KR101796500B1 - Lactobacillus Pentosus GFC03 and Fermented Whey Manufactured Using Thereof - Google Patents

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차미연
김주연
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Abstract

The present invention relates to a Lactobacillus pentosus GFC03 strain and fermented whey manufactured by using the same. The novel Lactobacillus pentosus GFC03 strain (Accession No: KCCM43226), a strain culture or fermented whey manufactured by using the GFC03 strain has excellent whitening and skin wrinkle alleviating effects, thereby being used as a cosmetic composition.

Description

락토바실러스 펜토서스 GFC03 균주 및 이를 이용하여 제조된 유청 발효물 {Lactobacillus Pentosus GFC03 and Fermented Whey Manufactured Using Thereof} Lactobacillus pentosus GFC03 and Fermented Whey Manufactured Using Thereof}

본 발명은 락토바실러스 펜토서스 균주 및 이를 이용하여 제조된 유청 발효물 에 관한 것이다.
The present invention relates to a lactobacillus pentosus strain and a whey fermented product prepared using the same.

프로바이오틱스(Probiotics)는 Pro와 Biotics의 합성어로서, Pro는 '~를 위한'을 의미하고, 'Biotics'는 생명을 뜻한다. 세계보건기구(WHO)는 프로바이오틱스를 건강에 좋은 효과를 주는 살아있는 균으로 정의하고 있다. 프로바이오틱스라는 단어의 역사는 그리 길지 않으나 인류의 생활에 들어온 지는 수천 년이 되었다. 치즈와 요구르트부터 우리나라의 김치와 된장에 이르기까지 발효를 이용하고 부패를 막고 영양가를 높인 전통 음식들에도 프로바이오틱스가 들어있다. 이 중 대표적인 것이 바로 유산균이다.Probiotics is a combination of Pro and Biotics, Pro means 'for', and 'Biotics' means life. The World Health Organization (WHO) defines probiotics as a living organism that has good health effects. The word probiotics does not have a long history, but it has been thousands of years since it came into human life. Probiotics are also used in traditional foods that utilize fermentation, prevent corruption and increase nutritional value, from cheese and yogurt to kimchi and miso in Korea. A representative of these is lactic acid bacteria.

화장품 분야에서는 유산균 배양액이 1955년 상품화된 이후 현재까지 사용되고 있는데 주로 스트렙토코쿠스 속(Streptococcus sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 락토코쿠스 속(Lactococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.) 등을 이용하여 직접 배양액에 발효하여 여과하거나 추출하는 등의 원료 형태 및 활성 소재에 접종하여 발효한 후 여과하거나 추출하는 등의 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 특히, 유용성과 안전성을 모두 갖춘 유익균으로 알려진 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus)는 락토바실러스 속 유산균으로 사람의 장내에 상재하며, 항균·항산화 효과를 가지며, 항염 작용, 면역조절 작용에도 관여하는 매우 유용한 균주로서 유제품이나 건강기능식품, 화장품 등 다방면의 산업에서 유익하게 활용되고 있다.
Lactobacillus sp. , Lactococcus sp. , Lactococcus sp. , Lactobacillus sp. , And Lactobacillus sp. Have been used in the field of cosmetics since the commercialization of lactic acid bacteria in 1955 . Leuconostoc sp. ) And Bifidobacterium sp. ), Fermenting directly into the culture medium, filtering and extracting the raw material, and filtering and extracting the fermented material by inoculating the active material. . In particular, Lactobacillus pentosus , which is known as a beneficial microorganism having both usefulness and safety, is a lactobacillus lactic acid bacterium and is highly active in the intestines of humans, has antimicrobial and antioxidative effects, and is very useful in anti-inflammatory and immunomodulatory actions As a strain, it is advantageously utilized in various industries such as dairy products, health functional foods, and cosmetics.

한편, 유청(乳淸)은 우유가 엉겨서 응고된 뒤 남은 액체이며, 훼이(Whey) 또는 유장(乳漿)이라고도 한다. 우유에는 수분, 단백질, 지방, 탄수화물, 무기질, 비타민, 효소 등이 포함되어있다. 지방은 가장 중요한 성분이며 이것을 제외한 것을 탈지유라고 한다. 탈지유에 산 또는 응유효소를 첨가하면 응고물이 생기는데 이것을 응유(Curd)라 하며 우유의 주단백질인 카세인이 주성분이다. 응유를 제외한 수용액을 유청(Whey)이라 하고 전 단백질의 20%를 포함한다. 유청에는 유당, 락토알부민, 락토글로불린, 무기질 등이 포함되어 있다. 락토글로불린에는 면역글로불린이 포함되어 있으며 특히 초유에 함량비가 높다. 유청은 보통 치즈 생산물의 부산물로만 여겨져 왔으나, 차츰 그 영양학적 중요성과 건강증진 기능성의 우수함이 밝혀지고 있다. 치즈 제조 중 우유 성분의 상당 부분이 유청으로 흘러나오므로 유청은 단백질, 유당, 무기질 및 비타민의 함량이 상당히 높다. On the other hand, milk (milk) is a remnant liquid after coagulation of milk, and it is also called whey or whey. Milk contains water, protein, fat, carbohydrates, minerals, vitamins, and enzymes. Fat is the most important ingredient and the exception is skim milk. The addition of acid or cough enzyme to skim milk results in clotting, which is called curd and is the main component of milk, casein. The aqueous solution except for the curd is referred to as whey and contains 20% of the total protein. Whey contains lactose, lacto-albumin, lactoglobulin, and minerals. Lactoglobulin contains immunoglobulins, especially in colostrum. Whey has usually been regarded as a by-product of cheese products, but gradually its nutritional importance and health-promoting functionality have been found to be excellent. Since a significant portion of the milk component flows into the whey during cheese production, the content of protein, lactose, minerals and vitamins in whey is very high.

유청을 화장품 소재에 적용하는 기술로서, 국내의 경우 대한민국 등록특허공보 제10-0030790호「피부용 보습제의 제조법」에서는 동물의 젖을 주성분으로 하는 배양기에 유산균을 접종한 다음, 유산발효시켜 얻어진 배양물에서 유청을 채취하고, 그 유청을 감압 하에 약 30-50℃로 가열하고, 유청을 약 10-20% 증발시켜 유청 중의 아세트알데히드, 아세톤 및 다이아세틸성분이 0.5ppm이하로 될때까지 그 일부를 증발시키는 것을 특징으로 하는 피부용 보습제의 제조법을 개시하였다.As a technology for applying whey to cosmetic materials, Korean Patent Registration No. 10-0030790 entitled " Method for Producing a Skin Moisturizing Agent " in Korea, discloses a method of inoculating a lactic acid bacterium into an incubator having an animal milk as a main component, The whey is picked, the whey is heated to about 30-50 DEG C under reduced pressure, and about 10-20% of the whey is evaporated to evaporate a portion of the whey until the acetaldehyde, acetone and diacetyl components in the whey become less than 0.5 ppm The present invention relates to a method for producing a skin moisturizer.

또한, 대한민국 등록특허공보 제10-0027759호「항산화제 함유 화장품」에서는 동물의 유배지를 사용한 유산균 배양액에서 채취된 유청에서 분자량 6000 이상의 고분자량물질을 실질적으로 제거하여서 이루어진 항산화제를 0.03-3.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화제 함유 화장품을 개시하였다.
Korean Patent Registration No. 10-0027759 entitled " Cosmetics Containing Antioxidants " discloses that an antioxidant obtained by substantially removing a high molecular weight substance having a molecular weight of 6000 or more from 0.03-3.0 wt% of whey collected from a culture solution of lactic acid bacteria using an animal's ex- A cosmetic composition containing an antioxidant is disclosed.

이에, 본 발명자들은 우리나라 전통식품인 김치에서 분리한 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226), 균주 배양액 또는 GFC03 균주를 이용하여 제조된 유청 발효물이 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
Accordingly, the inventors of the present invention have found that a whey fermented product prepared using a strain of Lactobacillus pentosus GFC03 (accession number: KCCM43226), a culture broth of a strain or GFC03 isolated from kimchi, which is a traditional Korean food, ) And an ability to inhibit extracellular melanin production, thus completing the present invention.

대한민국 등록특허공보 제10-0030790호Korean Patent Publication No. 10-0030790 대한민국 등록특허공보 제10-0027759호Korean Patent Publication No. 10-0027759

본 발명의 목적은 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는 신규한 균주 및 이를 이용하여 제조된 유청 발효물을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide a novel strain having an ability to inhibit elastase and extracellular melanin production and a fermented whey product prepared using the same.

본 발명의 다른 목적은 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는 유청 발효물의 제조방법을 제공하는 데 있다.Another object of the present invention is to provide a method for producing a whey fermented product having an ability to inhibit elastase and extracellular melanin production.

본 발명의 또 다른 목적은 균주, 균주 배양액 또는 유청 발효물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
It is still another object of the present invention to provide a cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement, which comprises a strain, a culture broth of a strain or a fermented whey product as an active ingredient.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a strain of Lactobacillus pentosus GFC03 (accession number: KCCM43226) having an ability to inhibit elastase and extracellular melanin production.

본 발명에 있어서, 상기 균주는 김치 유래인 것을 특징으로 한다.In the present invention, the strain is characterized in that it is derived from kimchi.

또한, 본 발명은 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)를 우유에 접종하고, 배양하여 요거트를 제조하는 단계; 및 제조된 요거트를 원심분리시킨 다음 상층액을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 유청 발효물의 제조방법을 제공한다.Also, the present invention provides a method for producing yogurt comprising the steps of: inoculating and culturing milk of Lactobacillus pentosus GFC03 strain (accession number: KCCM43226); And centrifuging the prepared yogurts to obtain a supernatant. The present invention also provides a method for producing a fermented whey product.

본 발명에 있어서, 상기 배양은 28 ~ 33℃에서 2 ~ 7일 동안 수행되는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the culturing is performed at 28 to 33 DEG C for 2 to 7 days.

또한, 본 발명은 상기와 같은 제조방법을 통해 제조된 유청 발효물을 제공한다.The present invention also provides a fermented whey product produced by the above-described method.

또한, 본 발명은 상기 균주, 균주 배양액 또는 유청 발효물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
The present invention also provides a cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement, which comprises the above-mentioned strain, culture broth or whey fermented product as an active ingredient.

본 발명으로부터 제공되는 신규한 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226), 균주 배양액 또는 GFC03 균주를 이용하여 제조된 유청 발효물은 엘라스타아제(Elastase) 억제능 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능이 우수하기 때문에, 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물로 활용 가능하다.
The whey fermented product prepared using the novel Lactobacillus pentosus GFC03 strain (accession number: KCCM43226), the strain culture or the GFC03 strain provided from the present invention has an elastase inhibitory activity and an extracellular melanin It is possible to use it as a cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement.

도 1은 MRS 배지에서 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)를 분리한 사진이다.
도 2는 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 3은 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226) 배양액의 세포독성 평가를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 유청 발효물 및 시판되는 식품 요거트 유청의 세포독성 평가를 나타낸 그래프이다.
도 5는 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주 배양액 및 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액의 Elastase 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 유청 발효물, 시판되는 식품 요거트 유청 및 락토바실러스 봄비콜라 유청 발효물의 Elastase 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 7은 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주 배양액, 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액 및 락토바실러스 쿠바투스 균주 배양액의 Elastase 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 유청 발효물, 시판되는 식품 요거트 유청 및 락토바실러스 퍼멘튬 유청 발효물의 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 유청 발효물의 피부 첩포 안전성 결과를 나타낸 것이다.1 is a photograph of a strain of Lactobacillus pentosus GFC03 (Accession No .: KCCM43226) isolated from MRS medium.
2 shows the nucleotide sequence of the Lactobacillus pentosus GFC03 strain (Accession No. KCCM43226).
Fig. 3 is a graph showing the cytotoxicity evaluation of the culture broth of Lactobacillus pentosus GFC03 (Accession No .: KCCM43226).
4 is a graph showing the cytotoxicity evaluation of whey fermented product and commercially available food yoghurt whey according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 is a graph showing Elastase inhibitory activity of Lactobacillus pentosus GFC03 ( Lactobacillus pentosus GFC03) culture broth and Lactobacillus bovis cola culture broth.
FIG. 6 is a graph showing the inhibitory activity of the whey fermented product, commercially available yogurt whey, and lactobacillus spring boar cola fermented product according to an embodiment of the present invention.
FIG. 7 is a graph showing Elastase inhibitory activity of Lactobacillus pentosus GFC03, Lactobacillus bovisolca, and Lactobacillus clavatus cultures.
8 is a graph showing the inhibitory effect on the production of extracellular melanin of whey fermented product, commercially available fermented wheat yogurt and fermented Lactobacillus fermentum according to an embodiment of the present invention.
FIG. 9 shows the results of skin patching safety of the whey fermented product according to an embodiment of the present invention.

이에, 본 발명에서는 우리나라 전통식품 김치에서 분리된 미생물로부터 미백 및 주름개선 효능을 갖는 균주를 스크리닝하여, 엘라스타아제(Elastase) 억제능 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능이 우수한 균주를 선발하고, 16s rDNA 염기서열 분석을 실시한 결과, 락토바실러스(Lactobacillus) 속(genus)에 속하는 신규 미생물임을 확인하였다. 이에, 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)로 명명하고 2016년 8월 19일자로 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms)에 기탁하였다.
In the present invention, a strain having a whitening effect and an anti-wrinkle-reducing effect was screened from microorganisms isolated from Korean traditional food kimchi, and strains having excellent inhibitory activity against elastase and inhibition of extracellular melanin production were selected, and a 16s rDNA sequence As a result of the analysis, it was confirmed that it is a new microorganism belonging to the genus of Lactobacillus . The strain was named Lactobacillus pentosus GFC03 (Accession No .: KCCM43226) and deposited on August 19, 2016 at the Korean Culture Center of Microorganisms.

따라서, 본 발명은 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)(이하 'GFC03'로 약칭함)에 관한 것이다.Accordingly, the present invention relates to a strain of Lactobacillus pentosus GFC03 (accession number: KCCM43226) (hereinafter abbreviated as 'GFC03') having an ability to inhibit elastase and extracellular melanin production.

이때, 상기 GFC03 균주는 김치 유래인 것을 특징으로 한다.At this time, the GFC03 strain is characterized in that it is derived from kimchi.

상기 GFC03 균주는 MRS 배지(Proteose peptone) No. 3. 10g, (Beef extract) 10g, 효모 추출물(Yeast extract) 5.0g, 덱스트로오스(Dextrose) 20g, 폴리소르베이트 80(Polysorbate 80) 1.0g, 시트르산암모늄(Ammonium citrate) 2.0g, 아세트산나트륨(Sodium acetate) 5.0g, 황산마그네슘(Magnesium sulfate) 0.1g, 황산망간(Manganese sulfate) 0.05g, 디포타슘포스페이트(Dipotassium phosphate) 2.0g, 한천(agar) 15.0g / 1L, Difco, USA)에 접종한 다음, 혐기조건 하에 28 ~ 33℃에서 2 ~ 7일 동안 배양하는 것이 균주 증식이 원활하게 이루어지는 측면에서 바람직하다.The GFC03 strain is an MRS medium (Proteose peptone). 3. 10 g of Beef extract, 5.0 g of Yeast extract, 20 g of Dextrose, 1.0 g of Polysorbate 80, 2.0 g of Ammonium citrate, Sodium acetate), 0.1 g of magnesium sulfate, 0.05 g of manganese sulfate, 2.0 g of diphotassium phosphate, 15.0 g / l of agar, Difco, USA) Next, it is preferable that the culture is carried out at 28 to 33 ° C under anaerobic conditions for 2 to 7 days in order to facilitate the growth of the strain.

상기 GFC03 균주 및 균주 배양액은 엘라스틴을 과도하게 분해하여 콜라겐 간 결합의 약화와 피부 주름의 원인으로 작용하는 엘라스타아제(Elastase)를 억제하는 효능이 우수하여 피부 주름개선 효능을 갖으며, 세포 외 멜라닌 생성 억제능이 우수하여 미백 효능을 갖는 것을 특징으로 한다.
The GFC03 strain and the culture medium of the strain have an efficacy to decompose elastin excessively and to exert an effect of inhibiting elastase (Elastase) which acts as a cause of weakening of collagen bonds and wrinkles of skin, And is excellent in inhibiting the production and having a whitening effect.

또한, 본 발명은 GFC03 균주를 우유에 접종하고, 배양하여 요거트를 제조하는 단계; 및 제조된 요거트를 원심분리시킨 다음 상층액을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 유청 발효물의 제조방법에 관한 것이다.In addition, the present invention provides a method for producing yogurt, comprising the steps of: inoculating and culturing GFC03 strain in milk to prepare yogurt; And centrifuging the resulting yogurts to obtain a supernatant. The present invention also relates to a method for producing a whey fermented product.

이때, 우유는 시중에 판매하는 우유를 사용할 수 있으며, 최적의 요거트를 제조하기 위해서는 저지방, 고칼슘 우유는 제외하는 것이 바람직하다.At this time, milk sold in the market can be used, and in order to produce an optimum yogurt, it is preferable to exclude low-fat, high-calcium milk.

상기 GFC03 균주는 혐기조건 하에 28 ~ 33℃에서 2 ~ 7일 동안 배양하여 요거트를 제조하는 것을 특징으로 한다. 만일, GFC03 균주를 접종하고 배양 시, 상기 배양 온도 및 시간을 벗어날 경우에는 발효균주의 배양조건이 맞지 않아 충분한 미백 및 주름 개선효과를 나타낼 수 없을 뿐만 아니라, 균주 증식이 되지 않기 때문에 바람직하지 않다. The strain GFC03 is cultured under anaerobic conditions at 28 to 33 DEG C for 2 to 7 days to produce yogurt. If the GFC03 strain is inoculated and is out of the culture temperature and time during the culture, the culturing conditions of the fermenting bacteria do not match, and sufficient whitening and wrinkle-reducing effects can not be exhibited.

상기와 같이 제조된 요거트는 원심분리시킨 다음 상층액을 수득하여 유청 발효물을 제조하는 것일 수 있다. 이때, 요거트를 원심분리 할 경우 응유(Curd)과 상층액인 액상으로 분리되는데, 최종적으로 수득된 유청 발효물은 응유(Curd)를 제외한 액상인 것을 특징으로 한다.
The yogurt thus prepared may be centrifuged to obtain a supernatant to produce a whey fermented product. At this time, when the yogurt is centrifuged, it is separated into a curd and a liquid phase which is a supernatant. The finally obtained whey fermented product is a liquid phase except curd.

또한, 본 발명은 상기 유청 발효물의 제조방법을 통해 제조된 유청 발효물에 관한 것이다.The present invention also relates to a whey fermented product produced by the above method for producing a whey fermented product.

상기 유청 발효물은 엘라스타아제(Elastase) 억제능 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능이 우수하여 미백 및 주름개선 효능을 갖는 것을 특징으로 한다.
The whey fermented product is characterized by being excellent in the ability to inhibit elastase and inhibit the formation of extracellular melanin, and has a whitening and wrinkle-reducing effect.

따라서, 본 발명은 상기 균주, 균주 배양액 또는 유청 발효물을 유효성분으로 포함하는 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.Accordingly, the present invention relates to a cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement comprising the above-mentioned strain, culture broth or whey fermented product as an active ingredient.

본 발명의 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.The cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement of the present invention can be used as an external ointment for skin, a cream, a softening longevity, a nutritional lotion, a pack, essence, a hair tonic, a shampoo, a rinse, a hair conditioner, a hair treatment, a gel, a skin lotion, Toner, Astringent, Lotion, Milk Lotion, Moisture Lotion, Nutrition Lotion, Massage Cream, Nourishing Cream, Eye Cream, Moisture Cream, Hand Cream, Foundation, Nutrition Essence, Sunscreen, Soap, Cleansing Foam, Cleansing Lotion, Cleansing Cream, Body Lotions, and body cleansers, but are not limited thereto. The composition of each of these formulations may contain various kinds of bases and additives necessary for formulation of the formulation, and the kinds and amounts of these ingredients can be easily selected by those skilled in the art.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal fibers, plant fibers, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide are used as carrier components .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.In the case of the solution or emulsion of the present invention, a solvent, a solvent or an emulsifier is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component is selected from aliphatic alcohol sulfates, aliphatic alcohol ether sulfates, sulfosuccinic acid monoesters, isethionates, imidazolinium derivatives, methyltaurate, sarcosinates, fatty acid amides Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linolenic derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters.

본 발명의 주름 개선 및 피부탄력 개선용 화장료 조성물에서, 상기 유청 발효물은 상기 화장료 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01 내지 99 중량% 함유되어 있을 수 있고, 바람직하게는 7 내지 15 중량% 함유되어 있을 수 있으나, 바람직한 피부 미백 또는 주름 개선 효과를 제공할 수 있는 유효량을 포함한다면 이에 제한되지 않는다.
In the cosmetic composition for wrinkle improvement and skin elasticity improvement of the present invention, the whey fermented product may be contained in an amount of 0.01 to 99% by weight, preferably 7 to 15% by weight, based on the total weight of the cosmetic composition But not limited to, an effective amount that can provide a desired skin whitening or wrinkle reducing effect.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are not to be construed as limiting the scope of the present invention. It will be self-evident.

<실시예 1> 균주의 분리 및 선발Example 1 Isolation and Selection of Strain

전통 발효 식품인 김치로부터 유용한 기능을 하는 유산균을 분리하기 위해, 먼저 김치 시료를 10진 희석법으로 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6으로 희석한 후 Bromophenol blue를 0.002% 첨가한 MRS 배지((Proteose peptone) No. 3. 10g, (Beef extract) 10g, 효모 추출물(Yeast extract) 5.0g, 덱스트로오스(Dextrose) 20g, 폴리소르베이트 80(Polysorbate 80) 1.0g, 시트르산암모늄(Ammonium citrate) 2.0g, 아세트산나트륨(Sodium acetate) 5.0g, 황산마그네슘(Magnesium sulfate) 0.1g, 황산망간(Manganese sulfate) 0.05g, 디포타슘포스페이트(Dipotassium phosphate) 2.0g, 한천(agar) 15.0g / 1L, Difco, USA)에 도말한 다음, 주변에 노란색 환을 형성하는 콜로니(Colony)를 유산균 속 후보군(GFC01~04)으로 분리하였다.(도 1) 분리된 균주들 중 엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능 테스트를 통해 가장 효능이 우수한 GFC03 균주를 선발하였다.
In order to isolate useful lactic acid bacteria from kimchi, which is a traditional fermented food, kimchi samples were first diluted to 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 , and 10 -6 by decylation method and then Bromophenol blue 10 g of Proteose peptone No. 3, 10 g of Beef extract, 5.0 g of yeast extract, 20 g of Dextrose and 1.0 g of Polysorbate 80 2.0 g of ammonium citrate, 5.0 g of sodium acetate, 0.1 g of magnesium sulfate, 0.05 g of manganese sulfate, 2.0 g of dipotassium phosphate, ), 15.0g / 1L, Difco, USA), and a colony forming a yellow circle in the periphery was separated into candidate members of lactic acid bacteria (GFC01 ~ 04) (Figure 1). Among the isolated strains, Elastase and extracellular melanin production inhibition test showed that the most effective GFC03 strain It was.

<< 실시예Example 2>  2> 선발균주Selection strain 16s  16s rDNArDNA 염기서열 분석 Sequencing

최종 선발된 GFC03 균주의 gDNA와 Universal primer인 서열번호 1: 27F(5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3')와 서열번호 2: 1492R(5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACTT 3')을 이용하여 PCR을 수행한 다음, 16S rDNA sequence 분석을 수행하여 염기서열(서열번호 3)을 확인하였다.(도 2) 16s rDNA sequencing 결과를 바탕으로 NCBI에서 제공하는 BLAST search를 통하여 상동성 분석을 수행하였다. 상동성 분석 결과 분리 균주는 락토바실러스(Lactobacillus) 속(genus)에 속하는 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus)와 98.76%의 유사성을 갖는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03)으로 명명하였고, 국제미생물특허 기탁기관인 한국미생물보존센터(KCCM)에 2016년 8월 19일자로 기탁하고, 기탁번호 KCCM 43226를 부여받았다.
(5 'AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3') and SEQ ID NO: 2: 1492R (5 'TAC GGY TAC CTT GTT ACT ACTT 3') which is the universal primer of the GFC03 strain (SEQ ID NO: 3) was confirmed by performing 16S rDNA sequence analysis (FIG. 2). Based on the result of 16s rDNA sequencing, homology analysis was performed through BLAST search provided by NCBI . Homology analysis isolates could be confirmed that the Lactobacillus pento suspension (Lactobacillus pentosus) and 98.76% similarity to belong to the Lactobacillus bacteria (Lactobacillus) genus (genus). Therefore, it was named Lactobacillus pentosus GFC03, deposited on August 19, 2016 and deposited under the deposit number KCCM 43226 at the Korean Microorganism Conservation Center (KCCM), the international microorganism patent depository.

<실시예 3> GFC03 균주 배양액 제조Example 3 Production of Culture Medium of GFC03 Strain

GFC03 균주를 MRS 배지(Difco, USA)에 접종하고, 37℃에서 4일동안 배양하여 최종 GFC03 균주 배양액을 제조하였다.
GFC03 strain was inoculated into MRS medium (Difco, USA) and cultured at 37 DEG C for 4 days to prepare a final GFC03 strain culture.

<실시예 4> 유청 발효물 제조Example 4: Preparation of whey fermented product

우유는 시중에 판매하는 우유를 구매하여 사용하였다. 먼저, 우유 100g에 GFC03 균주를 1X107cfu/ml로 접종하고, 28℃에서 3일동안 정치배양하여 요거트를 제조하였다. 수득된 요거트를 원심분리하여 응유(Curd)과 상층액인 액상(유청 발효물)으로 분리하였고, 응유(Curd)를 제외한 최종 유청 발효물을 수득하였다.
Milk was purchased and sold in the market. First, 100 g of milk was inoculated with 1 × 10 7 cfu / ml of GFC03 strain, and cultured for 3 days at 28 ° C. to prepare yogurt. The obtained yogurt was centrifuged and separated into a curd and a liquid phase (whey fermentation product) as a supernatant, and a final whey fermentation product except curd was obtained.

<< 실시예Example 5> 세포독성 시험 :  5> Cytotoxicity test: WSTWST assay assay

상기 실시예 3의 균주 배양액 및 실시예 4의 유청 발효물의 세포에 대한 자극성을 확인하기 위해 B16-F10 멜라노마 세포를 대상으로 세포독성 실험을 진행하였다. 먼저, B16-F10 멜라노마 세포(ATCCⓡ CRL 6475™)는 96 well plate(Corning 3590)에 5*10^3 / well로 배양하였다. 균주 배양액 및 유청 발효물을 농도별로 처리하고 48시간 이후에 DMEM media에 10% EZ-Cytox(대일, 99-EZ3000)을 혼합하여 시료 처리한 Media를 Suction 후 1well당 100ul씩 분주하였다. 2시간 배양 후 마이크로플레이트 리더기(Microplate reader; Biotek, Synergy HT)로 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 비교예로는 시중에 판매하는 식품 요거트 유청을 사용하였다.To confirm the irritation of the cell culture of Example 3 and the whey fermented product of Example 4, B16-F10 melanoma cells were subjected to cytotoxicity tests. First, B16-F10 melanoma cells (ATCC CRL ⓡ 6475 ™) were cultured with 5 * 10 ^ 3 / well in 96 well plate (Corning 3590). After 48 hours, 10% EZ-Cytox (Daeil, 99-EZ3000) was mixed with DMEM media and the samples were treated with 100ul per well after suction. After incubation for 2 hours, absorbance was measured at 450 nm wavelength with a microplate reader (Biotek, Synergy HT). As a comparative example, commercially available yogurt whey was used.

세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 처리군(무처리군)과 비교하여 계산하였으며 계산식은 다음과 같다. Cell viability was calculated by comparing with the untreated group (untreated group) and the calculation formula was as follows.

세포 생존율 (%) = (시료를 처리군의 흡광도 / 무처리군의 흡광도) * 100Cell survival rate (%) = (absorbance of treated group / absorbance of untreated group) * 100

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 GFC03 균주 배양액은 최대 2% 처리 농도까지 생존율이 90% 이상으로 B16/F10 세포에 대한 독성이 나타나지 않았으며, 도 4에 나타난 바와 같이 유청 발효물 및 식품 요거트 유청 역시 최대 4% 처리 농도까지 생존율이 90% 이상으로 B16/F10 세포에 대한 독성이 나타나지 않아 화장품에 안전한 소재로 사용이 가능함을 확인하였다.
As a result, as shown in FIG. 3, the culture of the GFC03 strain showed no toxicity to the B16 / F10 cells at a survival rate of 90% or higher up to the treatment concentration of 2%, and as shown in FIG. 4, Also, it was confirmed that the survival rate of 90% or more was not toxic to B16 / F10 cells up to the treatment concentration of 4%, and thus it could be used as a safe material for cosmetics.

<실시예 6> 항주름 효능 시험 : 엘라스타아제(Elastase) 활성 억제&Lt; Example 6 > Anti-wrinkle efficacy test: Elastase activity inhibition

상기 실시예 3의 균주 배양액 및 실시예 4의 유청 발효물을 다양한 농도별로 희석한 다음, 10mM Tris-HCl buffer에 녹인 1.6mM N-석시닐-알라닌-알라닌-알라닌-p-니트로아닐라이드(N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide)(S4760, Sigma)를 첨가한 다음, 혼합하여 5분 동안 반응시킨 후 410nm에서 흡광도를 측정하여 항주름 활성을 확인하였다. The fermentation broth of Example 3 and the whey fermentation of Example 4 were diluted with various concentrations and then diluted with 1.6 mM N-succinyl-alanine-alanine-alanine-p-nitroanilide (N -Succinyl- (Ala) 3-p-nitroanilide (S4760, Sigma) was added, followed by mixing and reacting for 5 minutes. Absorbance was measured at 410 nm to confirm anti-wrinkle activity.

이때, 실시예 3의 비교예로는 락토바실러스 봄비콜라(Lactobacillus bombicola)(수탁번호: KCCM 43227) 균주를 적용한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방법으로 제조된 균주 배양액을 사용하였으며, 실시예 4의 비교예로는 ①시중에 판매하는 식품 요거트 유청 및 ③락토바실러스 봄비콜라(Lactobacillus bombicola)(수탁번호: KCCM 43227) 균주를 적용한 것을 제외하고는 실시예 4와 동일한 방법으로 제조된 유청 발효물을 사용하였다.As a comparative example of Example 3, a culture medium of the strain prepared in the same manner as in Example 3 was used, except that a strain of Lactobacillus bombicola (Accession No .: KCCM 43227) was used. In Example 4 The whey fermented product prepared in the same manner as in Example 4, except that (1) commercially available food yogurt whey and (3) Lactobacillus bombicola (accession number: KCCM 43227) Respectively.

ElastaseElastase 활성억제 (%) = (시료  Activity inhibition (%) = (sample 처리군의Treatment group 흡광도 / control군의 흡광도) *100 Absorbance / absorbance of control group) * 100

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액은 4% 처리시 엘라스타아제 억제율이 30%였으나, GFC03 균주 배양액은 4% 처리시 엘라스타아제 억제율이 60%이고, IC50 값이 3.96%인 것으로 나타났다. 따라서, 같은 락토바실러스 속이라 할지라도, 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액 대비 락토바실러스 펜토서스 GFC03 균주 배양액이 피부 주름개선 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. As a result, the Lactobacillus spring rain coke strain culture solution as shown in 5 is yeoteuna elastase kinase inhibitory rate of 30% for 4% processing, GFC03 strain culture solution is elastase kinase inhibitory rate of 60% for 4% processing, and the IC 50 value 3.96%. Accordingly, it was confirmed that the culture broth of Lactobacillus pentosus GFC03 strain was superior to the culture medium of Lactobacillus bovis cola, even in the same Lactobacillus species, to improve skin wrinkles.

또한, 도 6에 나타난 바와 같이 식품요거트 유청 대비 GFC03 균주를 이용한 유청 발효물을 농도별로 처리하였을 때 유의성있는 엘라스타아제 억제율을 나타내었다. 식품요거트 유청의 경우에는 4% 처리시 엘라스타아제 억제율이 65.85%였으나, GFC03 균주를 이용한 유청 발효물은 4% 처리시 엘라스타아제 억제율이 83.98%로 확인되어 피부 주름개선 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. 또한, 락토바실러스 봄비콜라(Lactobacillus bombicola) 균주를 적용한 유청 발효물은 4% 처리시 엘라스타아제 억제율이 18%인 것으로서, GFC03 균주를 이용한 유청 발효물 대비 피부 주름개선 효과가 현저하게 낮은 것을 확인할 수 있었다.
Also, as shown in FIG. 6, whey fermented product using GFC03 strain versus food yogurt whey was treated by concentration to show a significant inhibition of elastase. In the case of the yogurt yogurst, the inhibition rate of elastase was 65.85% at 4% treatment, but the inhibition rate of elastase was 83.98% at 4% treatment of whey fermented product using GFC03 strain. there was. In addition, the whey fermented product to which Lactobacillus bombicola strain was applied had an elastase inhibition ratio of 18% at 4% treatment, and it was confirmed that the effect of improving the wrinkles of wheat fermented product compared with whey fermented product using GFC03 strain was remarkably low there was.

<실시예 7> 미백 효능 시험 : 세포 외 멜라닌 분석Example 7 Whitening Efficacy Test: Extracellular Melanin Analysis

B16-F10 멜라노마 세포는 6well에 1.2X10^5/well로 배양하였다. 배양 24시간 이후, 멜라닌 분비를 유도하기 위해 α-MSH(Sigma M4135)를 50nM로 처리하였고 동시에 실시예 3의 균주 배양액 및 실시예 4의 유청 발효물을 다양한 농도로 세포에 처리하였다. 이때 멜라닌 분석을 위해 페놀이 없는 DMEM media(10% FBS, 페니실린(100 unit/ml), 스트렙토마이신(100 ug/ml))를 사용하였다. 시료 처리 48~60시간 후 세포와 배양액을 15ml Conical tube에 옮긴 후 상온에서 3,000RPM에서 10분간 원심분리를 진행하였다. 세포 외 멜라닌 분석을 위해 세포의 배양액을 96 well plate(corning 3595)에 1well 당 100ul씩 농도별로 총 4well을 분주 한 후 마이크로 플레이트 리더기로 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.B16-F10 melanoma cells were cultured in 6 wells at 1.2 × 10 ^ 5 / well. After 24 hours of incubation, α-MSH (Sigma M4135) was treated with 50 nM to induce melanin secretion, and at the same time, the culture broth of Example 3 and the whey fermented product of Example 4 were treated at various concentrations. At this time, phenol-free DMEM media (10% FBS, penicillin (100 unit / ml), streptomycin (100 ug / ml)) was used for melanin analysis. After 48-60 hours, the cells and the culture were transferred to a Conical tube and centrifuged at 3,000 RPM for 10 minutes at room temperature. For the extracellular melanin assay, the cell culture was dispensed into a 96 well plate (corning 3595) at a rate of 100 ul per well in a total of 4 wells, and the absorbance was measured at 450 nm using a microplate reader.

이때, 실시예 3의 비교예로는 ①락토바실러스 봄비콜라(Lactobacillus bombicola)(수탁번호: KCCM 43227) 균주를 적용한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방법으로 제조된 균주 배양액 및 ②락토바실러스 쿠바투스(Lactobacillus curvatus) 균주를 적용한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방법으로 제조된 균주 배양액을 사용하였으며, 실시예 4의 비교예로는 ①시중에 판매하는 식품 요거트 유청 및 ②락토바실러스 퍼멘튬(Lactobacillus fermentum) 균주를 적용한 것을 제외하고는 실시예 4와 동일한 방법으로 제조된 유청 발효물을 사용하였다.As a comparative example of Example 3, a culture of the strain prepared in the same manner as in Example 3, except that Lactobacillus bombicola (Accession No .: KCCM 43227) was applied, and Lactobacillus clavatus ( Lactobacillus curvatus ) was used, and the culture medium prepared in the same manner as in Example 3 was used. As a comparative example of Example 4, there were (1) commercially available food yogurt whey and (2) Lactobacillus The fermented whey fermented product prepared in the same manner as in Example 4 was used, except that a fermentum strain was used.

세포 외 멜라닌 contents (%) = (시료 Extracellular melanin contents (%) = (sample 처리군의Treatment group 흡광도 / control군의 흡광도) *100 Absorbance / absorbance of control group) * 100

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이 GFC03 균주 배양액은 2% 처리시 세포 외 멜라닌 함량이 약 20% 이상이였으나, 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액은 세포외 멜라닌 저해능이 없었으며, 락토바실러스 쿠바투스 균주 배양액은 4% 처리시 세포 외 멜라닌 생성 저해능이 약 60% 이상이였다. 따라서, 같은 락토바실러스 속이라 할지라도, 락토바실러스 봄비콜라 균주 배양액 및 락토바실러스 쿠바투스 대비 락토바실러스 펜토서스 GFC03 균주 배양액이 세포 외 멜라닌 함량이 현저하게 낮은 것으로 나타난 바, 세포 외 멜라닌 생성 저해능이 월등히 높아 미백 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 7, the extracellular melanin content of the GFC03 culture broth was about 20% or more at the 2% treatment, but the culture broth of Lactobacillus bovis cola did not have extracellular melanin inhibitory activity and the culture broth of Lactobacillus clavatus strain At 4% treatment, the extracellular melanin production inhibitory effect was about 60% or more. Therefore, even in the same Lactobacillus species, the extracellular melanin content of the Lactobacillus bovis cola culture medium and the Lactobacillus pentosus GFC03 culture medium relative to Lactobacillus clavatus was remarkably low, and thus the extracellular melanin production inhibitory ability was remarkably high It was confirmed that the whitening effect was excellent.

또한, 도 8에 나타난 바와 같이 시판되는 식품요거트 유청의 경우에는 2% 처리시 세포 외 멜라닌 함량이 49%였으나, GFC03 균주를 이용한 유청 발효물은 2% 처리시 세포 외 멜라닌 함량이 33%로 확인되어 세포 외 멜라닌 생성 저해능이 월등히 높아 미백 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. 또한, 락토바실러스 퍼멘튬 균주를 적용한 유청 발효물은 4% 처리시 세포 외 멜라닌 함량이 78.06%인 것으로서, GFC03 균주를 이용한 유청 발효물 대비 세포 외 멜라닌 생성 저해능이 현저하게 낮은 것을 확인할 수 있었다.
In addition, as shown in FIG. 8, in the case of commercially available yogurt whey, the extracellular melanin content was 49% at the 2% treatment, but the extracellular melanin content at the 2% treatment of the whey fermented product using the GFC03 strain was 33% And it was confirmed that the effect of producing extracellular melanin is remarkably high and the whitening effect is excellent. In addition, the whey fermented product to which the Lactobacillus fermentum strain was applied had an extracellular melanin content of 78.06% at 4% treatment, and it was confirmed that the inhibitory effect on the formation of extracellular melanin was significantly lower than that of whey fermented product using the GFC03 strain.

상기 항주름 및 미백 효능 시험을 통해, GFC03 균주 배양액 및 GFC03 균주 를 이용한 유청 발효물이 시중에 판매하는 식품 요거트 유청 및 락토바실러스 속 균주 배양액 및 유청 발효물 대비 엘라스타아제(Elastase) 억제능 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능이 현저하게 높아 미백 및 피부 주름개선에 효과가 있음을 확인하였다.
The anti-wrinkle and whitening efficacy tests showed that the whey fermented product using the GFC03 strain and the GFC03 strain inhibited the elastase activity of the yogurt whey and Lactobacillus sp. Melanin production inhibitory ability was remarkably high, and it was confirmed that it was effective for whitening and skin wrinkle improvement.

<실시예 8> 피부 첩포에 의한 안전성 평가&Lt; Example 8 > Safety evaluation by skin patch

상기 실시예 4로부터 제조된 유청 발효물의 피부 첩포에 의한 안전성을 확인하였다. 피부첩포에 의한 안전성 평가 인체적용 시험은 ㈜엘리드에서 진행하였으며, 엘리드 기관 생명윤리위원회 표준운영지침(Ver. 3.0)에 의거하여 승인 후에 식품의약품안전처 기능성 화장품 심사에 관한 규정(제 2015-14 호), PCPC(Personal Care Products Council) Safety Evaluation Guidelines의 규정 및 국제 접촉피부염연구회(ICDRG:International Contact Dermatitis Research Group)3에서 제시하는 평가기준에 따라 연구를 수행하여 자극유무를 판정하였다.The safety of the whey fermented product prepared in Example 4 by the skin patch was confirmed. Safety Evaluation by Skin Patch The human body application test was conducted by ELID Co., Ltd. After the approval in accordance with the standard operation guide (Ver. 3.0) of the ELID Agency Bioethics Committee, the Korea Food and Drug Administration ), PCPC (Personal Care Products Council) Safety Evaluation Guidelines, and ICDRG (International Association for Contact Dermatitis Research) 3.

그 결과, 도 9에 나타난 바와 같이 첩포 제거한 다음 30분 경과 후, 24시간 경과 후, 120시간 경과 후에서 모두 반응을 관찰할 수 없었다. 평균 피부 반응도는 0.00으로써 판정기준에 따라 무자극으로 판정되었다.(보고번호 EL-160822513S179)
As a result, as shown in FIG. 9, no reaction could be observed after 30 minutes, 24 hours, and 120 hours after removing the patch. The mean skin response was 0.00 and was judged to be unstimulated according to the criteria (Report No. EL-160822513S179).

<제조예 1> 유청 발효물을 함유하는 화장료 제조Preparation Example 1 Preparation of Cosmetic Containing Fermented Whey

(1) 화장수 제조(1) Production of lotion

하기 표 1에 기재된 함량의 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 화장수를 제조하였다.Lotions were prepared according to the conventional method using the ingredients shown in Table 1 below.

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 4의 유청 발효물The whey fermentation product of Example 4 3.003.00 히드록시에틸렌셀룰로오스(2% 수용액)Hydroxyethylene cellulose (2% aqueous solution) 12.0012.00 잔탄검(2% 수용액)Xanthan gum (2% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol 6.006.00 글리세린glycerin 4.004.00 히알루론산나트륨(1% 수용액)Sodium hyaluronate (1% aqueous solution) 5.005.00 정제수Purified water 68.0068.00 합계Sum 100.00100.00

(2) 로션 제조(2) Lotion manufacturing

하기 표 2에 기재된 함량의 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 로션을 제조하였다.Lotions were prepared by conventional methods using the ingredients in the amounts shown in Table 2 below.

성분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 4의 유청 발효물The whey fermentation product of Example 4 3.003.00 아스코르빈산-2-인산마그네슘염Ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 수용성 콜라겐 (1% 수용액)Water soluble collagen (1% aqueous solution) 1.001.00 시트르산나트륨Sodium citrate 0.010.01 시트르산Citric acid 0.050.05 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 정제수Purified water 91.9491.94 합계Sum 100.0100.0

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the present invention is not limited thereto will be. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

한국미생물보존센터(KCCM)Korea Microorganism Conservation Center (KCCM) KCCM43226KCCM43226 2016081920160819

<110> GFC Co., Ltd. B&B Korea Co., ltd <120> Lactobacillus Pentosus GFC03 and Fermented Whey Manufactured Using Thereof <130> P17067 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Universal primer 27F <400> 1 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Universal primer 1492R <400> 2 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 3 <211> 1473 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GFC03 16s rDNA <400> 3 nggccncana tcatgcagtc gaacgaactc tggtatngat tggtgcttgc atcatgattt 60 acatttgagt gagtggcgaa ctggtgagta acacgtggga aacctgccca gaagcggggg 120 ataacacctg gaaacagatg ctaataccgc ataacaactt ggaccgcatg gtccgagntt 180 gaaagatggc ttcggctatc acttttggat ggtcccgcgg cgtattagct agatggtggg 240 gtaacggctc accatggcaa tgatacgtag ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg 300 gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac 360 gaaagtctga tggagcaacg ccgcgtgagt gaagaagggt ttcggctcgt aaaactctgt 420 tgttaaagaa gaacatatct gagagtaact gttcaggtat tgacggtatt tattgacggt 480 atttaaccag aaagccacgg ctnactacgt gccagcagcc cgcggtaata cgtaggtggc 540 aagcgntgtc cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg cggtttttta agtctgatgt 600 gaaagccttc ggctcaaccg aagaagtgca tcggaaactg ggaaacttga gtgcagaaga 660 ggacagtgga actccatgtg tagcggtgaa atgcgtagat atatggaaga acaccagtgg 720 cgaaggcggc tgtctggtct gtaactgacg ctgaggctcg aaagtatggg tagcaaacag 780 gattagatac cctggtagtc cataccgtaa acgatgaatg ctaagtgttg gagggtttcc 840 gcccttcagt gctgcagcta acgcattaag cattccgcct ggggagtacg gccgcaaggc 900 tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga 960 agctacgcga agaaccttac caggtcttga catactatgc aaatctaaga gattagacgt 1020 tcccttcggg gacatggata caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg 1080 ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttattatcag ttgccagcat taagttgggc 1140 actctggtga gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat 1200 gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggatg gtacaacgag ttgcgaactc 1260 gcgagagtaa gctaatctct taaagccatt ctcagttcgg attgtaggct gcaactcgcc 1320 tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg 1380 ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg agagtttgta acacccaaag tcggtggggt 1440 aacctttagg aaccagccgc ctatgtggtn ctg 1473 <110> GFC Co., Ltd.          B & B Korea Co., ltd <120> Lactobacillus Pentosus GFC03 and Fermented Whey Manufactured          Using Thereof <130> P17067 <160> 3 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Universal primer 27F <400> 1 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Universal primer 1492R <400> 2 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 3 <211> 1473 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GFC03 16s rDNA <400> 3 nggccncana tcatgcagtc gaacgaactc tggtatngat tggtgcttgc atcatgattt 60 acatttgagt gagtggcgaa ctggtgagta acacgtggga aacctgccca gaagcggggg 120 ataacacctg gaaacagatg ctaataccgc ataacaactt ggaccgcatg gtccgagntt 180 gaaagatggc ttcggctatc acttttggat ggtcccgcgg cgtattagct agatggtggg 240 gtaacggctc accatggcaa tgatacgtag ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg 300 gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac 360 gaaagtctga tggagcaacg ccgcgtgagt gaagaagggt ttcggctcgt aaaactctgt 420 tgttaaagaa gaacatatct gagagtaact gttcaggtat tgacggtatt tattgacggt 480 atttaaccag aaagccacgg ctnactacgt gccagcagcc cgcggtaata cgtaggtggc 540 aagcgntgtc cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg cggtttttta agtctgatgt 600 gaaagccttc ggctcaaccg aagaagtgca tcggaaactg ggaaacttga gtgcagaaga 660 ggacagtgga actccatgtg tagcggtgaa atgcgtagat atatggaaga acaccagtgg 720 cgaaggcggc tgtctggtct gtaactgacg ctgaggctcg aaagtatggg tagcaaacag 780 gattagatac cctggtagtc cataccgtaa acgatgaatg ctaagtgttg gagggtttcc 840 gcccttcagt gctgcagcta acgcattaag cattccgcct ggggagtacg gccgcaaggc 900 tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga 960 agctacgcga agaaccttac caggtcttga catactatgc aaatctaaga gattagacgt 1020 tcccttcggg gacatggata caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg 1080 ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttattatcag ttgccagcat taagttgggc 1140 actctggtga gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat 1200 gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggatg gtacaacgag ttgcgaactc 1260 gcgagagtaa gctaatctct taaagccatt ctcagttcgg attgtaggct gcaactcgcc 1320 tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg 1380 ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg agagtttgta acacccaaag tcggtggggt 1440 aacctttagg aaccagccgc ctatgtggtn ctg 1473

Claims (6)

엘라스타아제(Elastase) 및 세포 외 멜라닌 생성 억제능을 갖는 김치 유래의 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226).


Elastase and Lactobacillus pentosus GFC03 (Accession No .: KCCM43226) derived from Kimchi having the ability to inhibit extracellular melanin production.


삭제delete 김치 유래의 락토바실러스 펜토서스 GFC03(Lactobacillus pentosus GFC03) 균주(기탁번호: KCCM43226)를 우유에 접종하고, 배양하여 요거트를 제조하는 단계; 및 제조된 요거트를 원심분리시킨 다음 상층액을 수득하는 단계를 포함하되,
상기 배양은 28 ~ 33℃에서 2 ~ 7일 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 유청 발효물의 제조방법.


Preparing a yogurt by inoculating and culturing lactic acid bacterium Lactobacillus pentosus GFC03 strain (accession number: KCCM43226) derived from kimchi into milk; And centrifuging the prepared yogurts to obtain a supernatant,
Wherein the culturing is carried out at 28 to 33 DEG C for 2 to 7 days.


삭제delete 제3항의 제조방법을 통해 제조된 유청 발효물.
A whey fermented product produced by the method of claim 3.
제1항의 균주, 균주 배양액 또는 제5항의 유청 발효물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for whitening and wrinkle improvement, which comprises the strain of claim 1, the culture broth of the strain, or the whey fermented product of claim 5 as an active ingredient.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101846796B1 (en) * 2017-10-27 2018-04-06 주식회사 비앤비코리아 Cosmetics comprising whey obtained by fermentation with Korean type lactic acid bacteria for improving elasticity or moisturizing
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KR20220075624A (en) * 2020-11-30 2022-06-08 나눔제약 주식회사 Lactobacillus pentosus OKBL-L.PE 1 strain having antioxidant activity, anti-inflammatory activity, skin whitening activity, antimicrobial activity against pathogenic microorganism and anti-thrombotic activity and uses thereof

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