KR102365027B1

KR102365027B1 - 천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102365027B1
Application number: KR1020210127110A
Authority: KR
Inventors: 한상욱
Original assignee: 주식회사 네오코스
Priority date: 2021-09-27
Filing date: 2021-09-27
Publication date: 2022-02-23

Abstract

본 발명은 천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 천연 추출물은 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물로 이루어진다. 상기 화장료 조성물은 주름 개선 및 항산화 효능 통해 항노화 기능을 가지며, 피부의 항상성를 통해 피부 상태를 개선시킬 수 있다.

Description

천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR SKIN IMPROVEMENT COMPRISING NATURAL EXTRACTS AND HAMPSEED OIL}

피부는 신체의 외부를 덮고 있는 하나의 막으로 여러 가지 외부의 자극, 건조 등의 환경요소로부터 신체를 보호해 주는 다양한 생리적 기능을 수행하여 내부 장기와 그 밖의 체내 기관을 보호 조절하는 역할을 한다.

그러나, 피부는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적 기능이 저하되어 신진 대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되게 된다. 또한 광 또는 열에 반복적인 노출로 인해 피부의 외양 또는 기능이 변하게 되는데, 이로 인해 자유라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스 등은 피부의 정상 기능 저하, 멜라닌 침착에 의한 기미, 주근깨 등의 생성 및 피부 노화현상을 촉진하여 피부를 손상시키게 된다.

주름은 자연적 노화에 의한 주름의 생성과 자외선 노출(광노화)에 의한 주름의 생성으로 크게 나눌 수 있는데, 두 가지 원인에 의한 주름 형성 매커니즘은 아직까지 정확하게 밝혀져 있지 않은 상태이다. 자연적 노화와 광노화에 의하나 피부변화와 관련되어 발견되는 공통적인 현상은 진피 내의 주 구성 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형, 진피의 기질인 히알루론산의 감소에 의한 피부 탄력 감소이다. 특히 지금까지의 연구결과에 의하면 진피 내 주 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형이 주름의 생성 및 피부의 탄력저하에 직접적으로 관여하는 것으로 알려져 있다.

콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포외 간질에 존재하고, 중요한 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포분할과 분화의 유도 등이 알려져 있다. 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다.

근래에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구 결과가 보고되면서 피부에서의 콜라겐의 중요한 기능이 밝혀지고 있다. 콜라겐 합성을 촉진하여 주름개선 효과를 나타내는 유효성분들이 알려져 있다. 예를 들어 레티노산(retinoic acid), TGF(Transforming growth factor), 동물 태반 유래의 단백질, 베툴린산(betulinic acid) 등이 콜라겐 합성 촉진 물질로서 알려져 있다.

이처럼 피부노화를 방지하여 보다 건강하고 아름다운 피부를 유지하기 위하여 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻어진 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용함으로써 피부의 고유 기능을 유지시키고 피부 세포를 활성화시켜 피부 신진대사를 촉진하여 피부 건강을 유지하고자 하는 노력이 계속되고 있다. 이에 따른 화장품, 피부 외용제 등이 활발히 개발되고 있으며, 최근에는 기존의 피부 외용제 조성물과 비교하여 보다 생체에 안전하고 효과가 높은 새로운 피부 외용제 조성물의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

한국등록특허 제10-1560575호

본 발명의 목적은 천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면은 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물을 포함하는 천연 추출물; 및 햄프씨드 오일을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 “바나나(Musa sapientum L.)”는 다년생초본으로 파초과에 속한다. 제일 높이 자라면 최대 5 m 안팎이고 6월~9월 중에 꽃이 피고 10월에 바나나 열매가 성숙되는 것으로 알려져 있다. 바나나 열매는 당질이 풍부하고 녹말, 칼슘, 카로틴, 식이섬유인 펙틴 등이 다량 함유되어 있다. 또한 장을 촉촉하게 하는 성질이 있어 열로 인한 발생한 목의 갈증, 건조한 장 때문에 발생하는 변비 증세 개선 등에 효과가 있다고 알려져 있다.

본 발명에서는 바나나 열매 중에서도 바나나잎의 추출물이 과라나 추출물, 흑미강 발효 추출물과 혼합하여 주름개선, 항산화 등의 피부 노화 개선에 시너지 효과를 발휘할 수 있음을 규명하였다.

상기 바나나잎을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 “과리나(Paullinia cupana)”는 브라질 아마존 분지 원산의 무환자나무와 폴리니아 속의 덩굴식물이다. 과라나는 피로회복, 혈액순환, 뇌 활동을 촉진시키는 식물의 열매이며, 커피의 약 3배에 달하는 카페인을 함유하고 있지만 과라나에 함유된 식물성 카페인은 일반 커피나 홍차와는 달리 신경을 자극하지 않는다.

상기 과라나의 추출물은 주름방지, 피부탄력, 항균 등에 효과가 있으며, 특히 과라나 내 '크산틴 유도체'가 이뇨작용을 하여 노폐물 제거에 탁월한 효과가 있다고 알려져 있어, 건강 보조식품 등의 주요 성분으로 종종 활용되고 있다.

상기 과라나 추출물의 추출 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 바나나잎 추출물과 같이 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서 바나나잎 추출물 및 과라나 추출물은 에탄올 용매에 침지한 후 환류추출기에서 가열 추출한 뒤 상온에서 냉각하고 감압 농축하여 수득할 수 있다.

본 발명에서 “흑미(Oryza sativa L.)”는 안토시아닌계(anthocyanins) 및 폴리페놀계(polyphenols) 화합물 등의 기능성 성분을 풍부하게 함유하고 있는 쌀로서, 흑미는 영양성분으로 전분, 단백질, 지방산 등을 함유하고 있으며 앞서 설명한 안토시아닌 및 폴리페놀계 화합물 외에도 섬유소, 인체에 필수적인 무기질, 비타민 B군, 비타민 C, 니아신(niacin), 카로틴(carotene) 등이 함유되어 있다. 흑미의 약용효과로는 안토시아닌계 색소성분 등에 의한 항산화 효과, 항암 효과, 항알레르기 효과, 항염증 효과, 항고지혈증 효과가 알려져 있다.

본 발명에서 흑미강은 흑미의 도정이나 제분시 제거되는 외피와 약간의 호분층을 포함하는 부산물을 의미하며, 흑미 원물로부터 일반적인 도정 과정을 거쳐 흑미강을 수득할 수 있다.

본 발명에서 “발효”란 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해시키는 과정을 말한다. 발효라고 하는 것은 효소작용에 의해 유기물이 간단한 화합물로 변화해 자유에너지를 내놓는 현상이지만, 일반적으로는 미생물이 유기물의 분해과정을 통해 대사물을 축적하는 현상을 말한다. 예컨대 효모가 당을 무산소적으로 분해해서 에틸알코올과 이산화탄소로 하는 알코올 발효, 락트산균이 당을 무산소적으로 분해해서 락트산으로 하는 락트산 발효 등의 전형적인 발효와, 아세트산균이 공기 중의 산소를 이용해서 알코올을 아세트산으로 산화시키는 현상, 곰팡이가 공기 중의 산소를 이용해서 글루코오스를 글루콘산으로 산화시키는 현상 등의 아세트산 발효, 글루콘산 발효 등이 있다.

본 발명에서 흑미강 발효 추출물은 흑미강에 발효 균주를 접종하여 소정의 조건에서 발효한 후, 특정 용매로 추출하여 제조한 것일 수 있다.

구체적으로 상기 흑미강 발효 추출물은 버섯 균사체를 접종하여 수득한 것일 수 있다.

보다 구체적으로 상기 버섯 균사체는 노루궁뎅이버섯 균사체 및 상황버섯 균사체의 종균배양액을 1 : 9 내지 4 : 6의 비율로 혼합한 것일 수 있다. 상기 상황버섯 균사체의 종균 배양액을 이용하여 흑미강을 발효할 경우 주름 개선 효과가 나타나나, 노루궁뎅이버섯 균사체의 종균 배양액을 1 : 9 내지 4 : 6의 범위 내로 소정 혼합 시 주름 개선 효과가 현저하게 향상될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물을 0.1~0.5 : 0.5~1.5 : 0.1~0.5의 비율로 혼합한 천연 추출물을 포함할 수 있다.

본 발명에서 “햄프씨드 오일(Hempseed Oil)”은 대마 나무로부터 저온 압착(Cold Pressing)으로 얻어진 오일로써 필수 지방산, 비타민 A, D, E, 미네랄, 오메가 3, 오메가 6를 포함하고 있으며, 천연 항산화제 비타민 E와 콜레스테롤의 흡수를 막는 스테롤이 함유되어 있다. 또한, 햄프씨드 오일은 알파리놀레산(Alpha-Linolenic Acid; ALA)과 감마리놀레산이 풍부하며, 보습과 피부연화에 훌륭한 역할을 할 뿐만 아니라, 인, 칼륨, 마그네슘, 황, 칼슘과 철, 아연 등의 미네랄도 풍부하게 함유하고 있다. 이러한 햄프씨드 오일은 특히, 피부에 사용할 경우 보습, 피부노화방지 및 피부재생효과가 탁월하며, 아토피 피부에 사용시 가려움증을 해소할 수 있다고 알려져 있다.

상기 햄프씨드 오일은 천연 추출물 대비 0.1 내지 0.8 중량부로 포함할 수 있다. 햄프씨드 오일의 함량이 천연 추출물 총 중량 대비 0.1 중량부 보다 적을 경우 충분한 햄프씨드의 항산화 및 피부의 pH 유지 효과가 발휘되지 않을 수 있으며, 햄프씨드 오일의 함량이 0.8 함량보다 높을 경우 화장료 조성물로서 피부 안전성 및 기타 오일 함량 증진에 따른 부작용 문제가 나타날 수 있어, 천연 추출물 함량 대비 0.1 내지 0.8 중량부로 포함하는 것이 바람직하다. 또한 천연 추출물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.1 내지 10 중량부로 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 주름 개선은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명의 일 실시예에서 상기 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물로 구성되는 천연 추출물과 햄프씨드 오일을 포함하는 화장료 조성물에서 우수한 콜라게네아즈 저해 활성을 확인하였으며, 흑미강 발효 추출물의 균사 종균배양액이 노루궁뎅이버섯 균사체 및 상황버섯 균사체의 종균배양액 혼합물일 때 그 효과가 특히 우수함을 확인하였다(표 3).

상기 화장료 조성물은 항산화 또는 피부 항상성 유지 용도를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 피부 항상성 유지는 피부의 pH를 4.0 내지 6.5의 범위로 유지시키는 것일 수 있다.

본 발명에서 항산화란, 산화를 억제하는 작용을 의미한다. 인체는 산화촉진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발하게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다. 이러한 활성 산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있게 된다.

본 발명의 일 실시예에서 자유라디칼(free radical) 소거활성 측정을 통해 상기 천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 화장료 조성물의 항산화 효과를 확인하였으며, 항산화 물질인 폴리페놀 및 플라보노이드 함량은 바나나잎 추출물 및 과라나 추출물 조합을 통해 보다 향상됨을 확인하였다(도 1).

한편 피부 내 미생물의 적절한 균형 유지는 외부 유해 성분으로부터 피부의 각질층을 보호해줌으로써 피부 장벽 강화, 피부 보습 유지 효과 상승 및 피부 건조 증상 등을 개선시킬 수 있을 뿐 아니라, 피부 표면에 pH 균형을 회복시키는 탁월한 효능을 제공할 수 있다.

피부가 pH 4.0 이하의 산성 상태에서는 피지 분비량이 많아 지성 상태의 피부 환경이 형성되기 쉽고, pH 6.5 이상의 알칼리 상태에서는 유분이 부족하여 건조하고 예민해지며 각종 세균이 번식하여 여드름 등의 염증이 유발되기 싶다. 반면, 피부가 pH 4.0 내지 6.5 범위의 약산성 상태에서는 피부 장벽을 위해 보호막을 형성하여 외부로부터 미세먼지나 각종 오염물질의 침투를 차단하는 건강한 피부 상태가 유지될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 피부 항상성 유지 효과를 확인하기 위해 상기 천연 추출물 및 햄프씨드 오일을 포함하는 화장료 조성물을 처리한 후 피부 pH를 측정한 결과, pH 4.0 내지 6.5 범위 내의 약산성 상태의 피부를 유지시킬 수 있음을 확인하였으며, 특히 알칼리성을 나타내는 피부에 대하여도 보다 빠른 시간에 약산성 피부로 변화시키는 것을 확인하였다(표 6).

상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서, 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이

스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있으며, 특히 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

본 발명의 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물을 포함하는 천연 추출물은 주름 개선 및 항산화 효과를 향상시킴으로써 피부 노화 방지에 탁월한 효과를 가진다. 또한 상기 천연 추출물과 햄프씨드 오일을 혼합하여 피부의 항산화 효과는 물론 피부 항상성 유지를 통해 피부의 상태를 개선시킬 수 있는 바, 본 발명의 화장료 조성물은 피부 상태 개선 용도의 화장품 소재로서 유용하게 활용될 수 있다.

본 발명의 효과는 상기 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 실시예 및 비교예의 DPPH(1,1-diphenyl1-2-picrylhydrazyl) 자유라디칼 소거능을 측정한 결과를 나타낸 것이다 (A: 실시예, B: 비교예).

이하, 첨부된 도면을 참고하여 본 발명의 실시예에 관하여 상세히 서술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

제조실시예 1. 천연 추출물의 제조

1-1. 바나나잎 추출물 및 과라나 추출물의 제조

건조한 바나나잎 및 과라나 씨앗 500 g을 각각 분쇄하여 분말을 제조하였다. 상기 분말을 부직포에 담아 70%(v/v) 에탄올 5000 g에 침지한 후, 환류추출기에서 80℃ 온도로 5시간 동안 가열하여 추출한 뒤, 상온에서 냉각한 후 분말이 담긴 부직포를 제거한 다음 여과지로 여과하였다. 그 후, 냉각콘덴서가 달린 증류장치에 50℃ 온도에서 감압 농축하여 바나나잎 추출물 및 과리나 추출물을 각각 수득하였다.

1-2. 흑미강 발효 추출물(노루궁뎅이 및 상황버섯 균사)의 제조

흑미 원물에 도정기를 이용하여 흑미강을 수득한 뒤, 흑미강을 분쇄기로 갈아 체눈 크기 300 um 이하의 체를 통과시켜 분말화하였다. 분말화한 흑미강을 100 g당 1L의 증류수에 용해시킨 후 전분분해효소(amylase) 및 단백질분해효소(protease)를 처리하고 열처리 살균 공정을 수행하였다. 이후, 상기 배양 배지에 별도로 배양한 노루궁뎅이 및 상황버섯 균사 종균배양액을 4 : 6의 비율로 혼합한 후 10%(v/v) 만큼 접종하고 28~30℃ 및 pH 4.5~7의 조건에서 배양하였다. 상기 균사는 한국미생물보존센터(KCCM), 생명자원센터(KCTC), 한국세포주은항(KCLB), 미국표준균수배양수록보존소(ATCC), 한국농업미생물자원센터(KACC) 등의 기관에서 균주를 분양 받아 사용할 수 있다. 발효된 흑미강 분말은 70% 에탄올을 1 : 10의 중량비로 혼합하여 상온에서 12시간 동안 추출하고 0.45 um 필터로 여과하여 최종적으로 흑미강 발효 추출물을 제조하였다.

제조비교예 1. 천연 추출물의 제조

1-1. 흑미강 발효 추출물(상황버섯 균사)의 제조

상기 제조실시예 1-2와 제조방법은 동일하고, 다만 접종하는 균사체가 노루궁뎅이 및 상황버섯 혼합 균사가 아닌 상황버섯 균사의 종균배양액 100%를 접종하여, 흑미강 발효 추출물을 제조하였다.

상기 제조실시예 1-2와 제조방법은 동일하고, 다만 접종하는 균사체가 노루궁뎅이 및 상황버섯 균사 종균배양액의 비율을 5 : 5의 비율로 접종하여, 흑미강 발효 추출물을 제조하였다.

실시예 및 비교예

하기 표 1에 나타낸 조성을 가지는 세럼형 화장료 조성물을 제조하였다.

원료비 (함량%)	실시예 1	실시예 2	비교예 1	비교예 2	비교예 3	비교예 4
바나나잎 추출물	0.001	0.005	0.001	-	0.001	0.001
과라나 추출물	0.008	0.005	0.008	-	0.008	0.008
흑미강 추출물	-	-	-	-	-	-
흑미강 발효 추출물(상황버섯)	-	-	0.001	-	-	-
흑미강 발효 추출물 (제조실시예 1-2)	0.001	0.005	-	0.005	0.001	-
흑미강 발효 추출물(제조비교예 1-2)	-	-	-	-	-	0.001
햄프씨드 오일	0.004	0.006	0.004	0.002	-	0.004

실험예 1. 실시예 및 비교예의 세포독성 시험

실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 4의 피부 안정성을 확인하기 위해, EZ-사이톡스 분석(EZ-cytox assay)법을 이용하여 세포 독성 평가를 수행하였다. EZ-사이톡스 분석(EZ-cytox assay)은 살아있는 세포의 탈수소효소(Dehydrogenase)와 반응하여 주황색의 수용성 formazan을 생성하는 원리를 이용하여 세포생존율을 측정하는 대표적인 방법이다.

구체적으로, 피부각질형성세포에서의 독성을 확인하기 위하여 HaCaT 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5 X 10⁴ 세포/mL로 96 웰 플레이트에 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 18시간 동안 반응시킨 후, 마이크로플레이트리더 (microplate reader)를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료 군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포생존율을 평가하였다. 그 결과는 표 2에 나타내었다.

세포 생존율(대조군 %)
농도(ug/ml)	0	50	100	125
실시예 1	100	105	103	102
실시예 2	100	104	105	103
비교예 1	100	102	102	101
비교예 2	100	104	103	103
비교예 3	100	101	102	101
비교예 4	100	104	102	102

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 4의 조성물은 농도에 상관없이 우수한 세포 생존율을 나타냈으며, 피부각질형성세포에 대한 독성이 거의 없어 안정성이 높음을 확인하였다.

실험예 2. 실시예 및 비교예의 주름 개선 효과 확인

실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 4의 콜라게네이즈 저해 활성(collagenase inhibition activity)을 평가하였다. 구체적으로 0.1M tris-HCL 버퍼(pH 7.5)에 4 mM CaCl₂를 첨가하여 0.3 mg/mL의 4-페닐아조벤질 옥시카보닐(4-phenylazobenzyl oxycarbonyl)-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(sigma, U.S.A)를 녹인 기질액 125 uL에 시료 10 uL를 혼합하였다.

혼합액에 1 mg/mL 클로스트리듐 히스톨리티큠(Clostridium histolyticum) 콜라게네이즈(Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA) 0.075 mL를 첨가하였다. 실온에서 20분간 방치한 후 6% 시트르산 0.5 mL를 넣어 반응을 정지시키고, 아세트산에틸 2 mL를 첨가하여 분광광도계(UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan)로 320 nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게네이즈 저해활성은 하기 식에 따라 시료 무처리과의 비율로 산출하였다.

[식 1]

콜라게네이즈 저해 활성(%) = 100-[(균주 배양액 처리군의 흡광도/균주 배양액 무처리군의 흡광도)X100]

콜라게네이즈 저해활성 (%)
농도(ug/ml)	125	250	500
실시예 1	48.5	54.3	66.9
실시예 2	48.6	54.6	67.1
비교예 1	48.9	52.1	60.8
비교예 2	48.8	49.1	57.3
비교예 3	48.7	54.0	65.5
비교예 4	48.9	52.4	61.0

그 결과 표 3에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 2 모두 콜라게네이즈 저해활성능을 나타내는 것을 확인하였으며, 특히 노루궁뎅이 균사 종균배양액을 접종하지 않거나 또는 다량 포함한 비교예 1 및 4의 조성물 대비 콜라게네이즈 저해활성 효과가 향상됨을 확인하였다. 이는 노루궁뎅이 균사 및 상황버섯 균사 종균배양액의 비율이 1 : 9 내지 4 : 6의 비율 함량 내에서 주름 개선 효과가 가장 우수하게 나타남을 보여준다.

실험예 3. 실시예 및 비교예의 항산화 효과 확인

3-1. DPPH 소거활성 확인

실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 3의 항산화능을 확인하였다. 항산화능 평가는 자유라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위하여 DPPH(1,1-diphenyl1-2-picrylhydrazyl)을 이용하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH를 소거하여 탈색되는 정도를 515nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다. 상기 대조군은 비타민C를 이용하였고, 라디칼 DPPH는 50% 소거하는 농도(SC₅₀)를 측정하고, 이를 대조군과 비교하였다.

[식 2]

DPPH 소거활성(%) = [1-(실시예 또는 비교예 시료처리군의 흡광도/시료 무처리군의 흡광도)]X100

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 2의 자유라디칼 소거능이 농도 의존적으로 증가함을 확인하였다.

3-2. 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 확인

실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 3의 항산화능 평가는 항산화 효과가 있는 물질로 알려진 폴리페놀 함량을 측정하여 확인하였다. 구체적으로 시험관에 준비한 실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 3을 10 uL을 혼합한 후에 상온에서 5 분간 반응시켰다. 이 후 7.0%(w/v) Na₂CO₃ 100 ul을 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후에 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이후 갈릭산 1수화물(Galic acid monohydrate, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)을 이용하여 하기 식 3에 따라 총 폴리페놀 함량을 계산하였다.

[식 3]

표준곡선: y=0.0021x-0.0019, R²=0.9999

또한 실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 3의 플라보노이드 함량을 분석하였다. 구체적으로 5.0%(w/v) Na₂NO₂ (Sigma-Aldrich, St. Louise, MO, USA)와 섞어 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이후 루틴(Sigma-Aldrich Co., St. Louise, MO, USA)를 사용하여 0~1,000 mg/ml의 농도범위에서 얻어진 표준 검량선으로부터 추출물의 총 플라보노이드 함량을 계산하였다.

[식 4]

검량선: y=0.021x-0.0007, R²=0.9999

성분의 함량은 식품의약품안전처의 권고 사안에 따라 표준 시료인 갈산(galic acid)와 루틴(rutin)으로부터 작성된 검량 곡선을 이용하여 건조시료 100 g 당 mg 함량으로 표시하였다.

시료	총 폴리페놀 함량 (ug GAE/mg)
실시예 1	16.7
실시예 2	16.7
비교예 1	14.6
비교예 2	11.3.
비교예 3	12.5

상기 표 4에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 2는 비교예 1 및 3에 비해 총 폴리페놀의 총 함량이 많은 것으로 확인되었다.

상기 항산화 효과를 확인하는 실험을 통해 바나나잎 추출물 및 과라나 추출물이 흑미강 발효 추출물 조합을 통해 폴리페놀 및 플라보노이드 물질을 증진시키며, 햄프씨드 오일을 첨가함으로써 항산화 효과를 현저하게 향상시킬 수 있음을 증명하였다.

실험예 4. 실시예 및 비교예의 피부의 항상성 유지 효과 확인

상기 실시예 1, 2 및 비교예 3의 조성물이 피부 pH를 4.0 내지 6.5 범위로 피부 항상성 유지에 효과가 있는지 여부를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.

먼저 28세에서 50세 사이의 여성 피험자(평균 연령 35.8세) 18명을 대상으로 6명씩 나누어 얼굴에 하기 표 5에 따라 제조한 에센스를 각각 도포하였으며, 도포 전, 1분 후, 1시간 후, 2시간 후, 5시간 후 및 12시간 후의 피부 pH를 각각 측정하였다. 상기 피험자들은 세균 번식 및 이에 의한 여드름성 피부로서 알칼리성 피부를 가졌으며, 본 발명의 조성물을 통해 정상 피부의 pH인 약산성으로 균형이 맞추어지는 것을 확인하였다. 피부 pH변화는 피부 pH 측정기 PH900으로 측정하였다. pH 값은 18명을 평균하여 나타낸 것이다.

원료명	개선율(%)
실시예 1, 실시예 2 또는 비교예 3	5
세테아릴알코올	2
세테아릴글루코사이드	1
호호바씨오일	5
실리카	0.5
글리세린	10
정제수	to 100

구분	시간 경과에 따른 평균 pH
구분	바르기 전	1분 후	1시간 후	2시간 후	5 시간 후	12시간 후
실시예 1	7.4	6.8	6.4	6.0	5.6	5.7
실시예 2	7.4	6.5	5.9	5.4	5.4	5.6
비교예 3	7.4	7.1	6.9	6.7	6.5	6.0

그 결과, 정상적인 피부의 경우 인종별, 계절별 차이는 존재하나 약산성에 해당하는 pH 5~6.5, 보다 바람직하게는 pH 5.5~5.9 수치 범위내의 약산성 상태가 피부 내 세균 등의 유해성분을 억제하며 수분 유지 방어 기능이 있고, 실시예 및 비교예 모두 시간 경과에 따라 자연적으로 pH 밸런스가 유지됨을 확인하였다. 다만 실시예 1 또는 2의 조성물로 이루어진 에센스 성분을 도포 할 경우 피부 항상성 유지 효과가 보다 빠르게 발휘되는 것으로 나타났다.

제조예 1. 실시예를 함유하는 크림 제조

하기 표 7과 같이 크림 제형의 화장료 조성물을 제조하였다(단위: 중량%).

원료명	개선율(%)
실시예 1 또는 실시예 2	5
스테아린산 에탄올	10
수산화칼륨	0.7
글리세린	5
프로필렌글리콜	3
방부제	적량
향	적량
정제수	to 100

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물을 포함하는 천연 추출물; 및
햄프씨드 오일을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 있어서,
상기 천연 추출물은 바나나잎 추출물, 과라나 추출물 및 흑미강 발효 추출물을 0.1~0.5 : 0.5~1.5 : 0.1~0.5의 비율로 혼합된 것이고,
상기 흑미강 발효 추출물은 노루궁뎅이버섯 균사체 및 상황버섯 균사체의 종균배양액을 1 : 9 내지 4 : 6의 비율로 혼합한 버섯 균사체를 접종하여 수득한 것이며,
상기 햄프씨드 오일은 천연 추출물 대비 0.1 내지 0.8 중량부로 포함하는 것인, 주름 개선용 화장료 조성물.
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삭제
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항산화 또는 피부 항상성 유지 용도를 추가로 포함하고,
상기 피부 항상성 유지는 피부의 pH를 4.0 내지 6.5의 범위로 유지시키는 것인, 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 천연 추출물의 추출 용매는 물, 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합 용매로 추출된 것인, 주름 개선용 화장료 조성물.