KR101375775B1 - 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천연물인 동아(또는 동과)를 이용하여 기능성화장품 소재 제조에 관한 것이다.
더욱 상세하게는 여러 가지 영양성분을 함유하고 있는 동아와 천연물(또는 천연물 추출물, 천연물 파쇄물)을 혼합하여 동아천연배지를 제조하고, 상기 동아천연배지에 버섯균사체를 배양함으로써 발효물을 제조하고, 상기 제조된 발효물을 이용하여 미백효과 등 다양한 효능을 나타내는 기능성화장품 소재 제조에 관한 것이다.

Description

동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물 및 이의 제조방법{Functional cosmetic materials using Wax Gourd and The Manufacturing Method}

본 발명은 천연물인 동아(또는 동과)를 이용하여 기능성화장품 소재 제조에 관한 것이다.

더욱 상세하게는 여러 가지 영양성분을 함유하고 있는 동아와 천연물(또는 천연물 추출물, 천연물 파쇄물)을 혼합하여 동아천연배지를 제조하고, 상기 동아천연배지에 버섯균사체를 배양함으로써 발효물을 제조하고, 상기 제조된 발효물을 이용하여 미백효과 등 다양한 효능을 나타내는 기능성 화장품 소재 제조에 관한 것이다.

멜라닌(melanin)은 자연계에 널리 분포하는 페놀류의 생물고분자 물질로 검은 색소와 단백질 복합체이며, 우리 주변에서 멜라닌 합성은 사과, 감자, 바나나의 잘린 표면이 공기에 노출되었을 때, 발생하는 갈변이나 동물의 외피, 깃털, 피부, 머리, 눈 등에서 관찰된다.

멜라닌의 기능은 미생물에서 자외선 조사, 전파, 건조, 극한온도 등에 대한 생존능력을 높여주며, 동물에서는 피부나 머리의 멜라닌은 자기보호를 위한 수단의 기능을 한다. 또한 무척추동물이나 곰팡이에 존재하는 멜라닌은 미생물에 대한 면역체계의 역할을 수행하며, 커피, 차, 담배 등의 질 향상에 기여한다(J. Amm. Rev. Phytophathol. 240, 411. 1986 참조).

그러나 사람의 기미와 주근 깨 등 피부에 생기는 색소침착은 표피 내에서의 멜라닌색소의 이상적 증가에 기인하며, 멜라닌은 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트라고 불리는 색소세포 내의 멜라노좀에서 생합성 된다.

멜라닌의 주된 생성 과정은 아미노산의 일종인 티로신이 티로시나제에 의해 도파, 도파퀴논으로 산화시키며, 이들은 효소의 작용 및 자동 산화반응에 의하여 도파크롬, 인돌 카르복식 산, 인돌 퀴논류 등으로 대사되어 최종적으로 멜라닌을 합성한다(J. Mutation research 571, 121. 2005 참조).

이와 같은 멜라닌의 생합성 작용에서의 중요 효소인 티로시나제를 억제함으로써 멜라닌의 생성을 감소시킬 수 있으며, 이는 피부의 미백효과를 갖는다고 할 수 있고, 이러한 사실은 문헌에 공지되어 있다(J. Soc. Cosmet. Chem. 42, 361, 1991 참조).

현재 멜라닌 생합성 저해제는 의약품, 화장품, 식품 등에서 피부질환 치료제, 피부 미백제, 식품 갈변 방지제 등에 적용되고 있으며, 피부에서의 색소 침착 방지는 주로 네 가지 관점에서 연구되고 있다. 그 첫 번째는 멜라닌 합성의 주효소인 티로시나제 활성을 조절하기 위하여 티로시나제 합성저해물질이나, 티로시나제의 기질에 대한 길항물질을 개발하는 것이다. 두 번째는 동물의 멜라닌 생합성 장소인 멜라노사이트의 기능을 저하시키기 위하여 멜라노 사이트에 독성을 나타내는 물질을 개발하는 것이다. 세 번째는 도파의 산화방지를 위해 도파 환원 물질을 개발하는 것이다. 마지막으로 네 번째는 멜라닌 생성 기구인 제 1 효소 티로시나제와 도파크롬에서 DHICA로의 변환을 촉매하는 효소의 활성을 감소시키는 방법들이 있다.

지금까지 개발된 멜라닌 생성억제 유효물질의 대표적인 예는 알부틴, 코오지산, 아스코르빈산2인산 에스테르 마그네슘, 비타민 C, 히드로퀴논, 식물 추출물 등이 있다.

그러나 코직산은 티로시나제의 활성부위에 존재하는 구리 이온을 킬레이팅 시켜 효소활동을 억제하는 작용을 하고, 그 억제 효과는 우수하지만 화장품에 배합시 안전성이 낮아 화장료로서 적당하지 않다.

아스코르빈산 인산 에스테르 마그네슘은 티로신으로부터 멜라닌을 생성하는 반응에 관여하여 중간 체인 도파퀴논을 환원하고 멜라닌 생성작용을 억제하는 작용이 있다. 또 하나는 멜라닌에 직접작용으로 짙은색 산화형 멜라닌을 환원해서 갈색환원형 멜라닌으로 하는 작용이 있으나 용액 중에서 신속히 분해 착색됨으로서 안정성에 문제가 있다.

비타민 C 및 그 유도체 역시 미백 효과를 나타내지만 산화가 잘 되는 불안정성 때문에 화장품 원료로서의 사용이 어려워 최근에는 비타민 안정에 대한 연구가 활발하다.

하이트로 퀴논은 미백작용이 비가역적이고 피부 자극이 크기 때문에 안전성 문제로 그 사용이 제한되고 있으며, 최근에는 발암성이 인정되어 화장품 원료로는 사용이 금지되고 있다. 대부분의 식물 추출물의 경우에는 고농도에서만 비교적 높은 티로시나제 활성억제 효과를 나타내고, 저농도에서는 억제 효과가 거의 나타나지 않는다.

최근에는 뽕잎 추출물과 누에 동충하초 균사체를 이용한 국내 공개특허공보 제10-2008-0078371호(공개번호)의 뽕잎추출물을 이용한 누에 동충하초 균사체 배양액의 피부미백용 화장품 원료와, 신선초, 어성초 및 삼백초로 구성된 생약초를 기질로 하여 배지에 버섯 균사체를 접종하여 배양하는 국내 등록특허공보 제10-0848515호(등록번호)의 버섯 균사체 배양물을 유효성분으로 함유하는 미백화장품 등 천연배지에 버섯 균사체를 배양하여 획득한 배양물을 이용한 다양한 미백화장품의 원료가 개발되고 있다.

또한 본 출원의 연구진이 개발한 미백화장품 소재용 알로에 발효물과 이를 이용한 미백화장품(10-2009-033166, 2009.04.16)의 경우, 알로에를 이용한 발효물소재 개발 및 이를 이용하여 미백효능을 갖는 화장품에 대한 개발로 현재 심사 중에 있다.

동아를 wax gourde 또는 chinese watermelon이라고도 하며, 박과(―科 Cucurbitaceae)에 속하며 꼬이면서 자라는 다육질의 덩굴식물이다. 동과는 영양이 풍부하다. 단백질, 탄수화물, 칼슘, 인, 철, 각종 비타민, 섬유질, 베타캐로틴과 신진대사에 필요한 Malonic Acid 가 들어있다. Malonic Acid 가 비만을 방지해 주며 아름다운 몸매를 만들어 주는 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 동아를 이용한 기능성 소재 및 제품화에 관한 연구로는 당뇨, 알레르기, 화장료조성물에 대한 연구가 이루어졌다.

특히 동아추출물을 이용한 화장품소재에 대한 연구로는 『동아추출물을 함유하는 여드름 피부용 화장료 조성물과 그 제조방법』(등록번호 : 10-0511222)에서 동아추출물을 함유하여 여드름 증상을 악화시키는 주원인균인 프로피오니박테리움 아크네의 생육을 억제하는 우수한 여드름 치료 및 예방효과를 갖는 여드름 피부용 화장품조성물에 관한 연구 등이 이루어졌다.

동아를 이용한 연구의 경우, 건강기능식품에 대한 다양한 연구가 이루어 졌으나, 아직까지 동아를 이용하여 기능성 미백화장품 및 보습효과를 갖는 소재는 개발되지 않고 있다.

이에 동아를 이용하여 고부가가치화할 수 있는 기술개발이 절실히 필요하다.

(KR) 공개특허공보 제10-2008-0078371호 (KR) 등록특허공보 제10-0848515호 (KR) 등록특허공보 제10-0511222호

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 발명된 것으로,

본 발명은 동아를 천연배지로 하여 버섯종균을 발효시킴으로써, 미백효과가 우수한 것은 물론이고, 세포독성을 가지지 않아 피부자극이 적어 화장품 소재로 사용할 수 있는 화장품소재용 동아 발효물과 이의 제조방법을 제공하는데 목적이 있다.

또한 동아 발효물 소재의 경우 미백효과 등을 가지고 있어 다양한 기능성을 포함한 화장품소재용 동아 발효물과 이의 제조방법을 제공하는데 목적이 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 발명된 본 발명인 동아를 이용한 기능성 화장품소재용 발효물은, 동아를 주원료로 하여 이루어진 동아천연배지에 버섯종균을 접종하고, 배양 및 발효시켜 획득되는 것을 특징으로 한다.

또 다른 발명인 동아를 이용한 기능성 화장품소재용 발효물의 제조방법은, 동아를 주원료로 하는 동아천연배지를 제조하는 단계(S1)와; 상기 단계(S1)에서 제조된 동아천연배지에 버섯종균을 접종하는 단계(S2)와; 상기 단계(S2)에서 버섯종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 배양/발효단계(S3);로 이루어짐을 특징으로 한다.

상기 버섯종균은 영지버섯(Ganoderma lucidum), 상황버섯(Phellinus linteus), 붉은 동충하초(Cordyceps militaris ), 누에 동충하초(Paecilomyces japonica), 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceum), 아가리쿠스 브라제(Agaricus blazei), 표고버섯으로 이루어진 군으로부터 1종을 선택하여 단독으로 사용된다.

상기 동아천연배지는, 액 또는 겔 형태로 가공된 동아로 이루어지거나, 또는 액 또는 겔 형태로 가공된 동아에 천연물 또는 정제수가 첨가되어 이루어진 혼합물이거나, 또는 액 또는 겔 형태로 가공된 동아에 천연물과 정제수가 첨가되어 이루어진 혼합물임을 특징으로 한다.

상기 천연물은 홍삼추출물, 수삼 추출물[또는 수삼 파쇄물], 오가피 추출물, 오미자 추출물[또는 오미자 파쇄물], 강황(울금)추출물[또는 울금 파쇄물], 갈조류 추출물[또는 갈조류 파쇄물], 해조류 추출물[또는 해조류 파쇄물], 쑥추출물 중 어느 하나 또는 2개 이상을 선택사용됨을 특징으로 한다.

상기와 같이 이루어진 본 발명은 동아를 천연배지로 하여 버섯 균사체를 발효시켜 획득되는 미백 화장품 소재용 동아 발효물을 이용하여 피부에 대한 자극이 없으며, 피부 미백효과가 있는 미백 화장품을 제공할 수 있다.

특히, 본 발명의 경우 미백 화장품 소재용 동아 발효물은 다른 첨가물 없이 동아천연배지에 버섯 균사체 발효가 가능하며, 또한 동아천연배지에 천연물추출물[또는 천연물 파쇄물]을 첨가하여 발효시킴으로서 미백효과 등 다양한 기능성이 증대된 동아발효물을 얻을 수 있는 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 동아를 천연배지로 하여 발효물 제조방법을 도시한 블럭도.
도 2는 본 발명의 실시예 1에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 일정비율별 제조된 동아천연배지에 영지버섯을 발효시킨 발효물.
도 3은 본 발명의 실시예 2에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지에 영지버섯을 발효시킨 발효물.
도 4는 본 발명의 실시예 4에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지에 상황버섯을 발효시킨 발효물.
도 5는 본 발명의 실시예 5에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지에 동충하초를 발효시킨 발효물.
도 6는 본 발명의 실시예 9에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지와 오가피추출물을 혼합하여 영지버섯을 발효시킨 발효물.
도 7는 본 발명의 실시예 10에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지와 오가피추출물을 혼합하여 노루궁뎅이버섯을 발효시킨 발효물.
도 8는 본 발명의 실시예 11에 따른 동아를 이용하여 마쇄한 액으로 제조된 동아천연배지와 오가피추출물을 혼합하여 상황버섯을 발효시킨 발효물.

첨부된 도면을 참조로 본 발명의 바람직한 실시 예를 상세히 설명하도록 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

따라서, 본 명세서에 기재된 실시 예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

본 발명인 다양한 영양성분을 가짐으로써 기능성을 가지도록 한 동아를 이용한 기능성 화장품소재용 발효물의 제조방법은 도 1과 같이 동아를 사용하여 동아천연배지를 제조하는 천연배지 준비단계(S1)와, 상기 동아천연배지에 배양할 버섯종균을 준비하는 버섯종균 준비단계(S1')와, 상기 동아천연배지에 배양된 버섯종균을 접종하는 접종단계(S2)와, 상기 버섯종균이 접종된 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 배양 및 발효 단계(S3)와, 발효물을 획득하는 획득단계(S4)로 구성되며, 상기 획득단계(S4)에서 획득(습득)된 발효물을 숙성시키는 숙성단계(S5)를 더 포함할 수 있다.

상기 동아를 사용하여 동아천연배지를 제조하는 천연배지 준비단계(S1)는, 동아를 세척-절단-분리-마쇄 단계를 거쳐서 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 발효조에 상기 액(또는 겔) 상태의 동아를 단독 또는 천연물과 정제수를 혼합하여 혼합물을 투입하여 113~125℃로 10~60분간 가열멸균처리하고, 실온(25~30℃)으로 급랭 처리하여 동아천연배지를 제조한다.

상기 동아천연배지는 동아를 단독으로 발효조에 투입하여 제조되거나, 또는 동아에 다른 첨가물을 첨가한 혼합물을 발효조에 투입하여 제조된다.

상기 동아에 첨가되는 첨가물은 천연물과 정제수이며, 동아와 천연물로 혼합물을 형성하거나, 동아와 정제수로 혼합물을 형성하거나, 또는 동아와 천연물과 정제수로 혼합물이 형성된다.

상기 동아천연배지를 형성하기 위한 혼합물은 마쇄되어 액(또는 겔)의 동아 5~99중량%에 천연물(또는 천연물추출물) 1~95중량%로 이루어지거나, 또는 상기 동아천연배지를 형성하기 위한 혼합물은 마쇄되어 액(또는 겔)의 동아 5~99중량%에 정제수 1~95중량%로 이루어지거나, 또는 상기 동아천연배지를 형성하기 위한 혼합물은 마쇄되어 액(또는 겔)의 동아 5~99중량%에 천연물(또는 천연물추출물)과 정제수로 이루어진 혼합액 1~95중량%로 이루어진다.

상기 천연물(또는 천연물추출물)과 정제수로 이루어진 혼합액은 천연물(또는 천연물추출물) 1~99중량%와 정제수 1~99중량%로 이루어진다.

상기 천연물(또는 천연물추출물)은 홍삼 추출물, 수삼 추출물[또는 수삼 파쇄물], 오가피 추출물, 오미자 추출물[또는 오미자 파쇄물], 강황(울금)추출물[또는 울금 파쇄물], 갈조류 추출물[또는 갈조류 파쇄물], 해조류추출물[또는 해조류 파쇄물], 쑥추출물 중 어느 하나 또는 2개 이상을 선택 사용한다.

상기 버섯종균을 준비하는 버섯종균준비단계(S1')는, 버섯종균을 동아천연배지에 접종할 수 있도록 최적조건에서 배양하는 것으로, 상기 버섯종균은 온도 24~28℃, 통기량은 0.3~0.8vvm의 조건에서 100~140 rpm으로 교반(Shaking Rate)하면서 3~8일간 배양한다.

이러한 상기 버섯종균은 영지버섯(Ganoderma lucidum), 상황버섯(Phellinus linteus), 붉은 동충하초(Cordyceps militaris ), 누에 동충하초(Paecilomyces japonica), 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceum), 아가리쿠스 브라제(Agaricus blazei), 표고버섯으로 이루어진 군으로부터 1종을 선택하여 단독으로 사용한다.

상기 버섯종균을 접종하는 접종단계(S2)는, 동아천연배지가 들어있는 발효조에 배양된 버섯종균(버섯 전배양액)을 접종하는 것으로, 상기 동아천연배지에 5~15%(w/w)로 버섯종균을 접종한다.

상기 배양 및 발효 단계(S3)는, 버섯종균(전배양액)을 접종한 동아천연배지를 최적조건(온도 24~28℃, 통기량 0.4~0.8vvm, 교반속도 100~140 RPM )에서 3~10일 동안 배양 및 발효시킨다.

상기 동아천연배지가 들어있는 배양조에 배양되는 버섯종균(전배양액)은 그 종균의 종류에 따라 배양 및 발효의 온도 및 기간에서 약간의 차이가 있다.

상기 동아천연배지에 접종되는 버섯종균은 각각의 버섯종균의 특성 및 배양 정도에 따라 차이가 있으나, 보통 24~28℃의 온도와, 0.3~0.8vvm의 통기량, 그리고 80~140 rpm의 교반속도 조건하에서 3~8의 배양일수의 범위 내에서 조절하면서 발효조에 배양되는 버섯종균을 준비한다.

상세하게는, 영지버섯(Ganoderma lucidum)의 경우 종균접종 후 최적배양온도는 26.0± 2.0℃, 통기량은 0.3 ~ 0.5vvm 조건하에서 배양하는 것이 적당하며, 붉은 동초하초(코디셉스 밀리타리스;Cordyceps militaris )의 경우 종균접종 후 최적배양온도는 24.0± 2.0℃, 통기량은 0.3 ~ 0.5vvm 조건 하에서 배양하는 것이 적당하며, 상황버섯(페리누스 린테우스;Phellinus linteus)의 경우 종균접종 후 최적배양온도는 26.0± 2.0℃, 통기량은 0.4 ~ 0.6vvm 조건 하에서 배양하는 것이 적당하며, 노루궁뎅이버섯(헤리시움 에리나세움;Hericium erinaceum)의 경우 최적배양온도는 24.0± 2.0℃, 통기량은 0.4 ~ 0.6vvm 조건 하에서 배양하는 것이 적당하다.

상기 숙성 단계(S5)는 버섯종균이 접종된 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 배양 및 발효 단계(S3)와, 발효물을 획득하는 획득단계(S4)에 의하여 획득된 발효물(발효소재)을 사용하는 제품화 방법에 따라 추가되는 단계로써, 발효소재를 3~10℃ 저온에서 1~3일간 숙성시킨다.

상기와 같은 제조방법으로 제조된 발효물(발효소재)은 기능성 화장품소재의 주원료 및 부원료로 사용할 수 있다.

이하, 실시예를 통해 동아를 이용한 기능성 화장품소재용 발효물 및 이의 제조방법을 설명한다.

1. 실시예 1

250㎖ flask에서 동아천연배지로 하여 영지버섯(Ganoderma lucidum)을 이용한 화장품소재용 발효물의 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액과 증류수를 일정비율(중량%)(동아마쇄물:증류수 = 100:0, 80:20, 60:40)로 250㎖ flask에 넣은 다음 120℃에서 20분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 천연배지를 준비한다.

② 영지버섯 종균을 준비하는 단계 : 영지버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 120 RPM에서 4일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 영지버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 준비된 영지버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 영지버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 영지버섯이 접종된 동아천연배지를 최적조건(온도 : 27℃, Shaking Rate : 120 RPM)에서 84시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 발효물(발효소재)을 수득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 발효물을 도 2와 같이 획득한다.

2. 실시예 2

20L Bio-Reactor에서 동아천연배지로 하여 영지버섯(Ganoderma lucidum)을 이용한 화장품소재용 발효물의 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 80중량%와 증류수 20중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 천연배지를 준비한다.

② 영지버섯 종균을 준비하는 단계 : 영지버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 120 RPM에서 4일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 영지버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 준비된 영지버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 영지버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 영지버섯이 접종된 동아천연배지를 최적조건(온도 : 27℃, 통기량 : 0.4 ~ 0.5vvm)에서 84시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 발효물(발효소재)을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 발효물을 도 3과 같이 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

3. 실시예 3

300L Bio-Reactor에서 동아천연배지로 하여 영지버섯(Ganoderma lucidum) 을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 80중량%와 증류수 20중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 60분간 멸균한 다음 온도를 30℃까지 급랭하여 동아천연배지를 준비한다.

② 영지버섯 종균을 준비하는 단계 : 영지버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 30L Fermenter에서 최적온도 27℃, 통기속도 0.4vvm, Fermenter 교반속도 100 RPM에서 3.5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 영지버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 종균 준비단계에서 준비한 영지버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다. 이때 종균 준비단계의 30L Fermenter에서 3.5일간 배양한 종균이 300L Fermenter로 자동으로 접종되어진다.

④ 영지버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 영지버섯이 접종된 동아천연배지를 최적조건(최적온도 : 27℃, 통기량 : 0.5vvm, Fermenter 교반속도 110rpm)에서 84시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 발효물(발효소재)을 수득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 발효물(발효소재)을 수득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

4. 실시예 4

20L Bio-Reactor에서 동아천연배지로 하여 상황버섯(Phellinus linteus)을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 80중량%와 증류수 20중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 동아천연배지를 준비한다.

② 상황버섯 종균을 준비하는 단계 : 상황버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 125 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 상황버섯 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 준비된 상황버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 상황버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 상황버섯이 접종된 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 27℃, 통기량 0.5 ~ 0.6vvm)에서 96시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 발효물(발효소재)를 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 발효물(발효소재)을 도 4와 같이 수득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

5. 실시예 5

20L Bio-Reactor에서 동아천연배지로 하여 붉은(밀리타리스)동충하초(Cordyceps militaris )를 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 80중량%과 증류수를 20중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 동아천연배지를 준비한다.

② 붉은 동충하초 종균을 준비하는 단계 : 밀리타리스 동충하초 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 24℃, Shaking Rate 120 RPM에서 6일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 붉은 동충하초 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 천연배지에 준비한 붉은 동충하초 전배양액(종균)을 8%(w/w)를 접종한다.

④ 붉은 동충하초 종균을 접종한 동아천연배지를 배양하는 단계 : 상기 단계에서 붉은 동충하초가 접종된 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 24℃, 통기량: 0.4 ~ 0.5vvm)에서 96시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 발효물(발효소재)을 수득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 발효소재를 도 5와 같이 수득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

6. 실시예 6

동아천연배지로 하여 영지버섯(Ganoderma lucidum)-홍삼발효소재를 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아을 얻은 후 동아액 70중량%과 홍삼추출액 25중량%와 증류수 5중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 홍삼발효소재 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 영지버섯 종균을 준비하는 단계 : 영지버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 120 RPM에서 4일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 영지버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 천연배지에 준비한 영지버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 영지버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 영지버섯을 접종한 동아천연배지를 최적조건(온도 : 27℃, 통기량 : 0.4 ~ 0.5vvm)에서 84시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 홍삼 발효물(발효소재)을 수득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 홍삼 발효물(발효소재)을 수득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

7. 실시예 7

동아천연배지로 하여 노루궁뎅이버섯(Hericeum erinaceum)-발효홍삼소재를 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 제피 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아을 얻은 후 동아액 70중량%와 홍삼추출액 25중량%와 증류수 5중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 발효홍삼소재 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 노루궁뎅이버섯 종균을 준비하는 단계 : 노루궁뎅이버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 24℃, Shaking Rate 120 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 천연배지에 준비된 노루궁뎅이버섯 전배양액(종균)을 8%(w/w)를 접종한다.

④ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양하는 단계 : 상기 단계에서 노루궁뎅이버섯을 접종한 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 24℃, 통기량 0.5 ~ 0.6vvm)에서 96시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 홍삼 발효물(발효소재)을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 홍삼 발효물(발효소재)을 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

8. 실시예 8

동아천연배지로 하여 상황버섯(Phellinus linteus)-홍삼 발효물을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 70중량%와 홍삼추출액 25중량%와 증류수 5중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 홍삼 발효물을 제조하기 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 상황버섯 종균을 준비하는 단계 : 상황버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 125 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 상황버섯 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 단계에서 준비한 상황버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 상황버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 상황버섯을 접종한 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 27℃, 통기량 0.5 ~ 0.6vvm)에서 96시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 홍삼 발효물(발효소재)을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 홍삼 발효물(발효소재)을 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

9. 실시예 9

동아천연배지로 하여 영지버섯(Ganoderma lucidum)-오가피 발효물을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 10 중량%와 오가피 추출액를 90% 중량 비율로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 오가피 발효소재 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 영지버섯 종균을 준비하는 단계 : 영지버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 120 RPM에서 4일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 영지버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 준비된 영지버섯 전배양액(종균)을 7%(w/w)를 접종한다.

④ 영지버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 영지버섯을 접종한 천연배지를 최적조건(온도 : 27℃, 통기량 : 0.4 ~ 0.5vvm)에서 132시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 오가피 발효물(발효소재)을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 오가피 발효물(발효소재물)을 도 6과 같이 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

10. 실시예 10

동아천연배지로 하여 노루궁뎅이버섯(Hericeum erinaceum)-오가피 발효물을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 제피 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 10중량%와 오가피추출액 90중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 오가피 발효소재 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 노루궁뎅이버섯 종균을 준비하는 단계 : 노루궁뎅이버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 24℃, Shaking Rate 120 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 천연배지에 단계에서 준비한 노루궁뎅이버섯 전배양액(종균)을 8%(w/w)를 접종한다.

④ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양하는 단계 : 상기 단계에서 노루궁뎅이버섯이 접종된 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 24℃, 통기량 0.5 ~ 0.6vvm)에서 132시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 오가피 발효물을 수득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 오가피 발효물(발효소재)을 도 7과 같이 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

11. 실시예 11

동아천연배지로 하여 상황버섯(Phellinus linteus)-오가피 발효물을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 10 중량%와 오가피 추출액를 90% 중량 비율로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 오가피 발효소재 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 상황버섯 종균을 준비하는 단계 : 상황버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 27℃, Shaking Rate 120 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 상황버섯균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 동아천연배지에 준비된 상황버섯 전배양액(종균)을 8%(w/w)를 접종한다.

④ 상황버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 단계 : 상기 단계에서 상황버섯을 접종한 천연배지를 최적조건(온도 : 27℃, 통기량 : 0.4 ~ 0.5vvm)에서 132시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 오가피 발효물(발효소재)을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 오가피 발효물(발효소재물)을 도 8과 같이 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

12. 실시예 12

동아천연배지로 하여 노루궁뎅이버섯(Hericeum erinaceum)-수삼 발효물을 이용한 화장품소재용 발효물 제조.

① 동아천연배지를 준비하는 단계 : 동아를 세척 - 제피 - 분리 - 마쇄 단계를 거쳐서 마쇄된 액(또는 겔) 상태의 동아를 얻은 후 동아액 50중량%과 수삼 20중량%과 정제수 30중량%로 발효조에 투입한 다음 120℃에서 40분간 멸균한 다음 온도를 25℃까지 급랭하여 수삼 발효물 제조를 위한 동아천연배지를 준비한다.

② 노루궁뎅이버섯 종균을 준비하는 단계 : 노루궁뎅이버섯 균을 종균(전배양액)으로 사용하기 위해, 온도 24℃, Shaking Rate 120 RPM에서 5일간 배양하여 종균(전배양액)을 준비한다.

③ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종하는 단계 : 상기 단계에서 준비된 천연배지에 준비된 노루궁뎅이버섯 전배양액(종균)을 8%(w/w)를 접종한다.

④ 노루궁뎅이버섯 종균을 접종한 동아천연배지를 배양하는 단계 : 상기 단계에서 노루궁뎅이버섯을 접종한 동아천연배지를 최적조건(최적온도: 24℃, 통기량 0.5 ~ 0.6vvm)에서 96시간 동안 배양 발효시킨다.

⑤ 마지막으로 수삼 발효물을 획득하는 단계 : 상기 단계에서 배양이 끝난 수삼 발효물을 획득하여 저온열수추출을 한 다음, 여과(0.45㎕~ )하여10~30 brix로 농축하여 기능성 화장품 소재로 이용하기 위한 동아 발효물을 획득하거나, 또는 여과한 발효물을 10 brix내외로 농축시킨 다음 동결건조기를 이용하여 분말화하여 기능성 화장품 소재용 동아 발효물 분말을 획득한다.

상기와 같이 획득한 동아를 이용한 기능성 화장품소재용 발효물 소재를 세포내의 멜라닌 생성저해시험 (Melanogenesis inhibition assay)을 하였으며, 시험방법은 기능성화장품의 유효성평가를 위한 가이드라인[1] (식품의약품안전청, 2003)을 따랐다.

시험방법

이 시험방법은 세포배양시 세포내의 멜라닌 생성양을 공시료액과 비교하는 것이다.

본 실험은 murine melanoma(B-16 F1) 또는 이와 유사한 세포를 적량의 FBS (fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 혹은 동등이상의 성장력을 갖는 배지로 6-well plate에 well당 1×105 개로 접종한 후 5% CO2, 37℃하에서 세포가 well 바닥에 약 80% 이상 부착될 때까지 배양한다.

배양 후 배지를 제거하고 시료가 적당 농도로 희석된 배지로 교체한 후 5% CO2, 37℃하에서 일정시간 배양한다. 시료의 농도범위는 crystal violet assay를 이용한 독성실험을 통하여 결정한다. 배지를 제거한 세포를 PBS (phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수한다. 회수된 세포는 hematocytometer를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000~10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 pellet을 얻는다.

이 세포 pellet은 온도 60℃에서 건조한 후 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕ 또는 적량의 cell lysis buffer를 넣어 온도 60℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻는다.

이 액을 가지고 microplate reader로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정수당 멜라닌양 또는 일정 단백질당 멜라닌양을 구한다. 공시험하여 보정한다.

실험에 사용한 B16 F10 cell은 한국 세포주 은행에서 구입하였으며, Histopathology는 melanoma, Media는 Minimum essential medium, 25mM HEPES and 25mM NaHCO3, 90%; heat inactivated fetal bovine serum (FBS), 10% 였다.

실험결과

1) 독성시험 결과를 통한 시료의 농도결정

안전성을 포함한 시료결정을 위한 처치한 모든 농도 (고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml)에서 유의한 세포 독성 (cytotoxicity)이 나타나지 않았다. 이에 멜라닌 생성저해시험에서 각각 300 ug/ml, 30 ug/ml (final concentration)의 농도로 처치하기로 하였다.

[표 1] B16F10 cell에서의 세포독성 시험 I [ 고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml (final concentration)].

[표 2] B16F10 cell에서의 세포독성 시험 Ⅱ [ 고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml (final concentration)].

● WGG(동아-홍삼-영지버섯 발효물, 실시예 6)

● WGH(동아-홍삼-노루궁뎅이버섯 발효물, 실시예 7)

● WGP(동아-홍삼-상황버섯 발효물, 실시예 8)

[표 3] B16F10 cell에서의 세포독성 시험 Ⅲ [ 고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml (final concentration)].

2) 세포내의 멜라닌 생성저해시험 결과

[표 4] B16F10 cell에서의 멜라닌 생성량 비교 Ⅰ[고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml (final concentration)].

● Arbutin 처치군에서는 고농도 및 저농도에서 각각 96.5 ± 3.2%, 97.3 ± 1.2%의 멜라닌 생성량을 보여 유의한 효과가 관찰되지 않았다.

● Kojic acid를 처치한 군에서는 고농도와 저농도에서 각각 82.1 ± 1.7%, 82.0 ± 5.0%의 멜라닌 생성량을 보여 모든 농도에서 유의한 멜라닌 생성저해 효과가 관찰되었다.

● WN(천연동아 추출물) 처치군에서는 고농도에서 97.1 ± 3.2%, 저농도에서 96.5 ± 3.8%의 멜라닌 생성량을 보여 유의한 효과가 관찰되지 않았다.

● WG(동아 영지버섯 발효물, 실시예 2) 처치군은 고농도에서는 처치군( 89.2 ± 2.1%) 및 저농도 처치군(86.3 ± 1.2%)에서는 유의한 멜라닌 생성저해 효과를 나타내었다.

● WP( 동아 상황버섯 발효물, 실시예 4) 처치군은 고농도 처치군(86.3 ± 1.2%) 및 저농도 처치군(78.2 ± 2.8%)에서 멜라닌 생성 억제양상을 보였다.

● WC(동아 동충하초 발효물, 실시예 5) 시료를 처치한 군에서는 고농도에서는 효과가 없었으나(94.3 ± 2.6%) 저농도에서는 유의한 효과를 보였다(84.3 ± 1.3%).

[표 5] B16F10 cell에서의 멜라닌 생성량 비교 Ⅱ[고: 300 ug/ml, 저: 30 ug/ml (final concentration)].

● Arbutin 처치군에서는 고농도 및 저농도에서 각각 96.5 ± 3.2%, 97.3 ± 1.2%의 멜라닌 생성량을 보여 유의한 효과가 관찰되지 않았다.

● Kojic acid를 처치한 군에서는 고농도와 저농도에서 각각 82.1 ± 1.7%, 82.0 ± 5.0%의 멜라닌 생성량을 보여 모든 농도에서 유의한 멜라닌 생성저해 효과가 관찰되었다.

● WN(천연동아 추출물) 처치군에서는 고농도에서 97.1 ± 3.2%, 저농도에서 96.5 ± 3.8%의 멜라닌 생성량을 보여 유의한 효과가 관찰되지 않았다.

● WAG(동아-오가피-영지버섯 발효물, 실시예9) 처치군은 고농도에서는 처치군에서는 효과가 없었으나( 93.2 ± 2.8%), 저농도 처치군(85.6 ± 2.8%)에서는 유의한 멜라닌 생성저해 효과를 나타내었다.

● WAH(동아-오가피-노루궁뎅이버섯 발효물, 실시예 10) 처치군은 고농도에서는 처치군에서는 효과가 없었으나( 94.6 ± 2.1%), 저농도 처치군(90.2 ± 2.1%)에서는 유의한 멜라닌 생성저해 효과를 나타내었다.

● WAP(동아-오가피-상황버섯 발효물, 실시예11) 시료를 처치한 군에서는 고농도에서는 효과가 없었으나(93.2 ± 2.8%) 저농도에서는 유의한 효과를 보였다(82.0 ± 1.2%).

3) 실험 결과 요약

WN, WG, WP, WC, WAG, WAH, WAP 시료의 멜라닌 생성저해효과를 관찰한 결과, WN에서는 멜라닌 생성 저해효과가 없었으나, WG, WP, WC, WAG, WAH, WAP 은 멜라닌 생성 저해효과가 생긴 것으로 확인되었다.

Claims (13)

1. 액 또는 겔 형태로 가공된 동아를 원료로 하여 이루어진 동아천연배지에 버섯종균을 접종하고, 배양 및 발효시켜 획득하되, 상기 버섯종균은 영지버섯(Ganoderma lucidum), 상황버섯(Phellinus linteus), 붉은 동충하초(Cordyceps militaris ), 누에 동충하초(Paecilomyces japonica), 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceum), 아가리쿠스 브라제(Agaricus blazei), 표고버섯으로 이루어진 군으로부터 1종을 선택하여 단독으로 사용되고,
   상기 동아천연배지는 액 또는 겔 형태로 가공된 동아 5~99 중량%에 천연물 또는 정제수 1~95%가 첨가되어 이루어진 것과, 액 또는 겔 형태로 가공된 동아 5~99 중량%에 천연물과 정제수로 이루어진 혼합물 1~95%가 첨가되어 이루어진 것 중에서 선택되는 한편,
   상기 천연물은 홍삼추출물, 수삼 추출물, 수삼 파쇄물, 오가피 추출물, 오미자 추출물, 오미자 파쇄물, 강황(울금)추출물, 갈조류 추출물, 해조류 추출물, 쑥추출물 중 어느 하나 또는 2개 이상을 선택사용됨을 특징으로 하는 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물.
2. 동아를 원료로 하는 동아천연배지를 제조하는 단계(S1)와; 상기 단계(S1)에서 제조된 동아천연배지에 버섯종균을 접종하는 단계(S2)와; 상기 단계(S2)에서 버섯종균을 접종한 동아천연배지를 배양 및 발효시키는 배양/발효단계(S3);로 이루어지며,
   상기 단계(S1)는, 동아를 선별 - 세척 - 절단 - 분리 - 마쇄 단계로 가공하여 마쇄된 액 또는 겔 형태로 획득하고, 상기 마쇄된 액 또는 겔 형태의 동아를 가열멸균처리하여 동아천연배지를 제조하되,
   상기 동아천연배지는 액 또는 겔 형태로 가공된 동아 5~99 중량%에 천연물 또는 정제수 1~95%가 첨가되어 이루어진 것과, 액 또는 겔 형태로 가공된 동아 5~99 중량%에 천연물과 정제수로 이루어진 혼합물 1~95%가 첨가되어 이루어진 것 중에서 선택되는 한편,
   상기 천연물은 홍삼추출물, 수삼 추출물, 수삼 파쇄물, 오가피 추출물, 오미자 추출물, 오미자 파쇄물, 강황(울금)추출물, 갈조류 추출물, 해조류 추출물, 쑥추출물 중 어느 하나 또는 2개 이상을 선택사용됨을 특징으로 하는 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물의 제조방법.
3. 제2항에 있어서,
   상기 단계(S2)에서 접종되는 버섯종균은 최적온도 24~28℃, 통기량 0.3~0.8vvm, 교반속도 100~140rpm으로 3~8일간 배양된 버섯종균을 사용함을 특징으로 하는 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물의 제조방법.
4. 제2항에 있어서,
   상기 단계(S2)에서 접종되는 버섯종균은 동아천연배지에 5~15%(w/w)로 접종됨을 특징으로 하는 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물의 제조방법.
5. 제2항에 있어서,
   상기 버섯종균은 영지버섯(Ganoderma lucidum), 상황버섯(Phellinus linteus), 붉은 동충하초(Cordyceps militaris ), 누에 동충하초(Paecilomyces japonica), 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceum), 아가리쿠스 브라제(Agaricus blazei), 표고버섯으로 이루어진 군으로부터 1종을 선택하여 단독으로 사용됨을 특징으로 하는 동아를 이용한 미백 기능성을 갖는 화장품소재용 발효물의 제조방법.
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제

Images