KR101567735B1

KR101567735B1 - 면역 조절제 및 글루코사민을 포함하는 건선 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101567735B1
Application number: KR1020140175935A
Authority: KR
Inventors: 이애영; 김창현
Original assignee: 동국대학교 산학협력단
Priority date: 2014-12-09
Filing date: 2014-12-09
Publication date: 2015-11-09
Also published as: WO2016093474A1; US20170360882A1

Abstract

본 발명은 면역 조절제 및 글루코사민을 포함하는 건선 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여는, 부작용으로 인하여 장기 투여가 어렵고, 중단 시 원상으로 병변이 악화되기 쉬운 사이클로스포린의 용량을 감량하면서도, 사이클로스포린과 글루코사민의 단독 투여보다 매우 높은 건선 치료 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다.

Description

면역 조절제 및 글루코사민을 포함하는 건선 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or improving or treating psoriasis comprising immunomodulating agent and glucosamine}

본 발명은 면역 조절제 및 글루코사민을 포함하는 건선 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

건선(psoriasis)은 피부에서 염증성 세포 침윤의 만성적 활성화와 표피 각질 세포의 조절 장애에 의해 유도된 면역-매개 자가면역 피부 질환이다. 조직학적으로, 건선은 피부 조직 검사에서 표피의 비후(thickening)와 인설(scaling), 및 과증식성 부전각화증(hyperproliferative parakeratosis)으로 여겨지고 있다. 아직, 건선의 발병 메커니즘이 완전히 규명되지는 않았으며, 염증성 사이토카인과 T 세포와 같은 면역 세포 침윤 간의 상호작용을 포함하는 복잡한 메커니즘과 관련되어 있는 것으로 보고되고 있으며, 최근 연구에서 Th17(T helper 17) 세포 및 IL-17A, IL-22 및 IL-23과 같은 Th-17-매개 사이토카인이 건선 촉발을 유도한다고 보고되었다.

이러한 건선의 일반적인 치료에는 국소 투약, 광선 요법 및 내복 투약법이 있다. 국소 치료는 스테로이드, 콜타르, 안트랄린, 비타민 D3 및 그의 유사체, 레티노이드 및 햇볕 등을 포함하는 치료이며, 이러한 국소 치료는 피부 얇아짐, 튼살, 화상, 자극 및 광과민증의 부작용이 있다. 또한, 스테로이드는 내성을 유도할 수 있어 이후의 스테로이드 치료에 영향을 준다. 광선 요법은 자외선 B 또는 자외선 A와 함께 쏘랄렌의 투여를 포함하며, 피부가 빨리 노화되고, 피부암 발병률이 증가된다는 단점이 있다.

한편, 가장 심한 건선에 적용하는 내복 투여는 사이클로스포린과 같은 면역조절제를 투여하는 것이고, 현재 가장 많이 사용되고 있는 방법이다. 하지만, 장시간 사용에 따른 신장독성(nephrotoxicity)이나 고혈압을 일으킬 수 있기 때문에 주의 깊은 관찰이 필요하다. 따라서, 현재 건선의 치료제로 승인받은 사이클로스포린을 장기적으로 투여하기 위하여 투여용량을 줄이면서도 건선을 효과적으로 치료할 수 있는 치료법 개발이 주요한 과제의 대상이 되고 있고, 이에 대한 연구가 이루어지고 있으나, 아직 효과적인 치료법에 대해서 알려진 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 건선을 효과적으로 치료하는 방법에 대하여 연구 노력한 결과, 사이클로스포린을 글루코사민과 병용 투여하면, 사이클로스포린의 용량을 줄이면서도 건선 치료효능을 현저히 향상시키는 것을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.

이에, 본 발명은 사이클로스포린 및 글루코사민을 유효성분으로 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건선 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 사이클로스포린 및 글루코사민을 유효성분으로 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건선 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 사이클로스포린과 글루코사민은 1 대 5 내지 1 대 2000의 중량비로 함유될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 사이클로스포린은 사이클로스포린 A일 수 있다.

본 발명은 항건선 치료제인 사이클로스포린과 병용되는, 글루코사민을 포함하는 항건선 치료효과 증진용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 조성물은 상기 항건선 치료제와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여될 수 있다.

본 발명은 사이클로스포린과 글루코사민을 개체에 병용투여하는 단계를 포함하는 건선 치료방법을 제공한다.

본 발명은 사이클로스포린과 글루코사민을 개체에 병용투여하는 단계를 포함하는 건선 효과 증진 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여는, 부작용으로 인하여 장기 투여가 어렵고, 중단 시 원상으로 병변이 악화되기 쉬운 사이클로스포린의 용량을 감량하면서도, 사이클로스포린과 글루코사민의 단독 투여보다 매우 높은 건선 치료 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다.

도 1은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 글루코사민(100, 200, 300 및 400 mg/kg)을 단독 투여한 후, 몇 가지 대표적인 증상을 cumulative score (홍반+인설+비후)를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 사이클로스포린 A(10, 20, 및 40 mg/kg)를 단독 투여한 후, 몇 가지 대표적인 증상을 cumulative score (홍반+인설+비후)를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 후, (a)는 각각의 경우의 임상 피부 점수를 확인한 결과, (b)는 각각의 경우에서의 마우스의 임상적 특징을 나타낸 것이다.
도 4는 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 후, (a)는 혈청에서 (b)는 피부 샘플에서 IL-17A 레벨을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 후, (a)는 혈청에서 (b)는 피부 샘플에서 IL-22 레벨을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 후, (a)는 혈청에서 (b)는 피부 샘플에서 IL-23 레벨을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 후, (a)는 혈청에서 (b)는 피부 샘플에서 TNF-α 레벨을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 후, 등 피부 샘플에 대하여 H&E 염색을 실시한 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 후, 등 피부 샘플의 표피 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 후, 비장 크기를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 후, 비장 무게를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 IMQ-유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 후, CD4⁺CD25⁺Treg 세포의 수를 측정한 결과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 사이클로스포린 및 글루코사민을 유효성분으로 포함하는 건선 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 약학적 조성물 및 화장료 조성물을 포함한다.

즉, 본 발명에서는 현재 건선의 치료제로 승인받은 사이클로스포린을 글루코사민과 병용 투여하면, 사이클로스포린의 용량을 줄이면서도 건선 치료효능이 현저히 향상되는 것에 특징이 있으며, 이로 인해 사이클로스포린에 따른 부작용을 줄일 수 있다.

본 발명에서, "사이클로스포린"은 생체의 면역반응을 억제하는 면역조절제로서, 바람직하게는 사이클로스포린 A를 사용할 수 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, "글루코사민"은 바닷게 껍질이나 새우 껍질의 주성분인 키토산의 분해산물이다. 바닷게 또는 새우 껍질의 주성분은 키틴과 키토산으로, 키틴은 2-아세트아미도-2-데옥시-베타-D-글루코오스(N-아세틸글루코사민)으로 구성되어 있으며, 키토산은 키틴의 탈아세틸화가 일어난 다당류로서 폴리(베타-(1,4)-글루코사민)이다. 글루코사민은 다음과 같은 화학식 1의 구조를 가질 수 있다.

본 발명에서는 글루코사민 대신에 글루코사민 유도체가 이용될 수도 있다. 본 발명에서 용어 "글루코사민 유도체"는 글루코사민의 하이드록시기의 수소가 아실 또는 알킬화합물로 치환된 것으로, 하기 화학식 2의 구조를 가지는 것을 말한다.

상기 식에서, R은 탄소수가 2 내지 18개인 아실 기 또는 1 내지 5인 직쇄 또는 측쇄 알킬로서, 바람직하게는 아세틸 프로피오닐, 부티릴, 펜타오닐, 헥사노 일, 헵타노일, 옥타노일, 노나노일, 데카노일, 운데카노일, 라우릴, 트리데카노일, 미리스틸, 펜타데카노일, 팔미토일, 마가릴 또는 스테아릴기 등의 아실기이거나, 또는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 sec-부틸기 등의 알킬기일 수 있다.

또한, 본 발명에 사용되는 글루코사민 또는 그의 유도체는 그 사용 용도 등에 따라 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 염의 형태는, 예를 들어 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 황산염, 글루코 사민 또는 글루코사민 유도체의 염산염, 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 말레이트 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직한 염의 형태는 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 황산염이다.

본 발명에 따른 조성물에서 사이클로스포린과 글루코사민은 1 대 5 내지 1 대 2000의 중량비로 함유되는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 1 대 5 내지 1 대 500의 중량비로 함유될 수 있고, 가장 바람직하게는 1 대 5 내지 1 대 100의 중량비로 함유될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 멸균 주사용액, 좌제 및 경피 투여용 제제로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 필요에 따라 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제형화한다.

본 발명에 따른 조성물은 경구 투여용 고상 제제로 제형화되는 것이 바람직하다. 경구 투여를 위한 고상 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되는데, 이러한 고상 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로스 또는 락토스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 경구 투여용 액상 제제로 제형화되는 것이 바람직하다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 이러한 액상 제제에는 통상적으로 사용되는 불활성 희석제(예를 들면, 정제수, 에탄올, 리퀴드 파라핀) 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 비경구 투여를 위한 제제로 제형화될 수도 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 멸균된 수용액으로는 한스 용액 (Hank's solution), 링거 용액 (Ringer' solution) 또는 물리적으로 완충된 염수와 같은 적절한 완충 용액을 이용할 수 있으며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 이용될 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 이용할 수도 있다. 한편, 좌제의 경우에는 이의 통상적인 기제인 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

인간 환자에게 투여되는 경우, 본 발명에 따른 조성물의 총 1일 사용량은 의학적 판단 범위 내에서 처치에 의해 결정될 수 있다. 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 조성물의 분비율, 치료 기간을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.

바람직하게는 사이클로스포린은 0.025mg/kg 이상 2.9 mg/kg이하로 글루코사민과 혼합복용될 수 있으며, 복용 횟수는 환자의 피부 상태에 따라 적절히 가감하여 하루 1회 내지 3회 복용할 수 있다. 또한 사이클로스포린의 경우 피부 병변 상태에 따라, 최고 5mg/kg까지 혼합하여 복용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 피부 외용제 또는 화장료 제제 등으로 제형화될 수 있다. 상기 피부 외용제는 연고제, 경고제, 스프레이제, 현탁액, 유액, 크림, 젤 등을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 유효성분 외에도 필요에 따라 본 발명의 효과를 저하시키지 않는 범위 내에서 피부 외용제에 일반적으로 사용하는 각종 성분, 예를 들면 수용성 성분, 분말 성분, 유분, 계면활성제, 보습제, 점도 조절제, 방부제, 산화방지제, 향료, 색소 등을 배합하는 것이 가능하다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형은 임의로 선택할 수 있으되, 종래의 화장료제형인 피부외용연고, 에센스, 미백 크림, 로션, 에멀젼, 팩, 일반화장수, 스킨밀크, 크림, 세럼, 미용비누, 유연화장수, 약용화장수, 헤어토닉, 전신세정제, 오일젤과 같은 여러 가지 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 및 향료로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 첨가제를 추가로 포함할 수 있으며, 바람직한 제형으로 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 에센스, 팩의 제형을 가질 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 염증 부위에 도포함으로써 건선을 완화, 개선할 수 있다. 도포양은 환자의 염증 부위에 따라 적절히 가감될 수 있으며, 하루 1회 내지 5회 반복 도포하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 항건선 치료제인 사이클로스포린과 병용되는, 글루코사민을 포함하는 항건선 치료효과 증진용 약학적 조성물을 제공한다. 이때, 상기 조성물은 상기 항건선 치료제와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 실험준비 및 실험방법

1-1. 실험동물 준비

8주령 암컷 C57BL/6 마우스는 Orient Bio (Seongnam, Korea)으로부터 구입하였다. 마우스는 실험을 하기 전 일주일 정도 적응시켰고, 동국대학교 의과대학의 실험동물 시설에서 유지되었고, 동국대학교 병원의 동물 관리 및 사용위원회에서 모든 연구를 승인하였다.

1-2. 약물 및 시약 준비

글루코사민(Glu)과 사이클로스포린 A(CsA)는 각각 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO,USA) 및 종근당(Seoul, korea)으로부터 구입하였다. 또한, IMQ 크림(5%) (Aldara)은 동아제약으로부터 구입하였다.

1-3. C57BL/6 마우스에서 건선-유사 병변 유도

C57BL/6 마우스에서 건선-유사 피부 증상을 유발하기 위해 IMQ 크림(5%) (Aldara; 3M Health Care, UK)을 사용하였다.

보다 구체적으로, 전기 면도기를 사용하여 C57BL/6 마우스의 등에 있는 털을 면도한 후, 스킨-헤어-리무버(skin-hair-remover)(Niclean, Ildong, Korea)로 처리하였다. 0일 째에, 정상 그룹을 제외한 다른 모든 그룹은 14일 동안 면도된 등 부위에 매일 62.5mg의 IMQ 크림을 처리하였다.

한편, 첫 감작(fist sensitization) 후 7일 째에, 마우스를 여러 그룹으로 나눈 후, 글루코사민 및 사이클로스포린 A는 용량별로 단독 또는 병용투여를 하였고, 음성 대조군인 정상 그룹에는 오직 vehicle cream (Petrolatum)만을 처리하였다.

1-4. 피부 병변의 점수

(1) 홍반(erythema), (2) 인설(scaling) (3) 비후(thickening)의 정도에 대하여 0 (없음), 1 (경증), 2 (중간 정도), 3 (심각함)으로 점수화하였다. 누적 피부염 점수(cumulative dermatitis score)(홍반+인설+비후)는 등 피부의 건선의 중증도를 나타낸다(scale 0-9).

1-5. 사이토카인 생성 분석

혈청 내의 사이토카인 수준을 측정하기 위해, 최종 투여 후 24시간에 마우스 혈청을 수집한 후, 이를 분석할 때까지 -70℃에 보관하였다. 피부 조직 내의 사이토카인 수준을 측정하기 위해, 마우스의 등 피부를 제거하고 -80℃에 보관하였다. 이후, Bullet Blender ^TM Blue (Next Advance, Averill Park, NY)를 사용하여 4℃에서 피부 조직을 균질화시켜 상청액(supernatant)을 얻은 후, 이를 -30℃에 보관하였다. 마우스의 혈청 및 피부 조직 내의 IL-17A, IL-22, IL-23, 및 TNF-α 농도는 Quantikine mouse IL-17A (R&D system, Minneapolis, MN, USA), IL-22, IL-23, 및 TNF-α (eBioscience, San Diego, CA, USA)를 사용하여 측정하였다. 한편, ELISA는 제조사의 설명서에 따라 수행하였다.

1-6. 조직학적 분석

파라 포름 알데히드로 고정되고, 파라핀에 봉입된 마우스 등 피부를 슬라이스 한 후, H&E(hematoxylin and eosin)으로 염색을 하였다. 조직학적 발견에 기초하여, 건선의 대표적인 몇가지 증상들(표피 비후, 각질층 및 염증세포 침윤)은 표피 또는 진피의 맹검 방식(blind manner)으로 평가되었다.

1-7. regularoty T (Treg) 세포의 유세포 분석

비장으로부터 준비된 단일세포 현탁액(single-cell suspension)을 FITC-anti-CD4 (GK1.5) 및 PE-anti-CD25 (280406) (R&D System, Minneapolis, Minnesota, USA)으로 염색한 후, PBS, 2% FBS에서 4℃, 30분, 암 조건에서 인큐베이션시켰다. 상기 샘플들은 두 번 세척하고, CellQuest software (Becton Dickinson)을 사용하여 분석하였다.

실시예 2. 글루코사민과 사이클로스포린 A(CsA) 단독 투여에 의한 건선 치료 효과 검증

실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 글루코사민(100, 200, 300 및 400 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10, 20, 및 40 mg/kg)를 용량별로 각각 7일 동안 경구투여한 후, 실시예 1-4의 방법에 따라 몇 가지 대표적인 증상을 cumulative score (홍반+인설+비후)를 이용하여 측정하였고, 그 결과를 각각 도 1 및 도 2에 나타내었다.

도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 고용량의 글루코사민(400 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(40 mg/kg)를 각각 투여한 경우, 마우스의 건선 유사 피부 병변의 중증도가 억제됨을 확인할 수 있었다. 하지만, 저용량의 글루코사민(100, 200 및 300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)을 각각 투여한 경우에는 유의한 효과가 나타나지 않았다.

따라서, 이후 실시예에서는 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)으로 실험을 진행하였다.

실시예 3. 저용량의 글루코사민과 사이클로스포린 A(CsA) 병용 투여에 의한 건선 치료 효과 검증

3-1. 임상 피부 점수 비교를 통한 효과 확인

실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 일주일 동안 하루에 한번 병용투여(경구투여)한 후, 실시예 1-4의 방법에 따라 임상 피부 점수를 확인하였고, 그 결과를 도 3의 (a)에 나타내었다. 이때 임상 피부 점수는 홍반(erythema), 인설(scaling) 및 비후(thickening)의 증상을 기초로 각각의 점수를 합하여 산출되었다. 한편, 각각의 경우에서의 마우스의 임상적 특징을 도 3의 (b)에 나타내었다.

도 3의 (a) 및 (b)에 나타낸 바와 같이, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 경우, 임상 피부 점수 및 임상적인 측면에서 뚜렷하게 병변이 개선되는 것을 확인할 수 있었다. 한편, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우와 대조군(IMQ 단독) 사이에는 별다른 차이가 없었다.

3-2. 사이토카인 레벨 비교를 통한 효과 확인

글루코사민과 사이클로스포린 A(CsA) 병용 투여에 의한 건선 치료 효과를 면역반응의 변화로 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

즉, 실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 단독 또는 병용투여한 후, 실시예 1-5의 방법에 따라 혈청 및 피부 샘플에서 사이토카인(IL-17A, IL-22, IL-23 및 TNF-α)의 레벨을 측정하였고, 그 결과를 각각 도 4 내지 도 7에 나타내었다.

도 4 내지 도 7에 나타낸 바와 같이, 혈청 및 피부 샘플 모두에서 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 경우, IL-17A, IL-22, IL-23의 Th17-매개-사이토카인의 레벨이 현저히 억제됨을 확인할 수 있었다. 또한, Th1과 관련된 proinflammatory cytokine인 TNF-α의 레벨도 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(10 및 20 mg/kg)를 병용투여한 경우에 현저히 억제됨을 확인할 수 있었다. 한편, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우와 대조군(IMQ 단독) 사이에는 별다른 차이가 없었다.

3-3. 조직병리학적 특징 비교를 통한 효과 확인

실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 단독 또는 병용투여한 후, 실시예 1-6의 방법에 따라 등 피부 샘플에 대하여 H&E 염색을 실시하였고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.

도 8에 나타낸 바와 같이, IMQ-유도된 마우스의 등 피부에서는 표피 비후(epidermal thickening), 부전각화증(parakeratosis), 과각화증(hyperkeratosis), 표피(epidermis) 및 진피(dermis)로의 염증성 세포 침윤 등의 조직학적 특징을 확인할 수 있었다. 하지만, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 경우에, 표피 비후(epidermal thickening), 부전각화증(parakeratosis) 및 진피(dermis)로의 세포 침윤이 현저히 감소됨을 확인할 수 있었다.

추가적으로, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 단독 또는 병용투여한 후, 등 피부 샘플의 표피 두께도 측정하였고, 그 결과를 도 9에 나타내었다.

도 9에 나타낸 바와 같이, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 경우에, 표피 두께가 현저히 감소됨을 확인할 수 있었다.

3-4. 비장 무게 비교를 통한 효과 확인

이전 연구에서는 IMQ-유도된 건선 마우스 모델에서 비장의 크기 및 무게가 현저히 증가하는 것으로 보고되었다. 이에, 실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 단독 또는 병용투여한 후, 마우스를 희생시키고 비장을 제거하여 비장의 크기 및 무게를 확인하였고, 그 결과를 각각 도 10 및 도 11에 나타내었다.

도 10 및 도 11에 나타낸 바와 같이, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 경우에 비장의 크기 및 무게가 현저히 감소됨을 확인할 수 있었다.

3-5. regularoty T (Treg) 세포 수 비교를 통한 효과 확인

실시예 1-3에 유도된 건선 유사 마우스 모델에 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 단독 또는 병용투여한 후, 실시예 1-7의 방법에 따라 CD4⁺CD25⁺Treg 세포의 수를 측정하였고, 그 결과를 도 12에 나타내었다.

도 12에 나타낸 바와 같이, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우에 비하여, 저용량의 글루코사민(300 mg/kg) 및 사이클로스포린 A(20 mg/kg)를 병용투여한 경우에 CD4⁺CD25⁺Treg 세포의 수가 현저히 증가함을 확인할 수 있었다. 한편, 저용량의 글루코사민 및 사이클로스포린 A를 단독 투여한 경우와 대조군(IMQ 단독) 사이에는 별다른 차이가 없었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

Th1 또는 Th17 매개 사이토카인 억제에 의한 건선 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 조성물은 사이클로스포린과 글루코사민을 1 대 10 내지 1 대 30의 중량비로 함유하며,
상기 Th17 매개 사이토카인은 IL-17A, IL-22 또는 IL-23이고, 상기 Th1 매개 사이토카인은 TNF-α인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 사이클로스포린은 사이클로스포린 A인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
Th1 또는 Th17 매개 사이토카인 억제에 의한 건선 개선용 화장료 조성물로서,
상기 조성물은 사이클로스포린과 글루코사민을 1 대 10 내지 1 대 30의 중량비로 함유하며,
상기 Th17 매개 사이토카인은 IL-17A, IL-22 또는 IL-23이고, 상기 Th1 매개 사이토카인은 TNF-α인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
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제4항에 있어서, 상기 사이클로스포린은 사이클로스포린 A인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
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