KR101697179B1 - 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 서열번호 1로 표현되며, 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
본 발명에 의해, 아토피 피부염을 완화시킬 뿐만 아니라, 면역글로불린E의 수치를 저하시키고 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민과 프로스타글란딘D2의 분비를 억제하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물이 제공된다.

Description

스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물{A composition containing Scolopendrasin-1 peptide for the prevention and treatment of Atopic Dermatitis}
본 발명은 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 왕지네로부터 분리된 항균 펩타이드 스콜로펜드라신-1을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
아토피성 피부염(Atopic dermatitis)은 전 세계적으로 널리 분포하는 질환이며 5세 이하의 모든 어린이 중 3~5%가 이 질환을 가지고 있는 것으로 보고되어 있다.
대개 아토피성 피부염은 영,유아기, 특히 생후 2개월 전후에 시작되는데 이 중 90% 이상이 5세 전에 아토피성 피부염 증상을 보이며, 이는 유전인자와 환경인자가 관여하여 발병하는 면역성질환이다.
아토피성 피부염은 만성적으로 건조하며 소양감이 심하고 반복적으로 재발되며 각종 자극에 의해 쉽게 피부염이 유발된다. 많은 경우에는 1~2주 간격으로 반복적으로 악화되며 적절한 관리를 하지 않으면 삼출을 동반한 홍반성 발진의 아급성 병변, 가죽과 같이 두꺼워진 태선화(lichennification)의 만성병변으로 진행된다.
아토피성 피부염에 대하여 병리학적 검사에서의 소견(조직검사 소견)은 병변의 단계에 따라 다르지만 대체로 만성이 되면 표피가 두꺼워지고 여러 면역반응에 관여하는 세포의 침윤이 관찰된다. 특히 면역 반응을 담당하는 비장 세포(splenocyte)가 증가되어 있으며, 비정상적으로 증가된 항원제시 능력을 가진다. 또한, 아토피성 피부염에 의해 비만세포의 수는 증가되므로 탈과립상태(degranulation)를 나타낸다.
아토피성 피부염 환자의 80~90%는 혈청 면역글로불린E(Immunoglobulin E)가 증가되는데, 알러지성 비염이나 천식 같은 호흡기 아토피가 동반되어 있는 경우에는 특히 혈청 면역글로불린E(Immunoglobulin E)의 수치가 높게 나타난다.
또한, 약 87% 아토피성 피부염 환자에서 피부반응검사 혹은 RAST(radioallergosorbent test) 검사에서 여러 가지 음식과 흡입 알러젠(allergen)에 대한 특이 면역글로불린E가 양성으로 관찰되어지며, 만약 혈청 면역글로불린E가 증가된 경우, 아토피성 피부염과 같은 알러지성 질환일 가능성이 높은 것으로 진단된다.
최근에 이와 같은 여러 종류의 알러지성 질환의 증가로 이에 대한 연구가 활발히 진행되어 급진적인 면역학의 발전으로 알러지성 질환의 원인 규명 및 치료를 위한 많은 연구가 진행되고 있음에도 불구하고, 그 중요성에 비하여 아직까지 충분히 알러지성 질환을 치료할 수 있는 약물의 개발이 미비한 실정이다.
특히, 현재까지 아토피성 피부염에는 면역요법과 약물요법이 시행되고 있으나 그 원인을 아직 확실히 규명하지 못하고 있으며, 특별한 치료제가 없어 증상이 심각한 경우 스테로이드제제(부신피질호르몬제)를 사용하지만 단기간의 임상 증상 완화에만 효과가 있고, 다시 수일 내에 증상이 유발되는 정도의 효과가 대부분이다. 스테로이드제제의 국소적 투여가 장기간 계속되면 부신 기능의 저하를 초래하여 여러 가지 부신피질호르몬제에 의한 부작용이 나타나게 되어 계속적으로 사용하기에 부적절한 치료방법이다.
아토피성 피부염 환자를 위한 적절한 치료제가 없으므로 많은 경우에서 체질개선과 민간요법, 한방치료에 의존하여 임상증상의 완화와 치료효과를 기대하고 있으나 아직까지 장기적으로 부작용이 없이 사용할 수 있는 치료제가 개발되지 못하고 있는 실정이다.
이에, 새로운 아토피성 피부염 치료제의 개발이 필요하며, 관련 선행기술로는 한국공개특허 제10-2013-0013693(창포 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 개선용 외용 조성물)과 한국등록특허 제10-1056475호(산초유를 함유하는 아토피성 피부 개선용 화장품 조성물)에 관한 것이 공지되어 있다.
본 발명의 목적은 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1로 표현되며, 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하고자 한다.
상기 조성물 중 상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 전체 조성 1kg을 기준으로 5㎍ 내지 40㎍으로 포함되는 것이 특징이다.
상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 면역글로불린E(IgE)의 억제 효과를 나타내는 것이 특징이다.
상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 히스타민(histamin) 및 프로스타글란딘D2(PGD2)의 억제 효과를 나타내는 것이 특징이다.
또한, 본 발명은 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 개선 및 치료용 피부 외용제 또는, 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물를 제공하고자 한다.
본 발명에 의해, 아토피성 피부염을 완화시킬 뿐만 아니라, 면역글로불린E의 수치를 저하시키고 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민과 프로스타글란딘D2의 분비를 억제하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물이 제공된다.
도 1은 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 아토피성 피부염이 유도된 마우스에서 피부테스트(skin severity score)한 결과를 나타낸 도면이다.
AD: 아토피 유발 그룹
SP-1 20㎍: 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 20㎍ 그룹
SP-1 40㎍: 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 40㎍ 그룹
PL: 아토피 유발 + 아토피성 피부염 치료제(Elidel cream) 그룹
도 2은 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 처리하였을 때 아토피성 피부염이 유도된 마우스의 표피를 육안으로 관찰한 도면이다.
AD: 아토피 유발 그룹
SP-1(low dose): 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 20㎍ 그룹
SP-1(high dose): 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 40㎍ 그룹
AD+ Elidel cream: 아토피 유발 + 아토피성 피부염 치료제(Elidel cream) 그룹
도 3은 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 처리 후 14일째 면역글로불린E(IgE)의 억제활성을 나타낸 도면이다.
AD: 아토피 유발 그룹
SP-1 20㎍: 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 20㎍ 그룹
SP-1 40㎍: 아토피 유발 + 스콜로펜드라신-1 펩타이드 40㎍ 그룹
PL: 아토피 유발 + 아토피성 피부염 치료제(Elidel cream) 그룹
도 4는 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 처리하였을 때 염증매개물질인 히스타민의 억제활성(Histamine release)을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 처리하였을 때 염증매개물질인 프로스타글란딘D2(PGD2)의 억제활성을 나타낸 도면이다.
compound 48/80: 비만세포에 히스타민을 많이 나오게 하는 물질
Dexamethasone: 합성스테로이드의 일종
이하, 본 발명을 상세하게 설명하며, 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 설명은 생략한다.
본 발명은 왕지네에서 유래된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함함으로써, 아토피성 피부염을 완화시키고 면역글로불린E와 염증매개분자인 히스타민 및 프로스타글란딘D2을 감소시키는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
구체적으로 설명하면, 대부분의 아토피성 피부염 환자의 80~90%는 피부반응검사에서 여러 가지 음식과 흡입 알러겐(allergen)에 대한 특이 면역글로불린E가 양성으로 관찰되어지며, 비만세포 활성화를 통한 히스타민(histamin), 프로스타글란딘(prostaglandin), 일산화질소(NO) 등과 같은 염증매개인자의 분비로 염증이 유발된다.
그러나, 아토피성 피부염은 정확한 원인을 알 수 없어, 특별한 치료제가 없고 증상이 심한 경우 스테로이드제제를 사용하는 경우가 대부분이다.
이에 본 발명자들은 아토피성 피부염을 완화시키며 부작용이 적고 안전성이 확보된 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물에 대해 여러차례 연구한 바, 여러 물질들 중 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 유전자에서 연역된 아미노산에서 합성된 스콜로펜드라신-1 펩타이드에서 면역글로불린E의 수치를 저하시키고 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민과 프로스타글란딘D2의 분비를 억제하는 효과를 나타내는 것을 확인하였으며, 실질적으로 아토피성 피부염에 직접적으로 완화효과를 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 상기와 같은 효과를 갖는 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물을 제공하게 된 것이다.
특히, 상기 조성물 중 상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 전체 조성 1kg을 기준으로 5㎍ 내지 40㎍으로 포함되는 것이 적합하다.
이는 상기 조성물 중에서 상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 함량이 5㎍미만일 경우 면역글로불린E의 함량 및 염증매개물질의 수치에 관하여 낮은 억제 효과를 나타내어 본 발명이 목적하는 효과를 얻지 못하게 되며, 40㎍를 초과하여 함유될 경우에는 40㎍ 효과대비보다 상승된 효과를 나타내지 않으므로 경제적으로 적합하지 않으며, 오히려 다른 알러지를 일으킬 우려가 때문이다.
이러한 상기 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 아토피성 피부염을 완화시키고 면역글로불린E의 수치를 낮추며, 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민과 프로스타글란딘D2의 분비를 억제하므로 아토피성 피부염의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있게 된다.
아울러, 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 상기 약학적 조성물의 유효성분으로 사용될 경우에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 이용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 산제, 정제, 캡슐제, 환, 과립 또는 주사액제로 제제화 할 수 있다.
본 발명의 아토피성 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
또한, 본 발명은 스콜로펜드라신-1펩타이드를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 개선 및 치료용 피부외용제를 제공한다.
상기 피부외용제로 사용되는 적합한 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고 또는 스프레이의 형태로 제공될 수 있다.
또한, 상기 피부외용제는 스콜로펜드라신-1 펩타이드에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명인 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 아토피성 부염 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
이때, 상기 화장료 조성물에는 상기 유효 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 상기 다른 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제 또는 정제수가 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 유액, 크림,화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 또는 모발화장료로 제조될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저의 제형을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예 및 실험예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
< 실시예 1> 왕지네 유래 스콜로펜드라신-1 펩타이드 유전자 선발
먼저 왕지네를 액체질소로 급속 동결하여 전체 RNA를 분리하였고, 이를 RNA seq 분석법을 이용하여 하기와 같은 왕지네 전사체들에 관한 유전자 정보를 확인하였다.
(선발유전자 서열;
atgaaaccacttgaaggaaaagctgctttggttacaggaggtgccagtggaataggaaaggcagtagttaaagaatttcttaaaagaaaaatcaaagttgctttcctcgatatcaatgaaaatact)
그 다음, 각각의 전사체들로부터 번역된 아미노산의 서열(MKPLEGKAALVTGGASGIGKAVVKEFLKRKIKVAFLDINENT)을 바탕으로 SVM 알고리즘(http://apps.sanbi.ac.za/dampd/)을 이용하여 2차 구조 분석 및 아미노산 서열 비교 분석을 통해 항아토피성 피부염 활성능을 나타낼 것으로 추정되는 유전자를 선발하였다 (표 1).
이는 알파 헤릭스 영역을 포함하고 있음을 확인하였으며, 이를 생합성하여 실험에 사용하였다. 이렇게 생합성 한 펩타이드의 아미노산 서열은 KAVVKEFLKRKIKV-NH2으로 14개 아미노산으로 구성되었으며, '스콜로펜드라신-1'으로 명명하였다.
스콜로펜드라신-1
펩타이드 서열
(서열번호1)		 KAVVKEFLKRKIKV-NH2
< 실시예 2> 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 합성 및 분리정제
상기 실시예 1에서 왕지네로부터 유래하는 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 합성 및 분리 정제하였다.
먼저, 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 합성하기 위하여, 본 발명자들은 Fmoc 아미노기 보호용기를 이용한 메리필드(Merrifield)의 액상 고상법을 사용하여 펩타이드를 제조하였다.
상기 펩타이드 합성의 방법은 Fmoc(9-fluorenylmethoxycarbonyl)를 아미노산의 Nα-아미노 그룹(amino group)의 보호기(protecting group)로 사용하는 고상법(solid phase method)으로 합성하였다.
구체적으로, 카르복실 말단이 -NH2 형태인 펩타이드는 Rink Amide MBHA-Resin을 출발물질로 사용하였으며, 카르복실 말단이 -OH 형태의 펩타이드는 Fmoc-아미노산-Wang Resin을 출발물질로 사용하였다.
Fmoc-아미노산의 커플링(coupling)에 의한 펩타이드 사슬의 연장은 DCC(N-hydroxybenzo-triazole(HOBt)-dicyclo-hexylcar-bodiimide)법에 의하였다.
각 펩타이드의 아미노 말단의 Fmoc-아미노산을 커플링 시킨 후, 20% 피페리딘/N-메틸피롤리돈(NMP)용액으로 Fmoc기를 제거하고 NMP 및 디클로로메탄(DCM)으로 여러 번 씻어준 다음 질소 가스로 말렸다.
여기에 TFA(trifluoroacetic acid)-phenol-thioanisole-H2O-triisop- ropylsilane (85: 5: 5: 2.5: 2.5, vol./vol.) 용액을 가하고 3시간 동안 반응시켜 보호기의 제거 및 레진으로부터 펩타이드를 분리시킨 다음, 디에틸에테르로 펩타이드를 침전시켰다. 이렇게 하여 얻은 조(crude) 펩타이드는 0.1% TFA가 포함된 아세토니트릴 농도 구배(acetonitrile gradient)로 하여 정제형 역상-HPLC(reverse phase-HPLC) column (Delta Pak, C18 300Å, 15μ, 19.0 mmㅧ30 , Waters)을 이용하여 정제하였다.
합성 펩타이드를 6 N-HCl로 110℃ 에서 24시간 동안 가수분해한 후, 얻어진 잔사를 감압농축 한 뒤, 0.02 N-HCl에 녹여서 아미노산 분석기(Hitachi 8500 A)로 아미노산 조성을 측정하였다.
또한 합성된 펩타이드의 시퀀스(sequence)를 바탕으로 분자량을 계산하였고, MALDI 질량 분석법(matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometer)을 이용하여 정확한 분자량을 측정하였다.
그 결과 측정된 분자량과 계산된 분자량이 일치하므로 정확한 아미노산 서열을 가지는 펩타이드가 합성되었음을 확인하였다.
<실험예 1> 본 발명인 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 항 아토피성 피부염 효능 확인
1. 실험방법
[마우스의 아토피 유도]
상기 실시예 2에서 합성된 스콜로펜드라신-1 펩타이드에 대한 아토피 억제 효과를 확인하기 위하여 아토피가 유도된 마우스 모델을 준비하였다.
마우스에서 아토피를 유도하기 위해서는 안정화 기간이 지난 후의 마우스의 귀 하단부에서부터 꼬리 상단부까지 전체를 제모하고 24시간 방치한 후 4%(w/w)알루미늄 하이드록사이드 용액 50㎕와 오범 알부민(OVA) 0.05mg을 복강주사하고 100㎕의 인산완충용액(PBS)과 100㎕의 오범 알부민을 등에 도포하고 증발을 막기 위하여 멸균 투명 필름인 Tegaderm(2 x 2 cm)을 부착한 후 3일째 되는 날 떼어내고 같은 방법으로 패치를 갈아붙여 주었다.
3일이 지난 후 부착한 패치를 떼어내고 2주일간의 잠복기를 두었다. 2주일 후 두 번째 피부자극을 위해 50㎕의 PBS 용액과 50㎕의 OVA을 복강주사 하였으며 100㎕의 PBS 용액과 100㎕의 OVA을 등에 도포하고 동일한 방법으로 처리하였다.
3일 지난 후 첫 번째와 동일한 방법으로 복강에 주사하였으며 등 피부에 두 번째 패치를 부착하여 동일한 방법으로 처리하였고, 3일 후 부착된 패치를 떼어내었다.
[스콜라펜드라신1 펩타이드의 처치]
아토피 유도 후, 각 마우스에서 관찰 평가된 아토피 유발 점수를 부과하여 군을 분리하였다.
아토피 비유도군(normal group), 대조군(아토피 유발그룹), 스콜로펜드라신-1 도포군 및 양성대조군으로 분류한 후, 대조군은 control base로 처리하고, 처치군에는 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 20㎍ 또는 40㎍를 함유한 연고 20mg을 1일 1회 2주일 동안 등 부위에 도포하였으며, 양성대조군에는 비스테로이드성 아토피 치료제인 엘리델크림 20mg을 도포하였다(표 2).
아토피 유도 마우스 그룹(group)
No. group etc.
1 아토피 비유도군(normal group) 시료 비 처치군
2
(AD)		 아토피 유발 그룹(AD, Atopic dermatitis) 시료 비 처치군, 대조군
3
(SP-1
low dose)		 아토피 유발 + 스콜라펜드라신1
(20㎍/kg)		 처치군
4
(sp-1
high dose)		 아토피 유발 + 스콜라펜드라신1
(40㎍/kg)		 처치군
5
(Elidel cream)		 아토피 유발 + 엘리델 크림 (2 mg/kg) 양성대조군
[임상적 육안평가]
상기와 같이 본 발명의 스콜라펜드라신1 펩타이드를 마우스에 처치한 후, 아토피성 피부염에서 일반적으로 사용되는 임상적 육안 평가방법을 사용하여 아토피성 피부염의 심각성 정도를 평가하였다.
아토피성피부염의 심각성 정도는 다음의 5가지 항목을 각각 평가한 점수의 총 합으로 나타내었으며, 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 도포한 후 1, 3, 7, 14일이 되는 시점에 평가를 실시하였다. 평가항목은 홍반(erythema), 가려움과 건조피부(Pruritus & Dry Skin), 부종과 혈종(Edema & excoriation), 짓무름(Erosion), 그리고 태선화(Lichenification)로 나누었고 각각의 항목을 없음(0), 약함(1), 보통(2), 심함(3)으로 채점한 후 합산함으로써 최소 0점에서 최고 15점 사이의 점수를 부여하였다.
2. 실험결과
상기 실험결과, 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 7일간 도포한 경우 아토피성 피부염 점수가 대조군에 비해 유의성 있게 감소 효과를 나타내었으며, 도 1에 나타나 있듯이, 14일간 도포한 실험군에서도 스콜라펜드라신 1 펩타이드 처치군(SP-1 low dose, SP-1 high dose)에서 유의성 있는 감소 효과를 나타내었고, 이는 양성 대조군으로 사용된 엘리델 크림(Elidel cream)에 비해 더 좋은 효과를 보여주었다(도 1).
또한, 도 2에 나타나 있듯이 육안소견 결과 역시 스콜라펜드라신 1 펩타이드 처치군(SP-1 low dose, SP-1 high dose)에서 아토피성 피부염의 증상을 완화시키는 것으로 확인되었다.
상기와 같은 결과를 통해 본 발명의 스콜라펜드라신 1 펩타이드는 아토피성 피부염의 증상을 완화시킬 수 있음을 시사한다.
<실험예 2> 본 발명인 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 혈장 면역글로불린 IgE 함량의 측정
1. 실험방법
아토피와 같은 알레르기성 반응은 혈장세포에서 면역글로불린 IgE가 발견된다. 이에 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드에 의해 면역글로불린 IgE의 수치가 감소되는지 확인하여 항아토피성 활성을 나타내는지 확인하였다.
우선, 아토피가 유발된 마우스에 스콜로펜드라신-1 펩타이드 처치 후 2주 되는 시점에 티오펜탈 소디움(thiopental sodium, 50mg/kg)을 복강 주사하여 마우스를 마취시킨 후 심장 혈액을 채취하였고, 3,500rpm, 7분, 4℃에서 원심 분리하여 혈장을 얻은 후 -80℃에 보관했다가 ELISA kit (BD pharmingen, Franklin Lakes, NJ. USA)를 사용하여 면역글로불린 IgE 함량을 측정하였다.
2. 실험결과
상기 실험결과, 혈중 면역글로불린 IgE 함량은 아토피성 피부염의 유발로 증가하였으나, 본 발명의 스콜라펜드라신 1 펩타이드 처치군(SP-1 low dose, SP-1 high dose)의 도포에 의해 용량 의존적으로 유의성 있게 감소되었으며, 도 3에 나타나 있듯이, 도포 14일째에는 스콜라펜드라신 1 펩타이드 처치군(SP-1 low dose, SP-1 high dose)에서 양성 대조군으로 사용된 엘리델 크림보다 더 높은 면역글로불린 IgE 억제능을 보여주었다.
상기와 같은 결과를 통해 본 발명의 스콜라펜드라신1 펩타이드는 아토피성 피부염의 증상을 완화시킬 수 있으며, 그 증상의 완화는 알레르기 반응에서 증가하는 면역글로불린 IgE 억제작용과 연관이 있음을 확인하였다.
< 실험예 3> 본 발명인 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 비만세포 억제효과 확인
아토피성 피부염 유발 시 비만세포의 활성화를 통한 혈관 활성 물질의 분비로 염증이 유발되면 특히, 히스타민과 같은 혈관 확장 물질을 통해 발작 및 부종의 증상이 나타난다.
이에, 비만세포로부터 분비되는 과립(예, 히스타민)의 양을 측정하여 세포의 활성 및 염증 활성의 정도를 확인하였다
1. 실험방법
사람 비만세포주 HMC-1에 본 발명의 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 농도별로 처치하여 배양한 후 컴파운드(compound)48/80을 첨가하여 자극을 주었다. 세포 배양 상층액을 수거하여 상층액에 포함된 히스타민(histamine)의 양을 측정하였다. 또한 아토피 질환에서 비만세포가 분비하는 염증유발 물질 중 하나인 프로스타글란딘 D(PGD2)의 분비량 또한 측정하였다.
(1) 세포 배양 및 약물 처치
사람 비만세포주인 HMC-1 셀(cell)을 10%의 열 비활성화 FBS, 100 U/ml의 페니실린(penicillin), 100 μg/ml의 스트렙토마이신(streptomycin)을 포함하는 DMEM (Welgene, Seoul, Korea)배지에서 37℃, 5% CO2 및, 95% 습도 상에서 배양하였다.
그 다음, compound48/80(10 ㎍/㎖)을 37℃에서 30분 동안 전 처치한 후, 본 발명의 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 농도별로 처리하였다.
비교대상으로는 알레르기 염증 치료제로 통상적으로 사용되고 있는 합성스테롤이드의 일종인 덱사메타손(Dexamethasone)를 처리하였다.
(2) 염증매개물 측정
본 발명의 스콜라펜드라신 1 펩타이드를 처리한 후, 상층액을 취하여, 염증매개물인 히스타민(histamine), 프로스타글란딘D2(PGD2)의 분비량을 ELISA kit를 이용하여 측정하였다.
2. 실험결과
상기 실험결과 도 4에 나타나 있듯이, compound48/80에 의해 유도된 대표적인 혈관활성물질인 히스타민의 분비량이 스콜라펜드라신 1 펩타이드의 처치에 의해 감소한 것을 확인하였다.
또한, 도 5에 나타나 있듯이, 아토피 질환에서 비만세포가 분비하는 염증매개인자 중 하나인 프로스타글란딘D2의 생성 또한 스콜로펜드라신-1 펩타이드에 의해 억제됨을 확인하였다. 이는 스콜라펜드라신 1 펩타이드가 비만세포의 활성을 억제하고 있음을 보여주는 결과이다.
다시 말해, 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드의 항 아토피성 피부염 효능을 보여주었으며, 그 효능은 비만세포의 안정화를 유도하여, 히스타민 분비를 억제하고 염증을 매개하는 프로스타글란딘의 분비를 억제하는데 기인한 것으로 판단된다.
따라서, 본 발명의 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 조성물은 아토피 피부염을 완화시킬 뿐만 아니라, 면역글로불린E의 수치를 저하시키고 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민과 프로스타글란딘D2의 분비를 억제하는 효과를 나타내므로, 아토피 피부염 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물, 건강식품, 피부외용제, 화장료 조성물으로 사용이 가능하게 됨을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> National Academy of Agricultural Science <120> A composition containing Scolopendrasin-1 peptide for the prevention and treatment of Atopic Dermatitis <130> P2014-0071 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Scolopendrasin-1 <400> 1 Lys Ala Val Val Lys Glu Phe Leu Lys Arg Lys Ile Lys Val 1 5 10

Claims (6)

  1. 하기 서열번호 1로 표현되며, 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 유전자에서 연역된 아미노산에서 합성된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하며,
    아토피 피부염의 염증매개인자인 면역글로불린E(IgE), 히스타민(histamin) 및 프로스타글란딘D2(PGD2)의 억제 효과를 나타내는,
    아토피 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물.
    서열번호 1: Lys Ala Val Val Lys Glu Phe Leu Lys Arg Lys Ile Lys Val
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물 중 상기 스콜로펜드라신-1 펩타이드는 전체 조성 1kg을 기준으로 5㎍ 내지 40㎍으로 포함되는 것이 특징인,
    아토피 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 하기 서열번호 1로 표현되며, 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 유전자에서 연역된 아미노산에서 합성된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하며,
    아토피 피부염의 염증매개인자인 면역글로불린E(IgE), 히스타민(histamin) 및 프로스타글란딘D2(PGD2)의 억제 효과를 나타내는,
    아토피성 피부염 개선 및 치료용 피부 외용제.
    서열번호 1: Lys Ala Val Val Lys Glu Phe Leu Lys Arg Lys Ile Lys Val
  6. 하기 서열번호 1로 표현되며, 왕지네(Scolopendra subspinipes)로부터 분리된 유전자에서 연역된 아미노산에서 합성된 스콜로펜드라신-1 펩타이드를 유효성분으로 포함하며,
    아토피 피부염의 염증매개인자인 면역글로불린E(IgE), 히스타민(histamin) 및 프로스타글란딘D2(PGD2)의 억제 효과를 나타내는,
    아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물.
    서열번호 1: Lys Ala Val Val Lys Glu Phe Leu Lys Arg Lys Ile Lys Val
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