KR101473748B1

KR101473748B1 - 문주란 추출물을 이용한 항비만 조성물 및 항고지혈증 조성물

Info

Publication number: KR101473748B1
Application number: KR1020130039240A
Authority: KR
Inventors: 정용환; 강세찬; 오대주; 함영민; 윤원종; 박수영; 고미희; 임해숙
Original assignee: 재단법인 제주테크노파크; 주식회사 아이지에스
Priority date: 2013-04-10
Filing date: 2013-04-10
Publication date: 2014-12-18
Also published as: KR20140122490A

Abstract

본 발명은 문주란 추출물을 이용한 항비만 조성물 및 항고지혈증 조성물을 개시한다. 본 발명에서 문주란 추출물은 지방세포로의 분화 억제 활성과 중성지방 축적 억제 활성을 갖고, 또한 PPARγ, C/EBRα, C/EBRβ 등의 전사인자, aP2 등의 지방세포 특이적 단백질의 발현 억제 활성을 가지며, 고지방식이가 급여된 비만 유도 실험동물에 투여될 때도 실험동물의 체중을 감소시키고 혈중 지질 농도를 낮추는 활성을 갖는다.

Description

문주란 추출물을 이용한 항비만 조성물 및 항고지혈증 조성물{A Composition for Improving Obesity and Hyperlipidemia Using an Extract of Crinum asiaticum}

본 발명은 문주란(Crinum asiaticum) 추출물을 이용한 항비만 조성물 및 항고지혈증 조성물에 관한 것이다.

비만은 에너지의 섭취와 소모의 불균형으로 인하여 체내에 에너지가 과잉으로 축적되어 지방조직이 비정상적으로 증가된 상태를 말한다(Clinical Endocrinology 28:675-689, 1998; Clinical Obesity (eds. Kopelman PG, Stock MJ) 248-89 (Blackwell Science, Oxford 1998).

세계보건기구(WHO)는 동양인 기준 BMI(Body Mass Index: 체질량지수)가 23∼25를 과체중, 25∼30을 비만, 30 이상을 고도비만으로 보고 있다.

비만의 원인으로는 고지방·고열량의 식생활, 바쁜 사회적 환경에 따른 운동 부족, 내분비 이상 등 환경적 요인과 유전적 요인을 들 수 있는데, 이 중 비만의 50 내지 70% 정도가 환경적 요인에 의한 것으로 알려져 있고, 나머지가 유전적 요인에 의한 것으로 알려져 있다.

체내 에너지는 지방세포에 중성지방(triglyceride) 형태로 저장되었다가 체내 에너지원이 고갈되면 저장되었던 지방이 유리지방산과 글리세롤로 분해되어 에너지원으로 사용되게 되지만, 에너지의 과잉 섭취는 지방세포의 분화를 촉진하고 체내 저장 지방량을 증가시켜 비만의 직접적인 원인이 된다.

지방세포는 지방전구세포로부터 분화하여 만들어지는데, 이러한 지방세포 분화 시 중성지방의 축적이 일어나고 지방세포 특이적 단백질(aP2, FAS, GLUT4, LPL, leptin)의 발현이 유도되는데, 이에는 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor γ), C/EBP family(CCAAT/enhancer binding proteins; C/EBRα, C/EBRβ 및 C/EBRδ), ADD1/SREBP1c(adipocyte determination differentiation factor 1)/(sterol regulatory element binding protein 1c)라고 불리는 전사인자들이 중추적인 역할을 담당하고 있는 것으로 알려져 있다(Genes De 2000, 14(11) 1293~1307)(Physiol Rev 1998, 78(3):783~809; Annu Rev Biochem 2008, 77:289~312; Genes Dev 1996, 10:1096~1107).

따라서 지방전구세포의 지방세포로의 분화 억제 활성, 지방세포에서 중성지방의 축적 억제 활성, PPARγ, C/EBRα 및/또는 ADD1/SREBP1c의 발현 억제 활성을 갖는 물질은 항비만제로 활용될 수 있다.

유효성분으로서 징코라이드 에이(ginkgolide A) 또는 빌로발라이드(bilobalide)를 개시하고 있는 대한민국 특허 제920648호, 유효성분으로서 진세노사이드(ginsenoside)-Rf 또는 화합물 K(Compound K)를 개시하고 있는 대한민국 특허 제847252호, 유효성분으로서 올티프라즈를 개시하고 있는 대한민국 특허 제576157호 등이 이러한 예에 속한다.

본 발명도 문주란 추출물이 지방세포로의 분화 억제 활성과 중성지방 축적 억제 활성을 갖고 또한 PPARγ, C/EBRα, C/EBRβ 등의 전사인자, aP2 등의 지방세포 특이적 단백질의 발현 억제 활성 등을 갖는다는 점에 기초하여 완성된 것이다.

본 발명의 목적은 문주란 추출물을 이용한 항비만 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 문주란 추출물을 이용한 항고지혈증 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 문주란 추출물이 인슐린에 의해 분화 촉진된 지방전구세포의 지방세포로의 분화와 중성지방의 축적을 억제하고, 지방세포의 분화에 중추적으로 관여하는 PPARγ, C/EBRα, C/EBRβ 등의 전사인자의 발현을 억제하며, aP2 등의 지방세포 특이적 단백질의 발현을 억제할 뿐만 아니라 특히 고지방식이가 급여된 비만 유도 실험동물에 문주란 추출물을 투여하였을 때 실험동물의 체중이 감소함을 확인함으로써 완성된 것이다.

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 항비만 조성물은 문주란 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "추출물"이란 추출 대상을 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어지거나 조추출물과 그 조추출물을 상기 열거한 용매 중 하나 이상으로 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 이산화탄소, 펜탄 등의 초임계 유체를 사용하여 얻어진 추출물을 포함하는 의미이다. 추출 방법은 유효물질의 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식을 적용될 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 조추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 상기 열거된 용매로 순차적으로 분획하여 얻어진 분획물을 포함한다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물과, 그 추출물에서 추출용매를 제거하여 얻은 고형상의 물과 에탄올의 혼합 용매 추출물을 물에 현탁하고 이를 노르말 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 노르말 부탄올로 순차적으로 분획하였을 때 얻어지는 각층의 분획물을 의미한다. 특히 그 분획물 중에서도 아래의 실시예 및 실험예가 보여주듯이 지방세포로의 분화 억제 활성과 중성지방 축적 억제 활성이 뛰어난 노르말 부탄올 층의 분획물이 바람직하다. 여기서 '순차적으로 분획한다'는 분획 후 잔여 물층을 계속적으로 사용하여 상기 열거된 순서대로의 분획 용매로 분획한다는 의미이다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "항비만"이란 체지방의 감소 및/또는 체중의 감소를 의미한다. 따라서 비만의 예방, 비만의 치료를 포함하는 의미이며, 나아가 체중이 비만이나 과체중으로 분류되지 않지만 미용이나 건강 목적으로 체중/체지방을 감소시키는 것을 포함한다.

또한 본 명세서에서, 상기 "비만"이란, 그것이 유전적 요인에 의한 비만이든 또는 환경적 요인에 의한 비만이든 지방조직이 비정상적으로 증가된 상태를 의미하며, 체질량지수(BMI)의 구분에 따를 때는 고도 비만(BMI이 30.0 이상인 경우)과 비만(BMI 25~30인 경우) 그리고 과체중(BMI이 23~25인 경우)을 포함하는 의미이다.

본 발명의 항비만 조성물은 그 유효성분을 항비만 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.990 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 항비만 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물이 적용(처방)될 수 있는 대상은 포유동물 및 사람이며, 특히 사람인 경우가 바람직하다.

다른 측면에 있어서, 본 발명은 꼬물꼬시래기 추출물, 그것의 헥산 분획물, 또는 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함하는 항고지혈증 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서, "고지혈증"이란 중성 지방과 콜레스테롤 등의 지방대사가 제대로 이루어지지 않아 혈액 중에 지방량이 필요 이상으로 많아진 상태를 말한다. 보다 구체적으로는 혈액 내에 중성지방, LDL 콜레스테롤, 인지질, 유리 지방산 등의 지질 성분이 필요 이상으로 증가된 상태를 말한다.

본 발명의 항고지혈증 조성물에 있어서, 문주란 추출물의 의미, 그것의 유효량 등과 관련하여서는 상기 본 발명의 항비만 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.

본 발명의 항비만 조성물과 항고지혈증 조성물(이하 "본 발명의 조성물")은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 향미나 기호성을 향상시키고 기능성을 향상시키기 위하여 천연물 유래의 분말 또는 추출물을 포함할 수 있는데, 선지 분말 또는 추출물, 콩나물 분말 또는 추출물, 조개 분말 또는 추출물, 굴 분말 또는 추출물, 산미나리 분말 또는 추출물, 무 즙 또는 추출물, 오이 즙 또는 추출물, 부추 즙 또는 추출물, 시금치 즙 또는 추출물, 연근 즙 또는 추출물, 칡 즙 또는 추출물, 솔잎 즙 또는 추출물, 인삼 즙 또는 추출물, 백화사설초 분말 또는 추출물, 감초 분말 또는 추출물, 갈화 분말 또는 추출물, 갈근 분말 또는 추출물, 사인 분말 또는 추출물, 박 분말 또는 추출물, 생강 분말 또는 추출물, 대추 분말 또는 추출물, 인진 분말 또는 추출물, 지구자 분말 또는 추출물, 수비계 분말 또는 추출물, 백출 분말 또는 추출물, 저령 분말 또는 추출물, 진피(진귤의 껍질) 분말 또는 추출물, 구기자 분말 또는 추출물, 녹차 분말 또는 추출물, 오미자 분말 또는 추출물, 헛개나무 분말 또는 추출물, 지치 분말 또는 추출물, 노근 분말 또는 추출물, 계피 분말 또는 추출물, 데커시놀 등이 예시될 수 있다. 이러한 추출물은 추출 대상을 혼합하여 얻어질 수도 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다는 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 사용할 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 항비만 조성물을 제공할 수 있다. 또한 본 발명에 따르면 항고지혈증 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 항비만 조성물과 항고지혈증 조성물은 기능성 식품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.

[도 1]은 문주란 추출물의 노르말부탄올 분획물이 비만 지표 인자의 유전자 발현 억제 활성을 가짐을 보여주는 결과이다.
[도 2] 내지 [도 4]는 문주란 추출물의 노르말부탄올 분획물이 비만 유도 실험동물에 투여될 때 혈중 지질 농도를 낮추는 활성을 가짐을 보여주는 결과이다.
[도 5]는 문주란 추출물의 노르말부탄올 분획물이 비만 유도 실험동물에 투여될 때 부고환 지방 함량을 낮추는 활성을 가짐을 보여주는 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 문주란 추출물의 제조

제주도 일대의 문주란 잎을 입수하여 건조시킨 후, 건조된 문주란 잎을 음건·세절하고 세절한 문주란 잎 1kg을 80% 에탄올 10~20L로 실온에서 2~5회 반복 추출하여 문주란 추출물을 얻었다.

이렇게 얻어진 문주란 추출물을 증류수 2L에 현탁한 후, 각각 동량의 노르말 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 노르말부탄올로 순차적으로 분획한 다음 감압 농축하여 각 분획물을 얻었다.

< 실험예 > 문주란 추출물의 항비만 활성 및 항고지혈증 활성

< 실험예 1> 전지방세포 분화 억제 및 지방세포 지방축적 억제

3T3-L1 지방전구세포는 10% FBS와 항생제가 포함된 DMEM 배지를 사용하여, 5%의 이산화탄소의 공급과 37℃가 유지되는 배양기에서 배양하였다.

먼저 3T3-L1 세포를 1×10⁴cells/well의 농도로 96 웰 플레이트에 분주해 세포가 100%로 융합될 때까지 배양하였으며, 지방세포로 분화시키기 위하여 MDI (0.5 mM 3-isobutyl-1-methyxanthine, 1μM dexamethason, 10㎍/ml insulin, Sigma) 칵테일을 처리하였다. 이틀 후에 배지를 교체하고, 인슐린(Insulin)만을 같은 농도로 처리하였으며, 다시 이틀 후 DMEM 배지에 10% FBS만 포함된 배양액으로 배지를 교체하여 4일 동안 배양하였다.

지방세포 분화 유도 동안 시료를 각 배양액에 농도별로 처리하였고, 8일 동안 분화시킨 지방세포를 4% 포름알데하이드(Formaldehyde) 용액으로 5시간 고정시킨 뒤 인산완충용액(Phosphate buffered saline, PBS)으로 2번 세척한 후에 지방세포 분화 정도는 Oil Red O 염색을 통해 1차적으로 현미경을 통해 확인하였고, 지방세포 염색 정도는 510 nm 흡광도에서 세포의 분화된 지방량을 측정하였다.

결과를 아래의 [표 1]에 나타내었다.

지방세포 분화 억제 활성 및 지방 축적 억제 활성

구분	지방세포 분화 억제(EC₅₀ = ㎍/ml)	지방 축적 억제(EC₅₀ = ㎍/ml)
80% 에탄올추출물	23.06 ± 0.895	64.61 ± 1.858
n-Hexane 분획물	42.31 ± 3.319	69.20 ± 3.958
CH₂Cl₂ 분획물	10.92 ± 0.135	18.17 ± 1.288
EtOAc 분획물	23.13 ± 6.544	59.67 ± 3.014
n-BuOH 분획물	2.21 ± 0.002	5.56 ± 1.941
H₂O 분획물	42.84 ± 2.822	81.13 ± 4.025

상기 [표 1]에서 보여지는 바와 같이, 실시예의 시료 중 노르말부탄올 분획물의 지방세포 분화 억제 활성 및 지방 축적 억제 활성이 가장 우수한 것으로 나타났다.

< 실시예 2> 비만 지표 인자의 발현 억제 활성 실험

지방전구세포에서 지방세포로 분화가 시작되면 분화되는 과정 중 대표적으로 C/EBPα, C/EBPβ, PPARγ 등의 전사인자들이 발현하게 되며, 이러한 전사인자에 의하여 지방세포 특이적인 단백질인 aP2 등의 유전자의 발현이 증가하게 되는데, 본 실험에서는 문주란 추출물이 이들 비만 지표 인자의 발현을 억제하는지를 측정하였다.

6웰 플레이트에 3T3-L1 세포를 1×10⁵ cells/well의 농도로 분주한 후 세포가 100%로 융합될 때까지 배양하였으며, 지방세포로 분화시키기 위하여 MDI (0.5 mM 3-isobutyl-1-methyxanthine, 1 μM dexamethason, 10㎍/ml insulin, Sigma) 칵테일을 처리하였다. 이틀 후에 배지를 교체하고, 인슐린(Insulin)만을 같은 농도로 처리하였으며, 다시 이틀 후 DMEM 배지에 10% FBS만 포함된 배양액으로 배지를 교체하여 4일 동안 배양하였다.

지방세포 분화 유도 동안 실시예의 시료(노르말부탄올 분획물만을 사용하였음)를 각 배양액에 농도별로 처리하였고, 8일 동안 분화시킨 후 Trisol(Invitrogen,USA)을 이용하여 전체 RNA를 추출하였다. 분리된 RNA는 260 nm에서 정량한 후 cDNA 합성 키트(Takara)를 이용해 cDNA로 합성하였으며, SYBR Premix Ex Taq kit(Takara)를 이용하여 아래 [표 2]의 프라이머로 Real-time PCR를 실시하였다.

결과를 [도 1]에 나타내었다. [도 1]을 참조하여 보면 문주란의 노르말 부탄올 분획물이 농도(㎍/ml) 의존적으로 비만 표지 인자들의 발현을 억제함을 알 수 있다. [도 1]에서 NC 미분화 대조군, DC는 분화 대조군을 가리킨다.

프라이머

Gene name	Forward primer	Reverse primer
C/EBPα	GGGGTTGTTGATGTTTTTGG	CAGAAACGGAAAAGGTTCTCA
C/EBPβ	CGCAAGAGCCGAGATAAAGC	CACGGCTCAGCTGTTCCA
PPARγ	CAAGAATACCAAAGTGCGATCAA	GAGCTGGGTCTTTTCAGAATAATAAG
aP2	CATGGCCAAGCCCAACAT	CGCCCAGTTTGAAGGAAATC

< 실시예 3> 비만 동물모델에서의 항비만 및 항고지혈증 활성 측정

체중 19~21g의 6주령 C57BL/6 마우스(중앙실험동물)를 6개의 군으로 분배한 후 1군은 정상적인 사료를 급여하였으며, 나머지 5군은 60% 지방을 함유하고 있는 고지방식이 사료를 급여하였다. 7주 동안 비만을 유도하면서, 정상식이 대조군과 고지방식이 대조군에는 시료를 투여하지 않고 음용수(D.W)를 투여하였고, 실험군(비만 유도군)에는 orlistat(Xenical, 로슈) 4 mg/kg와, 문주란 추출물의 노르말부탄올 분획물을 농도별로(25, 50, 100 mg/kg 농도로) 매일 경구투여 하였다. 각각에 대한 체중과 사료 섭취량은 1주에 1회 측정하였으며, 7주 후 각각 혈액 및 부고환지방을 채취하여, 혈중 중성지방, 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 부고환 지방의 함량을 분석하였다.

체중에 대한 실험결과를 [표 3]에, 혈중 지질 농도에 대한 실험결과를 [도 2] 내지 [도 4]에, 부고한 지방 함량에 대한 실험 결과를 [도 5]에 나타내었다.

체중 감소 효과

구분	초기 체중	후기 체중	체중 증가량
정상식이 섭취군	20.0 ± 0.91	24.5 ± 1.15^**	4.5 ± 0.24**
고지방식이 섭취군	20.8 ± 0.86	32.4 ± 1.59	11.6 ± 0.73
Orlistat 4 mg/kg	20.2 ± 0.81	28.0 ± 1.08**	7.8 ± 0.27**
25 mg/kg	20.6 ± 0.69	28.3 ± 1.70**	7.6 ± 1.01**
50 mg/kg	20.1 ± 0.67	27.6 ± 2.61**	7.6 ± 1.94**
100 mg/kg	20.4 ± 0.75	27.6 ± 1.10**	7.2 ± 0.35**
- ** p<0.01

상기 [표 3]의 결과는 문주란 추출물의 노르말부탄올 분획물이 투여된 경우 대체로 농도 의존적으로 뚜렷한 체중 감소 효과를 보여주고 있음을 보여준다.

또 [도 2] 내지 [도 5]를 참조하여 보면 농도 의존적으로 혈중 지질 농도를 낮추고 부고환의 지방 함량을 낮춤을 보여준다.

Claims

문주란 잎의 물과 에탄올의 혼합 용매 추출물을 물에 현탁하고 이를 노르말 헥산(n-hexan), 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 노르말 부탄올(n-butanol)로 순차적으로 분획하였을 때 얻어지는 노르말 부탄올 분획물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 물과 에탄올의 혼합 용매는 80% 에탄올인 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물.
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제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.