KR101352238B1 - 단순포진바이러스 감염 치료를 위한 비특이적 지연형 과민증 반응 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 단순포진 바이러스(HSV) 감염 치료방법으로서, (a) HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 그 손상 부위에 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위해서, HSV 손상 부위에서 환자에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법을 제공한다.
단순포진 바이러스(HSV), 지연형 과민증(DTH), 면역반응 증강제,

Description

단순포진바이러스 감염 치료를 위한 비특이적 지연형 과민증 반응{NON-SPECIFIC DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY RESPONSE TO TREAT HERPES SIMPLEX VIRUS INFECTON}
단순포진바이러스(HSV)는 투명액으로 가득 차있는 수포형태로 나타나는 통증을 수반한 피부 또는 점막 병변을 일으키는 원인이다. HSV 1형(HSV-1)은 주로 입, 얼굴 및 눈을 감염시킨다. HSV 2형(HSV-2)은 주로 생식기 및 엉덩이를 감염시킨다. 그러나 1형 및 2형 혈청형 각각은 모든 부위에서 감염을 일으킬 수 있다(문헌[Stalkup JR et al., Chapter 80, Human Herpesviruses in Dermatology, Bolognia JL et al. eds. 2003, Mosby Edingurgh, United Kindom]).
HSV에 의한 1차 감염은 일반적으로 감염 부위에 약한 발열 병변을 발생시킨다. 치료기간은 평균적으로 8일 내지 12일이며, 이 기간에 바이러스가 신경절로 이동하여 이곳에서 잠복상태로 지내게 된다. 잠복상태의 바이러스는 육체적 또는 감정적 스트레스, 추위, 열, 면역기능 저하 또는 분명치 않은 원인 등을 포함한 여러가지 원인에 의해 다시 활성화될 수 있다. 활성화되면 이로 인해 2차 감염 발생을 유발한다. HSV 1형(HSV-1)의 경우, 주로 입술의 점막과 피부의 경계 연에 단순 포진을 유발한다. HSV 2형(HSV-1)의 경우, 2차적 감염 발생은 대부분 외음부, 질 또는 음경을 포함한 생식기 또는 그 주위의 병변을 유발한다.
일반적으로 처음에는 가려움증, 통증, 작열감이 있으며 몇 시간 동안 피부나 점막에 국소적 홍반이 나타난다. 그런 후에 그 피부나 점막에 수포가 생긴다. 며칠이 지나면 궤양이 건조되고 표면에 딱지가 생겨서, 일반적으로 약 10일 정도면 회복된다.
감염 발생은 많은 경우에 국소적 통증과 일반화된 미열을 유발한다.
HSV-2는 일반적으로 성적 접촉에 의해 전파된다. HSV-1은 바이러스를 보유하고 있는 타액과의 접촉에 의해 전파되는 것으로 추정된다. 이러한 하나 또는 두 혈청형의 HSV에 의한 감염은 매우 흔한 것이다. 일부 연구에서는 세계 인구의 90%가 HSV-1에 대한 항체를 보유하고 있다고 추산하고 있다. 미국의 경우 4천만 내지 6천만 명의 사람이 HSV-2에 감염되어 있다(문헌[Stalkup JR et al., Supra]).
현재 HSV 감염에 대한 치료법이 없다. 항바이러스 요법은 바이러스 유출 및 2차적 병변의 증상을 다소 감소시킬 수 있다. 항바이러스 치료로서 면역기능 저하 환자의 만성 감염을 치료할 수 있다. 항바이러스제는 또한 예방학적으로 사용될 수 있다. 그러나 항바이러스제가 감염에 대한 치료가 아니며, 따라서 예방학적 면에서의 치료는 환자의 평생 동안 필요할 수도 있다(문헌[Chakrabaty A et al. 2005, Skin Therapy Lett. 10(1): 1 ~ 4]). 예방학적 면에서의 항바이러스 치료를 시행한다 하더라도, 일반적으로, 자주는 아니지만 감염이 발생할 것이다. 통상적으로 사용되는 HSV에 대한 항바이러스제로는 아시클로버 및 그 유도체, 예들 들면, 발라시클로버 및 팜시클로버 등이 있다. 이러한 항바이러스제는 주로 경구 투여되지만, 정맥주사로 투여될 수도 있고 국소적 크림 형태로 사용될 수도 있다. 도코사 놀 크림(Docosanol cream; ABREVA 제품)도 또한 병변의 지속기간을 다소 감소시키는 것으로 알려져 있다(문헌[Sacks SL et al. 2001, J Am Acad Dermatol. 45(2): 220 ~ 30]).
HSV 감염 치료를 위한 신규한 물질 및 치료방법이 필요하다.
본 발명은 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에 국소적으로 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하는 물질을 투여하는 단계를 포함한다. 이 물질은 고농도의 바이러스를 포함하고 있는 HSV 환부로 T 세포가 무리를 지어 이동하게 한다. 이는 단순포진 바이러스를 인식하는 면역 시스템을 이끌어서, 바이러스에 대한 면역반응을 강화시키는 것으로, 하나 이상의 병변 치료 이후의 후속성 HSV 병변(예를 들면, 입가 발진 또는 생식기 포진)의 심한 정도 및 빈도를 감소시켜 준다. DTH 반응을 유도하는 물질로서 사용될 수 있는 화합물 또는 혼합물로는 스쿠아르산 디부틸 에스테르(SADBE), 디페닐시클로프로페논(DPCP), 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB), 덩굴옻나무 잎의 추출물 등이 있다. 또한 환자가 그에 대해 면역성을 가지고 있는 유행성 이하선염 항원이나 다른 항원과 같은 DTH 반응을 유도하는 단백질 항원도 병변의 부위에서 피부나 점막 내로 주사할 수 있다. 본 발명은 단순포진 바이러스 1형에 의해 유발되는 입가 발진에 대해 테스트한다. 본 발명은 또한 단순포진 바이러스 2형에 의해 유발되는 음부 포진에 대해 실행된다.
본 발명의 일 실시예는 단순포진바이러스(HSV) 감염을 치료하는 방법으로서, HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안, HSV 환부에서 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위하여, 환자의 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시예는 HSV 감염 환자의 후속 HSV 병변의 심한 정도 및 빈도를 감소시키는데 효과적인 약제를 제조하기 위해서 인간 지연형 과민증 반응을 유도할 수 있는 물질의 의약적 용도로 사용하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시예는 단순포진바이러스(HSV) 감염을 치료하는 방법으로서, HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위하여, 환자의 HSV 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 여기서 "병변(outbreak)"이라는 용어는 HSV 감염으로 인해 생기는 작열감, 쑤심, 통증 또는 외상적 질환의 일시적 증상을 의미한다. 병변은 환자가 감염의 증후가 전혀 없는 휴면기간에 의해 구분된다.
제 4형 과민증 반응이라고도 알려져 있는 지연형 과민증(DTH) 반응은 일반적으로 이뮤노겐(immunogen)과 접촉 24시간 내지 48시간 후에 최고의 강도에 도달하는 면역반응이다. 이는 이뮤노겐과의 접촉 부위에 가시적 홍반을 형성시킨다. DTH 반응은 기본적으로 T 세포 반응이다(문헌[Goldsby, Richard A et al. 2000, Kuby Immunology, 4th edition, WH Freedom and Co., New York, 제 16 장]). 이 반응은 항원이 민감 TDTH 세포를 활성화할 때 일어난다. TDTH 세포가 활성화되면 몇몇 시토킨 이 분비됨으로써, 대식세포를 그 부위로 유도하고 활성화시킨다.
T 세포와 세포매개성 면역은 바이러스성 감염에 대항하여 싸우는 역할을 하는 면역 시스템의 기본 병기이다. 세포매개성 면역은 HSV와 같은 세포내 병원체가 잠복하고 있는 세포를 인식하고 이를 제거하는 역할을 한다. 이론에 의해 한정되는 것을 원하지는 않지만, 본 발명자는 본 발명에서 기술하는 DTH 반응이 T 세포가 HSV 병변 부위로 무리를 지어 이동하게 만드는 원인이라고 생각한다. 병변이 진행되는 동안 그 부위에는 다량의 HSV 바이러스 입자 및 HSV 단백질이 존재하기 때문에, T 세포는 HSV 및 HSV가 잠복하고 있는 세포를 더 잘 인식할 수 있으므로, 바이러스 자체 및 바이러스 감염 세포를 더 잘 제거할 수 있도록 HSV에 대해 보다 강력한 면역 반응을 가지게 되며, 따라서 병변을 예방하고 병변의 심한 정도를 경감시킬 수 있다. 이 과정이 "에피토프 언베일링(epitope unveiling) 과정이며, 이 과정에 의해서 면역 시스템에 의해 인식이 잘 안 되는 에피토프가 보다 인식이 잘 된다.
앞서 기술한 바와 같이, 인유두종 바이러스에 의해 발생되는 사마귀는 DNCB와 같은 접촉 감광제(contact sensitizer)를 국소적으로 적용하여 사마귀 부위에 DTH 반응을 유도하거나, 유행성 이하선염 항원, 칸디다 항원, 또는 백선균 항원 등과 같이 환자에 DTH 반응을 유도하는 인유두종 바이러스와 관련없는 단백질 항원을 병소내로 주입함으로써 치료될 수 있다. (미국 특허 제6,350,451호; 미국 공개 특허 출원 제20050175634호; 문헌[Johansson,E.et al.1984, Dinitrochlorobenzene (DNCB) treatment of viral warts, Acta Derm.Verereol(Stockh) 64: 529 ~ 533]; 문헌[Dunnigan,W.G.et al.,1982, Dinitrochlorobenzene immunotherapy for verrucae resistant to standard treatment modlities, J. Am. Acad. Dermatol. 6: 40 ~ 45]). 본 발명은 유사한 메카니즘에 의해 실행될 것이다.
DTH 반응을 유도하기 위해 사용되는 본 발명의 이뮤노겐으로 환자가 이미 경험해서 면역 인식이 형성된 단백질 항원을 사용할 수 있다. 이는 결핵균 항원과 같은 알레르겐이나 항원에 대한 피부 테스트의 원리이다. 또한 이뮤노겐으로 국소용 감광제, 예를 들면 우루시올을 사용할 수 있는데, 이 오일은 덩굴옻나무, 포이즌 오크, 및 다른 자극성 식물 속에 있는 활성 자극 성분이다. 국소용 감광제로는 통상적으로 합텐을 사용한다. 합텐은 단독으로는 면역 반응을 유도하지 않는 작은 분자이지만, 단백질이나 다른 고분자에 부착되면 특이적으로 합텐 결정소를 인식하는 항체 및 면역 반응을 유도할 수 있다. 국소용 감광제는 일반적으로 피부 속의 단백질과 반응하여 면역성 부가물을 형성하는 합텐이다.
따라서, 일부 실시예에 있어서, DTH 반응을 유도하는 물질은 국소용 접촉 감광제, 즉 사람에게 국소적으로 적용하였을 때 DTH 반응을 유도하는 물질이다.
또한, 다른 일부 실시예에 있어서, HSV 손상 부위에서 환자에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 적용함으로써 손상 부위에 DTH 반응을 유도하는 방법을 포함한다.
국소적 적용을 위한 접촉 감광제는 일반적으로 예들 들어 아세톤이나 디메틸설폭사이드 유기 용매 중의 용액 형태로 국소적으로 적용된다. 물에 용해되는 경우 수용액 형태로 적용된다. 또한 크림, 연고, 로션, 오일 등의 형태로 적용될 수도 있다.
DTH 반응을 유도하는 물질이 국소적으로 적용되는(국소용 접촉 감광제인 경우) 특정 실시예에 있어서, 이 물질은 스쿠아르산 디부틸 에스테르(SADBE), 디페닐시클로프로페논(DPCP), 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB), 또는 1-클로로-2,6-디니트로벤젠이다. 일부 실시예에 있어서, 이 물질은 스쿠아르산 또는 그 에스테르이다.
스쿠아르산의 구조식은 아래와 같다.
Figure 112009067673046-pct00001
이러한 접촉 감광제는 몇몇 회사, 예를 들면 가디나(Gardena), 캘리포니아(California) 및 뉴브룬스윅(New Brunswick)에 있는 스펙트럼 화학 제조 회사(Spectrum Chemical manufaturing Corp)의 과(division)인 Spectrum Chemicals & Laboratory Products로부터 구입할 수 있다.
다른 실시예에 따르면, DTH 반응을 유도하는 물질은 우루시놀 또는 자극성 식물의 추출물이다.
또 다른 실시예에 따르면, DTH 반응을 유도하는 물질은 단백질 항원이다. 단백질 항원으로는 물론 HSV 항원을 사용할 수 있으나 일반적으로는 사용하지 않는 다. DTH 반응을 유도하는 어떠한 항원도 사용될 수 있다. 환자는 선재성 민감성을 보유할 수도 있다. 이러한 면에서, 유행성 이하선염 항원, 칸디다 항원 및 백선균 항원이 바람직한 세가지 항원이다. 왜냐하면 많은 사람들이 이 세가지 항원 중 하나 이상의 항원에 선재성 민감성을 보유하고 있기 때문이다. 또한 환자가 그에 대해 선재성 민감성을 보유하지 않는 외래(비자기) 항원이 사용될 수도 있다. 이 경우, HSV 감염발생 부위에서 DTH 반응을 유도하기 위해서 환자의 HSV 병변의 부위에 항원을 국소적으로 투여하기 전에, 환자에 항원을 투여함으로써(즉, 항원으로 환자를 면역화함으로써) 환자가 항원에 대해 민감성을 형성해야 한다.
일부 실시예에 있어서, 본 방법은 HSV 병변 부위에서 DTH 반응을 유도하기 위해서 환자의 HSV 병변 부위에 DTH 반응을 유도하는 물질을 병소내로(예를 들면, 피내주사) 주입하는 단계를 포함한다.
DTH 반응을 유도하는 물질을 병소내 주입하는 특정 실시예에 따르면, 이 물질에는 유행성 이하선염 항원, 칸디다 항원 또는 백선균 항원이 포함된다.
항원의 사용량은 상기 항원들을 이용한 피부 테스트에 사용되는 양과 대략 동일하다. 이 양은 DTH 반응을 조정하는 마일드를 유도하는 정도의 양이어야 한다.
특정 실시예에 있어서, 본 방법은 병변의 부위에 DTH 반응을 유도하기 전에, DTH 반응을 유도하는 물질을 환자에 투여함으로써 환자의 상기 물질에 대한 감광을 형성하는 단계를 또한 포함한다. 이러한 사전감광(presensitization) 단계는 항원을 병소내 주입하거나 유도물질을 국소적으로 적용함으로써 수행될 수 있다. 사전감광 단계에서, 유도물질을 병변의 부위에 투여할 수도 있다. 이는 HSV 및 HSV 감 염 세포의 인식을 자극시키는데 도움을 줄 수 있다. 혹은 사전감광 단계에서, 유도물질을 어느 곳에서나 투여할 수 있다. 예를 들어, 환자가 병변을 겪고 있을 때나 그렇지 않을 때, 국소용 접촉 감광제를 아래팔에 투여할 수도 있고, 주입가능한 항원을 진피내 주사에 의해 아래팔에 투여할 수도 있다.
특정 실시예에 있어서, 본 방법은 HSV 병변 부위에서 DTH 반응을 유도하는 단계 전에, HSV 병변 부위에서 DTH 반응을 유도하기 위해 투여되는 물질의 사용량을 결정하기 위해 적어도 1회 투여량으로 DTH 반응을 유도하는 물질을 환자에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
각각 HSV -1 및 HSV -2 병변이 발생하는 가장 일반적인 부위인 입술 및 생식기는 두 군데 다 매우 민감한 부위이다. 또한 입술은 매우 눈에 뜨이는 부위이다. 이러한 부위에서 DTH 반응이 격렬한 경우 고통스럽고 눈에 거슬리기 때문에, 이 부위에선 격렬한 DTH 반응을 유도하지 않는 것이 바람직하다. 따라서, 환자는 HSV 병변 부위에 유도물질을 적용하기 전에, 적정 수준의 DTH 반응을 유도하는 양을 찾아내기 위해서 아래팔과 같이 덜 민감하고 덜 눈에 뜨이는 부위에서 유도물질의 1회 이상의 투여량을 테스트하기를 원할 수 있다. 본 방법은 HSV 병변 부위에서의 DTH 반응이 매우 약한 경우에도 수행될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 따라서 격렬한 반응을 유도하는 것이 반드시 필요한 것은 아니다. 그러나 본 방법은 DTH 반응이 강할 때 후속 병변을 예방하도록 HSV에 대한 지속적 면역성을 유도하는데 보다 효과적이다.
DNCB의 경우, 적당한 감광량은 아세톤, 디메틸설폭사이드(DMSO) 또는 다른 용매 중의 2% DNCB 용액이며, 적당한 치료 사용량은 예를 들면, 0.05 ~ 2.0% DNCB이다. SADBE의 적당한 감광량은 2% 용액이며, 적당한 치료 사용량은 예를 들면, 0.05 ~ 2.0% 용액이다. 일부 환자의 경우는 상기 양보다 더 적거나 많은 양으로 사용될 수 있다.
일 실시예의 국소용 접촉 감광제 용액은 피부 또는 점막 상에 상기 용액을 적신 면봉으로 원하는 적용 부위를 두드림으로써, 다른 부위까지 확대해서 반복적으로 문지르거나 바르지 않고 적용될 수 있다. 감광 및 치료 둘 다에 사용시, 국소용 접촉 감광제는 피부 상에 적어도 몇 시간 방치한 후에 씻어내는 것이 바람직하다.
또 다른 실시예에 있어서, 접촉 감광제 용액은 마이크로피펫, 주사기 또는 미량주사기와 같은 고정형 기기를 이용하여 투여될 수 있다. 이 기기에 의하면 제한된 양으로 투여하는 것이 가능하므로, 접촉 감광제를 제한량만큼 투여할 수 있다. 이는 DTH 반응의 강도를 보다 예측가능한 수준으로 형성하는데 도움이 된다. 치료를 필요로 하지 않는 부위로 퍼지거나 흐르지 않고 손상 부위와 같은 치료대상의 제한적 부위에 용액을 투여할 수 있는 통상적인 용량은 2 ~ 40 마이크로리터이다.
본 방법의 특정 실시예의 경우, 단순포진 바이러스는 HSV 1형이다. 또 다른 실시예의 경우, 단순포진 바이러스는 HSV 2형이다.
특정 실시예에서, 본 방법은 환자의 입술 또는 그 주변의 HSV 손상 부위에 DTH 반응을 유도하는 물질을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 특정 실시예에서, 본 방법은 환자의 생식기의 HSV 병변 부위에 DTH 반응을 유도하는 물질을 투여하는 단계를 포함한다.
특정 실시예에서, 본 방법은 HSV 병변 부위에서 피부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 적용하는 단계를 포함한다. 또 다른 특정 실시예에서, HSV 병변 부위에서 점막에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 적용하는 단계를 포함한다.
본 방법은 미래의 병변의 심한 정도 또는 미래의 병변의 빈도 또는 이 두가지 모두를 감소시킬 수 있다. 본 방법은 DTH 반응이 HSV 환부에서 일어나는 동안 병변의 심한 정도를 감소시키기 위한 것은 아니다. 사실상, 본 방법은 특정 병변을 악화시킬 수 있다. DTH 반응은 염증을 수반하며, 미열을 유발할 수 있다. 염증 및 발열은 스스로 HSV 병변에 대한 트리거이며, 따라서 DTH 반응은 HSV를 자극함으로써 현상태의 병변을 악화시킬 수 있다. 그러나 일단 병변이 가라앉거나 제어 상태로 되면, 후속 병변은 빈도 및/또는 심한 정도가 훨씬 덜 한 것으로 밝혀졌다.
일 실시예에 있어서, DTH 반응이 유도되는 동안 DTH 반응이 HSV 병변을 악화시키는 경향을 막기 위해서, 본 방법은 DTH 반응이 유도되는 병변의 진행과정 동안 아시클로버 또는 발라시클로버와 같은 항바이러스 약제로 환자를 치료하는 단계를 포함할 수 있다.
추가적인 병변이 발생하는 경우, HSV에 대한 면역 반응을 보다 더 강화시키기 위해서, HSV 환부에서 DTH 반응을 유도하는 단계를 한 번 이상 반복할 수 있다. 사전 치료에 의해 면역 반응을 완전하게 형성시키기 위해, 적어도 2주 이상 간격을 두고 치료를 하는 것이 바람직하다.
많은 환자는 후속 병변(즉, 치료 후의 병변, DTH 반응을 유도하기 위한 유도물질이 투여되지 않은 경우의 병변)의 빈도 또는 심한 정도를 감소시키도록 면역성을 갖기 위해 1회 이상의 치료를 필요로 할 수 있다. 바람직하게 완전하게 형성된 면역은 후속 병변을 방지한다. 따라서, DTH 반응을 유도하는 물질을 하나의 병변의 환부에 투여한다. 병변이 가라앉고 나서 후속성 재발 병변이 발생하는 경우, 유도물질을 환부에 다시 투여할 수 있다. 1회 내지 3회 또는 그 이상의 병변이 진행되는 동안 유도물질을 투여한 후에는, 환자에게 어느 정도 기간 동안 병변이 발생되지 않을 수 있다. 그러나 결국 면역성이 떨어지게 되고, 감염발생이 재발할 수 있다. 그 다음에, 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 DTH 반응을 유도하는 물질을 다시 적용함으로써 다시 면역성을 형성하게 하여 병변을 방지할 필요성이 있다.
따라서, 일 실시예에서, 본 방법은 (a) 하나의 HSV 감염으로 인한 하나의 병변이 진행되는 동안(예를 들면, 6개월에 걸쳐 하나의 병변이 진행되는 동안) HSV 환부에서 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위하여, 환자의 HSV 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 적용하는 단계를 포함한다. 일 실시예에서, 본 방법은 HSV 감염으로 인한 하나의 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위하여, 환자의 HSV 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 적용하는 단계를 포함하며, 이때 본 방법은 하나의 병변 이전 또는 이후 3개월 내에 다른 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 DTH 반응을 유도하기 위하여, 환자의 HSV 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 투여하는 단계를 포함하지 않 는다.
청구범위 제 1 항의 방법은 (a) HSV 감염으로 인한 둘 이상의 병변이 진행되는 동안(예를 들면, 6개월 내에 둘 이상의 병변이 진행되는 동안) HSV 환부에서 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도하기 위해서, 환자의 HSV 환부에 DTH 반응을 유도하는 물질을 국소적으로 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 실시예는 단순포진 바이러스(HSV) 병변의 빈도 및 심한 정도를 감소시키는데 효과적인 약제를 제조하는데 사용되는, 인간 지연형 과민증 반응을 유도할 수 있는 물질의 의약적 용도에 관한 것이다.
특정 실시예에서, 상기 유도물질은 국소 투여시 인간 지연형 과민증 반응을 유도할 수 있는 국소용 접촉 감광제이다.
다른 실시예에서, 상기 유도물질은 진피내 주입시 인간 지연형 과민증 반응을 유도할 수 있는 항원이다.
본 발명의 방법은 후속 병변의 지속기간 및 심한 정도를 감소시켜 주고, 또한 감염 전파를 경감시킨다. 이는 HSV -1형 감염 및 HSV -2형 감염, 그리고 음부 포진 및 구순 포진에 적용된다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 방법은 HSV -1형 감염의 확산을 감소시킨다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 방법은 HSV -2형 감염의 확산을 감소시킨다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 방법은 구순 포진 감염의 확산을 감소시킨다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 방법은 음부 포진 감염의 확산을 감소시킨다.
특정 실시예에서, 본 방법은 후속 병변의 빈도를 적어도 50% 감소시킨다(즉, 치료후 다음 병변까지의 시간을 적어도 100%까지 증가시킨다). 본 발명의 다른 실시예에서, 본 방법은 후속 병변의 빈도를 적어도 75% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 실시예에서, 본 방법은 후속 병변의 빈도를 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 본 발명의 일 실시예에서, 본 방법은 병변 사이의 시간을 증가시킨다. 특정 실시예에서, 본 발명은 병변 사이의 시간을 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 또는 적어도 5배 증가시킨다(예를 들면, 이전의 병변 사이의 평균 시간과 비교시, 치료에 의해 병변이 다 소멸된 시점에서부터 그 다음 후속 병변까지의 시간을 증가시킨다).
특정 실시예에서, 본 발명의 방법은 후속 병변의 지속기간을 단축시킨다. 특정 실시예에서, 본 방법은 후속 병변의 환부를 치료하는 시간을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 또는 적어도 40% 단축시킨다.
본 발명의 방법은 세포매개 면역을 자극하는 것으로 추측된다. 세포매개 면역은 이후 실시예 2에 기술된 바와 같이, 말초혈액 단핵세포 증식 분석에 의해 분석될 수 있다. 특정 실시예에서, 본 방법은 HSV 입자에 의한 자극에 대한 증식 분석에서 말초혈액 단핵세포의 자극 지수(stimulation index)를 증가시킨다(실시예 2에 기재됨). 특정 실시예에서, 본 방법은 자극 지수를 치료전 30 이하에서 치료후 30 이상, 50 이상, 또는 60 이상으로 증가시킨다. 다른 실시예에서, 본 방법은 자극 지수를 치료전 50 이하에서 치료후 50 이상, 또는 60 이상으로 증가시킨다. 다른 실시예에서, 본 방법은 자극 지수를 적어도 10, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40 또는 적어도 50으로 증가시킨다. 또 다른 실시예에서, 본 방법은 자극 지수를 2 배, 3배, 또는 4배 증가시킨다.
DTH 반응을 이용하여 HSV에 대한 면역 생성을 향상시키기 위해서 DTH 반응을 유도하는 물질과 함께 면역반응 증강제가 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 증강제의 한 종류는 사이토카인이다. 사용될 수 있는 사이토카인으로는 인터페론(예를 들면, 인터페론 알파), 과립구 단핵구 콜로니 자극인자(GM-CSF), 인터루킨-2, 및 인터루킨-12 등이 있다. 이들 각각은 세포매개 반응이나 항바이러스 면역반응을 촉진하는 것으로 알려져 있다(문헌[Kiline MO et al. 2006, J. Immunol. 177: 6962 ~ 73; Arora A.et al.2006, J. Surg . Oncol. 94: 403 ~ 412]; Horn 등의 미국 공개 특허 출원 제20050175634호).
미국 공개 특허 출원 제20050175634호에는 사마귀에서 DTH 반응을 유도하기 위해 비관련 항원을 병소내 주입하는 것에 관해 보고되어 있다. 상기 출원에는 항원만을 병소내 주입한 환자군과, 인터페론 알파 또는 GM-CSF를 함께 병소내 주입한 환자군에 대한 연구에 관해 보고되어 있다. 치료받은 환자수가 통계학적 유의도 면에서 충분한 수준은 아니었지만, 항원과 함께 인터페론 알파 또는 GM-CSF를 주입한 환자들 중 다수가 항원만 주입한 환자들 보다 치료에 좋은 반응을 나타내었다.
사이토카인의 적당한 사용량은 당해 분야에 알려져 있으며, 최선의 결과를 도출하기 위한 사용량의 범위를 확인하기 위해서 실험에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 인터페론 알파의 적당한 사용량은 국소 투여용으로서 약 1 백만IU이다.
사이토카인의 투여는 병변 부위에 진피내 주입을 통해 수행될 수 있다. 또한 연고, 크림 또는 로션 등과 같이 국소적 적용을 통해 수행될 수 있다(문헌[Syed TA et al. 1995.J. Mol . Medicine 73: 141 ~ 144]).
또 다른 실시예에서, 면역반응 증강제는 사이토카인의 생성을 자극하는 의약제이다. 일 실시예에서, 면역반응 증강제는 사이토카인의 생성을 자극하는 합성(즉, 자연산 분자가 아님) 의약제이다. 이러한 의약제의 특정 예로는 이미퀴모드 및 레시퀴모드가 있다(문헌[Spruance SL et al. 2001, J. Infect . Dis. 184: 196 ~ 200; Bernstein DI et al. 2005, Clinical Infectious Disease 41; 808 ~ 814]).
면역반응 증강제는 어떠한 적당한 시점에도 투여될 수 있으며, DTH 반응 과정 동안 효과를 발휘하게 될 것이다. DTH 반응을 일으키는 물질이 투여될 때 동시에 투여될 수도 있고, 그 이전에 또는 그 이후에 투여될 수도 있다. 그러나 DTH 반응 이전에 또는 과정 동안 투여되어야 한다.
이제 본 발명은 다음의 실시예를 통해 상세히 기술될 것이다. 본 실시예는 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
실시예 1
빈번하고 심한 입가 발진을 겪고 있는 환자의 치료
치료 대상 환자는 본 발명자 중 한 사람이다. 그는 남성이며 치료 당시 42세였다. 이 환자는 아래 입술에 빈번한 입가 발진으로 고통을 겪고 있었다. 일반적으로 병변은 7일 내지 10일 지속되었고, 종종 더 오래 지속되었다. 이 환자는 샹활의 대부분 빈번한 입가 발진으로 고통을 겪어 왔다. 본 치료를 받기 전 6개월 동안, 감염 발생이 거의 계속되었다. 한 병변이 소멸되면, 일주일 이내에 다음 병변이 시작되곤 하였다.
아세톤 중의 2% DNCB 용액에 면봉을 적셔서 환자의 아래팔의 두 지점에 이 면봉을 접촉시킴으로써 환자가 DNCB에 대해 사전감광이 형성되게 하였다. 발진 증상은 전혀 일어나지 않았다. 2주 후에, 감광량을 적용한 지점이 아닌 다른 두 지점의 환자 아래팔에 2% DNCB 용액을 다시 적용하였다. 매우 강한, 그러나 국소적인 발진이 발생하였고 3주간 지속되었다. 그 다음, 환자의 아래팔의 몇군데 작은 지점에 따로따로 0.1%, 0.2%, 및 0.3% 용액을 적용하였다. 0.1% 용액은 전혀 홍반을 발생시키지 않았다. 0.2% 용액은 이 용액 적용 후 2일에 약하지만 쉽게 눈에 보이는 홍반을 발생시켰으며, 약 3일간 지속되었다. 이 결과를 기초로 해서, 0.2% 용액은 후속성 입가 발진에 적용하기 위한 적량으로서 선택되었다.
환자의 아래 입술에 입가 발진을 생기게 한 후속 HSV 병변에 대해서, 환자의 아래 입술의 입가 발진 부위에 아세톤 중의 2% DNCB 용액을 적용하고, 밤새 그대로 두었다. 다음날 아침에 씻어냈다. 입가 발진 부분에 약한 홍반이 2 ~ 3일에 걸쳐 나타났으며, 그 후 5일 동안 지속되다가 약 7일에 입가 발진이 소멸하였다. 이 기간은 이 환자의 전형적인 지속기간이거나 통상적인 경우보다 약간 짧은 기간이었다. 상기 치료 후에, 이 환자는 아래 입술에 입가 발진이 생기는 병변을 다음 4주간 대략 매주 경험하였으나, 이전에 비해 심한 정도가 훨씬 덜하고 지속기간도 훨씬 짧았다. 각 병변은 시작하고 나서 하루 내에 완전히 소멸하였다. 환자의 입술에 DNCB를 처음 적용한 지 약 2개월 후에, 이 환자는 약한 입가 발진이 생겼고, 병변이 시작되자마자, 아래 입술의 HSV 환부에 아세톤 중의 2% DNCB 용액을 적용하였다. 이때, 적용로 인한 염증과 홍반이 2개월 전 환자의 아래 입술의 환부에 처음 DNCB 용액을 적용했을 때 보다 더 심하였다. 본 발명자는 그 이유가 두 번째 적용로 인해 면역 시스템이 단지 DNCB 뿐만 아니라 단순포진 항원도 인식하고 있기 때문이라고 추측하였다. 염증이 더 심해지고, 입가 발진 병변은 첫 번째와 두 번째 DNCB 치료 사이에 생긴 어떠한 병변들보다도 악화되었다. 이러한 병변들은 매우 약하였지만, 본 HSV 병변은 약 7일 동안 지속되었고, DNCB 치료가 행해지기 이전의 전형적인 감염발생과 심한 정도가 같거나, 이보다 약간 더 심하기까지 하였다. 병변은 DTH 반응과 관련이 있는 염증이 악화됨에 따라 악화되는 것으로 보이다가, DTH 반응이 가라앉았을 때에야 약화되었다.
병변 부위에 두 번째 DNCB 치료를 행한 후에, 환자는 6개월 동안 전혀 감염 발생이 일어나지 않았다. 이 기간은 환자가 입가 발진 없이 생활한 가장 긴 기간이라고 보고한다. 이 6개월 기간 후에, 환자는 약한 입가 발진이 생겼고, 이 입가 발진에 0.1% DNCB 용액을 적용하였다. 다시, 적당한 DTH 반응을 유도하였으며, 염증이 감염발생을 악화시킴으로써, 약 10일간 병변이 지속되었다. 병변이 가라앉고 나서, 환자는 현재까지 6개월 동안 아무런 병변없이 지냈다.
처음 DNCB 치료전 수개월 기간과 처음 DNCB 치료후 본 명세서에서 기술한 전체 기간 동안, 환자는 항바이러스 약물을 전혀 복용하지 않았다.
실시예 2
스쿠아르산 디부틸 에스테르에 의한 구순 포진 치료
다음과 같은 채택 기준을 만족시키는 30명의 환자를 모집하였다.
포함 기준 배제 기준
18 ~ 85세
남성 및 비임신/비수유 여성
 임신 중이거나 임신을 하려고 시도중
프로토콜의 모든 요구사항을 이해하고 그에 부합할 수 있어야 함
 정기적 진찰을 위한 방문을 할 수 없거나
프로토콜에 부합할 수 없는 경우
매년 6회 이상의 자연 재발성 구순포진
 이전에 스쿠아르산에 의한 치료를 받거나 현재 치료중
암 치료 및 어떠한 면역결핍증세
스크리닝 인터뷰에서, 생체 징후를 기록하고, 환자가 현재 복용하고 있는 약물, 입가 발진에 대한 이전 및 현재 치료, 입가 발진의 심한 정도 및 지속기간에 관한 정보를 수집한다.
방문 1: 연구 시작시, DMSO 중의 2% 스쿠아르산 디부틸 에스테르(SADBE) 용액에 면봉을 적셔서 이것을 환자의 아래팔의 1cm2 부위에 발라줌으로써 환자가 SADBE에 대해 사전감광이 형성되도록 한다. 참가자들로 하여금 처음 치료를 위해 적어도 2주 동안 기다리도록 한다.
연구 기간 동안, 참가자에게 환자 일지를 보유하도록 부탁한다. 환자 일지에는 열, 부풀어오름, 통증, 발적, 가려움증, 작열감, 손상 크기 및 복용한 약 등을 포함해서 그들이 경험하는 모든 증상을 매일 기록하게 한다.
방문 2: SADBE에 대한 감광이 형성되도록 한 지 2주 후에, 그 다음 병변(첫 병변의 징후가 있은지 72시간 이내에)이 생기기 시작하면, 각 참가자는 DMSO 중의 0.5% SADBE 용액을 구순 포진 부위에 면봉으로 발라준다.
방문 3: 방문 2에서 사전 치료한 지 적어도 2주 후에 별개의 후속 병변에 관 해 연구 일지를 수집한다. 일지에 사전 SADBE 치료에 의해 임상적 병변부위에 걸쳐 0.5cm 이상의 발적, 물집 또는 작열감이 나타나 있으면, SADBE의 사용량을 0.1%로 낮춘다. 일지에 SADBE 치료로 인한 염증 또는 발적이 없는 것으로 나타나 있으면, SADBE의 사용량을 2%로 증가시킨다. 발적 또는 염증이 있는 경우, 사용량을 0.5%로 유지한다. 참가자는 구순 포진 부위에 SADBE 용액을 면봉으로 발라준다.
SADBE에 의해 발생되는 과민증 반응이 과다한 경우, 환자는 국소형 스테로이드 소염 크림으로 치료한다. 환자가 요청할 경우, 병변이 소멸될 때까지 경구용 발라시클로버로 병변을 치료한다.
방문 2 이후 적어도 6개월 동안, 환자는 그들의 일지를 지속한다. 매 2개월마다, 일지를 수집한다.
방문 1에서, SADBE를 적용하기 전에, 포진 바이러스에 대한 면역 반응을 테스트하기 위한 말초혈액 단핵세포(PBMC) 증식 분석에 사용하기 위해, 각 환자로부터 핼액 샘플을 수거한다.
환자가 방문 2 후에 재발성 병변을 경험하지 않는 경우에는 방문 2(HSV 병변 부위를 SADBE로 적용하여 처음 치료)의 2개월 후에, 혹은 방문 3(두번째 병변의 환부를 SADBE로 적용하여 치료)의 1개월 후에, 환자로부터 혈액 샘플을 수집한다. 사전치료된 첫 번째 혈액 샘플과 이후 치료된 두 번째 혈액 샘플을 사용하여, 치료전과 치료후 포진 바이러스에 대한 면역 반응을 테스트하기 위해 PBMC 증식 분석을 행하였다.
PBMC 증식 분석
앞서 기술한 시점에서 치료 전과 치료 후 단핵세포 분리를 위해 헤파린처리한 시험관 속에 정맥혈을 수집한다. 이 샘플을 처리를 위해 즉시 실험실로 이동시킨다.
정맥혈(15 ml)을 50 ml 원심분리관으로 옮기고, 식염수 또는 PBS로 총 부피가 30ml 되도록 희석시킨 다음, Fico/Lite-LymphoHTM (Atlanta Biologicals 제품)에 놓이게 한 후에, Eppendorf Model 5804R 원심분리기에서 2100rpm으로 20분간 원심분리한다. 인터페이스 세포를 수집하고 식염수/PBS로 2배 희석시킨 다음, 원심분리하고 식염수/PBS 내에서 재현탁한다. Beckman Coulter Z1 입자 계수기를 사용하여 세포 계산을 수행하고, 세포를 냉동 매개물(RPMI/20% 인간 AB 혈청) 내에서 재현탁한 다음, -70℃에서 저장한다. 증식 분석을 위해 각 환자로부터의 치료전 및 치료후 말초혈액 단핵세포를 저장한다.
베로 세포(VERO cell) 배양액 속에서 KOS HSV -1 바이러스(American Type Culture Collection)을 배양한다. 3ml 주사기가 부착된 45㎛ 필터를 통해 바이러스를 여과한 후, 무균의 세포동결 용기 속에 넣는다. 바이러스 스톡의 역가를 측정한다. 그런 다음, 바이러스를 열 비활성화시킨 후에, 이를 증식 분석에서 PMBC를 자극하는데 사용하기 위해 -20℃에서 저장한다.
말초혈액 단핵세포를 해동시키고, 식염수/PBS로 2회 세척한 다음, RPMI/20% 인간 AB 혈청 내에서 5 ×105 세포/ml의 수준으로 재현탁한다. 200㎕/웰(well)의 양으로 세포를 평판 배양한다. 실험 웰에 열 비활성화된 KOS HSV -1 바이러스 입자 (웰 당 2 ×105 pfu)를 가한다. 다른 웰에 양성 대조용(positive control)로서 콘카나발린 A(5 ㎍/ml)를 가한다. 음성 대조용의 경우 웰에 아무것도 가하지 않는다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 5일간 배양한 다음, Cell Countig Kit 8, 테트라졸리움 염료 분석(Dojindo Molecula Technologies, Gaithersburg, Maryland)을 이용하여 증식에 대해 분석한다.
결과는 각 군의 웰의 광학 밀도를 평균을 내어 계산한다. 양성 대조군 및 음성 대조군과 비교했을 때 사멸된 HSV에 의해 자극받은 웰 속의 증식을 반영하기 위해 자극 지수를 계산한다. 양성 대조군의 평균 광학 흡광도는 자극 지수(SI)값 100으로, 음성 대조군의 평균 광학 흡광도는 자극 지수 값 0으로 설정한다.
결과
SADBE에 의한 감광, 그 다음 후속성 두 병변의 환부에 대한 2회 치료 후에, 환자는 치료 이전에 비해 병변이 덜한 것을 경험하며, 환자가 경험하는 병변의 지속 기간도 짧다.
사멸된 HSV에 의한 자극을 이용한 증식 분석에서 환자의 PBMC의 자극 지수는 치료전과 비교할 때 치료후 증가된다.
본 명세서에서 인용된 모든 특허문헌, 특허 출원서 및 다른 공보물은 참고로 포함된다.

Claims (30)

  1. 인간 지연형 과민증(DTH) 반응을 유도할 수 있는 물질을 포함하는, 단순포진 바이러스(HSV) 감염 치료를 위한 약학 조성물로서,
    상기 물질은 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB) 및 스쿠아르산 디부틸에스테르(SADBE)로 구성된 군으로부터 선택되는 물질인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 물질이 HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 DTH 반응을 유도하기 위하여 HSV 환부에 국소적으로 투여되는 경우, 상기 물질은 후속 병변의 심한 정도를 감소시키는데 효과적인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 물질이 HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 DTH 반응을 유도하기 위하여 HSV 환부에 국소적으로 투여되는 경우, 상기 물질은 병변 사이의 시간을 증가시키는데 효과적인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제 1 항에 있어서,
    상기 단순포진 바이러스는 HSV 1형인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  11. 제 1 항에 있어서,
    상기 단순포진 바이러스는 HSV 2형인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  12. 제 1 항에 있어서,
    상기 물질이 HSV 감염으로 인한 하나 이상의 병변이 진행되는 동안 HSV 환부에서 DTH 반응을 유도하기 위하여 HSV 환부에 국소적으로 투여되는 경우, 상기 물질은 치료전 환자의 말초혈액 단핵세포(PBMC)의 자극 지수와 비교할 때, 사멸된 HSV 입자에 의한 증식 자극을 이용한 증식 테스트에서 환자의 PBMC의 자극 지수를 적어도 2배 증가시키는데 효과적인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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