KR101679812B1 - 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 - Google Patents
클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101679812B1 KR101679812B1 KR1020107007994A KR20107007994A KR101679812B1 KR 101679812 B1 KR101679812 B1 KR 101679812B1 KR 1020107007994 A KR1020107007994 A KR 1020107007994A KR 20107007994 A KR20107007994 A KR 20107007994A KR 101679812 B1 KR101679812 B1 KR 101679812B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- toxoid
- delete delete
- excipients
- composition
- toxoids
- Prior art date
Links
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 title claims description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 94
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 92
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims abstract description 49
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims abstract description 42
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 21
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 21
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 claims abstract description 10
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 38
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 38
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 38
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 32
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 32
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 28
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 28
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 27
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 22
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 15
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 15
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 7
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 claims description 5
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 claims description 5
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 41
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 41
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 40
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 31
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 28
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 26
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 26
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 24
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 21
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- -1 aluminum compound Chemical class 0.000 description 17
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 15
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 13
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 13
- FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-M 8-anilinonaphthalene-1-sulfonate Chemical compound C=12C(S(=O)(=O)[O-])=CC=CC2=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000010512 thermal transition Effects 0.000 description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 8
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 7
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 7
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical group [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 4
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 208000035032 Multiple sulfatase deficiency Diseases 0.000 description 3
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 3
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 201000006033 mucosulfatidosis Diseases 0.000 description 3
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010009657 Clostridium difficile colitis Diseases 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 208000003100 Pseudomembranous Enterocolitis Diseases 0.000 description 2
- 206010037128 Pseudomembranous colitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940047712 aluminum hydroxyphosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011654 magnesium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000011285 magnesium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940069446 magnesium acetate Drugs 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydroxy-6-[3,4,5-trihydroxy-6-[[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxyhexanal Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272478 Aquila Species 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 235000018081 Hibiscus syriacus Nutrition 0.000 description 1
- 244000130592 Hibiscus syriacus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N [(2r,3s,5r,6r)-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N 0.000 description 1
- PTTGRYBBCYZPSL-UHFFFAOYSA-H [Al+3].[Al+3].OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O Chemical compound [Al+3].[Al+3].OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O PTTGRYBBCYZPSL-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000005311 autocorrelation function Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000009021 linear effect Effects 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- NJTGANWAUPEOAX-UHFFFAOYSA-N molport-023-220-454 Chemical compound OCC(O)CO.OCC(O)CO NJTGANWAUPEOAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 클로스트리듐 디피실리 톡신 및/또는 톡소이드를 포함하는 조성물 및 관련해서 생기는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 톡신의 안정성을 증가시키거나 및/또는 응집을 감소시키는 하나 이상의 부형제를 포함한다.
Description
본 발명은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드를 포함하는 조성물 및 관련해서 생기는 방법에 관한 것이다.
클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile, C. difficile) 톡신 A 및 B는 원내감염 설사(nosocomial diarrhea) 및 위막성 대장염(pseudomembranous colitis)으로 나타나는 C. 디피실리-관련 질환(C. difficile-associated disease, CDAD)의 원인이 되고 있다 (Kuijper et al., Clinical Microbiology and Infection 12(Suppl. 6):2-18, 2006; Drudy et al., International Journal of Infectious Diseases 11(1):5-10, 2007; Warny et al., Lancet 366(9491):1079-1084, 2005; Dove et al., Infection and Immunity 58(2):480-488, 1990; Barroso et al., Nucleic Acids Research 18(13):4004, 1990). 상기 톡신을 포름알데히드로 처리하면 그와 유사한 톡소이드 A 및 B가 되는데, 이는 완전히 불활성화 되면서 최소한 일부 면역원성을 보유한다 (Torres et al., Infection and Immunity 63(12):4619-4627, 1995). 둘 모두의 톡소이드를 사용한 백신 접종은 햄스터, 건강한 성인 및 재발성 CDAD 환자에서 효과가 있는 것으로 나타났다 (Torres et al., Infection and Immunity 63(12):4619-4627, 1995; Kotloff et al., Infection and Immunity 69(2):988-995, 2001; Sougioultzis et al., Gastroenterology 128(3):764-770, 2005; Torres et al., Vaccine Research 5(3):149-162, 1996). 또한, 유리(free) 및 알루미늄 염(애주번트)이 결합된 톡소이드 둘 다의 투여는 적절한 면역 반응을 유도한다 (Torres et al., Vaccine Research 5(3):149-162, 1996; Giannasca et al., Infection and Immunity 67(2):527-538, 1999). 두 톡소이드 모두를 동시에 투여하는 것이 개개의 단백질을 단독으로 투여하는 것보다 더 효과적이다 (Kim et al., Infection and Immunity 55(12):2984-2992, 1987). 따라서 상기 A 및 B 톡소이드는 둘 다 백신 개발을 위한 후보물질이다. 그들의 형태적 무결성(conformational integrity)의 개선 및/또는 그들의 응집하려는 경향의 감소는 최적의 저장 안정성을 유도하는데 바람직하다.
본 발명은 클로스트리듐 디피실리의 톡신 또는 톡소이드 (예컨대, C. 디피실리 톡신 A 및/또는 B의 톡소이드; 예를 들어, 5:1 내지 1:5, 예컨대 3:2 (A:B)의 비율로 존재하는 톡소이드 A 및 B) 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학적 조성물 (예컨대, 백신 조성물)과 같은, 조성물을 제공한다. 상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡신 및/또는 톡소이드의 응집을 감소 또는 지연시킨다. 하나의 실시예에서, 상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡신 및/또는 톡소이드의 응집을 50% 이상 감소 또는 지연시킨다. 다른 실시예에서, 상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡신 및/또는 톡소이드의 열 안정성을 0.5℃ 이상 증가시킨다. 선택적으로, 본 발명의 조성물은 애주번트 (예컨대, 수산화알루미늄, 알루미늄 포스페이트, 또는 알루미늄 히드록시 포스페이트 화합물과 같은 알루미늄 화합물)를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 액상 형태, 건조 분말 형태, 동결 건조, 분무 건조, 또는 발포 건조된 형태일 수 있다.
상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는, 예를 들어, 버퍼(buffers), 등장화제(tonicity agents), 단순탄수화물(simple carbohydrates), 당류(sugars), 탄수화물 중합체(carbohydrate polymers), 아미노산(amino acids), 올리고펩티드(oligopeptides), 폴리아미노산(polyamino acids), 다가알코올(polyhydric alcohols) 및 그의 에테르(ethers thereof), 세제(detergents), 지질(lipids), 계면활성제(surfactants), 항산화제(antioxidants), 염류(salts), 인간 혈청 알부민(human serum albumin), 젤라틴(gelatins), 포름알데히드(formaldehyde), 또는 그들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 다양한 예에서, (i) 상기 버퍼는 구연산염(citrate), 인산염(phosphate), 글리신(glycine), 히스티딘(histidine), 탄산염(carbonate) 및 중탄산염(bicarbonate)으로 구성된 군에서 선택되며 5-100 mM의 농도이고; (ii) 상기 등장화제는 만니톨(mannitol)이며 1-50 mM의 농도이고; (iii) 상기 당류는 솔비톨(sorbitol), 트레할로스(trehalose) 및 수크로오스(sucrose)에서 선택되며 1-30%의 농도이고; (iv) 상기 아미노산, 올리고펩티드 또는 폴리아미노산은 최고 100 mM의 농도로 존재하고; (v) 상기 다가알코올은 글리세롤(glycerol), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 및 분자량 200-10,000을 갖는 그들의 에테르(ethers thereof)로 구성된 군에서 선택되며 최고 20%의 농도이고; (vi) 상기 세제 및 지질은 데옥시콜산 나트륨(sodium deoxycholate), 트윈 20(Tween 20), 트윈 80(Tween 80) 및 플루로닉(pluronics)로 구성된 군에서 선택되며 최고 0.5%의 농도이고; (vii) 상기 탄수화물 중합체는 덱스트란(dextran) 및 셀룰로오스(cellulose)로부터 선택되고; (viii) 상기 염류는 염화나트륨(sodium chloride), 염화칼륨(potassium chloride), 염화마그네슘(magnesium chloride) 및 초산마그네슘(magnesium acetate)으로 구성된 군에서 선택되며 최고 150 mM이고; (ix) 상기 포름알데히드는 0.0-0.02%로 존재한다.
이러한 부형제의 구체적인 예들은 표 1, 표 2, 표 8 또는 표 9에 기재된 것들을 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 조성물은 구연산나트륨 또는 구연산칼륨, 및/또는 인산나트륨 또는 인산칼륨, 선택적으로 수크로오스 및/또는 포름알데히드와 조합하여 포함한다. 따라서, 다양한 실시예에서, 상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 5-100 mM (예컨대, 10-30 mM 또는 20 mM) 구연산나트륨 또는 구연산칼륨 (또는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 2-20% (예컨대, 2-10% 또는 5%) 수크로오스, 및 ≤0.020% (예컨대, 0.016%) 포름알데히드를 포함하고, pH 5.5-8.5 (예컨대, 6.5-8.0 또는 7.5)이다. 다른 실시예에서, 솔비톨, 덱스트로스 및/또는 트윈 80의 조합이 사용된다.
본 발명은 또한, 클로스트리듐 디피실리의 톡신 또는 톡소이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡신 및/또는 톡소이드의 응집을 감소 또는 지연시키거나, 및/또는 톡신 또는 톡소이드의 열 안정성을 증가시킨다. 이러한 방법은 클로스트리듐 디피실리의 톡신 또는 톡소이드를 제공하는 단계 및 상기 클로스트리듐 디피실리의 톡신 또는 톡소이드를 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합하는 단계를 포함한다. 상기 조성물은 본 명세서에 기술된 바와 같이, 액상 형태 또는 동결 건조된 형태로 저장될 수 있다.
또한 본 발명은 본 명세서에 기술된 조성물을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 C. 디피실리에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 하나의 실시예에서, 상기 환자는 C. 디피실리 질환을 가지고 있지 않지만, 발병의 위험에 있고, 다른 실시예에서, 상기 환자는 C. 디피실리 질환을 가지고 있다. 추가로, 본 발명은 환자에서 C. 디피실리에 대한 면역 반응을 유도하거나, 또는 이러한 목적으로 사용하기 위한 약제(medicaments)의 제조에 있어서 본 발명의 조성물의 사용을 포함한다.
본 발명은 여러 이점을 제공한다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 상기 부형제의 사용은 C. 디피실리 톡소이드 A 및 B의 증가된 물리적 안정성, 및/또는 톡소이드를 포함하는 약학적 제품 (예컨대, 백신)의 생산에 중요한, 감소되거나 지연된 응집을 유도한다. 또한, 본 발명의 비율 (예컨대, 3:2, A:B)의 사용 및 투여 직전에 애주번트를 추가하는 것(저장된 백신의 제형화 보다)은, 증가된 면역원성을 유도할 수 있다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 이하 상세한 설명, 도면 및 특허청구범위로부터 명확해질 것이다.
본 발명은 클로스트리듐 디피실리 톡신 및/또는 톡소이드 및 조성물에 이로운 특성을 제공하는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들어, 이하 더욱 설명된 것처럼, 본 발명의 조성물에 포함되는 부형제는 상기 조성물의 하나 이상의 톡소이드 성분의 증가된 안정성 및/또는 톡소이드의 감소 또는 지연된 응집을 유도할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 C. 디피실리 톡소이드는 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 다수의 방법 중 하나를 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 포름알데히드에 의한 불활성화를 포함하는 방법들이 사용될 수 있다 (예컨대, Kotloff et al., Infection and Immunity 69(2):988-995, 2001 참조). 바람직하게는, 상기 조성물은 톡소이드 A 및 톡소이드 B 둘 모두를 포함하나, 이들 톡소이드 중 하나만을 포함하는 조성물 또한 본 발명에 포함된다. 톡신의 소스로서 사용될 수 있는 대표적인 C. 디피실리 균주는 ATCC 43255 (VPI 10463)이다. 상기 톡소이드는 다양한 비율, 예컨대 5:1 (A:B) 내지 1:5 (A:B)로 조성물에 존재할 수 있다. 구체적인 예에서, 상기 비율은 2:1, 3:1 또는 3:2 (A:B)일 수 있다. 본 발명의 조성물에 있는 톡소이드의 총량은, 예컨대 100 ng-1 mg, 100 ng-500 μg, 1-250 μg, 10-100 μg, 25-75 μg 또는 50 μg일 수 있다. 상기 조성물은 선택적으로 단일 유닛 용량(single unit dosage)으로 바이얼에 저장될 수 있다.
본 발명의 조성물은, 예들 들어, 버퍼 (예컨대, 구연산염, 인산염, 글리신, 히스티딘, 탄산염 또는 중탄산염; 5-100 mM; 사용될 수 있는 구연산염의 예들은 나트륨, 칼륨, 마그네슘 및 아연을 포함한다); 등장화제 (예컨대, 만니톨; 1-50 mM); 당류 또는 당알코올(sugar alcohols)과 같은, 탄수화물 (예컨대, 솔비톨, 트레할로스 또는 수크로오스; 1-30%) 또는 탄수화물 중합체 (예컨대, 덱스트란 및 셀룰로오스); 아미노산, 올리고펩티드 또는 폴리아미노산 (최고 10 mM); 다가알코올 (예컨대, 글리세롤, 폴리에틸렌 클리콜 또는 분자량 200-10,000을 갖는 그들의 에테르, 최고 20%의 농도); 세제, 지질 또는 계면활성제 (예컨대, 최고 0.5% 농도를 갖는, 트윈 20, 트윈 80 또는 플루오닉); 항산화제; 염류 (예컨대, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘 또는 초산마그네슘, 최고 150 mM); 알부민 (예컨대, 인간 혈청 알부민); 젤라틴; 포름알데히드 (0.001-0.02%); 또는 그들의 조합과 같은 하나 이상의 화합물을 포함한다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 부형제의 예들은 표 1, 2, 8 및 9에 기재된 것들을 포함한다. 다양한 실시예에서, 상기 부형제는 (i) 예를 들어, 이하 기술되는 분석법 (예컨대, Differential Scanning Calorimetry (DSC))에 의해 측정된 바와 같은 증가된 열 안정성 (예컨대 적어도 0.5℃, 예컨대 0.5-5℃, 1-4℃ 또는 2-3℃), 및/또는 (ii) 톡소이드 A, 톡소이드 B, 또는 톡소이드 A 및 B 둘 모두의 감소 또는 지연된 응집, 예를 들어, 이하 기술되는 분석법에 의해 측정되는, 예를 들어, 50% 이상 (예컨대, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%)을 유도하는 것일 수 있다. 톡소이드 응집체(toxoid aggregates)를 포함하는 조성물 역시 본 발명에 포함된다.
이와 같이 대표적인 부형제 및 버퍼는 구연산나트륨 (예컨대, 0.01-0.2 M, 예컨대, 0.02-0.1 M), 수크로오스 (예컨대, 1-20% 또는 5-10%), 솔비톨 (예컨대, 4-20% 또는 5-10%), 트레할로스 (예컨대, 4-20% 또는 5-10%), 트윈 80 (예컨대, 0.05-0.1%), 디에탄올아민 (예컨대, 0.3 M), 히스티딘 (예컨대, 0.02-0.3 M), 구아니딘 (예컨대, 0.3 M), 덱스트로스 (예컨대, 5-20%), 글리세롤 (예컨대, 20%), 알부민 (예컨대, 1-2.5%), 락토오스 (예컨대, 10-20%), 만니톨 (예컨대, 10%), 수크로오스 (예컨대, 5-20%), 플루로닉 F-68 (예컨대, 0.1%), 2-OH 프로필 β-CD(2-OH propyl β-CD) (예컨대, 5-10%), 덱스트란 T40 (예컨대, 0.03-0.08 mg/ml), Brij (예컨대, 0.01-0.1%), 리신(lysine) (예컨대, 0.3 M), Tween 20 (예컨대, 0.01-0.05%), 및 아스파르트산(aspartic acid) (예컨대, 0.15 M)(표 1, 2, 8 및 9 참조)를 포함한다. 이러한 부형제들은 상기 표에 기재된 농도로 본 발명에 사용될 수 있다. 선택적으로, 그 양은 본 발명이 속하는 기술분야에서 이해되는 것으로, 예컨대 0.1-10 배(fold)까지 달라질 수 있다. 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 다른 탄수화물, 당류, 알코올, 계면활성제 및 아미노산들 또한 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다.
상기 부형제 및 버퍼는 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 조합의 예로서, 상기 조성물은 구연산나트륨과 수크로오스를 포함하는데, 이는 톡소이드 안정성에 대하여 이점을 제공하는 것으로 나타났다. 이러한 성분들의 양은, 예를 들어, 10-30 mM, 15-25 mM 또는 20 mM 구연산나트륨; 및 1-20% 또는 5-10% 수크로오스일 수 있다. 이러한 성분에 추가로, 이 조성물은 0.001-0.020, 0.01-0.018 또는 0.16%와 같은, 적은 양의 포름알데히드를 포함할 수 있다. 이와 같은 조성물의 pH는, 예컨대 5.5-8.0 또는 6.5-7.5일 수 있고, 상기 조성물은 액상 또는 동결 건조된 형태로, 예컨대 2-8℃에서 저장될 수 있다. 이러한 조성물의 변형에서, 상기 구연산나트륨은 인산나트륨 (10-30 mM, 15-25 mM 또는 20 mM)으로 대체될 수 있고 및/또는 상기 수크로오스는 솔비톨 (예컨대, 4-20% 또는 5-10%) 또는 트레할로스 (예컨대, 4-20% 또는 5-10%)로 대체될 수 있다. 상기 조성물의 다른 변형들은 본 발명에 포함되고, 본 명세서에 기재된 다른 성분들의 사용을 포함한다. 상술한 바에 기초하여, 본 발명의 대표적인 조성물은 20 mM 구연산나트륨, 5% 수크로오스 및 0.016% 포름알데히드를 포함하고 pH 7.5이다.
다른 예에서, 상기 조성물은 솔비톨, 텍스트로스 및 트윈 80을 포함하는데, 이는 응집 및 안정성에 대하여 이점을 제공하는 것으로 나타난 조합이다 (이하 참조). 이러한 성분들의 양은, 예를 들어, 5-15%, 8-12% 또는 10% 솔비톨; 5-15%, 8-12% 또는 10% 덱스트로스; 및 0.01-1%, 0.025-0.5% 또는 0.05-0.1% 트윈 80일 수 있다. 이러한 성분들이 10% (솔비톨 및 덱스트로스) 및 0.05-0.1% (트윈 80)으로 존재하는 구체적인 예는 이하 기술된다. 다른 예에서, 상기 부형제는 덱스트로스 (10%) 및 솔비톨 (10%)이다.
본 발명의 조성물은 액상 또는 건조된 형태로 저장될 수 있는데, 후자는 예로서 동결 건조된 분말 형태, 동결 건조된 형태, 분무 건조된 형태 및 발포 건조된 형태를 포함한다. 따라서, 하나 이상의 부형제에 추가하여, 상술한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 액상 매체(liquid medium) (예컨대, 식염수 또는 물)을 포함할 수 있으며, 이는 예컨대, NaCL (예컨대, 150 mM)을 포함하는 인산나트륨 (예컨대, 5 mM)으로 완충될 수 있다. 본 발명의 조성물의 대표적인 pH 범위는 5-10, 예컨대 5-9, 5-8, 5.5-9, 6-7.5 또는 6.5-7이다. 상기 조성물은 하나 이상의 안정화제(stabilizing agents)를 포함할 수 있다. 다른 예에서, 상기 조성물은 동결 건조된 형태이고, 이러한 조성물은 투여 전 액상 매체 (예컨대, 식염수 또는 물)의 사용으로 재구성될 수 있다.
본 발명의 조성물은, 톡소이드 또는 톡신 항원 및 상술한 부형제들에 추가하여, 하나 이상의 애주번트(adjuvants)를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 얘쥬번트는 수산화알루미늄(aluminum hydroxide), 인산알루미늄(aluminum phosphate) 및 알루미늄 히드록시 포스페이트(aluminum hydroxy phosphate)와 같은, 알루미늄 화합물을 포함한다. 상기 항원은 표준 방법을 이용하여 알루미늄 화합물과 침전 또는 흡착될 수 있다. 구체적인 예로서, alum (예컨대, Rehydragel LV, Reheis, Inc., Berkeley Heights, New Jersey; 최고, 예컨대, 2 mg AlOH/dose, 예컨대, 약 1.5 mg AlOH/dose; Alhydrogel(예컨대, Alhydrogel2%; (수산화알루미늄 애주번트)), Brenntag Biosectror, Frederickssund, Denmark (AlOH3))이 사용될 수 있다. 사용된 알루미늄의 양은, 예를 들어 100-850 μg/dose, 200-600 μg/dose 또는 300-600 μg/dose일 수 있다.
본 발명에 포함되는 제형에 대한 하나의 접근법은 톡소이드들 및 부형제들을 함께 제형화하는 것을 포함하며, 그 후에 alum 애주번트와 같은, 애주번트를 투여 직전에 추가한다. 이러한 접근법은 이하 더욱 기술되는 것처럼, 면역원성을 증가시키는 것으로 나타났다. 다른 접근법에서, 상기 애주번트는 저장 전 제형화에서 포함된다 (액상 또는 동결 건조된 형태 중 하나). 본 발명의 조성물 및 방법에 사용될 수 있는 추가적인 애주번트는 RIBI (ImmunoChem, Hamilton, MT), QS21 (Aquila), Bay (Bayer) 및 Polyphosphazene (Virus Research Institute, Cambridge, MA; WO 95/2415)를 포함한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기술된 조성물을 제조하는 방법을 포함하는데, 이는 예컨대, Kotloff et al., Infection and Immunity 69(2):988-995, 2001에 의해 개시된 톡소이드의 생산, 및 약학적 제형화의 표준 방법을 이용하여 본 명세서에 기술된 바와 같은 톡소이드를 하나 이상의 부형제와 결합시키는 것을 포함한다. 상술한 바와 같이, 상기 조성물은 액상 또는 동결 건조된 형태로 저장될 수 있다. 동결 건조는 표준 방법 (예컨대, 이하 실시예 참조)을 이용하여 수행될 수 있고, 동결 건조된 물질은 멸균한 액체 (예컨대, 물, 식염수 또는 임의의 목적하는 부형제를 포함하는 용액)에서, 애주번트 있거나 없이, 투여 전에 재구성될 수 있다.
또한, 본 발명은 C. 디피실리 감염 또는 질환의 예방 및 치료에 있어서 조성물의 사용을 포함한다. 따라서, 본 발명은 재발성 CDAD와 같은, C. 디피실리 관련 질환(C. difficile associated disease, CDAD) 뿐 아니라 설사 (예컨대, 원내감염 설사(nosocomial diarrhea)) 및 위막성 대장염(pseudomembranous colitis)을 포함하는 CDAD의 특징을 예방 또는 치료하기 위한 본 발명의 조성물의 투여를 포함한다. 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 것처럼, CDAD는 종종 입원한 환자와 같은, 항생제 처치된 환자의 치료와 관련된다. 따라서, 본 발명의 치료 방법은 이러한 환자의 치료에 사용될 수 있다. 추가로, 본 발명에 따른 치료는 항생제 (예컨대, 반코마이신 및/또는 메트로니다졸) 처치 및/또는 수동 면역요법 (예컨대, U.S. Patent No. 6,214,341 참조)과 병행될 수 있다. 본 발명의 투여 방법은 또한 환자의 수동 면역(passive immunization)에 사용하기 위한 C. 디피실리 면역글로불린(immunoglobulin)의 생성에 사용될 수 있다 (예컨대, U.S. Patent No. 6,214,341 참조).
본 발명은 또한 개선된 특성을 갖는 C. 디피실리 톡신 또는 톡소이드를 포함하는 조성물을 생산하는데 사용될 수 있는 부형제를 확인하는 방법들을 포함한다. 이러한 방법들은, 이하 상세히 기술하는 바와 같이, 상기 조성물의 하나 이상의 톡신 및/또는 톡소이드 성분들의 감소 또는 지연된 응집 및/또는 증가된 안정성을 유도하는 조건의 확인을 용이하게 하는 스크리닝 분석을 포함한다. 이러한 방법들은 이하 상세히 기술하는 응집 분석 및 안정성 분석을 포함한다. 또한, 본 발명은 용해성, 면역원성 및 점도 분석들을 포함하여, 원하는 제형을 확인하기 위한 다른 분석법들의 사용을 포함한다.
본 발명의 조성물은, 예를 들어, 피부를 통한 (예컨대, 근육 내, 정맥 내 또는 복강 내) 경로로 당업자에 의해 적절하게 결정된 양 및 처방전에 따라 투여될 수 있다. 예를 들어, 100 ng-1 mg, 100 ng-500 μg, 1-250 μg, 10-100 μg, 25-75 μg 또는 50 μg 톡소이드가 투여될 수 있다. 예방 또는 치료의 목적으로, 상기 백신은, 예를 들어, 1, 2, 3 또는 4회 투여될 수 있다. 다회 용량(multiple doses)이 투여되는 경우, 그 용량들은, 예를 들어 1주 내지 1개월까지 서로 간격을 둘 수 있다. 다른 예에서, 각 50 μg의 4회 용량은 임의로 8주 기간에 걸쳐 근육 내로 투여될 수 있다.
본 발명은 여러 이점을 제공한다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 상기 부형제의 사용은 C. 디피실리 톡소이드 A 및 B의 증가된 물리적 안정성, 및/또는 톡소이드를 포함하는 약학적 제품 (예컨대, 백신)의 생산에 중요한, 감소되거나 지연된 응집을 유도한다. 또한, 본 발명의 비율 (예컨대, 3:2, A:B)의 사용 및 투여 직전에 애주번트를 추가하는 것(저장된 백신의 제형화 보다)은, 증가된 면역원성을 유도할 수 있다.
도 1. 20% 트레할로스(□), 20% 수크로오스(■), 10% 솔비톨(○), 10% 덱스트로스(●), 20% 글리세롤(△), 0.05% 트윈80(▲), 0.1% 플루로닉 F68(◇)에서 톡소이드 A(x)의 구조적 안정성에 대한 용질 효과의 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호; (c) ANS 방출 강도; (d) ANS 방출 피크 위치; 및 (b) DSC 온도기록도. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차(standard error)가 있었다.
도 2. 20% 트레할로스(□), 20% 수크로오스(■), 10% 솔비톨(○), 10% 덱스트로스(●), 20% 글리세롤(△), 0.05% 트윈80(▲), 0.1% 플루로닉 F68(◇)에서 톡소이드 B(x)의 구조적 안정성에 대한 용질 효과의 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호; (c) ANS 방출 강도; (d) ANS 방출 피크 위치; 및 (b) DSC 온도기록도. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 3. 10% 솔비톨 및 0.05% 트윈80(□), 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(■), 10% 소르비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 톡소이드 A(x)의 열 안정성에 대한 용질들의 조합의 효과 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호의 모니터 및 (b) OD 350 nm. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 4. 10% 솔비톨 및 0.05% 트윈80(□), 10% 덱스트로스 및 0.05 % 트윈80(■), 10% 솔비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 톡소이드 B(x)의 열 안정성에 대한 용질들의 조합의 효과 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호의 모니터 및 (b) OD 350 nm. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준 오차가 있었다.
도 5. 온도의 함수에 따라 10% 덱스트로스(■), 10% 솔비톨(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 트윈80(□) 특성의 연구: (a) 0.05% 트윈80 및 (b) 0.1% 트윈80의 208 nm CD 신호; (c) 0.05% 트윈80 및 (d) 0.1% 트윈80의 OD 350 nm; 트윈80 (e) 및 0.1% 트윈80 (f)에 기초한 유체역학적 직경 MSD 수(hydrodynamic diameter MSD Number)(채워진 사각형) 및 로그노말 수(Lognomal Number)(채워진 마름모). DLS 측정의 성질상 1 μm 이상의 크기는 정확하지 않다. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 6. 솔비톨 및 0.05% 트윈80(◆), 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(■), 솔비톨, 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(▲), 솔비톨, 덱스트로스 및 0.1% 트윈80(x), 솔비톨 및 덱스트로스(◇)의 존재시 톡소이드 A(a) 및 톡소이드 B(b)에 대한 CD 208 nm 신호로 모니터된 열 전이(Tm)의 중간점에 대한 용질 농도의 효과 연구.
도 7. 톡소이드 A(a-c) 및 톡소이드 B(d-f)에 대한 온도의 함수에 따른 유체역학적 직경. 여기서 채워진 사각형은 MSD 수 기초로 한 직경을 나타내고 채워진 마름모는 로그노말 수에 기초한 직경을 나타낸다. DLS 측정의 성질상 1 μm 이상의 크기는 정확하지 않다. (a,d) 단백질 단독; (b,e) 10% 솔비톨 및 10% 덱스트로스의 존재시 단백질; (c,f) 10% 솔비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80의 존재시의 단백질. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 8, Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant) 결합 연구: 톡소이드 A(◇) 및 톡소이드 B(▲)에 대하여 2 M NaCl의 존재시 (a) 흡착 등온선 및 (b) 탈착 등온선.
도 9. 5.5 내지 7.5의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 A의 이차 구조의 연구.
도 10. 5.5 내지 7.5의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 B의 이차 구조의 연구.
도 11. 5.5 내지 8.0 의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 A의 용융 온도의 연구.
도 12. 5.0 내지 7.5 의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 B의 용융 온도의 연구.
도 13. 고정된 저장온도에서 시간이 지남에 따른 서로 다른 pH 값에서 응집의 연구.
도 14. 시간이 지남에 따른 37℃에서 톡소이드 A의 염(salt)-의존적 응집의 연구.
도 15. 시간이 지남에 따른 37℃에서 톡소이드 B의 염(salt)-의존적 응집의 연구.
도 16. 백신 제형의 동결건조 파라미터의 연구.
도 2. 20% 트레할로스(□), 20% 수크로오스(■), 10% 솔비톨(○), 10% 덱스트로스(●), 20% 글리세롤(△), 0.05% 트윈80(▲), 0.1% 플루로닉 F68(◇)에서 톡소이드 B(x)의 구조적 안정성에 대한 용질 효과의 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호; (c) ANS 방출 강도; (d) ANS 방출 피크 위치; 및 (b) DSC 온도기록도. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 3. 10% 솔비톨 및 0.05% 트윈80(□), 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(■), 10% 소르비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 톡소이드 A(x)의 열 안정성에 대한 용질들의 조합의 효과 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호의 모니터 및 (b) OD 350 nm. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 4. 10% 솔비톨 및 0.05% 트윈80(□), 10% 덱스트로스 및 0.05 % 트윈80(■), 10% 솔비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 톡소이드 B(x)의 열 안정성에 대한 용질들의 조합의 효과 연구: (a) 208 nm에서 CD 신호의 모니터 및 (b) OD 350 nm. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준 오차가 있었다.
도 5. 온도의 함수에 따라 10% 덱스트로스(■), 10% 솔비톨(○), 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨(●)의 존재시 트윈80(□) 특성의 연구: (a) 0.05% 트윈80 및 (b) 0.1% 트윈80의 208 nm CD 신호; (c) 0.05% 트윈80 및 (d) 0.1% 트윈80의 OD 350 nm; 트윈80 (e) 및 0.1% 트윈80 (f)에 기초한 유체역학적 직경 MSD 수(hydrodynamic diameter MSD Number)(채워진 사각형) 및 로그노말 수(Lognomal Number)(채워진 마름모). DLS 측정의 성질상 1 μm 이상의 크기는 정확하지 않다. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 6. 솔비톨 및 0.05% 트윈80(◆), 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(■), 솔비톨, 덱스트로스 및 0.05% 트윈80(▲), 솔비톨, 덱스트로스 및 0.1% 트윈80(x), 솔비톨 및 덱스트로스(◇)의 존재시 톡소이드 A(a) 및 톡소이드 B(b)에 대한 CD 208 nm 신호로 모니터된 열 전이(Tm)의 중간점에 대한 용질 농도의 효과 연구.
도 7. 톡소이드 A(a-c) 및 톡소이드 B(d-f)에 대한 온도의 함수에 따른 유체역학적 직경. 여기서 채워진 사각형은 MSD 수 기초로 한 직경을 나타내고 채워진 마름모는 로그노말 수에 기초한 직경을 나타낸다. DLS 측정의 성질상 1 μm 이상의 크기는 정확하지 않다. (a,d) 단백질 단독; (b,e) 10% 솔비톨 및 10% 덱스트로스의 존재시 단백질; (c,f) 10% 솔비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 트윈80의 존재시의 단백질. 열 추적(thermal trace)은 2개의 측정의 평균을 나타내는데, 여기서 각 데이터 포인트는 0.5 이하의 표준오차가 있었다.
도 8, Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant) 결합 연구: 톡소이드 A(◇) 및 톡소이드 B(▲)에 대하여 2 M NaCl의 존재시 (a) 흡착 등온선 및 (b) 탈착 등온선.
도 9. 5.5 내지 7.5의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 A의 이차 구조의 연구.
도 10. 5.5 내지 7.5의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 B의 이차 구조의 연구.
도 11. 5.5 내지 8.0 의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 A의 용융 온도의 연구.
도 12. 5.0 내지 7.5 의 pH 범위에 걸쳐 원평광 이색성(circular dichroism, CD) 분광법에 의한 톡소이드 B의 용융 온도의 연구.
도 13. 고정된 저장온도에서 시간이 지남에 따른 서로 다른 pH 값에서 응집의 연구.
도 14. 시간이 지남에 따른 37℃에서 톡소이드 A의 염(salt)-의존적 응집의 연구.
도 15. 시간이 지남에 따른 37℃에서 톡소이드 B의 염(salt)-의존적 응집의 연구.
도 16. 백신 제형의 동결건조 파라미터의 연구.
실시예 1
클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile) 톡소이드 A 및 B의 물리적 안정성을 향상시키는 조건을 확인하기 위해, 안정화 화합물들(stabilizing compounds)에 대한 스크리닝을 수행하였다. 다양한 농도 및 여러 조합에서 30 GRAS(generally regarded as safe) 화합물들의 스크리닝을 두 파트로 수행하였다. 첫째, 고속 응집 분석(high-throughput aggregation assay)은 스트레스 조건(pH 5 내지 5.5에서 톡소이드를 55 ℃에서 55 또는 75분 동안 배양시킨다) 하에서 톡소이드의 응집을 지연 또는 예방하는 화합물의 스크리닝에 사용되었다. 두 단백질 모두를 안정화시키는 화합물은 추측가능한 천연-유사한 폴딩된 구조(pH 6.5)를 유도하는 조건 하에서 언폴딩(unfolding)을 지연시키는 능력에 대해 더 연구되었다. Alhydeogel(aluminum hydroxide adjuvant) 표면에서 톡소이드의 열 안정성은 DSC로 관찰하였으며, 또한 특정 부형제의 존재시 현저한 개선을 나타냈다. 두 톡소이드 모두의 응집을 효율적으로 저해시키는 화합물들은 단백질의 구조적인 안정성을 향상시키는 능력에 대해 더 연구되었다. 애주번트(adjuvant)-결합된 톡소이드에 대한 안정화제를 동정하기 위해, 선택된 부형제들은 애주번트-결합된 톡소이드의 열 안정성을 향상시키는 능력에 대해 더 연구되었다. 끝으로, 이러한 연구는 향상된 물리적 안정성이 약학적 제형을 디자인하는데 사용될 수 있는 조건(온도 및 용질(solute))의 범위에서 유리(free) 및 애주번트-결합된 톡소이드의 거동(behavior)에 대한 정보를 제공하였다.
실험 재료 및 방법
재료
톡소이드 A 및 B는 이전에 설명된 방법(Kotloff et al., Infection and Immunity 69(2):988-995, 2001)을 이용하여 고순도 형태로 제조하였다. 상기 단백질들의 농도는 각각 1 mg/mL의 농도에서 톡소이드 A에 대해 1.173 및 톡소이드 B에 대해 0.967의 흡광도 유닛을 이용하여 UV 흡광도로 280 nm에서 측정하였다. 모든 시약은 분석급의 것을 사용하였으며, 시그마사(St. Louis, MO)로부터 구매하였다. 150 mM NaCl을 포함하는 인산나트륨 버퍼(sodium phosphate buffer)(5 mM, pH 5.0, 5.5 및 6.5)는 부형제 스크리닝 연구에 사용되었다. 150 mM NaCl을 포함하는 나트륨 인산염 버퍼(5 mM, pH 6.5)는 교반 및 애주번트 연구에 사용하였다. 버퍼 교환을 위해, 단백질을 Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes, 10 kDa MWCO(Pierce, Rockford, IL)을 이용하여 냉장고용 온도에서 투석시켰다.
부형제 스트리닝 연구
응집 분석. 58 개의 농도 변화 및 여러 조합에 따라 약 30 GRAS(generally regarded as safe) 화합물이 톡소이드의 응집을 저해시키는 능력에 대해 스크리닝되었다. 단백질의 응집은 96-웰 플레이트 리더(Spectra Max M5, Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 광학 밀도 측정(optical density measurement)으로 350 nm(OD 350 nm)에서 모니터되었다. 응집 분석은 55 ℃에서 톡소이드 A(1.2 mg/ml)에 대해 pH 5.5 및 톡소이드 B(0.5 mg/ml)에 대해 pH 5.0에서 수행하였다. 이러한 조건 하에서, 상기 단백질들은 부분적으로 언폴딩되고, 자발적으로 결합한다. 따라서 이러한 두 프로세스를 교란시키는 부형제에 대한 임의의 안정화 작용은 잠재적으로 검출될 수 있다. 단백질을 해당 pH에서 부형제(들)를 포함하는 96-웰 플레이트의 웰에 첨가하고, 상기 샘플을 톡소이드 A의 경우 75분 동안, 톡소이드 B의 경우 55분 동안 55 ℃에서 반응시켰다. 상기 용액의 광학 밀도는 350 nm에서 5분마다 모니터되었다. 첨가된 화합물이 없는 단백질 용액의 대조군 및 부형제만 있는 버퍼(blanks)를 함께 시험하였다. 측정은 데이터 분석전 블랭크를 뺌으로서 고유의 버퍼-부형제 거동을 위해 교정되었다. 상기 샘플은 3번(triplicate) 평가하였다. 응집의 저해 퍼센트는 하기의 식을 사용하여 계산하였다.
여기서 ΔOD350(E)는 부형제의 존재시 단백질의 OD 350 nm에서 변화를 나타내고, ΔOD350(C)는 부형제가 없는 경우 단백질의 OD 350 nm에서 변화를 나타낸다 (Peek et al., Journal of Pharmaceutical Science 96(1):44-60, 2006).
구조적 안정성 연구. 톡소이드 용액은 CD 측정을 위해 0.2 mg/ml의 농도, 형광 및 UV 흡수 분석을 위해 0.1 mg/ml의 농도로 연구되었다. 이러한 범위 이상에서는 농도 의존적으로 나타나지 않는다. 각 샘플은 2번(duplicate) 평가하여 측정의 재현성을 확보하였다.
Far-UV CD(Circular Dichroism) 분광법. CD 스펙트럼은 6-포지션 펠티얼 온도 컨트롤러(6-position Peltier temperature controller)가 장착된 Jasco J-810 분광 편광계(spectropolarimeter)를 이용하여 획득하였다. CD 스펙트럼은 20 nm/min의 스캐닝 속도, 2번 누적 및 2초 응답 시간으로 260 ~ 190 nm에서 얻었다. 208 nm에서 CD 신호는 15 ℃/h의 온도 램프를 적용하여 10 내지 85 ℃ 온도 범위에 걸쳐 0.5℃ 마다 모니터하였으며, (0.1 cm 경로 길이를 갖는 밀폐된 큐벳 내에서) 상기 단백질의 열 전이(thermal transition)(용융 곡선)을 연구하였다. CD 신호는 Jasco Spectral Manager 소프트웨어로 몰 타원율(molar elipticity) 값으로 변환하였다. 열 전이의 중간점 온도(midpoint temperature)는 오리진(Origin) 소프트웨어를 이용한 용융 곡선의 시그모이드 피팅(sigmoid fitting)으로부터 얻었다.
ANS 형광 분광법. 단백질 상의 무극성(apolar) 부위의 접근성은 외부 프로브(extrinsic probe) ANS(8-Anilino-1-naphthalene sulfonate)의 형광 방출에 의해 모니터되었다. 각각의 샘플은 단백질에 대한 20배 몰 이상의 ANS를 포함시켰다. 방출 스펙트럼은 372 nm에서 ANS 여기(excitation) 후 2 nm의 스텝 크기(step size) 및 1초의 통합 시간으로 400 ~ 600 nm에서 수집되었다. 방출 스펙트럼은 10 내지 85℃ 온도 범위에 걸쳐 5분의 평형화(equilibration)로 2.5℃ 마다 수집되었다. 해당 pH에서 ANS-버퍼 기준선은 원(raw) 방출 스펙트럼에서 제외시켰다. 방출 스펙트럼의 피크 위치는 오리진 소프트웨어를 이용하여 폴리노미얼 피트(polynomial fits)로부터 얻었다.
고-해상도 UV 흡수 분광학. 고-해상도 UV 흡수 스펙트럼은 Agilent 8453 UV-visible 분광광도계를 이용하여 획득하였다. 단백질의 응집은 각각의 온도에서 5분 반응(평형화에 충분하도록)시킨 후 10 내지 80℃의 온도 범위에 걸쳐 2.5℃ 마다 350 nm에서 OD 값을 모니터함으로써 연구되었다.
동적 광산란법 (Dynamic Light Scattering). pH 6.5 (단독 및 부형제 존재시)에서 단백질의 평균 유체역학적 직경(mean hydrodynamic diameter)은 동적 광산란 장비(Brookhaven Instrument Corp., Holtzille, NY)를 이용하여 분석하였다. 상기 장비는 50 mW 다이오드-펌프 레이저(λ = 532 nm)가 장착되어 있으며, 산란된 빛은 입사빔(incident beam)에 대해 90°에서 모니터되었다. 자기상관(autocorrelation) 기능은 디지털 자동-상관기(digital auto-correlator, BI-9000AT)를 이용하여 발생시켰다. 유체학적 직경은 누적률 방법(cumulants; lognormal number based)을 이용하여 스톡스-아인슈타인(Stokes-Einstein) 등식에 의한 확산 계수(diffusion coefficient)로부터 계산하였다. 데이터는 비-음수 제한적 최소 자승 알고리즘(non-negatively constrained least squares algorithm)에 맞추어 MSD(multi-modal distributions)를 산출하였다. 상기 장비는 온도가 조절되는 순환 항온 수조 RTE111(Neslab, Newington, NH)가 장착되어 있으며, 유체학적 직경은 10 내지 85 ℃의 온도 범위에 걸쳐 모니터되었다.
DSC(Differential Scanning Calorimetry). DSC는 자동샘플주입기(autosampler; MicroCal, LLC; Northampton, MA)를 가지는 MicroCal VPDSD를 이용하여 수행하였다. 톡소이드(0.5 mg/ml) 단독 및 부형제가 존재하는 경우의 온도기록도(thermogram)는 60 ℃/h의 스캔 속도를 이용하여 10 ~ 90℃에서 얻었다. 각각의 스캔을 시작하기 전에, 채워진 세포들을 10℃에서 15분 동안 평형화 시켰다. 버퍼 단독의 온도기록도는 분석전 각 단백질 스캔에서 제외되었다.
교반(agitation) 연구. 0.4 mg/ml 농도에서 톡소이드 용액은 부형제가 있거나 없는 상태에서 연구되었다. 단백질 샘플들(0.4 ml)을 1.5 ml 원심분리 튜브에 넣은 후, 로테이터(Thermomixer R, Eppendorf AG, Hamhurg, Germany)에서 4℃의 일정한 온도에서 300 rpm으로 72시간 동안 교반시켰다. 단백질의 농도 및 OD 350 nm는 교반 전 및 후를 측정하여 혈관 벽에 흡수 및 응집을 평가하였다. 샘플들을 4℃에서, 10,000×g의 속도로 10분 동안 원심분리 하고, 상층액의 농도 및 OD 350 nm를 측정하여 불용성 응집물(aggregates)의 형태를 검출하였다. 단백질들의 구조는 CD로 평가하였다. 각 샘플은 2번(duplicate) 측정하였다.
애주번트(Aujuvant) 연구
수산화 알루미늄의 흡착(Alhydrogel)(aluminum hydroxide adjuvant). 다양한 농도(0.025 ~ 1 mg/ml)에서 Alhydrogel(Brenntag Biosectror, Frederickssund, Denmark; aluminum hydroxide adjuvant)에 흡착되는 톡소이드의 능력은 결합 등온선(binding isotherm)을 구축함으로써 측정하였다. 0.4 mg/ml Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)의 존재하에서 단백질 용액을 엔드-오버-엔드 튜브 로테이터(end-over-end tube rotator)에 넣고 냉동 온도에서 20분 동안 회전시켰다. 샘플들을 30초 동안 14,000×g의 속도로 원심분리하여 애주번트 펠렛을 얻었다. 상층액 내에 남아있는 단백질 농도의 값은 결합 커브의 작도(construction)를 위해 사용하였다. 부형제의 존재하에서 Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)에 결합하는 단백질의 능력은 동일한 과정으로 측정하였다. 이 경우, Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)을 단백질-부형제 용액에 첨가하였다.
Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)로부터 톡소이드의 탈착. Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)로부터 단백질의 탈착은 2 M NaCl의 존재하에서 평가하였다. 톡소이드 Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant) 펠렛은 상기 설명된 것과 같이 준비하였다. 상기 펠렛을 버퍼(pH 6.5)로 세척하여 NaCl 용액의 첨가전 상층액에 존재하는 단백질을 제거하였다. Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant) 용액을 엔드-오버-엔드 튜브 로테이터에 넣고 냉동 온도에서 20분 동안 회전시켰다. 샘플들을 30초 동안 14,000×g의 속도로 원심분리하여 애주번트 펠렛을 얻었다. 상층액에서 단백질의 농도는 탈착 등온선(desorption isotherms)의 구축을 위해 이용하였다.
Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)에 결합한 톡소이드의 안정성. Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)에 결합한 톡소이드의 열 안정성은 MicroCal VP-AutoDSC(Microcal, LLC, Northampton, MA)를 이용하여 DSC로 모니터하였다. 0.5 mg/ml에서 톡소이드는 상기 설명된 절차로 0.4 mg/ml의 Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant)에 결합시켰다. 톡소이드의 온도기록도는 60 ℃/h의 스캐닝 속도로 10 ~ 90 ℃에서 얻어내었다. 각각 스캔하기 전에 샘플들은 10 ℃에서 15 분 동안 평형화시켰다. Alhydrogel(aluminum hydroxide adjuvant) 단독의 온도기록도는 분석전 각각의 단백질/애주번트 스캔에서 제외시켰다.
결과 및 고찰
부형제 스크리닝 연구
응집의 예방/지연시키는 GRAS 화합물의 능력을 연구하기 위해, 스트레스 조건에서 톡소이드를 단독 및 부형제의 존재하에 반응시켰다 (55℃에서 반응). 톡소이드의 응집은 반응 시간 동안 350 nm에서 OD의 변화를 모니터함으로써 높은 처리량 방식(high-throughput fashion)으로 모니터하였다. 탁도(turbidity)의 변화는 응집 저해의 %를 계산하는데 사용되었으며, 톡소이드 A는 표 1에, 톡소이드 B는 표 2에 설명되어 있다.
톡소이드 A의 높은 처리량 응집 분석은 상기 부형제들의 절반 이상이 시간이 지남에 따라 OD 350 nm의 증가를 지연시키거나 예방하여 90% 이상까지 응집의 저해를 유도하는 하는 것으로 나타났다 (표 1). 시험된 부형제들 중에서 2.5% 알부민(albumin), 2.5% α-사이클로덱스트린(α-cyclodextrin), 0.1% 트윈80(tween 80), 0.3M 히스티딘(histidine) 및 0.3M 라이신(lysine)은 즉시 높은 OD 350 nm 값을 유도하였으며, 이는 톡소이드 A가 이러한 조건하에서 불용성임을 의미한다. 톡소이드 A의 응집은 또한 16개의 다른 부형제들의 존재하에서는 현저히 향상되었으며, 그 중 25 및 50 mM 아르기닌(arginine)/글루타민 혼합물, 0.3 M 아르기닌 및 0.3 M 프롤린(proline)은 특히 강력하였다.
90% 이상까지 톡소이드 B의 응집 저해는 15개의 부형제들의 존재하에서 발생하였다 (표 2). 0.3M 히스티딘(histidine) 또는 0.2M 구연산나트륨(sodium citrate) 존재시 즉시 높은 OD 350 nm을 나타내었다. 다른 20개의 화합물들은 모니터된 시간 동안 점차적으로 응집을 유도하였다. OD 350 nm에서 매우 높은 증가는 0.015M 염화칼슘(calcium chloride), 0.15M 아스코르브산(ascorbic acid) 및 0.3M 아르기닌(arginine)의 존재시 관찰되었다.
많은 경우에서, 둘 모두의 톡소이드의 응집은 동일한 부형제들에 의해 촉진되었다 (표 1 및 2). 대조적으로, 5% 2-OH 프로필 γ-CD, 0.01% 및 0.1% 트윈20, 0.15M 아스파르트산(aspartic acid) 및 0.3M 구아니딘(guanidine)은 톡소이드 B 단독의 응집을 촉진시켰다. 또한 0.015 M 염화칼슘의 존재시 응집은 톡소이드 A보다 톡소이드 B에 대하여 더 많았다. 이는 염화칼슘의 존재시 톡신(toxin) A C-말단 도메인(C-terminal domain)의 열 안정성이 증가되는 것으로 알려진 것과 관련이 있다 (Demarest et al., Journal of Molecular Biology 346(5):1197-1206, 2005). 응집이 유도된 용질(solute)에 대한 그들의 반응에서 톡소이드들 사이의 차이점은 아마도 해당 톡신 사이의 구조적인 차이와 관련이 있다 (Warny et al., Lancet 366(9491):1079-1084, 2005; Just et al., Reviews of Physiology, Biochemistry and Pharmacology 152:23-27, 2005). 연구된 화합물 중 이노시톨포스페이트(inositol phosphate)가 없는 경우는 톡소이드의 관찰된 응집이 자기촉매 절단(autocatalytic cleavage)과 관련이 없음을 의미한다 (Reineke et al., Nature (London, United Kingdom) 446(7134):415-419, 2007). 시험된 대부분의 탄수화물(carbohydrate), 세제(detergent) 및 사이클로덱스트린(cyclodextrin)은 톡소이드의 응집을 저해하였다. 다음의 부형제들은 두 종류 톡소이드의 응집을 효율적으로 저해하는 것으로 나타났다: 20% 트레할로스(trehalose), 20% 수크로오스(sucrose), 10% 솔비톨(sorbitol), 10% 덱스트로스(dextrose) 및 20% 글리세롤(glycerol).
상기 언급된 탄수화물, 솔비톨, 글리세롤 및 두 종류의 계면활성제(0.05% / 0.1% 트윈80 및 0.1% 플루로닉(pluronic) F-68)는 ANS 형광, 가열(heating)에 따른 CD 신호 변화 및 DSC를 모니터함으로써 pH 6.5에서 단백질들의 2차 및 3차 구조를 안정화하는 능력에 대해 더 연구하였다 (도 1 및 2). 20% 수크로오스 및 20% 트레할로스의 존재시 톡소이드 A는 2차 구조 변화의 조기 발생(earlier onset)을 유도하였으나, 나머지 부형제들은 ~2℃까지 열 전이를 지연시켰다 (도 1a). 놀랍게도, 톡소이드 B는 20% 수크로오스의 존재시에만 2차 구조 변화의 조기 발생이 나타났으나, 나머지 부형제들은 ~1℃까지 열 전이를 지연시켰다 (도 2a). 트레할로스 및/또는 수크로오스의 존재시 톡소이드들의 2차 구조 변화의 조기 발생은 용질에 의해 부분적으로 언폴딩된 상태(들)의 안정성에 의해 설명될 수 있다. 추가적으로, 상기 톡소이드들이 다당류(polysaccharide)에 의한 그들의 C-말단 탄수화물 인식 서열 반복(C-terminal carbohydrate recognition sequence repeats)에 결합함 (Greco et al., Nature Structural % Molecular Biology 3(5):460-461, 2006)에 따라 부분적으로 언폴딩될 가능성을 배제할 수 없다. 2차 메커니즘(second mechanism)에 의한 구조적인 불안정화의 경우, 트레할로스의 존재시 두 종류 톡소이드의 거동의 차이점은 톡소이드들 사이의 구조적인 차이와 관련되어 있다 (the C-terminal domain possesses 30 repeats in toxoid A and 19 repeats in toxoid B; Just et al., Reviews of Physiology, Biochemistry and Pharmacology 152:23-47, 2005). 단당류(monosaccharide)(dextrose)가 두 종류 톡소이드의 이차 구조에 안정화 효과를 나타낸다는 것은 흥미로운 것이다. 두 톡소이드들의 언폴딩이 유도되고 ANS의 결합이 관련된 온도는 화합물의 존재에 의해 영향을 받지 않는다 (도 1b, 2b). 톡소이드들의 온도-유도된 언폴딩에 따른 세제(detergent)의 효과는 DSC로 모니터하였으며, 현저한 효과는 나타나지 않았다 (도 1c, 2c 및 표 3). 이러한 관찰은 상기 부형제들이 잘 설명되어 있는 선택적 배제 메커니즘(preferential exclusion mechanism)에 의해 톡소이드들의 구조를 강력하게 안정화시키지는 않으며, 오히려 단백질 회합(protein association)을 초래하는 단백질/단백질 상호작용의 직접적 차단과 같은, 다른 메커니즘에 의해 그들의 응집을 저해한다 (Timasheff, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99(15):9721-9726, 2002; Timasheff, Advances in Protein Chemistry 51(Linkage Thermodynamics of Macromolecular Interactions):355-432, 1998).
더 나은 활성 약제들(active agents)의 조합의 이차 구조에 대한 효과를 연구하기 위해, 솔비톨, 덱스트로스 및 트윈80 혼합물에 따른 결과는 OD 350 nm으로 응집 및 CD로 톡소이드들의 열 전이를 모니터함으로써 특성화되었다 (도 3 및 4). 트윈80(0.05% 또는 0.1%) 단독 또는 솔비톨 및/또는 덱스트로스 존재시 용액의 가열은 마이셀(micelle) 구조에서 변화를 초래하였으며, 이는 CD 신호의 감소에 의해 유도되었으며 OD 350 nm에 의해 모니터된 것과 같이 광산란(light scattering)이 증가되었다 (도 5). 부형제들의 농도는 열 전이의 온도에 대하여 대략적으로 선형 효과를 나타내었다 (도 6). 이는 부형제들이 단백질 회합을 직접적으로 저해하여 응집을 예방한다는 가설을 뒷받침한다. 열 전이에 대한 부형제들의 효과는 표 4 및 5에 요약하였다. 0.05% 트윈80이 있거나 없는 10% 덱스트로스 및 10% 솔비톨의 조합은 두 톡소이드 가장 넓은 범위까지 (톡소이드 A에 대해 ~4℃, 톡소이드 B에 대해 ~10℃) 모두의 열 전이의 중간점(midpoint)을 지연시키는 경향이 있다 (도 3). 이는 안정화 화합물들(stabilizing compounds)의 시너지 효과 및/또는 더 높은 총 농도에 의한 것으로 설명할 수 있다. 톡소이드 B의 경우, 전이의 발생 온도는 약제들의 조합의 존재시 지연되지 않았으나, 열 전이의 중간점은 현저하게 지연되었다. 이는 둘 이상의 부형제들의 존재시 톡소이드 B의 더 단계적인 언폴딩과 관련될 수 있다. 톡소이드 A는 안정화 화합물들의 존재시 응집(OD 350 nm로 관찰)의 현저한 지연을 유도하였다 (도 4a). 또한 상기 부형제들이 있거나 없는 경우 톡소이드들의 유체역학적 직경(hydrodynamic diameter)은 DLS로 관찰하였다 (도 7). 톡소이드 A는 상기 부형제들의 존재시 이전에 관찰된 유체역학적 직경 증가의 지연된 발생을 유도하였으나 (도 7a-c), 반면 톡소이드 B는 더 작은 효과를 보였다 (도 7d-f). 이러한 결과는 본 명세서에서 시험된 가능성 있는 백신 부형제들의 특정 조합이 선택적 수화 메커니즘(preferential hydration mechanism)과 단백질 회합의 직접적 저해 모두에 의해 단백질 구조를 안정화한다는 것을 나타낸다. 이러한 안정화 화합물들의 사용은 저장하는 동안 톡소이드들의 물리적인 안정성을 아마도 증가시킬 것이다.
교반 연구
톡소이드 물리적 안정성에 대한 교반의 효과는 저장 바이알(vial)의 벽에 단백질 흡착, 불용성 응집물(aggregates)의 형성, 및 단백질 열 안정성의 변화를 모니터함으로써 연구되었다. 부형제들의 존재 및 부재시 단백질 농도, OD 350 nm, 및 CD 용해(melts)에서 무의미한 변화는 톡소이드들이 이러한 교반-기초한 스트레스의 적용에 대해 주요한 물리적인 변화를 겪지 않음을 나타내었다.
애주번트 연구
애주번트의 결합 등온선(binding isotherm)은 더 높은 단백질 농도에서 포화되는 결합을 갖는 낮은 농도에서 톡소이드들이 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 효율적으로 결합함을 나타냈다 (도 8a). 0.5 mg/ml에서 상기 톡소이드들은 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 95% 이상 결합하였으며, 이는 애주번트의 표면에서 단백질의 안정성을 직접으로 모니터하는데 DSC의 사용을 가능하게 한다. 2M NaCl의 첨가에 따라 톡소이드 탈착이 없는 것은 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)과 톡소이드의 상효작용이 단백질/수산화알루미늄 상호작용에서 종종 발생하는 것과 같은 단독 정전(solely electrostatic)이 아님을 의미한다 (도 8b; Gupta et al., Pharmaceutical Biotechnology 6:229-248, 1995; Seeber et al., Vaccine 9(3):201-203, 1991; White et al., Developments in Biologicals (Basel, Switzerland) 103(Physico-Chemical Procedures for the Characterization of Vaccines):217-228, 2000).
Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 결합함에 따라, 톡소이드 A는 자신의 열 안정성에 있어서 탐지가능한 변화를 보이지 않았으나, 애주번트-결합된 톡소이드 B는 ~1.4℃까지 Tm의 감소를 설명한다. Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 결합된 톡소이드의 프랙션(fraction)은 대부분의 부형제 존재시 다소 감소된다 (표 6 및 7). 이는 아마도 부형제들이 단백질 및/또는 애주번트와 직접적인 상호작용에 의해 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 결합하는 톡소이드를 부분적으로 방해함을 의미한다. 부형제들이 있거나 없는 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 결합된 단백질들의 열 안정성은 톡소이드 A에 대해서는 표 6 그리고 톡소이드 B에 대해서는 표 7에 요약하였다. 부형제의 존재는 전이 온도를 감소 또는 증가시킴으로써 애주번트-결합된 톡소이드들의 열 안정성을 교란시켰다. 열 안정성의 감소는 10% 솔비톨의 존재시 두 톡소이드 모두에서 나타나지만, 10% 솔비톨 및 10% 덱스트로스의 존재는 단지 톡소이드 B의 열 안정성을 감소시킨다. 추가적으로, 트윈80은 오직 애주번트-결합된 톡소이드 B의 경우에 안정화 효과를 갖는다. 이에 반해서, 덱스트로스(10 %)는 두 톡소이드 모두의 열 안정성에 대해 안정화 효과를 갖는다. 흥미롭게도, 세 가지 부형제(10% 솔비톨, 10% 덱스트로스 및 0.05% 또는 0.1% 트윈80)들의 조합은 3-4℃까지 두 애주번트-결합된 톡소이드 모두의 열 전이를 높이는데 도움이 된다.
결론
안정제(stabilizer) 스크리닝에 계통적 접근(systematic approach)은 두 A 및 B 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 모두의 열 안정성을 개선시키는 부형제들의 동정(identification)으로 귀결되었다. 선택된 부형제들의 존재시 Alhydrogel(aluminium hydroxide adjuvant)에 결합된 톡소이드들의 연구는 애주번트-결합된 단백질들의 개선된 물리적 안정성을 유도하는 조건들을 확인하였다. 이러한 연구는 또한 향상된 저장 안정성의 제형(formulation)을 디자인하는데 사용될 수 있는 조건들(온도, 용질)의 범위에서 톡소이드들의 물리적인 거동에 대한 정보를 제공하였다.
실시예 2
클로스트리듐 디피실리 톡소이드 백신의 제형(formulation)에 대한 추가 변경은 백신의 안정성 및 면역원성 프로파일(immunogenicity profile)을 개선하기 위한 노력의 성과로 조사되었다. 현재 백신에 대해 얻은 전임상(pre-clinical) 및 임상 데이터는 증가된 안정성 및 면역원성 프로파일이 미래의 임상 연구를 지원하는데 중요한 것임을 보여주었다.
pH
최대 안정성을 가져오는 pH를 결정하는 것은 제형 개선 노력의 일부이다. 연구는 -65℃, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 28일째까지 5.5-7.5 범위의 pH로 유지된 액체 샘플에 대하여 수행되었다. 다음의 방법은 안정성 프로파일(stability profile)을 확립하는데 사용되었다.
1. CD(circular dichroism) 분광법 (2차 구조에서의 변화),
2. CD(circular dichroism) 분광법 (용융 온도(Tm)에서의 변화), 및
3. 분광광도법(OD350nm) 및 SEC-HPLC (응집 형성).
시험된 전체 pH 범위에 전반에 걸쳐 pH 6.0 이상의 톡소이드 A 및 톡소이드 B에 대한 CD 스펙트럼에서 관찰된 2차 구조에는 변화가 없었다 (도 9 및 도 10; Salnikova et al., J. Pharm. Sci. 97(9):3735-3752, 2008). CD 측정으로부터 얻은 용융점(melting point) 데이터는 두 톡소이드 모두의 최대 안정성이 7.0 보다 큰 pH에 있음을 나타냈다 (도 11 및 도 12).
pH 6-7.5 범위에 걸쳐 톡소이드 A 및 B의 응집 상태는 ≤-60℃의 범위에서 거의 달라지지 않았으며, 이때 응집물 형성(% monomer) 및 % 영역 회복(area recovery)을 SEC-HPLC로 분석하였다. 그러나 응집 상태의 차이는, 응집 수준에서 더 큰 변화(shifts)의 경향이 있는 더 낮은 pH 값을 가지면서, 온도가 상승하는 경우(특히 5℃ 이상) pH 범위 전반에 걸쳐 더욱 명확하게 되었다. 이는 Salnikova et al., J. Pharm. Sci.97(9):3735-3752, 2008에 설명된 것과 같이, 더 낮은 pH 값, 350 nm에서 광학 밀도(optical density)의 증가에 의해 일어난다.
응집이 고정된 저장 온도(≤-60℃)에서 시간이 지남에 따라 서로 다른 pH 값에서 분석되었을 때, 응집이 더 낮은 pH 수준(< pH 7.0)에서 촉진된다는 암시를 가지면서, 그 결과는 응집 상태가 초-저온에서 매우 안정한 것으로 다시 나타났다. 이러한 데이터를 염두에 두고, 상기 백신 벌크(vaccine bulk)의 저장을 위한 명목상의(nominal) pH는 7.5로 설정하였다.
이온 강도(ionic strength)
최대 안정성을 가져오는 이온 강도를 결정하는 것 또한 제형 개선 노력의 일부이다. 연구는 pH 7.25인 20 mM 구연산 나트륨(sodium citrate) 버퍼에서 -65℃, 5℃, 25℃ 및 37℃로 28일째까지 유지된, 다양한 농도(0-300 mM)의 염화나트륨으로, 액체 샘플에 대하여 수행되었다. 또한 NaCl을 5% 수크로오스로 치환하여 시험하였다. 안정성 프로파일을 확립하는데 사용된 상기 방법들은 SEC-HPLC, SDS-PAGE 및 시각적 외관(visual appearance)이었다.
SDS-PAGE 및 시각적 외양에 의해 식별가능한 뚜렷한 차이는 없었다. SEC-HPLC는 더 높은 염 농도(salt concentrations)에서 톡소이드 B의 응집을 분명하게 보여주었다. 톡소이드 A에서 응집은 50 mM NaCl에서만 눈에 띄는 효과를 보이면서 시간과 온도 의존적으로 나타났다. 상기 데이터는 0-50 mM 염화나트륨 또는 5% 수크로오스가 첨가되어야 톡소이드들의 최대 안정성을 얻을 수 있음을 의미한다 (도 14 및 15).
버퍼 교환 및 부형제의 첨가
예비 연구를 수행하여 톡소이드들의 안정성에 대한 버퍼 및 부형제의 효과를 평가하였다. HPLC-SEC로부터 얻은 데이터는 부형제로서 솔비톨을 갖는 구연산나트륨 버퍼가 표 8 및 9에 나타낸 것과 같이, 시간이 지남에 따라 톡소이드들의 퍼센트 회복(percent recovery)에 의해 결정되는 가장 큰 안정성을 제공함을 증명하였다.
동결 건조 조제의 평가
단계 II(phase II) 임상시험에 안정한 동결 건조된 제형(lyophilized formulation)을 선별하기 위해, 본 발명자들은 햄스터 면역원성 분석(immunogenicity assay)을 수행하였으며, 이는 그것이 임상 면역원성에 관련된 생성물의 변화에 대한 가장 큰 감수성(sensitivity)을 증명하는 전임상 분석이기 때문이다. 예비 연구에서 얻은 데이터는 안정화 부형제로서 버퍼 또는 솔비톨과 같은 구연산나트륨에 기초한 부형제 스크리닝 연구에 이르게 하였다. 수크로오스는 솔비톨 제형에서 관찰되는 낮은 Tg' 및 긴 동결건조 시간으로 인하여 동결 건조된 제형에서 솔비톨을 대체하는 안정화 부형제로서 도입되었다. 두 번째 동결건조/부형제 스크리닝 연구는 또한 병렬 연구(parallel study)로부터 얻은 데이터에 기초하여 인산칼륨(potassium phosphate) 버퍼 및 트레할로스를 이용하여 수행하였다. 이러한 연구들과 이전의 실험에서 얻은 데이터로부터, 세 개의 리드 제형(lead formulations), 하나의 액체와 두 개의 동결 건조된 제형이 발견되었다.
동결 건조된 제형을 준비하여 그들의 안정성을 실시간으로 가속 조건에서 분석하였다. 톡소이드 A 및 B는 그들의 개별적인 안정성 프로파일을 더 분명히 연구하기 위해 별도로 저장하였다. 3개월간 -65, 5 또는 42℃에서 저장 후 하나의 제형(20 mM 구연산염(citrate), 5% 수크로오스, 0.016% 포름알데히드, pH 7.5, 동결 건조됨)으로부터 얻은 외관(appearance) 데이터 및 햄스터 면역원성 데이터는 하기에 제시되어 있다. 연구 시작 및 3개월간 -65, 5 또는 42℃에서 저장 후 시점에서 제형들 사이의 외관(appearance)은 약간의 차이도 없음이 관찰되었다 (표 10 및 11). 더욱이, 햄스터 면역 반응은 7개월간 5 및 42℃에서 저장시킨 제형들 사이 또는 포름알데히드가 있거나 없는 동일한 제형들 사이에서 뚜렷한 차이가 없었다. 42℃에서의 저장은 고도의 스트레스 조건이며, 저장시 변화가 관찰되지 않았기 때문에, 그 결과는 상기 제형이 더 낮은 온도에서 아마도 상당히 오랫동안 안정할 것임을 의미한다. 그러나 저장수명(shelf life)을 평가할 의도인 상기 데이터의 통계 음향 분석(statistically sound analysis)은 일부 수량화 가능한 변화(quantifiable change)가 나타나서 비율(rate)이 계산될 수 있음을 필요로 한다. 현재까지 변화가 관찰되지 않아서, 진성비율(true rate)은 측정될 수 없다. 이러한 데이터를 고려하여, 본 발명자들은 상기 톡소이드들은 20 mM 구연산염, 5 % 수크로오스, 0.016 % 포름알데히드에서, pH 7.5, 2-8℃에서 보관되고, 클로스트리듐 디피실리의 톡소이드 A 및 B로 구성된 동결 건조된 의약품(Drug Product) 제형을 사용할 계획이다.
본 명세서에서 상세히 설명된 안정성 연구에 사용된 상기 제형들은 표 12에 요약한 동결건조 사이클을 이용하여 제조되었다. 이 사이클은 고형의, 흰색의, 세련된 케이크를 제조하였지만, 압력식 진공(manometric vaccum) 기록과 동일할 때까지 감소하는 피라니 진공(Pirani vacuum) 기록에 의해 결정되는 1차 건조(primary drying)를 완료하는 가장 끝부분(very edge)에 있다 (도 16). 다음의 중대한 변화들은 동결건조 사이클을 위한 것으로, 이러한 고려사항들을 해결하여 좀 더 큰 규모의 공정을 만들 수 있다.
1. 상기 저장온도를 -35℃로 감소시켜 더 큰 규모에서 1차 건조시 의약품 물질(drug substance)이 동결된 상태로 남게 하였다.
2. 1차 건조를 4000분으로 연장시켜 더 큰 규모에서 1차 건조의 완료를 확실히 하였다.
3. 상기 진공을 100 mT로 증가시켜 건조를 신속하게 하고 더 큰 규모의 공정을 가능케 하였다.
GMP 임상 로트(clinical lots)의 공정을 위해 Althea Technologies, Inc.에 전달된 상기 동결건조 사이클은 표 13에 도시하였다.
물리화학적 및 생물학적 특성의 요약
실험으로 결정된 상기 백신의 주요한 물리화학적 및 생물학적 특성은 이하 요약하였다.
화학적으로, 상기 백신은 3:2 비율로 존재하는 C. 디피실리 톡신 A 및 B의 비활성화된(inactivated) 형태(톡소이드들)로 각각 구성된다. C. 디피실리 톡신 A 및 B는 각각 308 kDa, 270 kDa로, 구조에 있어서 아주 뚜렷하게 유사한 거대단백질이다.
물리적으로, 상기 백신은 측정가능한 응집의 증거 없이 ≥90% 순도의 용액으로 제공된다.
생화학적으로, 상기 백신의 톡소이드 A 및 B는 웨스턴 블롯 분석에서 그들 각각의 톡신 A 또는 B-특이적 항체에 대하여 면역학적으로 반응한다.
생물학적으로, 상기 백신은 햄스터에서 면역성을 나타내며, 일정하고 복용량-의존적 혈청 항체 반응을 유도한다. 상기 백신 톡소이드 A 및 B는 세포독성 활성(cytotoxic activity)이 없다. 상기 백신을 구성하는 톡소이드 A는 천연의 톡신 A에서 관찰된 것과 같은, 약간의 수용체-결합 활성을 유지한다.
상기 백신은 20 mM 구연산나트륨, pH 7.5, 5% 수크로오스, 0.016% 포름알데히드로 구성된 버퍼에서 동결 건조된 형태로 제공된다. 생성물은 2-8℃에서 보관된다.
동결건조 스크리닝 연구
동결 건조된 제형을 스크리닝하기 위하여 햄스터 면역원성이 평가에 사용되었다. 동결건조는 FTS LyoStar Ⅱ에서 수행되었다. 동결은 저장온도를 감소시킴으로써 수행되어 생성물 온도를 Tg' 이하로 충분히 낮게 유도하였다. 1차 건조는 자유수(free water)가 승화될 때까지 진공을 걸고 유지함으로써 시작하였다. 상기 저장온도는 그 후 2차 건조를 시작하기 위해 증가되고 흡착된 물을 날려버림으로써 생성물을 더 건조하기 위해 유지되었다. 제형들은 5, 25, 및 42℃의 온도 조건에서 안정성을 갖게 되었다.
표 1. 톡소이드 A 응집에 대한 GRAS 부형제들의 효과. 응집을 지연/예방하는 화합물들은 양(positive) %의 응집 저해 값을 갖는다; 응집을 유도하는 화합물들은 음(negative) %의 응집 저해 값을 갖는다.
표 2. 톡소이드 B 응집에 대한 GRAS 부형제들의 효과. 응집을 지연/예방하는 화합물들은 양(positive) %의 응집 저해 값을 갖는다; 응집을 유도하는 화합물들은 음(negative) %의 응집 저해 값을 갖는다.
표 3. 톡소이드 A 및 B의 열 안정성에 대한 용질(세제)의 효과. 열 안정성(Tm)은 DSC로 모니터되었다. Tm은 열 전이의 최대 피크 위치(peak position)에 대응하는 온도이다.
표 4. 열 전이 온도(Tm)의 톡소이드 A 중간점(midpoint)에 대한 부형제들의 효과. 열 전이는 온도의 역할로서 208 nm에서 CD 신호에 의해 모니터되었다. 각 측정은 2번(duplicate) 수행되었으며 ~0.5℃의 불확실성(uncertainty)을 갖는다.
표 5. 열 전이 온도(Tm)의 톡소이드 B 중간점(midpoint)에 대한 부형제들의 효과. 열 전이는 온도의 역할로서 208 nm에서 CD 신호에 의해 모니터되었다. 각 측정은 2번(duplicate) 수행되었으며 ~0.5℃의 불확실성(uncertainty)을 갖는다.
표 6. 부형재들의 존재 및 부재시 (특별히 다른 것이 없는 한) Alhydrogel에 결합된 톡소이드 A의 열 안정성. 열 안정성(Tm)은 열 전이의 피크 위치에 대응하는 온도를 나타내는 Tm으로, DSC에 의해 모니터되었다. 애주번트에 결합된 톡소이드의 퍼센트는 1%의 불확실성으로 각 조건에서 측정되었다. 각 조건은 2번 연구되었다.
표 7. 부형재들의 존재 및 부재시 (특별히 다른 것이 없는 한) Alhydrogel에 결합된 톡소이드 B의 열 안정성. 열 안정성(Tm)은 열 전이의 피크 위치에 대응하는 온도를 나타내는 Tm으로, DSC에 의해 모니터되었다. 애주번트에 결합된 톡소이드의 퍼센트는 1%의 불확실성으로 각 조건에서 측정되었다. 각 조건은 2번 연구되었다.
표 8.
톡소이드 A
2개월 안정성
% 톡소이드 회복
표 9.
톡소이드 A
2개월 안정성
% 톡소이드 회복
표 10. 다음의 서로 다른 온도에서 동결 건조된 제형의 외관
표 11. 다음의 서로 다른 온도에서 동결 건조된 제형의 면역원성 (햄스터에서 혈청 항-톡신 A 및 B igG 역가).
표 12.
표 13.
상기 인용된 모든 참고문헌들의 내용은 본 명세서에 참조로서 편입된다. “a” 및 “the”와 같이, 본 명세서에서 단수형의 사용은, 그 문맥이 상반되는 개념을 의미하지 않는 한, 그에 대응하는 복수형의 의미를 제외하지는 않는다. 요컨대, 예를 들어, 특허청구범위가 “a” 톡신, 톡소이드 또는 부형제의 사용을 의미한다면, 다른 지시가 없는 한, 하나 이상의 톡신, 톡소이드 또는 부형제의 사용을 포함하는 것으로도 해석될 수 있다. 다른 구현예들은 다음의 특허청구범위 내에 있다.
Claims (43)
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile)의 톡소이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제(excipients)를 포함하는 조성물로서,
상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡소이드의 열 안정성을 증가시키거나 톡소이드의 응집(aggregation)을 감소 또는 지연시키고,
상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 5-100 mM 구연산나트륨 또는 구연산칼륨, 2-20 중량% 수크로오스, 및 0 초과 0.020 이하 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 5.5-8.5인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 제 30항에 있어서, 상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 10-30 mM 구연산나트륨 또는 구연산칼륨, 2-10 중량% 수크로오스, 및 0 초과 0.020 이하 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 6.5-8.0인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 제 31항에 있어서, 상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 20 mM 구연산나트륨 또는 구연산칼륨, 5 중량% 수크로오스, 및 0.016 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 7.5인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile)의 톡소이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제(excipients)를 포함하는 조성물로서,
상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡소이드의 열 안정성을 증가시키거나 톡소이드의 응집(aggregation)을 감소 또는 지연시키고,
상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 5-100 mM 인산나트륨 또는 인산칼륨, 2-20 중량% 수크로오스, 및 0 초과 0.020 이하 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 5.5-8.5인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 제 33항에 있어서, 상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 10-30 mM 인산나트륨 또는 인산칼륨, 2-10 중량% 수크로오스, 및 0 초과 0.020 이하 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 6.5-8.0인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile)의 톡소이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제(excipients)를 포함하는 조성물로서,
상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡소이드의 열 안정성을 증가시키거나 톡소이드의 응집(aggregation)을 감소 또는 지연시키고,
상기 조성물은 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 A 및 B, 20 mM 인산나트륨 또는 인산칼륨, 5 중량% 수크로오스, 및 0.016 중량% 포름알데히드를 포함하고, pH 7.5인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile)의 톡신 또는 톡소이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제(excipients)를 포함하는 조성물로서,
상기 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 없는 조성물에 비해, 톡신 또는 톡소이드의 열 안정성을 증가시키거나 톡신 또는 톡소이드의 응집(aggregation)을 감소 또는 지연시키고,
상기 조성물은 하나 이상의 부형제로서 솔비톨, 덱스트로스 및 트윈 80을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US97249607P | 2007-09-14 | 2007-09-14 | |
| US60/972,496 | 2007-09-14 | ||
| PCT/US2008/010767 WO2009035707A1 (en) | 2007-09-14 | 2008-09-15 | Pharmaceutical compositions containing clostridium difficile toxoids a and b |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020157036693A Division KR20160005378A (ko) | 2007-09-14 | 2008-09-15 | 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20100075912A KR20100075912A (ko) | 2010-07-05 |
| KR101679812B1 true KR101679812B1 (ko) | 2016-11-28 |
Family
ID=40452372
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020107007994A KR101679812B1 (ko) | 2007-09-14 | 2008-09-15 | 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 |
| KR1020157036693A KR20160005378A (ko) | 2007-09-14 | 2008-09-15 | 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020157036693A KR20160005378A (ko) | 2007-09-14 | 2008-09-15 | 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9320790B2 (ko) |
| EP (2) | EP2198007B1 (ko) |
| JP (3) | JP5503543B2 (ko) |
| KR (2) | KR101679812B1 (ko) |
| CN (2) | CN101855336B (ko) |
| AU (1) | AU2008299885C1 (ko) |
| BR (1) | BRPI0816790A8 (ko) |
| CA (1) | CA2699435A1 (ko) |
| CY (1) | CY1119979T1 (ko) |
| DK (1) | DK2198007T3 (ko) |
| ES (1) | ES2657485T3 (ko) |
| HR (1) | HRP20180054T1 (ko) |
| HU (1) | HUE037932T2 (ko) |
| IL (1) | IL204366A (ko) |
| MX (1) | MX2010002815A (ko) |
| NO (1) | NO2198007T3 (ko) |
| PL (1) | PL2198007T3 (ko) |
| PT (1) | PT2198007T (ko) |
| RU (1) | RU2550271C2 (ko) |
| SI (1) | SI2198007T1 (ko) |
| WO (1) | WO2009035707A1 (ko) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SI2198007T1 (en) | 2007-09-14 | 2018-04-30 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Pharmaceutical compositions containing Clostridium difficile A and B toxoids |
| BR112014004896B1 (pt) | 2010-09-03 | 2023-02-14 | Valneva Usa, Inc. | Polipepttdeo isolado de proteínas de toxina a e toxina b de c. difficile e usos do mesmo |
| GB201105981D0 (en) * | 2011-04-08 | 2011-05-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel process |
| PE20141029A1 (es) * | 2011-04-22 | 2014-09-04 | Wyeth Llc | Composiciones relacionadas con una toxina de clostridium difficile mutante y sus metodos |
| KR101135486B1 (ko) * | 2011-05-25 | 2012-04-13 | 함종욱 | 보툴리눔 에이형 독소의 액상제품 |
| BR122016023101B1 (pt) | 2012-10-21 | 2022-03-22 | Pfizer Inc | Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile |
| CN104903349B (zh) | 2012-11-08 | 2018-10-19 | 十一生物治疗股份有限公司 | Il-6拮抗剂及其应用 |
| JP6290918B2 (ja) | 2012-12-05 | 2018-03-07 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物 |
| AP2015008733A0 (en) | 2013-03-14 | 2015-09-30 | Takeda Vaccines Inc | Compositions and methods for live, attenuated alphavirus formulations |
| JP2016519671A (ja) | 2013-03-15 | 2016-07-07 | サノフィ パストゥール インコーポレイテッド | トキソイド、組成物および関連方法 |
| AU2014228956A1 (en) | 2013-03-15 | 2015-10-08 | Sanofi Pasteur, Inc. | Toxoid, compositions and related methods |
| CA2915279A1 (en) | 2013-06-14 | 2014-12-18 | Sanofi Pasteur Inc. | Compositions and methods of immunizing against c. difficile |
| WO2014204303A2 (en) | 2013-06-17 | 2014-12-24 | De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws, Ministerie Van Volksgezondheid, Welzijn En Sport | Methods for the prevention of aggregation of viral components |
| US9930893B2 (en) * | 2014-02-10 | 2018-04-03 | The Johns Hopkins University | Inhibitors of DXP synthase and methods of use thereof |
| US11142571B2 (en) | 2014-11-07 | 2021-10-12 | Sesen Bio, Inc. | IL-6 antibodies |
| KR20180011784A (ko) | 2015-05-15 | 2018-02-02 | 사노피 파스퇴르 인코포레이티드 | 클로스트리듐 디피실에 대한 면역화 방법 |
| BE1023343B1 (nl) * | 2015-05-20 | 2017-02-09 | Mycartis Nv | Opslagbuffer |
| CA3012350A1 (en) * | 2016-02-23 | 2017-08-31 | Sesen Bio, Inc. | Il-6 antagonist formulations and uses thereof |
| JP7217700B2 (ja) | 2016-09-13 | 2023-02-03 | アラーガン、インコーポレイテッド | 安定化非タンパク質クロストリジウム毒素組成物 |
| KR20210010996A (ko) * | 2018-05-21 | 2021-01-29 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 유리 용기에 봉입된 동결건조 제제 |
| WO2021255690A2 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions against clostridioides (clostridium) difficile and methods thereof |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4879218A (en) * | 1982-09-13 | 1989-11-07 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Antibody for C.difficile |
| US5736139A (en) * | 1989-10-31 | 1998-04-07 | Ochidian Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of Clostridium difficile induced disease |
| JPH03193735A (ja) | 1989-12-22 | 1991-08-23 | Shionogi & Co Ltd | グリコペプチド系抗生物質の安定化組成物 |
| EP0610295A1 (en) * | 1991-10-16 | 1994-08-17 | Schering Corporation | Lipophilic oligosaccharide antibiotic salt compositions |
| WO1994000481A1 (en) | 1992-06-23 | 1994-01-06 | Associated Synapse Biologics | Pharmaceutical composition containing botulinum b complex |
| US5562909A (en) | 1993-07-12 | 1996-10-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Phosphazene polyelectrolytes as immunoadjuvants |
| US5902565A (en) * | 1993-12-24 | 1999-05-11 | Csl Limited | Spray dried vaccine preparation comprising aluminium adsorbed immunogens |
| US5512547A (en) * | 1994-10-13 | 1996-04-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation |
| JPH08333277A (ja) | 1995-06-05 | 1996-12-17 | Hoechst Japan Ltd | ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 |
| JPH11510793A (ja) * | 1995-07-07 | 1999-09-21 | オラバックス インク． | 胃腸病に対する鼻腔内ワクチン接種 |
| US5932223A (en) | 1996-09-26 | 1999-08-03 | Merck & Co., Inc. | Rotavirus vaccine formulations |
| PT892054E (pt) * | 1997-06-20 | 2007-02-28 | Intervet Int Bv | Vacina de clostridium perfringens |
| US6969520B2 (en) * | 1997-10-20 | 2005-11-29 | Acambis Inc. | Active immunization against clostridium difficile disease |
| EP1568378B1 (en) * | 1997-10-20 | 2016-03-16 | Sanofi Pasteur Biologics, LLC | Immunization against Clostridium difficile disease |
| AU754270B2 (en) * | 1997-10-20 | 2002-11-07 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Passive immunization against clostridium difficile disease |
| US6013635A (en) * | 1998-05-28 | 2000-01-11 | Synsorb Biotech, Inc. | Treatment of C. difficile toxin B associated conditions |
| JP2000117967A (ja) * | 1998-10-16 | 2000-04-25 | Fuji Photo Film Co Ltd | インクジェット記録方法 |
| FR2791895B1 (fr) | 1999-03-23 | 2001-06-15 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide |
| KR100922031B1 (ko) * | 1999-04-19 | 2009-10-19 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
| US6599715B1 (en) * | 1999-05-12 | 2003-07-29 | The Regents Of The University Of California | Real time viability detection of bacterial spores |
| US7780967B2 (en) * | 2000-02-08 | 2010-08-24 | Allergan, Inc. | Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| EP3192528A1 (en) | 2002-02-14 | 2017-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Formulation of anti-il6r antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer |
| WO2003088946A1 (en) * | 2002-04-19 | 2003-10-30 | The Regents Of The University Of Michigan | Polymer compositions that stabilize and control the release of formaldehyde-treated vaccine antigens |
| US20040235139A1 (en) * | 2002-12-23 | 2004-11-25 | Demain Arnold L. | Clostridium difficile culture and toxin production methods |
| DE10333317A1 (de) * | 2003-07-22 | 2005-02-17 | Biotecon Therapeutics Gmbh | Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA) |
| JP4671864B2 (ja) | 2003-10-09 | 2011-04-20 | 中外製薬株式会社 | タンパク質溶液の安定化方法 |
| CA2799413A1 (en) * | 2004-07-26 | 2006-02-23 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Therapeutic composition with a botulinum neurotoxin |
| EP1802349A1 (en) * | 2004-10-13 | 2007-07-04 | Ilypsa, Inc. | Pharmaceutical compositions comprising a toxin-binding oligosaccharide and a polymeric particle |
| FR2881139A1 (fr) * | 2005-01-26 | 2006-07-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Composition pour la lyophilisation de proteines |
| BRPI0613001B8 (pt) | 2005-10-06 | 2021-05-25 | Allergan Inc | composições farmacêuticas de toxina clostrídica estabilizada por uma não-proteína |
| US8137677B2 (en) | 2005-10-06 | 2012-03-20 | Allergan, Inc. | Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions |
| US20090324647A1 (en) * | 2005-10-11 | 2009-12-31 | Borodic Gary E | Albumin-Free Botulinum Toxin Based Pharmaceutical Compositions Containing a Hyaluronidase and Methods of Use |
| WO2008057550A2 (en) | 2006-11-07 | 2008-05-15 | Sanofi Pasteur Biologics Co. | Stabilization of vaccines by lyophilization |
| SI2198007T1 (en) | 2007-09-14 | 2018-04-30 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Pharmaceutical compositions containing Clostridium difficile A and B toxoids |
| RU2011126602A (ru) | 2008-12-03 | 2013-01-10 | Берингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх | Способ получения вакцин |
-
2008
- 2008-09-15 SI SI200831906T patent/SI2198007T1/en unknown
- 2008-09-15 PT PT88302104T patent/PT2198007T/pt unknown
- 2008-09-15 RU RU2010114730/10A patent/RU2550271C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-09-15 BR BRPI0816790A patent/BRPI0816790A8/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-09-15 CA CA2699435A patent/CA2699435A1/en not_active Abandoned
- 2008-09-15 EP EP08830210.4A patent/EP2198007B1/en active Active
- 2008-09-15 US US12/677,864 patent/US9320790B2/en active Active
- 2008-09-15 HU HUE08830210A patent/HUE037932T2/hu unknown
- 2008-09-15 DK DK08830210.4T patent/DK2198007T3/en active
- 2008-09-15 PL PL08830210T patent/PL2198007T3/pl unknown
- 2008-09-15 MX MX2010002815A patent/MX2010002815A/es unknown
- 2008-09-15 EP EP16174817.3A patent/EP3124044A1/en active Pending
- 2008-09-15 WO PCT/US2008/010767 patent/WO2009035707A1/en active Application Filing
- 2008-09-15 CN CN200880116603.0A patent/CN101855336B/zh active Active
- 2008-09-15 AU AU2008299885A patent/AU2008299885C1/en not_active Ceased
- 2008-09-15 NO NO08830210A patent/NO2198007T3/no unknown
- 2008-09-15 ES ES08830210.4T patent/ES2657485T3/es active Active
- 2008-09-15 KR KR1020107007994A patent/KR101679812B1/ko active IP Right Grant
- 2008-09-15 KR KR1020157036693A patent/KR20160005378A/ko active IP Right Grant
- 2008-09-15 JP JP2010524889A patent/JP5503543B2/ja active Active
- 2008-09-15 CN CN201610227574.1A patent/CN106039299A/zh active Pending
-
2010
- 2010-03-09 IL IL204366A patent/IL204366A/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-11-22 JP JP2013241821A patent/JP6258674B2/ja active Active
-
2016
- 2016-03-29 US US15/083,428 patent/US9687541B2/en active Active
- 2016-10-31 JP JP2016212540A patent/JP2017052773A/ja active Pending
-
2017
- 2017-06-26 US US15/632,480 patent/US10639362B2/en active Active
-
2018
- 2018-01-11 HR HRP20180054TT patent/HRP20180054T1/hr unknown
- 2018-01-23 CY CY20181100084T patent/CY1119979T1/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| International Journal of Pharmaceutics, Vol. 185, pages 129-188 (1999)* |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101679812B1 (ko) | 클로스트리듐 디피실리 톡소이드 ａ 및 ｂ를 포함하는 약학적 조성물 | |
| JP6097478B2 (ja) | 黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）抗原の安定な免疫原性組成物 | |
| UA124259C2 (uk) | Фармацевтичне одержання стабільного анти-pd-1 антитіла та його застосування в медицині | |
| US20210379186A1 (en) | Additives for protein formulations to improve thermal stability | |
| Maa et al. | Optimization of an alum-adsorbed vaccine powder formulation for epidermal powder immunization | |
| Mensch et al. | Enabling Lyophilized Pneumococcal Conjugate Vaccines Through Formulation Design and Excipient Selection Suitable for A Multivalent Adjuvanted Vaccine | |
| AU2015201233B2 (en) | Pharmaceutical compositions containing clostridium difficile toxoids a and b | |
| WO2019021957A1 (ja) | 点鼻用乾燥粉末医薬組成物 | |
| US20230000774A1 (en) | Methods and compositions produced thereby | |
| He et al. | Single immunization of non-adjuvanted recombinant TTFC-mi3 nanoparticle vaccine elicited a rapid and potent protective immunity against tetanus | |
| Mukti et al. | Recombinant Hepatitis B Dry Vaccine Formulation and In Vitro and In Vivo Potency Testing | |
| WO2024100130A1 (en) | Thermostable vaccin formulations and process for preparing the same | |
| Hassett | Ultra stable glassy state vaccines containing adjuvants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| A107 | Divisional application of patent | ||
| AMND | Amendment | ||
| J201 | Request for trial against refusal decision | ||
| E90F | Notification of reason for final refusal | ||
| B701 | Decision to grant | ||
| GRNT | Written decision to grant |