KR101679438B1 - Optical method for the detection of alzheimer's disease - Google Patents
Optical method for the detection of alzheimer's disease Download PDFInfo
- Publication number
- KR101679438B1 KR101679438B1 KR1020117006156A KR20117006156A KR101679438B1 KR 101679438 B1 KR101679438 B1 KR 101679438B1 KR 1020117006156 A KR1020117006156 A KR 1020117006156A KR 20117006156 A KR20117006156 A KR 20117006156A KR 101679438 B1 KR101679438 B1 KR 101679438B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- beta
- retina
- stained
- plaques
- peptide
- Prior art date
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 title claims description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract description 12
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 15
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 claims abstract 6
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 claims abstract 4
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 claims description 125
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 claims description 112
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 claims description 56
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 claims description 56
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 claims description 56
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 31
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 26
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 20
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 16
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 11
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 claims description 11
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 claims description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 8
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 claims description 7
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 claims description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 5
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 claims description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims 2
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 claims 2
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 claims 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 abstract description 49
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 6
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 82
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 46
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 32
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 31
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 28
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 18
- 238000000701 chemical imaging Methods 0.000 description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 10
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 210000003994 retinal ganglion cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 5
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 5
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 238000003709 image segmentation Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 210000003733 optic disk Anatomy 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 3
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 3
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 3
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 3
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 3
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 3
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 3
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N sudan black b Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1\N=N\C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N 0.000 description 3
- ZQAQXZBSGZUUNL-BJUDXGSMSA-N 2-[4-(methylamino)phenyl]-1,3-benzothiazol-6-ol Chemical compound C1=CC(N[11CH3])=CC=C1C1=NC2=CC=C(O)C=C2S1 ZQAQXZBSGZUUNL-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 2
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 101100268556 Mus musculus App gene Proteins 0.000 description 2
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 2
- 102000015499 Presenilins Human genes 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000007792 alzheimer disease pathology Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 210000004155 blood-retinal barrier Anatomy 0.000 description 2
- 230000004378 blood-retinal barrier Effects 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 2
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- JMTCEFUSRHYJBF-DDJPMISGSA-N 149635-73-4 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JMTCEFUSRHYJBF-DDJPMISGSA-N 0.000 description 1
- ADFKTOIGMCFNTG-UHFFFAOYSA-N 2-phenylpyridine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ADFKTOIGMCFNTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000030767 Autoimmune encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007082 Aβ accumulation Effects 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027146 Melanoderma Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000823042 Mus musculus Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 1
- 101100323330 Mus musculus Ap1g1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061323 Optic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 101150089079 PS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229940122985 Peptide agonist Drugs 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006933 amyloid-beta aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 239000012792 core layer Substances 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002592 gangliocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229940048282 ketamine 100 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000142 low-dose toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 229940100435 mydral Drugs 0.000 description 1
- 230000004379 myopia Effects 0.000 description 1
- 208000001491 myopia Diseases 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000007512 neuronal protection Effects 0.000 description 1
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940054534 ophthalmic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 description 1
- 208000020911 optic nerve disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108091008695 photoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004256 retinal image Effects 0.000 description 1
- 210000000844 retinal pigment epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229940026157 tropicamide ophthalmic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 229940110150 xylazine 20 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/006—Biological staining of tissues in vivo, e.g. methylene blue or toluidine blue O administered in the buccal area to detect epithelial cancer cells, dyes used for delineating tissues during surgery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
- A61B3/0016—Operational features thereof
- A61B3/0025—Operational features thereof characterised by electronic signal processing, e.g. eye models
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
- A61B3/10—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions
- A61B3/102—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions for optical coherence tomography [OCT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
- A61B3/10—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions
- A61B3/14—Arrangements specially adapted for eye photography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/40—Detecting, measuring or recording for evaluating the nervous system
- A61B5/4076—Diagnosing or monitoring particular conditions of the nervous system
- A61B5/4088—Diagnosing of monitoring cognitive diseases, e.g. Alzheimer, prion diseases or dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/72—Signal processing specially adapted for physiological signals or for diagnostic purposes
- A61B5/7235—Details of waveform analysis
- A61B5/7264—Classification of physiological signals or data, e.g. using neural networks, statistical classifiers, expert systems or fuzzy systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B6/00—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment
- A61B6/02—Arrangements for diagnosis sequentially in different planes; Stereoscopic radiation diagnosis
- A61B6/03—Computed tomography [CT]
- A61B6/037—Emission tomography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B6/00—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment
- A61B6/50—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment specially adapted for specific body parts; specially adapted for specific clinical applications
- A61B6/506—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment specially adapted for specific body parts; specially adapted for specific clinical applications for diagnosis of nerves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Abstract
본 발명의 대상은 알츠하이머병 (AD)에 대해 특이적인 초기 병리학적 이벤트, 예컨대 아밀로이드 플라크의 발달, 양 및 위치를 모니터링하기 위한 비-칩습성 광학 영상화 방법에 관한 것이다. 이같은 이벤트를 모니터링하는 능력은, 특히, AD 진단, 예후 및 가능한 치료법의 평가를 위한 기초를 제공한다. 또한, 본 발명의 대상은 AD 및 AD와 관련된 망막 질병을 치료하기 위한 신규 방법을 소개한다. 살아 있는 뇌에서의 Aβ-플라크 검출은, 특히 고해상도에서, 매우 제한된다: 따라서, 본 발명은 뇌-유래 조직에 대한 대안으로서 눈에 초점을 맞추는 연구를 기초로 하고, 이는 직접적으로, 반복적으로 및 비-침습성으로 영상화될 수 있다. An object of the present invention is a non-chip haptic optical imaging method for monitoring the development, quantity and location of an amyloid plaque, such as an early pathological event specific for Alzheimer's disease (AD). The ability to monitor such events provides a basis for, among other things, evaluation of AD diagnosis, prognosis and possible treatments. The subject of the present invention also introduces novel methods for treating retinopathy associated with AD and AD. Aβ-plaque detection in living brain is very limited, especially at high resolution: Therefore, the present invention is based on an eye-focused study as an alternative to brain-derived tissue, which is directly, repeatedly and Can be imaged non-invasively.
Description
본 발명의 대상은 알츠하이머병에 대해 특이적인 초기 병리학적 이벤트를 비-침습성으로 모니터링하는 방법에 관한 것이고, 따라서 AD의 진단, 치료, 예후 및 치료에 대한 응답 평가를 위한 방법 및 시스템을 포함한다.A subject of the present invention is a method for non-invasively monitoring an early pathological event specific for Alzheimer ' s disease and thus includes a method and system for assessing response to diagnosis, treatment, prognosis and treatment of AD.
본원의 모든 간행물은 각각의 개별적인 간행물 또는 특허 출원이 참고로 포함되는 것으로 명확하게, 그리고 개별적으로 지시된 것과 동일한 정도로 참고로 포함된다. 하기의 설명은 본 발명을 이해하는데 유용할 수 있는 정보를 포함한다. 이는 본원에서 제공된 임의의 정보가 종래 기술이거나 본원에서 청구되는 발명에 관련된다는 것 또는 구체적으로 또는 암시적으로 언급된 임의의 간행물이 종래 기술이라는 것을 시인하지 않는다.All publications are herein incorporated by reference to the same extent as if each individual publication or patent application was specifically and individually indicated to be incorporated by reference. The following description includes information that may be useful in understanding the present invention. This does not imply that any information provided herein is prior art or related to the claimed invention or any publication specifically or implicitly mentioned is prior art.
알츠하이머병 (AD)은 통상적이고 파괴적인 연령-의존적 신경변성 질환이다. AD 뇌 병리학은 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)의 단백질분해성 생성물인 아밀로이드-β 펩티드 (Aβ)의 전형적인 축적을 특징으로 하고, 이는 Aβ 플라크로 명명된 세포외 응집물을 형성한다. 이러한 플라크는 파괴된 세포 활성 및 뇌에서의 소통에 기여하여, 신경독성 염증 및 뉴런 사망에 이르는 것으로 생각된다 [2,3]. 살아 있는 대상체에서 병리학적 프로세스의 비-침습성 모니터링을 허용하는 분자 영상화는 질환 및 약물 효과의 검출 및 이해를 강화하는 잠재력을 지닌다. 따라서, 살아 있는 AD 환자 및 동물 모델의 두개골을 지나서 아밀로이드 플라크를 비-침습성으로 검출하는 것을 가능하게 하는 도구를 개발하는 것이 주로 시도되었다 [4-9]; 그러나, 아밀로이드 플라크의 비-침습성 모니터링은 여전히 임상적으로 어렵고, 고해상도에서의 이용가능성이 제한된다 [10-12]. 두개골 창을 통해 마우스 뇌 내의 Aβ 플라크를 영상화하기 위해 다광자 현미경검사법을 사용하여 최근에 실연된 바와 같이, 광학 영상화는 생체내 영상화를 위한 강력하고, 고해상도이며 특이적인 도구를 구성한다 [13]. 본 발명의 대상은 광학적 양식에 의해 AD 환자의 망막을 영상화하기 위한 인간에서의 별법적이고 비-침습성인 접근법을 제시하고, 단 Aβ 플라크가 이러한 환자의 망막에서 발달되고 뇌에서의 것들과 유사한 성질을 공유한다.Alzheimer's disease (AD) is a common and destructive age-dependent neurodegenerative disease. AD brain pathology is characterized by the typical accumulation of amyloid-beta peptide (A [beta]), a proteolytic product of amyloid precursor protein (APP), which forms an extracellular aggregate named A [beta] plaque. These plaques are believed to contribute to destructed cellular activity and communication in the brain leading to neurotoxic inflammation and neuronal death [2,3]. Molecular imaging, which allows non-invasive monitoring of pathological processes in living subjects, has the potential to enhance the detection and understanding of disease and drug effects. Thus, it has been attempted to develop tools that enable non-invasive detection of amyloid plaques across the skull of living AD patients and animal models [4-9]; Non-invasive monitoring of amyloid plaques is still clinically difficult, however, and its availability at high resolutions is limited [10-12]. As recently demonstrated using multiphoton microscopy to image Aβ plaques in the mouse brain through the skull window, optical imaging constitutes a powerful, high-resolution, and specific tool for in vivo imaging [13]. The subject of the present invention suggests an alternative and non-invasive approach in humans for imaging retinas in AD patients by optical means, with the proviso that A [beta] plaques are developed in these patients' retinas and have properties similar to those in the brain .
APP는 중추 신경계 (CNS)의 증식물인 망막 신경절 세포 (RGC)에서 광범위하게 발현되고, 시각 신경을 통해 축삭 형질막 및 신경 말단으로 수송된다 [14]. 망막에서의 플라크 형성은, 특히 2개의 관련된 신경변성 장애에서, 최근 연구 중이다: 연령-관련 황반 변성 (AMD) 및 녹내장 [50-53]. Aβ-플라크가 초기 단계 또는 후기 단계의 AD 환자의 망막에서 발견되는지 여부는 불명확하였다. 녹내장 및 AMD 환자 및 이의 설치류 모델의 망막 내의 Aβ-플라크의 존재가 과거에 입증되었다. 예를 들어, RGC 층에서의 Aβ 침착이 녹내장 환자에서 보고되었다 [50, 51]. 녹내장의 실험 모델에서, RGC의 세포자멸사가 Aβ-펩티드의 축적과 관련되었고, 이의 형성을 표적으로 하는 작용제가 신경보호 활성을 발휘하는 것으로 나타났다 [52]. AMD 환자에서, Aβ 침착물이 변성 중인 광수용체 및 망막 색소 상피 세포의 위치와 상호관련된 드루젠(drusen)에서 발견되었다 [53].APP is widely expressed in the retinal ganglion cell (RGC), the proliferation of the central nervous system (CNS), and transported through the optic nerve to the axon plasma membrane and nerve endings [14]. Plaque formation in the retina is under investigation, especially in two related neurodegenerative disorders: age-related macular degeneration (AMD) and glaucoma [50-53]. Whether A [beta] plaques were found in the retina of AD patients at early or late stages was unclear. The presence of A [beta] plaques in the retina of glaucoma and AMD patients and their rodent models has been demonstrated in the past. For example, Aβ deposition in the RGC layer has been reported in patients with glaucoma [50, 51]. In an experimental model of glaucoma, apoptosis of RGC has been associated with the accumulation of A [beta] -peptides, and agents that target its formation have been shown to exert neuroprotective activity [52]. In AMD patients, A [beta] deposits were found in drusen correlated with the location of the photoreceptors and retinal pigment epithelial cells being denatured [53].
AD의 드로소필라(Drosophila) 트랜스제닉(transgenic) 모델에서, 돌연변이된 인간 APP 및 프레세닐린 (PS) 유전자의 표적화된 발현을 기초로, Aβ 면역반응성이 겹눈에서, 그리고 망막 광수용체 변성과 관련하여 발견되었다 [15]. 최근의 연구에서, 질환의 진행된 단계에 있는 AD 트랜스제닉 마우스 (10개월령 초과)에서 망막 신경 섬유층 (NFL) 및 신경절 세포층 (GCL) 내의 Aβ 침착물이 실연되었다. Aβ 침착물이 RGC의 신경변성 및 미세아교 활성화와 추가로 상호관련되었다 [16]. In the Drosophila transgenic model of AD, based on the targeted expression of mutated human APP and presenilin (PS) genes, A [beta] immunoreactivity was found to be related to the expression of the A [beta] And [15]. In a recent study, A [beta] deposits within the retinal nerve fiber layer (NFL) and ganglion cell layer (GCL) were demonstrated in AD transgenic mice (over 10 months of age) at an advanced stage of disease. A [beta] deposits were further correlated with neurodegeneration and microglia activation of RGC [16].
이러한 고무적인 연구에도 불구하고, AD의 진단, 예후 및 치료를 위한 시스템 및 방법이 당업계에서 여전히 요구된다. 본 발명의 대상은 AD 환자의 사후 안구의 망막 내에서 Aβ 플라크의 존재를 발견함으로써 이러한 요구를 충족시킨다. 돌연변이된 형태의 인간 APP 및 PS1 유전자를 발현하는 마우스 (APPswe/PS1dE9, 본원에서 AD-Tg 마우스로 지칭됨)를 사용함으로써, 본 발명의 대상은 뇌에서 명백해지기 전에 망막에서의 Aβ 플라크의 초기 형성을 개시하는 증거를 또한 제공한다. 또한, 본 발명의 주제에서 AD-Tg 마우스의 마우스 뇌 및 망막에서 Aβ 플라크를 감소시키는데 효과적인, 수지상 세포 상에 로딩된 미엘린-유래 펩티드의 약한 효능제 [17, 18]를 사용하는 면역-기반 치료법이 확인된다. 마지막으로, 본 발명의 주제에서, Aβ 플라크에 결합하여 이를 표지하는 천연 화합물 [19, 20]인 쿠르쿠민 (디페룰로일메탄)의 살아 있는 동물 내로의 전신 주사가 망막 내의 Aβ 플라크의 특이적인 비-침습성 고해상도 가시화를 허용한다는 것이 실연되었다. 본 발명의 주제는, 최초로, Aβ 플라크가 개수 및 위치에 의해 검출되게 하고, AD 동물의 망막에서 실시간으로 반복적으로 계수 및 모니터링되도록 하는 방법을 교시한다.Despite this encouraging research, systems and methods for diagnosis, prognosis, and treatment of AD are still required in the art. The subject of the present invention meets this need by finding the presence of A [beta] plaques in the posterior ocular retinas of AD patients. By using mutant forms of human APP and a mouse expressing the PS1 gene (APPswe / PS1dE9, referred to herein as AD-Tg mice), the subject of the present invention is able to detect the initial formation of A [beta] plaques in the retina ≪ / RTI > Also, in the subject of the present invention, immunological-based therapies using weak agonists of myelin-derived peptides loaded on dendritic cells [17,18], which are effective in reducing A [beta] plaques in the mouse brain and retina of AD- / RTI > Finally, in the subject of the present invention, the systemic injection of a natural compound [19, 20], which binds to and labels A [beta] plaques into living animals in a living animal, - It has been demonstrated that it allows invasive high resolution visualization. The subject of the present invention teaches, for the first time, how to allow A [beta] plaques to be detected by number and position, and to be repeatedly counted and monitored in real time in the retina of AD animals.
예시적인 실시양태들이 참조 도면들에서 설명된다. 본원에 개시된 실시양태 및 도면은 제한적이기보다는 설명적인 것으로 간주되도록 의도된다.
도 1은 쿠르쿠민에 의해 가시화된 AD-Tg 마우스의 망막 내의 망막 Aβ 침착을 도해한다. 도 1a - 1f는 생체 외에서 항-인간 Aβ 항체 및 쿠르쿠민으로 염색된 9개월령 AD-Tg 마우스 (도 1a - 1e) 및 비-Tg 마우스 (wt) (도 1f)로부터의 뇌 냉동절편의 영상을 도해하고, 이는 양쪽 검출 방법에 의한 Aβ 플라크의 공동-국소화를 가리킨다. 도 1d 및 1e는 각각의 채널에 대해 제시된 플라크 염색 패턴의 더 높은 배율의 영상을 도해한다. 도 1f는 비-Tg (wt) 마우스에서 이중-양성 항-인간 Aβ플라크 및 쿠르쿠민에 대한 증거가 없음을 나타낸다. 세포핵이 DAPI (청색)으로 표지되었다. 축척 막대 = 100 ㎛. 도 1g - 1j는 생체 외에서 항-Aβ 항체 및 쿠르쿠민으로 염색된 10개월령 AD-Tg 마우스 (n=27) 및 비-Tg (wt) 마우스 (n=18)로부터의 망막 온조직 표본 (whole-mount)의 대표적인 영상이다. Aβ 플라크의 형성 (적색 및 녹색 채널이 중첩된 황색 반점)이 여러 상이한 망막 층에서 실연된다: 도 1g는 IPL (내망상층)을 도해하고, 도 1h는 INL (내핵층)/OPL (외망상층)을 도해하며, 도 1i는 ONL (외핵층)을 도해한다. 도 1J는 비-Tg (wt) 마우스에서 Aβ 플라크가 본질적으로 부재하였음을 나타낸다. (도 1g 및 1j, 아랫줄). 개별적인 채널들에 대한 더 높은 배율의 영상에서 양쪽 절차로의 플라크-염색 패턴이 실연된다. 축척 막대 = 5 ㎛. 도 1k - 1n은 생체 내에서 쿠르쿠민으로 염색된 후, 생체 외에서 항-인간 Aβ 항체 및 DAPI로 염색된 전체 눈 시상 냉동절편을 도해한다. 도 1k - 1m에서, Aβ 플라크가 10개월령 AD-Tg에서 대부분의 망막 층 및 맥락막에서 검출되었다. 도 1n에서, 비-Tg (wt) 마우스의 망막 및 맥락막에서 Aβ 플라크가 검출가능하지 않았다. 축척 막대 = 20 ㎛.
도 2는 인간 알츠하이머병 환자의 망막 내의 Aβ 플라크를 도해한다. 도 2a 및 2b는 수단 블랙(Sudan Black) B로 염색하여 비-특이적 자가형광 신호를 제거하고 나서, 쿠르쿠민으로 생체 외에서 염색된 후의 87세 AD 환자의 인간 온조직 표본 망막의 대표적인 영상이다 (쿠르쿠민으로 표지된 플라크가 백색 화살표로 지시됨). 축척 막대 = 10 ㎛. 세포핵은 DAPI (청색)로 표지된다. 도 2c 및 2d는 수단 블랙 B 염색 (수단 염색에 대해 흑색 반점)에 이어서 쿠르쿠민으로 염색된 후의 65세 AD 환자의 인간 온조직 표본 망막의 더 높은 배율의 영상을 나타낸다 (쿠르쿠민으로 표지된 플라크가 백색 화살표로 지시됨). 축척 막대 = 5 ㎛. 도 2e - 2g는 일련의 65세 내지 90세 인간 AD 환자의 망막 내의 쿠르쿠민-양성 플라크의 추가적인 예를 제공한다. 도 2h - 2j는 여러 망막 깊이 (RGC 및 IPL 포함)의 항-인간 Aβ 항체로 염색된 후 수단 블랙 B로 처리된 65세 및 87세 인간 AD 환자의 인간 온조직 표본 망막의 대표적인 영상이다. 도 2i는 망막 플라크의 더 높은 배율의 영상을 나타낸다. Aβ 플라크 형태학이 마우스 망막 및 뇌에서 발견된 것과 유사하였다. 축척 막대 = 5 ㎛. 도 2k - 2m은 이어지는 동일한 인간 망막의 쿠르쿠민으로의 염색을 나타내고, 이는 플라크가 선택적으로 인간 Aβ 항체 및 쿠르쿠민으로 공동-표지되었음을 드러냈다 (개별적인 채널들에 대한 아랫줄 영상). 도 2n은 사후 비-AD 인간 망막 온조직 표본에서의 인간 Aβ 항체 및 쿠르쿠민으로의 이중 염색을 도해하고, 이는 Aβ 플라크의 징후를 나타내지 않는다 (개별적인 채널들에 대한 아랫줄 영상). 축척 막대 = 5 ㎛.
도 3은 증상전 초기 단계에서의 마우스 망막 Aβ 플라크 형성 및 질환 진행 동안의 축적을 도해한다. 꼬리 정맥 내로의 정맥내 쿠르쿠민 주사 후, Aβ 플라크가 AD-Tg 마우스 망막 및 뇌에서 가시적이었다. 도 3a - 3n은 다양한 나이의 AD-Tg 마우스(n=18) 및 비-Tg 마우스 (wt; n=10)의 온조직 표본 망막의 대표적인 z-축 투사 영상이다; 도 3a - 3d는 2.5개월령 AD-Tg 마우스를 도해하고, 이때 도 3a는 망막 내의 플라크의 존재를 나타내고, 도 3b는 동일한 위치에서의 생체 외에서 특이적 항-인간 항체를 사용한 Aβ 플라크 염색의 확인을 나타낸다 (황색의 쿠르쿠민 및 Aβ 항체의 공동-국소화). 축척 막대 =10 ㎛. 도 3c 및 3d는 뇌 해마 및 피질에서 플라크가 검출되지 않았음을 나타낸다. 축척 막대 = 100 ㎛. 도 3e - 3h는 5개월령 AD-Tg 마우스를 도해하고, 이때 도 3e는 망막 내의 플라크의 존재를 도해하고, 도 3f는 이어지는 생체 외에서의 특이적 Aβ 항체 염색을 도해한다. 축척 막대 =10 ㎛. 도 3g 및 3h는 뇌에서의 플라크의 검출을 나타낸다. 축척 막대 = 50 ㎛. 도 3i - 3k는 9개월령 AD-Tg 마우스를 도해하고, 이때 도 3i는 망막 내의 다중 플라크를 나타내고, 도 3j 및 3k는 뇌 내의 플라크를 나타낸다. 축척 막대 (i) = 10 ㎛ 및 (j,k) = 50 ㎛. 도 3l - 3n은 17개월령 AD-Tg 마우스를 도해하고, 이때 도 3l은 망막 내의 수많은 플라크를 나타내고, 도 3m 및 3n은 뇌 내의 플라크를 나타낸다. 축척 막대 (i) = 10 ㎛ 및 (m,n) =100 ㎛. 도 3o - 3q는 9개월령 비-Tg (wt) 마우스를 도해하고, 이때 도 3o는 망막 내의 플라크를 나타내지 않았고, 도 3p 및 3q는 뇌 내의 플라크를 나타내지 않았다. 축척 막대 (o) = 10 ㎛ 및 (p,q) =100 ㎛.
도 4는 수지상세포-기반 백신접종 후의 AD-Tg 마우스의 망막 내의 감소된 Aβ 플라크를 도해한다. 도 4a - 4g는 10개월령 마우스로부터의 온조직 표본 망막의 대표적인 z-축 투사 영상이고, 도 4a - 4c는 PBS-처리 AD-Tg 마우스 대조군을 나타내고, 도 4d - 4f는 백신접종된 AD-Tg 마우스를 나타내며, 도 4g는 비-Tg (wt) 마우스를 나타낸다 (생체 외에서 쿠르쿠민 및 항-인간 Aβ 항체로 염색됨). 도 4b 및 4c, 및 도 4e 및 4f는 망막에서의 쿠르쿠민 및 항-Aβ 항체 표지화에 대한 개별적인 채널 영상을 도해한다. 축척 막대 = 10 ㎛. 도 4h는 망막 온조직 표본 내의 플라크의 정량적 분석에 포함된 면적을 나타내는 시신경 유두 주변의 12개의 영역 (사각형 1-12로 지시됨)의 도해이다 (n= 군 당 마우스 4 마리; 마우스 당 2개의 망막). 축척 막대 = 200 ㎛. 도 4i는 PBS-처리 대조군에 비해 면역-기반 백신접종으로 처리된 AD-Tg 마우스의 망막에서 관찰된, 플라크 개수에서의 감소를 도해한다 (스 튜던트 ( Student ) t-테스트; P=0.0028). 도 4j는 대조군에 비해 백신접종된 AD-Tg 마우스의 망막에서 관찰된, 평균 플라크 면적에서의 감소를 도해한다 (스튜던트 t-테스트 P=0.0002). 도 4k는 플라크로 덮인 전체 면적에서의 유의한 감소가 면역-기반 백신접종 후 동일한 마우스의 뇌 해마 및 피질에서 또한 검출되었음을 나타낸다 (스튜던트 t-테스트 P=0.0085). 각각의 패널에서의 오차 막대는 SEM을 나타낸다.
도 5는 AD-Tg 마우스 망막 내의 쿠르쿠민-표지 플라크의 생체내 영상화를 도해한다. 도 5a - 5c는 생체 내에서 정맥내 쿠르쿠민 또는 PBS 투여 후 비-관류 AD-Tg 마우스 대 비-Tg (wt) 마우스 (10개월령)의 망막 온조직 표본으로부터 취해진 대표적인 z-축 투사 영상이다 (혈관이 적색 화살표로 지시됨). 도 5a는 쿠르쿠민의 정맥내 주사 후 AD-Tg 마우스 망막에서 Aβ 플라크가 가시적이었음 (백색 화살표로 지시됨)을 나타낸다 (n=6). 도 5b는 PBS의 정맥내 주사 후 AD-Tg 마우스 망막에서 플라크가 검출가능하지 않았음을 나타낸다 (n=5). 도 5c는 쿠르쿠민의 정맥내 주사 후 비-Tg (wt) 마우스의 망막에서 플라크가 검출가능하지 않았음을 나타낸다 (n=5). 도 5d는 AD-Tg 마우스 망막 온조직 표본의 실질 내 및 혈관 내부의 항-인간 Aβ 항체로 염색된 Aβ 플라크 (혈관 내부의 플라크가 백색 화살표로 지시됨)를 실연하는, 3개의 채널 및 시상/관상 가상 절편을 사용한 대표적인 공초점 z-축 투사 영상이다. 도 5e 및 5f는 AOTF-기반 스펙트럼 영상화 시스템으로 형광 현미경을 사용하여 포착되고, 분할 및 분류 소프트웨어에 의해 분석 및 가시화된 영상을 도해한다. 도 5e에서, Aβ 플라크 (백색) 및 혈관 (화살표로 지시됨)이 쿠르쿠민으로 생체 내에서 염색되고 단일 채널 (여기 562/40 nm; 방출 624/40 nm)에서 영상화된 망막 온조직 표본에서 가시적이었다. 도 5f는 동일한 망막 온조직 표본 및 영역 내의 쿠르쿠민으로 염색된 Aβ 플라크에 대해 특이적인 광학적 서명 (OS)을 사용한, 스펙트럼으로 분류된 영상을 도해한다. Aβ 플라크가 모조색상 (백색 화살표로 지시됨)으로 제시되고, 모든 비-플라크 조직은 녹색 모조색상이다. 축척 막대 = 10 ㎛. 도 5g - 5j는 쿠르쿠민의 단일 주사 후의 영상이고, 이때 플라크 (백색 화살표로 지시됨)가 스펙트럼으로 제어되는 광원 (546/15 nm의 파장)의 여기 후의 빛의 방출에 의해 살아 있는 AD-Tg 마우스 망막 (n=4)에서 가시적이었다. 도 5i 및 5j는 더 높은 배율의 영상이고, 이때 플라크가 시신경 유두에 가까운 영역에서 대부분 검출되었고, 평균 플라크 크기가 온조직 표본 망막 (생체외)에서 관찰된 것과 양립성이었다. 도 5k는 쿠르쿠민이 정맥내 주사된 비-Tg (wt) 마우스 (n=4)에서 플라크가 검출되지 않았음을 나타낸다. 축척 막대 (g, k) = 100 ㎛, 및 (h-j) = 10 ㎛. 23.
도 6은 본 발명의 실시양태에 따라 Aβ 플라크를 진단, 예후, 및 분석하기 위한 스펙트럼 영상화 시스템의 순서도를 도해한다.
도 7은 본 발명의 실시양태에 따라 Aβ 플라크를 진단, 예후, 및 분석하기 위한 스펙트럼 영상화 시스템의 순서도를 도해한다.
도 8은 내인성 마우스 APP 유전자로부터 유래되는 것으로 확인된 소형 망막 플라크 (대부분 직경 <1 ㎛)의 고해상도 영상을 도해한다. 영상들은 10개월령 비-Tg (wt) 마우스 망막의 영상이다.
도 9는 살아 있는 AD-Tg 마우스 및 비-Tg (wt) 마우스 망막의 영상이고, AD-Tg 망막 내의 쿠르쿠민으로 염색된 플라크 및 비-Tg (wt) 마우스에서의 쿠르쿠민으로 염색된 플라크 결핍을 나타낸다.Exemplary embodiments are set forth in the accompanying drawings. The embodiments and figures disclosed herein are intended to be regarded as illustrative rather than restrictive.
Figure 1 illustrates retinal A [beta] deposition within the retina of AD-Tg mice visualized by the curcumin. Figures 1a-1f illustrate images of brain cryosections from 9 month old AD-Tg mice (Figures 1a-1e) and non-Tg mice (wt) stained with anti-human Aβ antibody and curcumin in vitro , Indicating co-localization of A [beta] plaques by both detection methods. Figures 1d and 1e illustrate images of higher magnification of the proposed plaque staining pattern for each channel. Figure 1f shows no evidence for dual-positive anti-human A [beta] plaques and curcumin in non-Tg (wt) mice. The nucleus was labeled DAPI (blue). Scale bar = 100 탆. Figures Ig-1j show retinal tissue samples from 10 month old AD-Tg mice (n = 27) and non-Tg (wt) mice (n = 18) stained with anti- ). The formation of A [beta] plaques (yellow spots with overlapping red and green channels) is performed in several different retinal layers: Figure 1G illustrates IPL (inner network layer), Figure 1h illustrates INL (inner nuclear layer) / OPL Layer), and Fig. 1I illustrates ONL (outer core layer). Figure 1J shows that A [beta] plaques are essentially absent in non-Tg (wt) mice. (Fig. 1g and 1j, bottom row). Plaque-staining patterns in both procedures are performed at higher magnification images for individual channels. Scale bar = 5 μm. Figures 1k-1n illustrate whole eye sagittal frozen sections stained with in vivo anti-human A [beta] antibody and DAPI after staining with in vivo quercumin. In Figures 1k-1m, A [beta] plaques were detected in most retinal layers and choroids at 10 months AD-Tg. In Figure 1n, A [beta] plaques were not detectable in the retina and choroid of non-Tg (wt) mice. Scale bar = 20 탆.
Figure 2 illustrates A [beta] plaques in the retina of human Alzheimer's disease patients. Figures 2a and 2b are representative images of human warm tissue retinas in 87-year-old AD patients after staining in vitro with Sudan Black B to remove non-specific autofluorescence signals and then in vitro staining with curcumin (Curcumin Labeled with a white arrow). Scale bar = 10 μm. The nucleus is labeled with DAPI (blue). Figures 2c and 2d show higher magnification images of the human warm tissue retina of a 65 year old AD patient after staining with coumarin followed by means black B staining (black spot for instrument staining) (the plaques labeled with coumarins were white Indicated by an arrow). Scale bar = 5 μm. Figures 2e-2g provide additional examples of curcumin-positive plaques in the retina of a series of 65- to 90-year-old human AD patients. Figures 2h-2j are representative images of human warm tissue retinas of 65- and 87-year-old human AD patients treated with Sudan Black B after staining with anti-human A [beta] antibodies at various retinal depths (including RGC and IPL). Figure 2i shows images of higher magnification of the retinal plaque. Aβ plaque morphology was similar to that found in the mouse retina and brain. Scale bar = 5 μm. Figures 2k-2m show subsequent staining of the same human retina with quercumin, revealing that plaques were co-labeled selectively with human A [beta] antibody and quercumin (bottom line image for individual channels). Figure 2n illustrates double staining with human A [beta] antibody and quercumin in posterior non-AD human retinal warmed tissue samples, which do not show signs of A [beta] plaques (down-line imaging for individual channels). Scale bar = 5 μm.
Figure 3 illustrates the formation of retinal A [beta] plaques and accumulation during disease progression in the early stages of symptoms. After intravenous quercumin injection into the tail vein, the A [beta] plaque was visible in the AD-Tg mouse retina and brain. Figures 3a-3n are representative z-axis projection images of warm-tissue specimen retinas of AD-Tg mice (n = 18) and non-Tg mice (wt; n = 10) at various ages; Figures 3a-3d illustrate the 2.5-month old AD-Tg mouse, in which Figure 3a shows the presence of plaques in the retina, Figure 3b shows confirmation of A [beta] plaque staining using in vitro specific anti- (Co-localization of yellow curcumin and A [beta] antibodies). Scale bar = 10 μm. Figures 3c and 3d show that no plaque was detected in the brain hippocampus and cortex. Scale bar = 100 탆. FIGS. 3e-3h illustrate 5-month old AD-Tg mice, where FIG. 3e illustrates the presence of plaques within the retina and FIG. 3f illustrates subsequent in vitro ex vivo Aβ antibody staining. Scale bar = 10 μm. Figures 3g and 3h show the detection of plaques in the brain. Scale bar = 50 탆. Figures 3i-3k illustrate 9-month old AD-Tg mice, where Figure 3i represents multiple plaques in the retina, and Figures 3j and 3k represent plaques in the brain. Scale bar (i) = 10 占 퐉 and (j, k) = 50 占 퐉. Figures 3l-3n illustrate a 17-month old AD-Tg mouse in which 3l represent numerous plaques in the retina, and Figures 3m and 3n represent plaques in the brain. Scale rod (i) = 10 占 퐉 and (m, n) = 100 占 퐉. Figure 3o-3q illustrates a 9-month non-Tg (wt) mouse in which 3o did not show plaques in the retina, and Figures 3p and 3q did not show plaques in the brain. Scale bar (o) = 10 μm and (p, q) = 100 μm.
Figure 4 illustrates reduced A [beta] plaques in the retina of AD-Tg mice following dendritic cell-based vaccination. FIGS. 4A-4G are representative z-axis projection images of warm tissue retinas from 10 month old mice, FIGS. 4A-4C show PBS-treated AD-Tg mouse controls, Mouse, and Figure 4g shows non-Tg (wt) mice (stained in vitro with quercumin and anti-human Aβ antibodies). Figures 4b and 4c and Figures 4e and 4f illustrate individual channel imaging for the curcumin and anti-A [beta] antibody labeling in the retina. Scale bar = 10 μm. Figure 4h is an illustration of 12 areas (indicated by squares 1-12) around the optic disc nipple representing the area involved in the quantitative analysis of plaques in retinal warm tissue samples (n = 4 mice per group; 2 mice per group retina). Scale bar = 200 μm. Figure 4i has immunity compared to PBS- treated control group - illustrates the decline in the number of plaques observed in the retinas of AD-Tg-based vaccination the mice treated with ('s pendant tube (Student) t- test; P = 0.0028) . Figure 4J illustrates the reduction in mean plaque area observed in the retina of vaccinated AD-Tg mice compared to the control ( Student t-test P = 0.0002 ). Figure 4k shows that a significant reduction in the plaque-covered total area was also detected in the brain hippocampus and cortex of the same mouse after immunization-based vaccination ( Student t-test P = 0.0085 ). The error bars in each panel represent SEM.
Figure 5 illustrates the in vivo imaging of the quercumin-labeled plaque in the AD-Tg mouse retina. Figures 5a-5c are representative z-axis projection images taken from retinal tissue samples of non-perfused AD-Tg mice versus non-Tg (wt) mice (10 months of age) after intravenous quercumin or PBS administration in vivo Indicated by the red arrow). Figure 5a shows that the A [beta] plaque was visible (indicated by the white arrow) in the AD-Tg mouse retina after intravenous injection of the curcumin (n = 6). Figure 5b shows that plaque was not detectable in the AD-Tg mouse retina after intravenous injection of PBS (n = 5). Figure 5c shows that no plaque was detectable in the retina of non-Tg (wt) mice after intravenous injection of curcumin (n = 5). FIG. 5d shows three channels and a sagittal / diaphragm layer that demonstrates Aβ plaques (plaques in the blood vessels are indicated by white arrows) stained with anti-human Aβ antibodies within the parenchyma and within the blood vessels of AD-Tg mouse retinal warmed tissue specimens. A typical confocal z-axis projection image using a coronal virtual intercept. Figures 5e and 5f illustrate an image captured and analyzed and visualized by segmentation and classification software using a fluorescence microscope with an AOTF-based spectral imaging system. In Figure 5e, A [beta] plaques (white) and blood vessels (indicated by arrows) were visible in retinal tissue specimens stained in vivo with quercumin and imaged at single channel (excitation 562/40 nm; emission 624/40 nm) . Figure 5f illustrates spectra-classified images using optical signature (OS) specific for the A? Plaque stained with quercumin in the same retinal warm tissue samples and areas. The A [beta] plaque is presented in imitation color (indicated by white arrow), and all non-plaque tissue is green imitation color. Scale bar = 10 μm. Figures 5g-5j are images after a single injection of the quercumin, in which the plaque (indicated by the white arrow) is illuminated by the emission of excitation light of a spectrally controlled light source (wavelength 546/15 nm) Retina (n = 4) was visible. Figures 5i and 5j are images at higher magnification, where plaques were mostly detected in areas close to the optic nerve head and the mean plaque size was compatible with that observed in the warm-tissue retinas (in vitro). Figure 5k shows that no plaque was detected in the intravenously injected non-Tg (wt) mice (n = 4). Scale bar (g, k) = 100 占 퐉, and (hj) = 10 占 퐉. 23.
Figure 6 illustrates a flow diagram of a spectral imaging system for diagnosing, prognosing, and analyzing A [beta] plaques according to embodiments of the present invention.
Figure 7 illustrates a flow diagram of a spectral imaging system for diagnosing, prognosing, and analyzing A [beta] plaques according to embodiments of the present invention.
Figure 8 illustrates a high-resolution image of a small retinal plaque (mostly < 1 mu m in diameter) identified to be derived from an endogenous mouse APP gene. Images are images of 10-month old non-Tg (wt) mouse retinas.
Figure 9 shows images of live AD-Tg mice and non-Tg (wt) mouse retinas and shows a plaque depressed with quercumin in plaques stained with and in non-Tg (wt) mice in the AD-Tg retina .
본원에서 언급된 모든 간행물은 그 전문이 참고로 완전하게 기재된 것과 같이 포함된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 의미가 동일하다. [Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001)]; [March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 5th ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001)]; 및 [Sambrook and Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2001)]가 본 출원에서 사용된 용어들 중 다수에 대한 일반적인 지침을 당업자에게 제공한다.All publications mentioned herein are incorporated by reference in their entirety as if fully set forth. Unless otherwise defined, technical and scientific terms used herein have the same meanings as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. [Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001)]; [March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 5th ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001)]; And Sambrook and Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd ed., Cold Spring Harbor, NY 2001) provide general guidance to many of the terms used in this application.
당업자는 본 발명의 실행에서 사용될 수 있는, 본원에 기술된 것들과 유사하거나 등가인 다수의 방법 및 물질을 인지할 것이다. 실제로, 본 발명은 기술된 방법 및 물질에 어떠한 방식으로도 한정되지 않는다.Those skilled in the art will recognize numerous methods and materials similar or equivalent to those described herein, which can be used in the practice of the invention. Indeed, the invention is not limited in any way to the methods and materials described.
본원에서 사용된 "투여하는" 및/또는 "투여하다"는 제약 조성물을 환자에게 전달하기 위한 임의의 경로를 지칭한다. 전달 경로에는 비-침습성 경구 경로 (입을 통하는 경로), 국소 경로 (피부), 경점막 경로 (비강, 볼/설하, 질, 안구 및 직장) 및 흡입 경로, 뿐만 아니라 비경구 경로, 및 당업계에 공지된 기타 방법이 포함될 수 있다. 비경구는 안와내, 주입, 동맥내, 경동맥내, 피막내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐내, 척주내, 흉골내, 수막강내, 자궁내, 정맥내, 지주막하, 피막하, 피하, 경점막, 또는 경기관이 포함되는, 주사와 일반적으로 결합되는 투여 경로를 지칭한다. 비경구 경로를 통해, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태이거나, 또는 동결건조 분말로서 존재할 수 있다.As used herein, "administering" and / or "administering" refer to any route for delivering a pharmaceutical composition to a patient. The delivery route may include a non-invasive oral route (route through the mouth), a local route (skin), a light mucosal route (nasal cavity, ball / sublingual, vaginal, ocular and rectal) and a suction route, as well as a parenteral route, Other known methods may be included. The parenteral solution may be administered orally, intravenously, intraarterially, intracerebroventricularly, intracardially, intracardially, intradermally, intramuscularly, intraperitoneally, intrapulmonary, intraspinally, intrasternally, intrathecal, intrauterine, intravenous, subarachnoid, , Subcutaneous, transmucosal, or glaucoma. ≪ / RTI > Through the parenteral route, the composition can be in the form of a solution or suspension for injection or injection, or as a lyophilized powder.
본원에서 사용된 "알츠하이머병"은 변성 및 말기 인지 장애로서 확인되는, 모든 형태의 치매를 지칭한다. 알츠하이머병은 정적이거나, 독특한 포괄적인 뇌 손상의 결과이거나, 또는 진행성일 수 있어서, 정상적인 노화로부터 예상될 수 있는 것을 넘어서는 신체 손상 또는 질환으로 인한 인지 기능에서의 장기적인 쇠퇴를 초래한다.As used herein, "Alzheimer ' s disease " refers to all forms of dementia identified as metamorphic and terminal cognitive impairment. Alzheimer ' s disease may be static, or may be the result of a distinctive global brain injury, or may be progressive, leading to a long-term decline in cognitive function due to bodily injury or illness beyond what can be expected from normal aging.
본원에서 사용된 "연령-관련 황반 변성"은 망막에 대한 손상으로 인한 시야의 중심 (황반)에서의 시력 손실을 초래하는 노인에서의 의학적 상태를 지칭한다.As used herein, "age-related macular degeneration" refers to a medical condition in the elderly that results in visual loss at the center of the field of vision (macula) due to damage to the retina.
본원에서 사용된 "백내장"은 약간의 불투명에서 완전한 불투명까지 정도가 다양하고 빛의 통과를 차단하는, 눈의 수정체 또는 이의 외피에서 발달되는 혼탁을 지칭한다. 연령-관련 백내장의 발달 초기에, 수정체의 능력이 증가되어 근시를 야기할 수 있고, 수정체의 점진적인 황색화 및 불투명화가 청색의 인지를 감소시킬 수 있다. 백내장은 전형적으로 천천히 진행되어 시력 소실을 야기하고, 치료되지 않으면 잠재적으로 눈을 멀게 한다.As used herein, the term "cataract" refers to haze developed in the lens of the eye or in the sheath of the eye, varying in degree from a slight opacity to complete opacity and blocking the passage of light. Early in the development of age-related cataracts, the ability of the lens to increase can cause myopia, and progressive yellowing and opacification of the lens can reduce the perception of blue. Cataracts typically progress slowly, causing vision loss, and potentially blindness if not treated.
본원에서 사용된 "형광 마커"는 화합물을 또 다른 분자, 예컨대 단백질 또는 핵산에 부착시키기 위한 형광단을 함유하는 임의의 모든 화합물을 지칭한다. 일반적으로 이는 표적 분자 내에 함유된 관능기에 선택적으로 결합하는 형광단의 반응성 유도체를 사용하여 달성된다.As used herein, "fluorescent marker" refers to any compound that contains a fluorescent moiety for attaching a compound to another molecule, such as a protein or nucleic acid. Generally this is achieved by using a reactive derivative of the fluorescent moiety to selectively bind to the functional group contained in the target molecule.
본원에서 사용된 "녹내장"은 시각 신경에 영향을 미치고 특징적인 패턴의 망막 신경절 세포 손실을 수반하는 질환 군을 지칭한다. 녹내장은 일종의 시각 신경병증으로 분류된다.As used herein, "glaucoma" refers to a group of diseases affecting the optic nerve and accompanied by a characteristic pattern of retinal ganglion cell loss. Glaucoma is classified as a type of optic neuropathy.
본원에서 사용된 "포유동물"은 인간 및 비-인간 영장류 예컨대 침팬지, 및 기타 유인원 및 원숭이 종; 농장 동물 예컨대 소, 양, 돼지, 염소 및 말; 애완 포유동물 예컨대 개 및 고양이; 마우스, 래트 및 기니피그와 같은 설치류가 포함되는 실험용 동물 등이 비제한적으로 포함되는, 포유류 강의 임의의 구성원을 지칭한다. 이러한 용어는 특정 연령 또는 성별을 표시하지 않는다. 따라서, 성체 및 신생 대상체, 뿐만 아니라 태아가, 남성 또는 여성 여부와 관계없이, 이러한 용어의 범주 내에 포함되도록 의도된다.As used herein, "mammals" include human and non-human primates such as chimpanzees, and other ape and ape species; Farm animals such as cattle, sheep, pigs, goats and horses; Pet mammals such as dogs and cats; And laboratory animals, including rodents such as mice, rats and guinea pigs, and the like. These terms do not indicate a specific age or gender. Thus, adult and newborn subjects, as well as fetuses, whether male or female, are intended to be included within the scope of these terms.
본원에서 사용된 "치료 유효량"은 치료되는 포유동물에서 이로운 결과를 달성할 수 있는 양을 지칭한다. 치료 유효량은 개별적인 기준으로 결정될 수 있고, 적어도 부분적으로, 포유동물의 생리학적 특징의 고려사항, 사용된 전달 시스템 또는 치료 기술의 유형, 및 치료될 질환, 장애 또는 상태의 진행에 관련되는 투여 시간을 기초로 한다.As used herein, "therapeutically effective amount" refers to an amount capable of achieving beneficial results in the mammal being treated. The therapeutically effective amount may be determined on an individual basis and may be determined, at least in part, by consideration of the physiological characteristics of the mammal, the type of delivery system or therapeutic technique employed, and the administration time associated with the progression of the disease, Based.
본원에서 사용된 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 치료적 처치 및 예방 또는 방지 수단 양쪽 모두를 포함하고, 이때 궁극적으로 치료가 실패하더라도 표적으로 하는 병리학적 상태, 질환 또는 장애를 방지하거나 둔화 (약화)시키는 것을 목적으로 한다. 치료를 필요로 하는 대상체에는 이미 장애가 있는 대상, 뿐만 아니라 장애에 걸리기 쉬운 대상체 또는 장애를 방지하려는 대상체가 포함될 수 있다.As used herein, "treating "," treating "and" treatment "include both therapeutic treatment and prevention or prevention measures, which ultimately leads to the onset of a pathological condition, Or to slow down (weaken) the object. A subject in need of treatment may include a subject already having a disorder, as well as a subject susceptible to or susceptible to a disorder.
β-아밀로이드 침착은 AD 신경병증에 중심이 되고, 알츠하이머병의 주요 특징이다. 그러나, 살아있는 알츠하이머병 환자 및 동물의 뇌 내의 Aβ 플라크를 모니터링하는 것은 MRI 및 PET의 현행 해상도 및 특수성에 의해 제한되고, 알츠하이머병 또는 Aβ 플라크의 형성을 특징으로 하는 기타 질병 또는 상태의 명확한 진단은 플라크 및 탱글(tangle)의 개수 및 분포를 모니터링함으로써 뇌조직 부검 후에만 가능하다. 따라서, 생체 내에서 플라크를 확인하는 수단의 개발이 진단, 뿐만 아니라 치료법에 응답하여 질환이 진행되는 것의 평가에 필수적이다. β-amyloid deposits are central to AD neuropathy and are a key feature of Alzheimer's disease. However, monitoring of A [beta] plaques in living Alzheimer's patients and animals' brains is limited by the current resolution and specificity of MRI and PET, and a clear diagnosis of Alzheimer's disease or other diseases or conditions characterized by the formation of A [ And by monitoring the number and distribution of tangles (tangles). Thus, the development of means for identifying plaques in vivo is essential for the diagnosis, as well as for assessing the progression of the disease in response to therapy.
본 발명의 대상은 포유류에서의 망막 Aβ 플라크의 형성을 확립하고, 망막 Aβ 플라크를 확인, 정량 및 영상화하는 방법을 교시한다. 본 발명의 대상은 알츠하이머병, 치매, 및 Aβ 플라크의 형성을 특징으로 하는 기타 임상 상태 및 질병에 걸린 환자에 대해 구체화될 수 있다. 또한, 본 발명의 대상은 AD 환자의 망막에서의 Aβ 플라크의 형성이 이의 뇌에서의 출현에 선행한다는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 대상은 망막 내의 Aβ 펩티드를 염색하기 위해 환자에게 형광 마커를 투여하는 단계, 및 환자의 망막을 광학 영상화 시스템으로 영상화하여 염색된 Aβ 펩티드를 확인하는 단계를 포함하는, 포유동물에서의 AD의 조기 진단 방법을 개시한다. The subject of the present invention teaches how to establish the formation of retinal A? Plaques in mammals and to identify, quantify and visualize retinal A? Plaques. Subjects of the present invention may be specified for patients suffering from Alzheimer's disease, dementia, and other clinical conditions and diseases characterized by the formation of A [beta] plaques. In addition, the subject of the present invention has found that the formation of A [beta] plaques in the retina of AD patients precedes its appearance in the brain. Accordingly, an object of the present invention is to provide a method of screening a subject for use in a mammal, including administering a fluorescent marker to a patient to stain an A [beta] peptide in the retina, and imaging the patient's retina with an optical imaging system to identify the stained A [ The method for early diagnosis of AD is disclosed.
본 발명의 주제의 또 다른 실시양태는 치료 전 및 후에 환자의 망막 내의 Aβ 플라크의 증가 또는 감소를 측정함으로써 포유동물에서 AD를 예후하는 방법을 교시한다. 이러한 예후 방법은 망막 내의 Aβ 펩티드를 염색하기 위해 환자에게 형광 마커를 투여하는 단계 및 환자의 망막을 광학 영상화 시스템으로 영상화하여 염색된 Aβ 펩티드를 확인하는 단계에 이어서 환자에게 AD 치료제를 투여하는 단계 및 AD 치료제가 효과를 나타내도록 적당한 기간을 허용하는 단계를 포함한다. 그리고, AD 치료 후 망막 내의 Aβ 플라크를 염색하기 위해 환자에게 형광 마커를 재투여하는 단계 및 환자의 망막을 광학 영상화 시스템으로 영상화하여 염색된 Aβ 펩티드에서의 증가 또는 감소를 확인하는 단계.Another embodiment of the subject matter of the present invention teaches a method of prognosing AD in a mammal by measuring an increase or decrease in A [beta] plaque in the retina of the patient before and after treatment. This prognostic method includes the steps of administering a fluorescent marker to a patient to stain an A [beta] peptide in the retina and imaging the patient ' s retina into an optical imaging system to identify the stained A [beta] peptide, And allowing the AD therapeutic to be effective for a reasonable period of time. And re-administering the patient with a fluorescent marker to stain the A [beta] plaque in the retina after AD therapy and imaging the patient's retina with an optical imaging system to ascertain an increase or decrease in the stained A [beta] peptide.
추가적인 실시양태에서, 본 발명의 대상은 Aβ 플라크의 형성을 감소시키거나 존재하는 Aβ 플라크를 용해시키기 위해 치료 유효량의 미엘린-유래 펩티드 및/또는 미엘린-유래 펩티드의 효능제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유류 환자에서 AD를 치료하는 방법을 개시한다.In a further embodiment, the subject of the present invention is a method of treating a subject suffering from a myelin-derived peptide comprising administering to a patient a therapeutically effective amount of an agonist of a myelin-derived peptide and / or a myelin-derived peptide for reducing the formation of A? Plaques or for dissolving an existing A? Lt; RTI ID = 0.0 > AD < / RTI >
본 발명의 대상은 치료 유효량의 미엘린-유래 펩티드 및/또는 미엘린-유래 펩티드의 효능제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 망막 Aβ 플라크를 함유하는 포유류 환자에서 시력을 개선하는 방법을 개시하는 것에서 또한 유용성이 발견된다. 시력 개선 방법은 AD, 치매, 또는 Aβ 플라크의 형성을 특징으로 하는 기타 임상 상태 및 질병, 예컨대 연령-관련 황반 변성 (AMD), 및 녹내장에 걸린 환자에게 적용가능할 수 있다.A subject of the present invention is a method of improving visual acuity in a mammalian patient containing retinal A [beta] plaques, comprising administering to the patient an effective amount of a myelin-derived peptide and / or an agonist-derived peptide agonist Usability is also found. Methods for improving visual acuity may be applicable to other clinical conditions and diseases characterized by the formation of AD, dementia, or A [beta] plaques, such as age-related macular degeneration (AMD), and glaucoma.
추가적인 실시양태에서, 본 발명의 대상은 Aβ 플라크가 포유동물의 망막 내에 존재하고, 망막 Aβ 플라크를 특징으로 하는 다수의 기타 임상 상태 및 질병을 분석, 예후 및 진단하는데 활용될 수 있다는 것을 기술한다. 대표적인 임상 상태 및 질병은 AMD 및 녹내장을 포함할 수 있다. In a further embodiment, the subject of the present invention describes that the A [beta] plaque is present in the retina of a mammal and can be utilized in the analysis, prognosis and diagnosis of a number of other clinical conditions and diseases characterized by retinal A [beta] plaques. Representative clinical conditions and diseases may include AMD and glaucoma.
본 발명의 주제에서 확인되는 추가적인 발견에는 비-인간 포유류 및 인간 환자의 망막에서 생체 내에서 Aβ 플라크를 가시화하기 위한 광학 영상화 시스템이 포함된다. 광학 영상화 시스템에는 형광 현미경, 수은 및 제논 아크 램프, CCD 카메라, AOTF (음향 광학 변조 필터)-기반 스펙트럼 영상 획득 기구, 및 사후 분석 영상화 소프트웨어의 사용이 통합된다. 염색된 Aβ 플라크의 망막 영상을 제공하는 상기의 도구가 광학 영상화 시스템에 통합되어, 미가공(raw) 영상으로부터 추출된 스펙트럼 서명의 가시적인 모조색상 표현을 제공하고, 이는 Aβ 플라크 물체의 크기 및 위치를 나타낸다.Additional findings identified in the subject of the present invention include optical imaging systems for visualizing A [beta] plaques in vivo in retinas of non-human mammalian and human patients. Optical imaging systems incorporate the use of fluorescence microscopy, mercury and xenon arc lamps, CCD cameras, AOTF (Acoustic Optical Modulation Filter) -based spectral imaging instruments, and post-analysis imaging software. The above-described tools for providing retinal images of stained A [beta] plaques are integrated in an optical imaging system to provide a visible mimic color representation of the spectral signature extracted from the raw image, which allows the size and location of the A [beta] .
별법적인 실시양태에서, 더 높은 해상도에서 형광 및 산란 신호를 가시화하도록 조정되는 입체현미경을 사용하는 것이 광학 영상화 시스템에 통합된다. 입체현미경에 폴리크롬(Polychrome) V 가변 파장 광원이 설비될 수 있다. 추가적인 실시양태에서, 배율 및 영상 세부묘사를 개선하도록 마이크로파이어(MicroFire) 컬러 디지털 카메라 및 하나 이상의 확대 렌즈가 광학 영상화 시스템에 통합될 수 있다. 영상화 소프트웨어를 사용한 사후 분석 영상 분할 및 분류에 의해 영상 획득이 달성되고 완성된다.In an alternative embodiment, the use of a stereoscopic microscope that is tuned to visualize fluorescence and scatter signals at higher resolutions is integrated into the optical imaging system. A stereoscopic microscope can be equipped with a polychrome V variable wavelength light source. In a further embodiment, a MicroFire color digital camera and one or more magnifying lenses may be integrated into the optical imaging system to improve magnification and image detail. Post analysis using imaging software Image acquisition is achieved and completed by image segmentation and classification.
추가적인 실시양태에서, 포유동물에서 Aβ 플라크를 진단, 예후 및 치료하는 방법에 광학 영상화 시스템이 통합될 수 있다. 또한, 급속하게 변하는 광학적 왜곡의 효과를 감소시킴으로써 광학 영상화 시스템의 성능을 개선하기 위해 사용되는 적응 과학으로 광학 영상화 시스템이 증대될 수 있다.In a further embodiment, an optical imaging system may be incorporated into a method of diagnosing, prognosing and treating A [beta] plaques in a mammal. Optical imaging systems can also be augmented with adaptive science that is used to improve the performance of optical imaging systems by reducing the effects of rapidly changing optical distortions.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 대상은 약물 개발 및 테스트에 활용될 수 있다. 신속하게 반복적인 비-침습성 영상화 방법이 다양한 약물 및 다양한 약물 투여량의 연속적인 비교를 가능하게 할 것이기 때문에, 본 발명의 대상은 약물 개발 및 테스트에서 유리한 유용성을 발견할 것이다.In another embodiment, the subject of the invention may be utilized for drug development and testing. The subject of the present invention will find beneficial use in drug development and testing, since rapid, repetitive, non-invasive imaging methods will enable continuous comparison of various drugs and various drug doses.
기존의 보고서에서, AD 환자의 수정체 내의 Aβ 축적을 발견한 것을 기초로 하는, 뇌에서의 Aβ 병리학이 확인되었다 [31]. 현재의 연구는 쿠르쿠민에 의해 특이적으로 가시화될 수 있는 AD 환자의 망막 내의 Aβ 플라크의 존재에 대한 증거를 제공한다. Aβ 플라크가 모든 검사된 AD 환자의 망막에서 발견된 반면, 비-AD 대조군에서는 검출될 수 없었다. 어린 AD 마우스, 뿐만 아니라 노령 AD 마우스 양쪽 모두에서, 망막 Aβ 플라크와 뇌 Aβ 플라크 병리학 간의 양호한 상관관계가 관찰되었다; 플라크가 질환 진행 동안 연령-의존적 방식으로 축적되었고, 망막 및 뇌 양쪽 모두가 동일한 치료 양식에 응답하여 Aβ 플라크 감소를 나타냈다. 종합적으로, 뇌와 다수의 유사성을 공유하는 망막 조직이 AD의 진단 및 모니터링에 잠재적으로 사용될 수 있다.Previous reports have identified Aβ pathology in the brain based on the discovery of Aβ accumulation within the lens of AD patients [31]. Current research provides evidence for the presence of A [beta] plaques in the retina of AD patients that can be specifically visualized by the curcumin. Aβ plaques were found in the retinas of all examined AD patients, but not in non-AD controls. In both young AD mice as well as older AD mice, a good correlation between retinal A [beta] plaques and brain A [beta] plaque pathology was observed; Plaques accumulated in an age-dependent manner during disease progression, and both retinas and brains showed A [beta] plaque reduction in response to the same treatment regimen. Collectively, retinal tissues that share many similarities with the brain can potentially be used for diagnosis and monitoring of AD.
본 발명의 연구에서, AD 환자의 망막 내의 Aβ 플라크는 대부분 RGC 층 내에서 검출되었다. AD 마우스의 눈에서, 대부분의 망막 층 및 맥락막에서 플라크가 보였다. NFL에서 ONL까지 플라크가 현저하였고, Aβ 플라크 클러스터(cluster)가 망막의 내층에서 더욱 빈번하게 보였으며, 이는 살아 있는 대상체의 눈을 통한 플라크 영상화의 가능성을 의미한다. AD 마우스의 망막은 뇌에서 관찰되는 플라크의 연령-의존적 축적과 유사한, 개수 및 크기 양쪽 모두의 면에서의 Aβ 플라크 부하의 연령-의존적 증가를 겪는다. 망막 플라크 병리학을 나타내는 본 발명가들의 결과는 성체 및 노화 AD-Tg 마우스에서의 망막 염증 및 변성과 상관되는 망막 Aβ 침착을 밝히는 최근의 보고와 일관된다 [16]. 본 발명의 대상은 망막 플라크 병리학과 뇌 플라크 병리학 간의 연관을 지지하는 증거를 제공할 뿐만 아니라, 어린 AD-Tg 마우스에서, 뇌에서의 Aβ 플라크 검출 전에 Aβ 플라크가 망막에서 검출가능하다는 것을 또한 나타낸다. 본 발명가들은 미엘린-유래 펩티드로의 백신접종 후 AD-Tg 마우스의 망막에서의 Aβ 플라크의 유의한 감소를 추가로 나타낼 수 있었다; 이러한 치료, 뿐만 아니라 관련된 치료는 뇌 내의 Aβ 플라크 부하를 감소시키는데 효과적인 것으로 발견되었다 [17, 24, 25]. 이러한 발견들은 망막 플라크의 평가가 플라크-감소 치료법에 대한 응답을 평가하는데 사용될 수 있다는 것과 망막 플라크가 뇌에서의 Aβ 플라크 감소에 효과적인 것과 동일한 치료에 응답할 수 있다는 것을 제공한다.In the study of the present invention, most of the A [beta] plaques in the retina of AD patients were detected in the RGC layer. In the eyes of AD mice, plaques were seen in most retinal layers and choroids. Plaque from NFL to ONL was prominent, and Aβ plaque clusters were seen more frequently in the inner layer of the retina, which implies the possibility of plaque imaging through the eye of a living subject. The retinas of AD mice undergo an age-dependent increase in A [beta] plaque load in both the number and size, similar to the age-dependent accumulation of plaques observed in the brain. The results of the present inventors demonstrating retinal plaque pathology are consistent with recent reports revealing retinal A [beta] deposition correlated with retinal inflammation and degeneration in adult and senescent AD-Tg mice [16]. The subject of the present invention not only provides evidence to support the association between retinal plaque pathology and brain plaque pathology, but also shows that in young AD-Tg mice, A [beta] plaques are detectable in the retina before detection of A [beta] plaques in the brain. The inventors were able to further demonstrate a significant reduction of A [beta] plaques in the retina of AD-Tg mice following vaccination with myelin-derived peptides; These therapies, as well as related treatments, have been found to be effective in reducing Aβ plaque burden in the brain [17, 24, 25]. These findings provide that the evaluation of retinal plaques can be used to evaluate responses to plaque-reduction therapies and that retinal plaques can respond to the same treatment as is effective in reducing A [beta] plaques in the brain.
중요하게, 플라크가 5 ㎛를 초과하는 크기에 도달하여 인간 눈 내의 GCL에서 보였다는 사실은 망막을 통한 알츠하이머 환자의 영상화를, 약간의 변형, 심지어 인간 눈 영상화를 위한 현재 이용가능한 도구, 예컨대 적응 광학 검안경 [32]과 함께, 실현가능한 접근법으로 만든다. 살아 있는 마우스에서, 시판되는 동공확대 망막 카메라가 안저 사진들을 기록하는데 효과적이어서 망막 신경절 세포의 장기적인 변화의 평가를 가능하게 하는 것으로 발견되었다 [33]. 청록색 형광 단백질을 가시화하도록 변형된 청색광 공초점 주사 레이저 검안경 (bCSLO) 시스템이 살아 있는 마우스 망막 내의 RGC를 가시화하기 위한 비-침습성 접근법을 또한 제공한다 [34]. 여기서, 개념 증명을 위해, 본 발명가들은 폴리크롬 V 스펙트럼 광원 및 이중 볼록 렌즈가 장착된 입체현미경 (라이카(Leica) S6E)을 사용하여 살아 있는 마우스에서 쿠르쿠민-표지 플라크를 검출할 수 있었다. 또한, AOTF 시스템을 사용하여, 본 발명가들은 강한 배경 자가형광 신호 (적혈구로부터의 신호)를 제거하면서 쿠르쿠민에 의해 망막 Aβ 플라크를 검출할 수 있었다.Significantly, the fact that the plaque has reached a size exceeding 5 [mu] m and is seen in the GCL in the human eye is due to the fact that the imaging of Alzheimer's patients through the retina can be achieved with some of the currently available tools for human eye imaging, Together with an ophthalmoscope [32], it makes a feasible approach. In live mice, a commercially available dilated retinal camera was found to be effective in recording fundus photographs, enabling the evaluation of long-term changes in retinal ganglion cells [33]. A blue light confocal laser ophthalmoscope (bCSLO) system modified to visualize cyan fluorescence proteins also provides a non-invasive approach to visualizing RGCs in the living mouse retina [34]. Here, for the proof of concept, the inventors were able to detect a quercumin-labeled plaque in live mice using a stereomicroscope (Leica S6E) equipped with a polychrome V spectral light source and a double convex lens. In addition, using the AOTF system, the present inventors were able to detect retinal A [beta] plaques by the curcumin, while strong background autofluorescence signals (signals from red blood cells) were eliminated.
본 발명의 연구에서, 7.5 mg/kg의 단일 용량으로 전신 투여되었을 때 또는 경구 제공되었을 때 쿠르쿠민이 망막 Aβ 플라크를 검출하는데 효과적이었다. 쿠르쿠민은 유용한 플라크 조영제에 대한 필요요건인, 혈액-뇌 및 혈액-망막 장벽을 가로지르는 능력을 나타냈다. 안전성 면에서, 암에 걸린 환자에서 쿠르쿠민을 사용한 I상 및 II상 시험에서, 고용량 (12 g/일)에서도, 그리고 장기간에 걸쳐 제공되었을 때 인간에서의 쿠르쿠민의 낮은 독성이 증명되었다 [35]. 망막 플라크 가시화를 위해 마우스에서 인간 (1 g 미만)으로 정맥내 또는 경구 제공된 쿠르쿠민 용량을 번역하는 것은 여전히 보고된 안전성 수준 이내일 것으로 예상된다. 또한, 최근의 연구들이 인간에서의 쿠르쿠민 안정성 및 생체이용률을 유의하게 증가시키기 위한 다양한 접근법들을 보고하였다 [36].In the study of the present invention, when administered systemically at a single dose of 7.5 mg / kg or when given orally, the curcumin was effective in detecting retinal A [beta] plaques. Curcumin demonstrated the ability to cross blood-brain and blood-retinal barriers, a requirement for useful plaque contrast agents. In terms of safety, low-dose toxicity of quercumine in humans has been demonstrated in high-dose (12 g / day) and long-term administration in phase I and II trials with quercumin in patients with cancer [35]. It is expected that translation of the intravenously or orally provided curcumin dose in mice (less than 1 g) for retinal plaque visualization is still within the reported safety level. In addition, recent studies have reported various approaches to significantly increase the stability and bioavailability of quercumin in humans [36].
AD 환자의 망막 내의 Aβ 플라크의 확인은 고해상도의 민감한 영상화 방법을 개발할 새로운 기회를 제공하고, 이는 생체 내에서의 검출을 허용할 것이다. 이러한 결과는 AD 환자에서 발견된 초기 시각 기능장애 [37, 38], 및 AD 환자에서 보고된 GCL 내의 세포 손실 및 NFL 위축과 같은 망막 이상에 대한 증거 [39-44]와 일치할 수 있다. Aβ 플라크가 초기 또는 후기 단계의 AD의 망막에서 발견되는지 여부가 불명확하지만, 상이한 연령의 이러한 환자들의 망막에서 Aβ 플라크가 현재 발견되는 것 및 이러한 플라크들이 AD-Tg 마우스에서 질환의 극초기 증상전 단계에서 검출가능하다는 사실은 눈을 통해 보이는 쿠르쿠민-표지 플라크가 AD의 조기 진단에 사용될 수 있는 가능성을 강화한다. 중요하게, 플라크의 독특한 크기 및 망막 내에서의 분포를 기초로, AD 환자에서 관찰된 플라크가 결국 감별 진단에 사용될 수 있다: 연령-관련 황반 변성에서 검출된 플라크는 드루젠 내의 망막 색소 상피에 국소적으로 제한되고, 크기 면에서 더 작게 나타난다 [45-47]. AD 환자에서 나타나는 망막 이상의 관점에서, 플라크-감소 치료법, 예컨대 현재의 DC 백신접종이 시각 기능장애들 중 일부를 개선하는 것을 또한 도울 수 있는 것이 가능하고, 심지어 시력이 개선된다.Identification of A [beta] plaques in the retina of AD patients provides a new opportunity to develop high resolution, sensitive imaging methods, which will allow detection in vivo. These results may be consistent with early visual dysfunction [37, 38] found in AD patients and evidence of retinal abnormalities such as cell loss and NFL atrophy in GCL reported in AD patients [39-44]. It is unclear whether A [beta] plaques are found in the retina of early or late AD, but it is now clear that A [beta] plaques are presently found in the retinas of these patients of different ages and that these plaques are present in AD- Can enhance the possibility that the curcumin-labeled plaque visible through the eye can be used for the early diagnosis of AD. Importantly, based on the unique size of plaques and distribution within the retina, the plaques observed in AD patients can eventually be used for differential diagnosis: plaques detected in age-related macular degeneration are localized in the retinal pigment epithelium And is smaller in size [45-47]. In view of the retinal abnormalities seen in AD patients, it is possible that plaque-reduction therapies, such as current DC vaccination, can also help to improve some of the visual dysfunctions, and even improve vision.
세계 인구가 노화되고 AD 유행이 증가함에 따라, 위험을 평가하고, 새로운 치료법을 평가하며, 일단 AD가 발병되었으면 조기 개입으로 AD를 치료하기 위해 AD의 조기 검출이 더욱 더 중요해진다. 증상이 나타나고 임의의 실질적인 신경변성이 발생하기 수년 전에 아밀로이드 플라크 및 신경섬유 탱글이 포함되는 AD 병리학이 나타나는 것으로 여겨진다. 여전히 인지적으로 정상인 대상체에서 뇌 병리학 및 인지 저하의 발달을 예측할 수 있는, AD에 대해 특이적인 조기에 측정가능한 마커, 예컨대 망막 내의 Aβ-플라크의 발견이 특히 필요하다. 마우스 AD 모델에서의 본 발명가들의 발견은 쿠르쿠민으로 생체 내에서 표지된 망막 플라크의 영상화를 AD 병리학 및 치료적 개입에 대한 응답의 조기 지시를 위한 비-침습성 도구로서 사용하는 것을 지지한다.As the world's population ages and AD epidemics increase, early detection of AD becomes even more important to assess risk, assess new therapies, and, once AD has developed, to treat AD with early intervention. It is believed that AD pathology involving amyloid plaques and neurofibrillary tangles occurs some years before symptoms develop and any substantial neurodegeneration occurs. There is a particular need for the early detection of markers specific for AD, such as A [beta] plaques in the retina, which can still predict the development of brain pathology and cognitive decline in cognitively normal subjects. The inventors' discovery in the mouse AD model supports the use of imaging of retinal plaques labeled in vivo with curcumin as a non-invasive tool for early indication of response to AD pathology and therapeutic intervention.
또한, 본 발명의 대상은 AD 환자에서의 눈 및 시력 변성과 종종 관련되는 망막 내의 Aβ-플라크를 감소시키고/시키거나 제거하기 위한 백신접종 치료법을 소개한다. 미엘린-유래 펩티드 또는 미엘린-유래 펩티드의 약한 효능제를 사용하여, 효과적으로 신경보호를 유도하고 망막 내의 플라크 형성을 감소시킬 수 있었다.The subject of the present invention also introduces a vaccination regimen for reducing and / or eliminating A [beta] plaque in the retina, which is often associated with eye and visual degeneration in AD patients. Using weak agonists of myelin-derived peptides or myelin-derived peptides, it was possible to effectively induce neural protection and reduce plaque formation in the retina.
요약하면, 본 발명가들은 인간 망막 내의 Aβ 플라크를 확인하였고, 인간에서 안전한 것으로 증명된 전신 투여 화합물을 사용하여 망막 내의 Aβ 플라크를 영상화함으로써, 뇌에서보다 더 조기에, 그리고 더 쉽게 알츠하이머의 플라크 병리학을 검출 및 모니터링하기 위한 새로운 접근법을 기술하였다. 이는 유의한 기능 결핍이 나타나기 전에 여전히 인지적으로 정상이고 건강한 대상체에서 뇌 병리학 및 인지 저하의 발달을 예측할 수 있다. 이러한 발견은 망막의 광학 영상화가 AD 진행 및 치료적 개입에 대한 응답을 모니터링하기 위한 비-침습성 접근법으로서 사용될 수 있다는 것을 나타낸다 [48].In summary, the present inventors have identified A [beta] plaques in the human retina, and by imaging systematic A [beta] plaques in the retina using systemically proven, safe compounds in humans, earlier and more readily than plaque pathology of Alzheimer's A new approach to detection and monitoring is described. This can predict the development of brain pathology and cognitive decline in cognitively normal and healthy subjects before a significant functional deficit appears. This finding indicates that optical imaging of the retina can be used as a non-invasive approach to monitoring response to AD progress and therapeutic intervention [48].
실시예Example
하기의 실시예들은 청구된 발명을 더 잘 설명하기 위해 제공되고, 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 특정 물질이 언급된다는 점에서, 이는 단지 설명을 목적으로 하고, 발명을 한정하도록 의도되지 않는다. 당업자는 독창적인 역량을 행사하지 않으면서, 그리고 본 발명의 범주를 벗어나지 않으면서 등가의 수단 또는 반응물을 개발할 수 있다.The following examples are provided to better illustrate the claimed invention and should not be construed as limiting the scope of the invention. Insofar as certain materials are mentioned, this is for illustrative purposes only and is not intended to limit the invention. Skilled artisans may develop equivalent means or reactants without departing from the inventive scope and within the scope of the invention.
실시예Example 1 One
결과result
ADAD 마우스 망막 내의 Aβ Aβ in the mouse retina 침착물이The deposit 쿠르쿠민을 사용하여 가시화될 수 있다 Can be visualized using coumucin
인간 APPswe 및 PS1dE9 트랜스진(transgenes)을 보유하는 AD-Tg 마우스를 사용하여, 눈에서 Aβ 플라크를 검출하기 위한 비-침습성 도구의 개발 가능성을 평가하였다. 먼저, 쿠르쿠민이 AD-Tg 마우스의 해마 내에서 인간 Aβ에 대해 특이적인 항체에 의해 검출된 것과 동일한 플라크에 대한 친화력이 있음을 증명하였다 (도 1a; 개별적인 채널 도 1b 및 1c). 더 높은 배율에서, 영상들은 각각의 절차 후 수득된 특이적 염색 패턴을 나타냈다 (도 1d 및 1e). 비-Tg 한배새끼 야생형 (wt) 마우스의 뇌에서는 인간 Aβ-플라크가 검출가능하지 않았다 (도 1f). 그후, AD-Tg 마우스의 눈 내의 Aβ 플라크가 쿠르쿠민에 또한 결합할 수 있는지 여부를 테스트하였다. 고해상도에서의 검사에서, AD-Tg 마우스의 망막에서 쿠르쿠민 및 항-인간 Aβ-항체 양쪽 모두로 표지된 Aβ 플라크의 존재가 밝혀졌지만 (도 1g - 1i, 망막 온조직 표본; 도 1k - 1m, 단면도), 비-Tg (wt) 마우스의 망막에서는 그렇지 않았다 (도 1j 및 1n). 대표적인 영상들이 내망상층 (IPL; 도 1g), 내핵층 (INL) / 외망상층 (OPL; 도 1h), 및 외핵층 (ONL; 도 1i)이 포함되는 다양한 깊이 (80 ㎛ 깊이의 초점면에서의 연속적인 획득)의 망막 온조직 표본에서의 Aβ 플라크의 위치를 디스플레이한다. 단면도의 분석에서, 심부 망막층 및 맥락막 내의 Aβ 플라크 침착이 추가로 증명되었고, 이때 신경절 세포층 (GCL) 및 IPL을 지나 OPL 층에서 명백히 우세하였다 (도 1k - 1m). 인간-Aβ 플라크가 비-Tg (wt) 한배새끼에서 부재하였지만 (도 1j 및 1n), 가끔의 소형 쿠르쿠민-양성 플라크가 검출되었다. wt 마우스에서 쿠르쿠민 염색에 의해 검출된 이러한 희박한 소형 플라크의 성질을 결정하기 위해, 10개월령 wt 마우스의 온조직 표본 망막에서 쿠르쿠민 및 마우스-Aβ에 대해 특이적인 항체를 사용하는 이중-염색 실험을 수행하였다. 실제로, wt 망막에서 쿠르쿠민에 의해 검출된 소형 플라크가 항-마우스 Aβ 항체와 공동-표지되는 것으로 발견되었고, 따라서 이들의 신원이 내인성으로 형성된 마우스-Aβ 침착물로서 확증되었다 (도 8a - 8d). AD-Tg mice bearing human APPswe and PS1dE9 transgenes were used to evaluate the development potential of non-invasive tools for detecting A [beta] plaques in the eye. First, it was demonstrated that quercumin has affinity for the same plaque as that detected by antibodies specific for human A [beta] in the hippocampus of AD-Tg mice (Fig. 1a; individual channels lb and lc). At higher magnifications, the images showed a specific staining pattern obtained after each procedure (Fig. 1d and 1e). Human A [beta] plaques were not detectable in the brain of non-Tg whole-breed wild-type (wt) mice (Fig. 1F). Thereafter, it was tested whether A [beta] plaques in the eyes of AD-Tg mice could also bind to the curcumin. Although the presence of A [beta] plaques labeled with both the curcumin and the anti-human A [beta] antibodies was found in the retina of AD-Tg mice at high resolution (Fig. 1g-1i, retinal tissue specimen; Fig. 1k- ) And not in retinas of non-Tg (wt) mice (Fig. 1j and 1n). Representative images were obtained at various depths including the inner network layer (IPL; FIG. 1g), the inner nuclear layer (INL) / outer layer (OPL; FIG. 1h), and the outer nuclear layer (ONL; Lt; RTI ID = 0.0 > of A < / RTI > plaques in a retinal warmed tissue sample. In the cross-sectional analysis, Aβ plaque deposition in the deep retina and choroid was further demonstrated, apparently dominant in the OPL layer past the ganglion cell layer (GCL) and IPL (Figure 1k - 1m). Although human-Aβ plaques were absent in non-Tg (wt) litters (FIGS. 1J and 1n), occasional small curcumin-positive plaques were detected. To determine the nature of these sparse small plaques detected by curcumin staining in wt mice, double-staining experiments were performed using antibodies specific for curcumin and mouse-A [beta] in warm tissue specimen retinas of 10 month old wt mice . Indeed, small plaques detected by curcumin in the wt retinas were found to be co-labeled with anti-mouse A [beta] antibodies, thus confirming their identity as an endogenously formed mouse-A [beta] deposits (FIGS. 8a-8d).
실시예Example 2 2
결과result
Aβ 플라크가 Aβ plaque ADAD 환자의 망막에서 형성되고, 쿠르쿠민에 의해 가시화될 수 있다 Formed in the patient ' s retina, and can be visualized by the curcumin
다음으로, AD로 명확하게 진단된 환자 (n=9; 48세 내지 94세 범위의 연령; 신경병리학 보고서를 기초로 분류된, 상이한 질환 중증도)의 사후 눈, 및 비슷한 연령의 정상 대조군 (n=4; 66세 내지 92세; 인간 기증자 눈 기록 참조)의 사후 눈에서 Aβ 플라크의 존재를 시험하였다 (표 1 참조). 360-710 nm 범위의 여기 하에 관찰되고 리포푸신/지질 침착물 및/또는 포르말린으로의 장기 고정 [21, 22]과 관련된, 고정된 인간 눈의 자가형광 및 비-특이적 신호를 수단 블랙 B 염색에 의해 제거하였다 (도 2). 쿠르쿠민 염색을 위해, 먼저 인간 온조직 표본 망막에 수단 블랙 B를 함침시킨 후 (도 2a 및 2c; 플라크가 관찰되지 않았음), 쿠르쿠민에 노출시켰다 (도 2b 및 2d; 대표적인 영상이 동일한 조직 위치 내의 플라크를 디스플레이함). 크기가 1 내지 10 ㎛ 범위 (전형적으로 약 5 ㎛)인, 쿠르쿠민에 의해 검출된 플라크가 GCL, IPL 및 INL 망막 층 (도 2a 및 2g)에 상응하는 다양한 초점 깊이에서, 그리고 뇌에서의 보고된 플라크 병리학에 명백하게 상관되면서, 검사된 모든 AD 환자의 눈에서 발견되었다. 인간 망막을 인간 Aβ에 대해 지시된 항체로 또한 분석하였다. AD 환자에서 Aβ 플라크가 확인되었고, 이의 구조가 마우스 망막 및 뇌에서 발견된 것과 유사하였음을 발견하였다 [도 2h 및 2i는 플라크가 쉽게 검출되는 가장 안쪽의 망막 층 (즉 GCL)을 나타내고; 도 2i는 망막 Aβ 플라크의 더 높은 배율의 영상이며; 도 2j는 더 깊은 연속적인 초점면들 (즉 IPL)을 나타낸다]. 2차 항체만 사용되었을 때는 플라크를 검출할 수 없었다 (데이터는 제시되지 않음). Aβ에 대한 면역표지 후 인간 망막을 쿠르쿠민에 노출시켰을 때, 이들의 공동-국소화가 확인되었다 (도 2k - 2m). 비-AD 인간이 눈에서는, Aβ 플라크가 검출되지 않았다 (도 2n).Next, the post-hoc eyes of patients clearly diagnosed with AD (n = 9; ages ranging from 48 to 94 years; different disease severity classified on the basis of neuropathology reports), and normal controls of similar age (n = 4; 66 to 92 years; see the human donor eye record) (see Table 1). Fixed human eye autofluorescence and non-specific signals observed under excitation in the 360-710 nm range and associated with limpuschin / lipid deposits and / or organ fixation to formalin [21, 22] (Fig. 2). For curcumin staining, the human warm tissue specimen retinas were first exposed to coumarchin after impregnating Sudan Black B (Figures 2a and 2c; no plaque was observed) (Figures 2b and 2d: Representative images are in the same tissue location Plaque). At various depths of focus corresponding to the GCL, IPL and INL retinal layers (Figs. 2A and 2G), and plaques detected by the quercumin, ranging in size from 1 to 10 mu m (typically about 5 mu m) It was found in the eyes of all AD patients examined, obviously correlated with plaque pathology. Human retinas were also analyzed with antibodies directed against human A [beta]. Aβ plaques were identified in AD patients and their structures were similar to those found in mouse retinas and brains (Figures 2h and 2i show the innermost retinal layer (ie, GCL) where plaques are readily detected; Figure 2i is an image of a higher magnification of the retinal A [beta] plaque; Figure 2j shows deeper continuous focal planes (i. E. IPL). Plaques could not be detected when only secondary antibodies were used (data not shown). When human retinas were exposed to quercumin following immunostaining for A [beta], their co-localization was confirmed (Fig. 2k - 2m). In non-AD human eyes, no A [beta] plaques were detected (Fig. 2n).
실시예Example 3 3
결과result
쿠르쿠민에 의해 생체 내에서 염색된, ≪ / RTI > dyed in vivo by < RTI ID = ADAD 마우스 내의 Aβ 플라크가 A < / RTI >
뇌에서보다 조기에 망막에서 검출되고, 질환 진행 동안 축적된다It is detected in the retina earlier than in the brain and accumulates during disease progression
망막 내의 플라크를 영상화하기 위해 쿠르쿠민을 사용하는 것을 확립하기 위해, 전신 투여되었을 때의 쿠르쿠민의 눈으로의 생체이용률을 테스트하였다. 이를 위해, 마우스에게 쿠르쿠민을 정맥내 주사하였다. 쿠르쿠민 투여 후 표지된 플라크를 AD-Tg 마우스의 망막 및 뇌에서 검출할 수 있었지만, 비-Tg (wt) 대조군에서는 그렇지 않았다 (도 3). 이러한 발견은 쿠르쿠민이 혈액-뇌 장벽을 가로지른다는 것을 확증하였고, 쿠르쿠민이 혈액-망막 장벽을 또한 가로지르고 생체 내에서 Aβ 플라크에 대한 높은 친화력을 지닌다는 것을 시사한다. 중요하게, 쿠르쿠민-표지 플라크를 단일 쿠르쿠민 주사 후 또는 다중 주사 후 검출할 수 있었다. 2.5, 5, 9 및 17개월령의 AD-Tg 마우스의 망막 및 뇌 해마 및 피질 영상의 대표적인 z-축 투사에서, 망막 및 뇌에서의 플라크 침착 간에 연령-의존적 상관관계, 및 질환 진행 과정에 걸쳐 증가된 축적이 실연되었다 (도 3a - n). 중요하게, 생체내 쿠르쿠민 투여 후 AD-Tg 마우스에서 2.5개월령 만큼 조기에 플라크가 망막에서는 검출되었지만 (도 3a 및 3b), 뇌에서는 그렇지 않았고 (도 3c 및 3d), 이는 망막 내의 Aβ 플라크가 뇌 병리학을 선행한다는 것을 실연한다. 이러한 쿠르쿠민-표지 플라크가 생체 외에서 항-인간 Aβ 항체 염색과 공동-국소화되었음이 추가로 확증되었다 (도 3b 및 3f). Aβ 플라크는 5개월령의 뇌에서 최초로 검출가능하였고 (도 3g 및 3h), 이는 이러한 계통의 AD-Tg 마우스에서의 질환 개시 및 진행의 기존의 설명 [23]과 일맥상통한다. wt 마우스에서는, Aβ 플라크가 9개월령에 망막 (도 3o) 및 뇌 (도 3p 및 3q) 양쪽 모두에서 검출가능하지 않았다.To establish the use of curcumin for imaging plaques in the retina, the bioavailability of curcumin to the eyes when administered systemically was tested. To this end, mice were injected intravenously with curcumin. Plaque labeled after the administration of the curcumin could be detected in the retina and brain of AD-Tg mice, but not in the non-Tg (wt) control (Fig. 3). This finding has confirmed that the curcumin crosses the blood-brain barrier and suggests that the curcumin also crosses the blood-retinal barrier and has a high affinity for A [beta] plaques in vivo. Importantly, the quercumin-labeled plaques could be detected after a single curcumin injection or multiple injections. In a representative z-axis projection of retinal and brain hippocampal and cortical images of AD-Tg mice at 2.5, 5, 9 and 17 months of age, age-dependent correlations between plaque deposition in the retina and brain, (Fig. 3a-n). Importantly, although plaques were detected in the retina (Figs. 3a and 3b) early in the AD-Tg mice after in vivo quercumin administration (Fig. 3c and 3d) In the first place. These curcumin-labeled plaques were further confirmed to be co-localized with anti-human Aβ antibody staining in vitro (FIGS. 3b and 3f). Aβ plaques were detectable for the first time in 5-month-old brains (FIGS. 3g and 3h), consistent with previous descriptions of disease initiation and progression in this line of AD-Tg mice [23]. In wt mice, A [beta] plaques were not detectable in both the retina (Fig. 3o) and the brain (Fig. 3p and 3q) at 9 months.
실시예Example 4 4
결과result
백신접종 치료법 후 망막에서 Aβ 플라크 부하가 Aβ plaque load in the retina after vaccination 감소된다Be reduced
AD-Tg 마우스에서 관찰된 망막 플라크의 운명이 동일한 치료에 응답하여 뇌 Aβ 플라크의 운명과 유사한지 여부를 추가로 연구하였다. 미엘린-유래 펩티드 또는 미엘린-유래 펩티드의 약한 효능제는 효과적으로 신경보호를 유도하고 플라크 형성을 감소시키는 것으로 나타났다 [24-26]. 자가면역 뇌척수염을 유발하는 위험 없이 백신접종의 이로운 효과를 확실히 하기 위해, 담체로서의 수지상세포 (DC) 및 애쥬번트를 사용하여 변형된 미엘린-유래 펩티드 (MOG 35-5527,28로부터 유래된 MOG45D)를 AD-Tg 마우스에게 백신접종하였다. MOG45D-로딩 DC 또는 PBS가 주사된 10개월령 AD-Tg 마우스의 온조직 표본 망막, 및 wt 한배새끼의 온조직 표본 망막 (군 당 4마리의 마우스/8개의 망막)을 쿠르쿠민 및 항-Aβ 항체 양쪽 모두를 사용하여 생체 외에서 Aβ 플라크에 대해 표지하였다 (도 4). 대표적인 축 (z-스택(stack)) 투사 영상에서, PBS-처리 대조군에 비해 백신접종 AD-Tg 마우스에서 Aβ 플라크 개수의 실질적인 감소가 실연되었다 (각각 도 4a - 4c 대 도 4d 및 4f;도 4b 및 4c, 및 도 4e 및 4f에서 개별적인 채널). wt 마우스에서 Aβ 플라크 (쿠르쿠민 및 항-인간 Aβ 항체로 이중 염색)가 검출되지 않았다 (도 4g). 고해상도 영상에서, 소형 망막 플라크 (대부분 직경 <1 ㎛)가 종종 검출되었고, 이는 내인성 마우스 APP 유전자로부터 유래되는 것으로 확인되었다 (도 8). 이러한 소형 플라크들은 3가지 실험 군 모두에서 쿠르쿠민으로는 염색되었지만 항-인간 Aβ로는 염색되지 않았다 (도 4a, 4d 및 4g). 시신경 유두 주변의 12개의 영역 (총 약 0.45 ㎟)을 포착함으로써 플라크 개수 및 크기를 추가로 정량하였고, 각각의 영역에서 60-㎛ 스캐닝 깊이에 걸쳐 플라크를 정량하였다 (도 4h; 각각의 영역이 사각형 1-12로 지시됨). 쿠르쿠민 염색에 의해 검출된 플라크 개수에서의 유의한 감소가 PBS-처리 대조군에 비해 백신접종 AD-Tg 마우스의 망막에서 발견되었다 (도 4i; P=0.0028). PBS-처리 AD-Tg 마우스에 비해 백신접종 마우스에서 망막 플라크로 덮인 평균 면적에서 유의한 감소가 또한 관찰되었다 (도 3j; P=0.0002). 현저하게, PBS-처리 마우스에 비해, 전체 플라크 면적에서의 유의한 감소가 동일한 백신접종 마우스의 뇌로부터의 해마 및 피질에서 또한 관찰되었다 (도 4k; P=0.0085).We further investigated whether the fate of the retinal plaque observed in AD-Tg mice resembles the fate of the brain Aβ plaque in response to the same treatment. Weak agonists of myelin-derived peptides or myelin-derived peptides have been shown to effectively induce neuronal protection and reduce plaque formation [24-26]. Derived peptides (MOG45D derived from MOG 35-5527,28) modified using dendritic cells (DCs) as carrier and adjuvants to ensure the beneficial effects of vaccination without the risk of causing autoimmune encephalitis AD-Tg mice were vaccinated. A warm-tissue specimen retina of 10-month old AD-Tg mice injected with MOG45D-loaded DC or PBS and a warm tissue specimen retina (4 mice per group / 8 retinas) of wt littermates were incubated with both curcumin and anti- All were used to label A [beta] plaques in vitro (Fig. 4). In a representative axial (z-stack) projected image, a substantial reduction in the number of A [beta] plaques in vaccinated AD-Tg mice compared to PBS-treated controls was demonstrated (Figures 4a-4c vs. 4d and 4f, And 4c, and individual channels in Figures 4e and 4f). wt mice did not detect A [beta] plaques (double staining with curcumin and anti-human A [beta] antibodies) (Figure 4g). In high resolution images, small retinal plaques (mostly diameters < 1 mu m) were often detected, which were identified to be derived from the endogenous mouse APP gene (Fig. 8). These small plaques were stained with quercumin in all three experimental groups, but not with anti-human Aβ (FIGS. 4a, 4d and 4g). The number and size of plaques were further quantified by capturing 12 regions around the optic nerve head (about 0.45 mm2 in total), and plaques were quantified over a 60-μm scanning depth in each region (FIG. 4h, 1-12). A significant reduction in the number of plaques detected by the curcumin staining was found in the retinas of vaccinated AD-Tg mice compared to the PBS-treated control (Fig. 4i; P = 0.0028 ). A significant reduction in the mean area covered with retinal plaques in vaccinated mice was also observed compared to PBS-treated AD-Tg mice (Fig. 3j; P = 0.0002 ). Significantly, a significant reduction in total plaque area as compared to PBS-treated mice was also observed in the hippocampus and cortex from the brain of the same vaccinated mice (Fig. 4k; P = 0.0085 ).
실시예Example 5 5
결과result
전신 주사된 쿠르쿠민을 사용하는 눈 내의 Aβ 플라크의 Of Aβ plaques in the eye using whole-body injected curcumin 생체내In vivo 영상화 Imaging
살아 있는 동물의 눈에서 쿠르쿠민에 의해 Aβ 플라크를 가시화하는 것의 가능성을 추가로 연구하기 위해, 본 발명가들은 더욱 생리학적인 환경인, 안구적출 전에 관류되지 않은 마우스의 온조직 표본 망막 내의 Aβ 플라크를 확인하는 본 발명가들의 능력을 먼저 테스트하였다. 대표적인 축 투사 영상에서, 혈관 내의 적혈구로부터의 배경 신호를 포함한 이러한 조건 하에서도, 쿠르쿠민이 앞서 정맥내 주사된 AD-Tg 마우스의 망막에서 플라크가 확인될 수 있음이 실연되었다 (도 5a). 중요하게, 쿠르쿠민의 부재 하에, PBS가 정맥내 주사된 AD-Tg 마우스에서 플라크가 검출가능하지 않았고 (도 5b), 이는 이러한 영상화 양식을 사용할 때, 플라크가 오직 자신의 자가형광 신호에 의해서만은 망막 내에서 거의 검출가능하지 않다는 것을 시사한다. 예상대로, 쿠르쿠민이 주사된 비-Tg(wt) 마우스에서, 플라크가 또한 검출되지 않았다 (도 5c). 생체 외에서 항-인간 Aβ 항체로 플라크를 추가적으로 표지하는 것에서, 쿠르쿠민 염색의 Aβ 특이성이 확증되었다 (데이터는 제시되지 않음). 항-Aβ 항체로 표지된 ADTg 마우스의 온조직 표본 망막 내의 Aβ 플라크가 혈관 내부, 뿐만 아니라 실질 부근에서 발견되었다 (도 5d; 공초점 가상 단면). 혈관으로부터의 배경 신호를 감소시키면서 Aβ 플라크를 검출하는 것이 가능할지 여부를 추가로 평가하였다. 이를 위해, 특이적 광학적 서명을 음향 광학 변조 필터 (AOTF)로의 스펙트럼 영상화 [29] 및 게이트 카메라를 사용하는 형광 수명 영상화로 구성된 멀티-스펙트럼 영상화 기술을 포함하는 형광 현미경 (Nikon TE2000)을 사용하여 모니터링하였다; 영상 획득에 본 발명가들이 개발한 소프트웨어 [30]를 사용한 사후 분석 영상 분할 및 분류가 이어졌다. 단일 파장 채널의 AOTF가 장착된 현미경을 사용하여 영상화된 쿠르쿠민-표지 플라크가 AD-Tg 마우스 망막에서 관찰되었다 (도 5e). AOTF-기반 영상화의 적용, 쿠르쿠민-표지 플라크의 스펙트럼 서명 포착, 및 색-분류 디지털 영상으로의 사후 번역에 의해, 혈관에 의해 생성된 자가형광 노이즈를 제거하면서 Aβ 플라크의 특이적 광학적 서명을 "진짜" 신호로서 확인할 수 있었다 (도 5f). 비-침습성 플라크 검출을 위한 본 발명가들의 접근법의 실행가능성을 연구하기 위해, 디지털 카메라 및 파장-제어 광원이 있는 변형 입체현미경 (Leica S6E)을 사용하여 살아 있는 마우스에서 망막의 생체내 영상화를 수행하였다. 영상화 2시간 전의 쿠르쿠민 (7.5 mg/kg)의 단일 주사 후, 쿠르쿠민-표지 플라크가 546/15 nm의 여기 파장에서 특이적으로 AD-Tg 마우스 망막에서 가시적이었다 (도 5g - 5j). 플라크들은 시신경 유두에 가까운 영역에서 대부분 검출되었다. 평균 플라크 크기는 온조직 표본 망막 (생체외)에서 관찰된 것과 양립성이었다. 쿠르쿠민이 정맥내 주사된 비-Tg (wt) 마우스 (도 5k) 또는 쿠르쿠민 주사가 제공되지 않은 AD-Tg 마우스 (데이터는 제시되지 않음)에서는 플라크가 검출되지 않았다. 변형 입체현미경에 의해 포착된 신호가 플라크로부터 유래되었음을 입증하기 위해, 마우스를 안락사시켰고, 쿠르쿠민-표지 플라크의 존재가 온조직 표본 망막 상에서 확증되었다 (데이터는 제시되지 않음).To further investigate the possibility of visualizing A [beta] plaques by curcumin in the eyes of living animals, the present inventors have identified a more physiologic environment, the A [beta] plaque within the warm tissue retina of mice not perfused before ocular extraction The inventors' ability was first tested. In a representative axial projection image, it was demonstrated that even under these conditions, including background signals from red blood cells in the blood vessels, plaques could be identified in the retina of the previously injected intravenous AD-Tg mice (FIG. 5A). Importantly, in the absence of the curcumin, plaques were not detectable in intravenously injected AD-Tg mice with PBS (Fig. 5b), which indicates that when using this imaging mode, plaques were detected only by their self- Lt; RTI ID = 0.0 > a < / RTI > As expected, no plaque was also detected in non-Tg (wt) mice injected with curcumin (FIG. 5C). In further labeling of plaques with anti-human A [beta] antibodies in vitro, A [beta] specificity of the curcumin staining was confirmed (data not shown). A [beta] plaques within the retina of warm tissue of ADTg mice labeled with anti-A [beta] antibodies were found in the blood vessels, as well as in the vicinity of the parenchyma (Fig. We further assessed whether it is possible to detect A [beta] plaques while reducing background signals from blood vessels. To do this, a specific optical signature was monitored using a spectroscopic imaging [29] of an acousto-optic modulation filter (AOTF) [29] and a fluorescence microscope (Nikon TE2000) including multi-spectral imaging technology consisting of fluorescence lifetime imaging using a gate camera ; The post-analysis image segmentation and classification using the software developed by the present inventors for image acquisition was continued. Curcumin-labeled plaques imaged using a single wavelength channel AOTF equipped microscope were observed in the AD-Tg mouse retina (Figure 5e). By applying the AOTF-based imaging, spectral signature capture of the quercumin-labeled plaque, and post-translation into the color-categorized digital image, the specific optical signature of the A [beta] plaque is removed &Quot; signal (Fig. 5F). To study the feasibility of our approach for non-invasive plaque detection, in vivo imaging of the retina in live mice was performed using a digital camera and a modified stereomicroscope (Leica S6E) with a wavelength-controlled light source . After a single injection of curcumin (7.5 mg / kg) 2 hours before imaging, the quercumin-labeled plaques were visible in the AD-Tg mouse retina specifically at the excitation wavelength of 546/15 nm (Figures 5g-5j). Plaques were mostly detected in the area near the optic nerve head. The mean plaque size was compatible with that observed in the warm-tissue specimen retina (in vitro). No plaque was detected in the AD-Tg mice (data not shown) in which the coccumine was injected intravenously into a non-Tg (wt) mouse (Fig. 5k) or without a curcumin injection. To demonstrate that the signals captured by the modified stereomicroscope were derived from plaques, mice were euthanized and the presence of the quercumin-labeled plaques was confirmed on a warm-tissue specimen retina (data not shown).
실시예Example 6 6
마우스mouse
키메라 마우스/인간 APP (APPswe) 및 돌연변이체 인간 프레세닐린 1 (엑손 9에서의 결실 - PSEN1△E9) 유전자를 보유하는 이중-트랜스제닉 마우스 (동일한 마릿수의 암컷 및 수컷) 및 이들의 비슷한 나이의 비-Tg 한배새끼를 <Jackson Laboratories> (Bar Harbour, ME) (품종 #4462)로부터 구입하여, <Cedars-Sinai Medical Center> (Los Angeles, CA)의 비교 의학 동물 센터에서 사육하고 유지시켰다. 모든 실험은 <Cedars-Sinai Institutional Animal Care and Use Committee>에 의해 고안된 규칙에 따라 인가되고 수행되었다.Double-transgenic mice (identical marbling male and female) carrying the chimeric mouse / human APP (APPswe) and the mutant human predenylin 1 (deletion in exon 9-PSEN1ΔE9) genes and their similar age Non-Tg chicks were purchased from Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) (breed # 4462) and raised and maintained at the Cedars-Sinai Medical Center (Los Angeles, CA). All experiments were approved and performed in accordance with the rules designed by the <Cedars-Sinai Institutional Animal Care and Use Committee>.
실시예Example 7 7
유전자형결정Genotype determination
게놈 DNA를 DNA 추출 키트 (Qiagen, Valencia, CA)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 0.5 cm 꼬리 끝부분에서 추출하였다. 이러한 연구에 사용된 마우스에서, 기존에 기술된 바와 같이 PCR에 의해 트랜스진의 존재에 대해 유전자형을 결정하였다 ([Jankowsky, 2004, Ref. #120]). Genomic DNA was extracted at the tail end of 0.5 cm using a DNA extraction kit (Qiagen, Valencia, Calif.) According to the manufacturer's protocol. In the mice used in these studies, genotyping was determined for the presence of transgene by PCR as previously described (Jankowsky, 2004, Ref. # 120).
실시예Example 8 8
백신접종 제제Vaccine formulation
뇌염생성 펩티드 MOG(35-55)로부터 변형된 미엘린-유래 펩티드 (MOG45D)가 유래된다 ([Koehler, 2002, Ref. #285]; [Shao, 2002, Ref. #283]; [Zhong, 2002, Ref. #284]; [Hauben, 2001, Ref. #28]; 및 [Hauben, 2001, Ref. #35]). 백신접종을 위해, MOG45D (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 비-Tg 한배새끼의 도너 마우스로부터의 골수-유래 수지상세포에 첨가하였다. 백신접종을 위한 수지상세포의 제조는 기존에 기술되어 있었다 ([Hauben, 2003, Ref. #34]).Derived peptide (MOG45D ) from the encephalitis producing peptide MOG (35-55) (Koehler, 2002, Ref. # 285; Shao, 2002, Ref. # 283) Ref. # 284], [Hauben, 2001, Ref. # 28], and Hauben, 2001, Ref. # 35). For vaccination, MOG45D (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) Was added to bone marrow-derived dendritic cells from donor mice in non-Tg infants. The production of dendritic cells for vaccination has been described previously (Hauben, 2003, Ref. # 34).
실시예Example 9 9
백신접종을 위한 실험 계획Experimental planning for vaccination
7개월령의 AD-Tg 마우스에게 DC-MOG45 (동물 당 1×PBS 내의 0.5×106개의 세포/200 ㎖)를 3개월 동안 한 달에 한 번씩 주사하였다. 7개월령 AD-Tg 마우스의 대조군에게는 상응하는 계획에 따라 1×PBS를 주사하였다. 연구 말기에, 모든 마우스에게 마취 하에 1×PBS에 이어서 2.5％ 파라포름알데하이드 ("PFA") (Sigma)를 관류시키고, 뇌 및 눈을 추가적인 연구를 위해 수집하였다.7-month-old AD-Tg mice were injected with DC-MOG45 (0.5 x 10 6 cells / 200 ml in 1 x PBS per animal) once a month for 3 months. Controls of 7-month old AD-Tg mice were injected with 1 x PBS according to the corresponding scheme. At the end of the study, all mice were perfused with 1 x PBS followed by 2.5% paraformaldehyde ("PFA") (Sigma) under anesthesia and the brain and eyes collected for further study.
실시예Example 10 10
동물 조직Animal tissue
마우스를 마취시키고, 4％ 빙냉 완충 PFA를 관류시켰으며, 일군의 마우스는 관류시키지 않았다. 마우스의 눈을 적출하고, 즉각적으로 신선한 4％ PFA에서 하룻밤 동안 고정시켰다. 온조직 표본 망막을 위해, 눈을 절개하고, 전방 부분을 제거하였다. 아이컵(eyecup)을 10분 동안 히알루로니다제 (I-S 유형) (0.07 ㎎/㎖) (Sigma)에 함침시켜, 액화시키고 유리체 잔류물을 제거한 후, 10분 동안 PBS에서 3회 세정하고, 온조직 표본 망막을 수집하였다. 전체 눈 절편화를 위해, 눈을 4％ PFA 내의 30％ 수크로스 내에 2시간 동안 놓고, 15분 동안 PBS에서 3회 세정하였다. 눈을 O.C.T에 매립하고, 드라이 아이스 상에서 천천히 동결시킨 후, 냉동미세절단기로 시상 절편화하였다 (7 ㎛). 뇌를 수집하고, 즉각적으로 신선한 4％ PFA에서 하룻밤 동안 고정시켰다. 뇌를 30％ 수크로스 (4％ PFA 내) 구배 내에 놓았다. 뇌를 15분 동안 PBS에서 3회 세정하고 나서, O.C.T에 매립하고, 드라이 아이스 상에서 천천히 동결시킨 후, 냉동미세절단기로 관상 절편화하였다 (30 ㎛).Mice were anesthetized and perfused with 4% ice-cold buffer PFA, and a group of mice were not perfused. The eyes of the mice were harvested and immediately fixed in fresh 4% PFA overnight. For warm tissue specimen retinas, the eyes were incised and the anterior portion removed. The eyecup was impregnated with hyaluronidase (IS type) (0.07 mg / ml) (Sigma) for 10 minutes, liquefied and the vitreous residue was removed, washed three times in PBS for 10 minutes, Tissue specimen retinas were collected. For total eye fragmentation, the eyes were placed in 30% sucrose in 4% PFA for 2 hours and washed three times in PBS for 15 minutes. The eyes were embedded in O.C.T., frozen slowly on dry ice, and then sagitized (7 쨉 m) with a freezing micro-cutter. The brains were collected and immediately fixed in fresh 4% PFA overnight. The brains were placed in a 30% sucrose (in 4% PFA) gradient. The brain was rinsed three times in PBS for 15 minutes, then embedded in O.C.T., frozen slowly on dry ice, and then coronally sectioned (30 [mu] m) with a freezing micro-cutter.
실시예 11Example 11
인간의 부검용 눈Human eye for autopsy
알츠하이머 환자로부터의 부검용 눈을 <Alzheimer's Disease Research Center, Department of Pathology, University of Southern California> (Los Angeles, CA)로부터 IRB 프로토콜 99491 및 3201 하에 조달하였다. 건강한 기증자의 눈은 <National Disease Research Interchange> (NDRI, Philadelphia, PA)로부터 구입하였다. NDRI에는 관리 위원회에 의해 인가되고 <National Institutes of Health>의 감독을 받는 인간 조직 수집 프로토콜이 있다. 질환 눈 및 정상 눈을 고정시키고, 10％ 중성 완충 포르말린에서 보관하였다. 또한, 고정 없이 동결되고 -80℃에서 보관된 2개의 건강한 눈이 사용되었다. 이러한 눈들로부터 온조직 표본 망막을 제조하고, 면역조직화학에 의해 추가로 연구하였다.Autopsy eyes from Alzheimer's patients were procured under IRB protocols 99491 and 3201 from the Alzheimer's Disease Research Center, Department of Pathology, University of Southern California (Los Angeles, CA). Healthy donor eyes were purchased from National Disease Research Interchange (NDRI, Philadelphia, Pa.). NDRI has a human tissue collection protocol that is licensed by the Trustees and supervised by the National Institutes of Health. Disease eyes and normal eyes were fixed and stored in 10% neutral buffered formalin. In addition, two healthy eyes frozen without fixation and stored at -80 占 폚 were used. Tissue specimen retinas from these eyes were prepared and further studied by immunohistochemistry.
실시예Example 12 12
쿠르쿠민의 꼬리 정맥 주사Intravenous injection of curcumin
생체내 Aβ-플라크 영상화를 위해, AD-Tg 및 비-Tg 야생형 마우스에게 PBS 내의 쿠르쿠민 (7.5 ㎎/㎏/일, 연속 7일) 또는 PBS를 꼬리에 정맥내 주사하였다. 이어서, 뇌 및 눈을 냉동절편화하거나, 또는 온조직 표본 망막용으로 제조하였다. 별법적인 실시양태에서, 쿠르쿠민을 환자에게 경구 투여할 수 있다.For in vivo A [beta] -plaked imaging, AD-Tg and non-Tg wild-type mice were injected intravenously with the tail in a dose of curcumin (7.5 mg / kg / day, 7 consecutive days) or PBS in PBS. The brain and eyes were then either frozen sectioned or prepared for warm tissue specimen retinas. In an alternative embodiment, the quercumin may be orally administered to the patient.
실시예 13Example 13
면역조직화학Immunohistochemistry
뇌 냉동절편 (30 ㎛ 두께), 망막 횡단 절편 (냉동절편) (7 ㎛ 두께) 및 온조직 표본 망막을 20％ 말 혈청 (Invitrogen) 및 0.01-0.1％ 트리톤(Triton) X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)을 함유하는 투과/차단 용액으로 처리하였다. 절편들을 하룻밤 동안 4℃에서 10％ 차단 용액을 함유하는 PBS 내의 하기의 1차 항체들의 특정 조합물로 염색하였다: 마우스 항-Aβ [인간 아미노산 잔기 1-17; 클론 6E10 (1:100; Milipore, Temecula, CA)]. 절편들을 1시간 동안 실온에서 2차 항체와 함께 인큐베이션한 후, 1×PBS로 3회 세정하고, 4',6-디아미디노-2-페닐인돌, 디하이드로클로라이드 (DAPI, Vector Laboratories, Peterborough, UK)를 함유하거나 함유하지 않는 벡터쉴드(Vectorshield)를 사용하여 마운팅하였다. 1×PBS 내의 2차 항체 용액은 Cy-5-접합 당나귀 항-마우스 항체 (1:200; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)를 함유하였다. 1차 항체를 생략하면서 동일한 프로토콜로 음성 대조군을 프로세싱하여, 비-특이적 표지화를 평가하였다. 현미경 분석을 위해, 짜이스(Zeiss)의 아포톰(ApoTome) 형광을 사용하였다.20% horse serum (Invitrogen) and 0.01-0.1% Triton X-100 (Sigma-Aldrich) were added to the brain retinas (30 쨉 m thickness), retinal transverse sections , St. Louis, Mo.). The sections were stained with a specific combination of the following primary antibodies in PBS containing 10% blocking solution overnight at 4 ° C: mouse anti-Ap [human amino acid residues 1-17; Clone 6E10 (1: 100; Milipore, Temecula, CA). The sections were incubated with secondary antibody for 1 hour at room temperature, then washed 3 times with 1 x PBS and incubated with 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI, Vector Laboratories, UK) using a Vectorshield. The secondary antibody solution in 1x PBS contained Cy-5-conjugated donkey anti-mouse antibody (1: 200; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pa.). Negative controls were processed with the same protocol, omitting the primary antibody, to assess non-specific labeling. For microscopic analysis, Zeiss's ApoTome fluorescence was used.
실시예Example 14 14
쿠르쿠민 염색Coumucine staining
쿠르쿠민 (Sigma-Aldrich)을 0.5 M NaOH (pH=7.9)에 용해시킨 후, 즉각적으로 1×PBS에서 희석함으로써 0.1 ㎎/㎖의 쿠르쿠민 용액을 제조하였다. 뇌 및 망막 조직 냉동절편 (각각 30 ㎛ 및 7 ㎛ 두께) 및 온조직 표본 망막을 쿠르쿠민 용액으로 10분 동인 실온에서 염색한 후, 1×PBS에서 각각 15분 동안 3회 헹궜다. 샘플을 GVA 마운팅 배지 (Zymed)로 덮었다. A solution of 0.1 mg / ml of curcumin was prepared by dissolving quercumin (Sigma-Aldrich) in 0.5 M NaOH (pH = 7.9) and immediately diluting in 1x PBS. Brain and retinal tissue frozen sections (30 μm and 7 μm thick, respectively) and warm tissue retinas were stained with a solution of quercumin at room temperature for 10 minutes and then rinsed three times for 15 minutes each in 1 × PBS. The sample was covered with a GVA mounting medium (Zymed).
티오플라빈 S 및 T 및 일부 유도체, 콩고 레드(Congo Red) 및 유도체, 메톡시-X04, 피츠버그 화합물(Pittsburgh Compound)-B (PiB), DDNP, 크리사민-G 및 몇몇 가지가 포함되는, 생체 내에서 아밀로이드 플라크를 염색/표지화할 수 있는 추가적인 화합물들이 당업계에 공지되어 있다. 그러나, 하기의 장점으로 인해, 쿠르쿠민 및 이의 유도체가 동물 모델, 뿐만 아니라 인간에서의 아밀로이드 플라크의 생체내 광학 영상화에 매우 매력적이다. 쿠르쿠민은 통상적으로 사용되는 광학 스펙트럼에서 특이적이고 매우 밝은 신호를 생성하고, 매우 낮은 비용으로 시판된다. 쿠르쿠민에 관한 안전성 문제가 최소이고 (높은 투여량에서도), 심지어 항산화제로서 환자의 건강에 이로운 것으로 간주될 수 있다. 쿠르쿠민은 Aβ에 대한 시험관내 및 생체내 결합 특성이 매우 양호한 효과적인 리간드이고, 양호한 초기 뇌 흡수 및 뇌로부터의 배설률 (생체내 조영제에 대해 중요한 성질)을 제공한다.Which contains the thioflavin S and T and some derivatives, Congo Red and derivatives, methoxy-XO4, Pittsburgh Compound-B (PiB), DDNP, Crissamine- Additional compounds that are capable of staining / labeling amyloid plaques within the context of the present invention are known in the art. However, due to the following advantages, quercumin and its derivatives are very attractive to animal models, as well as in vivo optical imaging of amyloid plaques in humans. Quercumin produces a specific, very bright signal in the commonly used optical spectrum and is commercially available at very low cost. Safety problems with the curcumin are minimal (even at high doses) and can even be considered beneficial to the patient's health as an antioxidant. Quercumin is an effective ligand with very good in vitro and in vivo binding properties to A [beta] and provides good initial brain absorption and excretion from the brain (an important property for in vivo contrast agents).
실시예 15Example 15
정량dose
염색된 조직의 현미경사진을 액시오 이미저(Axio Imager) Z1 아포톰-장착 현미경 (전동식 Z-드라이브) + 액시오캠(AxioCam) MRm 모노크롬 카메라 버젼 3.0 (1388×1040 픽셀의 해상도, 6.45 ㎛×6.45 ㎛ 픽셀 크기, 동작 범위 >1:2200, 펠티어(Peltier)-냉각 센서로 인해 저-노이즈 영상을 전달함) 상에서 수득하였다. Aβ 플라크 개수 및 면적 (βm2)의 정량적 분석을 마우스 당 2개의 온조직 표본 망막으로부터 수행하였다 (n = 군 당 4마리의 마우스). 0.28 βm의 해상도로 40× 대물렌즈에서 포착된 각각의 영상은 0.04 ㎟의 영역, 및 스캐닝 깊이 60 ㎛ 이내의 시신경 유두 주변의 총 12개의 사각형 영역을 포함하였다 (전동식 스캐닝 스테이지를 사용하는 연속적인 초점면에서의 다중 가상 절편 영상). 평균 플라크 반경의 측정 (쿠르쿠민 염색 후)을 각각의 동물 군에 대해 완료한 후, 각각의 동물 군에서의 평균 플라크 면적을 계산하였다. 획득을 위해, 모든 영상에 대해 유사한 노출 시간 (약 75 ms) 및 동일한 게인(gain) 값 (0)을 사용하였다. 영상 후처리를 수행하지 않았다. 쿠르쿠민으로 염색된 Aβ플라크로부터의 방출 신호를 망막 조직 내의 배경 신호와 비교하여, 신호 대 배경 비율을 결정하였다. 영상들로부터의 계산된 신호 대 배경 노이즈 비율이 높았고, 3:1 내지 10:1 범위 내였다. 뇌 내의 Aβ 플라크 개수 및 면적 (βm2)의 정량적 분석을 해마 및 피질 영역을 포함하는 면적에 걸쳐 450 ㎛ 간격으로 마우스 당 3개의 관상 절편 (각각 2개의 반구)으로부터 결정하였다. 검사물의 각각의 시역으로부터의 광학 절편을 NIH 이미지(Image) J 프로그램 (National Institutes of Health) 내로 이입하였다. 흑백으로의 전환을 수행하여, 면역반응성 영역과 배경 영역을 구별하였다. 전체 면적 및 면역반응성의 정량적 수준을 표준화된 맞춤식 막대그래프-기반 역치 기술을 사용하여 결정한 후, 입자 분석을 적용하였다.Microscopic photographs of the stained tissue were taken with an Axio Imager Z1 apotom-mounted microscope (electric Z-drive) + AxioCam MRm monochrome camera version 3.0 (resolution of 1388 × 1040 pixels, 6.45 μm × 6.45 占 퐉 pixel size, operating range> 1: 2200, delivering a low-noise image due to a Peltier-cooled sensor). Quantitative analysis of Aβ plaque counts and area (βm2) was performed from two warm tissue-specimen retinas per mouse (n = 4 mice per group). Each image captured in a 40x objective at a resolution of 0.28 [beta] m contained an area of 0.04 mm < 2 > and a total of 12 square areas around the optic nerve head within a scanning depth of 60 [mu] m (continuous focus using an electric scanning stage Multivariate virtual slice images in the plane). After the measurement of the average plaque radius (after the curcumin staining) was completed for each animal group, the average plaque area in each animal group was calculated. For acquisition, a similar exposure time (about 75 ms) and the same gain value (0) were used for all images. No image post-processing was performed. The signal to background ratio was determined by comparing the emission signal from the A? Plaque stained with the curcumin to the background signal in the retina tissue. The calculated signal to background noise ratio from the images was high and was in the range of 3: 1 to 10: 1. Quantitative analysis of Aβ plaque counts and area (βm2) in the brain was determined from three tubular sections per mouse (2 hemispheres each) at 450 μm intervals across the area including the hippocampus and cortical areas. Optical sections from each field of view of the specimens were transferred into the NIJ Image (J) program (National Institutes of Health). Conversion to black and white was performed to distinguish the immunoreactive region from the background region. Quantitative levels of total area and immunoreactivity were determined using standardized customized bar graph-based thresholding techniques and then particle analysis was applied.
실시예Example 16 16
스펙트럼 및 멀티스펙트럼 영상화Spectral and multispectral imaging
스펙트럼 영상화는 모든 픽셀에서 정확한 광학적 서명을 생성시키는 다수의 순차적인 파장에서 물체의 디지털 영상을 제공한다. 쿠르쿠민으로 생체 내에서 표지된 Aβ 플라크의 형광 스펙트럼 서명을 하기의 설비를 사용하는 본 발명가들의 스펙트럼 영상화 시스템에 의해 포착하였다: 니콘(Nikon) 형광 현미경 (E800 및 TE2000), 수은 및 제논 아크 램프, CCD 카메라, AOTF (음향 광학 변조 필터)-기반 스펙트럼 영상 획득 시스템 (ChromoDynamics, Inc) [29] 및 사후분석 영상화 소프트웨어 (본 발명가들의 <Minimally Invasive Surgical Technologies Institute>에서 개발됨) [30]. 최종 영상은 분석된 물체의 크기 및 위치를 나타내는, 미가공 영상으로부터 추출된 스펙트럼 서명의 시각적인 모조색상 표현을 제공하였다. 멀티스펙트럼 영상화에서, 펄스(pulse) 레이저 및 라비젼(LaVision)의 피코스타(PicoStar) HR 게이트 카메라로 수행된 형광 수명 영상화가 스펙트럼 획득을 보충하였다.Spectral imaging provides a digital image of an object at multiple sequential wavelengths that produces an accurate optical signature at every pixel. Fluorescence spectroscopy signature of Aβ plaques labeled in vivo with quercumin was captured by spectral imaging systems of the inventors using the following equipment: Nikon fluorescence microscope (E800 and TE2000), mercury and xenon arc lamps, CCD Cameras, AOTF (Acoustic Optical Modulation Filter) -based spectral imaging systems (ChromoDynamics, Inc) [29], and post-analysis imaging software developed by the inventors of the Minimally Invasive Surgical Technologies Institute. The final image provided a visual mimic color representation of the spectral signature extracted from the raw image, indicating the size and location of the analyzed object. In multispectral imaging, fluorescence lifetime imaging performed with a pulse laser and LaVision's PicoStar HR gate camera supplemented spectral acquisition.
도 6은 본 발명의 실시양태에 따라 생체 내에서 Aβ 플라크를 진단, 예후, 및 분석하기 위한 스펙트럼 영상화 시스템 100의 순서도를 도해한다. 대상체 망막 110이 Aβ 플라크를 표지하도록 형광 마커로 염색된다. 그 직후에, 염색된 망막 110이 더 높은 해상도에서 형광 및 산란 신호를 가시화하도록 조정되는 영상화 장치 120에 의해 영상화된다. 영상화 장치 120에 폴리크롬 V 가변 스펙트럼 광원 130이 설비될 수 있다. 추가적인 실시양태에서, 스펙트럼 영상화 시스템 100에 배율 및 영상 세부묘사를 개선하도록 컬러 디지털 카메라 140 (예를 들어, 마이크로파이어) 및 하나 이상의 확대 렌즈가 통합될 수 있다. 영상화 소프트웨어 160을 사용한 사후 분석 영상 분할 및 분류에 의해 영상 획득 170이 달성된다. Figure 6 illustrates a flow diagram of a
도 7은 본 발명의 실시양태에 따라 Aβ 플라크를 진단, 예후, 및 분석하기 위한 스펙트럼 영상화 시스템 200의 순서도를 도해한다. 대상체 망막 210이 Aβ 플라크를 표지하도록 형광 마커로 염색된다. 그 직후에, 염색된 망막 210이 영상화 장치 220을 사용하여 영상화된다. 영상화 장치 220에 음향 광학 변조 필터 (AOTF) 230으로의 스펙트럼 영상화 및 게이트 카메라 240을 사용하는 형광 수명 영상화로 구성된 멀티-스펙트럼 영상화 기술이 설비될 수 있다. 영상화 소프트웨어 250을 사용한 사후 분석 영상 분할 및 분류에 의해 영상 획득 260이 달성된다. Figure 7 illustrates a flow diagram of a
실시예 17Example 17
마우스 망막의 Mouse retina 생체내In vivo 영상화 Imaging
AD-Tg 및 wt 마우스 망막을 쿠르쿠민 정맥내 주사 2시간 후에 영상화하였다. 마우스를 케타민 100 ㎎/㎖/㎏ 및 자일라진 20 ㎎/㎖/㎏으로 마취시켰다. 마우스 동공을 0.5％ 트로피카미드 안과용 용액 (Mydral; Bausch & Lomb)과 조합된 0.5％ 페닐에프린 하이드로클로라이드 안과용 용액 (Bausch & Lomb)으로 약 2 ㎜ 직경으로 확대시켰다. 영상화 프로세스 동안, 마우스를 입체현미경의 스테이지 상에 놓고, 칼슘 및 마그네슘이 보충된 PBS 한 방울로 눈을 덮었으며, 이는 눈 표면과 영상화 렌즈 사이의 광학적 커플링 매질 역할을 하였다. 더 높은 해상도에서 형광 및 산란 신호를 가시화하도록 조정된 변형 입체현미경 (라이카 S6E)을 사용하여 영상들을 포착하였다 (노출 시간 750 ms. 게인 4). 이러한 변형 입체현미경은 폴리크롬 V (Till Photonics) 가변 파장 광원, 마이크로파이어 컬러 디지털 카메라 (Optronics), 및 추가적인 6× (이중 볼록) 확대 렌즈를 포함하도록 조립되었고, 이때 초점 길이는 10 ㎝였다. 더 큰 시역을 가시화하고 비-특이적 반사 신호를 제거하기 위해, 여러 상이한 각도에서 영상들을 반복적으로 포착하였다.AD-Tg and wt mouse retinas were imaged after 2 hours of intravenous injection of curcumin. Mice were anesthetized with
실시예Example 18 18
통계 분석Statistical analysis
2-군 비교의 p 값에 대해 한쪽 꼬리 언페어드(unpaired) 스튜던트 t 테스트에 의해 결과를 분석하였다. 결과는 평균 ± SD로 표현된다.Results were analyzed by unpaired Student's t test for the p-values of the 2-group comparisons. Results are expressed as means ± SD.
본 발명의 주제의 다양한 실시양태들이 상세한 설명에서 상기에 기술된다. 이러한 설명들이 상기 실시양태들을 직접적으로 기술하지만, 당업자가 본원에서 제시되고 기술된 구체적인 실시양태들에 대한 변형 및/또는 변경을 생각할 수 있음이 이해된다. 이러한 설명의 범위 내에 속하는 임의의 이같은 변형 또는 변경이 또한 본원에 포함되는 것으로 의도된다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본 발명가들은 적용가능한 기술분야(들)의 당업자에게 통상적이고 익숙한 의미가 명세서 및 청구항 내의 단어 및 구절에 주어지는 것을 의도한다.Various embodiments of the subject matter of the present invention are described above in the detailed description. While such descriptions are described directly with the embodiments, it is understood that one of ordinary skill in the art may contemplate modifications and / or variations to the specific embodiments presented and described herein. Any such modifications or variations that fall within the scope of this description are also intended to be included herein. Unless specifically stated otherwise, the inventors intend for ordinary and familiar meanings to those skilled in the applicable art (s) to be given the words and phrases in the specification and claims.
본 출원의 출원 시점에 출원인에게 알려진 본 발명의 주제의 다양한 실시양태들의 상기의 설명이 제시되었고, 이는 실례 및 설명의 목적으로 의도된다. 본 명세서는 철저하거나 본 발명의 주제를 개시된 정확한 형태로 한정하도록 의도되지 않으며, 다수의 변형 및 변경이 상기 교시내용의 견지에서 가능하다. 기술된 실시양태들은 본 발명의 주제의 원리 및 이의 실제적인 적용을 설명하고 당업자가 본 발명의 주제를 다양한 실시양태에서, 그리고 구현된 특정 용도에 적합하게 다양하게 변형하면서 활용할 수 있도록 하는 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 주제가 이를 수행하기 위해 개시된 특정 실시양태에 한정되지 않도록 의도된다.The foregoing description of various embodiments of the subject matter of the invention known to the applicant at the time of filing of the present application is presented and is intended for purposes of illustration and explanation. The specification is not intended to be exhaustive or to limit the invention to the precise form disclosed, and many modifications and variations are possible in light of the above teachings. The described embodiments illustrate the principles of the subject matter of the invention and its practical application and are intended to enable those skilled in the art to utilize the subject matter of the invention in various embodiments and with various modifications as are suited to the particular use embodied therein . Accordingly, it is intended that the subject matter of the invention not be limited to the particular embodiments disclosed for carrying out this disclosure.
본 발명의 대상의 특정 실시양태들이 제시되고 기술되었지만, 본원의 교시내용을 기초로, 이러한 대상 및 이의 더 넓은 측면을 벗어나지 않으면서 변화 및 변형이 이루어질 수 있고, 따라서 첨부된 청구항이 모든 이같은 변화 및 변형을 이러한 주제의 진정한 취지 및 범주 내에 있는 바와 같이 자신의 범주 내에 포함한다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 일반적으로, 본원에서 사용된 용어는 "개방형" 용어로서 일반적으로 의도된다는 것이 당업자에게 이해될 것이다 (예를 들어, 용어 "포함하는(including)"은 "포함하지만 제한되지는 않음(including but not limited to)"으로 해석되어야 하고, 용어 "갖는(having)"은 "적어도 갖는(having at least)"으로 해석되어야 하며, 용어 "포함하다(includes)"는 "포함하지만 제한되지는 않는다(includes but is not limited to)"로 해석되어야 하는 것 등이다). While particular embodiments of the subject matter of the present invention have been shown and described, changes and modifications may be made without departing from the broader spirit and scope of the invention, on the basis of the teachings herein, It will be apparent to those skilled in the art that variations are included within the scope of the subject matter and within the scope of this subject matter. In general, it will be understood by those skilled in the art that the term is used in its ordinary sense as the term "open" (for example, the term "including" includes but is not limited to " to be interpreted as having, and the term " having " should be interpreted as having at least, and the term "includes" not limited to ").
참조문헌References
Claims (28)
를 포함하며, 여기서 형광 마커는 쿠르쿠민이고, 상기 영상은 광학 영상화 시스템을 이용하여 생성된 것이며, 상기 영상에서 염색된 Aβ 펩티드가 존재하는 경우 포유동물이 알츠하이머병에 걸린 것을 나타내는 것인, 포유동물에서 알츠하이머병을 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법.Detecting the presence of the stained A [beta] peptide from the image of the retina of the mammal stained with the fluorescent marker
Wherein the fluorescence marker is quercumin, the image is generated using an optical imaging system, and wherein the presence of stained A [beta] peptide in the image indicates that the mammal is afflicted with Alzheimer's disease A method for providing information for diagnosing Alzheimer's disease.
기존의 진단과 비교하여, 대상체의 망막 내의 염색된 Aβ 펩티드의 증가 또는 감소를 정량하는 단계
를 포함하며, 여기서 대상체의 망막 내의 염색된 Aβ 펩티드의 수준의 증가는 불량한 예후를 나타내는 것인, 포유동물에서 알츠하이머병을 예후하기 위한 정보를 제공하는 방법.Detecting the presence of a stained A [beta] peptide from an image of the retina of a subject stained with a fluorescent marker, wherein the fluorescent marker is curcumin and the image is generated using an optical imaging system; And
Quantifying the increase or decrease of the stained A [beta] peptide in the retina of the subject in comparison with the existing diagnosis
Wherein the increase in the level of stained A [beta] peptide in the retina of the subject is indicative of a poor prognosis.
를 포함하며, 여기서 형광 마커는 쿠르쿠민이고, 상기 영상은 광학 영상화 시스템을 이용하여 생성된 것인, 포유동물의 망막 내에서 Aβ 펩티드의 존재를 확인하기 위한 정보를 제공하는 방법.Detecting the presence of the stained A [beta] peptide from the image of the retina of the mammal stained with the fluorescent marker
Wherein the fluorescence marker is quercumin, and wherein the image is generated using an optical imaging system. ≪ Desc / Clms Page number 19 >
를 포함하며, 여기서 형광 마커는 쿠르쿠민이고, 상기 영상은 광학 영상화 시스템을 이용하여 생성된 것이며, 포유동물의 망막 내에서 염색된 Aβ 펩티드의 수준이 감소된 경우 알츠하이머병 치료가 유효한 것을 나타내는 것인, 포유동물에서 알츠하이머병 치료의 유효성을 평가하기 위한 정보를 제공하는 방법.Detecting the presence of the stained A [beta] peptide from the image of the retina of the mammal stained with the fluorescent marker
Wherein the fluorescence marker is quercumin and the image is generated using an optical imaging system and wherein the level of A [beta] peptide stained in the retina of the mammal is decreased indicating that Alzheimer's disease treatment is effective, A method of providing information for evaluating the efficacy of Alzheimer's disease treatment in a mammal.
를 포함하며, 여기서 형광 마커는 쿠르쿠민이고, 상기 영상은 광학 영상화 시스템을 이용하여 생성된 것이며, 포유동물의 망막 내에서 염색된 Aβ 펩티드의 수준이 감소된 경우 Aβ 펩티드와 관련된 망막 질병에 대한 치료가 유효한 것을 나타내는 것인, 포유동물에서 Aβ 펩티드와 관련된 망막 질병의 치료의 유효성을 평가하기 위한 정보를 제공하는 방법.Detecting the presence of the stained A [beta] peptide from the image of the retina of the mammal stained with the fluorescent marker
Wherein the fluorescence marker is quercumin, the image is generated using an optical imaging system, and the treatment for retinopathy associated with A [beta] peptide when the level of stained A [beta] peptide in the retina of the mammal is decreased Wherein the method is provided to provide information for evaluating the efficacy of treatment of retinopathy associated with A [beta] peptide in a mammal.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9820608P | 2008-09-18 | 2008-09-18 | |
| US61/098,206 | 2008-09-18 | ||
| PCT/US2009/057569 WO2010033861A1 (en) | 2008-09-18 | 2009-09-18 | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020167031982A Division KR20160135843A (en) | 2008-09-18 | 2009-09-18 | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20110074972A KR20110074972A (en) | 2011-07-05 |
| KR101679438B1 true KR101679438B1 (en) | 2016-11-24 |
Family
ID=42039899
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020167031982A KR20160135843A (en) | 2008-09-18 | 2009-09-18 | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
| KR1020117006156A KR101679438B1 (en) | 2008-09-18 | 2009-09-18 | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020167031982A KR20160135843A (en) | 2008-09-18 | 2009-09-18 | Optical method for the detection of alzheimer's disease |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9839699B2 (en) |
| EP (1) | EP2323696B1 (en) |
| JP (4) | JP5771525B2 (en) |
| KR (2) | KR20160135843A (en) |
| CN (1) | CN102186504B (en) |
| CA (1) | CA2735869C (en) |
| DK (1) | DK2323696T3 (en) |
| ES (1) | ES2694278T3 (en) |
| IL (1) | IL211540A (en) |
| MX (1) | MX349711B (en) |
| PT (1) | PT2323696T (en) |
| TR (1) | TR201816335T4 (en) |
| WO (1) | WO2010033861A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220122120A (en) | 2021-02-26 | 2022-09-02 | (주)블라우비트 | Apparatus and method for diagnosing alzheimer's using retinal optic nerve |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| UA81216C2 (en) * | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| CA2590337C (en) | 2004-12-15 | 2017-07-11 | Neuralab Limited | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
| US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
| ES2498040T3 (en) | 2007-07-27 | 2014-09-24 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases with humanized anti-beta antibodies |
| JO3076B1 (en) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Immunotherapy regimes dependent on apoe status |
| US9839699B2 (en) * | 2008-09-18 | 2017-12-12 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Optical method for detecting Alzheimer's disease by systemic administration of curcumin |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| US20120094308A1 (en) * | 2009-07-23 | 2012-04-19 | Universidad Complutense De Madrid | Kit and method for the premortem in vitro detection of alzheimer's disease |
| CA2832517C (en) * | 2010-05-05 | 2021-07-13 | Melanie Crombie Williams CAMPBELL | Method and system for imaging amyloid beta in the retina of the eye in association with alzheimer's disease |
| EP2619590A2 (en) * | 2010-09-20 | 2013-07-31 | Technische Universität Darmstadt | Compounds for diagnosing neurodegenerative diseases at the retina |
| DE102010047060A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Carl Zeiss Meditec Ag | Diagnosis of dementia, preferably Alzheimer's disease, comprises supplying extracted components from a suction to an analysis unit and analyzing components in analysis unit for presence of e.g. paired helical filaments-tau plaques |
| US9808155B2 (en) | 2010-10-25 | 2017-11-07 | Neurovision Imaging Llc | Apparatus to detect amyloid in a patient user's retina in a diagnosis, advancement and prognosis of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative disorders and ocular diseases |
| CN103228200A (en) * | 2010-10-25 | 2013-07-31 | 史提芬·维杜纳 | Apparatus and method for detecting amyloid protein in a retina in a diagnosis, advancement, and prognosing of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative dissorders, and ocular diseases |
| EP3922270A1 (en) * | 2011-12-09 | 2021-12-15 | Regents of the University of Minnesota | Hyperspectral imaging for early detection of alzheimer's disease |
| TWI470205B (en) * | 2011-12-30 | 2015-01-21 | Ind Tech Res Inst | Optical detection method |
| JP6276252B2 (en) * | 2012-03-26 | 2018-02-07 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッドＹｅｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ． Ｌｔｄ | Cell markers for diagnosis of Alzheimer's disease and cell markers of Alzheimer's disease progression |
| KR101493935B1 (en) * | 2012-10-17 | 2015-02-16 | 아주대학교산학협력단 | Amyloid-β-specific two-photon fluorescent probe, and method for imaging amyloid-β plaque in vivo using the same |
| JP6133053B2 (en) * | 2012-12-21 | 2017-05-24 | 浜松ホトニクス株式会社 | Method and apparatus for quantifying amyloid aggregates |
| US9320724B2 (en) | 2013-02-13 | 2016-04-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of improving cognition and increasing dendritic complexity in humans with down syndrome and compositions therefor |
| US9782075B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-10-10 | I2Dx, Inc. | Electronic delivery of information in personalized medicine |
| US11089959B2 (en) | 2013-03-15 | 2021-08-17 | I2Dx, Inc. | Electronic delivery of information in personalized medicine |
| US9521975B2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-12-20 | Neurovision Imaging Llc | Method for detecting a disease by analysis of retinal vasculature |
| JP6324032B2 (en) * | 2013-06-14 | 2018-05-16 | 国立研究開発法人科学技術振興機構 | Aβ peptide oxidant |
| CN103776679B (en) * | 2014-01-29 | 2017-03-15 | 华中科技大学 | A kind of method for reducing biological sample background fluorescence |
| US9889087B2 (en) | 2014-06-10 | 2018-02-13 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Intranasal delivery of β2-adrenergic receptor agonists for improving cognition in humans with down syndrome and compositions therefor |
| CN113520301A (en) | 2016-03-10 | 2021-10-22 | 明尼苏达大学董事会 | Spatio-spectral imaging method and retinal imaging apparatus |
| ITUA20164712A1 (en) | 2016-06-28 | 2017-12-28 | Centervue S P A | Ophthalmic machine for the acquisition of fluorescence images of the retina and relative method of use. |
| AU2017305979A1 (en) * | 2016-08-01 | 2019-02-07 | Cognoptix, Inc. | System and method for detecting tau protein in ocular tissue |
| CN107561264B (en) * | 2017-09-05 | 2020-03-27 | 齐鲁工业大学 | β amyloid plaque identification and measurement method based on image processing |
| JP7404253B2 (en) * | 2017-11-27 | 2023-12-25 | レティスペック インコーポレイテッド | Hyperspectral image-guided Raman ocular imager for Alzheimer's disease pathology |
| CA3088201A1 (en) * | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Centre For Eye Research Australia Limited | Method and system for quantifying biomarker of a tissue |
| EP3803416A4 (en) * | 2018-05-31 | 2022-05-18 | Amydis, Inc. | Compositions and methods for detection of traumatic brain injury |
| EP3989806A4 (en) * | 2019-06-27 | 2024-01-10 | Univ Macquarie | Diagnosis and monitoring of neurodegenerative diseases |
| CN110403572A (en) * | 2019-07-01 | 2019-11-05 | 清华大学 | The unmarked pathology imaging diagnosis method of Alzheimer's disease and device |
| US11923091B2 (en) | 2020-05-21 | 2024-03-05 | Baruch SCHLER | Methods for remote visual identification of congestive heart failures |
| US11276498B2 (en) | 2020-05-21 | 2022-03-15 | Schler Baruch | Methods for visual identification of cognitive disorders |
| CN113008850B (en) * | 2021-02-07 | 2022-02-25 | 首都医科大学宣武医院 | Application of diagnosing Alzheimer disease and device for diagnosing Alzheimer disease |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040152068A1 (en) | 2000-08-21 | 2004-08-05 | Goldstein Lee E. | Ocular diagnosis of Alzheimer's disease |
| US20040192588A1 (en) | 2001-01-14 | 2004-09-30 | Michal Eisenbach-Schwartz | Pharmaceutical compositions comprising modified cns-derived peptides for promoting nerve regeneration and prevention of nerve degeneration |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6198532B1 (en) * | 1991-02-22 | 2001-03-06 | Applied Spectral Imaging Ltd. | Spectral bio-imaging of the eye |
| PT101290B (en) * | 1993-06-18 | 2000-10-31 | Fernandes Jose Guilherme Da Cu | FLUOROMETER FOR THE MEDICATION OF THE CONCENTRATION OF EYE LOCAL FLUOROPHORES |
| EP0808124B1 (en) | 1995-01-03 | 2003-04-16 | Non-Invasive Technology, Inc. | Optical coupler for in vivo examination of biological tissue |
| AU759945B2 (en) * | 1998-08-20 | 2003-05-01 | Regents Of The University Of California, The | Methods for labeling beta-amyloid plaques and neurofibrillary tangles |
| EP1322959A1 (en) * | 2000-08-21 | 2003-07-02 | The General Hospital Corporation | Methods for diagnosing a neurodegenerative condition |
| JP2005511498A (en) | 2001-04-27 | 2005-04-28 | ザ・ブリガム・アンド・ウイメンズ・ホスピタル・インコーポレイテッド | Visual diagnosis of Alzheimer's disease |
| US20040167217A1 (en) | 2003-02-26 | 2004-08-26 | Giovanni Scapagnini | Neuroprotective effects of polyphenolic compounds |
| CN102584813B (en) * | 2003-05-14 | 2016-07-06 | Ngc药物公司 | Compound and the purposes in regulating amyloid beta thereof |
| WO2005040337A2 (en) * | 2003-05-20 | 2005-05-06 | The Regents Of The University Of California | METHODS FOR BINDING AGENTS TO β-AMYLOID PLAQUES |
| US7575321B2 (en) * | 2003-10-30 | 2009-08-18 | Welch Allyn, Inc. | Apparatus and method of diagnosis of optically identifiable ophthalmic conditions |
| US8841326B2 (en) * | 2004-02-12 | 2014-09-23 | Stc.Unm | Therapeutic curcumin derivatives |
| EP2023919A4 (en) * | 2006-05-08 | 2010-12-22 | Molecular Neuroimaging Llc | Compounds and amyloid probes thereof for therapeutic and imaging uses |
| DE102006030382A1 (en) * | 2006-06-29 | 2008-01-03 | Carl Zeiss Meditec Ag | Method and device for optical detection on the eye |
| US7678819B2 (en) * | 2006-12-07 | 2010-03-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Acetylene derivatives and their use for binding and imaging amyloid plaques |
| EP2171478A4 (en) * | 2007-03-30 | 2013-01-30 | Univ California | In vivo imaging of sulfotransferases |
| CA2688811A1 (en) * | 2007-05-21 | 2008-11-27 | Neuroptix Corporation | Ophthalmic formulations of amyloid-beta contrast agents and methods of use thereof |
| US20090123373A1 (en) * | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Yanming Wang | Amyloid-imaging agents |
| PL2247558T3 (en) * | 2008-02-14 | 2022-05-02 | Eli Lilly And Company | Novel imaging agents for detecting neurological dysfunction |
| US20110208064A1 (en) * | 2008-07-31 | 2011-08-25 | Ran Chongzhao | Curcumin Derivatives for Amyloid-Beta Plaque Imaging |
| US9839699B2 (en) * | 2008-09-18 | 2017-12-12 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Optical method for detecting Alzheimer's disease by systemic administration of curcumin |
| US7854510B2 (en) | 2008-10-16 | 2010-12-21 | Steven Roger Verdooner | Apparatus and method for imaging the eye |
| EP2549913B1 (en) | 2010-03-23 | 2016-09-07 | NeuroVision Imaging LLC | Apparatus and method for imaging an eye |
| CN103228200A (en) | 2010-10-25 | 2013-07-31 | 史提芬·维杜纳 | Apparatus and method for detecting amyloid protein in a retina in a diagnosis, advancement, and prognosing of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative dissorders, and ocular diseases |
| US9808155B2 (en) | 2010-10-25 | 2017-11-07 | Neurovision Imaging Llc | Apparatus to detect amyloid in a patient user's retina in a diagnosis, advancement and prognosis of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative disorders and ocular diseases |
-
2009
- 2009-09-18 US US13/119,596 patent/US9839699B2/en active Active
- 2009-09-18 CA CA2735869A patent/CA2735869C/en active Active
- 2009-09-18 KR KR1020167031982A patent/KR20160135843A/en not_active Application Discontinuation
- 2009-09-18 KR KR1020117006156A patent/KR101679438B1/en active IP Right Grant
- 2009-09-18 PT PT09815306T patent/PT2323696T/en unknown
- 2009-09-18 CN CN200980136743.9A patent/CN102186504B/en active Active
- 2009-09-18 JP JP2011528014A patent/JP5771525B2/en active Active
- 2009-09-18 WO PCT/US2009/057569 patent/WO2010033861A1/en active Application Filing
- 2009-09-18 EP EP09815306.7A patent/EP2323696B1/en active Active
- 2009-09-18 DK DK09815306.7T patent/DK2323696T3/en active
- 2009-09-18 TR TR2018/16335T patent/TR201816335T4/en unknown
- 2009-09-18 ES ES09815306.7T patent/ES2694278T3/en active Active
- 2009-09-18 MX MX2011002930A patent/MX349711B/en active IP Right Grant
-
2011
- 2011-03-03 IL IL211540A patent/IL211540A/en active IP Right Grant
-
2014
- 2014-03-31 JP JP2014071034A patent/JP5988445B2/en active Active
-
2015
- 2015-08-26 JP JP2015166449A patent/JP2015214588A/en active Pending
-
2016
- 2016-12-01 JP JP2016233922A patent/JP2017052793A/en active Pending
-
2017
- 2017-10-31 US US15/798,612 patent/US10512699B2/en active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040152068A1 (en) | 2000-08-21 | 2004-08-05 | Goldstein Lee E. | Ocular diagnosis of Alzheimer's disease |
| US20040192588A1 (en) | 2001-01-14 | 2004-09-30 | Michal Eisenbach-Schwartz | Pharmaceutical compositions comprising modified cns-derived peptides for promoting nerve regeneration and prevention of nerve degeneration |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220122120A (en) | 2021-02-26 | 2022-09-02 | (주)블라우비트 | Apparatus and method for diagnosing alzheimer's using retinal optic nerve |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20160135843A (en) | 2016-11-28 |
| JP2015214588A (en) | 2015-12-03 |
| MX2011002930A (en) | 2011-10-11 |
| DK2323696T3 (en) | 2018-11-26 |
| TR201816335T4 (en) | 2018-11-21 |
| CN102186504B (en) | 2018-04-06 |
| CA2735869C (en) | 2020-08-18 |
| ES2694278T3 (en) | 2018-12-19 |
| EP2323696A4 (en) | 2014-10-01 |
| US9839699B2 (en) | 2017-12-12 |
| JP2012503012A (en) | 2012-02-02 |
| KR20110074972A (en) | 2011-07-05 |
| EP2323696A1 (en) | 2011-05-25 |
| IL211540A0 (en) | 2011-05-31 |
| JP5988445B2 (en) | 2016-09-07 |
| US10512699B2 (en) | 2019-12-24 |
| PT2323696T (en) | 2018-11-20 |
| MX349711B (en) | 2017-08-09 |
| US20110286932A1 (en) | 2011-11-24 |
| WO2010033861A1 (en) | 2010-03-25 |
| JP2017052793A (en) | 2017-03-16 |
| JP5771525B2 (en) | 2015-09-02 |
| EP2323696B1 (en) | 2018-09-05 |
| CA2735869A1 (en) | 2010-03-25 |
| CN102186504A (en) | 2011-09-14 |
| US20190022255A1 (en) | 2019-01-24 |
| JP2014122245A (en) | 2014-07-03 |
| IL211540A (en) | 2015-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101679438B1 (en) | Optical method for the detection of alzheimer's disease | |
| Hart et al. | Ocular indicators of Alzheimer’s: exploring disease in the retina | |
| Grimaldi et al. | Inflammation, neurodegeneration and protein aggregation in the retina as ocular biomarkers for Alzheimer’s disease in the 3xTg-AD mouse model | |
| Mirzaei et al. | Alzheimer’s retinopathy: seeing disease in the eyes | |
| van Wijngaarden et al. | Emerging ocular biomarkers of Alzheimer disease | |
| Perez et al. | β-amyloid deposition and functional impairment in the retina of the APPswe/PS1ΔE9 transgenic mouse model of Alzheimer’s disease | |
| Koronyo-Hamaoui et al. | Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model | |
| Chu et al. | α-synuclein aggregation reduces nigral myocyte enhancer factor-2D in idiopathic and experimental Parkinson's disease | |
| Vandenabeele et al. | The App NL-G-F mouse retina is a site for preclinical Alzheimer’s disease diagnosis and research | |
| Latina et al. | Systemic delivery of a specific antibody targeting the pathological N-terminal truncated tau peptide reduces retinal degeneration in a mouse model of Alzheimer’s Disease | |
| Cao et al. | ARCAM-1 facilitates fluorescence detection of amyloid-containing deposits in the retina | |
| Ren et al. | Microglial VPS35 deficiency impairs Aβ phagocytosis and Aβ-induced disease-associated microglia, and enhances Aβ associated pathology | |
| Xia et al. | Early alterations of neurovascular unit in the retina in mouse models of tauopathy | |
| Oliveira-Souza et al. | Retinal changes in the Tg-SwDI mouse model of Alzheimer’s disease | |
| US20100146646A1 (en) | Method of monitoring retinopathy | |
| Ng et al. | Chemotherapy promotes astrocytic response to Aβ deposition, but not Aβ levels, in a mouse model of amyloid and APOE | |
| Frame et al. | Alterations in retinal signaling across age and sex in 3xTg Alzheimer’s disease mice | |
| Koronyo-Hamaoui et al. | Advances in retinal imaging: retinal amyloid imaging | |
| Habiba et al. | A sequential deposition of amyloid beta oligomers, plaques and phosphorylated tau occurs throughout life in the canine retina | |
| JP7221483B2 (en) | Normal-tension glaucoma model and evaluation method for preventive or therapeutic effect of drug to be evaluated on normal-tension glaucoma | |
| Tullo et al. | Sex-focused analyses of M83 A53T hemizygous mouse model with recombinant human alpha-synuclein preformed fibril injection identifies female resilience to disease progression: A combined magnetic resonance imaging and behavioural study. | |
| Smith | Labelling and Longitudinal In Vivo Imaging of Retinal Ganglion Cells | |
| Pow et al. | AMD-like lesions in the rat retina: a latent consequence of perinatal hemorrhage | |
| West-Mays et al. | Conditional Deletion of AP-2β in the Cranial Neural Crest Results in Anterior Segment Dysgenesis and Early-Onset Glaucoma | |
| Drost | Characterization and manipulation of myeloid cells in the healthy and diseased Central Nervous System |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| A107 | Divisional application of patent | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190620 Year of fee payment: 4 |