KR101434606B1 - Strip paper for analysis of creatinine - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 체액 중의 크레아티닌 분석용 시험지 및 분석방법에 관한 것으로, 전개층과 이 전개층의 전부 또는 적어도 일부에 접하는 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질을 포함한다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to a test strip and an assay method for creatinine analysis in body fluids, and includes a development layer and 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid and a strongly alkaline substance which are in contact with all or at least a part of the development layer.

Description

크레아티닌 분석용 시험지{Strip paper for analysis of creatinine}{Strip paper for analysis of creatinine}

본 발명은, 체액 중의 크레아티닌 분석용 시험지 및 분석방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 소변과 같이 완충 작용이 강한 체액 중의 크레아티닌이어도 감도 높게 측정하는 것이 가능한 안정성 높은 시험지를 제공하는 것이다.
The present invention relates to a test strip for analyzing creatinine in body fluids and an analytical method thereof, and more particularly, to a test strip which is capable of highly sensitive determination of creatinine in a body fluid having a strong buffering action such as urine.

크레아티닌은, 크레아틴 경로의 최종 대사물이며, 크레아틴이 탈수, 고리화한 구조를 가진다. 체내에 있어서는, 대부분은 크레아틴 또는 크레아틴 인산으로서 근육 중에 존재한다. 크레아틴은, ATP로부터 고에너지 인산을 받아 크레아틴 인산이 되어, 에너지 저장 물질로서 기능해, 근육 수축 등의 에너지 소비시에는 ADP에 고에너지 인산을 전이하고 크레아틴으로 돌아오든지, 비효소적 반응에 의해서 크레아티닌이 된다. 그 후, 생성한 크레아티닌은, 신장을 통해 소변 중에 배설된다.Creatinine is the final metabolite of the creatine pathway and has the structure of dehydration and cyclization of creatine. In the body, most are present in muscle as creatine or creatine phosphate. Creatine, which receives high energy phosphoric acid from ATP, becomes creatine phosphate and functions as an energy storage material. When consuming energy such as muscle contraction, it transfers high energy phosphoric acid to ADP and returns to creatine, . The resulting creatinine is then excreted in the urine through the kidneys.

따라서, 크레아티닌의 소변 중 배설량 즉 소변 중 농도는, 근육 질환이나 신장 기능 장애의 지표에 이용되고 있다. 또, 신장 기능 장애가 있는 경우 등, 혈중의 크레아티닌 농도가 질환의 지표가 될 수 있다.Therefore, urinary excretion of creatinine, that is, urine concentration, is used as an indicator of muscle disease or renal dysfunction. In addition, creatinine concentration in the blood, such as in the case of kidney dysfunction, may be an indicator of disease.

체액중의 크레아티닌의 검출 방법으로서 공지의 「재프(Jaffe) 반응」은, 강알칼리성 조건하에 있어서의 크레아티닌과 피크린산과의 축합물에 의한 정색 반응을 이용한 것이어, 간편하고 경제적인 검출 방법으로서 넓고 일반적으로 사용되고 있다. 또 이 반응은, 피크린산 대신에 3,5-디니트로 벤조산(DNBA)을 사용하는, 베네딕트-베레(Benedict-Bhere) 방법으로 응용화 되고 있다.The known " Jaffe reaction " as a method for detecting creatinine in body fluids uses a color reaction with a condensate of creatinine and picric acid under strongly alkaline conditions. As a simple and economical detection method, . This reaction has also been applied by the Benedict-Bhere method using 3,5-dinitrobenzoic acid (DNBA) instead of picric acid.

상기의 재프 반응은, 주로 용액계로서 사용되고 있지만, 그 한편으로 이 반응을 간편한 건식의 시험편에 응용한 기술이 개시되고 있다(일본 특허공개공보 평1-129164호, 일본 특허공개공보 평1-1129165호, 미국특허 5662687호 등). 그렇지만, 소변을 대상으로 했을 경우, 이러한 기재의 방법은 모두 어느 정도의 크레아티닌을 측정할 수 있지만, 정도가 좋은 방법이라고는 말하기 어려운 것이었다.The above-described Zaffer reaction is mainly used as a solution system, and on the other hand, a technique of applying this reaction to a simple dry test piece has been disclosed (Japanese Patent Application Laid-Open Nos. 1-129164 and 1-1129165 No. 5,662,687, etc.). However, in the case of urine, all of these methods can measure a certain amount of creatinine, but it is difficult to say that the method is good enough.

즉, 소변은 넓은 pH역을 가져, 게다가 완충 작용이 매우 강하기 때문에, 강알칼리성화가 필수 조건인 상기의 방법으로 알칼리성 물질을 더해도 소변의 완충 작용에 의해서 반응 pH의 저하가 일으켜져 결과적으로 크레아티닌의 검출?측정에 큰 오차를 주어 버리기 때문이다.
That is, since the urine has a wide pH range and the buffering action is very strong, even if an alkaline substance is added by the above-described method in which the strong alkaline activation is necessary, the pH of the reaction is lowered due to the buffering action of the urine, This results in a large error in detection and measurement.

상기 방법을 이용한 소변 중 중 크레아티닌의 측정에 대하고 오차를 줄이기 위해서는, 강력한 알칼리성 물질(예를 들면 수산화 나트륨이나 수산화 리튬 등의 수산화물)을, 소변의 완충능을 웃도는 정도로 다량으로 첨가할 필요가 있다. In order to reduce the error in the measurement of creatinine in the urine by the above method, it is necessary to add a strong alkaline substance (for example, hydroxide such as sodium hydroxide or lithium hydroxide) in a large amount in excess of the buffering capacity of the urine .

그런데, 피크린산이나 3,5-디니트로 벤조산, 특히 이러한 반응 생성물은, 소변의 완충 작용을 웃돌 정도의 양의 알칼리성 물질을 첨가하면 지극히 불안정하고, 생성물의 정색에도 큰 영향을 준다.However, picric acid or 3,5-dinitrobenzoic acid, especially such a reaction product, is extremely unstable when adding an alkaline substance in an amount such that the buffering action of urine exceeds that of the urine, and has a great influence on the color of the product.

반응계가 액계인 경우에는, 측정하기 직전에 대량의 알칼리성 물질을 첨가하는 것에 의해서, 피크린산이나 3,5-디니트로벤조산의 안정성을 유지할 수 있지만, 사용하는 모든 시약류를 미리 담지하고 있는 건식의 시험편에서는, 이러한 안정성을 유지할 수 없다. 따라서, 희석되어 있지 않은 소변을 대상으로 하고, 크레아티닌을 감도 높게 측정하는 시험편을 제작하는 것은, 매우 곤란했다.When the reaction system is a liquid system, it is possible to maintain the stability of picric acid or 3,5-dinitrobenzoic acid by adding a large amount of alkaline substance just before the measurement, but in the case of a dry test piece bearing all the reagents used in advance , Such stability can not be maintained. Therefore, it has been very difficult to prepare a test piece that measures undiluted urine and has a high sensitivity to creatinine.

일본 특허 공개공보 평9-061430 호에서는 3,5-디니트로벤조산 대신 3,4-디니트로벤조산을 사용함으로써 이러한 문제를 해결하려고 시도하였다. Japanese Patent Application Laid-Open No. 9-061430 has attempted to solve this problem by using 3,4-dinitrobenzoic acid instead of 3,5-dinitrobenzoic acid.

그러나, 이 특허의 기술도 여전히 이러한 감도 문제를 포함하고 있었다.
However, the technology of this patent still contained this sensitivity problem.

본 발명은, 상기 선행기술들의 단점을 극복하기 위한 것으로, 비희석뇨와 같은 완충 작용의 강한 체액이어도, 크레아티닌을 감도 높게 잘 분석할 수 있는 안정적인 시험지를 제공하는 것이다.
The present invention is to overcome the disadvantages of the prior arts as described above, and to provide a stable test paper capable of analyzing creatinine with high sensitivity even in a strong body fluid having a buffering action such as non-diluted urine.

상기 과제를 해결하기 위해서 열심히 연구한 결과, 3,5 디니트로 벤젠 술폰산이, 알칼리성 물질의 존재하에서도 안정되고, 크레아티닌과의 축합 반응에 의해 정색 하는 것을 찾아내, 본 발명을 완성시켰다.As a result of intensive studies to solve the above problems, 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid was found to be stable even in the presence of an alkaline substance and colored by a condensation reaction with creatinine, thereby completing the present invention.

본 발명은, 전개층과 이 전개층의 전부 또는 적어도 일부에 접하는 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질을 포함한, 체액중의 크레아티닌 분석용 시험지에 관한 것이다.The present invention relates to a test strip for creatinine analysis in body fluids, including 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid and a strongly alkaline substance in contact with the development layer and all or at least a part of the development layer.

또, 본 발명은, 상기 시험지가 바람직한 모양으로서 전개층을 지지하기 위한 지지체를 포함하고, 이 지지체상에 3,5 디니트로 벤젠 술폰산을 포함한 시약층이 설치되어 이 시약층상에 강알칼리성 물질을 포함한 전개층이 설치된 시험지를 제공한다.
The present invention also relates to a method for producing a test piece, which comprises a support for supporting the development layer in the form of a test sheet, wherein a reagent layer containing 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid is provided on the support and a strongly alkaline substance Provide a test strip on which the development layer is installed.

본 발명에 의하면, 희석되어 있지 않은 소변 중의 크레아티닌 농도를 감도 높게 측정할 수 있는 안정적인 건식의 시험지를 제공할 수 있다.
INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a stable dry test paper capable of measuring the creatinine concentration in undiluted urine with high sensitivity.

도 1은 일반 실온의 환경에서 100~500 mg/dL 농도 구간의 표준액을 이용하여 제조한 크레아티닌 시험지를 사용 후 1분 후 이 시험지를 포토씨모스 비색 센서를 이용하여 농도에 따른 비색 센서값의 측정치 구해 나타낸 그래프이다.
도 2는 실제 소변을 시료로서 재프 반응을 이용한 용액계 자동 분석 장치용 시약과 본 발명에 의한 시험지를 이용하고 포토씨모스 비색 센서를 이용해 측정한 값을 검량선을 통해 역산한 값과 분산비교하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 비교를 위해 3,5-디니트로 벤젠 술폰산 대신 3,5-디니트로 벤조산을 이용해 실제 소변을 시료로서 실시예 1과 같게 측정하여 나타낸 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing the results of measurement of the colorimetric sensor value according to the concentration using a photochemical colorimetric sensor after 1 minute after using a creatinine test paper prepared using a standard solution at a concentration range of 100 to 500 mg / Fig.
FIG. 2 is a graph comparing the measured value obtained by using a reagent for a solution-based automatic analyzer using a Zap reaction and a test paper according to the present invention measured by a photochemistry colorimetric sensor using a calibration curve and a dispersion using real urine as a sample Graph.
FIG. 3 is a graph showing the actual urine measured as a sample using 3,5-dinitrobenzoic acid instead of 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid for comparison as measured in Example 1. FIG.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다. 본 발명의 시험지는, 전개층과 이 전개층의 전부 또는 적어도 일부에 접하는 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질을 포함하고, 바람직하게는 지지체를 더 포함한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail. The test paper of the present invention comprises a development layer and a 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid and a strongly alkaline substance which are in contact with all or at least a part of the development layer, and preferably further comprises a support.

상기 전개층은, 소변 등의 검사대상 물체를 흡수해 액상의 반응계를 만들기 위한 것이며, 소재로서는 여과지, 직포, 부직포, 유리 섬유, 니트로셀룰로스, 친수성 고분자 등, 다공성의 소재를 들 수 있다. 또, 형상으로서는, 스트립 모양, 막대 모양 등을 들 수 있다. 이러한 안에서는, 여과지 등이 같은 셀룰로오스 등의 천연 유래의 섬유 소재는, 강알칼리 조건하에서는 가수분해나 열화하는 일이 없기 위해, 화학 합성 섬유 천등이 바람직하다.
The development layer is for making a liquid reaction system by absorbing an object to be inspected such as urine. Examples of the material include porous materials such as filter paper, woven fabric, nonwoven fabric, glass fiber, nitrocellulose, and hydrophilic polymer. Examples of the shape include a strip shape and a rod shape. In such a case, a natural-derived fiber material such as a filter paper or the like does not undergo hydrolysis or deterioration under a strong alkaline condition, and therefore, a chemically synthesized fiberglass is preferable.

전개층의 물리적인 강도가 약한 경우에는, 본 발명의 시험지는, 전개층을 지지하기 위한 지지체를 가지고 있어도 괜찮다. 지지체는, 전개층과 일체가 될 수 있는 형상이어도 괜찮고, 전개층의 일부만을 지지하는 것이어도 괜찮다. 지지체의 소재로서는, 건식 시험지를 제작할 때에 통상 이용되는 플라스틱 수지, 예를 들면 , 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 폴리비닐클로라이드(이하,「PVC」라고 한다) 등을 들 수 있다. 지지체에 광투과성의 소재를 이용하면, 시험지를 사용할 때에, 정색을 지지체측으로부터 관찰, 측정하는 것이 가능해진다.When the physical strength of the development layer is weak, the test paper of the present invention may have a support for supporting the development layer. The support may be of a shape that can be integrated with the development layer, or may support only a part of the development layer. Examples of the material of the support include plastic resins commonly used in the production of dry test paper, such as polyethylene terephthalate and polyvinyl chloride (hereinafter referred to as " PVC "). When a light-transmitting material is used for the support, it is possible to observe and measure the color from the support side when using the test paper.

3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질은, 상기와 같은 전개층의 전부 또는 적어도 일부에 접한다. 여기서 「접한다」라고 하는 것은, 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질이 전개층의 표면상에 접하고 있는 것만을 의미하는 것이 아니고, 전개층의 내부에서 전개층을 구성하는 소재에 접하고 있는 것도 포함한다. 또, 상기의 물질은 간접적으로 전개층에 접하고 있어도 , 예를 들면 마이크로 캅셀에 봉입된 상태로 접하고 있어도 상관 없다. 또, 전개층 상에 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질이 그 위에 접하도록 담지되어 있어도 괜찮다.The 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid and the strongly alkaline material are in contact with all or at least a part of the spreading layer as described above. Here, "contact" does not mean that 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid and strongly alkaline substance are in contact with the surface of the development layer, and it does not mean that the material in contact with the material constituting the development layer in the development layer . In addition, the above-mentioned material may be in contact with the development layer indirectly, for example, in contact with the microcapsules. It is also possible that 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid and a strongly alkaline substance are supported on the development layer so as to be in contact with the development layer.

본 발명의 시험지의 바람직한 모양으로서는, 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 포함하는 층이 표면상에 형성된 지지체와 강알칼리성 물질을 포함하는 층이 표면상에 형성된 전개층이, 3,5 디니트로벤젠 술폰산 층과 강알칼리성 물질 층이 안정화 될 수 있도록 나누어 여러 차수에 걸쳐 반복 침적시킨 시험지를 들 수도 있다. 이와 같이 반복 침적하는 것으로, 3,5 디니트로벤젠 술폰산의 안정성을 한층 높일 수 있다. 이 때, 지지체로서 플라스틱 소재 등의 비다공성 소재를 이용할 때는, 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 지지체상에 고정하기 위해서, 바인더를 이용해 시약층으로서 지지체상에 담지시켜도 된다. 또, 강알칼리성 물질은, 전개층 안에 함침시켜도 된다. 3,5 디니트로벤젠 술폰산산과 강알칼리성 물질의 시험지 중의 존재 부위는, 상기설명과 반대여도 되나, 반응 환경을 강알칼리로 하는 것이 필요하다. 전개층 및 지지층 가운데, 먼저 검사대상 물체 시료가 접하는 전개층 측에 수산화물을 포함하게 하는 것이 바람직하다. 또, 강알칼리성 물질은, 강알칼리성 조건을 강화하기 위해서, 시약층 및 전개층의 양쪽 모두에 함유 시켜도 된다.As a preferred form of the test paper of the present invention, a development layer in which a layer containing 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid is formed on the surface and a layer containing a strong alkaline substance is formed on the surface is 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid It is also possible to divide the layer and the alkaline substance layer so as to stabilize them, and repeatedly immerse the test strip in various orders. By repeatedly depositing in this manner, the stability of 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid can be further enhanced. At this time, when a nonporous material such as a plastic material is used as the support, 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid may be supported on the support as a reagent layer using a binder in order to fix the 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid on the support. The strongly alkaline substance may be impregnated in the developing layer. The presence of the 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid and the strongly alkaline substance in the test strip may be contrary to the above description, but it is necessary to make the reaction environment a strong alkali. It is preferable that the developing layer and the supporting layer include a hydroxide on the developing layer side to which the sample of the object to be inspected first comes into contact. The strong alkaline substance may be contained in both the reagent layer and the development layer in order to strengthen the strong alkaline conditions.

강알칼리성 물질로서는, 시료에 용해시켰을 때에 강알칼리성의 환경을 유도할 수 있는 것이면 좋고, 특히, 시험지에 소변을 흡수시켰을 때에, 시험지로의 반응 pH를 12~13으로 유지할 수 있는 것이 바람직하다. 구체적으로는, 수산화 알칼리 금속 등이 있고, 수산화 리튬이 바람직하다.The strongly alkaline substance may be any substance capable of inducing a strongly alkaline environment when dissolved in a sample. In particular, when urine is absorbed into the test strip, it is preferable that the pH of the reaction to the test strip can be maintained at 12 to 13. Specifically, there are alkali metal hydroxides and the like, and lithium hydroxide is preferable.

본 발명의 시험지는, 크레아티닌과의 축합 반응에 의해 정색 하는 물질로서 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 이용하는 이외는, 종래의 시험지와 동일한 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들면, 바인더와 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 용매 중에 용해 또는 분산시키는 것에 의해서 점성이 높은 도공액을 조제해, 이 도공액을 지지체 표면에 일정한 두께에 도공한 후 건조시키고, 시약층을 형성시킨다.바인더로서는, 메틸 셀룰로오스 등의 비활성 한편 친수성의 폴리머를 들 수 있다. 상기와 같이 해 얻을 수 있는 지지체와 강알칼리성 물질 용액을 함침시켜 제조할 수 있다. 이러한 방법은, 최종 제품과 같은 크기의 소재를 이용해도 되지만, 큰 소재를 이용해 적층화한 것을 적당한 크기로 재단해 사용해도 된다.The test paper of the present invention can be produced in the same manner as in the conventional test paper, except that 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid is used as a substance to be colored by a condensation reaction with creatinine. For example, a coating liquid having a high viscosity is prepared by dissolving or dispersing a binder and 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid in a solvent, coating the coating liquid to a predetermined thickness on the surface of the support, drying the coating liquid, Examples of the binder include inert and hydrophilic polymers such as methylcellulose. The support can be obtained by impregnating a support and a solution of a strong alkaline substance as described above. Such a method may use a material having the same size as that of the final product, but it is also possible to use a laminate obtained by using a large material and cut it into a suitable size.

시약을 반복 침적하여 건조한 것을, 그대로 시험지로 이용해도 괜찮지만, 이것을 작은 조각화한 것을 PVC 등으로 이루어지는 지지부의 끝에 고정해 이용할 수도 있다.The reagent may be repeatedly immersed and dried, but it may be used as the test paper. However, the small fragment may be fixed to the end of the support made of PVC or the like.

본 발명의 시험지를 사용할 때, 전개층 위에 시료(소변 등 )를 떨어뜨리거나 담궈서 시약 층의 색변화를, 육안 혹은 포토씨모스 비색 센서, 반사율 측정 장치 등의 장치를 이용해 판독한다.When using the test paper of the present invention, the color change of the reagent layer is read by dropping or immersing a sample (urine or the like) on the developed layer by using a device such as a naked eye or a photo-cmos colorimetric sensor or a reflectance measuring device.

본 발명의 시험지는, 상기와 같은 구성을 가지고 있으므로, 시험지에 시료액을 흡수시켰을 때에, 시료액 중의 pH를 높게 유지할 수 있어 시료 중에 포함되는 크레아티닌과 3,5 디니트로벤젠 술폰산과의 축합 반응에 의한 정색을 안정화시킬 수 있다. 그 결과, 높은 분석 감도를 가져, 간편하게 크레아티닌을 정량 할 수 있다.
Since the test paper of the present invention has the above-described configuration, when the sample liquid is absorbed into the test paper, the pH of the sample liquid can be kept high, so that the condensation reaction of creatinine and 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid contained in the sample Can be stabilized. As a result, creatinine can be easily quantified with high analytical sensitivity.

<제조예><Production Example>

이하에, 본 발명을 한층 더 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically.

아래와 같은 도공액 성분을 혼합한 후, 여과지에 도공해, 70℃으로 10분간 건조시킨다.
After mixing the following coating components, the coating was applied to a filter paper and dried at 70 ° C for 10 minutes.

(시약층의 도공액성분)(The coating liquid component of the reagent layer)

수산화 리튬 4.5g, 증류수 100.0 g, 젤라틴 1.5g, 0.1% 트리톤엑스100 2 mL를 포함한 수용액을 여과지에 침적 시킨 후 70℃으로 10분간 건조시킨다.An aqueous solution containing 4.5 g of lithium hydroxide, 100.0 g of distilled water, 1.5 g of gelatin and 2 mL of 0.1% Triton X 100 is immersed in a filter paper and then dried at 70 ° C for 10 minutes.

이후에 에탄올 100mL에 3,5 디니트로벤젠 술폰산 6.61g을 함유하는 용액에 다시 침적 시킨 후 50℃으로 10분간 건조시킨다.Subsequently, the solution was immersed in a solution containing 6.61 g of 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid in 100 mL of ethanol, followed by drying at 50 DEG C for 10 minutes.

건조 후 양면테이프를 한쪽면에 접착후 5 mm 길이의 롤 형태로 재단한다. 양면테이프를 이용하여 백색 PVC 필름에 접착 시키고 이를 재단하여 5×5mm 의 크레아티닌 검사시험지가 붙어 있는 시험막대를 얻는다.
After drying, double-sided tape is bonded on one side and cut into rolls of 5 mm length. Using a double-sided tape, it is bonded to a white PVC film and cut to obtain a test rod with a 5 × 5 mm creatinine test strip.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

상기 제조예와 같이 시험지를 제조했다. 이 시험지로 소변 중의 크레아티닌을 측정했다. 사람의 소변에 크레아티닌을 100~500 mg/dl가 되도록 첨가한 것을 시료로 해서, 재프 반응을 이용한 시판되는 용액계 자동 분석 장치용 시약을 이용하여 표준용액을 정량하였으며 본 발명에 의한 시험지 각각을 이용하고, 시험지의 색상값을 읽을수 있는 포토씨모스 비색 센서를 이용하여 숫자화 하였으며 이를 이용하여 크레아티닌 농도에 따른 색변화의 상관을 취했다.Test papers were prepared as in the above Preparation Example. The urine creatinine was measured with this test strip. A standard solution was quantified using commercially available reagents for a solution-based automatic analyzer using Zaffer reaction, with creatinine added to human urine so as to have a concentration of 100 to 500 mg / dl, and each of the test strips according to the present invention was used And colorimetric values were measured using a photochemiosensitivity sensor capable of reading the color value of the test strip.

시험지의 전개층에 떨어뜨리는 시료의 양은 100μl로 해 시험지를 충분히 적시고 과량의 시료는 흡습지를 사용하여 이를 제거하였다.The amount of the sample dropped on the developing layer of the test strip was 100 μl, so that the test strip was sufficiently wetted, and the excessive amount of the sample was removed using a desiccant paper.

일반 실온의 환경에서 100~500 mg/dL 농도 구간의 표준액을 이용하여 제조한 크레아티닌 시험지를 사용 후 1분 후 이 시험지를 포토씨모스 비색 센서를 이용하여 농도에 따른 비색 센서값의 측정치를 구했다. After 1 minute of using the creatinine test paper prepared using the standard solution of the concentration range of 100 to 500 mg / dL in the normal room temperature environment, the colorimetric sensor value was measured with the photochemistry colorimetric sensor according to the concentration.

이를 도 1에 나타내었다. 상기 측정 범위에서 추세회귀 분석에서 상관계수제곱의 값이 0.984로 양호한 상관성을 나타냈다.This is shown in FIG. In the regression analysis of the measurement range, the value of the correlation coefficient square showed a good correlation with 0.984.

소변 중에 포함되는 크레아티닌 배설량은, 개인차가 있지만, 일반적으로 300 mg/dl까지의 범위이며, 본 발명에 의해서 얻을 수 있는 검량선은 500 mg/dl까지의 직선성을 나타내고 있어 소변 중 크레아티닌의 정량에 충분한 측정 범위를 가지고 있다.
The amount of creatinine excreted in the urine is in a range of up to 300 mg / dl, although there are individual differences, and the calibration curve obtained by the present invention shows a linearity of up to 500 mg / dl, sufficient for the determination of creatinine in the urine It has a measuring range.

<실시예 2>&Lt; Example 2 >

실제 소변을 시료로서 재프 반응을 이용한 용액계 자동 분석 장치용 시약과 본 발명에 의한 시험지를 이용하고 포토씨모스 비색 센서를 이용해 측정한 값을 검량선을 통해 역산한 값과 분산비교 하였다. 이러한 값의 상관 관계를 도 2 에 나타내었다. 이와 같이, 양자는, 실제 소변에 대해서도 양호한 상관관계를 나타냈다.
The actual urine was analyzed by using the reagent for the automatic analyzer of the solution system using the Zaff reaction and the test paper according to the present invention, and the value measured using the photochemical colorimetric sensor was compared with the value obtained by inversion through the calibration curve. The correlation of these values is shown in Fig. Thus, both showed a good correlation with the actual urine.

<비교예 1>&Lt; Comparative Example 1 &

비교를 위해 3,5 디니트로벤젠 술폰산 대신 3, 5 디니트로 벤조산을 이용해 실제 소변을 시료로서 실시예 1과 같게 측정했으며 이때의 비교결과는 도 3 과 같이 나타났다.
For comparison, actual urine was measured using 3,5,5-dinitrobenzoic acid instead of 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid as a sample in the same manner as in Example 1, and the result of the comparison was as shown in FIG.

이 결과에서 3,5 디니트로 벤조산을 이용했을 때 보다 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 이용했을 때 기울기 차이가 크며 결국 농도에 따른 변화량이 커서 크레아티닌의 농도에 따른 색 변화가 크며 이를 이용한 정량에 유리하다. 이것은, 반응시의 pH가 유지되지 않는 강한 완충능을, 소변이 가지기 때문에 비교예의 시험지에서는 정확한 측정을 할 수 없었기 때문이다.This result shows that the gradient of 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid is larger than that of 3,5 dinitrobenzoic acid. Therefore, the color change due to the concentration of creatinine is large, Do. This is because accurate measurement can not be performed in the test paper of the comparative example because urine has a strong buffering ability in which the pH at the time of the reaction is not maintained.

Claims (6)

전개층과 이 전개층의 전부 또는 적어도 일부에 접하는 3,5 디니트로벤젠 술폰산 및 강알칼리성 물질을 포함한, 체액중의 크레아티닌 측정용 시험지.
A test strip for creatinine measurement in body fluids, comprising 3,5-dinitrobenzenesulfonic acid and a strongly alkaline substance in contact with the development layer and all or at least a portion of the development layer.
청구항 1에 있어서,
상기 전개층을 지지하기 위한 지지체를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 시험지.
The method according to claim 1,
Further comprising a support for supporting said development layer.
청구항 2에 있어서,
상기 지지체 위에 3,5 디니트로벤젠 술폰산을 포함한 시약층이 설치되고 이 시약층 위에 강알칼리성 물질을 포함한 전개층이 설치된 것을 특징으로 하는 시험지.
The method of claim 2,
Wherein a reagent layer containing 3,5 dinitrobenzenesulfonic acid is provided on the support and a development layer containing a strong alkaline substance is provided on the reagent layer.
청구항 1에 있어서,
상기 체액이 소변인 것을 특징으로 하는 시험지.
The method according to claim 1,
Wherein said body fluid is urine.
청구항 1에 있어서,
상기 강알칼리성 물질이, 시험지에 소변을 스며들게 했을 때 반응 pH를 11~14로 유지할 수 있는 물질인 것을 특징으로 하는 시험지
The method according to claim 1,
Wherein the strong alkaline substance is a substance capable of maintaining the reaction pH at 11 to 14 when urine is impregnated into the test strip.
청구항 5에 있어서,
상기 강알칼리성 물질이 수산화 리튬인 것을 특징으로 하는 시험지.The method of claim 5,
Wherein the strongly alkaline substance is lithium hydroxide.
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