KR101820240B1 - 칼슘-알지네이트 비드에 포집한 사카로마이세스 세레비지에의 저온송풍건조를 이용한 종균의 제조방법 - Google Patents

칼슘-알지네이트 비드에 포집한 사카로마이세스 세레비지에의 저온송풍건조를 이용한 종균의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사카로마이세스 세레비지에 균주를 효모 종균으로 제조하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 균체와 1 내지 3% 농도(w/v)의 소듐알지네이트를 혼합하여 종균용액을 제조하는 단계(S1); 상기 종균용액에 염화칼슘 용액을 분사하여 칼슘-알지네이트 비드를 제조하는 단계(S2); 및 상기 칼슘-알지네이트 비드를 건조 보호용 조성물에 침지한 후, 송풍건조기로 건조하는 단계(S3)를 포함한다. 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 효모 종균은 생존율이 향상된 것을 특징으로 한다.

Description

칼슘-알지네이트 비드에 포집한 사카로마이세스 세레비지에의 저온송풍건조를 이용한 종균의 제조방법 {Development of Saccharomyces cerevisiae starter by using Ca-alginate bead after air-blast drying}
본 발명은 사카로마이세스 세레비지에 종균의 제조방법에 관한 것이다.
국내 와인의 점유율은 증가 추세에 있지만 수입 와인에 비해 신뢰도가 낮아 우리나라 영농업계에 상당한 영향을 미치고 있다. 우리나라 주요 포도 품종으로는 미국종 Vitis labrusca B 유래의 캠벨얼리 (Campbell Early) 가 전체 포도 재배면적의 약 70%에서 재배되고 있다. 상기 주 품종인 캠벨얼리는 당도가 14-15%로서 낮고 산도가 강하며 포도주 색이 약하며 향이 약한 편이어서 캠벨얼리 와인 제조에 적합한 와인 효모의 개발이 시급한 실정이다.
국내 포도주 제조에 있어서 이용되는 효모로써, Saccharomyces cerevisiae Fermivin (DSM Food Specialties, Heerlen, Netherlands), S. cerevisiae EC1118 (Lallemand, Montreal, Quebec, Canada) 등이 보편적으로 사용되고 있다. 시중에 판매되는 상기 효모들은 우량효모 연구가 활발하게 진행된 유럽 국가들이 개발한 종균화 된 효모로써, 동결건조에 의한 건조효모, 액상형 효모 등 다양한 형태로 판매되나, 이러한 외래종 효모들로는 국내 품종의 포도주의 고품질화에 도움을 주기 어려울 것으로 예상된다.
또한 대부분의 와인 효모는 동결건조법을 이용한 분말효모로 판매가 되는데 이 동결건조법은 물질을 동결시켜 감압 후 얼음의 승화에 의해 수분을 제거하는 건조 방법으로 물질의 원형을 최대한 유지하며 손상을 최소화시켜 복원성이 높은 장점이 있다. 하지만 에너지 및 장비의 비용이 높고 건조 시간도 길어 상업적으로 대량생산을 하기에는 무리가 있다. 반면 저온송풍건조법은 열에 의한 물질 손상이 적으며 수분함량 조절 및 비용절감에 용이하여 동결건조법에 비해 상업적으로 우수함을 보인다. 또한 동결건조는 송풍건조에 고정비용 및 제조원가 비용이 약 10배에 이르는 것으로 나타났다.
한편, 이러한 종균의 제조방법으로 국내 공개특허 제2008-0109537호에서는 대두분말에 바실러스 서브틸리스 균주를 접종하여 종균을 제조한 바 있으나, 역시 열풍건조 또는 동결건조하는 문제점을 보였다.
본 발명자들은 종래 와인 제조에 있어, 농가의 소규모 1차 가공 시 미생물의 보존 및 배양에 어려움이 있었던 문제를 해결하고자, 예의 연구한 결과, 와인 제조에 사용될 국산 토착형 효모를 종균화하는 기술로, 국산 포도로부터 분리한 토착형 와인 효모 S. cerevisiae D8, M12 및 S13을 인체에 무해한 Ca-alginate bead에 종균을 캡슐화 한 후 건조보호제를 첨가하여 송풍건조하는 방법을 개발함으로써, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 종균화 방법을 확립시킴으로써, 유통·저장 시 종균의 안정성 및 복원율을 향상시키는 것을 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 효모 종균의 제조방법을 제공한다:
균체와 1 내지 3% 농도(w/v)의 칼슘알지네이트를 혼합하여 종균용액을 제조하는 단계(S1);
상기 종균용액에 염화칼슘 용액을 분사하여 칼슘-알지네이트 비드를 제조하는 단계(S2); 및
상기 칼슘-알지네이트 비드를 건조 보호용 조성물에 침지한 후, 송풍건조기로 건조하는 단계(S3).
본 발명의 일 구현예로서, 상기 균체는,
a) 효모 배양액을 배지에 접종한 후, 진탕배양하는 단계;
b) 상기 진탕배양된 효모 배양액을 원심분리하여 균체를 분리하는 단계; 및
c) 상기 원심분리된 균체를 세척하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 효모 배양액은 사카로마이세스 세레비지에 D8(Saccharomyces cerevisiae D8, 수탁번호 : KACC93245P), 사카로마이세스 세레비지에 M12(Saccharomyces cerevisiae M12, 수탁번호 : KACC93246P), 및 사카로마이세스 세레비지에 S13(Saccharomyces cerevisiae S13, 수탁번호 : KACC 93247P)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또다른 구현예로서, 상기 건조 보호용 조성물은 스킴밀크(skim milk) 및 당류가 혼합된 것으로, 상기 당류는 수크로스(sucros), 라피노오스(raffinose), 및 트레할로스(trehalose)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또다른 구현예로서, 상기 스킴밀크(skim milk)의 농도는 5 내지 20%(w/v)인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또다른 구현예로서, 상기 당류의 농도는 3 내지 15%(w/v)인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 과실주를 제조할 때 이용되는 효모의 종균 스타터 제조 시 생존율을 강화시키고 저장성을 향상을 주목적으로 개발하는 것을 목적으로 하는 것으로, 종래 동결건조에 의한 종균 제조 방법과는 차별화를 두어, 칼슘-알지네이트(Ca-alginate)를 이용하여 균체를 비드화 시켰고, 송풍건조를 이용하여 수분을 제거하며, 칼슘-알지네이트, 스킴밀크 및 당류를 최적화된 농도로 사용함으로써, 저장성을 향상시킨 장점이 있다.
도 1은 Ca-alginate bead의 제조 공정을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 방법으로 제조된 Ca-alginate bead의 송풍건조 전후의 크기 및 외형을 나타낸 것이다.
도 3는 Ca-alginate bead의 대조군으로 생균의 송풍건조 전·후의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 4는 Ca-alginate bead의 농도를 달리하고 건조보호제를 첨가하지 않은 상태로 제조한 종균의 송풍건조 전·후의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 방법으로 제조된 2% Ca-alginate bead를 건조보호제인 Skim milk의 농도를 달리 첨가하였을 때 나타난 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 방법으로 제조된 2% Ca-alginate bead 종균과 10% Skim milk를 첨가한 후 농도를 달리한 16가지의 건조보호 첨가제를 사용하여 송풍건조 전후의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 방법으로 제조된 2% Ca-alginate bead 종균 시제품의 수분함량과 건조시간과의 상관관계를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 방법으로 제조된 2% Ca-alginate bead 종균의 bead 내부를 관찰한 사진을 나타낸 도면이다.
도 9는 본 발명의 방법으로 제조된 2% Ca-alginate bead 종균의 저장중의 생존율을 비교한 그래프이다.
본 발명자들은 과실주를 제조할 때 이용되는 효모의 종균 스타터 제조 시 생존율을 강화시키고 저장성을 향상시키기 위하여 연구한 결과, 종래 동결건조에 의한 종균 제조 방법과 다르게, 칼슘-알지네이트(Ca-alginate)를 이용하여 균체를 비드화시키고, 스킴밀크 및 당류가 혼합된 건조 보호용 조성물을 사용한 후 송풍건조하여 수분을 제거함으로써, 저장성이 향상된다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 효모 종균의 제조방법을 제공한다:
균체와 1 내지 3% 농도(w/v)의 칼슘알지네이트를 혼합하여 종균용액을 제조하는 단계(S1);
상기 종균용액에 염화칼슘 용액을 분사하여 칼슘-알지네이트 비드를 제조하는 단계(S2); 및
상기 칼슘-알지네이트 비드를 건조 보호용 조성물에 침지한 후, 송풍건조기로 건조하는 단계(S3).
상기 제조방법을 도식화 하여 도 1에 나타내었다. 상기 칼슘-알지네이트는 무색·무취의 폴리머로써, 비용도 저렴하여 의약품, 식품 등 다양한 분야에서 응용되어 사용되는 것으로, 상기 칼슘-알지네이트는 1%(w/v) 미만이면 비드가 원형을 이루지 못하고 쉽게 으스러지는 현상을 보이고, 3%(w/v) 농도를 초과하면, bead의 망상구조가 조밀하여 추후 실험에서 사용되는 다양한 protectant를 비드 내로 흡수하기 어려운 한계점을 보였다. 바람직하게는 1.5 내지 2.5%(w/v)의 농도로 사용될 수 있다.
본 발명에서 상기 균체는, a) 효모 배양액을 배지에 접종한 후, 진탕배양하는 단계;
b) 상기 진탕배양된 배양액을 원심분리하여 균체를 분리하는 단계; 및
c) 상기 원심분리된 균체를 세척하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것일 수 있다.
본 발명에서 효모 배양액은, 사카로마이세스 세레비지에 균주를 포함하는 것으로서, 본 발명에서 사용하는 균주는 국립과학원에 기탁된 것으로, 사카로마이세스 세레비지에 D8(Saccharomyces cerevisiae D8, 수탁번호 : KACC93245P), 사카로마이세스 세레비지에 M12(Saccharomyces cerevisiae M12, 수탁번호 : KACC93246P), 또는 사카로마이세스 세레비지에 S13(Saccharomyces cerevisiae S13, 수탁번호 : KACC 93247P)일 수 있다.
본 발명에서 상기 건조 보호용 조성물은 스킴밀크(skim milk) 및 당류가 혼합된 것으로, 상기 당류는 수크로스(sucros), 라피노오스(raffinose), 및 트레할로스(trehalose)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
상기 당류는 사카로마이세스 세레비지에 D8 (S. cerevisiae D8)의 경우 수크로스를 사용하는 것이 바람직하고, 사카로마이세스 세레비지에 M12 (S. cerevisiae M12)의 경우 라피노오스를 사용하는 것이 바람직하며, 사카로마이세스 세레비지에 S13 (S. cerevisiae S13)의 경우 트레할로스를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 스킴밀크(skim milk)의 농도는 5 내지 20%(w/v)인 것일 수 있다. 상기 스킴밀크의 농도가 5%(w/v) 미만일때는 생존율의 향상이 다소 미비하며, 20%(w/v)를 초과할때에는 오히려 생존율이 저하되는 현상이 관찰된 바, 바람직하게는 6 내지 18%(w/v), 보다 바람직하게는 8 내지 12%(w/v)일 수 있다.
아울러, 상기 당류의 농도는 3 내지 15%(w/v)인 것일 수 있고, 보다 바람직하게는 5 내지 10%(w/v)인 것일 수 있다.
본 발명은 실시예 1에서, 100mL YPD(yeast peptone dextrose) 배지에 5% (w/v) 효모 종배양액을 접종 한 후 24시간 30℃ 진탕배양을 실시하였다. 배양 후 효모는 약 108 CFU/mL의 균수를 유지하게 된다. 배양액과 균체의 분리를 위해 원심분리 후 회수된 효모 pellet을 0.85%(w/v) NaCl 수용액으로 2회 세척하였다. 세척 후 균체는 멸균수 100mL와 Sodium alginate를 혼합하여 최종농도 2% (w/v) 종균용액을 제조한 뒤 주사기 (syringe, 21 gauges)를 이용하여 0.1 M CaCl2 solution에 분사하면 칼슘-알지네이트 비드(Calcium-alginate bead)가 형성된다.
이때, Na+와 Ca2 +가 치환되면서 Ca2 +를 중심으로 두 가닥의 알지네이트(alginate)가 망상을 형성하며 캡슐화가 진행된다. 효모를 포함한 Ca-alginate bead는 10% skim milk와 건조보호제인 sucrose (S.cerevisiae D8), raffinose (S. cerevisiae M12), trehalose (S. cerevisiae S13)를 각각 혼합한 용액에 1시간 침지시킨 후 송풍건조기를 이용하여 37℃에서 5시간 동안 수분함량 10% 이하가 되도록 건조시킨 후 사용한 것이다.
또한, 본 발명은 실시예 2에서 Ca-alginate bead의 농도와 효모의 생존율의 상관관계를 규명하고자 Ca-alginate bead 농도를 달리하여 제조한 뒤 송풍건조를 이용하여 생존율을 조사한 결과, 2% 농도(w/v)에서 우수한 생존율을 보인다는 것을 확인하였고, 건조 보호용 조성물에서 스킴밀크(Skim milk)의 농도를 달리하여 제조된 Ca-alginate bead 내 효모의 생존율을 조사한 결과, 10%(w/v)에서 우수한 생존율을 보이며, 건조 보호 조성물에서 당류는 수크로스, 라피노오스 및 트레할로스를 사용하고, 농도가 10%(w/v)일 때 가장 우수한 생존율을 보인다는 것을 확인하였다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 국산 토착형 효모의 분리 및 보존
1.1. 국산 토착형 효모의 분리
국산 토착형 효모의 경우, 국산 Campbell Early 포도에서 분리하여 각각 S. cerevisiae D8, M12, 및 S13으로 동정하였다.
1.2. 국산 토착형 효모의 배양과 보존
순수 분리한 토착 효모는 배양에 적합한 YPD broth (표 1)에 접종하여 30℃에서 24시간 배양하여 미생물의 균수가 약 108 log CFU/mL 로 되었을 때 사용하였으며, 4주 간격으로 계대 배양하면서 보관하였다. 순수 분리한 미생물의 장기보관은 글리세롤 최종농도 20%로 효모 종배양액을 제조하여 -70℃에서 보존하였다.
성분 농도 (%)
Dextrose 2
Peptone 2
Yeast extract 1
1.3. 국산 토착형 효모 종균 제조 방법
본 발명에서 종균의 제조는 하기 방법에 의해 제조되었다.
100mL YPD 배지에, 상기 1.2에서 제조한 5% (w/v) 효모 종배양액을 접종 한 후, 24시간 동안 30℃ 진탕배양을 실시하였다. 배양 후 효모는 약 108 CFU/mL의 균수를 유지하였다. 배양액과 균체의 분리를 위해 원심분리 후 회수된 효모 pellet을 0.85% NaCl 수용액으로 2회 세척해주었다.
세척 후 균체는 멸균수 100mL와 각각 소디움알지네이트(Sodium alginate)를 혼합하여 최종농도 2% (w/v) 종균용액을 제조한 뒤, 주사기(syringe, 21 gauges)를 이용하여 0.1 M CaCl2 solution에 분사하여 칼슘-알지네이트 비드(Calcium-alginate bead)를 제조하였다. 이때, Na+과 Ca2 +가 치환되면서 Ca2 +를 중심으로, 두 가닥의 alginate가 망상을 형성하며 캡슐화가 진행되는 것이다.
효모를 포함한 Ca-alginate bead는 10% skim milk와 건조보호제인 sucrose (S. cerevisiae D8), raffinose (S. cerevisiae M12), trehalose (S. cerevisiae S13)를 각각 혼합한 용액에 1시간 침지시킨 후 송풍건조기를 이용하여 37℃에서 5시간 건조시킨 후 사용하였다 (수분함량 10% 이하).
상기 칼슘-알지네이트 비드(Ca-alginate bead)의 제조에 사용된 초자기구 및 시약은 121℃, 15분 초고압멸균기를 사용하여 멸균시킨 것을 사용하였다. 상기 제조된 Ca-alginate bead는 송풍건조기(HB-509C, Hanbaek Scientific Technology, Seoul, Korea)를 이용하여 37℃에서 5 시간 동안 송풍건조 후 0.4-0.5 mm의 크기를 나타냈다.
실시예 2. Ca-alginate bead의 제조 및 생존율 조사
2.1. Free cell의 생존율 조사
Ca-alginate bead를 형성하지 않은 대조구 (약 1.2 × 108 CFU/mL, 10mL)를 5시간 동안 37℃ 송풍건조 하였을 때, 각 효모 균주의 생존율은 S. cerevisiae D8은 0.24%, S. cerevisiae M12는 0.28%, S. cerevisiae S13은 0.27%로 매우 저조한 생존율을 나타내었다(도 3, ■ : 건조 전, □ : 건조 후).
2.2. Ca-alginate bead의 농도별 영향
Sodium alginate를 이용하여 효모 배양액과 혼합하여 Ca-algiante bead를 제조하여 5시간 동안 37℃에서 송풍건조 한 경우, 생존율이 증가하는 결과를 나타내었다(도 4).
각 처리군별로 생존율의 차이는 크게 나타나지는 않았으나, 1% (w/v) sodium alginate를 사용한 경우, bead가 원형을 이루지 못하고 쉽게 으스러지는 경향이 있어 종균으로 사용하기에 불편한 점이 있었다. 3% (w/v) sodium alginate를 사용한 경우, bead의 망상구조가 조밀하여 추후 실험에서 사용되는 다양한 protectant를 bead내로 흡수하기 어려운 문제점이 발생하였다. 이에 Ca-alginate bead의 농도를 2% (w/v)로 설정하여 사용하였다.
2.3. Skim milk의 영향
일반적으로 skim milk는 균체의 동결건조를 위한 동결방지제로 널리 이용되고 있다. 이는 skim milk의 단백질 구조가 극한 환경 조건에서 균체를 코팅하여 보호하기 때문으로 알려져 있고, 본 실시예에서도 송풍건조 시 수분이 없는 조건에서 효모 균체의 생존율 향상을 위해 skim milk를 보호제로 이용하였다. Skim milk의 균체 보호 효과를 알아보기 위하여 2% (w/v) sodium alginate를 이용하여 제작된 bead를 각각 5% (w/v), 10% (w/v), 20% (w/v)의 skim milk solution에 1시간 동안 침지시켜 skim milk가 bead 내로 흡수되도록 처리하였다. 각 처리 조건에 따른 생존율과 생균수의 결과는 도 5에 나타내었다.
Skim milk 침지 처리를 거치지 않은 2% Ca-alginate bead 종균에서 약 2.1-2.6%의 생존율을 나타낸 것과는 달리, skim milk 침지 처리를 거친 조건에서는 생존율이 크게 향상되는 것을 볼 수 있었다. 5% skim milk 처리에서는 약 17.7-18.9%로 생존율이 향상되었고, 10% skim milk 처리에서는 31.9-34.3%의 생존율을 나타내었다. 20% skim milk 처리에서는 오히려 10% skim milk 처리구보다 생존율이 낮아져 28.2-28.6%의 생존율을 나타내었다.
따라서 Ca-alginate bead 효모 종균 시제품 제조를 위해 건조방지제로 10% skim milk를 사용할 때 가장 우수한 생존율을 가지는 결과를 나타내었다.
2.4. 건조방지제의 영향
동결건조, 송풍건조 등 종균 제조시에 첨가되는 protectant는 수분이 없는 척박한 환경에서 균체를 보호하는데 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 본 실시예에서는 Ca-alginate bead 효모 종균에 protectant의 종류와 농도가 미치는 영향을 알아보기 위하여 종균 제조시 bead 형성 이후 10% skim milk와 함께 각각 5% (w/v)와 10% (w/v)의 protectant를 혼합한 용액에 Ca-alginate bead를 1시간 동안 침지시켜 skim milk와 protectant가 bead 내로 흡수되도록 처리하였고, 5시간의 송풍 건조 이후 생균수와 생존율의 변화를 도 5에 나타내었다.
본 실시예에서 사용한 protectant의 종류는 glucose, fructose, galactose, sucrose, lactose, trehalose, maltose, raffinose, dextrin, starch 등 10종의 당류, mannitol, sorbitol, inositol, adonitol 등 4종의 당 알코올류, 그리고 MSG, peptone 등 2종의 질소화합물, 총 16가지의 물질을 protectant로 이용하였다.
균주마다 차이가 있지만 모든 시험구에서 농도가 증가하였을 때, 생존율이 증가하는 것으로 나타났다. 각 균주별로 최적의 protectant가 다르게 나타났으며, S. cerevisiae D8은 10% sucrose를 사용하였을 때 90.67%의 생존율을 보였고 S. cerevisiae M12는 10% raffinose를 사용하였을 때 87. 63%의 생존율을 나머지 S. cerevisiae S13은 10% trehalose에서 92.05%의 생존율을 보였다(도 6).
2.5. Ca-alginate bead 효모 종균 시제품에서 건조시간과 수분함량에 따른 영향
종균 시제품에서 중요한 요소 중 하나는 수분함량이다. 적절한 수분 함량은 장기보관 시 물성변화를 최소화하여 시제품 보관 중 균체의 사멸 속도를 낮추어 주므로 이를 위해 최적 건조시간의 설정이 요구된다. 이에 본 실시예의 이전 단계까지는 예비실험을 토대로 5시간의 건조시간을 설정하여 실험을 진행하였으나, 10% skim milk와 10% protectant의 첨가에 따른 bead 내의 수분함량의 변화 가능성이 존재함으로 최적 건조시간과 장기보관에 적합한 수분함량을 재설정할 필요성이 제기되었다.
각 실험은 균주별로 최적의 생존율을 나타낸 조건으로 만든 Ca-alginate bead 효모 종균을 이용하였으며, 37℃에서 7시간 동안 건조하면서 시간당 생존율과 수분함량의 변화를 관찰한 결과를 도면 7에 나타내었다. 실험 결과, 예비 실험과 마찬가지로 5시간 건조하였을 때 수분함량이 9.8-10.1%로 장기보관에 적합한 수분함량을 나타내었고, 생존율 역시 83.4-92.4%로 우수하였다. 이는 10% skim milk와 10% protectant가 Ca-alginate bead 효모 종균 시제품의 전체 수분함량에 큰 영향을 미치지 않기 때문으로 보여진다.
2.6. 투과전자현미경( SEM )을 이용한 Ca-alginate bead 효모 종균 시제품 관찰
각각의 Ca-alginate bead 효모 종균이 어떠한 형태로 bead 내에서 보관되고 있는지 알아보기 위하여 scanning electron microscope(SU8220, Hitachi, Japan)을 이용하여 1,000배의 배율로 bead 내부를 관찰한 결과를 도 8에 나타내었다.
현미경 관찰을 위한 준비 단계로써, 오븐에서 각 bead의 수분을 완전 제거한 다음, 커터칼로 bead를 정교하게 절단한 후 내부를 관찰하였다. 관찰 결과, 각 효모들은 bead 내에서 skim milk나 당류에 의해 코팅이 된 상태로 매우 조밀하게 뭉쳐져 있음을 알 수 있다.
또한 일부 효모들은 출아흔이 관찰되어 배양이 왕성한 단계에서 종균 제품화가 되었음을 알 수 있고, 이는 본 발명의 방법으로 제조된 종균 제품을 사용 시, 단시간에 균체 활성을 띄게 될 것이란 것을 확인하였다.
2.7. 장기보관 실험에 따른 Ca-alginate bead 효모 종균 시제품의 생존율 비교
각 효모마다 최적의 생존율을 나타낸 조건으로 만들어진 2% Ca-alginate bead 효모 종균을 4℃에서 장기보관하면서 생존율과 생균수의 변화를 관찰한 결과를 도 9에 나타내었다. 4℃ 보관의 경우, 모든 효모 종균에서 4개월까지는 종균으로의 사용가능한 정도로 생존율이 감소하였으며 S. cerevisiae D8은 29%의 생존율을 S. cerevisiae M12는 34.7%의 생존율을 S. cerevisiae S13은 39.3%의 생존율을 각각 나타내었다. 5개월부터는 균수가 급격하게 줄어들어 log CFU/mL 값이 최대 2까지 감소하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
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Claims (6)

  1. 균체와 1.5 이상 2.5% 미만 농도(w/v)의 소디움알지네이트를 혼합하여 종균용액을 제조하는 단계(S1);
    상기 종균용액에 염화칼슘 용액을 분사하여 칼슘-알지네이트 비드를 제조하는 단계(S2); 및
    상기 칼슘-알지네이트 비드를 건조 보호용 조성물에 침지한 후, 송풍건조기로 건조하는 단계(S3)를 포함하고,
    상기 건조 보호용 조성물은 8 내지 12%(w/v)의 스킴밀크 및 5 내지 10%(w/v)의 당류를 포함하는 것이며,
    상기 당류는 수크로스(sucrose), 라피노오스(raffinose), 및 트레할로스(trehalose)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것이고,
    상기 효모 배양액은 사카로마이세스 세레비지에 D8(Saccharomyces cerevisiae D8, 수탁번호 : KACC93245P), 사카로마이세스 세레비지에 M12(Saccharomyces cerevisiae M12, 수탁번호 : KACC93246P), 및 사카로마이세스 세레비지에 S13(Saccharomyces cerevisiae S13, 수탁번호 : KACC 93247P)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는, 사카로마이세스 세레비지에 효모 종균의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 균체는,
    a) 효모 배양액을 배지에 접종한 후, 진탕배양하는 단계;
    b) 상기 진탕배양된 효모 배양액을 원심분리하여 균체를 분리하는 단계; 및
    c) 상기 원심분리된 균체를 세척하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는, 효모 종균의 제조방법.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
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