KR101837691B1 - 삼칠근 추출물을 함유하는 항바이러스용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 삼칠근 추출물을 함유하는 조성물은 항바이러스 활성을 나타내어, 박테리아 및 바이러스 감염성 질환의 예방 및 치료용으로 적용될 수 있고, 면역이 저하되거나 면역이 억제된 환자의 면역력 증진 및 조절을 위한 의약이나 건강기능식품 및 동물의 항질병 강화를 목적으로 하는 항바이러스용 사료 등으로 광범위하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 약학, 건강기능식품 또는 사료 조성물로 이용될 수 있는 삼칠근 추출물을 함유하는 항바이러스 조성물에 관한 것이다.
바이러스(virus)는 라틴어로 독성물질을 의미하며, 세균여과지(0.22㎛)를 통과하는 일군의 감염형 병원성 입자이다. 바이러스는 숙주세포의 종류에 따라 박테리오파지, 식물 바이러스, 동물 바이러스로 분류하기도 하며, 핵산의 종류에 따라 DNA 바이러스, RNA 바이러스로 분류할 수 있다. 최근 신종 플루, AI 및 구제역 등 다양한 바이러스 질병이 사회적으로 큰 문제를 일으켰으며, 이에 따라 바이러스 질병의 효과적인 대책에 대한 고민이 사회적으로 큰 관심을 불러일으키고 있다.
현재 바이러스성 질병을 예방하기 위한 가장 좋은 방법은 백신접종이지만, 바이러스에 의한 질병의 경우, 많은 바이러스 혈청형(아형) 생성 등에 따른 백신의 효율성 문제가 제기되고 있다. 이러한 백신의 문제점을 보완해 줄 수 있는 바이러스 감염 예방 물질의 개발 및 보급은 중요한 사항이며, 따라서, 바이러스에 대한 예방제제의 발굴 및 개발은 중요한 제제 개발 방법이 될 수 있다.
인플루엔자바이러스의 증식을 억제하는 대표적인 항바이러스 제제로는 아만타딘(amantadine)과 리만타딘(rimantadine)이 있으나, 이들 두 가지 항바이러스 제제들은 혈청형 A형 인플루엔자바이러스에만 효과적이며, M2 단백질이 없는 혈청형 B형 인플루엔자바이러스에는 효과가 없는 것으로 확인되었다(Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1998). 또한, 아만타딘과 리만타딘은 사용 시 인플루엔자바이러스 M2 단백질의 이온채널기능에 영향을 미치지 못하는 변이 바이러스의 출현이 매우 쉽게 일어나는 단점이 있는 것으로 확인되고 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 16종의 모든 혈청형 A형 인플루엔자바이러스와 혈청형 B형 인플루엔자바이러스에 효과적인 항바이러스 제제로 자나미비르(zanamivir)와 오셀타미비르(oseltamivir)가 개발되었다. 그러나 자나미비르는 흡입 및 정맥 투여해야 하는 단점이 있으며, 오셀타미비르는 경구투여가 가능하나 최근 내성 바이러스의 출현 보고(세계 보건기구 (WHO), 2010)와 경구투여 시 구토와 현기증 등의 부작용이 있어 단점으로 지적되고 있다.
또한, 뉴캐슬병 바이러스에 대한 백신은 크게 생독 백신과 사독 백신으로 구분된다. 가장 널리 이용되어온 대표적인 뉴캐슬병 생독 백신주인 B1주 와 La Sota주(Clone주 포함)는 백신 접종 반응을 유발하는 것으로 알려져 있다(월간 양계 연구 No.209, 2004년 4월호). 전 세계적으로 사용되고 있는 뉴캐슬병 사독 백신인 다가 혼합 사독 오일 백신은 1회 백신 접종으로 3종 이상의 질병이 동시에 예방될 수 있으나, 산란계 농장의 경우 면역력 저하로 인한 뉴캐슬병 발생 피해 사례가 늘어나고 있다.
이러한 상황 하에서, 최근 해외 및 국내에서 기존의 항바이러스 제제의 단점을 극복하고자 하는 많은 노력들이 이루어지고 있다. 그 중의 하나로 국내에서는 생약 추출물 및 식물 추출물을 대상으로 항바이러스 효능에 대한 연구가 진행 중이기는 하지만, 아직까지는 미비한 실정이다. 따라서, 기존의 항바이러스 제제의 단점을 극복하여 독성 및 부작용이 거의 없이 항바이러스 활성을 발휘할 수 있는 생약 추출물을 유효성분으로 하는 조성물의 개발이 필요한 실정이다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자는 항바이러스 효과를 나타내면서 부작용이 적고 인체에 무해한 천연물을 찾고자 예의 노력한 결과, 삼칠근 추출물이 인플루엔자, 수포성구내염 및 뉴캐슬병바이러스에 대한 높은 항바이러스 활성을 가지며, 전염증성 사이토카인을 강하게 유도하는 것을 확인하고, 이를 이용하여 약제 또는 식품에 적용할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 삼칠근(Notoginseng Radix) 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 삼칠근(Notoginseng Radix) 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 삼칠근(Notoginseng Radix) 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 삼칠근(Notoginseng Radix) 추출물을 포함하는 인플루엔자, 수포성구내염 및 뉴캐슬병으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 바이러스성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 삼칠근 추출물(Notoginseng Radix)을, 인간을 제외한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 삼칠근(Notoginseng Radix) 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어, “삼칠근(Notoginseng Radix)”이란, 두릅나무과에 속하는 중국의 운남성과 광서성 등지에서 재배되고 자생하는 식물이다. 본초강목에는 삼칠, 토삼칠, 금불환으로, 본초용법에는 삼삼칠, 신씨본초학에는 죽절삼칠 등의 여러 이름으로 불리며, 신체 내외의 모든 출혈에 적용하는 지혈의 아주 중요한 약제로 이용된다.
본 발명에서 상기 삼칠근은 상업적으로 판매되는 것을 구입하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 용어, “추출물”이란, 삼칠근을 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물 또는 분획물은 구체적으로 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 삼칠근 추출물에 있어서, 상기 삼칠근을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있으며, 알코올을 용매로 사용하는 경우에는 일 예로서 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다. 다른 예로서 본 발명의 삼칠근 추출물은 구체적으로 에탄올 추출물일 수 있다.
또한, 상기 추출물은 추출 또는 분획 과정을 수행한 이후, 감압 여과 과정을 수행하거나 추가로 농축 및/또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거할 수 있으며, 상기 수득한 삼칠근 추출물은 사용 시까지 급속 냉동 냉장고에 보관할 수 있다.
본 발명의 용어, “분획물”이란, 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 삼칠근을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexan), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 구체적으로 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
본 발명의 용어, “항바이러스”란, 항바이러스 효과 혹은 작용과 같이 사용되며, 식물, 동물, 세균 등의 살아 있는 세포에 기생하고 증식하여 여러 질환을 일으키는 여과성 병원체인 바이러스 감염 및 증식을 억제하는 것을 의미한다.
하나의 구체예로서, 상기 바이러스는 오르토믹소비리대 (Orthomixoviridae)일 수 있으며, 구체적으로 인플루엔자 바이러스(Influenza virus; PR8)일 수 있다. PR8 인플루엔자 바이러스는 H1N1 변종인 신종플루를 의미하며, 다양한 타입이 존재하여 해마다 종류가 달라지는 A형 독감 바이러스에 속한다.
다른 구체예로서, 상기 바이러스는 랍도비리대(Rhabdoviridae)일 수 있으며, 구체적으로 수포성구내염 바이러스(Vesicular stomatitis virus; VSV)일 수 있다. 상기 바이러스는 수포성구내염의 병인이 되는 음성(-)가닥 RNA 바이러스로, 입술, 혀의 수포 형성을 특징으로 하는 말, 소, 염소, 돼지의 급성 전염병이며 구제역과 유사한 증상을 나타낼 수 있다.
또 다른 구체예로서, 상기 바이러스는 파라믹소비리대(Paramixoviridae)일 수 있으며, 구체적으로 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle disease virus)일 수 있다. 상기 바이러스는 닭뉴캐슬병의 병원체로서 전염성이 강하고 기관지염, 폐렴, 설사나 경련, 마비 등을 일으키며 사망률이 높다. 바이러스 입자는 지름 150~200nm으로 피막이 있으며 입자에 RNA중합효소를 가질 수 있다. 유전체는 약 15,000염기의 (-)사슬 RNA이다.
바이러스는 가지고 있는 핵산의 종류에 따라 DNA 바이러스, RNA 바이러스로 구별되며, 수백 um로 아주 작다. 사람의 간염, 간암을 일으키는 간염 혹은 간암 바이러스, 아데노바이러스과에 속하는 바이러스 등은 인간을 포함한 여러 척추동물들에게 감염될 수 있는 DNA 바이러스이며, 에이즈의 원인이 되는 AIDS 바이러스는 레트로바이러스의 일종으로 RNA와 역전사 효소를 가진 전형적인 RNA 바이러스이다. 또한, 본 발명의 오르토믹소비리대(Orthomixoviridae), 랍도비리대(Rhabdoviridae), 및 파라믹소비리대(Paramixoviridae)에 각각 속하는 인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus; VSV), 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus) 역시 RNA 바이러스에 속한다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 본 발명의 삼칠근 추출물을 처리한 결과, 인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus; VSV), 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus)에 대한 우수한 항바이러스 활성(도 1a, 도 2a 및 도 3a) 및 세포 독성이 낮은 사실을 확인하였다(도1b, 2b 및 도 3b). 이는, 상기 삼칠근 추출물이 상기 바이러스에 대한 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 시사하는 것이다.
본 발명의 용어, “예방”이란, 본 발명의 약학 조성물의 투여로 상기 바이러스 감염에 의한 질병의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, “치료”란, 본 발명의 약학 조성물의 투여로 상기 바이러스 감염에 의한 질병의 증세가 호전되거나 이롭게 변경시키는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 약학적 허용 담체를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미할 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 바이러스 감염에 의한 질병의 치료 또는 예방용 약학 조성물의 형태로 제조될 수 있는데, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스 또는 락토스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 포함된 상기 제제의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 최종 조성물 총중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량%, 보다 구체적으로 0.01 내지 10 중량%의 함량으로 포함할 수 있다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명의 삼칠근 추출물을 처리한 결과, 인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus; VSV), 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus)에 대한 전염증성 사이토카인인 IFN-β, IL-6 및 TNF-α(도 4a, 도 4b 및 도 4c)가 강하게 유도됨을 확인하였다.
본 발명의 또 다른 양태는, 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 삼칠근 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 본 발명의 조성물은 친환경적이며 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 용어, "건강기능식품"이란, 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 삼칠근 추출물을 포함하여 상기 바이러스에 대한 예방 또는 개선 효과를 달성할 수 있는 한, 모든 종류의 식품을 모두 포괄할 수 있는 개념이다. 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
또한, 항바이러스를 목적으로 하는 건강기능식품에 있어서, 유효성분인 삼칠근 추출물의 함유량은 제한이 없으나, 상기 삼칠근 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함될 수 있으며, 음료 조성물의 경우 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 구체적으로는 0.3 내지 1g의 비율로 포함될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는, 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 사료 조성물을 제공한다.
항바이러스용 사료 조성물 중의 삼칠근 추출물의 함량은 급여 가축의 종, 주령, 체중, 및 사육 조건 등에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 사료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~95중량%, 구체적으로는 0.1~80중량%의 비율일 수 있다.
상기 사료용 조성물은 사료 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다.
본 발명에서 용어, "사료"란, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다.
상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한 상기 사료첨가제는 추가적으로 단위동물에 허용되는 담체를 함유할 수 있다. 본 발명에 있어서는 상기 사료첨가제를 그대로 또는 공지의 담체, 안정제 등을 가할 수 있으며, 필요에 따라 비타민, 아미노산류, 미네랄 등의 각종 양분, 항산화제 및 기타의 첨가제 등을 가할 수도 있으며, 그 형상으로서는 분체, 과립, 펠릿, 현탁액 등의 적당한 상태일 수 있다. 본 발명의 사료첨가제를 공급하는 경우는 단위동물에 대하여 단독으로 또는 사료에 혼합하여 공급할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는, 삼칠근 추출물을 포함하는 인플루엔자, 수포성구내염 및 뉴캐슬병바이러스로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 바이러스성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
하나의 구체예로서, 상기 바이러스성 질환은 감기, 장염, 수족구병, 바이러스성 수막염, 폐렴, 뇌염, 신경원성 폐부종, 결막염, 뇌심근염, 심근염, 간염, 소아마비, 마비, 바이러스성 수막염, 수포병, 근육염, 심근염, 췌장염, 유행성 근육통, 포진성 구협염, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 축농증, 또는 중이염을 포함할 수 있다.
또 하나의 구체예로서, 상기 바이러스 관련 질환은 구제역일 수 있다. 구제역은 감염된 동물의 수포액이나 침, 유즙, 정액, 호흡시의 공기, 분변 등을 통한 직접 접촉으로 전염이 된다. 또 농장주, 농장 노동자, 수의사, 인공수정사, 사료공급자, 분뇨 처리업자, 도축장 출하 차량 운전자 등의 작업복, 장갑, 신발, 차량, 사료 등을 통해서도 간접 감염이 가능하다. 그 뿐만 아니라 공기로도 전염이 가능하다.
본 발명의 사료 조성물은 항바이러스 효능이 우수하여 바이러스 관련 질환에 대한 저항력과 방어능력을 높임으로써 바이러스 관련 질환에 의한 폐사 및 생산성 감소를 예방할 수 있으며, 이를 통해 인간의 감염을 방지하는 효과가 있다.
본 발명의 또 다른 양태는, 삼칠근 추출물을, 인간을 제외한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"란, 어떠한 적절한 방법으로 개체에 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방식에 따를 수 있다. 상기 투여 방식의 비제한적인 예로, 조성물을 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 목적하는 투여 방식에 따라 다양한 제형으로 제작될 수 있다.
본 발명의 약학조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 예를 들어, 본 발명의 약학적으로 유효한 양은 0.0001 ~ 10 g/일 수 있고, 구체적으로 0.001 ~ 1 g/kg일 수 있으며, 하루 1 ~ 6회 투여될 수 있다. 그러나, 투여경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배를 함유하거나 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 구체적으로 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개체"란, 바이러스 관련 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 상기 조성물의 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 구체적으로 0.05 내지 200 mg/kg, 나아가 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수 회로 나누어 투여할 수 있다.그러나 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 조성물은 독성이나 부작용을 일으키지 않으면서 각종 바이러스성 질병의 예방 및 치료에 효과적으로 적용될 수 있으며, 면역력 증진에 기여할 수 있다.
도 1a는 삼칠근 추출물의 인플루엔자바이러스(PR8-GFP virus)에 대한 항바이러스 활성분석 결과를 나타낸 사진이다. (Medium; 음성 대조군, PR8-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/PR8-GFP; 양성대조군, 삼칠근/PR8-GFP; PR8-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군.)
도 1b는 삼칠근 추출물의 인플루엔자바이러스(PR8-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, PR8-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/PR8-GFP; 양성대조군, 삼칠근/PR8-GFP; PR8-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 2a는 삼칠근 추출물의 수포성구내염바이러스 (VSV-GFP virus)에 대한 항바이러스 활성분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 2b는 삼칠근 추출물의 수포성구내염바이러스 (VSV-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, VSV-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/VSV-GFP; 양성대조군, 삼칠근/VSV-GFP; VSV-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 3a는 삼칠근 추출물의 뉴캐슬병바이러스(NDV-GFP virus)에 대한 항바이러스 활성분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 3b는 삼칠근 추출물의 뉴캐슬병바이러스(NDV-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, NDV-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/NDV-GFP; 양성대조군, 삼칠근/NDV-GFP; NDV-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 4a 내지 4c는 삼칠근 추출물의 전 염증성 사이토카인 유도 분석 결과를 나타낸 그래프이다(*** p<0.0005).
도 1b는 삼칠근 추출물의 인플루엔자바이러스(PR8-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, PR8-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/PR8-GFP; 양성대조군, 삼칠근/PR8-GFP; PR8-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 2a는 삼칠근 추출물의 수포성구내염바이러스 (VSV-GFP virus)에 대한 항바이러스 활성분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 2b는 삼칠근 추출물의 수포성구내염바이러스 (VSV-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, VSV-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/VSV-GFP; 양성대조군, 삼칠근/VSV-GFP; VSV-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 3a는 삼칠근 추출물의 뉴캐슬병바이러스(NDV-GFP virus)에 대한 항바이러스 활성분석 결과를 나타낸 사진이다.
도 3b는 삼칠근 추출물의 뉴캐슬병바이러스(NDV-GFP virus)에 대한 세포 생존율 분석 결과를 나타낸 그래프이다. (Medium; 음성 대조군, NDV-GFP; 바이러스 감염군, IFN-β/NDV-GFP; 양성대조군, 삼칠근/NDV-GFP; NDV-GFP 바이러스 감염 및 삼칠근 추출물 처리군. *** p<0.0005)
도 4a 내지 4c는 삼칠근 추출물의 전 염증성 사이토카인 유도 분석 결과를 나타낸 그래프이다(*** p<0.0005).
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
실시예 1: 삼칠근 열수 추출물의 제조
삼칠근 추출물은 삼칠근의 중량을 기준으로, 20배의 증류수를 삼칠근에 첨가하여 115℃에서 180분간 열수 추출하고, 0.45㎛ 여과지로 1차 여과하고, 0.22㎛ 여과지로 2차 여과하여 침전물을 제거하여 수득하였다. 상기 추출액은 1.5㎖ Ep-튜브에 1㎖씩 분주하고 -20℃에서 저장하여 모든 시험에 사용하였다.
실시예
2: 마우스 대식 세포주를 이용한
삼칠근
추출물의 항바이러스 활성 분석
인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus), 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus) 에 대한 삼칠근 추출물의 항바이러스 활성 분석을 수행하였다.
(1) 마우스 대식 세포주를 이용한 바이러스 감염 분석
24 웰 TC 플레이트에 Raw 264.7 세포(2×105 cell/웰)를 배양한 후, 1% FBS가 첨가된 RPMI 배지에 상기 실시예 1에서 제조한 100 ㎍/㎖ 농도의 삼칠근 추출물을 처리하였다. 상기 추출물을 처리한 12시간 후, PR8-GFP(MOI:1.0), VSV-GFP(MOI:1.0), 및 NDV-GFP(MO3I:.0)를 각각 접종하고, 2시간 후 접종액을 제거하고 PBS로 3회 세척하여, 24시간 후, 상기 접종한 각 바이러스의 감염 정도를 확인하였다. 1% FBS가 첨가된 RPMI 배지를 음성 대조군으로 하였고, 각 바이러스 감염 배지에 마우스 IFN-β(1000 units/㎖)를 처리한 것을 양성 대조군으로 하였다.
(2) 마우스 대식 세포주를 이용한 세포 생존율 측정
96 웰 TC 플레이트에 Raw 264.7 세포(2×105 cell/웰)를 배양한 후, 1% FBS가 첨가된 RPMI 배지에 상기 실시예 1에서 제조한 100㎍/㎖ 농도의 삼칠근 추출물을 처리하였다. 상기 추출물을 처리하고 12시간 후, PR8-GFP(MOI:1.0) 및 VSV-GFP(MOI:1.0), 및 NDV-GFP(MOI:3.0)를 각각 접종하고, 접종 2시간 후 접종액을 제거하고 PBS 로 3회 세척하고, 24시간 후, 세포 생존율을 측정하기 위하여 10 ㎕의 CCK-8 시약을 처리하고 1시간 동안 배양하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 1% FBS가 첨가된 RPMI 배지를 음성 대조군으로 하였고, 각 바이러스 감염 배지에 마우스 IFN-β(1000 units/㎖)를 처리한 것을 양성 대조군으로 하였다.
실시예 2-1: 인플루엔자바이러스 (PR8-GFP virus)에 대한 감염도 분석
감염 24시간 후의 GFP(green fluorescent protein) 형광이미지를 이용한 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 활성 실험결과는 다음과 같다.
도 1에서 알 수 있듯이, 삼칠근 추출물을 처리한 세포를 인플루엔자 바이러스로 감염시킨 결과, 인플루엔자바이러스의 감염률이 현저하게 떨어졌으며(도 1a), 세포 생존율도 바이러스 감염군에 비해 약 2배 정도 상승한 것을 확인할 수 있었다(도 1b).
실시예 2-2: 수포성구내염바이러스 (VSV-GFP virus)에 대한 감염도 분석
감염 24시간 후의 GFP(green fluorescent protein) 형광이미지를 이용한 수포성구내염바이러스에 대한 항바이러스 활성 분석결과는 다음과 같다.
도 2에서 알 수 있듯이, 삼칠근 추출물을 처리한 세포를 수포성수내염 바이러스로 감염시킨 결과, 수포성구내염바이러스의 감염률이 현저하게 떨어졌으며(도 2a), 세포 생존율도 바이러스 감염군에 비해 2배 이상 상승한 것을 확인할 수 있었다(도 2b).
실시예 2-3: 뉴캐슬병바이러스 (NDV-GFP virus)에 대한 감염도 분석
감염 24시간 후의 GFP(green fluorescent protein) 형광이미지를 이용한 뉴캐슬병바이러스에 대한 항바이러스 활성 분석결과는 다음과 같다.
도 3에서 알 수 있듯이, 삼칠근 추출물을 처리한 세포를 뉴캐슬병바이러스로 감염시킨 결과, 뉴캐슬병바이러스의 감염률이 현저하게 떨어졌으며(도 3a), 세포 생존율도 바이러스 감염군에 비해 약 2.5 배 상승하여 양성 대조군과 비슷한 수준을 확인할 수 있었다(도 3b).
실시예
3: 마우스 대식 세포주를 이용한
삼칠근의
전 염증성 사이토카인 유도(pro-inflammatory Cytokine Induction) 분석
삼칠근 추출물의 면역인자 유도효과를 확인하기 위하여 하기와 같이분석 실험을 수행하였다.
구체적으로, 마우스 대식세포주인 Raw 264.7(2×105 cell/웰)을 분석실험에 사용하였다. 6-웰 TC플레이트에 세포를 배양한 후, 10% FBS가 첨가된 RPMI 배지에 상기 실시예 1에서 제조된 삼칠근 추출물을 첨가하였다. 시료는 최종 농도 100 ㎍/㎖인 삼칠근 추출물(pH 7.0)을 사용하여 처리하였고, 0 및 24시간 후의 세포에 대한 IFN-β, IL-6 및 TNF-α의 생성량(pg/㎖)을 ELISA로 측정하였다. 10% FBS가 첨가된 RPMI 배지를 음성 대조군으로 하였고, 각 바이러스 감염 배지에 마우스 IFN-β(1000 units/㎖)를 처리한 것을 양성 대조군으로 하였다.
그 결과, 도 4a 내지 4c에서 알 수 있듯이, Raw 264.7 세포에 삼칠근 추출물 처리 24시간 후에 전 염증성 사이토카인인 IFN-β 감소, TNF-α 및 IL-6가 강하게 유도되는 것을 확인할 수 있었다.
한편, 실험 결과의 비교는 one-way ANOVA를 이용하여 그룹간의 차이를 통계적 유의성을 평가하였다. 유의 확률이 *P<0.05와 ***P<0.005일 때 통계적으로 유의성을 가짐을 인정하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (13)
- 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 약학 조성물로서, 상기 바이러스는 뉴캐슬병바이러스 (Newcastle disease virus)인 것인, 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 삼칠근 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 중에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 것인, 약학 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삼칠근 추출물 또는 그의 분획물을 함유하는 항바이러스용 건강기능식품으로서, 상기 바이러스는 뉴캐슬병바이러스 (Newcastle disease virus)인 것인, 건강기능식품.
- 제7항에 있어서,
상기 건강기능식품은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 것인, 건강기능식품.
- 삭제
- 삭제
- 삼칠근 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 항바이러스용 사료 조성물로서, 상기 바이러스는 뉴캐슬병바이러스 (Newcastle disease virus)인 것인, 사료 조성물.
- 삼칠근 추출물을 포함하는 뉴캐슬병바이러스 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 삼칠근 추출물을, 인간을 제외한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 뉴캐슬병바이러스 질환의 예방 또는 치료 방법.
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