KR101444303B1 - Cosmetic composition including hydrolysate from silkworm gland - Google Patents

Abstract

본 발명은 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 화장료 조성물은 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 것을 특징으로, 보다 상세하게는 누에로부터 실샘을 분리해 낸 다음, 그 분리된 실샘을 물로 용해한 후 원심분리하여 얻은 상등액에, 알칼리를 첨가한 후 가수분해한 다음 중화 및 탈염과정을 거쳐 얻은 가수분해물을 포함하는 것이 특징이다.
본 발명에 의해, 인체 무해하면서 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 우수한 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising a hydrolyzate derived from silkworm.
The cosmetic composition of the present invention is characterized by comprising a hydrolyzate derived from silkworm. More specifically, the present invention relates to a cosmetic composition comprising a silkworm obtained by separating false silk from a silkworm, dissolving the separated silkworm in water and centrifuging, And hydrolysates obtained by post-hydrolysis and neutralization and desalting.
The present invention provides a cosmetic composition comprising a silkworm-derived hydrolyzate derived from silkworm which is harmless to human body and excellent in antioxidant ability, skin cell growth potential, skin-affinity, and the like.

Description

누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION INCLUDING HYDROLYSATE FROM SILKWORM GLAND}[0001] The present invention relates to a cosmetic composition comprising a hydrolyzate derived from silkworm gum,

본 발명은 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 인체 무해하면서 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 우수한 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising a hydrolyzate derived from a silkworm gum, and more particularly, to a cosmetic composition comprising a silkworm hydrolyzate derived from a silkworm gum which is harmless to the human body and is excellent in antioxidant ability, skin cell proliferating ability and skin affinity.

종래 미용팩에 사용되는 화장료의 성분은 대개 인공으로 합성한 조성물을 사용하는 경우가 대부분이어서 연약한 피부에 손상을 주거나 건강하고 윤택한 피부로 재생시키는 효과는 뒤떨어지는 실정이다. Conventionally, cosmetic compositions used in cosmetic packs are mostly composed of artificial synthetic compositions. Therefore, the effect of damaging fragile skin or regenerating the skin with healthy and rich skin is inferior.

또한, 심한 경우 피부발진이나, 알레르기 등의 부작용을 일으킬 수 있는 매우 심각한 단점을 갖고 있다. 따라서, 최근에는 미용팩 제품에 보습효과가 있고 미백효과가 우수한 천연물을 이용하려는 시도가 증가하고 있다. 그러나 현재까지 알려진 천연물들은 어느 정도의 피부미백효과는 기대할 수 있지만, 수분흡수력 및 보습력의 측면에서는 그리 만족할 만한 특성을 나타내지 못하는 실정이다.In severe cases, it has serious disadvantages that can cause side effects such as skin rash and allergies. Accordingly, in recent years, attempts have been made to use natural products having a moisturizing effect and a whitening effect on cosmetic products. However, the natural products known to date can be expected to have some degree of skin whitening effect, but they do not show satisfactory characteristics in terms of moisture absorption and moisturizing power.

누에고치를 이루고 있는 단백질은 피브로인과 세리신이 있다. 그 중에서 세리신(sericin)은 세포증식효과가 우수하여 혈청대체제로 사용가능하며 피부코팅효과, 보습, 항산화능, 피부친화력 등의 효과를 갖고 있어 화장품의 주재료로 유망한 것으로 알려져 있다.The proteins that make cocoon are fibroin and sericin. Among them, sericin has excellent cell proliferation effect and can be used as a serum substitute. It is known to be a main ingredient of cosmetic products because it has effects of skin coating, moisturizing, antioxidant ability and skin affinity.

그러나, 현재까지 알려진 통상의 방법으로 수득된 세리신은 아교질의 물질로써 원료 그대로는 화장료의 주재료로 사용할 수가 없으며, 또한, 종래의 세리신 분리 및 회수방법은 리튬브로마이드(LiBr)와 같은 유해한 용매를 사용하거나, 90℃이상의 고온가열을 사용하는 등 수득과정이 복잡하고 수율이 낮은 문제가 존재한다.However, sericin obtained by a conventional method known to date can not be used as a raw material for a cosmetic as a raw material as a collagen material, and conventional sericin separation and recovery methods can be carried out by using a harmful solvent such as lithium bromide (LiBr) , There is a problem in that the process of obtaining such a complicated and low yield is performed by using high temperature heating of 90 占 폚 or more.

관련 선행기술로는 대한민국등록특허 제10-0494229호(등록일: 2005년 05월 31일, 명칭: 세리신의 제조방법 및 이를 이용한 마스크 팩)과 대한민국등록특허 제10-0542266호(등록일: 2006년 01월 03일, 명칭: 누에고치로부터 추출된 세리신 단백질을 함유하는 미용팩조성물)이 있다.As a related prior art, Korea Patent No. 10-0494229 (registered on May 31, 2005, name: Sericin manufacturing method and mask pack using the same) and Korea Patent No. 10-0542266 (registered on Jan. 2006 2006 March 03, name: cosmetic pack composition containing sericin protein extracted from silkworm cocoon).

본 발명의 목적은 누에 실샘으로부터 분리되며, 유해한 용매를 사용하지 않고도, 상온추출 방법의 단순한 공정을 통해 높은 수율로 수득가능하며 인체 무해하면서 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 우수한 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.It is an object of the present invention to provide a method of extracting silkworm glands from silkworm glands, which is isolated from silkworm glands and can be obtained at a high yield through a simple process of extracting at room temperature without using a harmful solvent and is excellent in antioxidant ability, skin cell- And to provide a cosmetic composition comprising the hydrolyzate.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are not intended to limit the invention to the particular embodiments that are described. It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are not restrictive of the invention, There will be.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 화장료 조성물은 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 것이 특징이다. To achieve the above object, the cosmetic composition of the present invention is characterized by comprising a hydrolyzate derived from silkworm.

상기 가수분해물은 누에로부터 실샘을 분리해 낸 다음, 그 분리된 실샘을 물로 용해한 후, 원심분리하여 얻은 상등액에, 알칼리를 첨가한 후 가수분해한 다음 중화 및 탈염과정을 거쳐 얻는 것이 특징이다.The hydrolyzate is characterized in that the hydrolyzate is obtained by separating the false gland from the silkworm, dissolving the separated gland in water, centrifuging the supernatant, adding the alkali to the supernatant, hydrolyzing and then neutralizing and desalting.

상기 가수분해물은 세리신과 피브로인이 가수분해된 펩타이드를 포함하는 것이 특징이다.The hydrolyzate is characterized in that sericin and fibroin are hydrolyzed.

상기 가수분해물은 상기 화장료 조성물 중량에 대해 0.001 ~ 50 중량% 함유되는 것이 특징이다.The hydrolyzate is contained in an amount of 0.001 to 50% by weight based on the weight of the cosmetic composition.

상기 가수분해는 15~30℃에서 이루어진 것이 특징이다.The hydrolysis is performed at 15 to 30 占 폚.

상기 알칼리로 NaOH를 사용하는 것이 특징이다.It is characterized in that NaOH is used as the alkali.

상기 중화과정에 인산을 사용하는 것이 특징이다.Phosphoric acid is used in the neutralization process.

상기 화장료 조성물은 화장수(스킨로션), 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 또는 영양에센스의 제형을 갖는 것이 특징이다.The cosmetic composition is characterized by having formulations of lotion (skin lotion), nutrition lotion, nutritional cream, massage cream, or nutritional essence.

본 발명에 의해, 유해한 용매를 사용하지 않으면서, 상온추출로 가수분해물 수득이 가능하여 인체 무해한 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.The present invention provides a cosmetic composition comprising a hydrolyzate derived from a silkworm-derived silkworm which is capable of obtaining a hydrolyzate by extraction at room temperature without using a harmful solvent.

또한, 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 우수한 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.Also provided is a cosmetic composition comprising a silkworm-derived hydrolyzate derived from silkworm germ, which is excellent in antioxidant ability, skin cell growth potential, skin affinity, and the like.

도 1은 용매의 차이에 따른 본 발명의 가수분해물의 항산화능을 나타낸 그래프.
도 2는 가수분해물 첨가 농도에 따른 세포 독성시험 결과를 나타낸 그래프.
도 3은 무혈청 배지에서 인간 피부세포 증식에 미치는 가수분해물의 효과를 나타낸 그래프.
도 4a는 세포 배양 접시에 가수분해물 코팅 농도에 따른 세포 부착 및 증식한 세포형태를 나타낸 도면.
도 4b는 세포 배양 접시에 가수분해물 코팅 농도에 따른 세포 부착 및 증식효과를 나타낸 그래프.
도 5는 가수분해물의 피부자극 시험의 결과를 나타낸 도면.
A : 토끼머리 왼쪽 "건강(비찰과)피부 - 시험물질(실시예1의 가수분해물)"
B : 토끼머리 오른쪽 "찰과피부 - 시험물질(실시예1의 가수분해물)"
C : 토끼머리 왼쪽 "찰과피부 - 무처리"
D : 토끼머리 오른쪽 "건강(비찰과)피부 - 무처리"BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a graph showing the antioxidant ability of the hydrolyzate of the present invention according to the difference in solvent. FIG.
FIG. 2 is a graph showing the cytotoxicity test results according to the concentration of the hydrolyzate added. FIG.
3 is a graph showing the effect of hydrolyzate on human skin cell proliferation in serum-free medium.
FIG. 4A is a diagram showing cell attachment and proliferation according to hydrolyzate coating concentration in a cell culture dish. FIG.
FIG. 4B is a graph showing cell attachment and proliferation effects according to the hydrolyzate coating concentration in a cell culture dish. FIG.
5 is a view showing a result of skin irritation test of the hydrolyzate.
A: rabbit head left "Health (insomnia) skin - test substance (hydrolyzate of Example 1)"
B: rabbit head right "scratch and skin-test substance (hydrolyzate of Example 1)"
C: Rabbit head left "Scratch and skin - no treatment"
D: rabbit hair right "Health (non-tanning) skin - no treatment"

본 명세서에 기재된 용어, 기술 등은 특별한 한정이 없는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 의미로 사용된다.The terms, techniques, and the like described in this specification are used in the meaning commonly used in the technical field to which the present invention belongs, unless otherwise specified.

이하, 본 발명의 누에 실샘 유래 가수분해물을 포함하는 화장료 조성물을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the cosmetic composition comprising the hydrolyzate derived from the silkworm mucilage of the present invention will be described in detail as follows.

1. 가수분해물 준비1. Preparation of hydrolyzate

누에 실샘으로부터 수득한 가수분해물을 준비한다.A hydrolyzate obtained from silkworm gland is prepared.

상기 가수분해물은 피브로인(fibroin)과 세리신(sericin)이 혼합된 상태의 실샘이 상온에서 용해가 되는 실크 단백질을 가수 분해하여 얻은 것이며, 특히 상기 가수분해물은 물에 용이하게 용해되기 위해 수용성인 것이 특징이다.The hydrolyzate is obtained by hydrolyzing a silk protein in which the fibroin and sericin are mixed and the silk protein is dissolved at room temperature. In particular, the hydrolyzate is water-soluble to be easily dissolved in water to be.

이에, 상기 가수분해물은 세리신 및 피브로인에서 가수분해되어 얻은 물질들이 모두 혼합되어 있는 상태를 의미하며, 펩타이드와 아미노산이 포함되어 있는 것이다.Thus, the hydrolyzate means a mixture of substances obtained by hydrolysis of sericin and fibroin, and includes peptides and amino acids.

이러한 가수분해물은 누에 실샘에서 분리된 것이면 모두 가능하며, 바람직하게는 누에 실샘 초미세분말에서 분리된 것을 사용한다.
The hydrolyzate may be any as long as it is separated from silkworm gland secretion. Preferably, the hydrolyzate is one isolated from silkworm ultrafine powder.

상기 가수분해물의 수득방법에 대해 구체적으로 설명하면 다음과 같다.The method of obtaining the hydrolyzate will be described in detail as follows.

첫째, 누에로부터 실샘을 분리해 낸다. 이때 누에를 동결건조하여 실샘을 분리해 내는 것이 바람직하다.First, seals are separated from silkworms. At this time, the silkworm is preferably lyophilized to separate the false glands.

상기 누에의 종으로는 Bombix mori 종을 사용하나, 이에 국한한 것은 아니며, 일반적으로 실샘을 수득할 수 있는 누에로 여겨지는 모든 종은 사용가능하나, 그 중 세포증식효과가 우수하며 사육시간 및 인건비를 감소시켜 가수분해물을 수득하기 위해 상기 누에는 숙잠을 사용하는 것이 바람직하다.Species of the silkworm include Bombix mori Although all species considered to be silkworms capable of obtaining false glands in general can be used, they are excellent in cell proliferation effect and can be obtained by reducing the breeding time and labor cost to obtain hydrolysates It is preferred that the silkworm be used for the silkworm.

둘째, 상기 분리해 낸 실샘을 물로 용해하고 이를 원심분리하여 얻은 상등액을 사용한다.Second, the supernatant obtained by dissolving the separated glands in water and centrifuging them is used.

이때, 상기 실샘은 초미세분말상태로 가공하여 사용하는 것이 좋다. 바람직하게는 실샘을 동결건조한 후 분쇄하여 초미세분말로 가공하는 것이 좋다.At this time, it is preferable that the false glands are processed into ultrafine powder. Preferably, the sealant is lyophilized and then pulverized to be processed into an ultrafine powder.

이는 상기 실샘이 초미세분말 상태일 경우 성분변화를 최소화할 수 있도록 상온(15~30℃)에서 용이하게 용해가 이루어질 수 있기 때문이다.This is because when the false gland is in an ultrafine powder state, dissolution can be easily performed at room temperature (15 to 30 ° C) so as to minimize component changes.

또한, 상기 실샘은 초미세분말상태에서 물로 용해하는 것은, 용해시 물분자와 접촉면적이 최대화되어 용해가 잘 이루어지며, 실온에서 용해된 실샘 단백질만을 분리할 수 있기 때문이다. 이에 더욱 바람직하게는 상기 실샘 초미세분말의 입자 크기는 600~800 ㎛ 인 것이 좋다. The reason for solubilizing the false gland in water in the state of ultrafine powder is that it dissolves well by maximizing the contact area with water molecules at the time of dissolution, and can only isolate dissolved cytosm proteins at room temperature. More preferably, the particle size of the ultra fine silica powder is 600 to 800 탆.

셋째, 상기 얻은 상등액에 알칼리를 첨가한 후 가수분해한다.Third, the alkali is added to the supernatant obtained above, and then hydrolyzed.

알칼리로 수산화나트륨(NaOH)을 사용하는 것이 좋다. 이는, 수산화나트륨(NaOH)으로 인해 상기 상등액이 분자량이 작은 펩타이드(peptide)로 분해가 이루어지도록 해주기 때문이다.It is advisable to use sodium hydroxide (NaOH) as the alkali. This is because sodium hydroxide (NaOH) causes the supernatant to decompose into peptides having a small molecular weight.

바람직하게는 NaOH를 사용시 최종 농도가 0.2~1M이 되도록, 더욱 바람직하게는 1M 이 되도록 첨가한 후, 상온(15~30℃)에서 0.5~1시간 정도, 더더욱 바람직하게는 30분간 가열하여 가수분해한다. 다시 말해, 상기 누에 실샘은 상온에서도 모두 분해가 가능하므로, 기존에 고온 처리시 수득된 가수분해물의 특성이 일부 변형되는 것을 방지할 수 있으면서, LiBr과 같은 유해한 용매를 사용하지 않아도 가수분해물의 분리가 가능함을 의미한다. 이에 가수분해물은 세리신과 피브로인에서 가수분해된 펩타이드가 포함되어 있음을 의미한다.NaOH is added so that the final concentration is 0.2-1 M, more preferably 1 M, and the mixture is heated at room temperature (15-30 ° C) for 0.5-1 hour, more preferably for 30 minutes to hydrolyze do. In other words, since the silkworm gland can be completely decomposed even at room temperature, it is possible to prevent the hydrolyzate obtained at the high temperature treatment from being partially deformed, and to separate the hydrolyzate without using a harmful solvent such as LiBr It is possible. The hydrolyzate means that the peptide is hydrolyzed in sericin and fibroin.

넷째, 상기 가수분해 후 중화 및 탈염과정을 거쳐 누에 실샘 유래 가수분해물을 수득한다.Fourth, hydrolysis after hydrolysis and neutralization and desalting are carried out to obtain a hydrolyzate derived from silkworm.

이때, 중화과정은 산을 첨가하여 이루어지며 바람직하게는 인산을 사용하며, pH가 7.0~7.5 정도가 될 때까지 첨가하여 중화한다.At this time, the neutralization process is carried out by adding an acid, preferably phosphoric acid, and neutralizing by adding until the pH is about 7.0 to 7.5.

상기 탈염과정으로는 통상적인 탈염 방법으로 모두 사용가능하나, 물질이 분자량 수천 이상인 고분자의 경우는 염류와의 분자크기 차이를 이용하는 여러 가지 방법, 즉 겔여과, 한외여과, 투석 등으로 이루어진다.The desalting process can be generally used as a conventional desalting method. However, in the case of a polymer having a molecular weight of several thousands or more, various methods using a difference in molecular size with a salt, such as gel filtration, ultrafiltration, and dialysis, are performed.

이렇게 수득된 본 발명의 가수분해물은 무혈청 첨가효과가 우수하며, 세포증식효과가 우수하여 혈청대체제로 사용가능하며 피부코팅효과, 보습, 항산화능, 피부친화력 등의 물성이 우수한 소재로도 사용가능하다.
The hydrolyzate of the present invention thus obtained is excellent in the effect of adding serum-free serum, can be used as a serum substitute because of its excellent cell proliferation effect, and can also be used as a material having superior physical properties such as skin coating effect, moisturizing effect, antioxidant ability and skin affinity Do.

2. 본 발명의 화장료 조성물 제조2. Preparation of cosmetic composition of the present invention

본 발명은 상기와 같이 제조된 세포증식 효과가 뛰어난 가수분해물을 용해하여 액상상태로 제조한 후, 이를 포함하는 화장료 조성물을 제조한다. In the present invention, the hydrolyzate having excellent cell proliferation effect is dissolved to prepare a liquid state, and a cosmetic composition containing the hydrolyzate is prepared.

이때, 상기 가수분해물은 물에 잘 용해되므로, 물로 용해시키는 것이 좋다.At this time, since the hydrolyzate is dissolved well in water, it is preferable to dissolve it in water.

또한, 상기 화장료 조성물은 상기 가수분해물을 유효성분으로 단독 사용하는 것이 가장 좋으나, 경제적으로는 가수분해물을 화장료 조성물 전체중량대비 0.001 내지 50 중량%로, 바람직하기로는 0.1 내지 15 중량%로 포함되고, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 5 중량%로 포함되며, 나머지 잔량으로 그 외 화장료로 허용가능한 물질을 포함하는 것이 좋다. The cosmetic composition preferably contains the hydrolyzate as an active ingredient singly, but economically, the hydrolyzate is contained in an amount of 0.001 to 50% by weight, preferably 0.1 to 15% by weight, based on the total weight of the cosmetic composition, More preferably 0.5 to 5% by weight, and the remaining balance may contain a material acceptable as other cosmetics.

이때, 상기 가수분해물이 0.001 중량% 미만 함유된 경우, 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 미흡하게 나타나고, 50 중량%를 초과한 경우에는 50 중량% 이하와 동일한 효과를 나타낸다.At this time, when the hydrolyzate is contained in an amount of less than 0.001% by weight, the antioxidant ability, skin cell proliferating ability, skin affinity and the like are insufficient. When the hydrolyzate content is more than 50% by weight, the effect is equal to or less than 50% by weight.

화장료 조성물의 제형은 사용방법 및 목적에 따라 달리 적용할 수 있다. The formulation of the cosmetic composition can be applied differently depending on the method and purpose of use.

제형의 일예로는 로션제(lotion), 액제(液劑), 유제, 에멀션제, 현탁제(懸濁劑), 정제(錠劑) 및 캡슐제(capsule)가 있다. Examples of the formulations include lotions, liquid preparations, emulsions, emulsions, suspensions, tablets, and capsules.

화장료로 사용되는 경우 유연 화장수, 밀크로션, 영양크림, 맛사지 크림, 에센스, 클렌싱 폼, 클렌싱 워터, 팩 또는 보디오일 등의 기초 화장료 및 화운데이션, 립스틱, 마스카라 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 활용가능하며, 필요에 따라 피부 외용제에 일반적으로 사용하는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 계면활성제, 보습제, 점증제, 방부제, 향료 색소 등과 함께 배합하는 것이 가능하다.
When used as cosmetics, it can be used as cosmetics such as foundation lotion, lipstick, mascara or makeup base such as soft lotion, milk lotion, nutrition cream, massage cream, essence, cleansing foam, cleansing water, pack or body oil And can be blended with components commonly used in external preparations for skin such as an aqueous component, an oily component, a surfactant, a moisturizing agent, a thickening agent, an antiseptic, a perfume pigment and the like.

하기 실시예 및 실험예에 의해서 보다 구체적으로 설명하지만 보호범위가 하기 실시예 및 실험예에 국한되는 것은 아니다.The present invention will be described in more detail with reference to the following examples and experimental examples, but the scope of protection is not limited to the following examples and experimental examples.

<실시예 1> 누에 실샘 유래 가수분해물 수득Example 1: Hydrolysis product derived from silkworm gland

실크 원료로 숙잠을 준비하고 이를 동결건조하였다.The silk was prepared with the raw material and lyophilized.

상기 동결 건조물을 통해 실샘을 분리하고 이 분리된 실샘을 초저온 분쇄기 (cryogenic mill)에 투여하여 초미세분말로 가공하였다. The lysosomes were separated from the lyophilized product, and the separated lysosomes were administered to a cryogenic mill to be processed into ultrafine powder.

이렇게 가공된 누에실샘 초미세분말을 상온(15~30℃)에서 30 분간 교반하면서 용해한 후, 이를 원심분리한 다음 상등액만을 취하고 여기에 NaOH를 첨가하되, 최종 1M이 되도록 상기 상등액에 첨가하여 24℃에서 30분간 교반하였다.The thus-prepared silkworm ultrafine powder was dissolved by stirring at room temperature (15 to 30 ° C) for 30 minutes. After centrifugation, the supernatant was taken, and NaOH was added to the supernatant. Lt; / RTI &gt; for 30 minutes.

그 다음 인산을 이용하여 pH가 7이 되도록 중화한 후, 한외여과(ultrafiltration) 방법으로 탈염하였다. Then, the solution was neutralized to pH 7 with phosphoric acid, and desalted by ultrafiltration.

그 후 다시 동결건조하여 본 발명에서 사용되는 가수분해물을 수득하였다.
Thereafter, it was freeze-dried again to obtain the hydrolyzate used in the present invention.

<실시예 2> 본 발명의 크림 타입의 화장품 제조<Example 2> Production of cream type cosmetics of the present invention

상기 실시예 1의 가수분해물을 물에 용해한 후 하기와 같이 조성된 화장품을 제조하였다.After dissolving the hydrolyzate of Example 1 in water, cosmetics having the following composition were prepared.

실시예1의 가수분해물 용액------- 5.0 중량%The hydrolyzate solution of Example 1 5.0 wt%

세탄올 ------------------------ 2.0 중량%Cetanol 2.0 wt%

피이지-20 --------------------- 1.0 중량%&Lt; tb &gt; &lt; tb &gt;

소비탄 모노스테아레이트 ------- 1.0 중량%Sobutan monostearate ------- 1.0 wt%

미네랄오일 -------------------- 10.0 중량%Mineral oil -------------------- 10.0 wt%

트리옥타노에이트 -------------- 5.0 중량%Trioctanoate -------------- 5.0 wt%

트리에탄올아민 ---------------- 0.5 중량%Triethanolamine ---------------- 0.5 wt%

카보머 ------------------------ 0.2 중량%Carbomer ------------------------ 0.2 wt%

글리세린 ---------------------- 5.0 중량%Glycerin 5.0 wt%

프로필렌글리콜 ---------------- 3.0 중량%Propylene glycol - 3.0 wt%

방부제, 향--------------------- 적량Preservative, fragrance ---------------------

총합계 100 중량%가 되도록 나머지 정제수
The remaining purified water

<실시예 3> 본 발명의 연고 타입의 화장품 제조Example 3 Preparation of ointment-type cosmetics of the present invention

상기 실시예 1의 가수분해물을 물에 용해한 후 하기와 같이 조성된 화장품을 제조하였다.After dissolving the hydrolyzate of Example 1 in water, cosmetics having the following composition were prepared.

실시예1의 가수분해물 용액---------------------- 5.0 중량%The hydrolyzate solution of Example 1 5.0 wt%

디에틸세바케이트 ----------------------------- 8.0 중량%Diethyl sebacate 8.0 wt% &lt; RTI ID = 0.0 &gt;

경납 ----------------------------------------- 5.0 중량%Sintered ----------------------------------------- 5.0 wt%

폴리옥시에틸렌올레일에테르 포스페이트--------- 6.0 중량%Polyoxyethylene oleyl ether phosphate - 6.0 wt%

벤조산 나트륨 -------------------------------- 적량Sodium benzoate --------------------------------

총합계 100 중량%가 되도록 나머지 바셀린
The total amount of the remaining vaseline

<실시예 4> 본 발명의 에센스 타입의 화장품 제조Example 4: Preparation of an essence type cosmetic product of the present invention

상기 실시예 1의 가수분해물을 물에 용해한 후 하기와 같이 조성된 화장품을 제조하였다.After dissolving the hydrolyzate of Example 1 in water, cosmetics having the following composition were prepared.

실시예1의 가수분해물 용액----------------- 5.0 중량%The hydrolyzate solution of Example 1 5.0 wt%

프로필렌글리콜---------------------------- 10.0 중량%Propylene glycol 10.0 wt%

글리세린---------------------------------- 10.0 중량%Glycerin 10.0 wt%

히아루론산나트륨 수용액(1%) -------------- 5.0 중량%Aqueous solution of sodium hyaluronate (1%) -------------- 5.0 wt%

에탄올 ----------------------------------- 5.0 중량%Ethanol 5.0 wt%

폴리옥시에틸렌경화피마자유 --------------- 1.0 중량%Polyoxyethylene hydrogenated castor oil - 1.0 wt%

파라옥시안시향산메틸 --------------------- 0.1 중량%0.1% by weight &lt; RTI ID = 0.0 &gt;

카보머 ----------------------------------- 0.4 중량%Carbomer - 0.4 wt%

향 --------------------------------------- 적량Incense ---------------------------------------

총합계 100 중량%가 되도록 나머지 정제수
The remaining purified water

<실험예 1> 가수분해물 분리 공정에 따른 항산화능 분석<Experimental Example 1> Antioxidant ability analysis by hydrolyzate separation process

상기 실시예 1의 가수분해물의 항산화력을 측정하기 위하여 DPPH 테스트를 실시하였으며, 대조군으로 비타민C 용액과의 항산화 활성 정도를 비교하였다.
The DPPH test was conducted to measure the antioxidant activity of the hydrolyzate of Example 1, and the degree of antioxidant activity with the vitamin C solution was compared as a control.

그 결과, 하기 표 1과 같이 나타났다.The results are shown in Table 1 below.

항산화 활성(%)Antioxidant activity (%) 실시횟수Frequency 평균Average 1One 22 33 15% 비타민c15% vitamin c 9797 9797 9797 9797 실시예1의 가수분해물The hydrolyzate of Example 1 8282 8282 8181 8484

상기 표 1에 나타나 있듯이, 실시예 1의 가수분해물은 대조군과 유사한 결과를 나타내었다.As shown in Table 1, the hydrolyzate of Example 1 showed similar results to the control group.

즉, 비타민C는 인체의 기능과 건강 유지를 위한 미량 원소 중의 하나로 인체가 감염에 대해서 저항하며 상처를 치유하고 조직을 건강하게 유지할 수 있도록 도우며 항산화제 중의 하나로서 자유기에 의한 세포손상을 방지하는 것으로 알려진 성분이다. In other words, vitamin C is one of the trace elements for maintaining the function and health of the human body. It helps the human body to resist infection, heals the wounds and keeps the tissues healthy, and as one of the antioxidants, It is a known ingredient.

이에, 본 발명은 대조군과 유사한 결과를 나타냄으로써, 높은 항산화 활성을 갖음을 알 수 있다.
Thus, the present invention has a similar antioxidant activity to that of the control group.

또한, 도 1에 나타나 있듯이, 항산화능을 비교한 결과, 누에 실샘을 유해물질인 리튬브로마이드(LiBr) 및 요소(Urea, CO(NH₂)₂인 유기화합물)로 추출한 추출물보다 본 발명의 실시예 1의 가수분해물의 경우에 가장 높은 항산화능을 보임을 확인하였다.
As shown in FIG. 1, the antioxidative ability of the extract of the present invention was higher than that of extracts of silkworm gland secreted with lithium bromide (LiBr) and urea (organic compound of CO (NH ₂ ) ₂ ) 1 hydrolyzate showed the highest antioxidant activity.

<실험예 2> 가수분해물의 세포독성 시험<Experimental Example 2> Cytotoxicity test of hydrolysates

가수분해물의 세포독성을 알아보기 위하여 줄기세포를 배양한 후 가수분해물을 첨가하고 세포독성 여부를 CCK-8 분석(assay)방법으로 확인하였다. To investigate the cytotoxicity of hydrolysates, stem cells were cultured and hydrolysates were added and cytotoxicity was confirmed by CCK-8 assay.

CCK-8 assay는 세포배양에 처리한 테트라졸륨 염(tetrazolium salt)이 세포내의 미토콘드리아 숙신산-테트라졸륨-환원효소시스템(mitochondrial succinate-tetrazolium-reductase system)에 의해 다크레드(dark red)를 띄는 포르마잔(formazan)으로 분해되고, 이것을 450 nm에서 측정함으로써 생균(viable cells)의 양을 정량적으로 나타낼 수 있는 방법이다.The CCK-8 assay can be used to determine whether a tetrazolium salt that has been treated in cell culture has been transformed into a dark red-colored formazan by the mitochondrial succinate-tetrazolium-reductase system (formazan), and the amount of viable cells can be quantitatively measured by measuring at 450 nm.

IC₅₀ 농도에 기준하여 0~5 mg/㎖ 농도의 가수분해물을 배양중인 세포에 처리하고, 2일간 추가로 배양한 후 CCK-8 assay를 실시하였다.The hydrolyzate at a concentration of 0 to 5 mg / ml based on the IC ₅₀ concentration was treated on the cultured cells and CCK-8 assay was performed after further culturing for 2 days.

그 결과 도 2에 나타낸 바와 같이, 세포증식 억제가 일어나지 않는 것으로 보아 본 발명의 실시예 1의 가수분해물은 독성이 없는 것으로 확인되었다.
As a result, as shown in Fig. 2, cell proliferation inhibition did not occur, and it was confirmed that the hydrolyzate of Example 1 of the present invention was not toxic.

<실험예 3> 가수분해물을 이용한 인간 피부세포(human dermal fibroblast)의 증식 효과측정Experimental Example 3 Measurement of proliferation effect of human dermal fibroblast using hydrolyzate

상기 실시예 1의 가수분해물을 DPBS (WelGENE, cat. LB 001-02)에 20 ㎎/㎖ 의 농도로 용해한 후 혈청이 제거된 배지에 0 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖의 농도로 처리하였다. The hydrolyzate of Example 1 was dissolved in DPBS (WelGENE, cat. LB 001-02) at a concentration of 20 mg / ml, and then treated with the concentrations of 0 mg / ml and 0.1 mg / ml in the serum-free medium.

10% 혈청이 첨가된 세포(10% FBS)와의 성장을 비교하기 위하여 WST-1 분석(assay, Daeillab)을 하루 간격으로 총 4일간 측정하였다. To compare growth with 10% serum added cells (10% FBS), WST-1 assay (Daeillab) was measured for 4 days at intervals of one day.

WST-1 assay 시약을 배지의 10%가 되게 첨가하고 배양 조건과 동일하게 약 3시간 정도 반응시킨 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.The WST-1 assay reagent was added at 10% of the culture medium, incubated for about 3 hours in the same incubation condition, and absorbance was measured at 450 nm.

그 결과, 도 3에 나타나 있듯이, 무혈청 배양액에 1 mg/㎖ 누에 실샘 유유래 가수분해물을 첨가한 경우 같은 농도의 타사 제품(other company's cocoon-derived sericin)보다 세포증식 효과가 우월함을 확인하였으며 이는 본 발명에서 제조된 실샘 유래 가수분해물이 인간 피부세포의 증식에 탁월한 효과가 있음을 입증하는 것으로 화장품 성분으로 사용하였을 때 좋은 효과가 있을 것으로 사료된다.
As a result, as shown in FIG. 3, when the 1 mg / ml silkworm-derived hydrolyzate was added to the serum-free culture solution, the cell proliferation effect was superior to that of the other company's cocoon-derived sericin of the same concentration. The hydrolyzate derived from the sebaceous glands prepared in the present invention has an excellent effect on the proliferation of human skin cells.

<실험예 4> 가수분해물의 세포 부착성 시험<Experimental Example 4> Cell adhesion test of hydrolysates

실시예 1에서 제조된 가수분해물을 DPBS (WelGENE, cat. LB 001-02)에 각각 0.2, 0.5, 1.0 ㎎/㎖ 의 농도로 용해한 후 배양 접시(SPL, 10035) 표면에 처리하고 1시간 동안 37℃ 배양기에 정치해 두었다.The hydrolyzate prepared in Example 1 was dissolved in DPBS (WelGENE, Cat. LB 001-02) at a concentration of 0.2, 0.5 and 1.0 mg / ml, and then treated on the surface of a culture dish (SPL, 10035) Lt; / RTI &gt; incubator.

그 다음, 가수분해물을 제거한 후 포스페이트 완충용액으로 2회 세척하고 상온에서 완전히 건조시켰다Then, the hydrolyzate was removed, washed twice with phosphate buffer solution and completely dried at room temperature

세포 부착성 시험은 가수분해물의 코팅 농도별로 세포 접종 후 2일간 배양하여 증식한 세포 수를 직접 측정하였다. Cell adhesion test was carried out for 2 days after cell inoculation by the coating concentration of the hydrolyzate, and the number of cells proliferated was directly measured.

그 결과 도 4a에서 나타나 있듯이, 세포 접종 30분 경과 후에 가수분해물의 코팅 농도가 높아질수록 세포가 배양접시에 부착하는 세포의 양이 많은 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 4a, it was confirmed that the cells were adhered to the culture dish with increasing amount of the hydrolyzate after 30 minutes of inoculation.

또한, 도 4b에서 볼 수 있듯이, 2일 배양 후 증식된 세포의 총 수를 확인한 결과 코팅된 가수분해물의 농도가 높아질수록 증식된 세포의 양이 많은 것을 확인할 수 있었다. As can be seen from FIG. 4B, the total number of cells proliferated after 2 days of culture showed that the higher the concentration of the coated hydrolyzate, the greater the amount of proliferated cells.

따라서 본 발명에서 수득한 가수분해물은 세포의 증식을 촉진하는 첨가제 역할뿐만 아니라 배양접시에 코팅을 해 둔 경우에서 세포의 증식을 촉진하는 효과가 있음을 확인하였다.
Therefore, the hydrolyzate obtained in the present invention not only serves as an additive for promoting cell proliferation, but also has the effect of promoting proliferation of cells when coated on a culture dish.

<실험예 5> 가수분해물의 피부자극 시험<Experimental Example 5> Skin irritation test of hydrolysates

시험법은 식품의약품안전청 고시된 ‘의약품등의독성시험기준’에 따라 실시하였다. The test was carried out in accordance with the "Toxicological Test Standards for Drugs, etc." notified by the Food and Drug Administration.

상기 실시예 1의 가수분해물에 대한 피부자극성을 조사하기 위하여 뉴질랜드계 수컷 백색 토끼의 정상피부(비찰과피부) 및 찰과피부에 상기 실시예 1의 1%(w/v) 가수분해물을 적용한 후 무처리 적용한 정상피부(비찰과피부) 및 찰과피부와 비교 평가하였다. To investigate the skin irritation of the hydrolyzate of Example 1, 1% (w / v) hydrolyzate of Example 1 was applied to the normal skin of the New Zealand male white rabbit The non - treated normal skin (non - irritation and skin) and the irritated skin were compared and evaluated.

시험 24시간 전에 전기 제모기를 이용하여 토끼의 등쪽 피부에 상처가 나지 않도록 제모된 건강한 피부를 만들고 좌우로 나누어 2.5 cm × 2.5 cm 크기로 4개소를 준비하였다. Twenty-four hours before the test, healthy epidermal skin was prepared using an electric epilator to prevent skin damage on the dorsal skin of the rabbit, and the skin was divided into left and right sides to prepare four areas of 2.5 cm × 2.5 cm.

건강피부와 찰과피부에 실시예 1의 가수분해물을 충분히 도포한 후 24, 48, 72시간 때에 피부반응 기준에 따라 채점하여 기록하였다.
The hydrolysates of Example 1 were sufficiently applied to healthy skin and cheek skin, and scored according to skin reaction standards at 24, 48 and 72 hours, and recorded.

그 결과 도 5에 나타나 있듯이, 최종 자극성의 평가에서 본 발명인 실시예 1의 가수분해물은 비자극성(평가지수 0 ~ 0.5)으로 평가되었으며, 이에 가수분해물은 피부에 자극이 없는 소재임을 확인하였다.
As a result, as shown in FIG. 5, in the evaluation of the final irritation, the hydrolyzate of Example 1 of the present invention was evaluated as non-magnetic (evaluation index 0 to 0.5), and the hydrolyzate was found to be a material free from skin irritation.

상기와 같이 본 발명에 의해, 유해한 용매를 사용하지 않으면서, 상온추출로 가수분해물 수득이 가능하여 인체 무해하면서 항산화능, 피부세포증식능, 피부 친화력 등이 우수한 누에 실샘 유래 가수분해물을 이용한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
As described above, according to the present invention, it is possible to provide a cosmetic composition using a hydrolyzate derived from silkworm-derived hydrolyzate having excellent antioxidative ability, skin cell proliferating ability, skin-affinity and the like without harming human body by being able to obtain hydrolyzate by room temperature extraction without using harmful solvent .

상기의 본 발명은 바람직한 실시예 및 시험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments. You can implement the examples. The scope of the present invention is defined by the appended claims, and all differences within the scope of the claims are to be construed as being included in the present invention.

Claims (8)

누에를 동결건조하는 제1단계;
상기 제1단계 후 동결건조된 누에에서 실샘을 분리하는 제2단계;
상기 제2단계 후 분리된 상기 실샘을 600~800㎛의 초미세분말로 가공한 후 물로 용해하는 제3단계;
상기 제3단계 후 상기 실샘이 용해된 물을 원심분리하는 제4단계;
상기 제4단계 후 원심분리된 상기 실샘이 용해된 물의 상등액을 분리하는 제5단계;
상기 제5단계 후 분리된 상기 상등액에 알칼리를 첨가한 후 15~30℃에서 가수분해한 후, 이를 중화 및 한외여과 방법으로 탈염과정을 거쳐 수용성 세리신을 포함하는 가수분해물을 제조하는 제6단계 및,
상기 제6단계 후 화장료 조성물 총 중량대비 0.001~50중량%의 가수분해물이 포함된 화장료 조성물을 제조하는 제7단계를 포함하는,
화장료 조성물의 제조방법.
A first step of freeze drying the silkworm;
A second step of separating the false gland from the lyophilized silkworm after the first step;
A third step of processing the dilute glands separated after the second step into ultrafine powder of 600 to 800 탆 and dissolving them in water;
A fourth step of centrifugally separating the diluted water after the third step;
A fifth step of separating the supernatant of the water dissolving the false gum centrifuged after the fourth step;
Adding the alkali to the supernatant separated after the fifth step, hydrolyzing the supernatant at 15 to 30 ° C, desalting it by neutralization and ultrafiltration to produce a hydrolyzate containing water-soluble sericin, and ,
And a seventh step of preparing a cosmetic composition containing 0.001 to 50% by weight of hydrolyzate based on the total weight of the cosmetic composition after the sixth step.
Gt;
삭제delete 청구항 1항에 있어서,
상기 제6단계에서 제조된 가수분해물은 세리신과 피브로인이 가수분해된 펩타이드를 포함하는 것이 특징인,
화장료 조성물의 제조방법.
The method according to claim 1,
Wherein the hydrolyzate prepared in the sixth step comprises a peptide hydrolyzed with sericin and fibroin,
Gt;
삭제delete 삭제delete 청구항 1항에 있어서,
상기 제6단계에서 상기 상등액에 첨가되는 상기 알칼리는 NaOH를 사용하는 것이 특징인,
화장료 조성물의 제조방법.
The method according to claim 1,
Wherein the alkali added to the supernatant in the sixth step is NaOH.
Gt;
청구항 1항에 있어서,
상기 제6단계에서 중화하는 방법은 인산을 사용하는 것이 특징인,
화장료 조성물의 제조방법.
The method according to claim 1,
The method of neutralizing in the sixth step is characterized in that phosphoric acid is used.
Gt;
삭제delete

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