KR101375137B1 - 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 황금에 함유되어 있던 배당체인 바이칼린이 비배당체인 바이칼레인으로 효과적으로 전환되어 상기 바이칼레인을 고농도로 함유함으로써 항산화 및 피부 보습 효과가 탁월하여 피부개선용의 고기능성 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물 {A cosmetic composition comprising fermented extract of Scutellaria baicalensis using Leatiporus sulphureus var. miniatus for skin moisturizing}
본 발명은 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
인체에 있어서 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 생체성분 즉, 물이나 전해질 등의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 하는 역할을 한다.
이러한 피부는 크게 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체로부터 외부로 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유함으로써 유연성을 유지하여야 한다.
일반적으로 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 각질세포층에서는 약 10 내지 30%가 된다. 진피층에서 공급된 물은 주로 수동적 확산에 의해 각질층 상부로 이동하며 최종적으로는 외부로 배출된다. 이를 경피수분손실(Trans Epidermal Water Loss : TEWL)이라 하며, 이러한 경피수분손실을 적절한 수준으로 유지시켜주는 것이 각질세포층의 지질막 성분인 피지성분과 표피지질이라고 알려져 있다. 그리고 각질세포층에는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor : NMF)라고 하는 친수성의 수분 보유능을 가진 물질이 존재하여 피부의 보습에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 정상적인 각질세포층의 수분이 10 내지 30% 정도가 유지되면 피부는 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘하게 된다.
그러나 각질세포층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다. 예를 들어, 건성피부의 경우에는 각질세포의 결집력이 약화되어 피부표면으로부터 비늘조각과 같이 각질세포가 허옇게 벗겨져 나오는 스케일링(Scaling) 현상이 나타나는 바, 이와 같이 피부가 건성화되는 것은 각질세포층의 수분함량이 정상피부에 비해 적기 때문이다. 이 밖에, 건강한 피부라 할지라도 혹독한 외부환경 즉, 바람, 추운 날씨, 햇빛, 세안, 면도 등에 의해 수분 부족현상이 일어나 피부상태가 나빠지기도 한다.
따라서 피부의 각질세포층의 수분함량을 적절히 유지하는 것은 매우 중요하다. 이를 위하여 화장품에는 피지와 유사한 성분이나 NMF 성분, 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 첨가되어 사용되었다. 예를 들어, 수용성 폴리올로서 수산기(OH기)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 나타내나 끈적임이 심하여 사용할 때 불쾌감을 느끼게 하며, 수산기가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부의 부작용이 발생하기도 한다. 또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 해치는 문제점이 있으며, 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습능력이 있다고 하나 그 보습능력에 한계가 있다. 각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절되며 피부 외용제에서 천연보습인자와 같이 안전하면서도 사용성이 우수하고 보습효과가 높은 물질의 개발이 필요한 실정이다.
황금(Scutellaria baicalensis)은 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이풀로 동아시아 대륙이 원산지이고 한국·중국·시베리아 등지에 주로 분포한다. 속썩은풀, 토금다금, 향수수초라고 불리며 주 피를 벗긴 뿌리를 한약재로 사용한다. 황금은 한방에서는 뿌리를 해열·이뇨·지사·이담 및 소염제로 이용하고 있다. 황금의 주요 활성 성분으로는 플라보노이드(flavonoid) 계열의 배당체인 바이칼린(baicalin), 우고노사이드(wogonoside)가 있고, 비배당체인 바이칼레인(baicalein)과 우고닌(wogonin)은 미량 존재하는 것으로 알려져 있는데, 배당체에 비하여 비배당체 형태가 생리 활성이 높은 것으로 알려져 있다. 근래에는 상기 유효 성분들이 지니는 간세포 보호, 간경화억제, 알코올로 인한 위 손상 억제효과, 위산 억제, 헬리코박터 파일로리균 억제, 관절 등의 통증완화 효과 등의 효능에 대한 연구들이 진행되고 있다. 한편, 황금의 주요 성분인 바이칼린은 체내 흡수가 상당히 느리고 약리적인 적용범위가 좁은 편이지만, 바이칼레인은 이에 비해, 체내 흡수가 빠르고, 약리학적인 이용가치가 바이칼린에 비해 무척 큰 것으로 보고된 바 있다. 그러나 상기 바이칼레인은 황금에서 극미량(약 0.2~0.5% 함유)으로 존재하기 때문에 직접적인 추출 방법을 이용해서 황금으로부터 바이칼레인을 획득하는 것은 어려운 것으로 알려져 있다.
붉은덕다리버섯(Leatiporus sulphureus var. miniatus)은 담자균류의 구멍장이버섯과에 속하며, 우리나라의 백두산, 월출산, 지리산, 발왕산 등에 자생하며, 세계적으로는 일본, 아시아의 열대지방 전역에 걸쳐 분포한다. 봄부터 여름까지 침엽수의 생목, 고목, 그루터기 위에 중생하는 1년생 심재 갈색 부후성 버섯이다. 붉은덕다리버섯은 예로부터 기능 조절, 건강 증진, 항질병에 효과가 있다고 전해내려 왔으나 정확한 약리효과에 대해서는 잘 알려져 있지 않았다. 붉은덕다리버섯 자실체에는 N-메틸레이티드 티라민 유도체, 다당류, 라노스테인 트리터페노이드류, 레티포릭산 및 다른 다양한 혼합물들이 포함되어 있다. 최근에는 붉은덕다리버섯이 항암제와 인슐린 분비 조절 효과가 있다고 보고된 바 있으며, 항암효과로는 붉은덕다리버섯의 세포외 다당체가 암 전이억제 및 면역력 증강을 나타내며, 이 외에도 붉은덕다리버섯 균사체의 세포외 다당체는 피부세포 성장인자의 생성을 촉진하고 상처치유 효과 및 피부 보습 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 특히 붉은덕다리버섯은 글루코시다제를 비롯한 기능성 효소를 다량 생성하는 것으로도 알려져 있다.
본 발명자들은 여러 천연물들의 화장료 응용 가능성을 연구하던 중, 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물이 탁월한 항산화 효과를 나타내며, 피부 보습 효과가 우수하여 고기능성 화장료 조성물로 이용 가능함을 확인함으로써, 본 발명을 완성할 수 있었다.
한편, 한국등록특허 제1081913호에는 황금이 일부 구성성분으로 함유된 생약 추출물을 잎새버섯을 이용하여 발효한 발효물이 함유된 화장료 조성물이 개시되어 있다. 또한, 한국등록특허 제910040호 및 한국등록특허 제966835호에는 황금이 일부 구성성분으로 함유된 생약 추출물을 효모, 유산균, 비피더스, 바실러스 등의 균주로 발효시켜 제조한 발효물을 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있다. 이 외에도 한국공개특허 제2011-0108687호 및 한국공개특허 제2011-0108686호에는 황금 추출물이 일부 구성성분으로 함유된 생약 추출물을 글리코시다아제로 처리하여 제조한 발효물을 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있다. 그러나 상기 황금 추출물의 발효물들은 황금 추출물을 붉은덕다리버섯 균사체를 이용하여 발효한 본 발명의 황금 추출물의 발효물과는 기술구성이 전혀 다르다고 할 수 있다.
한국등록특허 제1081913호 (발효 생약추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물, 2011.11.03. 등록) 한국등록특허 제910040호 (항산화 활성을 갖는 화장료 조성물, 2009.07.23. 등록) 한국등록특허 제966835호 (자외선에 대한 피부 보호 효과와 미백 및 항주름 효과를 가지는 감초, 승마, 하수오, 흑임자, 상황버섯, 당귀, 상백피, 백작약, 고삼, 황금으로 구성되어진 식물 혼합물의 추출물을 함유한 화장료 조성물 및 그의 제조방법, 2010.06.22. 등록) 한국공개특허 제2011-0108687호 (천연 원료 추출물을 포함하는 미백제 및 이를 포함하는 화장료 조성물, 2010.03.29) 한국공개특허 제2011-0108686호 (천연 원료 추출물을 포함하는 항산화제 및 이를 포함하는 사료, 식품, 또는 화장료 조성물, 2010.03.29. 공개)
본 발명의 목적은 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 황금 추출물은 황금을 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 또는 이의 혼합 추출용매로 추출하여 제조한 추출물일 수 있다.
상기 황금 추출물은, 황금에 상기 황금 중량의 1~20배의 추출용매를 가한 후, 40~100℃에서 5분~10시간 동안 추출하여 제조할 수 있다.
상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은, 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에, 상기 배지 기준으로 상기 황금 추출물을 1~35 중량%를 첨가하여 발효한 것일 수 있다.
상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 총 화장료 조성물에 0.001~30.0 중량%가 함유될 수 있다.
따라서, 바람직하게는 본 발명은 상기 붉은덕다리버섯 균사체 발효물이 포함된 화장료 조성물을 함유하는 화장료를 제공할 수 있다.
이하 본 발명을 자세하게 설명한다.
상기 황금 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산, 또는 이의 혼합 용매로 제조한 추출물일 수 있으며, 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올은 에탄올, 메탄올, 프로판올, 이소프로판올 및 부탄올 중에서 선택될 수 있다. 또한, 상기 부탄올은 100% 부탄올 또는 75~85%(v/v) 부탄올 수용액인 수포화 부탄올이 사용될 수 있다. 상기 황금 추출물은 황금에 상기 황금 중량의 1~20배의 추출용매를 가해 40~100℃에서 5분~10시간 동안 추출하여 추출액을 제조하고, 상기 추출액에서 고형분을 제거하여 여액을 수거한 후, 상기 여액을 감압농축 또는 동결건조, 분무건조, 냉풍건조, 열풍건조 등의 방법으로 건조하여 건조물 형태로 제조한 추출물일 수 있다.
상기 황금 추출물 제조시, 추출용매를 가한 후, 초고압기술(Ultra high pressure)을 이용하여 고압 추출함으로써 유효성분의 추출효과를 높일 수 있다. 바람직하게는 황금에 추출용매를 가한 후, 압력 100~3000MPa에서 추출할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 압력 500~1000MPa에서 추출할 수 있다. 또한, 상기 고압 추출 시 바람직하게는 초고압기 내부 물의 pH를 1~6으로 낮춰 추출할 수 있다. 상기 고압 추출을 위해서는 초고압처리기를 이용할 수 있다. 한편, 고압 추출시의 추출시간은 바람직하게는 5~60분간일 수 있다.
상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은, 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에, 상기 배지 기준으로 상기 황금 추출물(건조물 상태 기준)을 1~35 중량%를 첨가하여 발효하여 제조한 것일 수 있는데, 상기 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지는 물 100 중량부 기준으로 글루코오즈(glucose) 1~20 중량부, 이스트 추출물(yeast extract) 0.1~10 중량부, 폴리펩톤(polypeptone) 0.01~1 중량부, MgSO4·7H2O 0.01~1 중량부, K2HPO4 0.01~1 중량부가 포함된 배지일 수 있다.
이 때, 상기 황금 추출물은 1~70%(w/v)의 수용액 상태로 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에 추가됨으로써 발효될 수 있다. 바람직하게는, 상기 황금 추출물의 1~70 중량%의 수용액이 첨가되는 양만큼 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지의 물 함유량을 줄일 수 있다. 예를 들어, 100㎖의 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지를 제조할 때, 물을 50%만 넣어주고, 나머지 50%의 수분은 황금 추출물의 50% 수용액을 첨가하여, 황금 추출물을 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에 추가한 후 발효할 수 있다.
황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은, 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지 기준으로, 상기 붉은덕다리버섯 균사체 또는 이를 전배양(preculture)한 배양액이 0.001~10 중량%가 함유되어 배양 발효된 발효물일 수 있다. 이 때, 순수 균사체는 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지 기준으로 0.00001~2 중량%가 포함될 수 있다.
상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 총 화장료 조성물에 0.001~50.0 중량%, 바람직하게는 0.001~30.0 중량%가 함유될 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 제조하는 방법을 제공한다. 바람직하게는,
(1공정) 황금 추출물을 제조하는 단계;
(2공정) 상기 황금 추출물을 붉은덕다리버섯(Leatiporus sulphureus var. miniatus) 균사체를 이용하여 발효하는 단계; 및,
(3공정) 상기 발효물로부터 붉은덕다리 버섯 균사체를 제거하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있으며, 이 후, 감압농축하거나 동결건조하여 농축액이나 분말 상태로 제조할 수 있다.
상기 1공정의 황금 추출물은 농축물 상태로 이용하거나 건조물 상태로 이용할 수 있으며, 농축 또는 건조 후, 다시 물에 현탁하여 수용액 상태로 제조하여 사용할 수도 있다.
상기 2공정의 황금 추출물을 발효할 때, 상기 황금 추출물이 건조물 상태일 때를 기준으로, 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에 상기 황금 추출물이 총 1~35 중량%가 함유되도록 첨가한 후 발효할 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물 외에 본 발명이 목적으로 하는 피부보습 효과를 상승시켜 줄 수 있는 다른 성분을 함유할 수 있다.
한편, 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 발효 직후의 액상 상태로 화장료에 이용될 수도 있으며, 통상적인 건조 방법으로 건조된 건조물 상태로 이용될 수도 있다. 상기 건조 방법은 감압 건조, 동결 건조, 분무 건조, 냉풍 건조 등의 방법을 이용할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 또는 염료를 함유할 수 있다. 상기 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.001~70 중량%, 바람직하게는 0.001~50 중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물은 바람직하게 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 에멀젼, 연고로 이루어진 기초화장료 제형, 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. 또한, 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 제조되어 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있으며, 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로 제조될 수도 있다.
본 발명은 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 황금에 함유되어 있던 배당체인 바이칼린이 비배당체인 바이칼레인으로 효과적으로 전환되어 상기 바이칼레인을 고농도로 함유함으로써 항산화 및 피부 보습 효과가 탁월하여 피부개선용의 고기능성 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 3의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물, 실시예 1의 발효 전 황금 추출물, 비교예 1~3의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물의 바이칼린 및 바이칼레인의 농도를 나타내는 그래프이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
실시예 1. 황금 추출물의 제조
실시예 1-1
건조된 시판 황금을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 분쇄하여 미세하게 만들었다. 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액에 100g/ℓ가 되도록 첨가하여 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa, 온도 50℃에서 60분간 추출한 후 실온으로 냉각하였다. pH는 3.0으로 낮추어 처리하였다. 이 추출물의 일부를 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 최종 여과하고, 감압농축 및 동결건조하여 건조물 상태로 제조하였다.
실시예 1-2
실시예 1-1과 동일하게 제조하되 분쇄한 황금을 70%(v/v) 에탄올 수용액에 100g/ℓ가 되도록 첨가하여 80℃에서 60분간 추출한 후 실온으로 냉각하고, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 최종 여과하고, 감압농축 및 동결건조하여 건조물 상태로 제조하였다.
실시예 1-3
실시예 1-1과 동일하게 제조하되 분쇄한 황금을 정제수에 100g/ℓ가 되도록 첨가하여 100℃에서 60분간 추출한 후 실온으로 냉각하고, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 최종 여과하고, 동결건조하여 건조물 상태로 제조하였다.
실시예 2 : 붉은덕다리버섯 균사체의 배양
붉은덕다리버섯 균사체(CS0218 KFCC 11494P)는 PDA(potato dextrose agar) 사면배지 25℃, 7일간 배양한 후, 4℃ 냉장보관을 하며, 약 2개월 간격으로 계대배양을 하였다.
황금 추출물을 발효하기 위한 종균 배양물은, 물 50㎖에 글루코오즈(glucose) 1.5g, 이스트 추출물(yeast extract) 0.3g, 폴리펩톤(polypeptone) 0.1g, MgSO4·7H2O 0.025g, K2HPO4 0.025g이 되게 혼합하여 멸균 제조한 배지에 균사체를 접종한 후, 25℃, 150rpm 7일간 배양하여 제조하였다.
실시예 3 : 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물의 제조
본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은, 붉은덕다리버섯 균사체의 배양시, 배양용 배지에 황금 추출물을 첨가함으로써 제조하였다(배양용 배지 제조시, 정제수를 50% 적게 넣고, 나머지 50%에 상기 황금 추출물의 수용액을 첨가함). 이를 위해, 실시예 1의 황금 추출물의 50%(w/v) 수용액 25㎖(표 1 참조), 물 25㎖, 글루코오즈 1.5g, 이스트 추출물 0.3g, 폴리펩톤 0.1g, MgSO4·7H2O 0.025g, K2HPO4 0.025g을 혼합하고 멸균하였다. 상기 배지 조성물에 실시예 2의 붉은덕다리버섯 균사체 종균 배양물을 10 중량%가 되게 첨가한 후(순수 균사체로 0.1g 포함됨), 25℃, 150rpm 조건에서 7일간 배양하여 황금 추출물을 발효하였다. 발효를 마친 후에는 원심분리하여 붉은덕다리버섯 균사체를 모두 제거하여 얻은 여액을 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물로 이용하였다.
조건 발효물 제조
실시예 3-1 실시예 1-1의 추출물을 발효한 발효물
실시예 3-2 실시예 1-2의 추출물을 발효한 발효물
실시예 3-3 실시예 1-3의 추출물을 발효한 발효물
실시예 4 : 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 크림의 제조
본 발명의 조성물을 포함하는 크림을 제조하였다. 그 조성은 표 2에 나타내 바와 같다. 이를 위해 표 2에 기록되어 있는 '나'상(실시예 3-1 내지 3-3의 발효물, 액상 상태)을 가열하여 70℃로 유지한 후, '가'상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림으로 제조하였다.

조건		 중량%
실시예 4-1 실시예 4-2 실시예 4-3




가		 스테아릴 알콜 8 8 8
스테아린산 2 2 2
스테아린산 콜레스테롤 2 2 2
스쿠알란 4 4 4
2-옥틸도데실알콜 6 6 6
폴리옥시에틸렌(25몰부가) 알콜에스테르
3
3
3
글리세릴모노스테아린산
아스테르
2
2
2

나		 실시예 3-1의 발효물 5 - -
실시예 3-2의 발효물 - 5 -
실시예 3-3의 발효물 5
정제수 to 100 to 100 to 100
비교예 1. 황금 추출물의 유산균 발효물 제조
실시예 3-1과 동일한 방법으로 황금 추출물을 발효하되, 황금 추출물의 수용액을 붉은덕다리버섯 균사체가 아닌 β-글루코시다제(β-glucosidase)를 생산하는 것으로 알려져 있는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus ATCC 9224)의 배양용 배지에 첨가하였다. 이를 위해, 락토바실러스 애시도필러스의 기본배지인 MRS 배지를 이용하였다. MRS 배지 제조시, 정제수를 50% 적게 넣고, 나머지 50%에 실시예 1-1의 황금 추출물의 50% 수용액(w/v)을 첨가하였다. 유산균 종균배양물은 107cells/㎖가 되도록 접종하여 37℃에서 48시간 동안 배양하여 발효하였다. 발효를 마친 후에는 배양액을 원심분리하여 균체를 제거함으로써 얻은 여액을 황금 추출물의 유산균 발효물로 제조하였다.
비교예 2. 황금 추출물의 잎새버섯 발효물 제조
실시예 3-1과 동일한 방법으로 황금 추출물을 발효하되, 붉은덕다리버섯 균사체가 아닌 잎새버섯 균사체를 이용하여 발효하였다. 상기 잎새버섯은 재래시장에서 구입한 것을 이용하여 균사체 증식 후 사용하였다.
비교예 3. 황금 추출물의 효소 발효물 제조
실시예 3-1과 동일한 방법으로 황금 추출물을 발효하되, 황금 추출물의 수용액의 pH를 5.5로 조절한 뒤, 글리코시다아제(Fungamyl, Sebamyl, 및 Clariseb ; Special Enzyme, USA)를 0.02g 첨가하여 3시간 동안 반응시킨 후 추출물의 온도를 약 80℃로 상승시켜 효소를 실활시키고, 이를 황금 추출물의 효소 발효물로 제조하였다(배지 조성물은 동일하게 넣어줌).
비교예 4. 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 크림의 제조
상기 실시예 4와 동일한 방법으로 크림을 제조하되, 일부 조건('나'상)은 하기 표 3의 조건으로 하여 비교대상 크림을 제조하였다.

조건		 중량%
비교예 4-1 비교예 4-2 비교예 4-3 비교예 4-4 비교예 4-5 비교예 4-6 비교예 4-7





가		 스테아릴 알콜 8 8 8 8 8 8 8
스테아린산 2 2 2 2 2 2 2
스테아린산
콜레스테롤
2
2
2
2
2
2
2
스쿠알란 4 4 4 4 4 4 4
2-옥틸도데실알콜 6 6 6 6 6 6 6
폴리옥시에틸렌
(25몰부가)
알콜에스테르
3
3
3
3
3
3
3
글리세릴모노스테아린산 아스테르
2
2
2
2
2
2
2






나		 실시예 1-1의
추출물
5
-
-
-
-
-
-
실시예 1-2의
추출물
-
5
-
-
-
-
-
실시예 1-3의
추출물
-
-
5
-
-
-
-
비교예 1의
발효물
-
-
-
5
-
-
-
비교예 2의
발효물
-
-
-
-
5
-
-
비교예 3의
발효물
-
-
-
-
-
5
-
Na-히알루론산염 - - - - - - 5
정제수 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100
시험예 1. 바이칼린 및 바이칼레인의 농도 확인
본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물의 바이칼린 및 바이칼레인의 농도를 HPLC를 이용하여 확인하였으며 이에 대한 결과는 도 1에 나타내었다. HPLC 실험 조건은 하기와 같다.
기기 - Waters (Waters e1225 module, Waters 2998 PDA)
컬럼 - Waters Capcellpak C18 (5㎛, 4.6 × 250㎜)
유속 - 1㎖/min
파장 -　277㎚
이동상 - 아세토니트릴(%):0.125% 포름산 수용액(%)=10:90(0분), 65:35(45분), 10:90(70분)
도 1을 확인하면, 실시예 3의 본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물에서 바이칼레인의 함량이 현저하게 증가한 것을 확인할 수 있었다. 한편, 정제 효소를 이용하여 제조한 황금 추출물의 발효물보다도 본 발명의 발효물이 바이칼레인 전환 효율이 더 좋은 것으로 나타나기에, 효소를 정제하는 데 이용되는 비용을 감안하면, 붉은덕다리버섯 균사체를 이용하여 황금 추출물을 발효하는 것이 비용적인 면에서도 유용할 것으로 예상되었다.
시험예 2. 항산화 효과 확인
NBT(Nitro Blue Tetrazolium)법을 이용하여, 본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물의 항산화 효과를 측정하였다. NBT법에서는 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소가 NBT(Nitro Blue Tetrazolium)와 반응하여 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하여 활성산소 소거율을 측정한다. 이 때 각 발효물은 동결건조한 후, 표 4의 농도로 희석하여 처리하였다.
측정방법은 하기와 같다.
1. 0.05M Na2CO3 ----------------------- 2.4㎖
2. 3mM 크산틴 용액-------------------- 0.1㎖
3. 3mM EDTA 용액---------------------- 0.1㎖
4. BSA 용액--------------------------- 0.1㎖
5. 0.72mM NBT 용액-------------------- 0.1㎖
6. 크산틴옥시다제 용액----------------- 0.1㎖
7. 6mM CuCl2 용액---------------------- 0.1㎖
① 1,2,3,4,5를 혼합하고 여기에 각 조건의 황금 추출물이나 발효물 0.1㎖(시료)을 첨가하여 25℃에서 10분간 방치한다.
② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간 반응시킨다.
③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도(St)를 측정한다.
④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도(Bt)를 측정한다.
⑤ 시료용액의 블랭크(Blank)는 6 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도(Bo)를 측정한다.
효과의 결과는 하기 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 4와 같다.
수학식 1
억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 효소(크산틴옥시다아제) 반응 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
시료명 시료 처리농도(%[w/v]) 항산화효과(%)
실시예 3-1의 발효물 0.01 98
실시예 3-2의 발효물 0.01 79
실시예 3-3의 발효물 0.01 77
실시예 1-1의 추출물 0.01 12
실시예 1-2의 추출물 0.01 18
실시예 1-3의 추출물 0.01 15
비교예 1의 발효물 0.01 36
비교예 2의 발효물 0.01 33
비교예 3의 발효물 0.01 32
레티놀 0.1 90
BHT 0.1 88
시험결과, 표 4와 같이 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물인 실시예 3의 조성물 모두에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었다.
시험예 3. DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
또 다른 방법으로 항산화 효과를 측정하기 위해, DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. DPPH법은 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical(DPPH)이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하는 방법으로서, 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다. 이 때 각 발효물은 동결건조한 후, 표 5의 농도로 희석하여 처리하였다.
측정방법은 하기와 같다.
① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 용액 0.15㎖에 시료용액 0.15㎖를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.
② 그 후 560nm에서의 흡광도(St)를 측정한다.
③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도(Bt)를 측정한다.
④ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도(Bo)를 측정한다.
효과의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 5에 나타내었다.
수학식 2
억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
시료명 시료 처리농도 (%) 항산화 효과 (%)
실시예 3-1의 발효물 0.01 93
실시예 3-2의 발효물 0.01 72
실시예 3-3의 발효물 0.01 77
실시예 1-1의 추출물 0.01 12
실시예 1-2의 추출물 0.01 13
실시예 1-3의 추출물 0.01 18
비교예 1의 발효물 0.01 38
비교예 2의 발효물 0.01 32
비교예 3의 발효물 0.01 30
녹차추출물 0.01 40
비타민 E 0.01 37
표 5를 참고하면, 시험예 2에서 확인된 것과 마찬가지로 실시예 3의 조성물이 항산화 효과가 가장 좋았고, 이는 녹차추출물과 비타민 E보다 우수한 것으로 확인되었다.
시험예 4. 피부 보습효과 측정 실험
본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 이용하여 제조한 실시예 4 및 비교예 4의 크림을 이용하여 피부 보습효과를 평가하였다. 각 조당 20~40대 여성 실험자 20명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 크림 시료를 바르고 눈가에서 3cm 우측으로 1cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 90분의 보습 능력을 Cornoemeter(CM810, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)로 △Hydration(보습증가량)을 평가하였다.
크림 Corneometer (△Hydration, g/m2/h)
실시예 4-1 18
실시예 4-2 19
실시예 4-3 20
비교예 4-1 4
비교예 4-2 3
비교예 4-3 5
비교예 4-4 7
비교예 4-5 8
비교예 4-6 9
비교예 4-7 7
표 6에서 나타낸 바와 같이 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 보습효과가 탁월함을 알 수 있다.
시험예 5. 경피수분손실량 측정
본 발명의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 이용하여 제조한 실시예 4 및 비교예 4의 크림을 이용하여 경피수분손실량(TEWL : Trans-Epidemal Water Loss)을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 평가하였다.
각 조당 20~40대 여성 실험자 20명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 시료를 바르고 눈가에서 3cm 우측으로 1cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간 및 6시간의 경피수분손실량을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하여 평균값을 사용하여 경피수분손실량을 평가하였으며, 이를 하기 표 7에 나타내었다(경피수분손실량 숫자가 작을수록 효과가 우수함).
크림 경피수분손실량 (단위시간당 피부 1㎠에서 증발하는 수분, g)
1시간 2시간 4시간 6시간
실시예 4-1 11.6 10.2 6.1 3.7
실시예 4-2 12.8 11.2 7.1 5.6
실시예 4-3 12.4 10.8 8.3 6.3
비교예 4-1 18.4 17.1 16.7 14.6
비교예 4-2 17.8 15.2 14.8 14.2
비교예 4-3 18.4 16.8 15.4 13.4
비교예 4-4 17.2 15.8 13.2 11.8
비교예 4-5 18.2 16.6 14.8 11.6
비교예 4-6 16.8 15.4 14.4 12.4
비교예 4-7 18.8 17.2 15.2 14.4
표 7에 나타낸 바와 같이 경피수분손실량을 측정한 결과, 실시예 4-1 내지 4-3의 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 경피수분손실량이 시간이 흐를수록 감소하고 있음을 알 수 있으며 특히 붉은덕다리버섯으로 발효한 초고압 황금 추출물을 함유한 크림(실시예 4-1)을 도포한 실험자에서 경피수분손실량이 현저하게 감소하고 있음을 알 수 있었다.

Claims (6)

  1. 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 황금 추출물은 황금을 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 또는 이의 혼합 추출용매로 추출하여 제조한 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 황금 추출물은, 황금에 상기 황금 중량의 1~20배의 추출용매를 가한 후, 40~100℃에서 5분~10시간 동안 추출하여 제조한 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은, 붉은덕다리버섯 균사체 배양용 배지에, 상기 배지 기준으로 상기 황금 추출물을 1~35 중량%를 첨가하여 발효한 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 황금 추출물의 붉은덕다리버섯 균사체 발효물은 총 화장료 조성물에 0.001~30.0 중량%가 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료.












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