KR101839161B1 - 난소암의 치료를 위한 항혈관신생 요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 일반적으로 항-VEGF 항체를 사용한 질환 및 병적 상태의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 난소암을 치료하기 위해 항-VEGF 항체를 바람직하게는 1종 이상의 추가의 항종양 치료제와 조합하여 사용함으로써 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단받은 인간 환자를 치료하는 것에 관한 것이다.

Description

난소암의 치료를 위한 항혈관신생 요법 {ANTI-ANGIOGENESIS THERAPY FOR THE TREATMENT OF OVARIAN CANCER}

<관련 출원>

본 출원은 2011년 2월 4일에 출원된 미국 가출원 번호 61/439,819, 2010년 6월 30일에 출원된 미국 가출원 번호 61/360,059, 2010년 6월 3일에 출원된 미국 가출원 번호 61/351,231, 및 2010년 2월 23일에 출원된 미국 가출원 번호 61/307,095를 우선권 주장하고 이들의 이점을 주장하며, 이들의 명세서는 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

<본 발명의 분야>

본 발명은 일반적으로 인간 질환 및 병적 상태의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 난소암의 치료를 위해 단독으로 또는 다른 항암 요법과 조합하여 수행되는 항혈관신생 요법에 관한 것이다.

암은 여전히 인간 건강에 가장 치명적인 위협 중 하나이다. 미국에서만도 매년 거의 130만명의 새로운 암 환자가 발생하고, 이는 심장 질환 다음으로 두번째로 높은 사망 원인이며, 사망자 4명 중 대략 1명에 해당한다. 난소암 및 복막암을 갖는 여성의 경우, 초기 외과적 진단, 병기결정 및 종양감축 후에, 진행된 상피 난소암 및 원발성 복막암을 갖는 여성을 위한 표준 일차 전신 화학요법은 백금 및 탁산 조합, 일반적으로 카르보플라틴 및 파클리탁셀을 사용하는 화학요법으로 이루어진다. 예를 들어, 문헌 [McGuire WP, et al. Cyclophosphamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage III and stage IV ovarian cancer. N Eng J Med 334:1-6, 1996; Piccart MJ, et al. Randomized intergroup trial of cisplatin-paclitaxel versus cisplatin-cyclophosphamide in women with advanced epithelial ovarian cancer: three-year results. J Natl Cancer Inst 92:699-708, 20003; Alberts DS, et al. Improved therapeutic index of carboplatin plus cyclophosphamide versus cisplatin plus cyclophosphamide: final report by the Southwest Oncology Group of a phase III randomized trial in stages III and IV ovarian cancer. J Clin Oncol 10:706-17, 1992; du Bois A, et al. A randomized clinical trial of cisplatin/paclitaxel versus carboplatin/paclitaxel as first-line treatment of ovarian cancer. J Natl Cancer Inst Sep.3;95.(17):1320.-9. 95:1320, 2003; Ozols RF, et al. Phase III trial of carboplatin and paclitaxel compared with cisplatin and paclitaxel in patients with optimally resected stage III ovarian cancer: a Gynecologic Oncology Group study. J Clin Oncol 21:3194-200, 2003; 및 Swenerton K, et al. Cisplatin-cyclophosphamide versus carboplatin-cyclophosphamide in advanced ovarian cancer: a randomized phase III study of the National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group. J Clin Oncol 10:718-26, 1992]을 참조한다. 환자 관리에서 진전이 있었으나, 이 질환은 여전히 미국에서 진단받은 모든 부인과 악성종양에 대해 높은 치사율 대 사례 비를 갖고 있다. 2004년에, 25,580건의 새로운 사례가 진단받고, 16,090명의 여성이 이 질환으로 사망하게 될 것으로 추정된다. 예를 들어, 문헌 [Jemal A, et al. Cancer statistics, 2004. CA Cancer J Clin 54:8-29, 2004]을 참조한다. 주요 치료 전략의 개선이 요망되고 있다.

혈관신생은 혈관 내피 세포가 증식하고 불필요한 부분을 잘라내며 재구성하여 기존의 혈관망으로부터 새로운 혈관을 형성하는 중요한 세포 사건이다. 혈관 공급의 발달이 정상적 및 병적 증식 과정에 필수적이라는 설득력 있는 증거가 있다 (문헌 [Folkman and Klagsbrun Science 235:442-447(1987)]). 산소 및 영양소의 전달 뿐만 아니라 이화 생성물의 제거는 다세포 유기체에서 발생하는 대다수의 성장 과정에서 속도 제한 단계를 나타낸다.

새로운 혈관의 유도가 종양 혈관신생의 우세한 방식이라고 여겨지지만, 최근의 데이터는 일부 종양이 기존의 숙주 혈관을 공동-채택하여 성장할 수 있음을 나타냈다. 이어서, 공동-채택된 혈관계는 퇴행하여 종양 퇴행을 유발하고, 이것은 결국 종양 주변에서의 저산소증-유도된 혈관신생에 의해 역전된다. 문헌 [Holash et al. Science 284:1994-1998 (1999)].

정상적인 혈관신생 및 비정상적인 혈관신생 둘 다의 핵심적인 양성 조절제 중 하나는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)-A이다. VEGF-A는 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 및 PlGF를 포함하는 유전자 패밀리의 일부이다. VEGF-A는 주로 2종의 고친화도 수용체 티로신 키나제인 VEGFR-1 (Flt-1) 및 VEGFR-2 (Flk-1/KDR)에 결합하며, 후자는 VEGF-A의 혈관 내피 세포 분열촉진 신호의 주요 전달자이다. 추가로, 뉴로필린-1이 헤파린-결합 VEGF-A 이소형에 대한 수용체로 확인되었고, 이는 혈관 발생에서 소정의 역할을 할 수 있다.

VEGF는 혈관신생 및 혈관형성에서 혈관신생 인자인 것 뿐만 아니라 다면발현성 성장 인자로서 다른 생리학적 과정, 예컨대 내피 세포 생존, 혈관 투과성 및 혈관확장, 단핵구 화학주성 및 칼슘 유입에서 여러 생물학적 효과를 나타낸다. 문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1997), 상기 문헌]. 또한, 몇몇 비내피 세포 유형, 예컨대 망막 색소 상피 세포, 췌장관 세포 및 슈반 세포에 대한 VEGF의 분열촉진 효과가 연구에서 보고되었다. 문헌 [Guerrin et al. J. Cell Physiol. 164:385-394 (1995); Oberg-Welsh et al. Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132 (1997); Sondell et al. J. Neurosci. 19:5731-5740 (1999)]. VEGF 발현은 대다수의 악성 종양에서 상향조절되고, VEGF의 과다발현은 많은 고형 종양에서 보다 진행된 병기 또는 보다 불량한 예후와 관련되기도 한다.

난소암은 여전히 가장 치명적인 위협 중 하나이기 때문에, 환자를 위한 추가의 암 치료법이 필요하다. 하기 개시내용을 검토할 때 명백해질 것과 같이, 본 발명은 이러한 요구 및 다른 요구를 다루고 있다.

<개요>

난소암을 치료하기 위한 항-VEGF 길항제의 용도가 제공된다. 예를 들어, 새로 진단받은, 이전에 치료받지 않은 난소, 난관 또는 원발성 복막 암 또는 백금 감수성 재발성 (또는 이전에 치료된) 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 갖는 여성을 효과적으로 치료하기 위한 항-VEGF 항체의 용도가 제공된다. 데이터는 새로 진단받은, 이전에 치료받지 않은, III기 (최적 아래로 및 육안상 최적으로 용적축소됨) 및 IV기 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 대상체 (예를 들어, 여성)에서 화학치료 요법과 조합된 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)^®)의 무작위화 III상 임상 시험으로부터 제공된다 (실시예 1). 데이터는 또한 초기 수술을 받고 질환 진행 이전에는 종양감축 수술이 고려되지 않을, 새로 진단받은 고위험 I기 및 IIa기 (등급 3 또는 오직 투명 세포 암종) 및 IIb-IV기 상피 난소, 난관 또는 원발성 복막 암을 갖는 대상체 (예를 들어, 여성)에서 화학치료 요법과 조합된 베바시주맙 (아바스틴^®)의 무작위화 III상 임상 시험으로부터 제공된다 (실시예 2). 데이터는 또한 백금 감수성 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 갖는 여성에서 겜시타빈 (1000 mg/m², 제1일 및 제8일, 21일마다)과 카르보플라틴 (곡선 아래 면적 [AUC] 4, 제1일, 21일마다)과 조합되어 투여된 베바시주맙 (15 mg/kg, 제1일, 21일마다)의 효능 및 안전성을 평가하는 위약-제어 무작위화 다기관 III상 연구로부터 제공된다 (실시예 3). 이러한 화학치료 요법은 탁산 요법 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 백금 기반 화학요법 (예를 들어, 카르보플라틴) 또는 겜시타빈, 및 이들의 조합을 포함한다. 시험의 성공은 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)의 제공이 화학요법과 조합되고 유지 요법으로 계속되었을 때 난소암 환자에게 통계적으로 유의하고 임상적으로 의미있는 이점을 제공한다는 것을 보여준다.

이전에 치료받지 않은 재발성 난소암을 갖는 인간 대상체에서의 공동 및 유지 치료 둘 다에서 베바시주맙을 사용하는 임상 연구에서 수득한 결과는 무진행 생존 (PFS)에 의해 평가된 효능이 화학요법제 단독을 사용하는 치료에 대한 PFS 데이터와 비교하였을 때 특히 긍정적이라는 것을 보여준다. 베바시주맙의 투여를 탁산 요법 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 및 백금 기반 화학요법 (예를 들어, 카르보플라틴) 또는 백금 기반 화학요법 (예를 들어, 카르보플라틴) 및 겜시타빈과 조합한 공동 치료에서의 베바시주맙 및 베바시주맙을 사용하는 유지 요법을 투여받은 임상 시험 중의 대상체에서 탁산 요법 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 및 백금 기반 화학요법 (예를 들어, 카르보플라틴) 단독 또는 백금 기반 화학요법 (예를 들어, 카르보플라틴) 및 겜시타빈 단독으로 치료된 대상체에 비해 무진행 생존이 증가하였다.

따라서, 본 발명은 이전에 치료받지 않은 난소암 또는 재발성 난소암으로 진단받은 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체의 투여와 적어도 1종의 화학요법을 조합하고 이어서 유지 요법을 위해 항-VEGF 항체를 투여하는 치료 요법을 행하는 것을 포함하고, 여기서 상기 치료로 환자의 무진행 생존이 증가되는 것인, 이전에 치료받지 않은 난소암 또는 재발성 난소암으로 진단받은 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 항-VEGF의 투여와 화학요법을 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 투여하는 치료 요법은 환자의 무진행 생존 (PFS)을 효과적으로 연장시킨다.

특정 실시양태에서, PFS는 대조군에 비해 약 1개월, 1.2개월, 2개월, 2.9개월, 3개월, 3.8개월, 4개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 1년, 약 2년, 약 3년 등 연장된다. 한 실시양태에서, PFS는 (예를 들어, 화학요법을 항-VEGF의 투여와 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 투여하는 치료 요법으로) 대조군에 비해 약 2.9개월 내지 3.8개월 연장된다. 한 실시양태에서, PFS는 (예를 들어, 화학요법을 항-VEGF의 투여와 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 투여하는 치료 요법으로) 대조군에 비해 적어도 약 3.8개월 연장된다. 또 다른 실시양태에서, PFS는 (예를 들어, 화학요법을 항-VEGF의 투여와 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 투여하는 치료 요법으로) 대조군에 비해 약 2.3개월 연장된다. 한 실시양태에서, PFS는 (예를 들어, 화학요법을 항-VEGF의 투여와 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 투여하는 치료 요법으로) 대조군에 비해 약 6개월 연장된다.

항암 활성을 나타내는 임의의 화학요법제가 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학요법제는 알킬화제, 항대사물, 폴산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착물, 탁산 안트라센디온 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 저해제, 아드레노코르티코스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐, 겜시타빈 및 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학요법제는 예를 들어 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 파클리탁셀 단백질-결합 입자 (예를 들어, 아브락산(Abraxane)^®), 겜시타빈, 백금 유사체, 카르보플라틴 또는 이들의 조합이다. 2종 이상의 화학요법제는 항-VEGF 항체의 투여와 조합되어 투여될 칵테일 (예를 들어, 탁산 및 백금 유사체 또는 겜시타빈 및 백금 유사체)에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 이는 카르보플라틴 및 파클리탁셀이다. 한 실시양태에서, 이는 카르보플라틴 및 도세탁셀이다. 또 다른 실시양태에서, 이는 겜시타빈 및 카르보플라틴이다.

본 발명에 따른 치료의 임상적 이점은, 예를 들어 무진행 생존 (PFS) 지속기간, 치료 실패까지의 시간, 객관적 반응률 및 반응의 지속기간에 의해 측정될 수 있다.

키트가 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체 조성물, 및 상기 항-VEGF 항체 조성물을 탁산 요법 및 카르보플라틴과 조합하여 사용하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 사용하기 위한 지침서를 포함하는 포장물을 포함하며, 여기서 지침서는 탁산 요법 및 카르보플라틴 요법 및 베바시주맙을 투여받은 환자에 대한 무진행 생존이 위험비 0.717 (p-값 < 0.0001)로 14.1개월임을 설명하고 있는 것인, 인간 환자에서 이전에 치료받지 않은 난소암을 치료하기 위한 키트가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 항-VEGF 항체 조성물, 및 상기 항-VEGF 항체 조성물을 파클리탁셀 및 카르보플라틴과 조합하여 사용하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 사용하기 위한 지침서를 포함하는 포장물을 포함하며, 여기서 지침서는 파클리탁셀, 카르보플라틴 및 항-VEGF 항체를 투여받은 환자에 대한 무진행 생존이 위험비 0.79로 18.3개월임을 설명하고 있는 것인, 인간 환자에서 이전에 치료받지 않은 난소암을 치료하기 위한 키트가 제공된다. 특정 실시양태에서, 키트는 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는 항-VEGF 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 키트에서 베바시주맙이다. 특정 실시양태에서, 키트는 III기 또는 IV기 난소암을 갖는 환자를 위한 것이다.

따라서, 본 발명은 인간 대상체의 무진행 생존을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 위험을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체를 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공함으로써 암, 예를 들어 난소암을 갖는 인간 대상체를 지시하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 적어도 1종의 화학요법제를 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 적어도 2종의 화학요법제를 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공하는 것을 더 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체를 사용하는 치료는 화학요법제를 사용하는 치료와 공동으로 및 순차적으로 둘 다 이루어진다. 특정 실시양태에서, 대상체는 지시 방법에 의해 지시되는 바에 따라 치료된다.

본 발명은 또한 인간 대상체에서 암, 예를 들어 난소암을 치료하기 위해 항-VEGF 항체의 투여를 홍보하는 것을 포함하는 홍보 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 적어도 1종의 화학요법제의 투여를 홍보하는 것을 더 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체의 투여는 화학요법제(들)의 투여와 공동으로 및 순차적으로 둘 다 이루어진다. 홍보는 이용가능한 임의의 수단에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 홍보는 항-VEGF 항체의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 홍보는 또한 화학요법제(들)의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어질 수 있다. 홍보는 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 또는 구두 커뮤니케이션으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 홍보는 항-VEGF 항체 및 적어도 1종의 화학요법제(들)를 사용한 공동 요법 및 항-VEGF 항체를 사용한 유지 요법을 수행하기 위한 지침을 제공하는 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 홍보는 1종 이상의 화학요법제(들)와 조합된 항-VEGF 항체에 이어 항-VEGF 항체를 사용한 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

본 발명은 인간 대상체에서 암, 예를 들어 난소암을 치료하여 무진행 생존을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 적어도 1종의 화학요법제와 조합된 항-VEGF 항체에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 항-VEGF 항체와 화학요법제(들)에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항-VEGF 항체와 조합된 2종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 항-VEGF 항체와 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

또한, 인간 대상체에서 암, 예를 들어 난소암을 치료하여 무진행 생존을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체와 조합된 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 조합에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다. 또한, 인간 대상체에서 암, 예를 들어 난소암을 치료하여 무진행 생존을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체와 조합된 2종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 조합에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

본 발명의 각각의 방법에서, 항-VEGF 항체는 하기 기재된는 바와 같은 VEGF 특이적 길항제, 예를 들어 VEGF 수용체 분자 또는 키메라 VEGF 수용체 분자로 대체될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙이다. 항-VEGF 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체, 키메라 항체, 완전 인간 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 항체는 베바시주맙 (아바스틴^®), G6 항체, B20 항체 및 이들의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는다.

항체 또는 그의 항원-결합 단편은 또한 Fc 부분, F(ab')₂, Fab 또는 Fv 구조가 결여된 항체일 수 있다.

한 실시양태에서, 치료는 VEGF-특이적 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체 및 적어도 1종의 화학요법제의 조합에 이어 VEGF 길항제 유지 요법을 사용한다. 한 실시양태에서, 치료는 VEGF-특이적 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체 및 2종 이상의 화학요법제의 조합에 이어 VEGF 길항제 유지 요법이다.

본 발명의 각각의 방법 또는 용도는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지 않는 암의 치료와 관련하여 실시될 수 있다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 난소암, 난소 원발성 복막암, 난소 난관암, 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 신암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 위암, 흑색종 및 여러 유형의 두경부암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 이전에 치료받지 않은 난소암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 새로 진단받은 이전에 치료받지 않은 난소암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 새로 진단받은, 이전에 치료받지 않은, III기 (최적 아래로 및 육안상 최적으로 용적축소됨) 및 IV기 상피 난소 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 백금 감수성 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 갖는다.

상기 각각의 측면은 암의 재발에 대해 대상체를 모니터링하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 모니터링은 예를 들어 무진행 생존 (PFS) 또는 전체 생존 (OS) 또는 객관적 반응률 (ORR)을 평가하여 달성될 수 있다. 한 실시양태에서, PFS는 치료 개시 후에 평가된다.

질환의 유형 및 중증도에 따라, 항-VEGF 항체, 예를 들어 베바시주맙의 바람직한 투여량은 본원에 기재되어 있고, 약 1 μg/kg 내지 약 50 mg/kg, 가장 바람직하게는 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 범위 (5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg을 포함하나 이에 제한되지 않음)일 수 있다. 투여 빈도는 질환의 유형 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 상태에 따라서 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 방법으로 측정하여 암이 치료될 때까지 또는 원하는 치료 효과가 달성될 때까지 치료가 지속된다. 한 예에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 용량 범위 (5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg을 포함하나 이에 제한되지 않음)로 매주, 2주마다, 또는 3주마다 1회 투여된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 본 발명의 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 유지 요법으로 제공된다. 추가 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 적어도 14개월 동안 (화학요법과의 공동 항-VEGF 요법 및 항-VEGF 유지 요법 포함) 제공된다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 적어도 12개월 동안 (화학요법과의 공동 항-VEGF 요법 및 항-VEGF 유지 요법 포함) 제공된다.

상기 각각의 측면의 추가 실시양태에서, VEGF-특이적 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체는 국부 또는 전신 (예를 들어, 경구 또는 정맥내) 투여된다. 다른 실시양태에서, 임상의가 평가하거나 본원에 기재된 바와 같이, 치료의 한 측면은 VEGF-특이적 길항제를 단일요법으로서 사용하거나, 또는 예를 들어 확장된 치료 단계 또는 유지 요법에서 VEGF-특이적 길항제 치료 기간의 지속기간 동안의 단일요법으로서 사용한다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 유지 요법은 적어도 주기 7 내지 22 동안 주어진다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF 유지 요법은 적어도 주기 7 내지 18 동안 주어진다.

다른 실시양태에서, VEGF-특이적 길항제를 사용하는 치료는 수술, 방사선 요법, 화학요법, 분화유도 요법, 생물요법, 면역 요법, 혈관신생 억제제, 세포독성제 및 항증식성 화합물을 포함하나 이에 제한되지 않는 추가의 항암 요법과 조합된다. VEGF-특이적 길항제를 사용하는 치료는 또한 상기 유형의 치료 요법의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학요법제 및 VEGF-특이적 길항제가 공동 투여된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 화학요법제 및 VEGF-특이적 길항제가 공동 투여된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다.

추가의 항암 요법을 포함하는 실시양태에서, 대상체를 VEGF-특이적 길항제의 투여 전, 투여 동안 (예를 들어, 동시에) 또는 투여 후에 추가의 항암 요법으로 추가로 치료할 수 있다. 한 실시양태에서, 단독으로 또는 항암 요법과 함께 투여되는 VEGF-특이적 길항제는 유지 요법으로 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명, 도면 및 특허청구범위로부터 명백해질 것이다.

도 1은 실시예 1에 기재된 난소암 시험을 위한 연구 설계를 도시한다.
도 2는 베바시주맙 (BEV) 또는 위약을 다양한 화학요법과 함께 사용하는 난소암 시험을 위한 연구 설계의 다이어그램을 도시한다.
도 3은 도 2에 도시된 시험으로부터 유해 사례 선택을 도시한다.
도 4는 도 2에 도시된 시험으로부터 치료 단계에 의한 유해 사례 선택을 도시한다.
도 5는 도 2에 도시된 시험의 아암 I, 아암 II 및 아암 III의 조사원-평가된 무진행 생존 (PFS)을 도시한다.
도 6은 도 2에 도시된 시험의 아암 I 및 아암 III에 대한 PFS 값 및 CA-125 마커를 진행의 결정인자로 사용하는 분지를 도시한다.
도 7은 도 2에 도시된 시험의 아암 III 대 아암 I의 환자의 하위군 분석을 도시한다.
도 8은 실시예 2에 기재된 난소암 시험을 위한 연구 설계를 도시한다.
도 9는 도 8에 도시된 시험의 무진행 생존 (PFS) 분석의 개요를 도시한다. "CP"는 도 8에서 아암 A에 해당된다. "CPB7.5+"는 도 8에서 아암 B에 해당된다.
도 10은 도 8에 도시된 시험으로부터의 PFS 결과의 그래프를 도시한다. "CP"는 도 8에서 아암 A에 해당된다. "CPB7.5+"는 도 8에서 아암 B에 해당된다.
도 11은 실시예 3에 기재된 난소암 시험을 위한 연구 설계를 도시한다

<상세한 설명>

I. 정의

용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는 예를 들어 문헌 [Leung et al. Science, 246:1306 (1989), 및 Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)]에 기재된 바와 같은 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자 및 관련 121-, 145-, 189- 및 206-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자 뿐만 아니라 이들의 자연 발생 대립유전자 및 프로세싱된 형태를 지칭하는데 사용된다. VEGF-A는 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 및 PlGF를 포함하는 유전자 패밀리의 일부이다. VEGF-A는 주로 2종의 고친화도 수용체 티로신 키나제인 VEGFR-1 (Flt-1) 및 VEGFR-2 (Flk-1/KDR)에 결합하며, 후자는 VEGF-A의 혈관 내피 세포 분열촉진 신호의 주요 전달자이다. 추가로, 뉴로필린-1이 헤파린-결합 VEGF-A 이소형에 대한 수용체로서 확인되었고, 이는 혈관 발생시에 소정의 역할을 할 수 있다. 용어 "VEGF" 또는 "VEGF-A"는 또한 비인간 종, 예컨대 마우스, 래트 또는 영장류로부터의 VEGF를 지칭한다. 때때로, 특정 종으로부터의 VEGF는 인간 VEGF의 경우에는 hVEGF, 또는 뮤린 VEGF의 경우에는 mVEGF와 같은 용어로 표시된다. 용어 "VEGF"는 또한 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 아미노산 1 내지 109를 포함하는 폴리펩티드의 말단절단된 형태 또는 단편을 지칭하는데 사용된다. VEGF의 임의의 이러한 형태들에 대한 언급은 본원에서 예를 들어 "VEGF (8-109)", "VEGF (1-109)" 또는 "VEGF165"로 표시될 수 있다. "말단절단된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에 표시된 바와 같이 넘버링된다. 예를 들어, 말단절단된 천연 VEGF에서의 아미노산 위치 17 (메티오닌)은 또한 천연 VEGF에서의 위치 17 (메티오닌)이다. 말단절단된 천연 VEGF는 KDR 및 Flt-1 수용체에 대해 천연 VEGF와 대등한 결합 친화도를 갖는다.

"항-VEGF 항체"는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체이다. 선택된 항체는 일반적으로 VEGF에 대해 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 상기 항체는 100 nM-1 pM의 Kd 값으로 hVEGF에 결합할 수 있다. 항체 친화도는 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대 PCT 출원 공보 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어(BIAcore) 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)으로 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 관여하는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는데 있어 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체를 대상으로 하여 다른 생물학적 활성 검정을 수행하여, 예를 들어 그의 치료제로서의 유효성을 평가할 수 있다. 이러한 검정은 당업계에 공지되어 있고, 표적 항원 및 항체의 의도된 용도에 따라 달라진다. 이것의 예는 HUVEC 억제 검정, 종양 세포 성장 억제 검정 (예를 들어, WO 89/06692에 기재된 바와 같음), 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC) 및 보체-매개 세포독성 (CDC) 검정 (미국 특허 5,500,362), 및 효능작용 활성 또는 조혈 검정 (WO 95/27062 참조)을 포함한다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 동족체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

"VEGF 길항제"는 1종 이상의 VEGF 수용체에 대한 결합을 포함하여, VEGF 활성을 중화하거나 차단하거나 억제하거나 없애거나 감소시키거나 방해할 수 있는 분자를 지칭한다. VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 및 그의 항원-결합 단편, VEGF에 특이적으로 결합함으로써 1종 이상의 수용체에 대한 그의 결합을 봉쇄시키는 수용체 분자 및 유도체, 항-VEGF 수용체 항체 및 VEGF 수용체 길항제, 예컨대 VEGFR 티로신 키나제의 소분자 억제제를 포함한다.

"천연 서열" 폴리펩티드는 자연계로부터 유래된 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 천연 서열 폴리펩티드는 임의의 포유동물로부터의 자연 발생 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 천연 서열 폴리펩티드는 자연계로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합 또는 합성 수단에 의해 생성될 수 있다. 구체적으로, 용어 "천연 서열" 폴리펩티드는 폴리펩티드의 자연 발생 말단절단된 형태 또는 분비된 형태 (예를 들어, 세포외 도메인 서열), 폴리펩티드의 자연 발생 변이체 형태 (예를 들어, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 자연 발생 대립유전자 변이체를 포함한다.

폴리펩티드 "변이체"는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 생물학적 활성 폴리펩티드를 의미한다. 이러한 변이체는 예를 들어 1개 이상의 아미노산 잔기가 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가되거나 결실된 폴리펩티드를 포함한다. 통상적으로, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80%의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 약 90%의 아미노산 서열 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 95%의 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다.

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체 (예를 들어, 전장 또는 무손상 모노클로날 항체), 폴리클로날 항체, 다가 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 항체 단편 (하기 참조)을 포함한다.

본 명세서 및 특허청구범위에 걸쳐서, 이뮤노글로불린 중쇄 내의 잔기에 관한 넘버링은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] (명백하게 본원에 참고로 포함됨)에서와 같은 EU 지수의 넘버링이다. "카바트에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 나타낸다.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 하기 검정에 기재하는 바와 같이 항체의 Fab 버전 및 VEGF 분자를 사용하여 수행되는 방사성표지된 VEGF 결합 검정 (RIA)으로 측정하고, 이는 VEGF에 대한 Fab의 용액 결합 친화도를 표지되지 않은 VEGF의 일련의 적정물의 존재 하에 최소 농도의 (¹²⁵I)-표지된 VEGF(109)로 Fab를 평형화시킨 후에 결합된 VEGF를 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획하여 측정한다 (문헌 [Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881]). 한 예에서, 검정 조건을 수립하기 위해, 마이크로타이터 플레이트 (다이넥스(Dynex))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후에 PBS 중 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단한다. 비-흡착 플레이트 (넌크(Nunc) #269620)에서 100 pM 또는 26 pM [¹²⁵I]VEGF(109)를 관심있는 Fab, 예를 들어 Fab-12의 연속 희석액과 혼합한다 (문헌 [Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]). 이어서, 관심있는 Fab를 밤새 인큐베이션하지만, 확실히 평형에 도달하게 하기 위해서는 65시간 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 트윈-20으로 8회 세척하였다. 플레이트를 건조시키고, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MicroScint)-20; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(Topcount) 감마 계수기 (팩커드)에서 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도를 선택하여 경쟁 결합 검정에 사용한다. 또 다른 실시양태에 따르면, Kd 또는 Kd 값을 25℃에서 약 10 반응 단위 (RU)의 고정된 hVEGF (8-109) CM5 칩으로 비아코어^TM-2000 또는 비아코어^TM-3000 (비아코어, 인크.(BIAcore, Inc.), 뉴저지주 피스카타웨이)을 사용한 표면 플라즈몬 공명 검정으로 측정한다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 인간 VEGF를 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.8)을 사용하여 5 μg/ml (약 0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유속으로 주입한다. 인간 VEGF 주입 후, 1M 에탄올아민을 주입하여 미반응 기를 차단한다. 역학 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석액 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유속으로 25℃에서 0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS (PBST) 중에서 주입한다. 회합 속도 (k_on) 및 해리 속도 (k_off)는 회합 및 해리 센서그램을 동시 피팅함으로써 단순 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 k_off/k_on 비로 계산하였다. 예를 들어, 문헌 [Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881]을 참조한다. 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의한 온-레이트(on-rate)가 10⁶ M^-1 s^-1을 초과하는 경우, 온-레이트는 분광측정계, 예컨대 정지-유동 설치 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 8000-시리즈 SLM-아민코(Aminco) 분광광도계 (써모스펙트로닉(ThermoSpectronic)) (교반 큐벳이 장착됨)에서 측정할 때 증가하는 농도의 인간 VEGF 단쇄 형태 (8-109) 또는 마우스 VEGF의 존재 하에 PBS (pH 7.2) 중 20 nM 항-VEGF 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm, 방출 = 340 nm, 16 nm 통과 대역)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 이용하여 결정할 수 있다.

"차단" 항체 또는 항체 "길항제"는 이것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제 또는 감소시키는 것이다. 예를 들어, VEGF-특이적 길항제 항체는 VEGF와 결합하여 혈관 내피 세포 증식을 유도하거나 혈관 투과성을 유도하는 VEGF의 능력을 억제한다. 특정 실시양태에서, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 완전히 또는 실질적으로 억제한다.

달리 나타내지 않는 한, 표현 "다가 항체"는 본 명세서 전반에 걸쳐 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 지칭하는데 사용된다. 예를 들어, 다가 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 조작되고, 일반적으로 천연 서열 IgM 또는 IgA 항체가 아니다.

"항체 단편"은 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하여 항원과의 결합 능력을 보유하는, 무손상 항체의 일부만을 포함한다. 이러한 정의에 포함되는 항체 단편의 예는 다음을 포함한다: (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편, (ii) CH1 도메인의 C-말단에 1개 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편, (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편, (iv) VH 및 CH1 도메인을 갖고 CH1 도메인의 C-말단에 1개 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편, (v) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편, (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (문헌 [Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)]), (vii) 단리된 CDR 영역, (viii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')₂ 단편, (ix) 단일 쇄 항체 분자 (예를 들어, 단일 쇄 Fv; scFv) (문헌 [Bird et al., Science 242:423-426 (1988); 및 Huston et al., PNAS (USA) 85:5879-5883 (1988)]), (x) 동일 폴리펩티드 쇄에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함하는, 2개의 항원 결합 부위를 갖는 "디아바디" (예를 들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조), (xi) 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 병렬식 Fd 절편 (VH-CH1-VH-CH1)의 쌍을 포함하는 "선형 항체" (문헌 [Zapata et al. Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)]; 및 미국 특허 번호 5,641,870).

본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동질성인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 나타내고, 즉, 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원에 대하여 지정된다. 추가로, 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 지정된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 달리, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일결정자에 대해 지정된다. 수식어구 "모노클로날"은 임의의 특정한 방법을 통한 항체 생성이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature 256:495 (1975)]에 최초로 기재되었던 하이브리도마 방법으로 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조)으로 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한, 예를 들어 문헌 [Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991) 또는 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)]에 기재되어 있는 기술을 이용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.

"Fv" 단편은 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이러한 영역은 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인이 단단하게 회합된 이량체로 이루어지며, 이러한 연결은 예를 들어 scFv에서 특성상 공유 결합일 수 있다. 이러한 형태에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 V_H-V_L 이량체 표면의 항원 결합 부위를 규정한다. 전체적으로, 6개의 CDR 또는 이것의 하위세트가 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 일반적으로 전체 결합 부위보다 친화도가 낮긴 하지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.

본원에 사용된 "항체 가변 도메인"은 상보성 결정 영역 (CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3) 및 프레임워크 영역 (FR)의 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자의 경쇄 및 중쇄의 일부를 지칭한다. V_H는 중쇄의 가변 도메인을 지칭한다. V_L은 경쇄의 가변 도메인을 지칭한다. 본 발명에서 사용되는 방법에 따라, CDR 및 FR에 대해 지정된 아미노산 위치는 카바트 (문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)])에 따라 규정될 수 있다. 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 넘버링 역시 카바트에 따른다.

본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역" (CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3)은 항원 결합에 필요한 항체 가변 도메인의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각각의 가변 도메인은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 확인되는 3개의 CDR 영역을 갖는다. 각각의 상보성 결정 영역은 카바트에 의해 규정된 바와 같은 "상보성 결정 영역"으로부터의 아미노산 잔기 (즉, 경쇄 가변 도메인 내의 약 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 아미노산 잔기 (즉, 경쇄 가변 도메인 내의 약 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3), 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); 문헌 [Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)])를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 상보성 결정 영역은 카바트에 따라 규정된 CDR 영역 및 초가변 루프 둘 다로부터의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 4D5의 중쇄의 CDRH1은 아미노산 26 내지 35를 포함한다.

"프레임워크 영역" (이하, FR)은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 각각의 가변 도메인은 전형적으로 FR1, FR2, FR3 및 FR4로 확인되는 4개의 FR을 갖는다. CDR이 카바트에 따라 정의되는 경우, 경쇄 FR 잔기는 약 잔기 1-23 (LCFR1), 35-49 (LCFR2), 57-88 (LCFR3) 및 98-107 (LCFR4)에 위치하고, 중쇄 FR 잔기는 중쇄 잔기에서 약 잔기 1-30 (HCFR1), 36-49 (HCFR2), 66-94 (HCFR3) 및 103-113 (HCFR4)에 위치한다. CDR이 초가변 루프의 아미노산 잔기를 포함하는 경우, 경쇄 FR 잔기는 경쇄에서 약 잔기 1-25 (LCFR1), 33-49 (LCFR2), 53-90 (LCFR3) 및 97-107 (LCFR4)에 위치하고, 중쇄 FR 잔기는 중쇄 잔기에서 약 잔기 1-25 (HCFR1), 33-52 (HCFR2), 56-95 (HCFR3) 및 102-113 (HCFR4)에 위치한다. 일부 경우에, CDR이 카바트에 의해 정의된 바와 같은 CDR의 아미노산과 초가변 루프의 아미노산 둘 다를 포함하는 경우에는 FR 잔기가 그에 따라 조정될 것이다. 예를 들어, CDRH1이 아미노산 H26-H35를 포함하는 경우, 중쇄 FR1 잔기는 위치 1-25에 존재하고 FR2 잔기는 위치 36-49에 존재한다.

"Fab" 단편은 경쇄의 가변 및 불변 도메인 및 중쇄의 가변 도메인 및 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. F(ab')₂ 항체 단편은 한 쌍의 Fab 단편 사이에서 이들의 카르복시 말단 근처에서 힌지 시스테인에 의해 일반적으로 공유결합에 의해 연결된 한 쌍의 Fab 단편을 포함한다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링 또한 당업계에 공지되어 있다.

"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재하는, 항체의 V_H 및 V_L 도메인을 포함한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있도록 하는, V_H 및 V_L 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해서는 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.

용어 "디아바디"는 동일 폴리펩티드 쇄 (V_H 및 V_L)로 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함하는, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭한다. 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍 형성을 허용하기에는 지나치게 짧은 링커를 사용함으로써, 상기 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 형성하게 되어 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.

표현 "선형 항체"는 문헌 [Zapata et al., Protein Eng., 8(10):1057-1062 (1995)]에 기재된 항체를 지칭한다. 간략하게, 이들 항체는 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 병렬식 Fd 절편 (V_H-C_H1-V_H-C_H1)을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.

구체적으로, 본원에서의 모노클로날 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체 (이뮤노글로불린) 뿐만 아니라, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한은 이러한 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]).

"인간화" 형태의 비인간 (예를 들어, 뮤린) 항체는 비인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대다수의 경우, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종 (공여자 항체)의 초가변 영역의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해 치환된다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수도 있다. 이러한 변형은 항체 성능이 추가로 개선되게 한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 임의로, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 이뮤노글로불린의 것을 또한 포함할 것이다. 보다 상세한 내용은 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다.

"인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖고/거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체 제조 기술 중 임의의 것을 이용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 제외된다. 인간 항체는 다양한 당업계의 공지된 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 인간 항체는 파지 라이브러리로부터 선택되는데, 이러한 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다 (문헌 [Vaughan et al. Nature Biotechnology 14:309-314 (1996): Sheets et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 95:6157-6162 (1998)); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]). 인간 항체는 인간 이뮤노글로불린 로커스를 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어 마우스에 도입시켜 제조될 수도 있다. 시험접종시에, 인간 항체 생성이 관찰되고, 이것은 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 비롯한 모든 면에서 인간에서 관찰되는 것과 매우 유사하다. 이러한 접근법은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, 및 하기 과학 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)]에 기재되어 있다. 대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생성하는 인간 B 림프구를 불멸화시킴으로써 제조될 수 있다 (이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나, 또는 시험관내 면역화되었을 수 있음). 예를 들어, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991)]; 및 미국 특허 번호 5,750,373을 참조한다.

"친화도 성숙" 항체는 변경(들)을 갖지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체의 친화도를 개선시키는, 1개 이상의 CDR에 1개 이상의 변경을 갖는 항체이다. 바람직한 친화도 성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어는 피코몰의 친화도를 가질 것이다. 친화도 성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 제조된다. 문헌 [Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]에서는 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 설명하고 있다. CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발이 문헌 [Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.

항체의 "기능적 항원 결합 부위"는 표적 항원과 결합할 수 있는 부위이다. 항원 결합 부위의 항원 결합 친화도는 항원 결합 부위가 유래된 모 항체만큼 강력할 필요는 없지만, 항원에 결합하는 능력은 항원에 대한 항체 결합을 평가하는 것과 관련하여 공지된 다양한 방법 중 어느 하나로 측정가능해야 한다. 추가로, 본원에서의 다가 항체의 항원 결합 부위 각각의 항원 결합 친화도가 정량적으로 동일할 필요는 없다. 본원에서의 다량체 항체의 경우, 기능적 항원 결합 부위의 수는 미국 특허 출원 공보 번호 20050186208의 실시예 2에 기재된 바와 같은 초원심분리 분석을 이용하여 평가할 수 있다. 이러한 분석 방법에 따라, 다량체 항체에 대한 표적 항원의 상이한 비를 조합하고, 기능적 결합 부위의 상이한 수를 추정하여 복합체의 평균 분자량을 계산한다. 이러한 이론적 값을 수득된 실제 실험 값과 비교하여 기능적 결합 부위의 수를 평가한다.

지정된 항체의 "생물학적 특징"을 갖는 항체는 이러한 항체를 동일 항원에 결합하는 다른 항체와 구별시켜 주는, 항체의 하나 이상의 생물학적 특징을 보유하는 항체이다.

관심있는 항체가 결합하는 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 통상의 교차-차단 검정, 예컨대 문헌 [Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 검정을 수행할 수 있다.

"종-의존성 항체"는 제1 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 결합 친화도가 제2 포유동물 종으로부터의 상기 항원의 상동체에 대한 결합 친화도 보다 더 강한 항체이다. 통상적으로, 종-의존성 항체는 인간 항원에 "특이적으로 결합" (즉, 결합 친화도 (K_d) 값이 약 1 x 10^-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 x 10^-8 M 이하, 가장 바람직하게는 약 1 x 10^-9 M 이하)하지만, 제2의 비인간 포유동물 종으로부터의 상기 항원의 상동체에 대한 결합 친화도는 인간 항원에 대한 결합 친화도보다 적어도 약 50배 또는 적어도 약 500배 또는 적어도 약 1000배 더 약하다. 종-의존성 항체는 상기 정의된 바와 같은 임의의 다양한 유형의 항체일 수 있으나, 전형적으로는 인간화 또는 인간 항체이다.

본원에 사용된 "항체 돌연변이체" 또는 "항체 변이체"는 종-의존성 항체의 1개 이상의 아미노산 잔기를 변형시킨, 종-의존성 항체의 아미노산 서열 변이체를 지칭한다. 이러한 돌연변이체는 종-의존성 항체와 반드시 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 가져야 한다. 한 실시양태에서, 항체 돌연변이체는 종-의존성 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 본원에서, 이러한 서열과 관련된 동일성 또는 유사성은 서열을 정렬하고 필요한 경우에는 최대 서열 동일성 %를 달성하기 위한 갭을 도입한 후에 종-의존성 항체 잔기와 동일 (즉, 동일 잔기) 또는 유사한 (즉, 공통적인 측쇄 특성을 기초로 할 때 동일 군으로부터의 아미노산 잔기, 이하 참조) 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. N-말단, C-말단 또는 내부 확장, 결실, 또는 가변 도메인 바깥쪽에서의 항체 서열 내로의 삽입 중 어떤 것도 서열 동일성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 해석되지 않아야 한다.

본 발명의 아미노산 서열을 함유하는 항체 또는 폴리펩티드의 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 5,739,277에 기재된 바와 같이 샐비지 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편)에 부착시킬 수 있다. 예를 들어, 이러한 샐비지 수용체 결합 에피토프를 코딩하는 핵산 분자를 본 발명의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 핵산과 인 프레임으로 연결시켜서, 조작된 핵산 분자에 의해 발현된 융합 단백질이 샐비지 수용체 결합 에피토프 및 본 발명의 폴리펩티드 서열을 포함하게 할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 담당하는 IgG 분자 (예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃ 또는 IgG₄)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie et al., Ann. Rev. Immunol. 18:739-766 (2000)], 표 1). 그의 Fc 영역 내에 치환을 갖고 혈청 반감기가 증가된 항체가 또한 WO00/42072, WO 02/060919; 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Hinton, J. Biol. Chem. 279:6213-6216 (2004))]에 기재되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 혈청 반감기는 또한 예를 들어 다른 폴리펩티드 서열을 부착시켜 증가될 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법에 유용한 항체 또는 다른 폴리펩티드를 FcRn 수용체에 결합하는 혈청 알부민 또는 혈청 알부민의 일부, 또는 혈청 알부민 결합 펩티드에 부착시켜서 혈청 알부민이 이러한 항체 또는 폴리펩티드와 결합되도록 할 수 있고, 예를 들어 이러한 폴리펩티드 서열은 WO 01/45746에 개시되어 있다. 한 실시양태에서, 부착될 혈청 알부민 펩티드는 아미노산 서열 DICLPRWGCLW를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, Fab의 반감기는 이들 방법에 의해 증가된다. 또한, 혈청 알부민 결합 펩티드 서열에 대해서는 문헌 [Dennis et al. J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002)]을 참조한다.

"키메라 VEGF 수용체 단백질"은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 VEGF 수용체 분자인데, 이중 적어도 하나는 VEGF 수용체 단백질로서 존재한다. 특정 실시양태에서, 키메라 VEGF 수용체 단백질은 VEGF와 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있다.

"단리된" 항체는 천연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리 및/또는 회수된 항체이다. 이의 천연 환경의 오염물 성분은 항체에 대한 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체는 (1) 로우리 방법으로 측정시에 항체의 95 중량%를 초과하는 정도, 가장 바람직하게는 99 중량%를 초과하는 정도로, (2) 스피닝 컵 시쿼네이터를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 이용하여 환원 또는 비환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질한 것으로 나타날 정도로 정제될 것이다. 단리된 항체는 재조합 세포 내의 계내 항체를 포함하는데, 이는 항체 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 1회의 정제 단계를 통해 제조될 것이다.

"단편"은 바람직하게는 참조 핵산 분자 또는 폴리펩티드 전체 길이의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 초과를 함유하는 폴리펩티드 또는 핵산 분자의 일부를 의미한다. 단편은 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100, 200, 300, 400, 500, 600개 또는 그 초과의 뉴클레오티드, 또는 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 190, 200개 또는 그 초과의 아미노산을 함유할 수 있다.

"항혈관신생제" 또는 "혈관신생 억제제"는 혈관신생, 혈관형성, 또는 바람직하지 않은 혈관 투과성을 직접적으로 또는 간접적으로 억제하는 저분자량 물질, 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 단리된 단백질, 재조합 단백질, 항체, 또는 이들의 접합체 또는 융합 단백질을 지칭한다. 항혈관신생제는 혈관신생 인자 또는 그의 수용체에 결합하고 이것의 혈관신생 활성을 차단하는 작용제를 포함한다는 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 항혈관신생제는 본 명세서에 정의된 바와 같거나 또는 당업계에 공지된 혈관신생제에 대한 항체 또는 다른 길항제 (VEGF-A 또는 VEGF-A 수용체 (예를 들어, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, VEGF-트랩, 항-PDGFR 억제제, 예컨대 글리벡(Gleevec)^TM (이마티닙 메실레이트)을 포함하나 이에 제한되지 않음)이다. 항혈관신생제는 또한 천연 혈관신생 억제제, 예를 들어 안지오스타틴, 엔도스타틴 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Klagsbrun and D'Amore, Annu. Rev. Physiol., 53:217-39 (1991); Streit and Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003)] (예를 들어, 악성 흑색종에서의 항혈관신생 요법을 열거한 표 3); [Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5:1359-1364 (1999); Tonini et al., Oncogene, 22:6549-6556 (2003)] (예를 들어, 공지된 항혈관신생 인자를 열거한 표 2); 및 [Sato. Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206 (2003)] (예를 들어, 임상 시험에 사용된 항혈관신생제를 열거한 표 1)을 참조한다.

본원에서의 "유지" 용량은 치료 기간에 걸쳐서 또는 치료 기간 이후에 환자에게 투여되는 치료제의 1회 이상의 용량을 지칭한다. 통상적으로, 유지 용량은 치료 시간 간격을 두고 투여되며, 예컨대 대략 매주, 대략 2주마다, 대략 3주마다, 또는 대략 4주마다 투여된다. 한 실시양태에서, 유지 용량은 본원에서 도 1 (확장된 요법), 도 2 또는 도 8 또는 도 11에 도시된 바와 같다.

"생존"은 환자가 살아있는 상태를 지칭하며, 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)을 포함한다. 생존은 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법으로 추정할 수 있고, 생존에서의 임의의 차이는 계층화된 로그 순위 시험에 의해 전산화된다.

"무진행 생존 (PFS)"은 치료 (또는 무작위화) 시점으로부터 최초 질환 진행 또는 사망 시점까지의 시간을 지칭한다. 본 발명의 한 측면에서, PFS는 고형 종양에서의 반응 평가 기준 (RECIST)으로 평가될 수 있다. 본 발명의 한 측면에서, PFS는 진행의 결정인자로서 CA-125 수준에 의해 평가될 수 있다.

"전체 생존"은 환자가 치료 개시 또는 초기 진단으로부터 규정된 기간 동안, 예컨대 약 1년, 약 1.5년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 10년 등 동안 생존을 유지하는 것을 지칭한다. 본 발명의 기반을 이루는 연구에서, 생존 분석을 위해 사용된 사건은 임의의 원인으로 인한 사망이었다.

"생존을 연장시키는 것" 또는 "생존 가능성을 증가시키는 것"은 치료받지 않은 환자에 비해 (즉, VEGF-특이적 길항제, 예를 들어 VEGF 항체로 치료받지 않은 환자에 비해), 또는 대조군 치료 프로토콜, 예컨대 난소암의 관리 표준에 사용되는 것과 같은 화학요법제 만에 의한 치료에 비해 치료받은 환자에서 PFS 및/또는 OS를 증가시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 연장된 PFS는 환자가 대조군 (예를 들어, 동일한 VEGF 특이적 길항제로 치료되지 않은 환자)에 비해 치료 개시 또는 초기 진단으로부터 암의 복귀 없이 예를 들어 규정된 기간의 시간, 예컨대 약 1개월, 2개월, 2.3개월, 2.9개월, 3개월, 3.8개월, 4개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 1년, 약 2년, 약 3년 등 동안 생존을 유지하고 있는 시간이다. 한 실시양태에서, PFS는 대조군에 비해 약 2.9개월 내지 3.8개월 연장된다. 한 실시양태에서, PFS는 대조군에 비해 적어도 약 3.8개월 연장된다. 또 다른 실시양태에서, PFS는 약 2.3개월 연장된다. 한 실시양태에서, PFS는 대조군에 비해 약 6개월 연장된다. 특정 실시양태에서, 생존은 치료 개시 또는 초기 진단 후에 적어도 약 1개월, 2개월, 4개월, 6개월, 9개월, 또는 적어도 약 1년, 또는 적어도 약 2년, 또는 적어도 약 3년, 또는 적어도 약 4년, 또는 적어도 약 5년, 또는 적어도 약 10년 등 동안 모티터링된다.

위험비 (HR)는 사례 발생률에 대한 통계적 정의이다. 본 발명의 목적상, 위험비는 임의의 특정 시점에서 실험군에서의 사례 확률을 대조군에서의 사례 확률로 나눈 것으로 정의된다. 무진행 생존 분석에서의 "위험비"는 이후의 기간 전반에 걸쳐서 대조군과 비교하여 치료시의 사망 위험의 감소를 나타내는, 2개의 무진행 생존 곡선 사이의 차이에 관한 요약이다.

본원에서, 용어 "공동으로"는 투여의 적어도 일부가 시간상 중첩되는, 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭하는데 사용된다. 따라서, 공동 투여는 1종 이상의 다른 작용제(들)를 불연속적으로 투여한 후에 연속하여 1종 이상의 작용제(들)를 투여하는 경우의 투여 요법을 포함한다.

"단독요법"은 치료 기간 동안 암 또는 종양을 치료하기 위해서 오직 단일의 치료제만을 포함하는 치료 요법을 의미한다. VEGF-특이적 길항제를 사용한 단독요법은 VEGF-특이적 길항제가 치료 기간 동안 추가의 항암 요법 없이 투여되는 것을 의미한다.

"유지 요법"은 질환의 재발 또는 진행 가능성을 감소시키기 위해 제공되는 치료 요법을 의미한다. 유지 요법은 최대로는 대상체의 수명까지 연장된 기간을 포함하는 임의의 길이의 시간 동안 제공될 수 있다. 유지 요법은 초기 요법 후에 제공될 수 있거나, 또는 초기 또는 추가의 요법과 연계해서 제공될 수 있다. 유지 요법에 사용되는 투여량은 상이할 수 있고, 다른 유형의 요법에 사용되는 투여량과 비교할 때 감소된 투여량을 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 유지 요법은 5 주기의 항-VEGF 요법과 공동으로 화학요법을 완료한 후에 적어도 16 주기 동안 제공된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 유지 요법은 6 주기의 항-VEGF 요법과 공동으로 화학요법을 완료한 후에 적어도 12 주기 동안 제공된다. 한 실시양태에서, 유지 요법은 도 1, 도 2, 도 8 또는 도 11에 도시된 바와 같다.

용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않는 세포 성장을 전형적인 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 이의 정의는 양성 및 악성 암 뿐만 아니라 휴면 종양 또는 미세전이를 포함한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 난소암, 난소 원발성 복막암, 난소 난관암, 백금 감수성 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종, 편평세포암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종 포함), 복막암, 간세포암, 위암 또는 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종 및 여러 유형의 두경부암, 뿐만 아니라 B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) NHL; 중등급/여포성 NHL; 중등급 미만성 NHL; 고등급 면역모세포성 NHL; 고등급 림프모구성 NHL; 고등급 비-절단 세포 NHL; 거대 질환 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프모구성 백혈병 (ALL); 모발상 세포 백혈병; 만성 골구모구성 백혈병; 및 이식후 림프구증식성 장애 (PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양과 관련된 부종) 및 메이그스 증후군을 포함한다.

"전이"는 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 부위로 확산되는 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프관 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통하여 순환하여 신체 내 그 밖의 정상 조직의 원위 중심에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국부 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터의 종양 세포 분리가 우발적으로 발생하고 혈류를 통해 이동하여 원위 부위에서 중단되는 순차적 과정이다. 이러한 새로운 부위에서 상기 세포는 혈액 공급을 확립시키고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다. 종양 세포 내에서의 자극성 분자 경로 및 억제 분자 경로 둘 다가 이러한 거동을 조절하고, 종양 세포와 원위 부위의 숙주 세포 사이의 상호 작용이 또한 유의하다.

"대상체"는 인간 또는 비인간 포유동물, 예컨대 소, 말, 개, 양 또는 고양이를 포함하나 이에 제한되지 않는 포유동물을 의미한다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다. 환자 역시 본원에서의 대상체이다. 전형적으로, 대상체는 여성이다.

본 발명의 방법과 관련하여, 대상체에게 "지시하는"이라는 용어는 임의의 수단에 의하지만 바람직하게는 서면, 예컨대 포장 삽입물 또는 다른 서면 홍보물의 형태로 이루어지는, 적용가능한 요법, 의약, 치료, 치료 요법 등에 관한 지침을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명의 방법과 관련하여, 용어 "홍보"는 포장 삽입물 형태와 같은 서면을 비롯한 임의의 수단을 이용하여 특정 약물, 약물의 조합, 또는 치료법을 제공하거나 광고하거나 판매하거나 설명하는 것을 의미한다. 본원에서의 홍보는 적응증, 예컨대 난소암 치료를 위한 치료제, 예컨대 VEGF 길항제, 예를 들어 항-VEGF 항체 또는 화학요법제에 대한 홍보를 지칭하며, 이러한 홍보는 대상체 집단 내 통계적으로 유의한 치료 효능 및 허용되는 안전성과 관련된 것으로 입증되어야 미국 식품 의약품국 (FDA)의 승인을 받게 된다.

용어 "마케팅"은 본원에서 제품 (예를 들어, 약물)의 홍보, 판매 또는 유통을 기술하는데 사용된다. 마케팅은 구체적으로 제품을 상품화할 목적으로 하는 포장, 광고 임의의 영업 활동을 포함한다.

대상체의 "집단"은 임상 시험에서와 같이, 또는 난소암 요법과 같은 특정 적응증에 대한 FDA 승인 후에 종양학자가 관찰하는 바와 같이 암을 갖는 대상체의 그룹을 지칭한다.

용어 "항암 요법"은 암 치료에 유용한 요법을 지칭한다. 항암 치료제의 예는 예를 들어 수술, 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용되는 작용제, 항혈관신생제, 아폽토시스 작용제, 항튜불린제, 및 암 치료를 위한 다른 작용제, 예컨대 항-HER-2 항체, 항-CD20 항체, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 길항제 (예를 들어, 티로신 키나제 억제제), HER1/EGFR 억제제 (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바(Tarceva)^®)), 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예를 들어, 글리벡^TM (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브), 인터페론, 시토카인, ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA 또는 VEGF 수용체(들) 표적 중 하나 이상에 결합하는 길항제 (예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 다른 생물활성 및 유기 화학적 작용제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이들의 조합이 또한 본 발명에 포함된다.

본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제, 및 독소, 예컨대 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소 (그의 단편 및/또는 변이체 포함)를 포함한다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는암의 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시톡산(CYTOXAN)^® 시클로스포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메트우레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 포함); 아세토게닌 (특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (예를 들어, 합성 유사체인 KW-2189 및 CB1-TM1); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 다이네미신 (다이네미신 A 포함); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 에네디인 항생 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)^® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항아드레날, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK^® 폴리사카라이드 복합체 (제이에이치에스 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 탁솔(TAXOL)^® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스톤), 크레모포르-무함유 아브락산^®, 파클리탁셀의 알부민-조작 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샤움버그) 및 탁소테레(TAXOTERE)^® 독세탁셀 (론-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니); 클로란부실; 겜자르(GEMZAR)^® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)^® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (캄프토사르, CPT-11) (이리노테칸을 5-FU 및 류코보린과 함께 사용하는 치료 요법 포함); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 콤브레스타틴; 류코보린 (LV); 옥살리플라틴 (옥살리플라틴 치료 요법 (FOLFOX) 포함); 라파티닙 (타이커브(Tykerb)^®); 세포 증식을 감소시키는 RKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR (예를 들어, 에를로티닙 (타르세바^®) 및 VEGF-A의 억제제 및 상기의 것 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.

또한, 상기 정의에는 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬 작용제, 예컨대 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예를 들어 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)^® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 파레스톤(FARESTON)ㆍ토레미펜; 부신에서의 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(MEGASE)^® 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(AROMASIN)^® 엑세메스탄, 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르(RIVISOR)^® 보로졸, 페마라(FEMARA)^® 레트로졸, 및 아리미덱스(ARIMIDEX)^® 아나스트로졸; 및 항-안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상 세포 증식과 관련된 신호전달 경로에서의 유전자 발현을 억제하는 것, 예컨대 예를 들어 PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임(ANGIOZYME)^® 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(ALLOVECTIN)^® 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)^® 백신, 및 박시드(VAXID)^® 백신; 프로류킨(PROLEUKIN)^® rIL-2; 루르토테칸(LURTOTECAN)^® 토포이소머라제 1 억제제; 아바렐릭스(ABARELIX)^® rmRH; 및 이들 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다.

용어 "시토카인"은 세포간 매개자로서 또 다른 세포에 대해 작용하는, 한 세포 집단에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반 용어이다. 이러한 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 통상적인 폴리펩티드 호르몬이다. 시토카인에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체화 호르몬 (LH); 표피 성장 인자; 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 뮬러-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-관련 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-알파; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF), 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론, 예컨대 인터페론-알파, -베타 및 -감마 콜로니 자극 인자 (CSF), 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자, 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 다른 폴리펩티드 인자, 예를 들어 LIF 및 kit 리간드 (KL)가 포함된다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.

"성장 억제제"가 본원에 사용되는 경우, 이것은 세포의 성장을 시험관내 및/또는 생체내 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 억제제는 S기에서 세포의 백분율을 유의하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예는 세포 주기 진행을 (S기 이외의 다른 단계에) 차단하는 작용제, 예컨대 G1 정지 및 M기 정지를 유도하는 작용제를 포함한다. 전통적인 M기 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁솔(TAXOL)^®, 및 토포 II 억제제, 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들어 DNA 알킬화제, 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 ara-C는 S기 정지로까지 이어질 수도 있다. 추가의 정보는 문헌 [The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995)] (특히 p. 13)에서 찾아볼 수 있다.

본원에 사용된 용어 "전구약물"은 모 약물에 비해 종양 세포에 덜 세포독성이고, 효소에 의해 활성화되거나 전환되어 더욱 활성인 모 형태가 될 수 있는, 제약 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들어, 문헌 [Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) 및 Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)]을 참조한다. 본 발명의 전구약물은 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 술페이트-함유 전구약물, 펩티드-함유 전구약물, D-아미노산-변형된 전구약물, 글리코실화 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물 또는 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로시토신, 및 더욱 활성이고 세포독성이 없는 약물로 전환될 수 있는 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 사용하기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는 상기 기재된 화학요법제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"방사선 요법"은, 정상적으로 기능하거나 세포를 파괴시키는 능력이 완전히 제한되도록 세포에 대한 충분한 손상을 유도시키기 위해 지정된 감마선 또는 베타선을 사용하는 것을 나타낸다. 당업계에는 투여량 및 치료의 지속시간을 결정하는 수많은 방법이 공지되어 있음을 이해할 것이다. 전형적인 치료는 1회 투여로 제공되며, 전형적인 투여량은 하루당 10 내지 200 유닛 (Gray)의 범위이다.

"감소시키거나 억제한다"란 바람직하게는 20% 이상, 보다 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 75%, 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 전반적인 감소를 유발하는 능력을 나타낸다. 감소시키거나 억제한다는 것은 치료할 장애의 증상, 전이 또는 미세전이의 존재 또는 크기, 원발성 종양의 크기, 휴면 종양의 존재 또는 크기, 또는 혈관신생 장애에서 혈관의 크기 또는 수를 지칭할 수 있다.

용어 "정맥내 주입"은 약물을 대략 5분 초과, 바람직하게는 대략 30 내지 90분의 시간에 걸쳐 동물 또는 인간 환자의 정맥으로 도입하는 것을 지칭하지만, 본 발명에 따르면 정맥내 주입은 이와 달리 10시간 이하 동안 투여된다.

용어 "정맥내 볼루스" 또는 "정맥내 투입"은 신체가 약물을 대략 15분 이하, 바람직하게는 5분 이하로 수용하도록 동물 또는 인간의 정맥내로 약물을 투여하는 것을 지칭한다.

용어 "피하 투여"는 약물 용기로부터 비교적 느린 속도의 지속적인 전달에 의해 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로, 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내로 약물이 도입되는 것을 지칭한다. 포켓은 피부를 기저 조직으로부터 핀칭 또는 드로잉하여 생성될 수 있다.

용어 "피하 주입"은 30분 이하 또는 90분 이하를 포함하나 이에 제한되지 않는 기간의 시간 동안 약물 용기로부터 비교적 느린 속도의 지속적인 전달에 의해 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로, 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내로 약물이 도입되는 것을 지칭한다. 임의로, 주입은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽에 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있는데, 이러한 펌프는 예정량의 약물을 소정 기간의 시간, 예컨대 30분, 90분, 또는 치료 요법의 길이에 걸친 기간 동안 전달한다.

용어 "피하 볼루스"는 동물 또는 인간 환자의 피부 아래쪽으로의 약물 투여를 지칭하고, 여기서 볼루스 약물 전달은 바람직하게는 대략 15분 미만, 보다 바람직하게는 5분 미만, 가장 바람직하게는 60초 미만이다. 투여는 바람직하게는 피부와 기저 조직 사이의 포켓 내에서 이루어지고, 포켓은 예를 들어 피부를 기저 조직으로부터 핀칭 또는 드로잉하여 생성된다.

"장애"는 항체를 이용한 치료로부터 이익을 얻게 될 임의의 상태이다. 이는 만성 및 급성 장애 또는 질환 (포유동물이 당해 장애에 걸리기 쉬운 병적 상태 포함)을 포함한다. 본원에서 치료할 장애의 비제한적인 예는 암; 양성 및 악성 종양; 백혈병 및 림프성 악성종양; 뉴런, 신경교, 성상세포, 시상하부 및 다른 선상, 대식세포, 상피, 기질 및 포배강 장애; 및 염증성, 혈관신생 및 면역 장애를 포함한다.

용어 "치료 유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애의 치료에 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 치료 유효량의 약물은 암 세포의 수를 감소시키고/거나, 종양 크기를 감소시키고/거나, 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 정지시키는 것), 종양 전이를 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 정지시키는 것), 종양 성장을 어느 정도 억제하고/거나 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있다. 약물은, 존재하는 암 세포의 성장을 방지하고/거나 존재하는 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 생체내 효능은 예를 들어 생존 지속기간, 무진행 생존 (PFS)의 지속기간, 무진행 생존 (PFS)의 연장, 반응률 (RR), 반응의 지속기간, 및/또는 삶의 질을 평가하여 측정될 수 있다.

"치료"는 이미 장애를 갖는 대상을 포함하는 치료를 필요로 하는 대상을 위한 치료적 치료를 지칭한다.

"예방적 또는 방지적 치료"는 장애가 방지되도록 하는 것을 지칭한다.

본원에 사용된 경우의 용어 "표지"는 폴리펩티드와 직접적으로 또는 간접적으로 접합되는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지는 그 자체로 검출가능할 수도 있고 (예를 들어, 방사성동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우에는 기질 화합물 또는 조성물의 검출가능한 화학적 변경을 촉매할 수도 있다.

II. 항-VEGF 항체 및 길항제

난소암을 치료하기 위한 항-VEGF 길항제의 용도가 본원에 제공된다. 혈관신생은 고형 종양의 침습 및 전이로 이어지는 주요한 과정 중 하나이다. 혈관신생-신호전달 경로는 국부 미세환경으로 종양 세포로부터의 혈관신생 프로모터, 예컨대 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)가 방출되어 일으킬 수 있다. 혈관신생이 난소암 질환 예후 및 아마도 진행 및 예후에서 소정의 역할을 한다는 증거가 축적되고 있다. 예를 들어, 문헌 [Yoneda J, et al., Expression of angiogenesis-related genes and progression of human ovarian carcinomas in nude mice. J Natl Cancer Inst 90:447-54, 1998; Nakanishi Y, et al. The expression of vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta associates with angiogenesis in epithelial ovarian cancer. Int J Gynecol Pathol 16:256-62, 1997; Gasparini G, et al. Prognostic and predictive value of tumour angiogenesis in ovarian carcinomas. Int J Cancer 69:205-11, 1996; Hollingsworth HC, et al.,. Tumor angiogenesis in advanced stage ovarian carcinoma. Am J Pathol 147:33-41, 1995; Paley PJ, et al. Vascular endothelial growth factor expression in early stage ovarian carcinoma. Cancer 80:98-106, 1997; Alvarez AA, et al., The prognostic significance of angiogenesis in epithelial ovarian carcinoma. Clin Cancer Res 5:587-91, 1999; Gasparini G. The rationale and future potential of angiogenesis inhibitors in neoplasia. Drugs 58:17-38, 1999; van Hinsbergh VW, et al.,. Angiogenesis and anti-angiogenesis: perspectives for the treatment of solid tumors. Ann Oncol 10 Suppl 4:60-3, 1999; Malonne H, et al.,. Mechanisms of tumor angiogenesis and therapeutic implications: angiogenesis inhibitors. Clin Exp Metastasis 17:1-14, 1999; Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. N Eng J Med 285:1182-6, 1971; Kim KJ, et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo. Nature 362:841-4, 1993; 및 Luo JC, et al., Differential inhibition of fluid accumulation and tumor growth in two mouse ascites tumors by an anti vascular endothelial growth factor/permeability factor neutralizing antibody. Cancer Res 58:2594-600, 1998]을 참조한다.

(i) VEGF 항원

항체 생성에 사용될 VEGF 항원은, 예를 들어 VEGF₁₆₅ 분자 및 또한 원하는 에피토프를 함유하는 VEGF의 다른 이소형 또는 그의 단편일 수 있다. 본 발명의 항-VEGF 항체 생성에 유용한 다른 형태의 VEGF는 당업자에게 명백할 것이다.

인간 VEGF는 소 VEGF cDNA를 혼성화 프로브로 사용하여 인간 세포로부터 제조된 cDNA 라이브러리를 처음 스크리닝하여 수득한다. 문헌 [Leung et al. (1989) Science, 246:1306]. 이로써 확인된 cDNA 중 하나가 소 VEGF와 95% 초과의 상동성을 갖는 165-아미노산 단백질을 코딩하며, 이러한 165-아미노산 단백질은 전형적으로 인간 VEGF (hVEGF) 또는 VEGF₁₆₅라 지칭된다. 인간 VEGF의 분열촉진 활성은 포유동물 숙주 세포에서의 인간 VEGF cDNA 발현으로 확인되었다. 인간 VEGF cDNA로 형질감염된 세포에 의해 조건화된 배지는 모세관 내피 세포의 증식을 촉진시켰지만, 대조군 세포는 그렇지 않았다. 문헌 [Leung et al. (1989) Science, 상기 문헌].

후속 치료 용도를 위해 혈관 내피 세포 성장 인자가 천연 공급원으로부터 단리 및 정제될 수 있었지만, 여포 세포 내의 비교적 낮은 농도의 단백질 및 VEGF를 회수하는데 드는 노력과 비용 둘 다의 면에서 높은 비용은 상업상 이용할 수 없는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 재조합 DNA 기술을 통해 VEGF를 클로닝하고 발현시키기 위한 추가의 노력이 있어 왔다. (예를 들어, 문헌 [Ferrara, Laboratory Investigation 72:615-618 (1995)], 및 여기에 인용된 참고문헌 참조).

VEGF는 여러 조직에서 대안적인 RNA 스플라이싱으로 인한 다양한 동종이량체 형태 (단랑체 당 121, 145, 165, 189 및 206개 아미노산)로서 발현된다. VEGF₁₂₁은 헤파린과 결합하지 않는 가용성 미토겐이고, VEGF가 보다 긴 형태를 가질수록 점진적으로 더 높은 친화도로 헤파린과 결합한다. VEGF의 헤파린 결합 형태는 플라스민에 의해 카르복시 말단에서 절단되어 확산가능한 형태(들)의 VEGF를 방출시킬 수 있다. 플라스민 절단 후에 확인된 카르복시 말단 펩티드의 아미노산 서열분석은 Arg₁₁₀-Ala₁₁₁이다. 동종이량체로서 단리된 아미노 말단 "코어" 단백질인 VEGF (1-110)은 중화 모노클로날 항체 (예컨대, 4.6.1 및 3.2E3.1.1이라 지칭되는 항체) 및 가용성 형태의 VEGF 수용체에 무손상 VEGF₁₆₅ 동종이량체와 유사한 친화도로 결합한다.

태반 성장 인자 (PIGF), VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 및 VEGF-E를 포함하는, VEGF에 구조적으로 관련된 여러 분자가 또한 확인되었다. 문헌 [Ferrara and Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev., 상기 문헌; Ogawa et al. J. Biological Chem. 273:31273-31281(1998); Meyer et al. EMBO J., 18:363-374(1999)]. 수용체 티로신 키나제, Flt-4 (VEGFR-3)는 VEGF-C 및 VEGF-D에 대한 수용체로 확인되었다. 문헌 [Joukov et al. EMBO. J. 15:1751(1996); Lee et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1988-1992(1996); Achen et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:548-553]. VEGF-C는 림프 혈관신생의 조절에 관여하는 것을 밝혀졌다. 문헌 [Jeltsch et al. Science 276:1423-1425(1997)].

(ii) 항-VEGF 항체

난소암을 치료하기 위한 본 발명의 방법에 유용한 항-VEGF 항체는 VEGF에 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하고 VEGF의 생물학적 활성을 감소 또는 억제시킬 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 항-VEGF 항체는 일반적으로 다른 VEGF 동족체, 예컨대 VEGF-B 또는 VEGF-C에도 결합하지 않을 것이고, 다른 성장 인자, 예컨대 PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생성된 모노클로날 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체; 문헌 [Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 생성된 재조합 인간화 항-VEGF 모노클로날 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 "rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴^®"이라고도 공지된 "베바시주맙 (BV)"이다. 아바스틴^®은 특정 국가에서 상업적으로 입수가능하다. 이것은 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역, 및 인간 VEGF의 그의 수용체에 대한 결합을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 모노클로날 항체 A.4.6.1로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 베바시주맙의 아미노산 서열의 대략 93% (대다수의 프레임워크 영역 포함)는 인간 IgG1로부터 유래되고, 서열의 약 7%는 뮤린 항체 A4.6.1로부터 유래된다.

베바시주맙 및 다른 인간화 항-VEGF 항체는 2005년 2월 26일에 허여된 미국 특허 번호 6,884,879에 추가로 기재되어 있다. 추가의 항체는 PCT 공보 번호 WO2005/012359, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 60/991,302에 기재되어 있는 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체 (예를 들어, G6-31, B20-4.1)를 포함하며, 이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 추가의 항체에 대해 미국 특허 번호 7,060,269, 6,582,959, 6,703,020; 6,054,297; WO98/45332; WO 96/30046; WO94/10202; EP 0666868B1; 미국 특허 출원 공보 번호 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409, 및 20050112126; 및 문헌 [Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]을 참조한다. 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하거나, 또는 이와 달리 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 것을 포함한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:

및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역:

을 갖는다.

본 발명에 따른 "G6 시리즈 항체"는 PCT 공보 번호 WO2005/012359 (그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)의 도 7, 24-26 및 34-35 중 어느 하나에 따른 G6 항체 또는 G6-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공보 번호 WO2005/044853을 참조하고, 그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, G6 시리즈 항체는 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "B20 시리즈 항체"는 PCT 공보 번호 WO2005/012359 (그의 전체 개시내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)의 도 27-29 중 어느 하나에 따른 B20 항체 또는 B20-유래 항체의 서열로부터 유래된 항-VEGF 항체이다. 또한, PCT 공보 번호 WO2005/044853, 및 미국 특허 출원 60/991,302 (이들 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함됨)를 참조한다. 한 실시양태에서, B20 시리즈 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합한다.

본 발명에 따른 "기능적 에피토프"는 항체의 결합에 강력하게 기여하는 항원의 아미노산 잔기를 지칭한다. 이와 같이 강력하게 기여하는 항원 잔기 중 어느 하나를 돌연변이시키면 (예를 들어, 알라닌에 의한 야생형 VEGF의 돌연변이 또는 상동체 돌연변이) 항체의 결합성이 파괴되어 항체의 상대적인 친화도 비 (IC50 돌연변이체 VEGF/IC50 야생형 VEGF)는 5를 초과할 것이다 (WO2005/012359의 실시예 2 참조). 한 실시양태에서, 상대적 친화도 비는 용액 결합 파지 디스플레이 ELISA로 결정된다. 간략하게, 96웰 맥시소르프(Maxisorp) 이뮤노플레이트 (넌크)를 4℃에서 PBS 중 2 μg/ml 농도의 Fab 형태의 시험할 항체로 밤새 코팅한 후에 2시간 동안 실온에서 PBS, 0.5% BSA 및 0.05% 트윈20 (PBT)으로 차단한다. PBT 중 hVEGF 알라닌 점 돌연변이체 (잔기 8-109 형태) 또는 야생형 hVEGF (8-109)를 디스플레이하는 파지의 연속 희석액을 우선 실온에서 15분 동안 Fab-코팅된 플레이트에서 인큐베이션하고, 상기 플레이트를 PBS, 0.05% 트윈20 (PBST)으로 세척하였다. 결합된 파지는 PBT 중에서 1:5000으로 희석된 항-M13 모노클로날 항체 양고추냉이 퍼옥시다제 (아머샴 파마시아(Amersham Pharmacia)) 접합체로 검출하고, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (TMB, 키르케가드 ＆ 페리 랩스(Kirkegaard ＆ Perry Labs), 메릴랜드주 게이더스버그) 기질로 대략 5분 동안 발색시키며, 1.0 M H3PO4로 켄칭시킨 후에 450 nm에서 분광광도계로 판독한다. IC50 값의 비 (IC50,ala/IC50,wt)는 결합 친화도에 있어서의 감소 배수 (상대적 결합 친화도)를 나타낸다.

(iii) VEGF 수용체 분자

2종의 VEGF 수용체, Flt-1 (VEGFR-1라고도 함) 및 KDR (VEGFR-2라고도 함)이 확인되었다. 문헌 [Shibuya et al. (1990) Oncogene 8:519-527; de Vries et al. (1992) Science 255:989-991; Terman et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187:1579-1586]. 각각의 VEGF 패밀리 구성원에 대한 각각의 수용체의 특이성은 다양하지만, VEGF-A는 Flt-1 및 KDR 둘 다에 결합한다. 뉴로필린-1은 헤파린-결합 VEGF 이소형에 결합할 수 있는 선택적 VEGF 수용체인 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Soker et al. (1998) Cell 92:735-45]). Flt-I 및 KDR 둘 다 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리에 속한다. RTK는 다양한 생물학적 활성을 갖는 막횡단 수용체의 거대 패밀리를 포함한다. 현재, 적어도 열아홉 (19) 종의 별개의 RTK 서브패밀리가 확인되어 있다. 수용체 티로신 키나제 (RTK) 패밀리는 다양한 세포 유형의 성장 및 분화에 중요한 수용체를 포함한다 (문헌 [Yarden and Ullrich (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:433-478; Ullrich and Schlessinger (1990) Cell 61:243-254]). RTK의 내인성 기능은 리간드 결합시에 활성화되며, 이로써 수용체 및 여러 세포 기질의 인산화 및 이후에 다양한 세포 반응이 일어난다 (문헌 [Ullrich & Schlessinger (1990) Cell 61:203-212]). 따라서, 수용체 티로신 키나제 매개된 신호 전달은 특정 성장 인자 (리간드)와의 세포외 상호작용에 의해 개시되고, 전형적으로는 이후에 수용체 이량체화, 내인성 단백질 티로신 키나제 활성의 자극 및 수용체 트랜스-인산화가 일어난다. 이에 따라 세포내 신호 전달 분자를 위한 결합 부위가 생성되고, 적절한 세포 반응 (예를 들어, 세포 분열, 분화, 대사 효과, 세포외 미세환경의 변화)을 용이하게 하는 세포질 신호전달 분자의 스펙트럼을 갖는 복합체가 형성된다. 문헌 [Schlessinger and Ullrich (1992) Neuron 9:1-20]을 참조한다. 구조적으로, Flt-1 및 KDR 둘 다 세포외 도메인 내에 7개의 이뮤노글로불린-유사 도메인, 단일 막횡단 영역, 및 키나제-삽입 도메인이 개재된 컨센서스 티로신 키나제 서열을 갖는다. 문헌 [Matthews et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9026-9030; Terman et al. (1991) Oncogene 6:1677-1683].

VEGF에 특이적으로 결합하는 VEGF 수용체 분자 또는 그의 단편은 본 발명의 방법에 사용되어 VEGF 단백질에 결합하고 이를 봉쇄시킴으로써 이것의 신호전달을 막을 수 있다. 특정 실시양태에서, VEGF 수용체 분자 또는 그의 VEGF 결합 단편은 가용성 형태, 예컨대 sFlt-1이다. 가용성 형태의 수용체는 VEGF와 결합함으로써 VEGF 단백질의 생물학적 활성에 대한 억제 효과를 발휘하여 VEGF 단백질이 표적 세포 표면 상에 존재하는 그의 천연 수용체와 결합하는 것을 방해한다. 또한, VEGF 수용체 융합 단백질이 포함되는데, 이것의 예는 아래에 기재되어 있다.

키메라 VEGF 수용체 단백질은 적어도 2종의 상이한 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 수용체 분자로서, 이 중 적어도 1종은 VEGF와 결합하여 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 VEGF 수용체 단백질 (예를 들어, flt-1 또는 KDR 수용체)이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 VEGF 수용체 단백질은 오직 2종의 상이한 VEGF 수용체 분자로부터 유래된 아미노산 서열로 이루어지지만, flt-1 및/또는 KDR 수용체의 세포외 리간드 결합 영역으로부터의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개의 모든 Ig-유사 도메인을 포함하는 아미노산 서열이 다른 무관한 단백질로부터의 아미노산 서열, 예를 들어 이뮤노글로불린 서열에 연결될 수 있다. Ig-유사 도메인과 조합되는 다른 아미노산 서열은 당업자에게 매우 명백할 것이다. 키메라 VEGF 수용체 단백질의 예는, 예를 들어 가용성 Flt-1/Fc, KDR/Fc, 또는 FLt-1/KDR/Fc (VEGF 트랩으로서 공지되기도 함)를 포함한다. (예를 들어 PCT 출원 공보 번호 WO97/44453 참조).

본 발명의 가용성 VEGF 수용체 단백질 또는 키메라 VEGF 수용체 단백질은 막횡단 도메인을 통해 세포의 표면에 고정되지 않는 VEGF 수용체 단백질을 포함한다. 이와 같이 가용성 형태의 VEGF 수용체, 예를 들어 키메라 수용체 단백질은 VEGF와 결합하여 이것을 불활성화시키면서도 막횡단 도메인을 포함하지 않기 때문에 일반적으로는 해당 분자가 발현되는 세포의 세포막과 회합되지 않는다.

III. 항-VEGF 항체의 치료 용도

본 발명은 종양 성장을 지지하는 영양소 제공에 필요한 종양 혈관의 발달 억제를 목표로 하는 신규 암 치료 전략인 항혈관신생 요법을 포함한다. 혈관신생이 원발성 종양 성장 및 전이 둘 다에 관여하기 때문에, 본 발명이 제공하는 항혈관신생 치료는 원발성 부위에서의 종양의 신생물성 성장을 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 또한 이차 부위에서의 종양의 전이를 예방할 수도 있고, 따라서 다른 치료제에 의한 종양의 공격을 허용한다. 또한, 난소암은 종양 성장 및 확산과 관련된 단백질인 순환 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)의 높은 수준과 관련된다. 난소암을 갖는 여성의 연구는 VEGF의 높은 수준 및 보다 불량한 예후 사이의 상관관계를 보여주었다 (문헌 [Alvarez A et al. 1999 Clin Cancer Res.; 5:587-591; Yamamoto S et al. 1997 Br J Cancer; 76:1221-1227]).

구체적으로, 한 실시양태에서, 본 발명은 (임의로 새로 진단받은), 이전에 치료받지 않은 난소암으로 진단받은 환자에게 적어도 화학요법을 유효량의 항-VEGF 항체의 투여와 공동으로 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 수행하는 치료 요법을 행하는 것을 포함하는, (임의로 새로 진단받은), 이전에 치료받지 않은 난소암으로 진단받은 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 환자는 III기 (최적 아래로 및 육안상 최적으로 용적축소됨) 또는 IV기의 상피 난소 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는다. 다른 실시양태에서, 환자는 I기 및 IIa기 (등급 3 또는 오직 투명 세포 암종) 또는 IIb-IV기의 상피 난소, 난관 또는 원발성 복막 암을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 재발성 또는 이전에 치료된 난소암으로 진단받은 환자에게 적어도 화학요법을 유효량의 항-VEGF 항체의 투여와 공동으로 조합하고 이어서 항-VEGF 유지 요법을 수행하는 치료 요법을 행하는 것을 포함하는, 재발성 또는 이전에 치료된 난소암으로 진단받은 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

조합 요법

본 발명은 적어도 1종의 VEGF-특이적 길항제와 1종 이상의 추가의 항암 요법의 조합에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 것을 특징으로 한다. 항암 요법의 예는 수술, 방사선 요법 (방사선요법), 생물요법, 면역요법, 화학요법, 또는 이들 요법의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 추가로, 세포독성제, 항혈관신생제 및 항증식제는 VEGF-특이적 길항제와 조합하여 사용될 수 있다.

특정 측면에서, 본 발명은 이전에 치료받지 않은 난소암 또는 재발성 난소암에 걸리기 쉽거나 또는 이전에 치료받지 않은 난소암 또는 재발성 난소암으로 진단받은 환자에게 유효량의 항-VEGF 항체 및 1종 이상의 화학요법제를 투여하여 난소암을 치료하는 방법을 제공한다. 다양한 화학요법제가 본 발명의 조합 치료 방법에서 사용될 수 있다. 고려되는 화학요법제의 예시적이고 비제한적인 목록은 본원에서 "정의" 하에 제공되거나 본원에 기재되어 있다.

한 예에서, 본 발명은 VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 화학요법제 (예를 들어, 칵테일) 또는 이들의 임의의 조합의 사용을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 화학요법제는 예를 들어 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 파클리탁셀 단백질-결합 입자 (예를 들어, 아브락산^®), 백금 유사체, 카르보플라틴, 겜시타빈 또는 이들의 조합이다. 한 실시양태에서, 화학요법제는 카르보플라틴 및 파클리탁셀 또는 도세탁셀이다. 또 다른 실시양태에서, 화학요법제는 카르보플라틴 및 겜시타빈이다. 조합 투여는 별개의 제제 또는 단일 제약 제제를 사용한 동시 투여 및 임의의 순서로의 연속 투여를 포함하고, 여기서 바람직하게는 둘 다 (또는 모두) 활성제가 이들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 기간이 존재하고, 이는 VEGF 특이적 길항제를 사용하는 유지 요법으로 이어진다 (예를 들어, 도 1, 도 2, 또는 도 8 또는 도 11에 개략된 바와 같음). 이러한 화학요법제에 대한 제조 및 투여 스케줄은 제조업체의 지침에 따라 또는 숙련된 진료의가 경험적으로 결정하는 바에 따라 이용될 수 있다. 화학요법을 위한 제제 및 투여 스케줄은 또한 문헌 [Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md. (1992)]에도 기재되어 있다. 화학요법제는 VEGF-특이적 길항제의 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있거나, 또는 VEGF-특이적 길항제와 동시에 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 투여 스케줄 및 양은 도 1, 도 2 또는 도 8 또는 도 11에 열거된 바와 같다.

일부 다른 측면에서, 본 발명의 항체와의 조합 종양 요법에 유용한 다른 치료제는 종양 성장에 관여하는 다른 인자, 예컨대 EGFR, ErbB2 (Her2로서 공지되기도 함), ErbB3, ErbB4 또는 TNF의 길항제를 포함한다. 때때로, 1종 이상의 시토카인을 환자에게 투여하는 것이 유익할 수도 있다. 한 실시양태에서, VEGF 항체는 성장 억제제와 공동 투여된다. 예를 들어, 성장 억제제가 먼저 투여된 후에 VEGF 항체가 투여될 수 있다. 그러나, 동시 투여 또는 VEGF 항체의 우선 투여 역시 고려된다. 성장 억제제의 적합한 투여량은 현재 사용되고 있는 양이며, 성장 억제제 및 항-VEGF 항체의 조합 작용 (상승작용)으로 인해 감소될 수 있다.

본원의 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 악영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는, 1종 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, 하나의 제제 중에 EGFR, VEGF (예를 들어, VEGF 상의 상이한 에피토프에 결합하는 항체), VEGFR 또는 ErbB2 (예를 들어, 헤르셉틴^®) 또는 종양학 적응증에 사용되는 다른 항체에 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은 세포독성제, 시토카인, 성장 억제제 및/또는 소분자 VEGFR 길항제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제 (예를 들어, 항-VEGF 항체)는 난소암을 위한 치료이다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제 (예를 들어, 항-VEGF 항체)는 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 조합된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제 (예를 들어, 항-VEGF 항체)는 시스플라틴 및 파클리탁셀과 조합된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제 (예를 들어, 항-VEGF 항체)는 카르보플라틴 및 도세탁셀과 조합된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다. 특정 실시양태에서, VEGF 길항제 (예를 들어, 항-VEGF 항체)는 카르보플라틴 및 겜시타빈과 조합된 후에 항-VEGF 유지 요법으로 이어진다.

특정 측면에서, 본 발명의 항체와의 조합 암 요법에 유용한 다른 치료제는 다른 항혈관신생제를 포함한다. 많은 항혈관신생제가 당업계에서 확인되었고 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Carmeliet and Jain (2000)])에 열거되어 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 또 다른 VEGF 길항제 또는 VEGF 수용체 길항제, 예컨대 VEGF 변이체, 가용성 VEGF 수용체 단편, VEGF 또는 VEGFR을 차단시킬 수 있는 압타머, 중화 항-VEGFR 항체, VEGFR 티로신 키나제의 저분자량 억제제, 및 이들의 임의의 조합물과 조합되어 사용된다. 대안적으로 또는 추가로, 2종 이상의 항-VEGF 항체가 대상체에게 공동 투여될 수 있다.

질환을 예방 또는 치료하는데 적절한 VEGF-특이적 길항제의 투여량은 상기 규정된 바와 같은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, VEGF-특이적 길항제가 예방 목적으로 투여되는지 아니면 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 VEGF-특이적 길항제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 좌우될 것이다. VEGF-특이적 길항제는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여된다. 조합 치료 요법에서는, 본 발명의 VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 항암 치료제가 치료상 유효한 또는 상승작용적 양으로 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, 치료 유효량은 VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제의 공동 투여 또는 본 발명의 조성물의 투여로 인해 상기 기재된 바와 같이 암이 감소 또는 억제되는 양이다. 치료 상승작용적 양은 특정 질환과 관련된 상태 또는 증상을 상승작용적으로 또는 유의하게 감소 또는 제거하거나 또는 무진행 생존을 증가시키는데 필요한, VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제의 양이다.

VEGF-특이적 길항제 및 1종 이상의 다른 치료제는 종양, 휴면 종양 또는 미세전이의 발생 또는 재발을 감소시키거나 없애는데 충분한 양으로 충분한 시간 동안 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. VEGF-특이적 길항제는 종양 재발의 가능성을 예방 또는 감소시키거나 또는 환자의 무진행 생존을 증가시키기 위한 유지 요법으로 투여될 수 있다.

당업자에게 이해되는 바와 같이, 화학요법제 또는 다른 항암제의 적절한 용량은 일반적으로 예를 들어 화학요법제가 단독으로 또는 다른 화학요법제와 조합되어 투여되는 임상 요법에서 이미 사용된 용량 정도일 것이다. 치료할 상태에 따라 투여량에서 변동이 발생할 것이다. 치료를 관리하는 전문의는 개별 대상체에게 적절한 용량을 결정할 수 있을 것이다.

상기 치료 요법 이외에도, 환자에게 방사선 요법을 수행할 수 있다.

특정 실시양태에서, 투여된 VEGF 항체는 무손상 네이키드 항체이다. 그러나, VEGF 항체는 세포독성제와 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합된 항체 및/또는 이와 결합되는 항원은 세포에 의해 내재화되어, 이와 결합되는 암 세포를 사멸시키는 데에 있어서 접합체의 치료 효능을 증가시킨다. 한 실시양태에서, 세포독성제는 암 세포 내의 핵산을 표적화하거나 이를 방해한다. 이러한 세포독성제의 예는 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 리보뉴클라아제 및 DNA 엔도뉴클레아제를 포함한다.

본 발명은 또한 무진행 생존 시간을 증가시키거나, 난소암을 갖는 인간 대상체의 암 재발 위험을 감소시키거나 또는 상기 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체를 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공함으로써 난소암을 갖는 인간 대상체를 지시하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 적어도 1종의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 2종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 치료를 수행하기 위한 지침을 제공하는 것을 더 포함한다. 항-VEGF 항체를 사용하는 치료는 화학요법제(들)를 사용하는 치료와 공동으로 이루어질 수도 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 상기 지시 방법으로 지시되는 바에 따라 치료된다. 화학요법제의 존재 또는 부재 하에서의 항-VEGF 항체의 투여에 의한 난소암의 치료는, 암 재발 또는 사망시까지 계속될 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 환자는 화학요법제(들)와의 공동 요법 후에 적어도 16 주기의 항-VEGF 요법으로 치료된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 환자는 화학요법제(들)와의 공동 요법 후에 적어도 12 주기의 항-VEGF 요법으로 치료된다.

본 발명은 인간 대상체에서의 난소암의 치료를 위한 항-VEGF 항체의 투여를 홍보하는 것을 포함하는 홍보 방법을 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 적어도 1종의 화학요법제의 투여에 이어 항-VEGF 유지 요법을 홍보하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 2종 이상의 화학요법제의 투여에 이어 항-VEGF 유지 요법을 홍보하는 것을 더 포함한다. 항-VEGF 항체의 투여는 화학요법제(들)의 투여와 공동으로 이루어질 수 있다. 홍보는 이용가능한 임의의 수단에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 홍보는 항-VEGF 항체의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 홍보는 또한 화학요법제(들)의 시판 제제가 동봉된 포장 삽입물에 의해 이루어질 수도 있다. 홍보는 의사 또는 건강 관리자에 대한 서면 또는 구두 커뮤니케이션으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 홍보는 항-VEGF 항체를 사용한 난소암 요법을 수행하기 위한 지침을 제공하는 포장 삽입물에 의해 이루어진다. 추가 실시양태에서, 포장 삽입물은 실시예 1 또는 실시예 2 또는 실시예 3의 결과를 일부 또는 전부 포함한다. 일부 실시양태에서, 홍보는 화학요법의 존재 또는 부재 하에 항-VEGF 항체를 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

본 발명은 인간 대상체에서 난소암을 치료하여 대상체의 무진행 생존 시간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체를 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항-VEGF 항체와 조합하여 사용하기 위한 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제와 함께 또는 화학요법제 없이 항-VEGF 항체에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항-VEGF 항체와 조합하여 사용하기 위한 2종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제와 함께 또는 화학요법제 없이 항-VEGF 항체에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

또한, 인간 대상체에서 난소암을 치료하여 대상체의 무진행 생존 시간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체와 조합된 화학요법제를 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 조합에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다. 또한, 인간 대상체에서 난소암을 치료하여 대상체의 무진행 생존 시간을 증가시키거나, 대상체의 암 재발 가능성을 감소시키거나 또는 대상체의 생존 가능성을 증가시키기 위해 항-VEGF 항체와 조합된 2종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 마케팅하는 것을 포함하는 영업 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 마케팅은 화학요법제 및 항-VEGF 항체의 조합에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 대상체의 치료로 이어진다.

IV. 투여량 및 지속기간

VEGF-특이적 길항제 조성물은 양호한 의료 관행과 일치하는 방식으로 제제화되어 투여량에 따라 분배되고 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려해야 하는 요인에는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 대상체, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의사에게 공지된 다른 요인들이 포함된다. 투여될 VEGF-특이적 길항제의 "치료 유효량"은 이러한 고려사항에 따라 달라질 것이고, 암을 예방하거나 호전시키거나 치료하거나 안정화시키거나, 진행까지의 시간 (무진행 생존의 지속기간)을 늘리거나, 또는 종양, 휴면 종양 또는 미세전이물을 치료하거나 또는 이것의 발생 또는 재발을 예방하는데 필요한 최소량이다. VEGF-특이적 길항제는 암 또는 암 발생 위험을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 함께 제제화될 필요는 없지만 임의로는 이것과 함께 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 VEGF-특이적 길항제의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 요인에 따라 달라진다. 일반적으로, 이들은 이전에 사용되던 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나, 이전에 사용되던 투여량의 약 1 내지 99%로 사용된다.

질환의 유형 및 중증도에 따라서, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여이든지 아니면 연속 주입이든지에 관계없이, VEGF-특이적 길항제 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg (예를 들어 0.1-20 mg/kg)이 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 상기 언급된 요인에 따라, 전형적인 1일 투여량은 약 1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 특히 바람직한 투여량은 예를 들어 5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 및 15 mg/kg을 포함한다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 치료는 상태에 따라서 상기 기재되거나 당업계에 공지된 방법으로 측정시에 암이 치료될 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 한 예에서, VEGF-특이적 길항제가 항체인 경우, 본 발명의 항체는 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 용량 범위 (5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg를 포함하나 이에 제한되지 않음)로 매주, 2주마다 또는 3주마다 1회 투여된다. 본 발명의 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 다른 실시양태에서, 이러한 투여 요법은 이전에 치료받지 않은 난소암을 치료하기 위한 일차 요법으로 화학치료 요법 (1종 이상의 화학요법제(들)를 포함하나 이에 제한되지 않음)과 조합되어 사용된 후에 유지 요법으로 이어진다. 다른 실시양태에서, 이러한 투여 요법은 재발성 난소암을 치료하기 위한 이차 요법으로서 화학치료 요법 (1종 이상의 화학요법제(들)를 포함하나 이에 제한되지 않음)과 조합되어 사용된 후에 유지 요법으로 이어진다. 적합한 투여량에 대한 추가의 정보는 하기 실시에에서 제공된다.

요법의 지속기간은 의학적으로 나타나는 한 계속되거나 바람직한 치료 효과 (예를 들어, 본원에 기재된 효과)가 달성될 때까지 계속될 것이다. 특정 실시양태에서, VEGF-특이적 길항제 요법은 1개월, 2개월, 4개월, 6개월, 8개월, 10개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 또는 최대로는 대상체의 수명까지의 기간 동안 계속된다. 특정 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 화학요법제와의 공동 항-VEGF 치료 후에 적어도 16 주기 동안 계속된다. 다른 실시양태에서, 항-VEGF 요법은 화학요법제와의 공동 항-VEGF 치료 후에 적어도 12 주기 동안 계속된다.

본 발명의 VEGF-특이적 길항제는 공지된 방법에 따라서, 예컨대 볼루스로서 정맥내 투여 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활액막내, 경막내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해 대상체, 예를 들어 인간 환자에게 투여한다. 광범위한 부작용 또는 독성이 VEGF 길항작용과 연관되는 경우에는 국부 투여가 특히 요망된다. 치료 용도를 위해 생체외 전략을 사용할 수도 있다. 생체외 전략은 대상체로부터 수득된 세포를 VEGF 길항제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질감염 또는 형질도입시키는 것을 포함한다. 이어서, 상기 형질감염 또는 형질도입된 세포를 대상체에게 다시 주입한다. 세포는 조혈 세포 (예를 들어, 골수 세포, 대식세포, 단핵구, 수지상 세포, T 세포 또는 B 세포), 섬유모세포, 상피 세포, 내피 세포, 각질세포 또는 근육 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 광범위한 범위의 유형일 수 있다.

예를 들어, VEGF-특이적 길항제가 항체인 경우, 이러한 항체는 임의의 적합한 수단, 예를 들어 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비내, 및 국부 면역억제 치료를 위해 원한다면 병변내 투여를 통해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 추가로, 항체는 특히 항체의 용량을 감소시킨 펄스 주입에 의해 적합하게 투여된다. 바람직하게는, 투여는 부분적으로는 투여가 단기인지 장기인지에 따라 주사, 가장 바람직하게는 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다.

또 다른 예에서, VEGF-특이적 길항제 화합물은 예를 들어 장애 또는 종양의 위치가 허용된다면 직접 주사를 통해 국부 투여되고, 상기 주사는 주기적으로 반복될 수 있다. VEGF-특이적 길항제는 또한 예를 들어 휴면 종양 또는 미세전이의 국부 재발 또는 전이를 예방하거나 감소시키기 위해서 종양의 외과적 절제 이후에 대상체에게 전신 전달될 수 있거나, 또는 종양 세포에, 예를 들어 종양 또는 종양 층에 직접 전달될 수 있다.

대안적으로, VEGF-특이적 길항제를 코딩하는 핵산 서열을 함유하는 억제 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드를 대상체의 적절한 세포에 전달할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 핵산은 종양 자체에 대해 지시될 수 있다.

핵산은 이용된 벡터에 적절한 임의의 수단에 의해 세포 내로 도입될 수 있다. 많은 이러한 방법이 당업계에 널리 공지되어 있다 (문헌 [Sambrook et al., 상기 문헌], 및 [Watson et al., Recombinant DNA, Chapter 12, 2d edition, Scientific American Books, 1992]). 유전자 전달 방법의 예는 리포솜 매개 형질감염, 전기천공, 칼슘 포스페이트/DEAE 덱스트란 방법, 유전자 총 및 미세주사를 포함한다.

V. 제약 제제

본 발명에 따라 사용되는 항체의 치료 제제는 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를 임의의 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 혼합함으로써 동결건조된 제제 또는 수용액의 형태로 보관용으로 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)^TM, 플루로닉스(PLURONICS)^TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 바람직한 동결건조된 항-VEGF 항체 제제는 WO 97/04801 (이는 명백하게 본원에 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.

임의로, 제제는 제약상 허용되는 염, 전형적으로는 예를 들어 염화나트륨을 바람직하게는 약 생리학적 농도로 함유한다. 임의로, 본 발명의 제제는 제약상 허용되는 보존제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 보존제 농도는 0.1 내지 2.0% (전형적으로 v/v)의 범위이다. 적합한 보존제는 제약 업계에 공지된 것을 포함한다. 벤질 알콜, 페놀, m-크레졸, 메틸파라벤 및 프로필파라벤이 보존제의 예이다. 임의로, 본 발명의 제제는 0.005 내지 0.02% 농도의 제약상 허용되는 계면활성제를 포함할 수 있다.

전형적으로, 베바시주맙은 4 ml 또는 16 ml의 베바시주맙을 전달하기 위해 100 mg 및 400 mg 보존제-비함유 1회용 바이알에서 치료 용도를 위해 제공된다 (25 mg/ml). 100 mg 생성물은 240 mg α,α-트레할로스 이수화물, 23.2 mg 인산나트륨 (일염기성, 일수화물), 4.8 mg 인산나트륨 (이염기성, 무수), 1.6 mg 폴리소르베이트 20, 및 주사용수, USP 중에서 제제화된다. 400 mg 생성물은 960 mg α,α-트레할로스 이수화물, 92.8 mg 인산나트륨 (일염기성, 일수화물), 19.2 mg 인산나트륨 (이염기성, 무수), 6.4 mg 폴리소르베이트 20, 및 주사용수, USP 중에서 제제화된다. 또한, 베바시주맙에 대한 라벨을 참조한다.

본원의 제제는 또한 치료할 특정 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 악영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는, 1종 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, 하나의 제제 중에 EGFR, VEGF (예를 들어, VEGF 상의 상이한 에피토프에 결합하는 항체), VEGFR 또는 ErbB2 (예를 들어, 헤르셉틴^®)와 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 상기 조성물은 세포독성제, 시토카인, 성장 억제제 및/또는 소분자 VEGFR 길항제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

활성 성분은 또한 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 매크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예로는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919), L-글루탐산 및 γ 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 데포(LUPRON DEPOT)^TM (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로구체), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 100일을 초과하여 분자를 방출할 수 있는 반면, 특정 히드로겔은 단백질을 더 짧은 기간 동안 방출한다. 캡슐화된 항체가 신체 내에서 장기간 동안 유지되는 경우, 37℃에서 습도에 노출된 결과로 항체가 변성되거나 응집되어, 생물학적 활성의 손실 및 면역원성의 가능한 변화가 일어날 수 있다. 수반되는 메카니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 메카니즘이 티오-디술피드 상호교환을 통한 분자간 S-S 결합 형성인 것으로 발견되면, 안정화는 술프히드릴 잔기의 변형, 산성 용액으로부터의 동결건조, 수분 함량의 제어, 적절한 첨가제의 사용 및 특정 중합체 매트릭스 조성물의 개발에 의해 달성될 수 있다.

생체내 투여에 사용하고자 하는 제제는 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.

VI. 치료 효능

본 발명의 치료법의 주요 이점은 유의한 독성이나 역효과를 유발함이 없이 인간 환자에서 현저한 항암 효과를 유발하여 환자가 치료로부터 전반적으로 이점을 얻을 수 있다는 것이다. 본 발명의 치료 효능은 암 치료의 평가에 통상적으로 사용되는 다양한 종점 (종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 수축, 진행까지의 시간, 생존 지속기간, 무진행 생존, 전체 반응률, 반응의 지속기간 및 삶의 질을 포함하나 이에 제한되지 않음)로 측정될 수 있다. 본 발명의 항혈관신생제가 종양 혈관계를 표적화하고 반드시 신생물성 세포 자체를 표적화하는 것은 아니기 때문에, 이들은 특징적인 클래스의 항암 약물을 나타내고, 따라서 약물에 대한 임상 반응의 특징적인 측정 및 정의를 사용할 수 있다. 예를 들어, 2차원 분석에서 50% 초과의 종양 수축이 반응을 선언하는 표준 컷-오프이다. 그러나, 본 발명의 항-VEGF 항체는 원발성 종양의 수축 없이도 전이성 확산을 억제할 수 있거나, 또는 단순히 종양증식억제 효과를 발휘할 수 있다. 따라서, 임의로 예를 들어 혈관신생의 혈장 또는 뇨 마커의 측정 및 방사선 영상화를 통한 반응의 측정을 포함하는, 항혈관신생 요법의 효능을 결정하는 다른 접근법이 이용된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암에 걸리기 쉽거나 또는 암으로 진단받은 인간 환자의 무진행 생존을 증가시키는 방법을 제공한다. 질환 진행까지의 시간은 약물 투여로부터 질환 진행 또는 사망까지의 시간으로 정의된다. 바람직한 실시양태에서, 항-VEGF 항체 및 1종 이상의 화학요법제에 이어 항-VEGF 유지 요법을 사용하는 본 발명의 조합 치료는 무진행 생존을 항-VEGF 항체 유지 요법이 없는 치료에 비해 적어도 약 1개월, 2개월, 2.3개월, 2.9개월, 3.0개월, 3.8개월, 바람직하게는 약 1 내지 약 6.1개월 유의하게 증가시킨다. 한 실시양태에서, 중앙 PFS (개월) (95% CI)는 대조군에 비해 베바시주맙 및 탁산 요법 (예를 들어, 도세탁셀 또는 파클리탁셀) 및 카르보플라틴에 이어 항-VEGF 유지 요법으로 치료된 환자에서 3.8개월 증가하였다 (0.717 (0.625, 0.824), 단측 p-값 (로그 랭크) <0.001)). 또 다른 실시양태에서, 파클리탁셀 및 카르보플라틴 단독을 투여받은 환자 대 파클리탁셀, 카르보플라틴 및 항-VEGF 항체에 이어 항-VEGF 유지 요법을 투여받은 환자 사이의 중앙 PFS (개월) (95% CI)의 차이는 HR=0.79 및 p-값 (로그-랭크 시험) 0.0010으로 2.3개월이었다.

VII. 항체 생성

(i) 폴리클로날 항체

폴리클로날 항체는 관련 항원 및 아주반트의 다중 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사에 의해 동물에서 바람직하게 생성된다. 이관능성 또는 유도체화제, 예를 들어 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통함), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl₂, 또는 R¹N=C=NR (여기서, R 및 R¹은 상이한 알킬 기임)을 사용하여, 면역화될 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원을 접합시키는 것이 유용할 수 있다.

예를 들어 단백질 또는 접합체 100 μg 또는 5 μg (각각, 토끼 또는 마우스의 경우)을 3 부피의 프로인트 완전 아주반트와 합하고, 상기 용액을 여러 부위에 피내 주사함으로써, 동물을 항원, 면역원성 접합체 또는 유도체에 대해 면역화한다. 1개월 후, 프로인트 완전 아주반트 내의 펩티드 또는 접합체를 원래 양의 1/5 내지 1/10로 여러 부위에 피하 주사하여 동물을 부스팅한다. 7 내지 14일 후, 동물에서 채혈하여, 혈청을 항체 역가에 대해 검정한다. 역가가 정체기에 도달할 때까지 동물을 부스팅한다. 바람직하게는, 상이한 단백질에 및/또는 상이한 가교제를 통해 접합된 동일한 항원의 접합체로 동물을 부스팅한다. 접합체는 또한 재조합 세포 배양물에서 단백질 융합체로서 제조될 수도 있다. 또한, 명반과 같은 응집제를 적합하게 사용하여 면역 반응을 향상시킨다.

(ii) 모노클로날 항체

본원에서의 모노클로날 항체를 제조하는 다양한 방법이 당업계에서 이용가능하다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법을 이용하여 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허 번호 4,816,567)에 의해 제조될 수 있다.

하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 다른 적합한 숙주 동물, 예컨대 햄스터 또는 마카크 원숭이를 상기 기재된 바와 같이 면역화시켜, 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유발시킨다. 대안적으로, 림프구를 시험관내에서 면역화시킬 수 있다. 이어서, 적합한 융제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 림프구를 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]).

이렇게 제조된 하이브리도마 세포를, 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 시딩하여 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT) 효소가 없는 경우, 하이브리도마용 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함할 것이며 (HAT 배지), 이러한 물질들은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다.

바람직한 골수종 세포는 효율적으로 융합되고, 선택된 항체-생성 세포에 의한 높은 수준의 안정적인 항체 생성을 지지하며, HAT 배지와 같은 배지에 감수성이 있는 것이다. 특히 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center) (미국 캘리포니아주 샌 디에고)로부터 입수가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양 및 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (미국 메릴랜드주 록빌)으로부터 입수가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포로부터 유래된 것이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 또한 인간 모노클로날 항체 생성에 대해 기재된 바 있다 (문헌 [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]).

하이브리도마 세포가 성장되는 배양 배지를 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체의 생성에 대해 검정한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)으로 결정한다.

바람직한 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 클론을 한계 희석 절차에 의해 서브클로닝하고, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]). 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포가 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상적인 이뮤노글로불린 정제 절차, 예컨대 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적절하게 분리된다.

통상의 절차 (예를 들어, 모노클로날 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함)를 이용하여 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA가 용이하게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로 기능한다. 일단 단리되면, DNA를 발현 백터 내에 놓을 수 있고, 그 후 이러한 벡터를 형질감염되지 않으면 이뮤노글로불린 단백질을 생성하지 않는 이. 콜라이(E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포와 같은 숙주 세포 내로 형질감염시켜, 재조합 숙주 세포에서의 모노클로날 항체의 생성을 수득한다. 항체의 재조합 생성은 하기에 더욱 상세하게 기재될 것이다.

추가 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편을 문헌 [McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 이용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리할 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에는 파지 라이브러리를 사용하여 뮤린 및 인간 항체를 각각 단리시키는 방법이 기재되어 있다. 이후의 간행물은 쇄 셔플링에 의한 고친화도 (nM 범위) 인간 항체의 생성 (문헌 [Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)]) 뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구축하기 위한 전략으로서의 조합 감염 및 생체내 재조합 (문헌 [Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21:2265-2266 (1993)])을 기재한다. 따라서, 이러한 기술들은 모노클로날 항체의 단리를 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행가능한 대안이다.

DNA는 또한 예를 들어 상동성 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 (미국 특허 번호 4,816,567; 문헌 [Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 또는 이뮤노글로불린 코딩 서열에 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유결합에 의해 연결함으로써 변형시킬 수 있다.

전형적으로, 이러한 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인 대신 사용되거나 항체의 하나의 항원 결합 부위의 가변 도메인 대신 사용되어, 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원 결합 부위 및 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 또 다른 항원 결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성한다.

(iii) 인간화 및 인간 항체

인간화 항체에는 비인간 공급원으로부터의 1개 이상의 아미노산 잔기가 도입되어 있다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기라 지칭되고, 전형적으로는 "유입" 가변 도메인으로부터의 것이다. 인간화는 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항체의 상응하는 서열 대신 사용함으로써 본질적으로 윈터(Winter) 및 동료들의 방법 (문헌 [Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)])에 따라 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 부분이 비인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환된 키메라 항체 (미국 특허 번호 4,816,567)이다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다.

인간화 항체의 제조에 사용되는 인간 가변 도메인 경쇄 및 중쇄 둘 다의 선택은 항원성 감소에 매우 중요하다. 소위 "최적 맞춤" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인 서열을 공지의 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 이어서, 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열이 인간화 항체에 대한 인간 프레임워크 (FR)로서 수용된다 (문헌 [Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)]). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정 프레임워크를 이용한다. 여러 상이한 인간화 항체에 대해 동일한 프레임워크를 사용할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immnol., 151:2623 (1993)]).

추가로, 항체가 항원에 대해 높은 친화도를 보유하고 다른 유리한 생물학적 특성을 보유하도록 인간화하는 것이 중요하다. 이를 달성하기 위해서, 바람직한 방법에 따라, 인간화 항체는 모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 이용하는 모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물의 분석 방법에 의해 제조된다. 3차원 이뮤노글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고, 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 이뮤노글로불린 서열의 가능한 3차원 형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이러한 디스플레이를 조사하면 후보 이뮤노글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉 후보 이뮤노글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석이 가능하다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수용자 서열 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어 바람직한 항체 특징, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 친화도 증가를 달성할 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기가 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로, 및 가장 실질적으로 연관된다.

인간화 항-VEGF 항체 및 그의 친화도 성숙 변이체는 예를 들어 2005년 2월 26일에 허여된 미국 특허 번호 6,884,879에 기재되어 있다.

면역화시에 내인성 이뮤노글로불린의 생성 없이 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)을 생성하는 것이 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 배선 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (J_H) 유전자를 동형접합 결실시키면 내인성 항체의 생성이 완전히 억제된다는 것이 기재되어 있다. 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자 어레이를 이러한 배선 돌연변이체 마우스에게 전달하면, 항원 접종시 인간 항체가 생성될 것이다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993); 및 Duchosal et al. Nature 355:258 (1992)]을 참조한다.

다르게는, 파지 디스플레이 기술 (문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)])을 이용하여 면역화되지 않은 공여자로부터의 이뮤노글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 시험관내에서 인간 항체 및 항체 단편을 생성할 수 있다. 이러한 기술에 따라, 항체 V 도메인 유전자를 필라멘트형 박테리오파지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 코트 단백질 유전자로 인 프레임으로 클로닝하고, 파지 입자의 표면 상에 기능적 항체 단편으로서 디스플레이한다. 필라멘트형 입자는 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 기능적 특성에 기초한 선택에 의해 이러한 특성을 나타내는 항체를 코딩하는 유전자도 선택된다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성의 일부를 모방한다. 파지 디스플레이는 다양한 포맷으로 수행될 수 있고, 이에 대한 검토를 위해서는 예를 들어 문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)]을 참조한다. V-유전자 절편의 여러 공급원이 파지 디스플레이에 사용될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)]에서는 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 소형 무작위 조합형 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이가 단리되었다. 본질적으로 [Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), 또는 Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)]에 기재된 기술에 따라, 면역화되지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구축될 수 있고, 다양한 어레이의 항원 (자가-항원 포함)에 대한 항체가 단리될 수 있다. 또한, 미국 특허 번호 5,565,332 및 5,573,905를 참조한다.

상기 논의된 바와 같이, 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수도 있다 (미국 특허 5,567,610 및 5,229,275 참조). 인간 모노클로날 항-VEGF 항체는 1998년 3월 24일에 허여된 미국 특허 번호 5,730,977에 기재되어 있다.

(iv) 항체 단편

항체 단편 생성을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유래되었다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 현재 이러한 단편들이 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 항체 단편이 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')₂ 단편을 형성할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')₂ 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 항체 단편의 생성을 위한 또 다른 기술들이 당업자에게 명백할 것이다. 다른 실시양태에서, 선택된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO 93/16185를 참조한다.

(v) 다른 아미노산 서열 변형

본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체들은 적절한 뉴클레오티드 변화를 항체 핵산 내에 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물이 원하는 특성을 갖는다는 조건 하에 결실, 삽입 및 치환의 임의 조합이 이루어져 최종 구축물에 도달된다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역후 프로세싱을 변경시킬 수 있으며, 예컨대 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시킬 수 있다.

돌연변이유발에 바람직한 위치인 항체의 특정 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 문헌 [Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이라 불린다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기 그룹이 확인되고 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu), 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 치환되어 아미노산과 항원과의 상호작용에 영향을 미친다. 이후에, 치환에 대해 기능적 감수성을 나타내는 아미노산 위치가 치환 부위에 또는 치환 부위에 대해 추가적인 또는 다른 변이체를 도입함으로써 정련된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 미리 결정되지만, 돌연변이 그 자체의 특성이 미리 결정될 필요는 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서의 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발을 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고, 발현된 항체 변이체를 원하는 활성에 대하여 스크리닝한다.

아미노산 서열 삽입에는 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합체 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입이 포함된다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드가 항체의 N- 또는 C-말단에 융합된 것을 포함한다.

또 다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이러한 변이체에서는 항체 분자 내의 적어도 1개의 아미노산 잔기가 상이한 잔기로 대체된다. 치환 돌연변이유발에 가장 흥미로운 부위에는 초가변 영역이 포함되지만, FR 변경 또한 고려된다.

항체의 생물학적 특성에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 형태로서, 치환 영역 내의 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 부피를 유지하는 것에 대한 효과가 현저하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 아미노산은 그의 측쇄 특성의 유사성에 따라 하기 군으로 나뉠 수 있다 (문헌 [A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)]):

(1) 비극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)

(2) 비하전 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)

(3) 산성: Asp (D), Glu (E)

(4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H)

대안적으로, 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 따라 하기 군으로 나뉠 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비보존적 치환은 이들 클래스 중의 하나의 구성원을 또 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 것이다.

또한, 항체의 적절한 형태 유지에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선시키고 비정상적인 가교를 방지할 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)이 항체에 부가되어 그의 안정성을 개선시킬 수 있다 (특히, 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우).

특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반하였다. 일반적으로, 추가의 개발용으로 선택된 생성된 변이체(들)는 이들이 생성되는 모 항체에 비해 생물학적 특성이 개선될 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하는 편리한 방법은 파지 디스플레이를 사용한 친화도 성숙이다. 간략하게, 여러 초가변 영역 부위 (예를 들어, 6-7개 부위)를 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노 치환이 생성되도록 돌연변이시킨다. 이로써 생성된 항체 변이체를 필라멘트형 파지 입자로부터 각각의 입자 내에 포장물된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서 1가 방식으로 디스플레이시킨다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체를 본원에 개시된 바와 같이 이들의 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝한다. 변형을 위한 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 유의하게 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 인간 VEGF 사이의 접촉점을 확인하기 위해서는 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 본원에서 상술된 기술에 따른 치환을 위한 후보이다. 일단 이러한 변이체가 생성되면, 변이체들의 패널을 본원에 기재된 바와 같이 스크리닝하고, 한가지 이상의 관련 검정에서 탁월한 특성을 갖는 항체를 추가적인 개발을 위해 선택할 수 있다.

항체의 아미노산 변이체의 또 다른 유형은 항체의 원래의 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 변경은 항체에서 발견되는 1개 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키는 것 및/또는 항체에 존재하지 않는 1개 이상의 글리코실화 부위를 부가하는 것을 의미한다.

항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결된다. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 나타낸다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (식 중 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 모이어티를 아스파라긴 측쇄에 효소에 의해 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이러한 트리펩티드 서열 중 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나가 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착되는 것을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신이 또한 사용될 수 있다.

항체에 글리코실화 부위를 부가하는 것은 1개 이상의 상기 기재된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성된다 (N-연결 글리코실화 부위의 경우). 변경은 원래의 항체의 서열에 대한 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 또한 달성될 수 있다 (O-연결 글리코실화 부위의 경우).

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착되는 푸코스가 결여된 성숙 탄수화물 구조를 갖는 항체는 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1 (Presta, L.)에 기재되어 있다. 또한, US 2004/0093621 A1 (교와 핫꼬 고교 캄파니, 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))도 참조한다. 항체의 Fc 영역에 부착된 탄수화물 내의 이분지 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc)을 갖는 항체가 WO03/011878 (Jean-Mairet et al.) 및 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.)에 언급되어 있다. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체가 WO97/30087 (Patel et al.)에 보고되어 있다. 또한, 항체의 Fc 영역에 부착된 탄수화물이 변경된 항체에 대해 WO98/58964 (Raju, S.) 및 WO99/22764 (Raju, S.)를 참조한다.

본 발명의 항체를 예를 들어 항체의 항원-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)이 향상되도록 이펙터 기능과 관련하여 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이것은 항체의 Fc 영역에 1개 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역 내에 도입하여, 이 영역 내에서의 사슬간 디술피드 결합 형성을 허용할 수 있다. 이로써 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다. 문헌 [Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) 및 Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)]을 참조한다. 항종양 활성이 향상된 동종이량체 항체는 또한 문헌 [Wolff et al. Cancer Research 53:2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종이관능성 가교제를 사용하여 제조할 수 있다. 대안적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체를 조작할 수 있고, 이에 의해 보체 용해 및 ADCC 능력이 향상될 수 있다. 문헌 [Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)]을 참조한다.

WO00/42072 (Presta, L.)에는 인간 이펙터 세포의 존재 하에 개선된 ADCC 기능을 갖는 항체가 기재되어 있고, 여기서 항체는 그의 Fc 영역 내에 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 개선된 ADCC를 갖는 항체는 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 Eu 넘버링)에서의 치환을 포함한다. 바람직하게는, 변경된 Fc 영역은 상기 위치 중 1개, 2개 또는 3개에서의 치환을 포함하거나 이러한 치환으로 이루어진 인간 IgG1 Fc 영역이다. 이러한 치환은 C1q 결합 및/또는 CDC를 증가시키는 치환(들)과 임의로 조합된다.

변경된 C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 갖는 항체는 WO99/51642, 미국 특허 번호 6,194,551B1, 미국 특허 번호 6,242,195B1, 미국 특허 번호 6,528,624B1 및 미국 특허 번호 6,538,124 (Idusogie et al.)에 기재되어 있다. 항체는 그의 Fc 영역의 아미노산 위치 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333 및/또는 334 (잔기의 Eu 넘버링) 중 1개 이상에서의 아미노산 치환을 포함한다.

항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 5,739,277에 기재된 바와 같이 샐비지 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편) 내로 혼입시킬 수 있다. 본원에 사용된 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자 (예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃ 또는 IgG₄)의 생체내 혈청 반감기 증가를 담당하는 상기 IgG 분자의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.

신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 결합이 개선되고 반감기가 증가된 항체가 WO00/42072 (Presta, L.) 및 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 1개 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 예를 들어, Fc 영역은 위치 238, 250, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 314, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428 또는 434 (잔기의 Eu 넘버링) 중 1개 이상에서 치환을 가질 수 있다. 개선된 FcRn 결합을 갖는 바람직한 Fc 영역-포함 항체 변이체는 그의 Fc 영역의 위치 307, 380 및 434 (잔기의 Eu 넘버링) 중 1개, 2개 또는 3개에서의 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 307/434 돌연변이를 갖는다.

3개 이상 (바람직하게는 4개)의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 고려된다 (미국 출원 번호 US2002/0004587 A1 (Miller et al.)).

항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이러한 방법은 천연 공급원으로부터의 단리 (자연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 항체의 앞서 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위-지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

(vi) 면역접합체

본 발명은 또한 세포독성제, 예컨대 화학요법제, 독소 (예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성접합체)에 접합된 본원에 기재된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.

이러한 면역접합체의 생성에 유용한 화학치료제는 상기 기재되어 있다. 사용할 수 있는 효소 활성 독소 및 그의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 방사성접합체 항체의 생성을 위해 다양한 방사성핵종이 이용가능하다. 이것의 예는 ²¹²Bi, ¹³¹I, ¹³¹In, ⁹⁰Y 및 ¹⁸⁶Re를 포함한다.

다양한 이관능성 단백질 커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디프이미데이트 HCL), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 항체와 세포독성제의 접합체가 제조된다. 예를 들어 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al. Science 238: 1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14 표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성뉴클레오티드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO94/11026을 참조한다.

또 다른 실시양태에서, 항체를 종양 예비표적화에 이용하기 위해 "수용체" (예컨대, 스트렙타비딘)에 접합시킬 수 있고, 여기서의 항체-수용체 접합체를 환자에게 투여한 후에 제거제를 사용하여 순환계로부터 미결합 접합체를 제거하고, 이어서 세포독성제 (예를 들어, 방사성뉴클레오티드)에 접합된 "리간드" (예를 들어, 아비딘)를 투여한다.

(vii) 이뮤노리포솜

본원에 개시된 항체는 또한 이뮤노리포솜으로서 제제화될 수 있다. 항체를 함유하는 리포솜은, 예컨대 문헌 [Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980)]; 및 미국 특허 번호 4,485,045 및 4,544,545에 기재된 바와 같은 당업계 공지의 방법으로 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포솜은 미국 특허 번호 5,013,556에 개시되어 있다.

특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용한 역상 증발 방법으로 생성될 수 있다. 규정된 기공 크기의 필터를 통해 리포솜을 압출하여 원하는 직경의 리포솜을 생성한다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 디술피드 상호교환 반응을 통해 문헌 [Martin et al. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982)]에 기재된 바와 같이 리포솜에 접합시킬 수 있다. 화학요법제 (예컨대 독소루비신)는 임의로 리포솜 내에 함유된다. 문헌 [Gabizon et al. J. National Cancer Inst.81(19)1484 (1989)]을 참조한다.

VIII. 제조품 및 키트

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 장애의 치료에 유용한 물질들을 함유하는 제조품이 제공된다. 상기 제조품은 용기, 표지 및 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 용기는 상태를 치료하는데 효과적인 조성물을 보유하고, 멸균 접근 포트가 있을 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘이 관통가능한 마개가 있는 정맥주사액 또는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 항-VEGF 항체이다. 용기 상의 또는 용기와 합쳐진 라벨은 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용된다는 것을 가리킨다. 제조품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 포스페이트 완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 제조품은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함하여, 상업용 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 추가로, 제조품은 예를 들어 조성물의 사용자에게 항-VEGF 항체 조성물 및 화학요법제, 예를 들어 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 파클리탁셀 단백질-결합 입자 (예를 들어, 아브락산^®), 백금 유사체, 카르보플라틴, 겜시타빈 또는 이들의 조합물에 이어 항-VEGF 유지 요법을 환자에게 투여할 것을 지시하는 것을 포함하는 사용 지침서를 갖는 포장 삽입물을 포함한다. 포장 삽입물은 임의로 실시예 1 또는 실시예 2 또는 실시예 3에서 확인된 결과를 일부 또는 전부 함유할 수 있다.

VEGF-특이적 길항제는 단독으로 또는 다른 항암 치료제 화합물과 조합되어 키트로서 포장될 수 있다. 이러한 키트는 환자에게 단위 용량을 투여하는 데에 도움을 주는 임의의 성분, 예컨대 분말 형태를 재구성하기 위한 바이알, 주사용 시린지, 주문제작된 IV 전달 시스템, 흡입기 등을 포함할 수 있다. 추가로, 단위 용량 키트는 조성물의 제조 및 투여를 위한 지침서를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 지침서는 예를 들어 조성물의 사용자에게 항-VEGF 항체 조성물 및 화학요법제, 예를 들어 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 파클리탁셀 단백질-결합 입자 (예를 들어, 아브락산^®), 백금 유사체, 카르보플라틴, 겜시타빈 또는 이들의 조합물에 이어 항-VEGF 유지 요법을 환자에게 투여할 것을 지시하는 것을 포함하는 사용 지침서를 포함한다. 지침서는 임의로 실시예 1 또는 실시예 2 또는 실시예 3에서 발견된 결과를 일부 또는 전부 함유할 수 있다. 키트는 한 환자를 위해 1회용 단위 용량으로서 제조될 수 있거나, 특정 환자를 위해 여러회 사용하도록 (일정한 용량으로, 또는 요법이 진행됨에 따라 개별 화합물의 효력이 달라질 수 있도록) 제조될 수 있거나; 또는 키트는 다수의 환자에게 투여하는데 적합한 다중 용량을 함유할 수 있다 ("벌크 포장"). 키트 성분은 카툰, 블리스터 팩, 병, 튜브 등에 조립될 수 있다.

물질의 기탁

하기 하이브리도마 세포주는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC) (미국 버지니아주 매너시스)에 부다페스트 조약의 제공 하에 기탁되었다:

항체 명칭 ATCC 번호 기탁일

A4.6.1 ATCC HB-10709 1991년 3월 29일

하기 실시예는 단지 본 발명의 실시를 설명하기 위한 것이며, 본 발명을 제한하기 위해 제공되는 것이 아니다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전문이 명백하게 본원에 참고로 포함된다.

실시예

실시예 1. 새로 진단받은, 이전에 치료받지 않은, III기 (최적 아래로 및 육안상 최적으로 용적축소됨) 또는 IV기의 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 여성에서의, 카르보플라틴 및 파클리탁셀 플러스 위약 대 카르보플라틴 및 파클리탁셀 플러스 공동 베바시주맙 이어서 위약, 대 카르보플라틴 및 파클리탁셀 플러스 공동 및 확장된 베바시주맙의 III상 시험

결과는 국제 부인과종양 연맹 (FIGO) III기 및 IV기의 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 환자에 대한 새로운 치료 프로그램을 평가하기 위한 III상 무작위화 연구로부터 제시된다. 주요 목적은 5 공동 주기의 베바시주맙을 6 주기의 표준 요법 (카르보플라틴 및 파클리탁셀) [아암 II]에 첨가하는 것이 새로 진단받은 III기 (임의의 총 잔류 질환 포함) 및 IV기의 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 여성에서 6 주기의 표준 요법 단독 [아암 I]과 비교하였을 때 무진행 생존 (PFS)의 지속기간을 증가시키는지 결정하는 것; 및 5 공동 주기의 베바시주맙 플러스 16 주기 동안 확장된 베바시주맙을 6 주기의 표준 요법 (카르보플라틴 및 파클리탁셀) 후에 첨가하는 것 [아암 III]이 새로 진단받은 III기 (임의의 총 잔류 질환 포함) 및 IV기의 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 여성에서 6 주기의 표준 요법 [아암 I]과 비교하였을 때 무진행 생존을 증가시키는지 결정하는 것을 포함한다.

GOG-0182-ICON5는 표준 요법 (카르보플라틴 및 파클리탁셀)을 파클리탁셀 및 카르보플라틴과 조합하여 또는 이와 순차적으로 겜시타빈, 토포테칸 및 리포솜 독소루비신을 혼입시키는 4개의 연구 아암과 비교하는 5-아암 무작위화 임상 시험이었다. 전세계적으로 주요 난소암 임상 시험 군이 이 연구에 참여하였다. 이러한 국제적 협력은 유망한 무작위화 시험에서 여러 작용제의 동시 평가를 용이하게 하는 시의적절한 방식으로 다수의 환자를 통합시킬 유일한 기회를 제공하였다. 국제적인 참여로, 누적수는 한 해에 1,200명의 환자를 초과하였고, 시험은 활성화 4년 내에 목적한 누적수 목표에 도달하였다.

GOG-0182-ICON5의 결과는 진행된 난소 및 원발성 복막 암을 갖는 이전에 치료받지 않은 환자에 대한 최적의 화학요법을 확립하는 것을 돕는 한편, 차세대 임상 시험은 화학요법과 조합된 분자 표적화된 요법의 영향을 조사할 것이다. 특히, 성장 인자 신호 전달 억제제 및 항혈관신생제는 현재 이들 암을 갖는 여성에서 단일 작용제로서 및 화학요법 약물과 조합되어 시험되고 있다. 다수의 이러한 작용제는 인간 암의 실험적 모델에서 세포증식억제 효과를 갖고 화학요법과 상승작용을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 이러한 III상 시험에서는, 진행된 질환을 갖는 환자에서 표준 화학치료 요법 단독에 비해 표준 화학치료 요법 플러스 또는 마이너스 확장된 단일 작용제 투여와 조합된 활성 생물학적 작용제의 결과에 대한 영향을 평가하였다.

베바시주맙은 rhuMAb VEGF로 명명되는, 뮤린 항-인간 VEGF 모노클로날 항체의 재조합 인간화 버전이다. 베바시주맙은 고형 종양을 갖는 환자에서 종양 성장 억제를 유도하기 위한 단일 작용제로 사용하기 위해 및 전이성 고형 종양을 갖는 환자에서 질환 진행까지의 시간을 지연시키기 위해 세포독성 화학요법과 조합하여 사용하기 위해 임상 개발이 진행되었다. 예를 들어, 문헌 [Presta LG, et al. Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody for the therapy of solid tumors and other disorders. Cancer Res 57:4593-9, 1997]을 참조한다. 재발성 상피 난소 및 원발성 복막 암을 갖는 환자에 대한 베바시주맙의 2개의 단일 작용제 시험의 결과가 공개되었다. 예를 들어, 문헌 [Burger RA, et al., Phase II trial of bevacizumab in persistent or recurrent epithelial ovarian cancer or primary peritoneal cancer: a Gynecologic Oncology Group study. J Clin Oncol 25(33):5165-5171, 2007; 및 Cannistra SA, et al.,. Phase II Study of Bevacizumab in Patients with Platinum Resistant Ovarian Cancer or Primary Peritoneal Serous Cancer. J Clin Oncol 25(33):5180-86, 2007]을 참조한다. GOG (GOG-0170-D)는 2개의 공동-일차 효능 종점을 사용하였다: NCI RECIST 기준에 의한 임상적 반응 및 적어도 6개월 동안의 무진행 생존의 비율. 62명의 참가자에게 질환 진행의 임상적 또는 방사선 촬영 증거 또는 허용되지 않는 독성의 발생까지 21일마다 15 mg/kg의 베바시주맙을 투여하였다. 주요 질환 특성은 전형적인 재발성 난소암을 갖는 환자였고, 환자의 대략 43%가 주로 백금 내성인 것으로 여겨졌다. 21% 반응률이 관찰되었고, 40%는 유사한 임상적 특성을 갖는 집단에서 세포독성제의 이전의 음성 II상 시험을 기반으로 병력 대조군에 대한 1.8개월에 비해 적어도 6 개월 (중앙 PFS 4.7개월) 동안 무진행 상태였다. 제넨테크 AVF 2949는 질환 진행 및 유해 사례에 대한 잠재성에 대해 보다 높은 위험 프로파일을 갖는 환자를 조사하여, 일차 또는 이차적으로 백금 내성인 것으로 여겨지고, 2 또는 3회의 이전의 세포독성 요법을 받은 환자만을 허용하였다. 적격성에서의 이러한 차이는 궁극적으로 AVF 집단에서 보다 높은 수준의 백금 내성, 보다 많은 수의 사전 요법 및 약간 악화된 수행 상태 프로파일로 이해된다. 44명의 환자를 GOG 170-D에서 사용된 것과 동일한 베바시주맙에 대한 용량 및 스케줄로 처리하였다. 7명 (16%)의 반응이 문서화되었고, 12명 (27%)은 적어도 6개월 동안 무진행 상태였다.

이 연구에서, 2개의 실험적 아암이 파클리탁셀 및 카르보플라틴을 사용하는 표준 세포독성 화학요법과 비교하기 위해 선택되었다: 하나는 5 주기의 베바시주맙 (공동 베바시주맙)을 혼입시키고, 다른 하나는 파클리탁셀 및 카르보플라틴을 사용한 화학요법의 완료 후에 추가의 16 주기 동안 베바시주맙을 사용한다 (확장된 베바시주맙). 투여 및 용량은 도 1 및 2에 나타낸다. 카르보플라틴 (AUC) 투약을 위한 칼버트 식:

전체 용량 (mg)= 표적 AUC (mg/ml/분)^*[GFR (ml/분) + 25].

연구의 일차 종점을 위한 통계적 설계는 PFS 위험비 (HR) ≤ 0.77 (중앙 PFS 이동: 14.0개월 (병력) → 18.2개월)을 검출하기 위한 90% 능력을 기반으로 하였다. 일차 분석은 각각의 베바시주맙 아암 대 대조군에 대해 조사원-평가된 PFS를 비교하였다 (분석 1 → RECIST (예를 들어, 문헌 [Therasse et al., J Natl. Cancer Inst., 92:205-16, 2000] 참조), 전반적인 임상적 악화, 또는 CA-125에 의함; 또는 분석 2 → RECIST 또는 전반적인 임상적 악화, 센서링 CA-125에 의함). 환자의 기준선 임상적 특성은 표 1에서 찾아볼 수 있다. 환자의 기준선 외과적-병리학적 특성은 표 2에서 찾아볼 수 있다.

적격 환자: 상피 난소암, 원발성 복막 암종 또는 난관 암; 임의의 총 (육안으로 보이거나 또는 촉진가능한) 잔류 질환을 갖는 FIGO III기 또는 초기 복부 수술의 완료시에 수술에 의해 규정되고 조직학적 평가에 이용가능한 적절한 조직을 갖는 FIGO IV기로 조직학적 진단을 받은 환자. 요구되는 최소 수술은 조직학적 평가를 위한 조직을 제공하고, 원발성 부위 및 병기 뿐만 아니라 종양 용적축소시 최대의 노력을 확립 및 문서화하는 복부 수술이었다. 추가의 수술이 수행되었다면, 이는 GOG 수술 절차 매뉴얼 (https://www.gog.fccc.edu/manuals/pdf/surgman.pdf)에 기재된 난소 또는 복막 암종에 대한 적절한 수술에 따라야 한다. 그러나, 외과의가 GOG 수술 절차 매뉴얼의 이 부분에 함유된 항목을 모두 수행할 필요는 없다. 이러한 초기 수술의 완료시에 임의의 잔류 종양 이식편의 가장 큰 최대 직경이 1 cm 이하인 III기 암을 갖는 환자가 "최적"으로 규정될 것이고, 나머지 모두가 "최적 아래"로 규정될 것이다. 수술후 영상화 연구 상에서 측정가능한 질환은 적격성에 요구되지 않는다.

하기 조직학적 상피 세포 유형을 갖는 환자가 적격이다: 장액성 선암종, 자궁내막양 선암종, 점액성 선암종, 미분화 암종, 투명 세포 선암종, 복합 상피 암종, 이행 세포 암종, 악성 브레너 종양 또는 달리 특정되지 않은 (N.O.S.) 선암종. 그러나, 종양의 조직학적 특성은 원발성 뮬러 상피 선암종에 적합하여야 한다. 환자는 침습성 종양의 본래 기원이 난소, 복막 또는 난관인 한은 원 위치에서 공동-존재하는 난관 암종을 가질 수 있다.

환자를 적절한 하기 사항을 가져야 한다:

(1) 골수 기능: 1,500개/μl 이상의 절대 호중구 수 (ANC), 유해 사례에 대한 공통 독성 기준 v3.0 (CTCAE) 등급 1에 해당됨. 이 ANC는 과립구 콜로니 자극 인자에 의해 유도 또는 지지될 수 없다.

(2) 100,000개/μl 이상의 혈소판. (CTCAE 등급 0-1).

(3) 신장 기능: 크레아티닌 ≤ 1.5 x 제도적 정상 상한 (ULN), CTCAE 등급 1.

(4) 간 기능:

(a) 1.5 x ULN 이하의 빌리루빈 (CTCAE 등급 1).

(b) 2.5 x ULN 이하의 SGOT 및 알칼리성 포스파타제 (CTCAE 등급 1).

(c) 신경 기능: CTCAE 등급 1 이하의 신경병증 (감각 및 운동).

(5) 혈액 응고 파라미터: 국제 정규화 비 (INR)가 ≤ 1.5 (또는 환자가 폐 혈전색전증을 포함하는 정맥 혈전증의 관리를 위한 치료 와파린의 안정한 용량을 투여받고 있다면, INR 범위 내, 일반적으로 2 내지 3)가 되도록 하는 PT 및 PTT < 1.2 x 정상 상한.

(6) 0, 1 또는 2의 GOG 수행 상태를 갖는 환자.

(7) 환자는 진단, 병기결정 및 종양감축의 조합된 목적을 위해 수행된 초기 수술 후 1 내지 12주에 들어가야 한다.

(8) 측정가능한 및 측정가능하지 않은 질환을 갖는 환자가 적격이다. 환자는 암-관련 증상을 가질 수 있거나 또는 갖지 않을 수 있다.

(9) 섹션 7.0에 특정된 등록전 요구사항을 만족시키는 환자.

(10) 개인 건강 정보의 제공을 허용하는 승인된 사전 동의 및 권한부여는 환자 또는 보호자의 서명이 있어야 한다.

(11) 이 시험에서 환자는 임의의 시점에 폐경 증상의 제어를 위한 최저 유효 용량(들)에서 지시된 바와 같이 난소 에스트로겐 +/- 프로게스틴 대체 요법을 받을 수 있으나, 프로토콜 지시된 요법 중에 또는 질환 진행 이전에 식욕부진의 관리를 위한 프로게스틴은 받을 수 없다.

부적격 환자: 수술로만 치료되는 경계성 상피 난소 종양 (이전에는 "낮은 악성 잠재성의 종양") 또는 재발성 침습성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암을 갖는 것으로 현재 진단받은 환자 (예컨대 Ia기 또는 Ib기 저등급 상피 난소 또는 난관 암을 갖는 환자)는 적격하지 않다. 수술로 절개된 경계성 종양을 갖는 것으로 이전에 진단받고, 이후에 관련되지 않은 새로운 침습성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암이 발생한 환자가 적격이고, 단 이들은 임의의 난소 종양에 대해 사전 화학요법을 받은 적이 없다.

복강 또는 골반의 임의의 부분에 사전 방사선요법을 받은 환자는 배제된다. 유방, 두경부 또는 피부의 국부 암에 대한 사전 방사선 조사는 허용되나, 단 이는 등록하기 3년 넘게 전에 완료되었고, 환자는 재발성 또는 전이성 질환이 없는 상태로 유지되고 있어야 한다.

이들의 난소, 원발성 복막 또는 난관 암에 대한 네오-아주반트 화학요법을 포함하여 임의의 복부 또는 골반 종양에 대한 사전 화학요법을 받은 환자는 배제된다. 환자는 국부 유방암에 대한 사전 아주반트 화학요법을 받을 수 있으나, 단 이는 등록하기 3년 넘게 전에 완료되었고, 환자는 재발성 또는 전이성 질환이 없는 상태로 유지되고 있어야 한다.

이들의 상피 난소 또는 원발성 복막 암의 관리를 위한 임의의 표적화된 요법 (백신, 항체, 티로신 키나제 억제제를 포함하나 이에 제한되지 않음) 또는 호르몬 요법을 받은 환자.

동시발생 원발성 자궁내막 암, 또는 원발성 자궁내막 암의 과거 병력을 갖는 환자는 하기 조건을 모두 만족시키지 않는 한 배제된다: I-B기 이하; 혈관 또는 림프 침습 없는, 오직 표재성 자궁근층 침습; 잘 분화되지 않은 하위유형 (유두상 장액성, 투명 세포 또는 다른 FIGO 등급 3 병변 포함)이 없음.

비-흑색종 피부암 및 상기 언급된 다른 특정 악성 종양을 제외하고, 마지막 5년 내에 존재하는 다른 암의 임의의 증거를 가졌거나 (또는 갖거나) 또는 이전의 암 치료가 이 프로토콜 요법에는 사용할 수 없는 것인, 다른 침습성 악성 종양을 갖는 환자가 배제된다.

급성 간염 또는 비경구 항생제를 필요로 하는 활성 감염을 갖는 환자

심각한 비치유 상처, 궤양, 또는 골절을 갖는 환자. 이는 28일 내의 복부 누공, 위장 천공 또는 복부내 농양의 병력을 포함한다. 안면 열개 또는 감염의 증거가 없는 이차 목적에 의해 치유되는 과립화 절개부를 갖는 환자가 적격이지만, 매주 상처 조사를 필요로 한다.

과도한 출혈 또는 높은 출혈 위험을 보유하는 병적 상태, 예컨대 공지된 출혈성 장애, 응고병증, 또는 주요 혈관과 관련된 종양을 갖는 환자.

원발성 뇌 종양, 표준 의학 요법으로 제어되지 않는 발작, 임의의 뇌 전이, 또는 이 연구에서의 치료 제1일의 6개월 내에서의 뇌혈관 사고 (CVA, 졸중), 일과성 허혈 발작 (TIA) 또는 지주막하 출혈의 병력을 포함하여, 신체 검사시에 CNS 질환의 병력 또는 증거를 갖는 환자.

임상적으로 유의한 심혈관 질환을 갖는 환자. 이는 다음을 포함한다:

수축기 > 150 mm Hg 또는 확장기 > 90 mm Hg로 규정된, 제어되지 않은 고혈압; 등록 < 6 개월 이전의 심근 경색 또는 불안정한 협심증; 뉴욕 심장 학회 (NYHA) 등급 II 이상의 울혈성 심부전; 의약을 필요로 하는 중증의 심장 부정맥. 이는 제어된 심박수를 갖는 무증상 심방 세동; CTCAE 등급 2 이상의 말초 혈관 질환 (비-수술적으로 관리되고 영구적인 결핍이 없는 허혈의 적어도 단기 (< 24시간)의 에피소드); 6개월 내의 CVA의 병력을 포함하지 않는다.

차이니즈 햄스터 난소 세포 생성물 또는 다른 재조합 인간 또는 인간화 항체에 대한 공지된 과민증을 갖는 환자.

임상적으로 유의한 단백뇨를 갖는 환자. 뇨 단백질은 뇨 단백질-크레아티닌 비 (UPCR)에 의해 스크리닝되어야 한다. UPCR은 24시간 뇨 수집물에 분비된 단백질의 양과 직접적으로 상호관련되는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 문헌 [Ginsberg JM, et al.,. Use of single voided urine samples to estimate quantitative proteinuria. N Engl J Med 309:1543-6, 1983; Rodby RA, et al., The urine protein to creatinine ratio as a predictor of 24-hour urine protein excretion in type 1 diabetic patients with nephropathy. The Collaborative Study Group. Am J Kidney Dis 26:904-9, 1995; Schwab SJ, et al., Quantitation of proteinuria by the use of protein-to-creatinine ratios in single urine samples. Arch Intern Med 147:943-4, 1987; Steinhauslin F, & Wauters JP. Quantitation of proteinuria in kidney transplant patients: accuracy of the urinary protein/creatinine ratio. Clin Nephrol 43:110-5, 1995; Wilson DM, & Anderson RL. Protein-osmolality ratio for the quantitative assessment of proteinuria from a random urinalysis sample. Am J Clin Pathol 100:419-24, 1993; 및 Zelmanovitz T, et al.,. Proteinuria is still useful for the screening and diagnosis of overt diabetic nephropathy. Diabetes Care 21:1076-9, 1998]을 참조한다. 구체적으로, 1.0의 UPCR은 24시간 뇨 수집물 중 단백질 1.0 그램에 해당된다. 환자는 연구에의 참여가 허용되기 위해 UPCR < 1.0을 가져야 한다.

아래 규정되는 바와 같은 침습성 절차를 갖거나 또는 이러한 절차가 예상되는 환자: 베바시주맙/위약 요법 (주기 2)의 제1일 이전 28일 내의 주요 수술 절차, 개방 생검 또는 유의한 외상성 손상. 연구 과정 동안 예상되는 주요 수술 절차. 질환 진행 이전의 복부 수술 (개복술 또는 복강경검사), 예컨대 결장조루술 또는 장조루술 (종양감축 수술 전에, 그 사이에 또는 그 후에 수행됨), 또는 이차 추시 수술을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 베바시주맙/위약 요법 (주기 2)의 제1일 이전 7일 내의 코어 생검.

3 또는 4의 GOG 수행 등급을 갖는 환자.

임신 또는 수유 중인 환자.

연령이 18세 아래인 환자.

베바시주맙을 포함하여, 임의의 항-VEGF 약물을 사용한 사전 요법을 받은 환자.

위장 폐색의 임상적 증상 또는 징후를 갖거나 비경구 수분공급 및/또는 영양공급을 필요로 하는 환자.

의사의 소견으로 연구에 참여하지 못하게 될 다른 병력 또는 상태를 갖는 환자.

반응 및 진행은 이 연구에서 고형 종양에서의 반응 평가 기준 (RECIST) 위원회에 의해 제안된 국제 기준을 사용하여 평가될 것이다. 예를 들어, 문헌 [Therasse P, et al. New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors. European Organization for Research and Treatment of Cancer, National Cancer Institute of the United States, National Cancer Institute of Canada. J Natl Cancer Inst 92:205-16, 2000]을 참조한다. 종양 병변의 최대 직경 (단일차원 측정) 만의 변화를 RECIST 기준에서 사용하였다.

진행성 진행의 생물학적 마커로서의 CA-125: 종양-관련 당단백질 항원인 CA-125의 혈청 수준은 상피 난소암을 갖는 환자의 80%에서 상승하였다. 예를 들어, 문헌 [Bast et al., N. Engl. J. Med. 309:88307, 1983]을 참조한다. CA-125는 종종 빈번한 기준 상에서 요법에 대한 반응, 잔류 질환의 존재, 및 재발의 조기 증거를 확인하기 위해 모니터링하였다. 그러나, CA-125는 전적으로 종양 특이적이지 않고, 다양한 양성 상태, 예컨대 자궁내막증, 자궁 유섬유종 및 골반 염증에서 상승할 수 있고, 이는 특히 폐경 전의 여성에서 그러하다. 또한, CA-125의 수준은 가양성 및 가음성 경향 둘 다로서 종양 반응과 맞지 않을 수 있고; 이러한 부정확성에 대한 생물학적 제제의 영향은 확실하지 않다. 그럼에도 불구하고, 이는 환자 및 전문의가 재발성 또는 진행성 질환의 증거로서 요법후 CA-125의 점차적인 상승을 이해하고, CA-125를 기반으로 치료 결정을 내리게 될 표준 실시이다. 현재의 무작위화 시험은 (고형 종양의 관리에서 다른 표준 규정에 더하여) CA-125의 일련의 상승을 기반으로 진행성 질환을 규정하기 위한 보수적 공식을 사용할 것이나, 오직 초기 화학요법의 완료 후에 사용할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Guppy et al., Oncologists, 7:437043, 2002; Rustin et al., J. Clin. Oncol. 19:4054-7, 2001; Rustin, J. Clin. Oncol., 21:187-93, 2003; Rustin et al., Clin. Cancer Res. 10:3919-26, 2004; 및 Rustin et al., J Natl. Cancer Inst., 96:487-8, 2004]을 참조한다. 한 예에서, 혈청 CA-125를 기반으로 한 진행은 하기 3개의 조건 중 하나를 만족시킨다면 세포독성 화학요법의 완료 이후의 기간 동안에만 결정될 수 있다: 1) 상승된 CA-125 예비치료를 받고, CA-125가 정규화된 환자는 적어도 1주 간격의 2회 경우에 대한 정상 상한의 2배 이상의 CA-125의 증거를 보여주어야 하거나; 또는 2) 정규화된 적이 없는 상승된 CA-125 예비치료를 받은 환자는 적어도 1주 간격의 2회 경우에 대한 가장 낮은 값의 2배 이상의 CA-125의 증거를 보여주어야 하거나; 또는 3) 정상 범위의 예비치료에서 CA-125를 갖는 환자는 적어도 1주 간격의 2회 경우에 대한 정상 상한의 2배 이상의 CA-125의 증거를 보여주어야 한다.

결과

연구의 결과는 베바시주맙이 화학요법과 조합되고 유지 요법으로 계속되었을 때 일차 난소암에 효과적임을 입증한다. 이 조합은 증가하는 PFS에서 효과적이었다. 안전성의 예비 평가는 이전의 연구에서 언급된 베바시주맙 관련 유해 사례 (AE)를 확인하였다. PFS의 일차 분석은 도 2의 아암 III에서의 14.1개월에 비해 10.3 개월 (도 2의 아암 I)의 중앙 무진행 생존을 입증하였다. HR (95% CI)은 도 2의 아암 III에서의 0.717 (0.625, 0.824) (단측 p-값 (로그-랭크) < 0.001)에 비해 도 2의 아암 I에서 0.908 (0.795, 1.04) (단측 p-값 (0.08의 로그-랭크))이었다. 도 5를 참조한다. 차이는 통계적으로 유의하다. 치료 요법은 일반적으로 잘 허용되고, 유해 사례 (GI 천공 포함)는 이전의 베바시주맙 연구와 유사하였다. 도 3 및 도 4를 참조한다. 이는 이 집단에서의 이점을 입증하기 위한 제1 항혈관신생 요법이다. 도 6은 진행의 결정인자로서 CA-125를 사용하는 것의 분지를 설명한다. CA-125는 모노클로날 항체 (OC-125)에 의해 인식되는 고분자량 당단백질에 대한 항원 결정인자로, 면역원으로 난소암 세포주를 사용하여 생성된다. CA 125는 상피 난소 암종 및 다른 암을 갖는 환자를 모니터링하기 위한 혈청 마커로 평가되었다. 예를 들어, 참고문헌 [Gyn Oncol 38:373, 1990; Gyn Oncol 38:181, 1990; Amer J Ob Gyn 160:667, 1989; Amer J Ob Gyn 159:873, 1988; Amer J Ob Gyn 159:341, 1988; Ob Gyn 72:159, 1988; 및 Gyn Oncol 36:299, 1990] 및 본원의 설명을 참조한다. 도 7은 아암 I 대 아암 III의 하위군 분석을 설명한다.

실시예 2. 상피 난소암을 갖는 환자에서 표준 화학요법 (카르보플라틴 및 파클리탁셀)에 베바시주맙을 첨가하는, 무작위화 2-아암 다기관 부인과 암 그룹간 시험

결과는 카르보플라틴 및 파클리탁셀을 사용하는 표준 화학요법에 베바시주맙을 첨가하는 것의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 III상 무작위화 연구 (ICON7)로부터 제시된다. 일차 종점은 표준 화학요법에 베바시주맙을 첨가하는 것이 초기 수술 (용적축소 종양감축 수술 또는 환자가 국제 부인과 및 산과 연맹 (FIGO) IV기 질환을 갖는 경우에 생검)을 받았고, 질환 진행 이전에는 종양감축 수술이 고려되지 않을, 새로 진단받고 조직학적으로 확인된 고위험 FIGO I기 및 IIa기 (등급 3 또는 오직 투명 세포 암종) 및 FIGO IIb-IV기 (모든 등급 및 모든 조직학적 유형) 상피 난소, 난관 또는 원발성 복막 암을 갖는 여성에서 표준 화학요법 단독과 비교하였을 때 무진행 생존 (PFS)을 개선시키는지 여부를 결정하는 것이었다. 이차 종점은 전체 생존율 (OS), 반응률, 반응 지속 기간, 생물학적 무진행 간격 (증가하는 CA 125 또는 PFI_BIO에 의해 규정됨), 안전성 및 삶의 질을 포함하였다. ICON7은 표준 요법 (카르보플라틴 및 파클리탁셀)을 파클리탁셀 및 카르보플라틴과 조합하여 베바시주맙을 혼입시키는 1개의 연구 아암과 비교하는 2-아암 무작위화 임상 시험이었다 (도 8 참조). 총 1528명의 적격 여성이 시험에 참여하였다.

베바시주맙은 rhuMAb VEGF로 명명되는 뮤린 항-인간 VEGF 모노클로날 항체의 재조합 인간화 버전이다. 베바시주맙은 고형 종양을 갖는 환자에서 종양 성장 억제를 유도하기 위한 단일 작용제로 사용하기 위해 및 전이성 고형 종양을 갖는 환자에서 질환 진행까지의 시간을 지연시키기 위해 세포독성 화학요법과 조합하여 사용하기 위해 임상 개발이 진행되었다. 예를 들어, 문헌 [Presta LG, et al. Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody for the therapy of solid tumors and other disorders. Cancer Res 57:4593-9, 1997]을 참조한다.

환자 선택

ICON7은 초기 수술 (용적축소 종양감축 수술 또는 환자가 FIGO IV기 질환을 갖는 경우에 생검)을 받고, 질환 진행 이전에 종양감축 수술이 고려되지 않을, 새로 진단받고, 조직학적으로 확인된, 고위험 FIGO I기 및 IIa기 (등급 3 또는 오직 투명 세포 암종) 및 FIGO IIb-IV기 (모든 등급 및 모든 조직학적 유형) 상피 난소, 난관 또는 원발성 복막 암을 갖는 환자를 포함하였다. 측정가능한 및 측정가능하지 않은 질환을 갖는 환자가 적격이다. 환자는 본 시험에서 이들이 하기 기재된 바와 같은 포함 기준을 모두 충족시키고 배제 기준 어느 것에도 해당하지 않는다면 등록에 적격인 것으로 간주하였다:

환자 포함 기준:

● ≥ 18세 연령의 여성

● 최소 필요조건으로 질환 부위로부터 코어 생검을 수행한 (세포학은 단독으로 진단에 불충분함), 조직학적으로 확인된

○ 상피 난소암

○ 원발성 복막 암종 (유두상-장액성 조직학적 유형의 것이여야 함) 또는

○ 난관 암종

● 및 표 3의 기준을 만족시키는 것

임의의 단계의 투명 세포 암종을 갖는 환자가 하위유형과 관련된 보다 불량한 예후로 인해 적격이었다. 수술만으로 치료된 이전의 초기 단계의 상피 난소 또는 난관 암종을 가졌던 환자는 추가의 중간 종양감축 요법이 질환 진행 이전에 계획되지 않는 한 배골반 재발의 진단 시점에서 적격이다.

이 시험의 목적을 위해, 투명 세포 암종은 현지 병리학자에 의해 투명 세포 암종으로 제시된 또는 보고된 ≥ 50% 투명 세포 요소로 규정되었다.

● 환자는 이미 GCIG 컨퍼런스 컨센서스 스테이트먼트 (GCIG Conference Consensus Statement)에 따라 최대 수술적 종양감축의 도움을 받아 난소암 관리에 경험이 있는 외과의에 의해 수술적 용적축소를 받았어야 한다. 질환 진행 이전에 수술적 용적축소가 계획되지 않아야 한다.

○ 초기 수술적 용적축소가 적절하지 않았던 III기 및 IV기 질환을 갖는 환자가 여전히 적격일 것이다(단,

■ 환자는 조직학적 진단을 받았고,

■ 질환 진행 이전에 용적축소 수술이 예견되지 않았다)

○ 환자는 종양감축 수술 8주 내에 전신 요법을 시작할 수 있어야 한다. 환자가 아암 연구를 위해 무작위화되면, 베바시주맙의 제1 용량은 조사원이 수술 4주 내에 화학요법을 시작하기로 결정한 경우에는 생략되어야 한다.

○ 환자가 2가지 수술, 예를 들어 양성 낭종일 것으로 생각되는 것을 제거하기 위한 초기 수술에 이어 난소 종양의 공식적인 병기결정 및 최대 용적축소를 위한 이차 부인과종양 수술을 받았다면, 이차 수술 일자를 수술 문서화하고, 일차 전신 치료는 상기 일자 8주 내에 시작하였다. 진단 일자는 난소암이 진단받은 초기 수술 일에 기록하였다.

● ECOG 수행 상태 (PS) 0-2

● 기대 수명 > 12 주

● 적절한 골수 기능 (모든 파라미터가 수술후 혈액에 대해 확인/계산되었다) (무작위화 이전 28일 내에)

○ 절대 호중구 수 (ANC) ≥ 1.5 x 10⁹개/l

○ 혈소판 (PLT) ≥ 100 x 10⁹개/l

○ 헤모글로빈 (Hb) ≥ 9 g/dl (수혈후일 수 있다)

● 적절한 응고 파라미터 (모든 파라미터가 수술후 혈액에 대해 확인/계산되었다) (무작위화 이전 28일 내에)

○ 활성화된 프로트롬빈 시간 (APTT) ≤ 1.5 x ULN; 또는,

○ 국제 정규화 비 (INR) ≤ 1.5 (INR의 측정은 환자가 와파린 치료를 받았다면 의무적이다)

● 적절한 간 기능 (모든 파라미터가 수술후 혈액에 대해 확인/계산되었다) (무작위화 이전 28일 내에)

○ 혈청 빌리루빈 (BR) ≤ 1.5 x ULN

○ 혈청 트랜스아미나제 ≤ 2.5 x ULN

● 단백뇨에 대한 뇨 딥스틱 < 2+. 뇨 딥스틱 ≥ 2+이면, 24시간 뇨는 24시간에서 ≤ 1 g의 단백질을 입증하여야 한다

● 혈청 크레아티닌 ≤ 2.0mg/dl 또는 ≤ 177μmol/l로 규정된 적절한 신장 기능

환자 배제 기준:

● 비-상피 난소암 (악성 혼합 뮬러 종양 포함)

● 경계성 종양 (낮은 악성 잠재성의 종양)

● 계획된 복강내 세포독성 화학요법

● 난소암에 대한 이전 전신 요법 (예를 들어, 화학요법, 모노클로날 항체 요법, 티로신 키나제 억제제 요법 또는 호르몬 요법)

● 베바시주맙의 예상되는 제1 투여 이전 4주 내의 수술 (개방 생검 포함) (베바시주맙이 화학요법의 제1 주기로부터 생략될 수 있다는 사실 허용)

● 연구 치료의 시작으로부터 58주 기간 동안 (치료 54주 플러스 베바시주맙 제거를 허용하는 추가의 4주) 임의의 계획된 수술

● 제어되지 않은 고혈압 (휴식 5분 후에 앉은 자세의 환자에서 혈압 측정치를 기록하였다) (항고혈압 요법에도 불구하고 BP > 150/100mmHg의 지속적인 상승)

● 복부 또는 골반에 대한 임의의 이전 방사선요법

● 베바시주맙의 잠재적인 제1 투여전 4주 동안의 유의한 외상성 손상

● 뇌 전이 또는 척수 압박의 병력 또는 임상적 의심. 뇌 전이가 의섬되는 경우에 뇌의 CT/MRI이 의무적이다 (무작위화 이전 4주 내에). 척수 압박이 의심되는 경우에 척수 MRI가 의무적이다 (무작위화 이전 4주 내에)

● 표준 의학 요법으로 적절하게 치료되지 않는 한, 중추 신경계 (CNS) 질환의 신경학적 조사시의 병력 또는 증거, 예를 들어 제어되지 않은 발작

● 무작위화 이전 6개월 내의 이전의 뇌혈관 사고 (CVA), 일과성 허혈 발작 (TIA) 또는 지주막하 출혈 (SAH)

● 연구 지속기간 및 그 후에 적어도 6개월 동안 자발적으로 적절한 피임 (경구 피임제, 자궁내 피임 기구, 또는 살정자성 젤리 또는 수술적 불임과 연관된 차단 피임 방법)을 사용하지 않은 출산 가능성이 있는 가임 여성

● 임산부 또는 수유부

● 마우스 CA 125 항체에 대한 이전의 노출

● 임의의 다른 시험 작용제를 사용한 치료, 또는 이 시험에 들어가기 전 30일 내에 다른 임상 시험에의 참여

● 자궁경부 및/또는 기저 세포 피부 암의 원 위치에서 적절하게 치료된 암종 및/또는 하기 특정된 바와 같은 초기 자궁내막 암종을 제외한, 무작위화 이전 5년 내의 난소암 이외의 악성 종양. 환자는 이후에 재발의 증거 없이 5년 넘게 전에 진단받은 다른 악성 종양, 예를 들어 유방 또는 결장직장 암종에 대한 이전의 아주반트 화학요법을 받았을 수 있다

● 동시발생 원발성 자궁내막 암종을 갖거나, 또는 원발성 자궁내막 암종의 과거 병력이 있는 환자는 자궁내막 암종을 기술하기 위한 하기 기준을 모두 충족시키지 않는다면 배제시켰다

○ 병기 ≤ Ib

○ 오직 표재성 자궁근층 침습

○ 림프관 침습 없음

○ 잘 분화되지 않은 것 (즉, 등급 3 또는 유두상 장액성 또는 투명 세포)이 없음

● 베바시주맙 및 그의 부형제 또는 화학요법 (크레모포르 포함)에 대한 공지된 과민증

● 비치유 상처, 궤양 또는 골절. 안면 열개 또는 감염의 증거 없이 이차 목적에 의해 치유되는 과립화 절개부를 갖는 환자가 적격이지만, 3주마다 상처 조사가 필요하다

● 혈전성 또는 출혈성 장애의 병력 또는 증거

● 임상적으로 유의한 심혈관 질환 (하기 포함:

○ 무작위화 6개월 내의 심근경색 또는 불안정형 협심증

○ 뉴욕 심장 학회 (NYHA) ≥ 등급 2 울혈성 심부전 (CHF)

○ 의약에도 불구하고 잘 제어되지 않은 심장 부정맥 (속도-제어된 심방 세동을 갖는 환자가 적격이었다)

○ 등급 ≥ 3 말초 혈관 질환 (즉, 징후적이고, 복구 또는 변경을 필요로 하는 일일 생존의 활성 [ADL]을 방해함)

● 현재 또는 최근 (주기 1 치료 이전 10일 내에)의 아스피린 > 325 mg/일의 장기 사용 (저용량 아스피린 (< 325mg/일)은 베바시주맙 플러스 화학요법을 사용한 경우에 등급 3-4 출혈의 위험을 증가시키는 것으로 나타나지 않았고, 이에 따라 동맥 혈전색전성 사건의 위험이 있는 환자에서 예방적 저용량 아스피린의 사용은 이 시험 프로토콜에서 금지되지 않았다)

● 현재 또는 최근 (주기 1 치료 이전 10일 내에)의 치료 목적을 위한 전체-용량 경구 또는 비경구 항응고제 또는 혈전용해제의 사용 (라인 개방 제외, INR이 1.5 아래로 유지되어야 하는 경우)

● 기존의 감각 또는 운동 신경병증 ≥ 등급 2

● 시험 약물의 사용을 금하거나 또는 환자가 치료-관련 합병증에 대해 높은 위험에 있도록 하는 질환 또는 상태의 타당한 의심을 제공하는 임의의 다른 질환, 대사 기능장애, 신체 검사 발견사항 또는 실험실 발견사항의 증거

RECIST 기준을 이용하는 측정치를 사용한 CT 또는 MRI 스캔에 의한 종양 평가를 연구 아암 상의 환자에 대한 화학요법의 3 및 6 주기 후에, 및 상기 환자에 대한 치료 첫해에서 9개월 및 12개월 부근에 또는 주기 12 및 주기 18 후에 수행하였다. 시험의 두번째 및 세번째 해에서 종양 평가를 6개월마다 반복한 후에, 임상적으로 지시된 바와 같이 반복하였다. 이들 스캔은 기준선 스캔에 대해 환자가 최적으로 또는 최적 아래로 용적축소되는지에 관계없이 및 측정가능한 질환이 있는지 또는 없는지에 관계없이 수행하였다.

환자는 모든 화학요법 주기를 시작할 때 및 이어서 시험 첫해 동안 6주마다 임상적으로 평가되고 CA 125 측정되었다. 시험의 두번째 및 세번째 해에서 환자는 3개월마다 평가되고 CA 125 측정되었다. 네번째 및 다섯번째 해에서 환자는 6개월마다 임상적으로 평가되고 CA 125 측정되었다. 이후에는 해마다 평가하였다. CA 125 기준 단독을 기반으로 한 진행은 CT 스캔으로 확인하였다. 이것이 음성이면, 이는 의심되는 임상적 진행의 시점에 반복하였다.

프로토콜 규정된 질환 진행의 증거 후에, 환자에 대한 시험에서 이들의 사후 관리의 처음 5년 동안은 6개월마다 및 그 이후에는 매해 생존 및 후속 치료를 수행하였다.

정규 신체 검사 및 정기 혈액 시험을 치료 동안 수행하여 환자 안전성을 모니터링하였다. 삶의 질 (QoL)은 모든 화학요법 주기를 시작할 때, 첫해가 끝날 때까지 6주마다, 이어서 진행에 대한 치료를 시작하거나 또는 두번째 해가 끝날 때까지 3개월 마다 EORTC QLQ C-30+OV-28 및 EQ-5D 설문지를 사용하여 평가하였다. 추가의 QoL 형태가 무작위화 3년 후에 여전히 살아있는 모든 환자에 의해 완성되었다. 유해 사례 및 의료 자원 사용은 연구 치료 및 사후 관리 기간 동안 문서화되었다.

결과

연구의 결과는 베바시주맙이 화학요법과 조합되고, 12개월의 전체 지속기간 동안 유지 요법으로 계속되었을 때 일차 난소암에 효과적임을 입증한다. 이 조합은 무진행 생존 (PFS)을 증가시키는데 효과적이었다. PFS의 일차적 분석은 화학요법 플러스 베바시주맙 아암 (CPB7.5+)에서의 18.3개월에 비해 화학요법 아암 (CP)에서 16개월의 중앙 PFS를 입증하였다 (p-값 (로그-랭크 시험) 0.0010). 위험비 (HR) (95% CI)는 0.79 (0.68; 0.91)였다. 차이는 유의하였다. PFS 분석은 도 9 및 10에 요약된다.

기준선 특성은 다음과 같았다:

베바시주맙에 대한 유해 사례의 예비 평가는 이전의 연구와 일치하였다.

실시예 3. 백금 감수성 재발성 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 갖는 환자에서 카르보플라틴 및 겜시타빈 플러스 베바시주맙의 III상 다기관 무작위화 블라인드 위약-제어 시험

상피 난소 암종 (EOC) 및 그의 조직학적 및 임상적 등가물, 원발성 복막 암종 (PPC) 및 난관 암종은 미국에서 한 해에 대략 25,000개 사례의 발생률로 일어나고, 연간 대략 14,000명의 사망을 초래한다. 질환은 초기 단계에 무증상인 경향이 있기 때문에, 대다수의 환자에서 처음에 진행된 (III기 또는 IV기) 질환이 발견될 것이다. 다수의 화학요법제, 특히 탁산 및 백금 화합물에 대한 EOC, PPC, 및 난관 암종의 감수성에도 불구하고, III기 또는 IV기 질환이 존재하는 환자의 20%-30%만이 5년 생존할 것이다. 백금 감수성 재발성 암 (백금 기반 화학치료 요법의 완료로부터 6개월이 넘은 다음의 질환의 재발로 규정됨)을 갖는 환자는 화학요법에 대해 보다 높은 초기 반응률을 갖지만; 이러한 환자가 치료가능한 것으로 고려되지 않는다. 최근에, 미국 식품 의약품국 (FDA)은 재발성 백금 감수성 질환에 대해 카르보플라틴과 조합된 겜시타빈 화학요법을 승인하였다. 카르보플라틴 및 겜시타빈은 백금 감수성 질환을 갖는 환자에서 카르보플라틴 단독에 비해 통계적으로 유의한 무진행 생존 (PFS)을 나타내었다. 예를 들어, 문헌 [Pfisterer, Plante M, Vergote I, et al. Gemcitabine plus Carboplatin compared with carboplatin in patients with platinum-sensitive recurrent ovarian cancer: an intergroup trial of the AGO-OVAR, the NCIC CTG, and the EORTC GCG. J. Clin Oncol, 2006;24:4699-707]을 참조한다.

혈관신생은 EOC의 발생 및 이후의 진행 둘 다에서 중요한 요인인 것으로 나타났다. 요네다(Yoneda) 및 동료 (1998)들은 EOC의 이종이식 모델에서 종양 성장률이 혈관 밀도에 정비례하고, EOC의 좋지 않은 결과와 관련된 특징인 악성 복수의 발생이 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)와 관련된다는 것을 입증하였다. 예를 들어, 문헌 [Yoneda J, Kuniyasu H, Crispens MA, et al. Expression of angiogenesis-related genes and progression of human ovarian carcinomas in nude mice. J Natl Cancer Inst. 1998 Mar 18;90:447-54]을 참조한다. 다른 연구는 EOC에서의 VEGF 발현과 미세혈관 밀도의 관련성을 입증하였다. 또한, 연구는 EOC에서 면역조직화학에 의한 CD31 (혈관 내피의 마커)의 발현 밀도가 생존율과 반비례한다는 것을 보여주었다.

본 실시예는 백금 감수성 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 갖는 여성에서 겜시타빈 (1000 mg/m2, 제1일 및 제8일, 21일마다)과 카르보플라틴 (곡선 아래 면적 [AUC] 4, 제1일, 21일마다)과 조합되어 투여되는 베바시주맙 (15 mg/kg, 제1일, 21일마다)의 효능 및 안전성을 평가하는 위약-제어 무작위화 다기관 III상 연구를 기재한다. 약 480명의 환자가 대략 2.5년의 기간에 걸쳐 등록하였다. 환자를 위약과 조합된 카르보플라틴 및 겜시타빈 대 베바시주맙과 조합된 카르보플라틴 및 겜시타빈으로 무작위로 분류하였다. 또한, 무작위화에서, 환자를 백금 감수성 질환 (마지막 백금 기반 치료로부터 6-12개월에서의 재발 대 마지막 백금-기반 치료로부터 > 12개월에서의 재발) 및 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종에 대한 종양감축 수술 (수술을 수행함 대 수술을 수행하지 않음)에 의해 계층화되었다.

연구는 하기 제시된 2가지 아암으로 이루어진다. 또한 도 11을 참조한다.

● 아암 1: 카르보플라틴 (AUC 4 IV) 및 겜시타빈 (1000mg/m2) 화학요법 (6 주기 내지 20 주기)에 이어 위약

● 아암 2: 카르보플라틴 및 겜시타빈 화학요법 (6 주기 내지 10 주기)과 조합된 아바스틴 (15mg/kg, 6 주기 내지 10 주기 동안)에 이어 질환 진행까지의 아바스틴 (15 mg/kg) 단독의 계속된 사용

카르보플라틴 용량은 추정된 사구체 여과율 (GFR)을 사용하여 칼버트 식에 따라 농도 x 시간의 표적 AUC에 도달하도록 계산되었고; 예를 들어 본원에서의 목적을 위해, GFR은 크레아티닌 제거율과 동등한 것으로 간주된다

카르보플라틴 (AUC) 투약을 위한 칼버트 식

전체 용량 (mg) = 표적 AUC (mg/ml/분) x [GFR (ml/분) 25]

크레아티닌 제거율은 제도적 지침에 따라 계산될 수 있다.

환자 선택

백금-기반 화학요법 > 6개월 이후에 재발된 (첫번째 재발) 난소의 상피 암종, PPC, 또는 난관 암종을 갖는 환자가 본 연구에 적격일 것이다. 추가의 특정 포함 및 배제 기준이 아래 열거된다.

환자 포함 기준:

환자는 연구 진입에 적격이기 위해 하기 기준을 만족시켜야 한다:

● 서명된 피험자 동의서

● 연령 ≥ 18 세

● 백금 기반 화학요법 > 6개월 후에 재발된, 조직학적으로 문서화된 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종

● 환자는 재발성 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종을 가져야 한다. 이는 상피 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종의 첫번째 재발이어야 한다.

● 적격한 조직학적 세포유형의 예는 다음을 포함한다: 장액성 선암종, 자궁내막양 선암종, 점액성 선암종, 미분화 암종, 투명 세포 선암종, 이행 세포 암종, 악성 브레너 종양 또는 달리 특정되지 않은 선암종

● 재발성 셋팅에 사전 화학요법이 없음

● 적어도 하나의 차원 (기록된 최장 차원)에서 정확하게 측정될 수 있는 적어도 하나의 병변을 갖는 변형된 RECIST에 따른 측정가능한 질환

● 각각의 측정가능한 병소는 통상의 기술, CT 및 자기 공명 영상화 (MRI)에 의해 측정될 때 20 mm이거나, 또는 나선식 CT에 의해 측정될 때 10 mm이어야 한다.

● 사전 방사선 요법 또는 수술로부터 28일 초과 및 이로부터의 회복됨

● ECOG 수행 상태 0 또는 1

● 피임 (출산 가능성이 있는 여성을 위한)의 효과적인 수단의 사용

● 연구 및 사후 관리 절차를 따르는 능력

환자 배제 기준

하기 기준 중 어느 하나를 만족시키는 환자는 연구 진입으로부터 배제될 것이다:

● 질환-특이적 배제

○ 재발성 난소, 원발성 복막 또는 난관 암종에 대한 사전 화학요법 치료: 호르몬 요법 (즉 프로게스테론, 에스트로겐, 항 에스트로겐, 아로마타제 억제제)은 사전 화학치료 요법을 고려하지 않을 것이다. 수반되는 항신생물성 항호르몬 요법 (타목시펜, 아로마타제 억제제 등 포함)은 연구 치료에의 환자의 참여를 허용하지 않는다. 저용량 (생리학적) 에스트로겐 호르몬-대체 요법 (HRT)이 주어질 수 있다.

○ 복부 누공, 위장 천공 또는 복강내 농양의 병력

○ GI 폐색의 임상적 증상 또는 징후를 갖거나 또는 비경구 수분공급, 비경구 영양공급 또는 튜브 섭식을 필요로 하는 환자

○ 천자 또는 최근의 수술 절차에 의해 설명되지 않는 복부 자유 공기의 증거를 갖는 환자

● 일반적인 의학적 배제

○ < 12주의 기대 수명

○ 실험적 약물 연구에의 현재, 최근 (주기 1의 제1일 4주 내에)의, 또는 계획된 참여

○ 스크리닝 임상 실험실 값

■ 과립구 수 < 1500개/μL

■ 혈소판 수 < 100,000개/μL

■ 헤모글로빈 < 8.5 g/dL (헤모글로빈이 수혈 또는 에리트로포이에틴 또는 다른 승인된 조혈 성장 인자에 의해서 지원될 수 있음)

■ 혈청 빌리루빈 > 2.0 x 정상의 상한 (ULN)

■ 알칼리성 포스파타제, 아스파르테이트 트랜스아미나제 (AST) 및/또는 알라닌 트랜스아미나제 (ALT) > 2.5 x ULN (간 전이를 갖는 환자의 경우 AST, ALT > 5 x ULN)

■ 혈청 크레아티닌 ≥ 1.6

■ 국제 정규화된 비 (INR) > 1.5 및/또는 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) > 1.5 x ULN (항응고 요법을 받은 환자는 제외됨)

■ 전체-용량 와파린 상의 환자의 경우, 범위내 INR (일반적으로 2 및 3 사이) 및 PTT < 1.2 x ULN

○ 주기 1의 제1일의 5년 내의 다른 악성종양 병력 (전이 또는 사망의 위험을 무시해도 될 정도의 종양, 예컨대 충분히 제어된 피부의 기저-세포 암종 또는 편평 세포 암종 또는 자궁경부의 상피내 암종은 제외됨)

○ 연구 약물의 사용을 금하거나 또는 결과의 해석에 영향을 미칠 수 있거나 또는 환자의 치료 합병증에 대한 위험을 높일 수 있는 질환 또는 상태에 대해 합리적인 의심을 부여하는 임의의 다른 질환, 대사 기능장애, 신체 검사 발견사항, 또는 임상 실험실 발견사항

● 베바시주맙-특이적 배제

○ 전신 베바시주맙 (아바스틴^®) 또는 다른 VEGF 또는 VEGF 수용체 표적화된 작용제 사용의 병력

○ 부적절하게 제어된 고혈압 (항고혈압 의약에 대해 수축기 혈압 > 150 mmHg 및/또는 확장기 혈압 > 100 mmHg으로 규정됨)

○ 고혈압 위기 또는 고혈압성 뇌병증의 이전 병력

○ 뉴욕 심장 학회 클래스 II 또는 이보다 큰 CHF

○ 주기 1의 제1일 (첫번째 베바시주맙/위약 주입일) 이전 6개월 내의 심근경색 또는 불안정형 협심증의 병력

○ 연구 등록 이전 6개월 내의 졸중 또는 TIA의 병력

○ 치료된 뇌 전이를 제외한 공지된 CNS 질환

■ 치료된 뇌 전이는 스크리닝 기간 동안 임상 검사 및 뇌 영상화 (MRI 또는 CT)에 의해 확인되는 바와 같이, 치료 후에 진행 또는 출혈의 증거가 없고, 덱사메타손에 대한 진행 중의 요구가 없는 것으로 정의된다. 이들 전이는 뇌간, 중뇌, 뇌교, 연수 또는 연수막에 위치하지 않아야 한다. 뇌 전이를 위한 치료는 전체 뇌 방사선요법 (WBRT), 방사선수술 (감마 나이프, LINAC, 또는 등가물) 또는 치료 전문의에 의해 적절한 것으로 간주되는 조합을 포함할 수 있다. 제1일 이전 3개월 내에 수행된 뇌신경외과 절제술 또는 뇌 생검에 의해 치료된 CNS 전이를 갖는 환자는 제외될 것이다.

○ 유의한 혈관 질환 (예를 들어, 대동맥류, 대동맥 박리)의 병력

○ 주기 1의 제1일 이전 6개월 내의 최근 말초 동맥 혈전증

○ 주기 1의 제1일 이전 1개월 내의 객혈 (에피소드 당 밝은 적색 혈액의 ≥ 1/2 티스푼)의 병력

○ 출혈성 소질 또는 유의한 응고병증의 증거 (치료적 항응고의 부재)

○ 주기 1의 제1일 이전 28일 내의 주요 수술 절차, 개방 생검 또는 유의한 외상성 손상, 또는 연구 과정 동안 주요 수술 절차에 대한 필요의 예측

○ 주기 1의 제1일 이전 7일 내의 코어 생검, 또는 혈관 접근 장치의 배치를 제외한, 다른 부수적 수술 절차

○ 심각한, 비치유 상처; 활성 궤양; 또는 치료되지 않은 골절

○ 스크리닝에서 ≥ 1.0의 UPCR에 의해 입증되는 바와 같은, 스크리닝에서의 단백뇨

○ 베바시주맙의 임의의 성분에 대한 공지된 과민증

○ 임신 (양성 임신 테스트) 또는 수유

● 출산 가능성이 있는 환자는 피임의 효과적인 수단을 이용하여야 한다.

본 연구, OCEANS는 실시예 1 (GOG 0218) 및 실시예 2 (ICON7)로부터의 상이한 환자 집단을 등록하였고; 이전에 치료된, 백금 감수성 난소암을 갖는 여성이 이 시험에 적격이었다. 난소암을 갖는 여성은 일차 치료로 백금-기반 화학요법을 받을 수 있다. 백금-기반 화학요법의 마지막 용량의 투여 및 질환 복귀 (재발) 사이의 시간은 다음 치료에 사용되는 화학요법의 선택을 돕는데 사용하였다. 여성은 초기 백금-기반 화학요법을 완료하고 6개월이 넘은 후에 질환이 복귀하면 "백금 감수성" 난소암을 갖는다. 난소암이 초기 백금-기반 화학요법을 완료하고 6개월 내에 복귀하면 이는 "백금-내성"으로 여겨진다.

결과

난소암을 갖는 여성에서 베바시주맙 플러스 화학요법의 이러한 III상 연구는 그의 일차 종점에 도달하였다. 연구의 목적은 이전에 치료된 난소암을 갖는 여성에서, 화학요법 단독에 비해, 표준 화학요법에 베바시주맙을 첨가하는 것에 이어 질환 진행까지의 베바시주맙 단독의 확장된 사용의 효능 및 안전성을 평가하는 것이었다. 연구는 베바시주맙 플러스 화학요법에 이어 질환 진행까지의 베바시주맙 단독의 계속된 사용이 화학요법 단독에 비해 이전에 치료된 (재발성) 백금 감수성 난소암을 갖는 여성에서 질환이 악화되지 않고 살아있는 시간 (무진행 생존 또는 PFS)을 증가시킨다는 것을 보여주었다. PFS는 무작위화로부터, 어느 것이 먼저 일어나든지 조사원에 의해 결정된 바와 같은 질환 진행 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의된다. PFS의 일차 종점은 연구 조사원에 의해 평가되었다. 측정가능한 질환은 조사원이 예를 들어 연구 과정 전반에 걸쳐 9주마다 변형된 RECIST (문헌 [Therasse et al. 2000])를 이용하여 평가하였다. 예를 들어, 문헌 [Therasse P, Arbuck SG, Eisenhauser EA, et al. New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors. J Natl Cancer Inst 2000;92:205-1]을 참조한다. 이차 종점은 전체 생존율 (OS), 반응률, 반응 지속기간 및 안전성을 포함하였다. 어떠한 새로운 안전성 발견이 관찰되지 않았고, 유해 사례는 베바시주맙의 이전의 피보탈 시험에서 관찰된 것과 일치하였다.

SEQUENCE LISTING <110> Dupont, Jakob Irl, Cornelia <120> ANTI-ANGIOGENESIS THERAPY FOR THE TREATMENT OF OVARIAN CANCER <130> P4411R1 <141> 2011-02-22 <150> US 61/439,819 <151> 2011-02-04 <150> US 61/360,059 <151> 2010-06-30 <150> US 61/351,231 <151> 2010-06-03 <150> US 61/307,095 <151> 2010-02-23 <160> 2 <210> 1 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is Synthesized <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr 50 55 60 Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser 95 100 105 Ser His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 110 115 120 Val Ser Ser <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Sequence is Synthesized <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser 20 25 30 Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Val Leu Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys Arg

Claims (47)

1. 유효량의 항-VEGF 항체 및 이어지는 항-VEGF 항체 단일요법을 포함하는 백금-감수성 재발성 난소, 난관 또는 원발성 복막 암으로 진단받은 환자를 치료하기 위한 제약 조성물이며, 항-VEGF 항체가 베바시주맙이고, 치료는 환자의 무진행 생존을 효과적으로 연장시키는 것인, 카르보플라틴 및 겜시타빈을 포함하는 화학요법제와 조합되어 백금-감수성 재발성 난소, 난관 또는 원발성 복막 암으로 진단받은 환자를 치료하기 위한 제약 조성물.
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13. 제1항에 있어서, 환자의 무진행 생존이 화학요법제만으로 치료된 환자와 비교하였을 때 적어도 3.8개월 이상 연장되는 것인 제약 조성물.
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16. 제1항에 있어서, 카르보플라틴이 21일 주기의 제1일에 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC)이 4, 또는 21일 주기의 제1일에 AUC가 6이 되도록 투여되는 것인 제약 조성물.
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18. 제1항에 있어서, 겜시타빈이 21일 주기의 제1일 및 제8일에 1000 mg/m²으로 투여되는 것인 제약 조성물.
19. 제1항에 있어서, 베바시주맙이 21일 주기의 제1일에 15 mg/kg으로 투여되는 것인 제약 조성물.
20. 항-VEGF 항체 조성물, 및 상기 항-VEGF 항체 조성물을 겜시타빈 및 카르보플라틴과 조합하여 사용하고 이어서 항-VEGF 항체 단일 요법을 사용하기 위한 지침서를 포함하는 포장물을 포함하며, 항-VEGF 항체가 베바시주맙이고, 여기서 지침서는 겜시타빈 및 카르보플라틴 요법 및 항-VEGF 항체를 투여받은 환자에 대한 무진행 생존이 증가함을 설명하고 있는 것인, 인간 환자에서 백금-감수성 재발성 난소, 난관 또는 원발성 복막 암을 치료하기 위한 키트.
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23. 제20항에 있어서, 환자가 III기 또는 IV기 난소암을 갖는 것인 키트.
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45. 제1항에 있어서, 환자가 III기 또는 IV기 난소암으로 진단받은 것인 제약 조성물.
46. 제1항에 있어서, 환자가 난관암으로 진단받은 것인 제약 조성물.
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