름 행동을 전혀 유발하지 않았다. 2 and 3, the excipient (0.4% of ethanol) did not cause any scratching or rubbing action at all.

실시예 2: TRPC3 채널 억제를 통한 AA-유도된 가려움증 완화Example 2: Reduction of AA-induced itching through TRPC3 channel inhibition

TRPC3 채널이 AA 주입으로 인한 mROS-유도된 가려움의 억제에 어떠한 영향을 미치는지를 판단하기 위하여, 선택적 TRPC3 채널 억제제인 Pyr10이 AA-유도된 가려움증에 미치는 영향에 대한 실험을 진행하였다. In order to determine how the TRPC3 channel affects the inhibition of mROS-induced itching due to AA injection, an experiment was conducted on the effect of the selective TRPC3 channel inhibitor PyrlO on AA-induced itching.

정상 실험쥐에 50μM의 AA와 25μM의 Pyr10을 함께 주입한 다음 30분간 긁음 행동을 카운트하여, 50μM의 AA만을 주입한 경우와 비교하였다. 도 4에서 확인 가능한 바와 같이, Pyr10을 함께 주입함으로써 TRPC3 채널의 활성을 억제시킨 실험쥐는 Pyr10을 주입하지 않고 AA만을 주입한 실험쥐에 비하여 현저히 적은 수의 긁음 행동을 나타내었다. Normal mice were injected with 50 μM of AA and 25 μM of Pyr 10, and then scraping behavior was counted for 30 min and compared to the case of injecting only 50 μM of AA. As can be seen in FIG. 4, the experimental mice in which the activity of TRPC3 channel was inhibited by injecting Pyr10 together showed significantly fewer scraping behaviors as compared with the mice injected with only AA without Pyr10 injection.

이로부터 TRPC3 채널을 억제하는 경우 mROS 과잉 생산으로 유발된 가려움증을 억제할 수 있다는 것을 확인할 수 있었다. From these results, it was confirmed that inhibition of TRPC3 channel inhibits itch induced by mROS overproduction.

실시예 3: 건조한 피부로 인한 만성 가려움증 완화 실험Example 3: Chronic itching relieving experiment due to dry skin

다음으로, TRPC3가 만성 가려움증에 미치는 영향에 대하여, 건조한 피부 모델 실험쥐를 사용하여 실험하였다. Next, the effects of TRPC3 on chronic itching were examined using dry skin model mice.

앞서 실험 준비에서 설명한 바와 같이, 건조한 피부 모델 실험쥐는 5일간 AEW(아세톤-에터-물) 처리하여 준비하였으며, 반복된 AEW 처리는 건조한 피부로 인한 강한 긁음 행동을 유도하였다. As previously described in the experimental preparation, dry skin model mice were prepared by treatment with AEW (acetone-ether-water) for 5 days and repeated AEW treatment induced strong scratching behavior due to dry skin.

상기 건조한 피부 모델 실험쥐에 대하여, 25μM의 Pyr10 및 DSMO(0.25%) 부형제를 각각 주입한 후 30분간 긁음 행동을 카운트 하였다. 도 5에서 확인 가능한 바와 같이, 선택적 TRPC3 채널 억제제인 Pyr10를 만성 가려움증 모델 실험쥐에 투여한 경우, 긁음 행동이 현저히 완화된 것을 확인할 수 있었으며, 부형제를 투여한 경우 긁음 행동이 크게 완화되지 않았다. The dry skin model mice were injected with 25 μM Pyr 10 and DSMO (0.25%) excipients, respectively, and scraping behavior was counted for 30 minutes. As can be seen in FIG. 5, when the selective TRPC3 channel inhibitor, Pyr10, was administered to rats with chronic itching, it was confirmed that the scraping behavior was remarkably alleviated, and scraping behavior was not significantly alleviated when the vehicle was administered.

상기 실험으로부터, 건조한 피부로부터 유래되는 만성 가려움증도 TRPC3 채널의 활성을 억제함으로써 크게 완화시킬 수 있다는 것을 확인하였다. From the above experiment, it was confirmed that chronic itching derived from dry skin can be greatly alleviated by inhibiting the activity of TRPC3 channel.

이상 본 발명의 일부 구현 형태에 대해서 설명하였으나, 본 발명은 상술한 바와 같은 구현형태에 대해서만 한정되는 것이 아니라 본 발명의 요지를 벗어나지 않는 범위 내에서 수정 및 변형하여 실시할 수 있으며, 그러한 수정 및 변형이 가해진 형태 또한 본 발명의 기술적 사상에 속하는 것으로 이해되어야 한다.While the present invention has been described with reference to exemplary embodiments, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments, but, on the contrary, It is to be understood that this applied form also belongs to the technical idea of the present invention.

Claims (13)

삭제delete 삭제delete TRPC3(transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3)의 억제제를 유효성분으로 포함하는 가려움증 치료용 약제학적 조성물로서,
상기 TRPC3의 억제제가 N-[4-[3,5-비스(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]페닐]-4-메틸-벤젠술폰아미드(N-[4-[3,5-Bis(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]phenyl]-4-methyl-benzenesulfonamide)인 것을 특징으로 하는, 가려움증 치료용 약제학적 조성물.A pharmaceutical composition for the treatment of itching comprising an inhibitor of TRPC3 (transient receptor potential ion channel, subfamily C, member 3) as an active ingredient,
Wherein the inhibitor of TRPC3 is selected from the group consisting of N- [4- [3,5-bis (trifluoromethyl) -1H-pyrazol-1-yl] phenyl] -4- methyl- Pyrazol-1-yl] phenyl] -4-methyl-benzenesulfonamide). 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete

Images