KR101830001B1 - Prpp 합성 경로 개선을 통한 l-트립토판이 과발현되는 균주 및 이를 이용하는 l-트립토판의 제조 방법 - Google Patents

Prpp 합성 경로 개선을 통한 l-트립토판이 과발현되는 균주 및 이를 이용하는 l-트립토판의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 포스포리보실피로포스페이트(phosphoribosylpyrophosphate, PRPP)의 공급을 강화시켜 L-트립토판 생산능을 향상시키는 에스케리키아 속 변이 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 트랜스알돌라아제(transaldolase) 및 트랜스케톨라아제(transketolase)의 활성을 약화 또는 불활성화시키고, 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제(glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase)의 활성을 강화시킴으로써 L-트립토판 생산능을 향상시키는 에스케리키아 속 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법을 제공한다.

Description

PRPP 합성 경로 개선을 통한 L-트립토판이 과발현되는 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법{STRAIN OVEREXPRESSING L-TRYPTOPHAN BY IMPROVING PRPP SYNTHESIS PATHWAY AND PROCESS FOR PRODUCING L-TRYPTOPHAN USING THE SAME}
본 발명은 포스포리보실피로포스페이트(phosphoribosylpyrophosphate, PRPP)의 공급을 강화시켜 L-트립토판 생산능을 향상시키는 에스케리키아 속 변이 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법에 관한 것이다.
L-트립토판(L-tryptophan)은 필수아미노산 중 하나로서, 생체 내에서 단백질의 중합 및 니코틴산아마이드 등의 출발물질로 중요하다. 식물성 단백질에 라이신(lysine) 및 메티오닌(methionine)과 병용하면 단백가를 높일 수 있으며, 아미노산류 강화제, 사료첨가제, 수액제 등의 의약 원료 및 건강식품소재 등으로 널리 사용되고 있다. 이러한 L-트립토판은 화학합성법, 효소반응법, 미생물을 이용한 발효법 등을 통해 생산되어 왔다.
종래 공지된 오탄당 인산 경로에서, L-트립토판의 생합성에는 전구체인 코리코리스미산(chorismate)을 제조하기 위하여 포스포엔올피루베이트(phosphoenolpyruvate, PEP)와 에리트로오스-4-포스페이트(erythrose-4-phosphate, E4P), 부기질인 PRPP, 세린(serine) 및 글루타민(glutamine)이 필요하다고 알려져 있다. 기존에 알려진 L-트립토판의 생산능 강화 방법으로는, 방향족 아미노산의 생산능을 증가시키기 위하여 PEP 및 E4P를 강화하는 전략이 대부분이었고, 특히 E4P 강화를 위하여 tktA 유전자 등을 과발현시키는 경우가 많았다. 그러나 트립토판의 경우 생산능을 강화하기 위하여 PEP 및 E4P 뿐만 아니라 분자구조의 약 40%를 차지하는 PRPP의 공급이 주요한 변수로 작용할 것으로 보여지며(도 1 참조), 이에 따라 트립토판 생합성 경로의 주요 부기질의 조절에 따른 보다 진보된 트립토판 생산 균주의 개발이 요구되고 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명은 PRPP의 공급을 강화시켜 L-트립토판 생산능을 향상시키는 에스케리키아 속 변이 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 트랜스알돌라아제(transaldolase) 및 트랜스케톨라아제(transketolase)의 활성을 약화 또는 불활성화시키고, 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제(glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase)의 활성을 강화시킴으로써 L-트립토판 생산능을 향상시키는 에스케리키아 속 균주 및 이를 이용하는 L-트립토판의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 양상은 프리페네이트 디히드라타아제(prephenate dehydratase)의 활성이 약화 또는 불활성화되어 있는 균주에 있어서, 트랜스알돌라아제 및 트랜스케톨라아제의 활성이 약화 또는 불활성화되고, 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제의 활성이 강화되는, L-트립토판의 생산능을 가지는 에스케리키아 속 변이 균주를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 트랜스알돌라아제는 트랜스알돌라아제를 암호화하는 talA 유전자, 트랜스케톨라아제는 트랜스케톨라아제를 암호화하는 tktB 유전자의 전부 또는 일부가 결실됨으로써 상기 각 효소의 활성이 약화 또는 불활성화되고, 상기 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제는 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제를 암호화하는 zwf 유전자의 발현이 증가되어 활성이 강화되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 에스케리키아 속 균주는 대장균(Escherichia coli)일 수 있다.
본 발명의 일 양상은 (a) 상기 에스케리키아 속 변이 균주를 배지에서 배양하는 단계; 및 (b) 상기 배양된 균주 및 배양 배지에서 L-트립토판을 회수하는 단계를 포함하는 L-트립토판의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 에스케리키아 속 균주는 대장균일 수 있다.
본 발명은 트립토판 생합성에 필요한 핵심부기질인 포스포리보실피로포스페이트의 활성을 강화시키는 에스케리키아 속 변이 균주를 제공하여, 수율을 향상시킴으로써 보다 효율적이고 경제적으로 L-트립토판을 제조할 수 있는 효과를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 에스케리키아 속 변이 균주에서의 L-트립토판의 생성 경로를 나타낸다.
도 2는 talA와 tktB 유전자를 결실시킨 트립토판 생산 균주의 DNA 절편을 증폭한 PCR 전기영동 사진을 나타낸다(M: 래더(ladder) 마커, C: 대조군 균주(1,958 bp), 및 비교예 1: talA 및 tktB 파쇄 균주(1,067bp)).
도 3은 talA와 tktB 유전자를 결실시키고 zwf 유전자를 삽입한 트립토판 생산 균주의 DNA 절편을 증폭한 PCR 전기영동 사진을 나타낸다(M: 래더 마커, C: 대조군 균주(1,958 bp), 및 실시예 1: talA, tktB 파쇄 및 zwf 삽입 균주(2,429bp)).
도 4는 실험실 수준(10 ㎖)에서 본 발명의 일 실시예에 따른 에스케리키아 속 변이 균주의 트립토판 생산능을 나타낸다.
도 5는 실험실 수준(5 L)에서 본 발명의 일 실시예에 따른 에스케리키아 속 변이 균주의 트립토판 생산능을 나타낸다.
본 발명의 일 양상은 프리페네이트 디히드라타아제의 활성이 약화 또는 불활성화되어 있는 균주에 있어서, 트랜스알돌라아제 및 트랜스케톨라아제의 활성이 약화 또는 불활성화되고, 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제의 활성이 강화되는, L-트립토판의 생산능을 가지는 에스케리키아 속 변이 균주를 제공한다.
본 발명자들은 L-트립토판을 효율적으로 생산할 수 있는 에스케리키아 속 균주를 개발하고자 노력한 결과, 오탄당 인산 경로의 주요 효소인 트랜스알돌라아제, 트랜스케톨라아제 및 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제의 활성을 조절함으로써 PRPP의 공급을 조절하고, 이로써 결국 L-트립토판의 생산능을 조절할 수 있음을 확인하였다.
본 발명에 따른 균주의 모균주는 프리페네이트 디히드라타아제의 활성이 약화 또는 불활성화된 에스케리키아 속 균주일 수 있으며, 이는 트립토판을 생산할 수 있도록 프리페네이트 디히드라타아제를 암호화하는 pheA 유전자의 전부 또는 일부가 결실됨으로써 상기 효소의 활성이 약화 또는 불활성화되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, L-트립토판의 생산능은 상기 트랜스알돌라아제를 암호화하는 tal 유전자, 바람직하게는 talA 유전자와, 상기 트랜스케톨라아제를 암호화하는 tkt 유전자, 바람직하게는 tktB 유전자의 전부 또는 일부가 결실됨으로써 상기 각 효소의 활성이 약화 또는 불활성화되고, 상기 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제를 암호화하는 zwf 유전자의 발현이 증가되어 활성이 강화됨으로써 PRPP의 발현이 증가되고, 결국 L-트립토판의 생산능이 향상될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “활성이 약화"는 객체인 유전자의 발현량이 본래의 발현량보다 감소되는 것을 의미한다. 이러한 활성의 약화는 유전자를 암호화하는 뉴클레오티드 치환, 삽입, 결실 또는 이들의 조합을 통하여 효소 자체의 활성이 본래 미생물이 가지고 있는 효소의 활성에 비해 감소한 경우와, 이를 암호화하는 유전자의 발현 저해 또는 번역 저해 등으로 세포 내에서 전체적인 효소 활성 정도가 천연형 균주 또는 변형전의 균주에 비하여 낮은 경우, 이들의 조합 역시 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “불활성화"는 효소 등 단백질을 암호화하는 유전자의 발현이 천연형 균주 또는 변형전의 균주에 비하여 전혀 발현이 되지 않는 경우 및 발현이 되더라도 그 활성이 없는 경우를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “발현이 증가"는 객체인 유전자의 발현량이 본래의 발현량보다 증가되는 것을 의미한다. 변이 전 균주에 발현을 증가시키고자 하는 유전자가 존재하지 않는 경우에는 하나 이상의 유전자를 상기 균주의 염색체에 도입하여 발현을 증가시킬 수 있고, 변이 전 균주에 발현을 증가시키고자 하는 유전자가 존재하는 경우에는 하나 이상의 유전자를 상기 균주에 추가로 도입하거나 기존 유전자의 발현량이 증가하도록 유전공학적으로 조작할 수 있다.
본 발명에서, 발현 조절 서열을 변형하는 방법은 상기 발현 조절 서열의 핵산 서열에 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합으로 발현 조절 서열상의 변이를 유도하여 수행하거나, 더욱 약한 프로모터로 교체하는 등의 방법으로써 수행할 수 있다. 상기 발현 조절서열에는 프로모터, 오퍼레이터 서열, 리보좀 결합부위를 코딩하는 서열, 및 전사와 해독의 종결을 조절하는 서열을 포함한다.
아울러, 염색체상의 유전자 서열을 변형하는 방법은 상기 효소의 활성이 더욱 약화하도록 유전자 서열을 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합으로 서열상의 변이를 유도하여 수행하거나, 더욱 약한 활성을 갖도록 개량된 유전자 서열 또는 활성이 없도록 개량된 유전자 서열로 교체함으로써 수행할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “활성이 강화"는 유전자를 암호화하는 뉴클레오티드 치환, 삽입, 결실 또는 이들의 조합을 통하여 효소 자체의 활성이 본래 미생물이 가지고 있는 효소의 활성에 비해 강화된 경우와, 이를 암호화하는 유전자의 발현 촉진 또는 번역 촉진 등으로 세포 내에서 전체적인 효소 활성 정도가 천연형 균주 또는 변형 전의 균주에 비하여 높은 경우, 이들의 조합 역시 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “일부"는 폴리뉴클레오티드의 서열의 전부 아닌 것을 가리키는 것으로, 1 내지 300개, 바람직하게는 1 내지 100개, 보다 바람직하게는 1 내지 50개일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 에스케리키아 속 변이 균주를 제작하기 위하여는 형질전환이 되지 않은 에스케리키아 속 균주로부터 형질전환된 에스케리키아 속 균주를 분리 및 수득하는 단계를 포함한다.
상기 형질전환된 균주를 분리 및 수득하는 단계를 실시하는데 있어서 선택 표지된 벡터를 이용할 수 있고, 본 발명에서 이용하는 선택표지는 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며, 구체적으로는 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트 라사이클린에 대한 내성 유전자를 포함하며, 바람직하게는 암피실린 또는 카나마이신 내성 유전자이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 에스케리키아 속 균주는 대장균(Escherichia coli), 바람직하게는 pheA 유전자가 결실된 대장균, 예를 들어 수탁번호 KFCC11660P의 기탁 균주일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양상은 (a) 본 발명에 따른 에스케리키아 속 변이 균주를 배지에서 배양하는 단계; 및 (b) 상기 배양된 균주 및 배양 배지에서 L-트립토판을 회수하는 단계를 포함하는 L-트립토판의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 이용되는 균주는 당업계에 공지된 배양 방법을 통해 배양될 수 있다. 배지로는 천연배지 또는 합성배지를 사용할 수 있다. 배지의 탄소원으로는 예를 들어 글루코오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세롤, 녹말 등이 사용될 수 있고, 질소원으로는 펩톤, 육류 추출물, 효모 추출물, 건조된 효모, 대두 케이크, 우레아, 티오우레아, 암모늄염, 나이트레이트 및 기타 유기 또는 무기 질소-함유 화합물이 사용될 수 있으나, 이러한 성분에 한정되는 것은 아니다.
배지에 포함되는 무기염으로는 마그네슘, 망간, 포타슘, 칼슘, 철 등의 포스페이트, 나이트레이트, 카보네이트, 클로라이드 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 탄소원, 질소원 및 무기염의 성분 이외에 아미노산, 비타민, 핵산 및 그와 관련된 화합물들이 배지에 첨가 될 수 있다.
배양물의 온도는 27 내지 40℃, 보다 바람직하게는 30℃ 내지 37℃일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 배양 기간은 유용 물질의 원하는 생성량이 수득될 때까지 계속될 수 있으며, 바람직하게는 10 내지 100 시간일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 L-트립토판을 회수하는 단계는 본 발명의 미생물의 배양 방법, 예를 들어 회분식, 연속식 또는 유가식 배양 방법 등에 따라 당해 기술 분야에 공지된 적합한 방법을 이용하여 배양액으로부터 목적하는 L-트립토판을 회수할 수 있으며, 상기 회수 단계는 정제 공정을 포함할 수 있다.
이하 하나 이상의 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
비교예 1. ΔtalAΔtktB 균주의 제작
모주인 W0G 균주(수탁번호: KFCC11660P)의 야생형 균주에 talA, tktB 유전자를 동시에 상동 재조합에 의하여 결실시켰다.
이를 위해, 문헌[One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products, Datsenko KA, Wanner BL., Proc Natl Acad Sci USA. 2000 Jun 6;97(12):6640-5]를 참고하여 1단계 불활성화 방법을 사용하여 돌연변이를 제작하였다. 유전자 삽입을 확인하기 위하여 pKD13 플라스미드의 카나마이신 유전자를 사용하였다.
해당 유전자 각각의 유전자의 일부와 카나마이신의 내성 유전자를 가지는 DNA를 만들기 위하여, 모주인 W0G의 염색체와 pKD13 플라스미드를 주형으로 중합효소 연쇄반응법(polymerase chain reaction, PCR)을 수행하였다. 사용된 프라이머는 하기 표 1에 기재된 바와 같으며, (i) 변성(denaturation)단계: 95℃에서 30초, (ii) 결합(annealing)단계: 58℃에서 30초, 및 (iii) 확장(extension)단계: 72℃에서 2분을 총 30회 수행하였다. 상기 PCR 결과물을 0.8% 아가로스 젤에서 전기영동 후 원하는 크기의 밴드를 얻었으며, PCR 밴드의 단편을 다시 다음과 같은 조건으로 오버랩 PCR(overlap PCR)하여 원하는 단편 DNA를 수득하였다(변성단계: 95℃에서 30초, 결합단계: 58℃에서 30초, 확장단계: 72℃에서 3분을 총 30회 수행함).
위 DNA 단편이 삽입된 벡터 pKD46으로 형질전환된 W0G균주를 컴피턴트 상태로 제조 후, 형질전환 시키고, 카나마이신이 든 고체 배지에 도말하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 얻어진 콜로니는 다시 PCR법을 통해 talA, tktB 유전자가 결실된 것을 확인하였고(도 2 참조), 해당 유전자가 결실된 균주를 개발하였다.
Figure 112016098480505-pat00001
실시예 1. ΔtalAΔtktB :: zwf 균주의 제작
모주인 WOG 균주(수탁번호: KFCC11660P)의 야생형 균주에 talA, tktB 유전자를 상동 재조합에 의하여 결실시키고 zwf 유전자를 삽입하였다.
PCR에 사용된 프라이머를 하기 표 2에 기재된 것을 사용하고, overlap PCR의 확장단계를 72℃에서 4분을 수행한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하였다.
위 DNA 단편을 pKD46으로 형질전환된 W0G균주를 컴피턴트 상태로 제조 후, 형질전환 시키고, 카나마이신이 든 고체 배지에 도말하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 얻어진 콜로니는 다시 PCR법을 통해 talA, tktB 유전자가 결실 및 zwf 유전자가 삽입된 것을 확인하였고(도 3 참조), 해당 유전자를 돌연변이 시킨 균주를 개발하였다.
Figure 112016098480505-pat00002
실험예 1. ΔtalAΔtktB :: zwf 균주의 트립토판 생산능 확인
상기 W0G 균주, 비교예 1 및 실시예 1 에서 제작된 균주를 이용하여 생산능의 강화 정도를 확인 및 비교하였다.
평가를 위하여, 각 균주를 LB 고체 배지에서 밤새 배양하고, 하기 표 3의 조성을 갖는 10 ㎖의 플라스크에 접종하였다. 균주 접종 후 72시간 동안 배양하고, 그로부터 수득된 L-트립토판의 농도를 검측하였다(하기 표 4 및 도 4 참조).
Figure 112016098480505-pat00003
Figure 112016098480505-pat00004
상기 실험 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 talA 및 tktB 유전자를 결실시키고 zwf 유전자를 과발현시킨 경우, 트립토판 생산량은 모균주와 talA 및 tktB 유전자만을 결실시킨 비교예 1에 비하여 약 74% 향상되었다.
따라서, 본 발명에서 talA 및 tktB 유전자를 결실시키고 zwf 유전자를 과발현시킴에 따라, PRPP의 양이 증가함으로써 결과적으로 L-트립토판 생산능이 증가된 것을 확인할 수 있었다.
실험예 2. ΔtalAΔtktB :: zwf 균주의 트립토판 생산능 확인
상기 W0G 균주 및 실시예 1 에서 제작된 균주를 이용하여 생산능의 강화 정도를 확인 및 비교하였다.
평가를 위하여, 각 균주를 LB 고체 배지에서 밤새 배양하고, 상기 표 3의 당 농도를 18.75%로 증량한 조성을 갖는 5 L의 Jar 발효기에 접종하였다. 균주 접종 후 76시간 동안 배양하고, 그로부터 수득된 L-트립토판의 농도를 검측하였다(하기 표 5 및 도 5 참조).
Figure 112016098480505-pat00005
상기 실험 결과, 상기 도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 talA 및 tktB 유전자를 결실시키고 zwf 유전자를 과발현시킨 경우, 트립토판 생산량은 모균주에 비하여 약 60.9% 향상되었으며, 수율은 61.8% 개선되었고, 발효시간이 모주에 비하여 단축되었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> Daesang Incorporation <120> STRAIN OVEREXPRESSING L-TRYPTOPHAN BY IMPROVING PRPP SYNTHESIS PATHWAY AND PROCESS FOR PRODUCING L-TRYPTOPHAN USING THE SAME <130> PN160187 <160> 9 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 1 tcctcaaaat cgtacccggt 20 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 2 ccttcttttt ccagctcttc t 21 <210> 3 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 3 agaagagctg gaaaaagaag gttgagcgat tgtgtaggct g 41 <210> 4 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 4 atggtgccag cccagttttt gaattaattc cggggatccg 40 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 5 aaaaactggg ctggcaccat 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 6 agtcgttttc tcccagtcct 20 <210> 7 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 7 gctgtttgcg ttaccgccat ggtctgtttc ctgtgtgaaa tt 42 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 8 atggcggtaa cgcaaacagc 20 <210> 9 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic nucleotide <400> 9 atggtgccag cccagttttt cgcaagatca tgttaccggt 40

Claims (6)

  1. 프리페네이트 디히드라타아제(prephenate dehydratase)의 활성이 약화 또는 불활성화되어 있는 균주에 있어서,
    트랜스알돌라아제를 암호화하는 talA(transaldolase A) 유전자, 및 트랜스케톨라아제를 암호화하는 tktB(transketolase B) 유전자의 전부 또는 일부가 결실되어 트랜스알돌라아제(transaldolase) 및 트랜스케톨라아제(transketolase)의 활성이 약화 또는 불활성화되고, 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제(glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase)의 활성이 강화되는, L-트립토판의 생산능을 가지는 에스케리키아(Escherichia) 속 변이 균주.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 변이 균주는 글루코오스-6-포스페이트 1-데히드로게나아제를 암호화하는 zwf 유전자의 발현이 증가된 것인 에스케리키아 속 변이 균주.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 에스케리키아 속 균주는 대장균(Escherichia coli)인 것인 에스케리키아 속 변이 균주.
  5. (a) 제 1 항에 따른 에스케리키아 속 변이 균주를 배지에서 배양하는 단계; 및
    (b) 상기 배양된 균주 및 배양 배지에서 L-트립토판을 회수하는 단계
    를 포함하는 L-트립토판의 제조 방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 에스케리키아 속 균주는 대장균인 것인 L-트립토판의 제조 방법.
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