KR101452320B1

KR101452320B1 - FERMENTED CAMELLIA JAPONICA SEED OIL INHIBITING 5-α REDUCTASE FOR IMPROVEMENT OF BENIGN PROSTATIC HYPERPLASIA AND ALOPECIA

Info

Publication number: KR101452320B1
Application number: KR1020140028160A
Authority: KR
Inventors: 정종문; 이승숙
Original assignee: 주식회사 벤스랩; 정종문
Priority date: 2014-03-11
Filing date: 2014-03-11
Publication date: 2014-10-22
Also published as: WO2015137652A1

Abstract

The present invention relates to a use of fermented camellia japonica seed oil having a high content of essential free fatty acid. More specifically, the present invention relates to a drug material, a health functional food, or a cosmetic product containing the fermented camellia japonica seed oil as an active ingredient for preventing and alleviating prostatic hyperplasia and male alopecia, wherein the fermented camellia japonica seed oil produced by fermenting camellia japonica seed oil includes plenty of essential free fatty acid and has a remarkable effect in controlling 5-alpha reductase, so that prostatic hyperplasia and male alopecia can be prevented and alleviated. According to the present invention, by indirectly fermenting camellia japonica seed oil, the content of essential fatty acid freed to be easily absorbed and used in vivo, so that the effects of essential fatty acid can be maximized. Moreover, according to the present invention, as a result of confirming a single toxicity test and cell toxicity, the fermented camellia japonica seed oil rarely has toxicity and controls 5-alpha reductase, so that dihydrotestosterone is reduced and the size of the prostate is restored to a normal level in terms of the prostatic hyperplasia. Moreover, the growth of follicular cells is promoted. As a result of a simple clinical test, the alopecia of a subject is alleviated. Accordingly, the fermented camellia japonica seed oil has similar activities to finasteride which prevents and alleviates prostatic hyperplasia and male alopecia, and a cosmetic product, a health functional food, or a pharmaceutical composition can be produced and purchased using fermented natural oil including fermented camellia japonica seed oil having the same or similar effects as or to a natural material-derived ingredient.

Description

전립선 비대증 및 탈모를 개선하는 ５―알파 환원효소 억제용 발효 동백오일{fermented Camellia japonica seed oil inhibiting ５－α reductase for improvement of benign prostatic hyperplasia and alopecia}The present invention relates to a 5-alpha-reductase inhibiting camellia japonica seed oil inhibiting 5-alpha reductase for improvement of benign prostatic hyperplasia and alopecia,

본 발명은 5-알파 환원효소(5-α reductase)를 억제하여 전립선 비대증과 탈모를 개선 및 예방하는 기능성 식품, 약학 조성물 및 화장품 원료에 관한 것으로, 보다 자세하게는 유리된 올레산을 포함한 필수 불포화지방산이 풍부한 발효 동백 오일(Camellia japonica seed oil)을 포함한 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 예방 및 치료, 및 탈모 예방 및 개선용 기능성 식품, 약학 조성물 및 화장품 원료에 관한 것이다.
The present invention relates to a functional food, a pharmaceutical composition, and a cosmetic raw material which inhibit 5-alpha reductase and improve and prevent enlargement of the prostate gland and hair loss. More specifically, the present invention relates to an essential unsaturated fatty acid including liberated oleic acid The present invention relates to a functional food, a pharmaceutical composition, and a cosmetic raw material for prevention and treatment of benign prostatic hyperplasia containing a fermented natural oil including an abundant fermented camellia japonica seed oil as an active ingredient and preventing and improving hair loss.

전립선은 샘조직과 섬유근조직으로 구성된 부속 생식샘이다. 전립선은 정액을 생성, 분비하는 역할을 하며 방광 바로 아래에 위치하여 요도를 둘러싸고 있다. 전립선의 기능은 정액의 약 40%를 담당하고 정자의 생존과 활성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고되어 있다. 또한 전립선은 정자에 영양분을 공급하고 적절한 이온농도와 산성을 유지하게 하며, 아연성분이 있어 세균 감염을 방지하는 역할을 한다.The prostate gland is a gonadal gland consisting of the glandular tissue and fibrous tissue. The prostate gland is responsible for the production and secretion of semen and is located just below the bladder and surrounding the urethra. The function of the prostate has been reported to play an important role in sperm survival and activity, accounting for about 40% of semen. In addition, the prostate provides nutrients to the sperm, maintains the proper ion concentration and acidity, and has a zinc component that prevents bacterial infection.

이러한 중요한 기능을 하는 전립선은 나이가 들면서 크기가 점차 증가하게 된다. 따라서 중년 이후 가장 흔하게 나타나는 전립선질환은 전립선 비대증(Benign Prostatic Hyperplasia, BPH)이다. These important prostate glands become increasingly larger as they age. Therefore, the most common prostate disease after middle age is benign prostate hyperplasia (BPH).

전립선 비대증은 전립선이 비정상적으로 커져 방광 아래쪽 소변이 나오는 통로를 막거나 요도를 압박하여 소변의 원활한 배출을 막고 방광을 위로 밀어 올려 이로 인해 나타나는 하루 8회 이상 소변을 보는 빈뇨, 야간 빈뇨, 강하고 갑작스런 요의(오줌이 마려운 느낌)를 느끼면서 소변이 마려우면 참을 수 없는 절박뇨 등의 방광 저장 증상과 지연뇨(소변을 볼 때 뜸을 들여야 소변이 나오는 현상), 단절뇨(소변의 흐름이 끊기는 현상), 배뇨 시 힘을 주어야 하는 현상 등 방광의 배출 장애를 나타내는 증상을 통칭한 하부 요로증상을 통칭한다. 나이가 들수록 전립선 비대증은 증가하고 60대 이상의 남성에서 50%이상, 85세 남성의 90%이상에서 전립선 비대가 나타난다.Prostate hyperplasia is an abnormally enlarged prostate that blocks the passage of the urine below the bladder or pushes the urethra to prevent the smooth discharge of urine and pushes the bladder up, causing urine more than 8 times a day, urinary frequency, nocturia, strong and sudden (Urinary symptoms), urinary incontinence (urinary bladder depression), urinary incontinence, urinary incontinence, urinary incontinence, urinary incontinence, urinary incontinence, , A phenomenon that should give power during urination, and lower urinary tract symptoms collectively referred to as a symptom of discharge disorder of the bladder. Prostate enlargement increases with age, with prostate hypertrophy occurring in more than 50% of men over 60 years and more than 90% of men 85 years of age.

전립선 비대증의 원인은 아직 명확하게 밝혀지지 않았고, 다른 만성 질환과 마찬가지로 여러 가지 복합적인 요인이 작용하는 것으로 알려져 있다. 전립선의 비대는 남성호르몬을 만드는 정상 고환을 가지고 있는 40대 이상의 남성에서 주로 발생하며 현재 가장 중요한 원인의 하나로 지목되는 것은 테스토스테론(testosterone)의 변환과 노화 간의 상관관계이다. The cause of the enlarged prostate has not yet been clarified, and it is known that various complex factors act like the other chronic diseases. The hypertrophy of the prostate occurs mainly in men aged 40 or older who have normal testicles making testosterone. One of the most important causes of this is the correlation between testosterone conversion and senescence.

전립선 비대증의 기전을 간략히 설명하면 다음과 같다. 혈액 내에서 테스토스테론이 과다하게 존재하면 전립선 조직에 존재하는 5-알파 환원효소에 의해 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)으로 다량 변환 합성하게 된다. 이 DHT는 테스토스테론에 비해 훨씬 전립선의 기질세포(stromal cell)와 상피세포(epithelial cell)의 세포분열을 활발하게 하여 결국 전립선 비대로 발전하게 만든다. The mechanism of enlargement of the prostate is briefly described as follows. When excess testosterone is present in the blood, it is converted into dihydrotestosterone (DHT) by 5-alpha reductase present in the prostate tissue. This DHT activates cell division of stromal cells and epithelial cells of prostate much more than testosterone, and eventually develops into prostate hyperplasia.

노년기가 되면 테스토스테론의 수치는 점차 낮아지지만 상대적으로 전립선 비대증은 더 많이 발생하게 된다. 그 이유는 바로 이 전립선의 세포수를 증가시키는 디하이드로테스토스테론 때문이다. 남성호르몬은 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론의 두가지 형태로 존재하는데 전립선의 성장에 더 중요한 것은 디하이드로테스토스테론이다. 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론은 전립선에서 유사한 비율로 동일한 남성호르몬 수용체와 결합하지만, 디하이드로테스토스테론-남성호르몬 수용체 복합체가 테스토스테론-남성호르몬 수용체 복합체보다 더 안정적이기 때문에 전립선 내의 대부분 남성호르몬 수용체는 테스토스테론보다 디하이드로테스토스테론과 결합한 상태로 존재하게 된다. 또한, 디하이드로테스토스테론는 테스토스테론과 달리 나이가 들어도 양에는 크게 줄지 않아 내분비계 균형을 유지하기 위해 전립선 세포의 안드로겐 수용체가 증가하게 되며 결국 나이가 들어도 전립선의 증식을 유도하는 다른 성장인자들을 지속적으로 자극하여 전립선비대가 발생하게 되는 것이다. In old age, the levels of testosterone gradually decrease, but relatively more of the prostate hyperplasia occurs. This is because of dihydrotestosterone, which increases the number of cells in the prostate. Male hormones exist in two forms, testosterone and dihydrotestosterone, and more importantly in the growth of the prostate is dihydrotestosterone. Although testosterone and dihydrotestosterone bind to the same male hormone receptor at similar rates in the prostate, most dihydrotestosterone-male hormone receptor complexes are more stable than the testosterone-male hormone receptor complexes, so most male hormone receptors in the prostate are more dihydrotestone than testosterone It is present in a state bound to testosterone. In addition, dihydrotestosterone, unlike testosterone, does not significantly decrease in amount when age is reached, so that the androgen receptor of the prostate cell increases in order to maintain the balance of the endocrine system. Eventually, stimulation of other growth factors that induce proliferation of the prostate Prostate enlargement will occur.

테스토스테론을 디하이드로테스토스테론으로 전환시키는 5-알파환원효소는 미세소체(microsome)의 NADPH 의존성 3-oxo-5α-steroid-dehydrogenase로서 테스토스테론과 같은 이중 결합 스테로이드를 환원시킨다. 이 효소는 신체에서 크게 bile acid 합성 및 androgen과 estrogen의 물질대사에 관여한다. 5-알파 환원효소는 1형과 2형, 그리고 3형의 아형을 가지며 1형은 주로 피부와 간조직 등의 여러 장기에 존재하고, 2형은 간과 전립선을 포함한 요로생식기에 주로 존재한다. 테스토스테론은 전립선 조직 내에서 5-알파 환원효소에 의해 90% 이상 디하이드로테스토스테론으로 변환되며 디하이드로테스토스테론이 테스토스테론의 대략 10배 이상의 활성도로 전립선 성장을 촉진한다. 따라서, 5-알파 환원효소를 효율적으로 억제하게 되면 생리적 활성이 강한 디하이드로테스토스테론의 합성을 감소시켜 결국, 전립선 비대증을 개선 내지 치료할 수 있다. A 5-alpha reductase that converts testosterone to dihydrotestosterone is a NADPH-dependent 3-oxo-5α-steroid-dehydrogenase in microsomes that reduces double bond steroids such as testosterone. This enzyme is largely involved in bile acid synthesis and metabolism of androgen and estrogen in the body. 5-alpha reductase has type 1, type 2, and type 3 subtypes. Type 1 is mainly present in various organs such as skin and liver, and type 2 is mainly present in urinary genitalia including liver and prostate. Testosterone is converted to dihydrotestosterone by more than 90% by 5-alpha reductase in prostate tissue, and dihydrotestosterone promotes prostate growth by about 10 times more activity than testosterone. Thus, effective inhibition of 5-alpha reductase can reduce the synthesis of dihydrotestosterone, which has a strong physiological activity, and eventually improve or treat prostate hyperplasia.

대체로 인간모발의 수는 약 10만개에서 15만개로 추정하고 있다. 모발은 하루에 50개에서 100개정도 빠지게 되며 하루 100개 이상이 계속 빠졌을 때 탈모증(hair loss)이 시작되었다고 한다. 탈모의 원인은 매우 다양하며 사람마다 양상이 다르게 나타난다. 특히 남성의 머리카락은 20대를 절정으로 점점 얇아지는 경향이 있다. 탈모의 여러 증상들 중에서 가장 흔하게 나타나는 남성형 탈모증(Male Pattern Baldness, MPB)은 유전적인 특징이 크며 또 다른 큰 이유는 남성호르몬의 이상에 의해 모근이 약해지고 피지 분비가 과다하게 되면서 두피에 염증을 일으켜 모발이 빠지게 된다.In general, the number of human hairs is estimated at about 100,000 to 150,000. Hair falls 50 to 100 times a day, and hair loss begins when more than 100 a day is lost. The causes of hair loss vary widely and appear to vary from person to person. In particular, male hair tends to become thinner at the peak of their 20s. Male pattern baldness (MPB) is the most common among the various symptoms of hair loss, and its genetic characteristic is great. Another reason is that male hormone abnormality weakens hair follicle and excessive sebum secretion causes inflammation of scalp, .

상기 남성형 탈모의 가장 큰 원인(약 90% 이상)은 남성호르몬의 이상(androgenic alopecia)이다. 전립선 비대증과 마찬가지로 5-알파 환원효소에 의해 디하이드로테스토스테론이 과량 합성되게 되면 디하이드로테스토스테론이 모낭 주변의 안드로겐 수용체에 결합하여 점점 모낭을 축소 및 황폐화하여 결국 모발의 성장기 기간을 축소하게 된다. 축소된 성장기 때문에 모발의 뿌리, 즉 모근이 충분하게 발육하지 못하고 동시에 색소축적도 충분하지 못하게 된다. 이렇게 힘이 없는 미성숙의 모발이 자주 두피에서 빠져나와 결국 탈모가 시작된다. 계속 축소된 모낭은 결국 죽게 되고 이에 영구적인 탈모가 발생하게 되는데 이때가 되면 모발이식 이외 치료가 어려워진다. 디하이드로테스토스테론은 모발의 생장 주기 중 생장기를 짧게 하고 휴지기를 길게 하여 결국 생장주기를 거듭할수록 모발의 크기가 점점 작아지게 만드는 요인을 제공하는 것이다. 탈모가 진행되는 동안 모낭은 점점 수축되고 대신 피지선은 점점 커져서 머리카락은 점점 가늘고 작아지며, 대체로 기름기는 점점 많아져 뾰루지 또는 염증을 만들기도 한다. 가늘고 작아진 머리는 솜털로 변하고 우리 눈에 보이지 않게 되어 머리 속 두피가 들여다 보이기 시작한다. 빠지고 다시 나면서 이전보다 더 가늘어지는 반복과정을 20회 정도 하고 나면 모낭은 영원히 죽게 되고 어떤 치료수단도 이를 다시 회복시키지 못하게 되는 것이다. 테스토스테론은 주로 겨드랑이 털과 음모의 성장에 영향을 주고 있는 반면, 디하이드로테스토스테론은 턱수염과 대머리에 영향을 미치고 있다고 알려져 있지만 확실치는 않다. The most common cause of male pattern hair loss (about 90% or more) is androgenic alopecia. As with hypertrophy of the prostate, when dihydrotestosterone is over-synthesized by 5-alpha-reductase, dihydrootestosterone binds to the androgen receptor around the hair follicle, which gradually shrinks and destroys the hair follicle, thereby reducing the period of hair growth. Because of the reduced growth period, the roots of the hair, that is, the hair follicles, can not grow sufficiently, and at the same time, the pigment accumulation becomes insufficient. This inexperienced hair is often removed from the scalp and hair loss eventually begins. Continued reduction of hair follicles will eventually die and permanent hair loss will occur, but at this time, hair transplantation is difficult to treat other than. Dihydrotestosterone is a factor that shortens the growth period of the hair growth cycle and lengthens the rest period, which eventually causes the size of the hair to become smaller as the growth cycle is repeated. During hair loss, the hair follicles shrink gradually. Instead, the sebaceous glands grow larger and the hair becomes thinner and smaller, and the oil becomes more and more frequent, creating a rash or inflammation. The thinner and smaller head turns into fluffy, invisible to our eyes, and begins to look into the head scalp. After 20 minutes of tapering, the hair follicles die forever and no treatment can restore them. While testosterone mainly affects the growth of armpit hair and conspiracy, dihydrotestosterone is known to affect beard and baldness, but it is not certain.

전립선 비대증 및 남성형 탈모를 치료하기 위한 약물들도 많이 알려져 있다. 그러나 근본적인 치료를 위해서는 5-알파 환원효소를 억제하는 것이 가장 중요하다.There are many known drugs for the treatment of benign prostatic hyperplasia and male pattern hair loss. However, inhibition of 5-alpha-reductase is the most important treatment.

5-알파 환원효소 합성 억제제에는 Finasteride와 Dutasteride 등이 있다. 테스토스테론은 전립선 조직 내에서 5-알파 환원효소에 의해 디하이드로테스토스테론로 전환된다. 따라서 디하이드로테스토스테론의 변환을 효율적으로 막는 5-알파 환원효소 억제제를 복용하면 전립선의 크기를 줄일 수 있다는 것이다. 보통 6개월 정도 사용하면 전립선의 크기가 최대로 줄어드는 것으로 알려져 있다. Merck사가 개발한 5-알파 환원효소의 경쟁적 억제자인 Finasteride는 1형도 억제하지만 주로 2형 5-알파 환원효소를 억제하여 전립선과 혈중에 존재하는 dihydro테스토스테론를 감소시킨다. Dutasteride는 Finasteride에 비해 반감기가 길고, 1형 효소에 대하여 45배, 2형에 대하여는 2.5배 더 강력한 결합력을 갖는다. 대부분 간에서 대사가 이루어져 간부전 환자에서는 사용을 제한해야 한다. 이들 5-알파 환원효소의 합성 억제자는 전립선 비대증의 근본적인 치료 방법이라고 할 수는 있으나 5 mg/일씩 4~6개월 장기간 복용해야 환자가 효과를 볼 수 있으며 복용을 중단하면 재발하는 문제점이 제시되고 있다. 부작용으로 발기부전, 성욕감퇴, 여성형 유방, 사정장애 등이 보고되고 있다. 5-alpha reductase synthesis inhibitors include Finasteride and Dutasteride. Testosterone is converted to dihydrotestosterone by 5-alpha reductase in the prostate tissue. Thus, taking a 5-alpha reductase inhibitor that effectively blocks the conversion of dihydrotestosterone can reduce the size of the prostate gland. It is known that when used for about six months, the prostate size is reduced to the maximum. Finasteride, a competitive inhibitor of 5 - alpha - reductase developed by Merck, inhibits type 1 but mainly inhibits type 2 5 - alpha - reductase, thereby reducing the dihydro testosterone present in the prostate and blood. Dutasteride has a longer half-life than finasteride and has a stronger binding capacity of 45-fold for type I enzyme and 2.5-fold for type II enzyme. Most of the liver is metabolized and should be restricted in patients with hepatic impairment. Although inhibitors of 5-alpha reductase synthesis can be considered as a fundamental treatment for benign prostatic hyperplasia, prolonged administration of 5 mg / day for 4 to 6 months is effective for patients. . Side effects include erectile dysfunction, loss of libido, gynecomastia, and ejaculatory disorders.

또한 남성형 탈모를 치료하기 위해서도 finasteride가 사용된다. Finasteride는 전립선 비대증을 치료하기 위해 처음 사용되었다가 탈모 치료효과도 미국식품의약안전청에 의해 인정되어 복용량을 다르게 하루 1 mg 씩 처방, 탈모 치료제(상품명, 프로페시아)로 판매되고 있다. 상기한 대로 이 약품도 두피에 존재하는 5-알파 환원효소를 억제하는 기전을 통해 탈모 치료효과를 나타낸다. 그러나 최소 3-5개월은 지나야 효과가 있으며 복용하다가 중단하면 12개월 이내에 원상태로 돌아가는 단점이 있다. 또한, 원래 finasteride의 구조 자체가 테스토스테론이나 프로게스테론 호르몬들과 같은 성호르몬과 비슷해서 여성들에게서 부작용이 종종 발견되며 특히, 산모의 사용을 엄격히 제한하고 있다. 심지어 finasteride를 생산하는 공장에서는 여자가 직접 생산에 참여치 못하게 하고 있다.Finasteride is also used to treat male pattern baldness. Finasteride was first used to treat benign prostatic hyperplasia, and the effect of treating hair loss was also recognized by the US Food and Drug Administration (USFDA) and is sold as a prescription, hair loss treatment (trade name, Propecia) for 1 mg / day. As described above, this drug also exhibits the effect of treating hair loss through the mechanism of inhibiting 5-alpha reductase in the scalp. However, at least 3-5 months after the effects are effective, and if you stop and return to the original twelve months after the disadvantage. In addition, the structure of finasteride itself is similar to that of sex hormones such as testosterone or progesterone hormones, so that side effects are often found in women and strictly limits maternal use. Even in factories that produce finasteride, women are not allowed to directly participate in production.

미녹시딜 또한 고혈압 치료를 위해 개발되었다가 고혈압 환자에게서 탈모 억제현상을 관찰하고 발모제로 개발, 시판되었다. 미녹시딜의 작용기전은 명확하지 않으나 두피의 혈관을 팽창하여 산소와 영양분을 모낭에 수월하게 공급하여 머리카락 생성과 발육을 촉진하는 것으로 볼 수 있다. 부작용은 거의 없으나 최대효과를 내려면 6개월 이상 오랜 기간 도포해야 하며 사용을 중지하였을 때에 그 효과가 사라진다. 또한 5-알파 환원효소의 억제자가 아니어서 디하이드로테스토스테론의 농도를 낮추지 못한다.Minoxidil has also been developed for the treatment of hypertension and has been developed and marketed as a hair growth inhibitor in the treatment of hypertension. The mechanism of action of minoxidil is unclear, but it can be seen as expanding the blood vessels of the scalp and supplying oxygen and nutrients to the hair follicle to promote hair growth and development. Side effects are scarce, but for best results, they should be applied over a period of 6 months or longer, and their effect disappears when they are discontinued. It is also an inhibitor of 5-alpha reductase and does not lower the level of dihydrotestosterone.

최근에는 기존의 전립선 비대증과 남성형 탈모를 치료하기 위한 약물 치료법의 부작용과 단점을 보완하기 위해 생약요법이 많이 대두되고 있다. 생약요법은 전립선 비대증 및 남성형 탈모 치료에 다른 가능성을 보여주기는 하지만 현재까지 위약 대조군과 비교한 장기간의 임상결과가 축적되어 있지 않다.Recently, there have been a lot of herbal remedies to supplement the side effects and disadvantages of the conventional drug treatment for the treatment of benign prostatic hyperplasia and male pattern hair loss. Although herbal remedies show different possibilities for the treatment of benign prostatic hyperplasia and male pattern baldness, there is no long-term clinical outcome compared with placebo-controlled trials.

미국에서만 2백만 명 이상이 이용하고 있는 것으로 보고된 쏘팔메토는 톱야자 나무의 열매에서 추출한 것으로서 전립선 비대증에 가장 흔히 사용되는 대표적인 천연물 유래 기능성 식품이다. 과거 인디언들은 쏘팔메토 열매를 비뇨생식기계의 치료제로 사용했던 기록되어 있다. 쏘팔메토의 주성분은 TG형의 여러 지방산과 피토스테롤(phytosterols)으로서, 5-알파 환원효소억제제 작용을 하여 전립선 비대증을 개선하고 탈모를 개선하는 것으로 추정된다. 국내에서는 쏘팔메토가 전립선 비대증을 개선하는 효과가 인정되어 개별인정형 제품으로 시판되고 있다. 최근에는 쿠쿠르비트 종자유를 유효성분으로 하여 전립선 비대증 치료제로 제조 판매되고 있다. 실제로 이 종자유는 유럽의 호박씨 추출유로서 유럽 제약회사로부터 수입하고 있다. 이것의 작용기전으로 제약회사 측은 쿠쿠르비트 종자유가 전립선 비대를 일으키는 혈중 콜레스테롤을 억제하고 남성호르몬의 변화를 막아 전립선 비대에 의한 배뇨장애를 치료한다고 설명하고 있다.
Saw palmetto, which is reported to be used by more than 2 million people in the United States, is extracted from the fruit of saw palmetto and is a typical functional food derived from natural products most commonly used for the enlargement of the prostate gland. Former Indians have used Saw Palmetto fruit as a remedy for the genitourinary system. The main ingredient of soap palmetto is TG type of fatty acid and phytosterols, and it is estimated that it acts as 5-alpha reductase inhibitor to improve benign prostatic hyperplasia and improve hair loss. In Korea, soap palmetto has been recognized as an effective treatment for improving enlargement of the prostate gland. Recently, it has been manufactured and sold as a therapeutic agent for the treatment of benign prostatic hyperplasia using an active ingredient of Cucurbit beet seed oil. In fact, this seed oil is imported from European pharmaceutical companies as European pumpkin seed extract. The mechanism of action is that the pharmaceutical company will explain that Cucurbit 's seed oil inhibits blood cholesterol that causes prostate hypertrophy and prevents the change of male hormone and treats urination disorder caused by prostate hypertrophy.

동백은 겨울의 장미라고도 불리며 중국의 산둥지방, 대만, 한국의 남쪽지방, 일본 등에서 자란다. 해발 300-1,100m에서 주로 자라고 보통 키가 1.5-6m 정도이다. 1월에서 3월에 꽃을 피운다. 한국에서는 통영과 제주도에서 재배된다. 특히, 국내 통영지방에서 생산되는 동백 오일은 일본 아토피성 피부염 전문회사에서 수입하여 판매되고 있다. 동백유는 차나무과(Theaceae)의 동백나무(Camellia japonica L.) 및 그 동속식물의 종자에서 채취되는 지방유로서 구성 지방산이 올리브 오일과 유사하여 올레산(Oleic acid)이 82-86%까지 함유되어 있어서 올리브유와 비슷한 용도로 크림, 유액 등에 사용되고 있으며, 특히 두발용으로 많이 사용되고 있다. 섭씨 160-220도의 고온에서도 잘 변질되지 않는다. 동백유에 많이 함유되어 있는 올레산(Oleic acid)은 몸에 해로운 저밀도 콜레스테롤인 LDL 콜레스테롤의 수치는 낮추는 반면, 몸에 좋은 고밀도 콜레스테롤인 HDL 콜레스테롤의 수치는 높여주어 고혈압과 심장병 등을 예방해 준다. 암 예방 효과와 노화로 인한 기억력 감퇴 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다. Camellia, also called winter roses, grows in China's Shandong province, Taiwan, southern Korea, and Japan. It grows mainly at 300-1,100m above sea level, and its height is about 1.5-6m. It blooms from January to March. It is grown in Tongyeong and Jeju Island in Korea. In particular, camellia oil produced in domestic Tongyeong province is imported and sold by a company specialized in atopic dermatitis in Japan. Camellia oil is a fatty oil extracted from Camellia japonica L. of Camellia japonica L. and the seeds of the same plant, and its constituent fatty acids are similar to olive oil and contain oleic acid in 82-86% It is used for cream, milk, etc. for similar use, and it is widely used especially for hair. It does not deteriorate even at high temperatures of 160-220 degrees Celsius. Oleic acid, a major component of camellia oil, lowers LDL cholesterol, which is harmful to the body, while elevating HDL cholesterol, a good high-density cholesterol in the body, to prevent hypertension and heart disease. It is also known to be effective in preventing cancer and declining memory due to aging.

그러나 자연계에는 자유 올레산(free oleic acid)로 존재하지 않고 대개 에스테르(ester)형으로 글리세롤(glycerol)에 공유결합되어 있다. 시중의 올레산은 거의 오일의 비누화로 이루어진 K+ 혹은 Na+가 붙어있는 형태이거나 가에탄올 분해(ethanolysis)를 통한 에틸 에스테르(ethyl ester)형이거나, 혹은 여러 단계의 공업적 과정을 거쳐 제조한 것이다.
In nature, however, it is not present as free oleic acid and is usually ester-bonded to glycerol. Oleic acid in the market is almost a form of oil saponification with K + or Na +, or ethyl ester through ethanolysis, or it is manufactured through various industrial processes.

이에, 필수 불포화지방산인 올레산과 리놀레산 등을 풍부하게 함유하고 있는 동백오일을 흡수와 이용에 용이하도록 발효하여, 다른 화학적 처리를 전혀 하지 않으면서 글리세롤 골격분자에서 유리된 올레산과 리놀레산 등을 포함한 필수지방산의 함량을 높여 생기는 5-알파 환원효소 억제능으로, 전립선비대증 및 남성형 탈모를 예방하고 개선하는 효과를 가지는 발효 천연오일을 제조함으로써, 본 발명을 완성하였다.
Thus, it is possible to ferment the camphor oil, which contains enriched oleic acid and linoleic acid, which are essential unsaturated fatty acids, so that it can be easily absorbed and utilized, and it is possible to obtain essential fatty acids including oleic acid and linoleic acid liberated from the glycerol skeleton molecule without any other chemical treatment Alpha-reductase inhibitory activity resulting from the increase of the content of the active ingredient in the preparation of a fermented natural oil having the effect of preventing and ameliorating the enlargement of the prostate gland and the male pattern hair loss.

본 발명의 목적은, 동백 오일을 포함한 천연 오일을 선 미생물배양, 후 효소발효방법이란 가장 완화된 공정을 통해 지방산(Fatty acid)과 글리세롤(Glycerol)로 분리시켜 결국 이로 인해 새로 생긴 여러 생화학적 기능을 추가하여 제조하는 것을 목적으로 한다. It is an object of the present invention to separate natural oil including camellia oil into a pre-fermentation culture and a post-enzyme fermentation process by separating into fatty acid (Fatty acid) and glycerol (glycerol) through the most relaxed process, And the like.

또한, 본 발명의 목적은, 동백오일의 글리세롤 골격분자에서 필수 불포화지방산을 떼어내는 리파아제의 고기능을 가진 미생물 균주를 선별하고 이를 리파아제 유도배지에서 배양한 후, 고역가의 리파아제를 함유하는 배양액을 황산암모늄을 이용, 효소단백질을 침전, 농축 및 투석하여 미생물의 배양시 생겨 최종 발효제품을 오염시킬 수 있는 여러 대사 최종물질들을 배제하고 직접 발효에 의해 생기는 발효냄새를 없애며 나아가 최종 발효제품에서 미생물의 오염을 원천 차단할 수 있도록 리파아제 농축발효액을 이용하여 동백오일을 발효한다. It is also an object of the present invention to provide a method for producing a microorganism which is capable of isolating glycerol skeleton molecules of camphor oil from essential microorganism strains of lipase capable of removing essential unsaturated fatty acids and culturing them in a lipase induction medium, , The enzyme protein is precipitated, concentrated and dialyzed to eliminate the various metabolic final substances which are generated when the microorganism is cultured and contaminate the final fermented product, thereby eliminating the fermentation odor caused by the direct fermentation and further preventing the contamination of microorganisms in the final fermented product Camellia oil is fermented using a lipase concentrated fermentation broth to block the source.

또한, 본 발명의 목적은, 유리 필수지방산이 다량 함유된 발효오일을 제조하여 5-알파 환원효소를 억제하도록 함으로써 전립선 비대증 및 탈모를 예방하고 개선하기 위한 용도를 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a use for preventing and ameliorating enlargement of the prostate gland by preventing the 5-alpha reductase from being produced by preparing a fermented oil containing a large amount of free essential fatty acids.

또한, 본 발명의 목적은, 발효 천연오일을 제조하여 전립선 비대증을 위해서는 경구용으로 개발하고, 탈모 예방 및 치료를 위해서는 경구용 및 피부 도포용으로 제조하여 시너지 효과를 갖게 하는 것이다.
The object of the present invention is to produce a fermented natural oil to be used for oral administration for prostatic hyperplasia, and to produce synergistic effects for oral and skin application for hair loss prevention and treatment.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 동백오일을 발효하여 올레산을 포함, 유리된 필수 지방산을 풍부하게 함유하는 발효 동백오일을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a fermented camellia oil containing fermented camellia oil and containing essential fatty acids free of oleic acid.

또한, 본 발명은 동백오일로부터 발효효소 또는 발효효소조성물을 이용하여 발효시키는 공정을 포함하는 발효 동백오일의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing a fermented camellia oil comprising a step of fermenting a camellia oil using a fermenting enzyme or a fermenting enzyme composition.

또한, 본 발명은 동백오일 외에 올리브오일, 카놀라오일, 올리브오일, 유채씨오일, 모링가유 또는 해바라기씨유 중 하나 이상을 포함하는 식물성 오일을 발효하여 올레산 등의 유리된 필수 지방산을 풍부히 함유하고 있는 발효 천연오일을 제공한다.The present invention also encompasses a method of fermenting a vegetable oil containing at least one of olive oil, canola oil, olive oil, rape seed oil, moringa oil or sunflower seed oil in addition to camellia oil to abundantly contain free essential fatty acids such as oleic acid To provide a fermented natural oil.

또한, 본 발명은 상기 다양한 식물성 오일로부터 발효효소 또는 발효효소조성물을 이용하여 발효시키는 공정을 포함하는 발효 천연오일의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a process for producing a fermented natural oil comprising the step of fermenting the various vegetable oils using a fermentation enzyme or a fermentation enzyme composition.

또한, 본 발명은 유리된 필수 지방산을 풍부히 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 하여 5-알파 환원효소를 억제, 전립선 비대증 및 탈모를 개선 및 예방하는 약학적 조성물, 또는 건강기능성 식품을 제공한다.Further, the present invention provides a pharmaceutical composition or a health functional food which contains a fermented camellia oil rich in free essential fatty acids as an active ingredient, inhibits 5-alpha reductase, improves and prevents prostatic hyperplasia and alopecia.

또한 본 발명은 유리된 필수 지방산을 풍부히 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 하여 5-알파 환원효소를 억제, 탈모를 개선 및 예방하는 피부 외용제, 화장료 조성물, 또는 그외 의약외품을 제공한다.The present invention also provides an external preparation for skin, a cosmetic composition, or other quasi-quasi-drug, which comprises a fermented camellia oil enriched in free essential fatty acids as an active ingredient and which inhibits 5-alpha reductase and improves and prevents hair loss.

또한, 본 발명은 유리된 필수 지방산을 풍부히 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 하여 5-알파 환원효소를 억제, 전립선 비대증 및 탈모를 개선 및 예방하는 약학적 조성물, 또는 건강기능성 식품을 제공한다.Further, the present invention provides a pharmaceutical composition or a health functional food which contains a fermented natural oil rich in essential essential fatty acids as an active ingredient, inhibits 5-alpha reductase, improves and prevents prostatic hyperplasia and hair loss.

아울러, 본 발명은 유리된 필수 지방산을 풍부히 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 하여 5-알파 환원효소를 억제, 전립선 비대증 및 탈모를 개선 및 예방하는 피부 외용제, 화장료 조성물, 또는 그외 의약외품을 제공한다.
In addition, the present invention provides an external preparation for skin, a cosmetic composition, or other quasi-drugs which inhibits 5-alpha-reductase and improves and prevents enlargement of the prostate gland and alopecia using a fermented natural oil rich in free essential fatty acids .

본 발명에 따르면, 발효 동백오일은 올레산을 포함한 필수 지방산을 다른 발효 전 오일에 비교하여 대량 함유하고 있어 유효한 효과를 나타낸다.According to the present invention, the fermentation camellia oil contains a large amount of essential fatty acids including oleic acid compared with other pre-fermentation oils, and thus exhibits an effective effect.

또한, 본 발명에 따르면 리파아제를 생산하는 미생물을 유도배지에서 먼저 유도배양한 다음, 리파아제를 함유한 배양액을 황산암모늄을 이용하여 침전, 농축 및 투석과정을 거쳐 고역가의 발효액과 동백오일을 물리적 유화 방법으로 믹싱한 후 최적조건에서 발효과정을 거치기 때문에 직접발효시 생기는 미생물의 폐기물질 오염, 발효 특유의 냄새 등을 없앨 수 있었으며 유리 불포화지방산의 생산효율도 훨씬 높일 수 있다. According to the present invention, the microorganism producing lipase is first inductively cultured in the induction medium, and then the culture solution containing the lipase is precipitated, concentrated and dialyzed with ammonium sulfate, and the fermentation broth and camellia oil are physically emulsified , And fermentation process is performed under optimal conditions. Therefore, it is possible to eliminate waste substance pollution and specific odor of fermentation caused by direct fermentation, and the production efficiency of free unsaturated fatty acid can be much improved.

또한, 본 발명에 따르면 발효 동백오일은 5-알파 환원효소를 억제하는 능력으로 혈중 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)을 낮추어 전립선 비대증을 치료, 개선 또는 예방하는 효과를 나타낸다.In addition, according to the present invention, fermented camellia oil has an effect of inhibiting 5-alpha reductase and lowering dihydrotestosterone in blood to treat, improve or prevent prostatic hyperplasia.

또한, 본 발명에 따르면 발효 동백오일이 함유한 풍부한 유리된 필수지방산들은 5-알파 환원효소를 억제하여 남성형 탈모를 예방 또는 개선하는 효과를 가진다.
In addition, according to the present invention, the abundant free essential fatty acids contained in the fermented camellia oil have the effect of preventing or ameliorating male pattern hair loss by inhibiting 5-alpha reductase.

도 1은 발효 동백오일의 전립선 무게 감소 효과를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 발효 동백오일의 5-알파 환원효소의 억제 효과를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 발효 동백오일의 모낭세포의 성장 촉진 효과를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 발효 동백오일의 마우스 유래 대식세포에 대한 세포독성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 발효 동백오일의 마우스에 대한 단회 독성시험에 따른 암컷 마우스의 장기무게 변화를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 발효 동백오일의 마우스에 대한 단회 독성시험에 따른 수컷 마우스의 장기무게 변화를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 7은 발효 동백오일의 마우스에 대한 단회 독성시험에 따른 암컷 및 수컷 마우스의 체중 변화를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a graph showing the results of analyzing prostate weight reduction effect of fermentation camellia oil. FIG.
2 is a graph showing the results of analysis of the inhibitory effect of 5-alpha-reductase of fermentation camellia oil.
3 is a graph showing the results of analysis of growth promoting effect of follicular cells of fermentation camellia oil.
4 is a graph showing the results of measurement of cytotoxicity of mouse fermented camellia oil to mouse-derived macrophages.
FIG. 5 is a graph showing the results of measurement of long-term weight change of a female mouse according to a single toxicity test on a mouse of fermented camellia oil.
6 is a graph showing the result of measuring the change in organ weight of a male mouse according to a single toxicity test on a mouse of fermented camellia oil.
FIG. 7 is a graph showing the results of measuring the body weight change of female and male mice according to a single toxicity test of a fermented camellia oil to a mouse. FIG.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 동백오일을 발효하여 유리 필수 지방산을 풍부하게 함유하는 발효 동백오일을 제공한다.The present invention provides a fermented camellia oil containing fermented camellia oil and abundantly containing essential fatty acids.

상기 동백오일의 학명은 Camellia japonica seed oil로 이 원료는 동백나무 Camellia japonica Linne(Theaceae)의 종피를 제거한 종자에서 얻은 지방유이다. 동백오일을 추출제조하는 방법에는 크게 상온에서 압착하여 얻어내는 냉압(cold pressing), 고온에서 압착하여 추출하는 열추출(heat extraction), 그리고 고온고압에서 에탄올이나 헥산을 이용하여 추출하는 용매 추출(solvent extraction) 방법 등이 있다. 동백오일은 특이하게 올레산을 80%이상 함유하고 있으며 팔미트산, 리놀레산, 리놀렌산 등을 함유하고 있다. 피부 흡수력이 좋으며 피부 진정효과를 지니고 있다. 또한, 황색포도상구균의 성장을 억제하며 아토피 피부염, 피부 가려움증 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.The scientific name of the camellia oil is Camellia japonica seed oil. This raw material is Camellia japonica It is a fatty oil obtained from seeds from which Linne ( Theaceae ) has removed the seed coat. Methods for extracting and producing camellia oil include cold pressing which is obtained by compression at room temperature, heat extraction by compression at high temperature, solvent extraction by using ethanol or hexane at high temperature and high pressure, extraction method. Camellia oil contains oleic acid in more than 80%, and contains palmitic acid, linoleic acid, and linolenic acid. Good absorption of skin and a calming effect on the skin. It is also known to inhibit the growth of Staphylococcus aureus and to be effective for atopic dermatitis and itchy skin.

본 발명에 사용된 발효 동백오일의 유효성분은 필수 불포화지방산으로서, 특히 올레산을 다량 함유한 오일을 의미한다The active ingredient of the fermentation camellia oil used in the present invention means an essential unsaturated fatty acid, especially an oil containing a large amount of oleic acid

상기 필수 지방산은 유리된 올레산과 리놀레산, 감마리놀렌산 등을 다량 함유하는 것이 바람직하다. 또한, 유리된 필수 지방산을 다량 함유한 발효 동백오일은 5-알파 환원효소를 억제하는 효과가 있는 것이 바람직하다.The essential fatty acid preferably contains a large amount of free oleic acid, linoleic acid, gamma linolenic acid, and the like. In addition, it is preferable that the fermentation camellia oil containing a large amount of the liberated essential fatty acid has an effect of inhibiting the 5-alpha reductase.

상기 올레산은 다른 지방산에 비해 쉽게 산화하지 않고 과산화지질을 생성하지 않는다. 올레산은 리놀레산이나 알파-리놀렌산처럼 혈액속의 LDL-콜레스테롤을 제거하여 동맥경화나 심장질환을 예방하는 것으로 알려져 있으며 항암작용도 하는 것으로 보고되고 있다. 또한 모유에도 가장 많이 함유된 지방산으로 아기의 성장, 발달을 돕는다. The oleic acid does not easily oxidize and does not produce lipid peroxides as compared to other fatty acids. Oleic acid is known to prevent arteriosclerosis or heart disease by removing LDL-cholesterol in the blood, such as linoleic acid or alpha-linolenic acid, and has been reported to be used for anti-cancer activity. It is also the most abundant fatty acid in breast milk, helping the baby grow and develop.

상기 발효효소는 리조푸스속 또는 칸디다속 미생물 유래 리파아제, 또는 식물 및 동물에서 추출, 황산암모늄처리 및 투석 과정을 거쳐 농축된 천연식물 발효용 발효효소농축액인 것이 바람직하다.
The fermentation enzyme is preferably a lipase derived from Rizophus sp. Or Candida sp. Microorganism, or a concentrated fermentation enzyme concentrate for natural plant fermentation, which is obtained by extraction from plant and animal, ammonium sulfate treatment and dialysis.

또한, 본 발명은 발효 동백오일의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a process for producing a fermented camellia oil.

본 발명에 사용된 발효 동백오일은 다음과 같이 제조될 수 있다. 목적을 달성하기 위한 발효 동백오일의 제조방법은 미생물이 생산하는 리파아제를 포함한 발효농축액을 이용하여 오일을 구성하는 골격분자인 글리세롤에서 지방산들을 분리하여 얻는다. 발효를 함으로써 발효 전보다 유리된 필수지방산의 함량이 풍부해진다. The fermented camellia oil used in the present invention can be prepared as follows. Fermentation for Achieving the Object A method for producing camellia oil is obtained by separating fatty acids from glycerol, a skeletal molecule that constitutes oil, using a fermentation concentrate containing lipase produced by microorganisms. By fermentation, the content of essential fatty acids liberated before fermentation is enriched.

보통, 오일 발효를 위해서는 리파아제를 다량으로 생산하는 균주인 미생물 배양액을 직접 오일에 첨가하고 인공 유화제를 소량 넣어 오일이 쉽게 발효될 수 있도록 유화한 다음, 미생물 성장을 최대로 끌어올릴 수 있도록 미생물 배양을 위한 여러 가지 적정 영양분을 넣고 최적조건에서 장시간 충분히 배양한다. 배양이 종료되면 대개 미생물 균체와 오일 배양액을 분리하기 위해 원심분리한다. 이렇게 생산된 미생물 직접 발효오일은 대개 미생물 발효 특유의 냄새가 심하며, 배양된 미생물을 발효오일로부터 분리시켜야 하는 번거로움이 있으며 또한, 발효미생물과 발효하는 동안 생성된 미생물의 여러 부가적 최종 폐기 생성물들이 최종 발효오일 제품에 오염되어 있을 가능성도 높다. 이를 위해 최종 발효오일을 다시 흡착컬럼에 통과시키든지 증류식 혹은 여과식 공정을 추가하여 냄새 및 오염물질을 제거해야 한다. 특히, 미생물이 성장하면서 내놓는 화합물로서 지용성이 높은 물질은 쉽게 최종 발효오일에 오염되고 나중에 발효오일에서 쉽게 제거하기도 어려워 결국 제품성이 떨어지는 경우가 많다. Generally, for oil fermentation, a microorganism culture which is a strain producing a large amount of lipase is directly added to oil, and a small amount of artificial emulsifier is emulsified so that oil can be easily fermented. Then, microorganism cultivation is carried out so as to maximize microorganism growth And then cultivate it for a long time under optimal conditions. When the cultivation is completed, the microorganism is centrifuged to separate the microbial cells and the oil culture medium. The fermented microorganism directly produced fermented oil generally has a high odor characteristic of microbial fermentation, it is troublesome to separate the cultured microorganism from the fermentation oil, and the fermentation microorganism and various additional final products of the microorganism produced during fermentation There is a high possibility that the product is contaminated with the final fermented oil product. To this end, the final fermented oil must be passed back through the adsorption column or by adding distillative or filtration processes to remove odors and contaminants. Particularly, as a compound that the microorganism grows, a substance having high fat-solubility is easily contaminated with the final fermentation oil and is difficult to be easily removed from the fermentation oil later, resulting in poor productivity.

따라서, 본 발명에서는 발효미생물을 리파아제 유도배지에서 선배양한 후 배양액만을 회수하고 농축한 다음 여기서 얻어진 고역가의 리파아제 함유 배양액과 오일을 물리적 방법으로 유화시켜 발효하는 함으로써 첫째, 발효로부터 오는 특유의 발효냄새를 최소화할 수 있고 둘째, 유리 불포화지방산을 최대로 생산할 수 있도록 하며 셋째, 최종 발효오일제품의 미생물 오염문제를 최소화할 수 있으며 넷째, 인공유화제나 기타 화학공정에 의존하지 않기 때문에 몸에 해롭거나 소비자에게 좋지 않은 인상을 줄 수 있는 화학물질의 오염이 없으며 다섯째, 가장 자연스러운 방법으로 유리된 필수불포화지방산을 최대로 생산할 수 있어 다른 발효제품에 비해 경쟁력을 높일 수 있으며 여섯째, 발효여액을 황산암모늄으로 농축하고 완충용액으로 간단하게 투석함으로써 발효 중에 부산물로 생성되는 미생물이 만든 지용성이면서 낮은 분자량의 여러 화합물들을 미연에 제거하여 순수한 발효오일만을 제조할 수 있는 등 여러 장점들을 제공한다. Therefore, in the present invention, the fermentation microorganism is preliminarily grown in a lipase-inducing medium, and then only the culture medium is recovered and concentrated. Then, by fermenting the obtained high-temperature lipase-containing culture medium and oil by physical methods, the fermentation is firstly performed. Second, it can maximize the production of free unsaturated fatty acids. Third, it can minimize the microbial contamination problem of the final fermented oil product. Fourth, because it does not depend on artificial emulsifier or other chemical process, And 5) it is possible to maximize the production of essential unsaturated fatty acids liberated in the most natural way, thereby enhancing the competitiveness compared to other fermented products; and 6) the fermentation filtrate is concentrated with ammonium sulfate Lt; RTI ID = 0.0 > The present invention provides various merits such as the production of pure fermentation oils by removing various compounds having a low molecular weight and a fat-soluble microorganism produced as a by-product during fermentation.

본 발명에 사용된 발효효소는 리파아제(Lipase)인 것이 바람직하고, 상기 발효효소 조성물은 리파아제를 포함하는 조성물인 것이 바람직하며, 특히 리파아제를 생성할 수 있는 미생물을 선배양하고 얻게 되는 효소여액을 농축한 것이 바람직하다. 미생물에서 유래한 리파아제 발효농축액에 한정시키지 않고 식물이나 동물에서 유래한 리파아제도 본 발명의 제조에 포함될 수 있다.The fermentation enzyme used in the present invention is preferably a lipase, and the fermentation enzyme composition is preferably a composition containing lipase. In particular, a microorganism capable of producing a lipase can be obtained in advance, . The lipase derived from plants or animals can be included in the production of the present invention without being limited to the fermentation concentrate of lipase derived from microorganisms.

발효 동백오일의 제조방법을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.The production method of the fermented camellia oil will be described in detail as follows.

본 발명에 사용된 발효 동백오일의 제조방법은 i) 동백오일에 발효 효소 또는 발효효소 조성물을 1:8에서 8:1의 중량비로 혼합하는 단계; ii) 상기 단계 i)의 혼합물을 믹서기에서 5 ~ 10분 동안 블렌딩한 후, 초음파 처리를 30 ~ 60분 동안하여 물리적으로 유화시키는 단계; iii) 상기 단계 ii)의 혼합물을 발효온도 섭씨 25 ~ 45도, pH 5.0 ~ 8.0 및 발효시간 48 ~ 120 시간 동안 300 ~ 400 rpm에서 믹싱하면서 발효시키는 단계; 및 iv) 상기 단계 iii)의 발효물을 원심분리하고 한외여과하여 발효오일을 발효농축액으로부터 분리하는 단계를 포함할 수 있다.The method for producing the fermentation camellia oil used in the present invention comprises the steps of: i) mixing the fermentation enzyme or the fermentation enzyme composition with the camellia oil at a weight ratio of 1: 8 to 8: 1; ii) physically emulsifying the mixture of step i) in a blender for 5 to 10 minutes, followed by ultrasonication for 30 to 60 minutes; iii) fermenting the mixture of step ii) while mixing at a temperature of 25 to 45 degrees Celsius, a pH of 5.0 to 8.0 and a fermentation time of 48 to 120 hours at 300 to 400 rpm; And iv) centrifuging the fermented product of step iii) and ultrafiltering to isolate the fermented oil from the fermentation concentrate.

본 발명에 사용된 발효효소의 제조방법은 a) 미생물(리조푸스속 혹은 칸디다속 미생물을 포함함)을 특정 유도조건에서 배양하여 리파아제 효소가 고역가로 다량 첨가된 발효배양액을 얻는 단계; b) 배양액에서 얻어진 효소여액을 농축하고 투석하는 단계; c)상기 미생물 발효 배양액과 식물성 오일을 첨가하고 최적조건(물리적 유화, 최적 pH, 최적 온도, 최적 믹싱 rpm과 발효시간)에서 발효하는 단계; 및 d) 발효가 끝난 오일을 회수하는 단계를 포함할 수 있다.A method for producing a fermentation enzyme used in the present invention comprises the steps of: a) culturing a microorganism (including Rizophus genus or Candida genus microorganism) under specific induction conditions to obtain a fermentation broth in which the lipase enzyme is added in a large amount at a high frequency; b) concentrating and dialyzing the enzyme filtrate obtained in the culture broth; c) fermenting the microorganism fermentation broth and the vegetable oil at the optimum conditions (physical emulsification, optimum pH, optimum temperature, optimum mixing rpm and fermentation time); And d) recovering the fermented oil.

상기 방법에 있어서, 단계 a)는 미생물을 호기 조건에서 1차 리파아제를 고역가로 최대한 많이 생산하도록 유도배양하는 단계이다. In the above method, step a) is a step of inducing and culturing the microorganism to produce the first-order lipase as much as possible in the high-frequency region under aerobic conditions.

상기 방법에 있어서, 단계 b)는 1차 배양을 마친 배양액에서 균체를분리하고 효소를 농축 투석하는 단계이다. In the above method, step b) is a step of separating the cells from the culture solution after completion of the primary culture and concentrating the enzyme.

상기 방법에 있어서, 배양한 각각의 균주 배양액을 4℃, 10,000 rpm의 조건에서 원심분리하여 균체를 배양액으로부터 분리한 후, 상등액은 4℃에서 황산 암모늄(ammonium sulfate)을 처리하여 단백질을 침전시킨 다음, 효소가 함유된 단백질을 회수한 후, 농축된 효소를 pH 7.0인 완충용액(sodium phosphate buffer, 50 mM)에 녹이고 동일 완충용액에 투석하여 농축된 리파아제를 획득할 수 있다. In the above method, the cultured strains were centrifuged at 10,000 rpm at 4 ° C to separate the cells from the culture. The supernatant was treated with ammonium sulfate at 4 ° C to precipitate proteins , The enzyme-containing protein is recovered, and the concentrated enzyme is dissolved in a sodium phosphate buffer (50 mM) at pH 7.0 and dialyzed into the same buffer solution to obtain concentrated lipase.

상기 방법에 있어서, 단계 c)는 얻어진 리파아제 농축 용액과 식물성 오일을 첨가하여 발효하는 단계이다. In the above method, step c) is a step of fermenting by adding the obtained lipase concentrate and the vegetable oil.

여기에서, 오일의 온도는 40℃가 적당하다. 또한 첨가하는 발효효소액의 pH는 pH 7.0이 바람직하다. 식물성 오일과 발효효소액의 혼합 비율은 발효효소액 50%중량 대비 식물성 오일 50% 중량비의 비율이 바람직하다. 식물성 오일과 발효효소액을 혼합할 때는 믹서기로 약 10분 정도 블렌딩하고 10-60분 정도 초음파 처리한 다음, 발효조에 넣고 발효시킨다. 혼합 회전수는 350rpm이 바람직하다. 발효하는 시간은 120시간이 바람직하다. 발효하는 온도는 40℃가 바람직하다. 이는 리파아제와 식물성 천연오일이 충분히 반응할 수 있도록 발효하여 유리된 필수지방산이 최대로 생산될 수 있도록 해야 하기 때문이다.
Here, the temperature of the oil is suitably 40 占 폚. The pH of the added fermentation enzyme solution is preferably pH 7.0. The mixing ratio of the vegetable oil to the fermentation enzyme solution is preferably a ratio of 50% by weight of the vegetable oil to 50% by weight of the fermentation enzyme solution. When mixing vegetable oil and fermentation enzyme solution, blend for about 10 minutes with a blender, sonicate for 10-60 minutes, and ferment in fermenter. The mixing number of revolutions is preferably 350 rpm. The fermentation time is preferably 120 hours. The fermentation temperature is preferably 40 占 폚. This is because the lipase and the vegetable natural oil must be fermented so that they can react sufficiently, and the maximum amount of the essential fatty acid liberated must be produced.

또한, 본 발명은 동백오일 외에 올리브오일, 카놀라오일, 올리브오일, 유채씨오일, 모링가유 또는 해바라기씨유 중 하나 또는 둘 이상을 포함하는 식물성 오일을 발효하여 올레산 등의 유리된 필수 지방산을 풍부히 함유하고 있는 발효 천연오일을 제공한다.The present invention also relates to a method for fermenting a vegetable oil containing one or more of olive oil, canola oil, olive oil, rape seed oil, moringa oil or sunflower seed oil in addition to camellia oil to liberate essential free fatty acids such as oleic acid To provide a fermented natural oil.

상기 필수 지방산은 유리된 올레산, 리놀레산 또는 감마리놀렌산 등을 다량 함유하고 있으며, 유리된 필수 지방산을 다량 함유한 발효 동백오일은 5-알파 환원효소를 억제하는 효과가 있는 것이 바람직하다.The essential fatty acid contains a large amount of free oleic acid, linoleic acid or gamma linolenic acid, and a fermentation camellia oil containing a large amount of free essential fatty acid preferably has an effect of inhibiting 5-alpha reductase.

또한, 본 발명은 올리브오일, 카놀라오일, 올리브오일, 유채씨오일, 모링가유 또는 해바라기씨유 중 하나 또는 둘 이상을 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시키는 공정을 포함하는 올레산 등의 유리된 필수 지방산을 풍부히 함유하고 있는 발효 천연오일의 제조방법을 제공한다.
The present invention also relates to a process for the fermentation of a fermentation enzyme or fermentation enzyme composition by fermentation of one or more of olive oil, canola oil, olive oil, rapeseed oil, morlinga oil or sunflower seed oil, And a method for producing a fermented natural oil rich in essential fatty acids.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 전립선 비대증 예방 및 개선용 건강기능식품, 화장료 조성물 또는 의약외품을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing and treating enlargement of the prostate gland containing the fermented camellia oil according to the present invention as an active ingredient, and a health functional food, a cosmetic composition or a quasi-drug for preventing and improving enlargement of the prostate gland.

이런 조성물은 발효 동백오일을 주성분으로 하고, 약학적, 식품학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 담체, 예를 들면 비타민 등으로부터 이루어진 선택된 조합을 부가성분으로 포함할 수 있다.Such a composition may comprise a fermented camellia oil as a major component and a selected combination of pharmaceutical, foodstuff or cosmetically acceptable carriers such as vitamins and the like as an additional ingredient.

이런 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. Such a composition may contain at least one active ingredient which exhibits the same or similar functions in addition to the above components.

구체적으로 이런 조성물에는 동백오일에만 한정되지 않고 필수지방산 중 올레산 혹은 리놀레산을 다량 함유하고 있는 식물성 오일을 포함할 수 있다. 여기에는 올리브오일, 카놀라오일, 유채씨오일, 해바라기씨 오일, 피칸오일, 티트리오일 등이 포함될 수 있다. 이들을 발효하여 유리된 필수 불포화지방산을 다량 포함하게 하면 발효 동백오일과 유사한 효과를 가질 수 있다. Specifically, such a composition may include not only the camellia oil but also a vegetable oil containing a large amount of oleic acid or linoleic acid among essential fatty acids. This may include olive oil, canola oil, rapeseed oil, sunflower seed oil, pecan oil, tea trioyl, and the like. By incorporating a large amount of essential unsaturated fatty acids liberated by fermentation thereof, it can have an effect similar to that of the fermented camellia oil.

이런 조성물은 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 제형화될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. Such a composition can be formulated into various formulations, such as oral and parenteral formulations, and when formulated, it can be prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants and the like.

이런 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 조성물의 양을 기준으로 약 0.0001 내지 10 g/kg일 수 있으며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.The dosage of such a composition varies depending on the patient's body weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of disease, and the daily dose is about 0.0001 to 10 g / kg, and may be administered 1 to 6 times a day.

본 발명에서 전립선 비대증을 치료, 개선 및 예방하기 위한 조성물이라 함은 5-알파 환원효소를 효과적으로 억제하여 5-알파 환원효소에 의해 과량으로 만들어지는 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)에 의한 전립선 비대증을 개선 혹은 치료, 예방하는 것을 의미하며 그 임상적 효과는 전립선 비대증으로 인해 비대해진 전립선을 정상의 크기로 회복하는 것을 의미한다.
In the present invention, a composition for treating, improving and preventing enlargement of the prostate refers to a composition which effectively inhibits 5-alpha-reductase and improves or suppresses enlargement of the prostate by dihydrotestosterone produced by 5-alpha reductase Treatment, and prevention of prostatitis, and its clinical effect means restoring the enlarged prostate to normal size due to enlarged prostate.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 탈모 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 탈모 예방 및 개선용 건강기능식품, 화장료 조성물 또는 의약외품을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for prevention and treatment of hair loss comprising fermented camellia oil according to the present invention as an active ingredient, and a health functional food, cosmetic composition or quasi-drug for alopecia prevention and improvement.

본 발명에서 탈모 치료, 개선 및 예방하기 위한 약학적 조성물이라 함은 5-알파 환원효소를 효과적으로 억제함으로써, 5-알파 환원효소에 의해 과량으로 만들어지는 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)에 의해 발생하는 남성형 탈모를 개선, 치료 및 예방하는 것을 의미하며 조성물을 경구투여하거나 두피에 직접도포 시 탈모가 치료되는 것을 의미한다. In the present invention, a pharmaceutical composition for treating, ameliorating and preventing hair loss refers to a composition which effectively inhibits 5-alpha reductase and thereby inhibits male-type hair loss caused by dihydrotestosterone produced by 5-alpha reductase Means that the composition is orally administered or the hair loss is treated upon direct application to the scalp.

특히, 본 발명은 발효한 동백오일을 화장품 조성물이나 도포용으로 사용함으로 두피에 빠르게 흡수되어 더욱 효과적인 남성형 탈모 개선 효과를 가지는 것을 의미한다.
Particularly, the present invention means that the fermented camellia oil is rapidly absorbed into the scalp by using it for cosmetic composition or application, and thus has a more effective male-type alopecia improvement effect.

또한, 본 발명은 동백오일 외에 올리브오일, 카놀라오일, 올리브오일, 유채씨오일, 모링가유 또는 해바라기씨유 중 하나 이상을 포함하는 식물성 오일을 발효하여 올레산 등의 유리된 필수 지방산을 풍부히 함유하고 있는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 전립선 비대증 예방 및 개선용 건강기능식품, 화장료 조성물 또는 의약외품을 제공한다.The present invention also encompasses a method of fermenting a vegetable oil containing at least one of olive oil, canola oil, olive oil, rape seed oil, moringa oil or sunflower seed oil in addition to camellia oil to abundantly contain free essential fatty acids such as oleic acid A pharmaceutical composition for preventing and treating enlargement of the prostate gland containing the fermented natural oil as an active ingredient, and a health functional food, a cosmetic composition or a quasi-drug for preventing and improving enlargement of the prostate gland.

또한, 본 발명은 동백오일 외에 올리브오일, 카놀라오일, 올리브오일, 유채씨오일, 모링가유 또는 해바라기씨유 중 하나 이상을 포함하는 식물성 오일을 발효하여 올레산 등의 유리된 필수 지방산을 풍부히 함유하고 있는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 탈모 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 탈모 예방 및 개선용 건강기능식품, 화장료 조성물 또는 의약외품을 제공한다.
The present invention also encompasses a method of fermenting a vegetable oil containing at least one of olive oil, canola oil, olive oil, rape seed oil, moringa oil or sunflower seed oil in addition to camellia oil to abundantly contain free essential fatty acids such as oleic acid Which comprises a fermented natural oil as an active ingredient, and a health functional food, cosmetic composition or quasi-drug for alopecia prevention and improvement.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 상세히 설명하면 다음과 같으나, 본 발명의 범위가 아래의 실시예에 의해 한정된 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited by the following Examples.

<< 실시예Example 1> 리파아제를 생성하는 미생물과 배지 조성 및 침전, 농축, 투석과정을 거친 고농축 1> Microorganisms producing lipase and medium composition and high concentration through precipitation, concentration and dialysis 발효효소액Fermented enzyme solution 제조 Produce

동백오일을 발효하기 위하여 리파아제를 생성하는 칸디다 루고사(Candida rugosa) 또는 다른 칸디다속 미생물 배양의 배지는 2% 올리브 오일(olive oil), 0.3% 효모 추출물, 0.3% 맥아 추출물(Malt extract), 0.5% 펩톤(peptone), 1% 덱스트로스(dextrose)의 조성을 사용하였고, pH 7.0, 섭씨 30도에서 배양하였으며, 리조푸스 오리제(Rhizopus oryzae) 또는 다른 리조푸스속 미생물 배양의 배지는 2% 올리브 오일, 4% 감자전분, 1% 덱스트로스의 조성을 사용하였고, pH 6.0, 섭씨 30도에서 배양하여 리파아제가 다량 생산분비된 고역가 발효농축액 제조에 사용하였다. 미생물의 배양 시간은 칸디다 균주인 경우 70-90시간 배양하였고, 리조푸스 균주인 경우에는 100-120시간 동안 배양하였다. 미생물 배양이 종료되면 8,000 rpm으로 원심분리하여 미생물 균체를 가라앉히고 상등액만 회수한 다음 여기에 60-80% 황산암모늄을 섭씨 4도에서 서서히 첨가하면서 저어주어 배양액 속 단백질들을 침전시켰다. 침전된 효소 단백질은 섭씨 4도에서 12,000 rpm으로 원심분리하여 가라앉히고 상등액을 제거한 다음, 여기에 50 mM 인산염 완충용액(sodium phosphate buffer)(pH 7.0)을 넣어 녹였다. 이렇게 농축된 효소 단백질은 동일 완충용액으로 섭씨 4도에서 2-4회 반복 투석하여 분자량이 적은 물질들을 제거하였다. 이렇게 하여 획득한 고역가의 농축 발효효소액의 리파아제 역가를 측정하기 위해 비누화 반응을 통한 발색법을 사용하였다. 구리 아세테이트-피리딘 시약의 제조는 5%(w/v) cupric acetate(Sigma)가 되게 만들고 피리딘(Merck)을 사용하여 pH를 6.1로 맞추어 제조하였다. 기질은 1% 폴리비닐알콜(polyvinylalcohol)에 10% 올리브 오일을 포함하도록 만들고 기질 2.5ml과상기 농축발효효소액 1 ml을 섭씨 37도에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 5 ml 아세톤(acetone)으로 반응을 종료시켰다. 생성된 유리된 지방산은 2.5 ml 이소옥탄(isooctane)을 넣어 녹이고 구리-아세테이트-피리딘 1ml을 넣고 구리화 반응을 시켜 발색시켰다. 이때 발색된 정도는 715nm에서 흡광도를 측정하였다. 리파아제의 지방분해 활성은 unit 단위로 표시하며 1 unit은 생성된 지방산의 1 μmol로 정의하였다.The culture medium of Candida rugosa or other Candida species microorganism producing lipase for fermentation of camellia oil contains 2% olive oil, 0.3% yeast extract, 0.3% malt extract, 0.5 The culture medium of Rhizopus oryzae or other Rhizopus oryzae microorganisms was cultured in a medium containing 2% olive oil (1%), peptone (1%) and dextrose (1% , 4% potato starch, and 1% dextrose were used, and they were cultured at pH 6.0 and 30 ° C to prepare a high-fermented concentrate having high production and secretion of lipase. The culture time of the microorganism was 70-90 hours for Candida strains and 100-120 hours for Risofus strains. After the microbial cultivation was completed, the microbial cells were centrifuged at 8,000 rpm to recover the supernatant. Then, 60-80% ammonium sulfate was added slowly at 4 ° C. to precipitate proteins in the culture liquid. The precipitated enzyme protein was centrifuged at 4,000 rpm at 12,000 rpm, and the supernatant was removed. Then, 50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0) was added to dissolve the precipitated enzyme protein. The concentrated enzyme protein was dialyzed 2-4 times at 4 ° C in the same buffer to remove low molecular weight substances. In order to measure the lipase activity of the high-concentration concentrated fermentation enzyme solution thus obtained, a coloring method using a saponification reaction was used. Preparation of the copper acetate-pyridine reagent was made up to 5% (w / v) cupric acetate (Sigma) and adjusted to pH 6.1 with pyridine (Merck). The substrate was made to contain 10% olive oil in 1% polyvinyl alcohol, and 2.5 ml of the substrate and 1 ml of the concentrated fermentation enzyme solution were reacted at 37 ° C for 30 minutes. After the reaction, the reaction was terminated with 5 ml of acetone. The resulting free fatty acids were dissolved by adding 2.5 ml of isooctane, and 1 ml of copper-acetate-pyridine was added thereto to conduct a copperation reaction. The degree of color development was measured at 715 nm. The lipase activity of lipase is expressed in unit of unit, and 1 unit is defined as 1 μmol of the produced fatty acid.

균체 무게 (g/100 ml)Cell weight (g / 100 ml) 리파아제 활성 (U/ml)The lipase activity (U / ml) 칸디다 루고사(Candida rugosa) Candida rugosa ) 2.72.7 4.84.8 리조푸스 오리제(Rhizopus oryzae) Rhizopus oryzae ) 2.92.9 3.23.2

<< 실시예Example 2> 고농축 2> High concentration 발효효소액을The fermentation enzyme solution 이용한 동백 오일의 발효 Fermentation of used camellia oil

효소가 반응하는 최적의 온도 조건을 잡기 위해 동백오일의 온도를 37℃로 설정한 후, 미생물 배양에 의해 생산되고 고농축된 발효효소액을 pH 7.0의 인산염 완충용액(Sodium phosphate buffer, 50 mM)에 투석한 후 서로 섞어 사용하였다. 즉, 고농축 발효효소액(리파아제 포함) 50% 중량 대비 오일 50% 중량비의 비율로 혼합한 후, 믹서기에서 10분간 블렌딩한 다음 다시 30분 동안 초음파 처리하여 물리적 유화과정을 마친 후, 회전수 350 rpm, 37℃에서 72시간 동안 발효하였다. 발효를 마친 오일은 10,000 rpm으로 20분간 원심분리 후 발효효소액과 효소 잔여물을 분리하고 한외여과하여 발효된 천연오일만을 수득하였다.
The temperature of the camellia oil was set at 37 ° C in order to obtain the optimum temperature condition for the enzyme reaction. The fermentation enzyme solution produced by microbial cultivation and dialyzed was dialyzed against phosphate buffer (50 mM) in pH 7.0 And then mixed with each other. That is, the mixture was mixed at a ratio of 50% by weight of high-concentration fermentation enzyme solution (containing lipase) to 50% by weight of oil, blended in a blender for 10 minutes and then ultrasonically treated for 30 minutes to complete physical emulsification. Followed by fermentation at 37 DEG C for 72 hours. After the fermented oil was centrifuged at 10,000 rpm for 20 minutes, the fermentation enzyme solution and the enzyme residue were separated and ultrafiltered to obtain only fermented natural oil.

<< 비교예Comparative Example 1> 발효한 올리브오일 1> Fermented olive oil

상기 <실시예 2>와 동일한 방법으로 발효한 올리브오일을 수득하였다.An olive oil fermented in the same manner as in <Example 2> was obtained.

<< 비교예Comparative Example 2> 발효한 2> fermented 카놀라오일Canola oil

상기 <실시예 2>와 동일한 방법으로 발효한 카놀라오일을 수득하였다.A canola oil fermented in the same manner as in <Example 2> was obtained.

<< 비교예Comparative Example 3> 발효하지 않은 동백오일 3> Camellia oil not fermented

<< 비교예Comparative Example 4> 발효하지 않은 올리브오일 4> Unfermented olive oil

<< 비교예Comparative Example 5> 발효하지 않은 5> Not fermented 카놀라오일Canola oil

<< 실험예Experimental Example 1> 발효한 동백 오일의 유리된 필수지방산 생산 수율 측정 1> Measurement of yield of free essential fatty acid production of fermented camellia oil

HPLC를 이용하여 필수지방산 함량을 측정하였다. 이때 각각의 필수지방산의 함량을 정량할 때는 각 지방산에 대한 표준시약을 구하여 HPLC로 표준곡선을 먼저 구하고 발효한 동백오일을 분석한 후 이 표준곡선과 비교하여 정량하였다. 사용한 HPLC 컬럼은 (C18,250 x 4.6 mm ID)를 사용하였고 이동상(mobile phase)으로는 0.005% TFA in acetonitrile:0.005% TFA in water를 부피비로 8:2로 섞어 사용하였으며 유속은 1.0 ml/min, 시료주입량은 0.01 ml을 사용하였으며 UV 210 nm의 파장에서 측정하였다. 이동상의 기울기 조건으로는 20:80 (v/v)로 시작하여 30분간 유지시켜주다가 이후 극성을 높여가며 지방산들을 분석하였다.The content of essential fatty acids was measured by HPLC. When determining the content of each essential fatty acid, the standard reagent for each fatty acid was obtained, and the standard curve was first obtained by HPLC. The fermented camellia oil was analyzed and compared with the standard curve. 0.005% TFA in acetonitrile: 0.005% TFA in water was used as the mobile phase in a volume ratio of 8: 2, and the flow rate was 1.0 ml / min (C18, 250 x 4.6 mm ID) , The sample injection amount was 0.01 ml, and the measurement was performed at a wavelength of 210 nm. The slope conditions of the mobile phase were 20:80 (v / v) and maintained for 30 minutes. After that, fatty acids were analyzed by increasing the polarity.

하기 표 3에 표시한 것은 본 발명을 위해 사용한 동백오일(통영, 한국), 카놀라오일(퀘벡, 캐나다), 올리브유(그리스산)의 성적서에 기재된 지방산의 함량을 나타낸 것이다. 이들 지방산은 99% 이상 글리세롤 골격분자에 에스테르 결합되어 있으며 유리된 지방산의 전체함량은 1% 미만이었다.Table 3 shows the contents of fatty acids listed in the certificate of camellia oil (Tongyeong, Korea), canola oil (Quebec, Canada), and olive oil (Greek acid) used for the present invention. These fatty acids were ester bound to more than 99% of glycerol backbone molecules and the total content of free fatty acids was less than 1%.

본 발명에 사용하기 위해 구입한 천연오일의 총지방산 함량The total fatty acid content of the natural oils purchased for use in the present invention 올레산Oleic acid 리놀레산Linoleic acid 리놀렌산Linolenic acid 팔미트산Palmitic acid 스테아린산Stearic acid 동백오일(통영)Camellia oil (Tongyeong) 85-87%85-87% 4.5%4.5% 0.3%0.3% 8.5%8.5% 1.1%1.1% 올리브유 (Henry Lamotte 사)Olive oil (Henry Lamotte) 72-75%72-75% 5.0-6.0%5.0-6.0% 0.6%0.6% 3.7%3.7% 11.5%11.5% 카놀라유 (캐나다산)Canola oil (Canadian) 63.4-66.0%63.4-66.0% 17.0-21.2%17.0-21.2% 8.7-9.2%8.7-9.2% 4.2-4.5%4.2-4.5% 1.6%1.6%

동백오일, 올리브유, 카놀라유의 발효 전과 발효 후 지방산 함량Before and after fermentation of camellia oil, olive oil and canola oil, fatty acid content 발효Fermentation 함량 (%)content (%) 올레산(Oleic acid) (OA)Oleic acid (OA) 리놀레산(Linoleic acid) (LA)Linoleic acid (LA) 감마-리놀렌산(γ-Linolenic acid) (GLA)Gamma-linolenic acid (GLA) 실시예2
(발효 동백오일)Example 2
(Fermented camellia oil) 38.7638.76 2.062.06 0.100.10 비교예1
(발효 올리브 오일)Comparative Example 1
(Fermented olive oil) 25.3525.35 1.021.02 0.020.02 비교예2
(발효 카놀라 오일)Comparative Example 2
(Fermented canola oil) 19.2519.25 0.950.95 0.050.05 비교예3
(발효전 동백오일)Comparative Example 3
(Camellia oil before fermentation) Not detectedNot detected Not detectedNot detected Not detectedNot detected 비교예4
(발효전 올리브 오일)Comparative Example 4
(Olive oil before fermentation) Not detectedNot detected Not detectedNot detected Not detectedNot detected 비교예5
(발효전 카놀라 오일)Comparative Example 5
(Canola oil before fermentation) Not detectedNot detected Not detectedNot detected Not detectedNot detected

상기 된 표 3에서 알 수 있듯이 발효하지 않은 오일에서는 유리된 필수지방산이 거의 측정되지 않았고 발효한 식물성 오일에서만 유리된 필수지방산들을 검출할 수 있었으며, 이들 중 발효 동백오일에서 유리된 필수지방산의 함량이 가장 높은 것을 알 수 있다. 또한 필수지방산 중에서도 유리된 올레산이 가장 많음을 확인할 수 있다.
As can be seen from the above Table 3, in the non-fermented oil, almost no free essential fatty acids were measured, and essential fatty acids free from the fermented vegetable oil could be detected. Among them, the content of the essential fatty acids liberated from the fermented camellia oil The highest is known. It is also confirmed that oleic acid liberated from the essential fatty acids is the most abundant.

<< 실험예Experimental Example 2> 2> 생체내In vivo (( inin vivovivo ) 실험을 통한 동백 발효오일의 전립선 무게 변화 측정Measurement of prostate weight change of camellia fermented oil through experiment

실험에 사용할 동물은 260～300g의 7주령 수컷 Sprague Dawley계 흰쥐(셈타코, 오산, Korea)를 이용하여 다음과 같은 실험을 진행하였다. 1주일 간의 적응기간을 두었으며 이들 렛트들은 섭씨 18-22도, 습도 약 40-50%, 그리고 12시간의 암조건과 12시간의 명조건에서 키우면서 실험하였다. 비교군으로는 전립선 비대증에 대하여 치료효과를 나타내는 피나스테라이드를 사용하였다. 렛트 자신의 내부 테스토스테론의 영향을 배제하기 위해 정상군을 제외하고 수컷 SD계 흰쥐를 에테르로 마취 후 복부 정중 절개를 통하여 복강내부를 확인하고 복강 내로 고환을 위치시킨 다음 3-0 silk suture 실을 이용하여 측부 복벽에 고환을 고정시켰다. 1주일간 안정을 취하게 한 후, 각 개체의 군은 정상군, 호르몬 자극에 의한 전립선 비대 유도군(대조군), 호르몬 자극에 의한 전립선 비대 유도 후 본 발명에 따른 조성물(발효 동백오일)을 투여한 실험군 1, 호르몬 자극에 의한 전립선 비대 유도 후 피나스테라이드를 투여한 비교군, 및 조성물의 기타 효과 및 독성여부를 확인하기 위한 본 발명의 조성물(발효 동백오일)을 투여한 실험군 2로 각각 분류하였다. 각 그룹은 몸무게 기준으로 각 그룹당 몸무게가 거의 동일하게 6마리씩 배정하였으며 전립선 비대를 유도하기 위해 프로피온산 테스테스테론(testosterone)(TP)은 3주간 5 mg/kg/일 씩 피하주사하고 본 발명의 조성물의 효과를 보기 위해 발효 동백오일을 100 mg/kg/일 또는 400 mg/kg/일의 양으로 실험군에 경구투여하였고 비교군에서는 피나스테라이드를 2 mg/kg/일을 3주간 경구 투여하였다. The animals used in the experiment were the mice (Sprague Dawley rats) (Mt. Tacho, Osan, Korea) at the age of 6 weeks. The lectures were maintained at a temperature of 18-22 ° C, a humidity of 40-50%, and 12 hours of darkness and 12 hours of light. As the comparative group, finasteride, which shows a therapeutic effect on the enlarged prostate, was used. In order to exclude the effect of LET's own internal testosterone, except for the normal group, male SD rats were anesthetized with ether, and the inside of the abdominal cavity was examined through abdominal midline incision. The testes were placed in the abdominal cavity and then 3-0 silk suture thread was used The testis was fixed on the lateral abdominal wall. After one week of stabilization, groups of individuals were divided into normal group, hypertrophied group induced by hormone stimulation (control group), prostate hyperplasia induced by hormone stimulation, and composition of the present invention (fermented camellia oil) Experimental group 1, Comparative group in which finasteride was administered after induction of prostatic hyperplasia by hormone stimulation, and Experimental group 2 in which the composition of the present invention (fermented camellia oil) was administered to confirm other effects and toxicity of the composition. Each group was divided into six groups with approximately the same weight per group. In order to induce enlargement of the prostate, propionic acid testosterone (TP) was subcutaneously injected at 5 mg / kg / day for 3 weeks, Fermented camellia oil was orally administered to the experimental group at a dose of 100 mg / kg / day or 400 mg / kg / day. In the comparative group, 2 mg / kg / day of pinasteride was orally administered for 3 weeks.

실험군Experimental group 시료 및 일일투여량 (21일)Samples and daily dose (21 days) 정상normal VehicleVehicle 대조군Control group TP
(5 mg/kg/일)TP
(5 mg / kg / day) VehicleVehicle 실험군 1Experiment 1 실시예2 발효동백 (100 mg/kg/일)Example 2 Fermented Camellia (100 mg / kg / day) 실시예2 발효동백 (400 mg/kg/일)Example 2 Fermented Camellia (400 mg / kg / day) 비교군Comparative group 피나스테라이드 (2 mg/kg/일)Finasteride (2 mg / kg / day) 실험군 2Experiment 2 실시예2 발효동백 (100 mg/kg/일)Example 2 Fermented Camellia (100 mg / kg / day) 실시예2 발효동백 (400 mg/kg/일)Example 2 Fermented Camellia (400 mg / kg / day)

상기 표 4에 나타난 대로 경구투여를 3주간 실시한 후 쥐를 희생하여 결과를 확인하였다. 결과는 하기 표 5과 도 1에 나타내었다.After oral administration for 3 weeks as shown in Table 4, the mice were sacrificed and the results were confirmed. The results are shown in Table 5 and FIG.

실험군Experimental group 전립선 무게 (g/kg)Prostate weight (g / kg) 정상normal 0.534 ± 0.0750.534 + 0.075 대조군Control group 0.890 ± 0.0530.890 + - 0.053 실험군 1Experiment 1 0.685 ± 0.0810.685 + 0.081 0.595 ± 0.0450.595 + 0.045 비교군Comparative group 0.572 ± 0.0390.572 + 0.039 실험군 2Experiment 2 0.525 ± 0.0310.525 + 0.031 0.553 ± 0.0470.553 + 0.047

실험한 결과 도 1에 나타난 것과 같이, 대조군은 정상군의 전립선 무게보다 대조군의 무게가 약 60% 정도 증가하였으며 <실시예 2>를 투여한 실험군 1, 2는 각각 23.1%, 33.2%의 비대증 억제효과를 나타내었다. 또한 전립선 비대를 유도하지 않은 실험군 2는 정상군과 비슷한 수준으로 나타나 발효 동백오일은 건강한 전립선에 어떠한 부작용이나 전립선 발달을 억제하지는 않는 것으로 보인다.
As shown in FIG. 1, in the control group, the weight of the control group was increased by about 60% over the weight of the normal group, and the test groups 1 and 2 administered with Example 2 were 23.1% and 33.2% Effect. Experimental group 2, which did not induce enlargement of the prostate, was similar to normal group, and fermented camellia oil did not seem to suppress any adverse effects or prostate development on healthy prostate.

<< 실험예Experimental Example 3> 발효 동백 오일의 5-알파 환원효소의 억제효과 측정 3> Measurement of inhibitory effect of 5-alpha reductase of fermented camellia oil

5-알파 환원효소 억제 효과는 Hirosumi의 방법대로 실시하였다. 마이크로 튜브에 40 mM potassuim phosphate, 0.2 mM NADPH의 완충용액에 효소와 상기 <실시예 2>에서 제조된 발효 동백오일 시료 및 1 mM DTT, 120 nCi[1.2.6.7-3H]T를 혼합하여 최종 용량을 500 μl로 맞추고 잘 혼합한 후, 37℃에서 60분간 반응시켰다. 그 뒤 1 ml의 에틸아세테이트를 넣어 반응을 종료시킨 후에 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리 하여 상층액을 얻었다. 상층액은 60℃에서 완전히 건조시키고 50 μl 에틸아세테이트를 넣어 녹인 후 TLC에서 전개하였다. TLC의 분리조건에 사용한 용매는 50% 사이클로 헥산, 50% 에틸아세테이트로 하였다. TLC 상에 나타나는 생성물인 테스토스테론은 254 nm에서 UV 조사기로 확인하고 10% 황산을 뿌려 디하이드로테스토스테론을 확인하였다. 정량적인 분석을 위해 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론 부위를 오려 낸 후 10 ml의 Ultima GoldTM cocktail(PerkinElmer, Massachusetts, USA)을 넣어 Liquid scintillation analyzer(Packard Bioscience, Meriden, USA)로 측정하였다. 5-알파 환원효소에 의한 테스토스테론의 전환율은 다음 식으로 계산하였다. The 5-alpha reductase inhibitory effect was carried out according to Hirosumi's method. To the microtube, 40 mM potassuim phosphate and 0.2 mM NADPH buffer were mixed with the enzyme, the fermented camellia oil sample prepared in Example 2, 1 mM DTT and 120 nCi [1.2.6.7-3H] T, Was adjusted to 500 μl, mixed well, and reacted at 37 ° C for 60 minutes. Then, 1 ml of ethyl acetate was added to terminate the reaction, followed by centrifugation at 1500 rpm for 5 minutes to obtain a supernatant. The supernatant was completely dried at 60 ° C, dissolved in 50 μl of ethyl acetate, and developed by TLC. The solvent used for the TLC separation was 50% cyclohexane, 50% ethyl acetate. Testosterone, a product of TLC, was identified by UV irradiation at 254 nm and spiked with 10% sulfuric acid to identify dihydrotestosterone. For quantitative analysis, testosterone and dihydrotestosterone were excised and counted using a liquid scintillation analyzer (Packard Bioscience, Meriden, USA) with 10 ml of Ultima Gold ™ cocktail (PerkinElmer, Massachusetts, USA). The conversion of testosterone by 5-alpha reductase was calculated by the following equation.

5-알파 전환효소 억제활성(%) 5-alpha Converting Enzyme Inhibitory Activity (%)

={1-(디하이드로테스토스테론/테스토스테론+디하이드로테스토스테론)}×100= {1- (dihydrotestosterone / testosterone + dihydrotestosterone)} x 100

실험한 결과 도 2에 나타난 것과 같이, 발효 동백오일이 5-알파 환원효소를 억제하는지를 보는 본 실험에서 양성대조군으로 사용한 finasteride는 0.5 ppm의 농도에서 약 98% 억제할 수 있었다. Finasteride의 논문에 보고된 IC₅₀값은 69 nM (type II 5-alpha reductase), 360 nM (type I 5-alpha reductase)이다. 분자량이 372.5 dalton임을 감안하면 0.03-0.13 ppm 농도에서 IC₅₀값을 가진다. 반면 발효 동백오일의 IC₅₀ 값은 발효전 동백오일의 음성대조군(control)의 값을 고려하면 약 80 ppm이다.
As shown in FIG. 2, finasteride used as a positive control was able to inhibit about 98% at a concentration of 0.5 ppm in this experiment to see whether fermentation camellia oil inhibits 5-alpha reductase. The IC ₅₀ values reported in the Finasteride study are 69 nM (type II 5-alpha reductase) and 360 nM (type I 5-alpha reductase). Given that the molecular weight is 372.5 dalton, it has an IC ₅₀ value at a concentration of 0.03-0.13 ppm. On the other hand, the IC ₅₀ value of the fermented camellia oil is about 80 ppm considering the negative control value of the camellia oil before fermentation.

<< 실험예Experimental Example 4> 4> 모낭세포의Follicular 성장 촉진 효과 측정 Measuring growth acceleration

모유두세포는 모공보다 아래 있는 모낭의 아래부분에서 발모명령을 내리는 세포이다. 따라서 발효 동백 오일에 의해 모유두 세포의 성장이 촉진되는지 실험하였다.The dermal papilla is a cell that commands the hair growth in the lower part of the hair foll below the pores. Therefore, we examined whether the growth of the dermal papilla cells was promoted by the fermented camellia oil.

실험에 사용하는 세포주로 인간 모유두세포(Human Dermal papilla cell)를 이용하였다. 세포배양은 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5％ CO₂에서 배양하였다. 세포를 96 well의 각 well 당 1 x 10⁵ cells/mL로 분주한 다음 24시간 배양하였다. 24시간 후 이전 배양에 사용된 배지를 제거하고 시료를 DMSO에 녹인 뒤 DMSO의 최종농도가 1%가 되도록 배지로 희석하여 발효 오일의 농도별(μg/mL)로 각각 37℃, 5％ CO₂에서 24시간 동안 각각 처리하였다. 양성대조군으로는 finasteride를 0.5 ppm으로 처리하였다. 처리 후 각 well 당 0.2％ MTT용액을 20㎕씩 첨가하여 37℃, 5％ CO₂ 배양기에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO 150 ㎕씩을 첨가하고 10분간 상온에서 생성된 포르마잔(formazan)을 모두 녹이고 ELISA reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. DMSO에 대한 영향을 알아보기 위해 일반 대조군과 1％ DMSO에 대한 대조군으로 나누어 실험하며, 세포 성장율(％)은 다음과 같은 식을 사용하여 나타내었다.A human dermal papilla cell was used as a cell line to be used in the experiment. Cell cultures were cultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS at 37 ° C and 5% CO ₂ . Cells were plated at 1 × 10 ⁵ cells / mL for each well of 96 wells and cultured for 24 hours. After 24 hours, remove the medium used in the previous cultivation, each of the sample and after dissolved in DMSO the final concentration of DMSO is diluted with medium to a 1% concentrations (μg / mL) of the fermentation five days 37 ℃, 5% CO ₂ For 24 hours. As a positive control, finasteride was treated at 0.5 ppm. After treatment, 20 μl of 0.2% MTT solution was added to each well, followed by reaction at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator for 3 hours. After the reaction, the supernatant was removed, and 150 μl of DMSO was added. All of the formazan produced at room temperature for 10 minutes was dissolved, and the absorbance at 570 nm was measured using an ELISA reader. To investigate the effect of DMSO on cell viability, we divided into two groups: normal control and 1% DMSO. Cell growth rate (%) was calculated using the following equation.

세포 성장율(％)=(샘플처리군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100Cell growth rate (%) = (absorbance of sample treated group / absorbance of control group) x 100

실험한 결과 도 3에 나타난 것 같이, 발효 동백오일의 400 ppm에서 모유두 세포의 성장 증식 효과가 우수하였으며 대조군에 비하여 120±4.5% 정도 모유두 세포가 더 성장하였다. 발효 동백오일 400 ppm은 양성 대조군으로 사용한 0.5 ppm finasteride의 104.5±3.3% 보다 더 증가 효과가 높게 나타났다.
As shown in FIG. 3, the growth of the dermal papilla cells at 400 ppm of the fermentation camellia oil was excellent, and the dermal papilla cells grew 120 ± 4.5% more than the control group. 400 ppm of fermented camellia oil showed a higher effect than 104.5 ± 3.3% of 0.5 ppm finasteride used as a positive control.

<< 실험예Experimental Example 5> 세포 안전성 측정 5> Measurement of cell safety

본 발명의 발효 동백오일의 마우스 유래 대식세포주인 Raw264.7 세포에 대한 독성을 측정하기 위하여 MTT assay를 실시하였다.To determine the toxicity of the fermented camellia oil of the present invention to Raw264.7 cells, a mouse-derived macrophage cell line, MTT assay was performed.

대식세포에 대한 독성 측정은 MTT [(3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)(Sigma, MO, 미국)] 측정으로 분석하였다. Raw264.7 세포를 96 well의 각 well 당 1 x 10⁴ cells/mL로 분주한 다음, 37℃, 5％ CO₂에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 이전 배양에 사용된 배지를 제거하고 시료를 DMSO에 녹인 뒤 DMSO의 최종농도가 1%가 되도록 배지로 희석하여 발효 오일의 농도별(μg/mL)로 각각 37℃, 5％ CO₂에서 5시간과 24시간 동안 각각 처리하였다. 처리 후 각 well 당 0.2％ MTT용액을 20㎕씩 첨가하여 37℃, 5％ CO₂ 배양기에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO 150 ㎕씩을 첨가하고 10분간 상온에서 생성된 포르마잔(formazan)을 모두 녹이고 ELISA reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. DMSO에 대한 영향을 알아보기 위해 일반 대조군과 1％ DMSO에 대한 대조군으로 나누어 실험하며, 세포 생존율(％)은 다음과 같은 식을 사용하여 나타내었다.The toxicity to macrophages was analyzed by measuring MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide] (Sigma, MO, USA). Raw 264.7 cells were plated at 1 × 10 ⁴ cells / mL per well in 96 wells and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 24 hours. After 24 hours, remove the medium used in the previous cultivation, each of the sample and after dissolved in DMSO the final concentration of DMSO is diluted with medium to a 1% concentrations (μg / mL) of the fermentation five days 37 ℃, 5% CO ₂ For 5 hours and 24 hours, respectively. After treatment, 20 μl of 0.2% MTT solution was added to each well, followed by reaction at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator for 3 hours. After the reaction, the supernatant was removed, and 150 μl of DMSO was added. All of the formazan produced at room temperature for 10 minutes was dissolved, and the absorbance at 570 nm was measured using an ELISA reader. To investigate the effects on DMSO, experiments were performed by dividing into a control group and a control group for 1% DMSO. Cell viability (%) was expressed by the following equation.

세포 생존율(％)=(샘플처리군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100Cell survival rate (%) = (absorbance of sample treated group / absorbance of control group) x 100

실험한 결과 도 4에서 보는 바와 같이, 본 발명에 의하여 제조된 발효 동백오일에 대한 세포독성은 1000 ppm이라는 고농도에서도 독성이 없음을 알 수 있다.
As shown in FIG. 4, it can be seen that the cytotoxicity of the fermented camellia oil prepared by the present invention is not toxic even at a high concentration of 1000 ppm.

<< 실험예Experimental Example 6> 6> 단회One time 독성 측정 Toxicity measurement

실험동물은 6주령 Sprague Dawley(SD) 계통의 rat(샘타코, 한국)로, 시험군은 암컷과 수컷 각 5마리씩 대조군과 실험군으로 정하였다. 이 동물들은 인수 시 및 적응기간 동안 일반증상의 이상이 관찰되지 않았다. 사육조건은 온도 22 ± 2℃, 상대습도 45 ± 10%, 조명시간 12시간(오전 6시 ~ 오후 6시)으로 설정한 뒤 수행하고, 실험동물용 고형사료(샘타코, 한국)와 정수시스템을 이용한 물(Tap water)을 자유섭취 하도록 하였다. 발효 동백 오일의 단 회 독성시험에서 실험군은 발효 동백 오일을 증류수에 용해하여 투여하고, 대조군은 증류수를 투여하였으며, rat는 시료 투여 12시간 전에 절식시키고 통상 건강기능성 식품의 단회 독성 경구 투여 농도로 사용되는 농도인 2 g/kg으로 1회 경구투여 한 후 14일 동안 관찰하였다. 임상증상 관찰은 식품의약품안전청의 독성시험기준 및 OECD test guideline 420(TG 420)에 따라서 실시하였다. 즉, 모든 실험동물은 투여 당일 날에 투여 후 6시간 동안 매 시간마다 관찰하였으며, 다음날부터 14일까지는 1일 1회씩 동물의 일반상태의 변화, 중독증상의 발현 및 사망유무를 관찰하였다. 또한 시험물질 투여 당일과 14일째의 체중변화를 측정하였다. 시험 종료 후 실험동물을 마취하고 치사시킨 다음 외관 및 내부 장기의 이상 유무를 육안으로 관찰하였다. Experimental animals were a 6-week-old Sprague Dawley (SD) strain (Samtaco, Korea), and the control and experimental groups were 5 male and 5 female. These animals were not observed for general symptoms during acquisition and during the adaptation period. The rearing conditions were set at a temperature of 22 ± 2 ° C, a relative humidity of 45 ± 10% and a lighting time of 12 hours (6:00 am to 6:00 pm), followed by a solid feed (Samtaco, Korea) (Tap water) was freely consumed. In the single toxicity test of the fermented camellia oil, fermented camellia oil was dissolved in distilled water and the control group was treated with distilled water. The rat was fasted 12 hours before the administration of the sample and used as a single oral toxin concentration (2 g / kg), and then observed for 14 days. Clinical symptoms were observed according to the Korea Food & Drug Administration 's toxicity test standard and OECD test guideline 420 (TG 420). That is, all the animals were observed every hour for 6 hours after the administration on the day of administration, and the change of the general state of the animal, the expression of the toxic symptoms and the deaths were observed once a day from the next day to the 14th day. The body weight change on the day of the test substance administration and on the 14th day was also measured. After the end of the test, the animals were anesthetized and sacrificed, and visual appearance of the external appearance and internal organs was visually observed.

실험한 결과 도 5 내지 도 7에서 보는 바와 같이, 시료를 투여에 따른 수컷과 암컷에서 사망한 개체는 없었고 당일 4회 관찰 및 다음날부터 14일간 매일 1회 육안 관찰을 한 결과, 대조군에 비해서 동백발효오일 투여군에서 특이적인 행동 변화가 없었다. 또한, 도 5 내지 도 7에서 알 수 있듯이 시료 투여 14일 후 체중 변화측정과 부검 후 장기 무게의 변화도 대조군에 비교하여 유의한 변화가 없었다. 따라서 발효 동백 오일은 동물 단회 독성이 없음을 알 수 있다.
As shown in FIG. 5 to FIG. 7, no deaths occurred in males and females after administration of the sample. After 4 observations on the day and 1 day on the day after 14 days from the next day, There was no specific behavioral change in the oil-treated group. Also, as can be seen from FIGS. 5 to 7, there was no significant change in the weight change after 14 days of the sample administration and the change in the organ weight after the autopsy compared to the control group. Thus, it can be seen that the fermented camellia oil is not toxic to animals.

<< 실험예Experimental Example 6> 6> 간이임상Simple clinical 시험 exam

본 발명의 발효 동백오일을 이용하여 탈모증이 있는 남성 대상자를 선정하여 간이임상 시험을 실시하였다. Using the fermented camellia oil of the present invention, a male subject with alopecia was selected for a brief clinical trial.

피험자는 33세에서 55세까지의 경증의 탈모증(대략 하루 평균 빠지는 모발 수가 50개 이상으로 본인 스스로 탈모가 진행되고 있음을 자각함)이 있는 성인 남성 12명을 대상으로 하여 6명씩 한 그룹으로 설정하여 한 그룹은 발효 동백오일을 1일 1회(취침전)에 5 ml씩 머리에 도포하고 다음날 머리를 감는 식으로 진행하였으며, 다른 그룹은 placebo그룹으로 발효 전 동백오일을 1일 1회, 5 ml씩 동일 기간(4주) 동안 머리에 도포하고 그 결과를 관찰하였다. 효과의 판정은 머리를 감은 후 평균 탈모 모발 수, 육안평가, 피험자의 개인 소견을 평가척도로 선정하고 5단계로 평가하였으며, 점수는 5점을 만점으로 하여 1점 단위로 판정점수를 매기도록 하였다. 더 자세히는 다음 표 6에 나타난 것과 같다. 종합적인 시험 결과는 각 판정 점수의 평균으로 나타내었다.The subjects were grouped into six groups of 12 adult males with mild alopecia from 33 to 55 years old (approximately 50 per day or more of the number of hairs remaining per day, with self-awareness of hair loss). One group applied fermented camellia oil to the head once a day (before bed) (5 ml) to the head, and the other day, the other group was a placebo group. The camellia oil was fermented once a day, ml in the same period (4 weeks), and the result was observed. The evaluation of the effect was made by evaluating the average number of hair loss, visual evaluation, and the personal findings of the subjects as the evaluation scale, and the evaluation was performed in 5 steps. The score was 5 points, . More details are shown in Table 6 below. Comprehensive test results are expressed as an average of each judgment score.

본 발명의 임상시험 평가 지표The clinical trial evaluation index 판정점수Judgment score 육안평가Visual evaluation 개인소견Personal opinion 탈모수Hair loss 1One 약화weakening 약화weakening 증가increase 22 변화 없음No change 변화 없음No change 변화 없음No change 33 약간 개선Slight improvement 약간 개선Slight improvement 약간 감소Slight decrease 44 보통 개선Normal improvement 보통 개선Normal improvement 보통 감소Moderate decrease 55 많이 개선Much improved 많이 개선Much improved 많이 감소Much reduced

본 발명의 임상시험 결과The clinical trial results of the present invention 판정점수Judgment score 실시예 2
(발효 동백오일)Example 2
(Fermented camellia oil) 비교예 3
(발효 전 동백오일)Comparative Example 3
(Camellia oil before fermentation) 비고Remarks 육안평가Visual evaluation 3.43.4 2.72.7 21%21% 개인소견Personal opinion 4.14.1 3.23.2 28%28% 탈모수Hair loss 3.93.9 2.52.5 36%36% 종합 개선Comprehensive improvement 3.83.8 2.82.8 27%27%

본 발명의 간이 임상 시험 결과는 상기 표 7에서 보는 바와 같이 발효하지 않은 동백오일인 <비교예 3>에 비하여 육안평가, 개인소견, 탈모수에서 21 ~ 36%의 개선효과가 있었으며 종합적으로 27%의 개선효과가 있음을 알 수 있었다.
As shown in Table 7, the results of the clinical trials of the present invention showed 21 ~ 36% improvement in visual evaluation, personal findings, and number of unhairing hair compared to the non-fermented camellia oil of Comparative Example 3, The results of this study are as follows.

Claims

삭제delete

i) 동백오일에 발효 효소 또는 발효효소 조성물을 1:8에서 8:1의 중량비로 혼합하는 단계;
ii) 상기 단계 i)의 혼합물을 믹서기에서 5 ~ 10분 동안 블렌딩한 후, 초음파 처리를 30 ~ 60분 동안하여 물리적으로 유화시키는 단계;
iii) 상기 단계 ii)의 혼합물을 발효온도 섭씨 25 ~ 45도, pH 5.0 ~ 8.0 및 발효시간 48 ~ 120 시간 동안 300 ~ 400 rpm에서 믹싱하면서 발효시키는 단계; 및
iv) 상기 단계 iii)의 발효물을 원심분리하고 한외여과하여 발효오일을 발효농축액으로부터 분리하는 단계를 포함하는, 발효 동백오일의 제조방법.
i) mixing camellia oil with a fermenting enzyme or a fermenting enzyme composition in a weight ratio of 1: 8 to 8: 1;
ii) physically emulsifying the mixture of step i) in a blender for 5 to 10 minutes, followed by ultrasonication for 30 to 60 minutes;
iii) fermenting the mixture of step ii) while mixing at a temperature of 25 to 45 degrees Celsius, a pH of 5.0 to 8.0 and a fermentation time of 48 to 120 hours at 300 to 400 rpm; And
iv) centrifuging the fermented product of step iii) and ultrafiltering to isolate the fermented oil from the fermentation concentrate.

제 5항에 있어서, 상기 단계 i)에서 사용한 발효효소 또는 발효효소 조성물은
a) 리파아제 생산 미생물을 유도배지에서 배양하는 단계; 및
b) 상기 배양액에서 발효가 종료된 미생물 균체를 원심분리와 여과를 통해 제거한 후, 배양액 내의 단백질을 황산암모늄으로 침전시켜 농축하는 단계; 및
c) 상기 침전 및 농축된 단백질을 완충용액(50 mM, sodium phosphate buffer, pH 7.0)으로 투석한 후 효소발효액을 회수하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는 발효 동백오일의 제조방법.
The fermentation enzyme or fermentation enzyme composition according to claim 5, wherein the fermentation enzyme or fermentation enzyme composition used in step i)
a) culturing the lipase producing microorganism in an induction medium; And
b) removing the microbial cells that have undergone fermentation in the culture solution through centrifugation and filtration, and then concentrating the protein in the culture solution by ammonium sulfate; And
c) dialyzing the precipitated and concentrated protein with a buffer solution (50 mM, sodium phosphate buffer, pH 7.0), and recovering the enzyme fermentation broth.

제 5항에 있어서, 상기 단계 i)의 발효효소는 리조푸스 오리제(Rhizopus oryzae)를 포함한 리조푸스속 균주 또는 칸디다 루고사(Candida rugosa)를 포함한 칸디다속 균주로부터 분리한 리파아제, 또는 식물류와 동물췌장에서 추출 농축한 리파아제 효소인 것을 특징으로 하는 발효 동백오일의 제조방법.
6. The method according to claim 5, wherein the fermentation enzyme of step i) is selected from the group consisting of Rhizopus or Rhizopus oryzae, a lipase isolated from a Candida species including Candida rugosa, Wherein the fermented camellia oil is a lipase enzyme extracted and concentrated from a pancreas.

동백오일에 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 동백오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 치료용 약학적 조성물.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA) and gamma-linolenic acid (GLA), which are free essential unsaturated fatty acids, can be used as the fermented camellia oil fermented by fermenting a fermentation enzyme or a fermentation enzyme composition to camellia oil. The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating hyperplasia or alopecia of the prostate, which comprises a fermented camellia oil as an active ingredient.

동백오일에 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 동백오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 건강기능식품.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA) and gamma-linolenic acid (GLA), which are free essential unsaturated fatty acids, can be used as the fermented camellia oil fermented by fermenting a fermentation enzyme or a fermentation enzyme composition to camellia oil. ) As an active ingredient for preventing or treating hyperplasia or alopecia of the prostate.

동백오일에 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 동백오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 화장료 조성물.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA) and gamma-linolenic acid (GLA), which are free essential unsaturated fatty acids, can be used as the fermented camellia oil fermented by fermenting a fermentation enzyme or a fermentation enzyme composition to camellia oil. ) As an active ingredient. The cosmetic composition for prevention and improvement of hypertrophy or alopecia of the prostate.

동백오일에 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 동백오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 동백오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 의약외품.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA) and gamma-linolenic acid (GLA), which are free essential unsaturated fatty acids, can be used as the fermented camellia oil fermented by fermenting a fermentation enzyme or a fermentation enzyme composition to camellia oil. ) As an active ingredient, and a quasi-drug for preventing and improving prostatic hyperplasia or hair loss.

올리브오일 또는 카놀라오일을 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 천연오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립성 비대증 또는 탈모 예방 및 치료용 약학적 조성물.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA), and gamma-linolenic acid (GLA), which are fermented natural oils obtained by fermenting olive oil or canola oil with fermentation enzyme or fermentation enzyme composition, acid, GLA) as an active ingredient. The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating hyperplasia or alopecia.

올리브오일 또는 카놀라오일을 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 천연오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 건강기능식품.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA), and gamma-linolenic acid (GLA), which are fermented natural oils obtained by fermenting olive oil or canola oil with fermentation enzyme or fermentation enzyme composition, acid, or GLA) as an active ingredient. The present invention relates to a health functional food for preventing or ameliorating hyperplasia or alopecia.

올리브오일 또는 카놀라오일을 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 천연오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 화장료 조성물.
Oleic acid (OA), linoleic acid (LA), and gamma-linolenic acid (GLA), which are fermented natural oils obtained by fermenting olive oil or canola oil with fermentation enzyme or fermentation enzyme composition, acid, GLA) as an active ingredient. The present invention relates to a cosmetic composition for prevention and improvement of benign prostatic hyperplasia or alopecia.

올리브오일 또는 카놀라오일을 발효효소 또는 발효효소 조성물을 처리하여 발효시킨 발효 천연오일로서, 유리 필수불포화지방산인 올레산(Oleic Acid, OA), 리놀레산(Linoleic acid, LA) 및 감마-리놀렌산(gamma-Linolenic acid, GLA)을 포함하는 발효 천연오일을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 또는 탈모 예방 및 개선용 의약외품.Oleic acid (OA), linoleic acid (LA), and gamma-linolenic acid (GLA), which are fermented natural oils obtained by fermenting olive oil or canola oil with fermentation enzyme or fermentation enzyme composition, acid, GLA) as an active ingredient, and a prophylactic or therapeutic agent for the prevention and improvement of alopecia.