KR101537758B1 - 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법 - Google Patents

초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 초오, 고련피 및 소리쟁이로부터 유용성분을 효과적으로 추출하는 방법을 제공한다. 본 발명은 유용성분을 포함하는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물 및 이를 포함하는 충해 방제용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 진딧물에 대해 효과적인 생물학적 살충제로 개발될 가능성이 매우 높다. 이러한 천연 살충제를 사용함으로써 화학살충제의 사용량을 줄여 환경친화적인 방제작업에 기여할 수 있다.

Description

초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법{Method for Preparing Extract of Aconitum ciliare Decaisne, Melia azedarach Linne var. japonica Makino and Rumex crispus L.}
본 발명은 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
진딧물은 곤충강 매미목 진딧물과에 속하는 해충으로 전 세계 4,700종, 한국에는 10과 350종이 서식하고 있는 것으로 보고되어 있다. 몸길이는 2-4㎜ 정도이며, 단위생식으로 번식하고, 기주식물이 다양하며 전 세계적으로 분포한다. 초목의 줄기, 새싹, 잎에 모여서 살며 식물의 즙액을 빨아먹으므로 대부분 해충으로 분류되고 있다. 몸은 매우 연약하고 제5배마디와 제6배마디 등판 사이의 양 옆에 뿔관이 있는 것이 특징이다. 그 모양은 원기둥, 사다리, 고리 모양 등 여러가지이며, 뿔관이 없는 것도 있다. 배마디는 8개이고 제9배마디등판은 꼬리로 변한다. 알로 월동하고 3월 하순~4월 상순에 부화하면 간모가 된다. 이것은 날개가 없는 암컷이며 다 자라면 알을 낳는 것이 아니라 혼자서 새끼를 낳는데 새끼들이 자라면 어미와 똑같은 날개 없는 암컷이 된다. 몇 세대를 이렇게 되풀이해 번식하므로 기주 식물의 가지가 온통 진딧물로 덮이게 된다. 이러는 동안에 차차 날개 돋친 암컷(유시충)이 생겨 분산하게 된다. 또한, 진딧물은 몸을 외부의 적으로부터 방어하는 무기로서 뿔관에서 분비되는 끈끈한 액체를 이용한다. 이 액체를 이용해 포식충의 주둥이를 부자유스럽게 만들어 위기를 면하거나 또는 많은 밀랍가루를 분비해 몸을 보호하는 것도 있다. 진딧물의 먹이는 식물의 즙액이므로 새끼를 낳기 위한 영양분, 즉 단백질이 부족하고 탄수화물은 과다하므로 남는 당분을 배설물로 배출한다. 이 배설물을 먹으려고 작은 개미, 기생벌, 파리 등이 많이 모이게 된다. 또한 잎에 떨어진 배설물(감로)에 그을음병균이 발생하면 잎이 까맣게 더렵혀지고 엽록소가 파괴되므로 광합성작용의 저해되어 상품가치가 떨어지게 된다. 진딧물은 직접 식물의 즙액을 빨아 해를 끼칠 뿐 아니라, 복숭아혹진딧물, 목화진딧물 등과 같이 각종 작물에 식물바이러스병을 매개하여 이중으로 해를 끼치는 경우도 많다. 진딧물의 천적으로는 꽃등에류, 진디벌류, 무당벌레류, 풀잠자리류 등이 있다.
진딧물의 방제를 위해 주로 화학농약 등의 진딧물방제제를 사용하여 왔으나, 화학농약은 토양의 산성화 및 오염 문제, 인축에의 독성문제, 농약성분의 잔류로 인한 환경문제 등을 유발한다. 최근 환경문제에 대한 인식 제고와 소비자들의 친환경식품 선호현상으로 인해 화학농약을 대체할 수 있는 친환경농자재에 대한 관심이 커지고 있으며 그 사용도 점차 확대되고 있다. 화학농약을 대체할 수 있는 친환경농자재로는, 식물에서 추출한 천연물 농약의 사용 및 천적을 활용한 생물적 방제 인자의 사용이 있다. 이중 천연추출물을 이용한 진딧물방제의 경우 대부분 효과가 객관적으로 검증되지 않은, 농민 개개인의 민간요법 차원인 경우가 많다. 또, 몇몇 제조사에 의해 상용화가 시도된 제품들도 있으나 방제효과의 한계, 제조방법의 까다로움, 제한된 유통기간 등의 문제로 화학농약을 대체하여 상용화되기에는 아직까지 해결해야 할 문제를 많이 갖고 있다. 특히, 방제효과가 떨어지는 제품의 경우 천적 개체수 증가에 따른 2차적인 문제를 유발할 수 있어 바람직한 방제방법이라고 할 수 없다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 작물에 해를 입히는 해충을 화학적 살충제를 사용하지 않는 환경친화적인 방법으로 방제하기 위한 충해 방제제를 개발하기 위해 연구 노력하였다. 그 결과, 초오, 고련피 및 소리쟁이 혼합 추출물이 진딧물에 대해 강한 방제 효과를 갖는다는 것을 실험적으로 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 충해 방제용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 작물에 살포하는 단계를 포함하는 충해를 방제하는 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 초오(Aconitum ciliare Decaisne), 고련피(Melia azedarach Linne var. japonica Makino) 및 소리쟁이(Rumex crispus L.) 추출물의 제조방법을 제공한다:
(a) 초오, 고련피 및 소리쟁이에 유기용매, 물 또는 이들의 혼합물을 처리 하는 단계; 상기 유기용매는 에탄올, 메탄올, 아세톤, 헥산, 에틸아세테이트, 아세트산, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되고;
(b) 상기 단계 (a)의 결과물을 40-80℃에서 감압 추출하는 단계;
(c) 상기 단계 (b)의 결과물을 여과하는 단계;
(d) 상기 여과 결과물을 감압 농축하여 추출물로서 농축액을 수득하는 단계.
본 발명자들은 작물에 해를 입히는 해충을 화학적 살충제를 사용하지 않는 환경친화적인 방법으로 방제하기 위한 충해 방제제를 개발하기 위해 연구 노력하였고 그 결과, 초오, 고련피 및 소리쟁이 혼합 추출물이 진딧물에 대해 강한 방제 효과를 갖는다는 것을 실험적으로 규명하였다.
본 발명의 방법의 기본적인 기술적 사상은 초오, 고련피 및 소리쟁이로부터 살충 효과를 나타내는 유효성분인 아코니틴 및 콰시인을 다량으로 수득할 수 있는 추출물 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명은 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 제조방법 및 그의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 방법을 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명에 따르면, 건조된 초오, 고련피 및 소리쟁이를 분쇄한 후, 추출용매를 처리한다. 본 발명의 방법에는 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide) 및 (v) DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF를 포함한다.
보다 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 추출용매는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 부틸아세테이트, (h) 1,3-부틸렌글리콜, (i) 헥산 및 (j) 아세트산을 포함한다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명의 추출물은 에탄올, 메탄올, 물 및 아세트산의 혼합물을 초오, 고련피 및 소리쟁이에 처리하여 수득한 것이며, 가장 바람직하게는 에탄올과 메탄올 혼합물 및 물과 아세트산 혼합물을 7:3의 부피비로 혼합한 혼합물을 초오, 고련피 및 소리쟁이에 처리하여 수득한 것이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 초오, 고련피 및 소리쟁이에 추출용매를 처리한 다음, 바람직하게는 40-80℃에서, 보다 바람직하게는 50-70℃ 온도에서 상압 및 감압을 실시하여 추출한다. 상압 압력은 바람직하게는 300-850 mmHg이고, 보다 바람직하게는 400-800 mmHg이며, 보다 더 바람직하게는 500-760 mmHg이다. 상압은 바람직하게는 4-8 시간 동안 실시한다. 이어서, 음압으로 감압하여 추출한다. 감압 시 압력은 바람직하게는 음압 300-850 mmHg이고, 보다 바람직하게는 음압 400-800 mmHg이며, 보다 더 바람직하게는 음압 500-760 mmHg이다. 감압은 바람직하게는 2-4 시간 동안 실시한다. 감압 추출은 당업계에 공지된 다양한 감압 추출기를 이용하여 실시할 수 있다. 그 다음, 감압 추출 결과물을 여과한다. 여과는 당업계에 공지된 다양한 여과방법을 이용하여 실시할 수 있다. 이어서 여과 결과물을 감압 농축하여 추출물로서 농축액을 수득한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 ‘추출물’은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명에서 이용되는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 하기의 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 초오, 고련피 및 소리쟁이으로부터 추출한 추출물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물은 아코니틴(aconitine) 및 콰시인(quassin)을 포함한다. 추출물은 바람직하게는 아코니틴 0.8-1.5 중량%, 콰시인 0.8-1.4 중량%, 보다 바람직하게는 아코니틴 9-1.3 중량%, 콰시인 0.9-1.2 중량%를 포함한다.
본 발명의 다른 일 양태에 양태에 따르면, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양태에 양태에 따르면, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 충해 방제용 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 살충 성분을 포함하는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물에 의해 충해 방재 효과를 나타낸다.
본 발명에서 사용되는 용어 “충해”는 해충에 의해 발생하는 작물 손상을 의미하며, 작물에 충해를 입히는 해충에는 선충류, 연체 동물, 절지 동물 및 곤충, 진드기 및 진딧물을 포함하는 무척추 동물이 포함된다. 본 발명에서 충해는 보다 바람직하게는 진딧물에 의해 발생한 것이고, 가장 바람직하게는 목화진딧물에 의해 발생한 것이다.
본 발명의 다른 일 양태에 양태에 따르면, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 작물에 살포하는 단계를 포함하는 충해를 방제하는 방법을 제공한다.
본 발명의 조성물이 적용될 수 있는 작물은 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 자두, 살구 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(ⅰ) 본 발명은 초오, 고련피 및 소리쟁이로부터 유용성분을 효과적으로 추출하는 방법을 제공한다.
(ⅱ) 본 발명은 유용성분을 포함하는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물 및 이를 포함하는 충해 방제용 조성물을 제공한다.
(ⅲ) 본 발명의 조성물은 작물 충해 방제에 사용될 수 있다.
(ⅳ) 본 발명의 조성물은 효과적인 생물학적 살충제로 개발될 가능성이 매우 높으며, 이러한 천연 살충제를 사용함으로써 화학살충제의 사용량을 줄여 환경친화적인 방제작업에 기여할 수 있다.
도 1은 초고속 진공 저온 추출기에 대한 사진이다.
도 2는 약용 식물 추출물의 성상[추출물 1:메탄올/물/빙초산(70/30/1, V/V/V); 추출물 2:에탄올/물/빙초산(70/30/1, V/V/V); 추출물 3, 에탄올/메탄올/물/빙초산(30/40/30/1, V/V/V/V)]을 나타낸 사진이다.
도 3은 아코니틴 표준품의 회귀 검량선을 나타낸 그래프이다.
도 4는 콰시인 표준품의 회귀 검량선을 나타낸 그래프이다.
도 5는 아코니틴 표준품 농도별 크로마토그램[25, 50, 100, 200, 400(mg/L)]을 나타낸 그래프이다.
도 6은 콰시인 표준품 농도별 크로마토그램[50, 100, 200, 400(mg/L)]을 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예 1: 추출 방법에 따른 살충 약효 성분 함유량 평가
1-1: 약용 식물 추출물의 제조
초오, 고련피 및 소리쟁이의 추출은 수직으로 환류 냉각관을 부착시킨 초고속 진공 저온 추출기 COSMOS-660(경서기계산업, 한국, 도 1)에 시료 5배의 에탄올-메탄올-물-빙초산 혼합 용액 비율을 여러 가지 조건을 사용하여 50-70℃의 범위의 수욕상에서 상압 추출(500-760 mmHg/4-8시간)과 감압 추출(음압 500-760 mmHg/2-4시간)을 거쳐 추출한 후 여과하여 감압 농축 농도(2025 Brix, %) 조건에 따라 농축한 다음 4℃ 냉장에 보관하면서 실험에 사용하였다(표 1). 초오, 고련피 및 소리쟁이를 건조 중량으로 각각 200g씩을 사용하여 조건에 따라 추출한 후 감압 농축하여 그 농축액을 얻었다. 각 추출물의 살충 성분과 고형물의 함유량은 표 2와 같았다. 표 2의 결과에 의하면 동일 조건에서 추출물 2(에탄올/물/빙초산(70/30/1))에서의 아코니틴 및 콰시인 함량은 각각 0.87%와 0.79%였으며, 아코니틴 함량은 추출물 1(메탄올/물/빙초산(70/30/1))에서 0.95%, 추출물 3(에탄올/메탄올/물/빙초산(30/40/30/1))에서 1.15%로 높게 나타났으며, 콰시인 함량은 각각 1.01%와 0.98%로 높았다. 모든 추출물의 추출 용매 조건에서 추출 온도(5070℃)와 추출 시간(48시간) 조건은 살충 유효 성분의 함량에는 영향을 미치지는 못하였다. 추출물 3의 조건에서 아코니틴 함량이 가장 높았고 콰시인의 함량은 추출물 1의 조건에서 가장 높게 나왔으나 큰 차이가 없는 것으로 판단되어 살충 유효 성분인 아코니틴 및 콰시인의 동시 추출 조건은 추출물 3의 조건이 효과적이라고 평가하였다.
약용 식물의 추출 조건
구분 추출 용매 혼합 비율(V/V/V) 추출 온도(℃) 추출 시간(시간)
1 메탄올/물/빙초산(70/30/1) 50-70 4-8
2 에탄올/물/빙초산(70/30/1) 50-70 4-8
3 에탄올/메탄올/물/빙초산(30/40/30/1) 50-70 4-8
약용 식물 추출물의 살충 성분 함유량
추출물 추출 용매 혼합 (V/V/V) 추출온도
(℃)/시간		 고형물농도
Brix(%)		 살충성분(%)
아코니틴 콰시인
1 메탄올/물/빙초산
(70/30/1)		 70/4 19.4 0.95 1.01
2 에탄올/물/빙초산
(70/30/1)		 70/4 20.8 0.87 0.79
3 에탄올/메탄올/물/빙초
(30/40/30/1)		 70/4 20.6 1.15 0.98
1-2: 약용 식물 추출물의 살충 유효 성분 분석
약용 식물 추출물의 살충 유효 성분으로 알려져 있는 아코니틴 및 콰시인을 분석하기 위한 HPLC 측정법을 실시하였다. 아코니틴 및 콰시인 표준품과 추출물들의 분석은 표 3의 조건에서 동일하게 수행하였다. 아코니틴 표준액은 아코니틴(M.W 642.70, Approx, 95 % Sigma, 미국) 52.7 mg에 0.1 M HCl 적량 및 0.5 M NaOH 2 ml를 가하여 정확히 50 ml로 제조하였고, 콰시인(M.W 388.45, Approx 96.6 %, Chromadex, 미국) 표준액은 콰시인 10 mg에 MeOH를 가하여 정확히 10 ml로 제조하였다. 아코니틴 살충 유효 성분 분석 조건은 HPLC(Agilent Technologies 1260 Infinity, 미국) 크로마토그램의 양호한 분리를 위하여 250 mm×4.6 mm I.d.(Zobax CN, 5㎛, Agilent, 미국)의 컬럼과 아세토니트릴-인산염(70:30)의 혼합 용매로 표 3과 같은 조건으로 검량 회귀 방정식을 작성하였다(도 3 및 5).
또한, 콰시인 살충 유효성분 분석은 HPLC 크로마토그램의 양호한 분리를 위하여 250 mm × 4.6 mm I.d.(Restec Ultra C18, 5㎛, Agilent, U.S.A)의 컬럼과 메탄올에 녹인 0.1 % 포름산 용액과 물에 녹인 0.1 % 포름산 용액을 등용매 분석 조건으로 5 % 농도를 5분 동안 유지하고 그런 다음 95% 될 때까지 20분 이상을 유지하고 난 후에 95 % 농도를 5분 동안 유지하는 환경에서 표 3과 같은 조건으로 검량 회귀 방정식을 작성하였다(도 4 및 6). 살충 유효 성분인 아코니틴의 회귀 방정식은 Y=3.0833X+1.5875(r2=1.0000)이었고 콰시인의 회귀 방정식은 Y=14.9055X1.2926 (r2=0.9997)이었다. 다양한 조건에서 추출한 모든 추출물들의 살충 유효 성분의 분석은 각각의 검량 회귀 방정식에 적용하여 산출하였다. 약용 식물 추출액들의 살충 유효 성분인 아코니틴 및 콰시인의 HPLC의 피크 면적을 대입하여 추출물들의 아코니틴 및 콰시인의 함유량을 측정하였다(표 4).
HPLC 분석 조건
조건 아코니틴 콰시인
컬럼 Zorbax CN 컬럼 Restec C18 컬럼
이동상 아세토니트릴-pH 3.0, 인산버퍼 (70:30) 0.1% 포름산,
메탄올/물
유속 0.5 ml/분 0.5 ml/분
탐지기 254 ± 40 nm 250 ± 40 nm
주입 부피 5.0 ㎕ 5.0 ㎕
컬럼 온도 30℃ 25℃
약용 식물 고형 추출물들의 HPLC에 의한 아코니틴 및 콰시인의 함유량
추출물 추출 용매 혼합 (V/V/V) HPLC 피크 면적(mAU) 살충성분(%)
아코니틴 콰시인 아코니틴 콰시인
1 메탄올/물/빙초산
(70/30/1)		 29,169.61 150,499.54 0.95 1.01
2 에탄올/물/빙초산
(70/30/1)		 26.672.13 118,721.01 0.87 0.79
3 에탄올/메탄올/물/빙초
(30/40/30/1)		 35,582.87 146,594.30 1.15 0.98
실시예 2: 고효율 추출 조건으로 사용한 조추출물의 획득 및 시험평가
살충 유효 성분 최적의 추출물 3을 이용하여 조제한 시제품을 이용하여 오이 목화진딧물의 방제 현장 적용 시험을 아래와 같은 방법으로 실시하였다. 표 5와 같이 시험구를 배치한 다음, 표 6에 기재된 조건으로 약제를 처리하였다. 구체적인 약제 희석 배수, 처리 시기 및 방법은 표 7과 같다. 약제 처리를 완료한 후, 약제처리 전 및 최종약제처리 3,7 일 후 구당 100주, 1주당 100엽에 대한 성충, 약충의 생충수를 총 3회 조사하여 생충률을 계산하였다. 최종 약제처리 3일 및 7일 후 방제가 결과는 각각 표 8 및 9와 같다.
시험구 배치
구 분 처리수 반복수 총 구수 구당 면적(m2) 소요면적(m2)
약 효 3 3 9 25 225
약제 처리 기구 및 처리 조건
구 분 사 양
처리 방법/기구 엔진동력살포기
노즐 Yamaho D5, 2ea
살포각도 110°
살포거리 50 cm
희석제 지하수
약제 희석 배수, 처리 시기 및 방법
시험약제
(상표명)		 주성분
함량(%)		 희석배수
및 사용량		 처리시기 및 방법
시험구 아코니틴
0.24 %
500배		 발병초 7일간격 3회 경엽처리
콰시인
0.17 %
1,000배		 발병초 7일간격 3회 경엽처리
대조구
(디노테퓨란)		 20.0 % 1,000배 발병초 7일간격 3회 경엽처리
최종 약제처리 3일 후 방제가 조사
구 분 약제처리전밀도
(마리/구)		 희석배수 생충률(%) 유의차
(DMRT)		 방제가
(%)
시험구 322.8 500배 19.2 b 80.8
1,000배 24.6 b 75.4
대조구(디노테퓨란) 342.6 1,000배 12.6 a 87.4
최종 약제처리 7일 후 방제가 조사
구 분 약제처리전밀도
(마리/구)		 희석배수 생충률(%) 유의차
(DMRT)		 방제가
(%)
시험구 322.8 500배 16.8 b 83.2
1,000배 20.3 b 79.7
대조구(디노테퓨란) 342.6 1,000배 9.6 a 90.4
시험구와 대조구에 대한 유의성을 조사한 결과, 각각의 처리구와 비교하여 통계적 유의성이 나타났다. 본 시험 결과를 종합하면, 시험 약제의 오이 목화진딧물에 대한 방제 효과는 최종 약제 처리 3일 후 500배량에 대하여 80.8%, 1,000배량에 대하여 75.4%를 나타냈으며, 최종 약제 처리 7일 후 500배량에 대하여 83.2%, 1,000배량에 대하여 79.7%를 나타냈다. 기준량 및 배량에서 방제가의 살포 방법, 성충 밀도 등을 고려할 때 두 가지 방제가의 비교는 큰 의미가 없는 것으로 판단된다. 결과적으로 본 발명의 시험 약제는 오이 목화진딧물에 대해 작물 충해 관리용 친환경 유기농 자재로써 실용성이 있다고 판단된다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 다음의 단계를 포함하는 초오(Aconitum ciliare Decaisne), 고련피(Melia azedarach Linne var. japonica Makino) 및 소리쟁이(Rumex crispus L.) 추출물의 제조방법으로서 상기 방법에 의해 추출물은 아코니틴을 0.9-1.3 중량% 및 콰시인을 0.9-1.2 중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법:
    (a) 초오, 고련피 및 소리쟁이에 에탄올과 메탄올 혼합물 및 물과 아세트산 혼합물을 70:31의 부피비로 처리 하는 단계;
    (b) 상기 단계 (a)의 결과물을 40-80℃에서 항온반응 시키는 단계;
    (c) 상기 항온반응 결과물을 감압하는 단계;
    (d) 상기 단계 (c)의 결과물을 여과하는 단계;
    (e) 상기 여과 결과물을 감압 농축하여 추출물로서 농축액을 수득하는 단계.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제 1 항의 방법에 의해 제조된 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물.
  8. 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 아코니틴을 0.9-1.3 중량% 및 콰시인을 0.9-1.2 중량% 포함하는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 충해 방제용 조성물:
    (a) 초오, 고련피 및 소리쟁이에 에탄올과 메탄올 혼합물 및 물과 아세트산 혼합물을 70:31의 부피비로 처리하는 단계;
    (b) 상기 단계 (a)의 결과물을 40-80℃에서 항온반응 시키는 단계;
    (c) 상기 항온반응 결과물을 감압하는 단계;
    (d) 상기 단계 (c)의 결과물을 여과하는 단계;
    (e) 상기 여과 결과물을 감압 농축하여 추출물로서 농축액을 수득하는 단계.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 충해는 진딧물에 의해 발생하는 것을 특징으로 하는 충해 방제용 조성물.
  10. 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 아코니틴을 0.9-1.3 중량% 및 콰시인을 0.9-1.2 중량% 포함하는 초오, 고련피 및 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 작물에 살포하는 단계를 포함하는 충해를 방제하는 방법:
    (a) 초오, 고련피 및 소리쟁이에 에탄올과 메탄올 혼합물 및 물과 아세트산 혼합물을 70:31의 부피비로 처리하는 단계;
    (b) 상기 단계 (a)의 결과물을 40-80℃에서 항온반응 시키는 단계;
    (c) 상기 항온반응 결과물을 감압하는 단계;
    (d) 상기 단계 (c)의 결과물을 여과하는 단계;
    (e) 상기 여과 결과물을 감압 농축하여 추출물로서 농축액을 수득하는 단계.
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