KR101245559B1

KR101245559B1 - 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR101245559B1
Application number: KR1020120070944A
Authority: KR
Inventors: 김형래; 이정옥; 류재욱; 하재두; 조성윤; 정희정; 한선영; 이종국
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2012-06-29
Filing date: 2012-06-29
Publication date: 2013-03-22
Also published as: KR20120100845A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르면 이상 세포 성장질환의 치료에 유용한 다양한 단백질 키나아제, 예를 들면 c-Met, Ron, KDR, Lck, Flt1, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf, Aurora-A 등에 대하여 우수한 억제효과를 나타내므로, 이상 세포 성장 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
[화학식 1]

(상기 화학식 1에서, R¹~R⁴는 본 명세서에서 정의된 바와 같다.)

Description

신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물{Novel pyridine derivatives substituted with multiple substituted benzoxazole or pharmaceutically acceptable salt thereof, preparation method thereof and pharmaceutical composition for the prevention and treatment of abnormal cell growth diseases containing the same as an active ingredient}

본 발명은 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

단백질 키나아제(PK)는 단백질의 티로신, 세린 및 트레오닌 잔사 상의 히드록시 그룹의 인산화를 촉매하는 효소이다. 상기 단백질 키나아제는 세포 성장, 분화 및 증식을 야기하는 성장 인자 신호 전달에 중요한 역할을 하고, 따라서 단백질 키나아제의 활성은 세포 생명의 거의 모든 양태에 영향을 미친다.

단백질 키나아제의 돌연변이나 과발현에 의한 세포신호전달체계의 이상은 건선과 같이 비교적 생명에 위협적이지 않은 질환에서부터 암과 같은 독성(병원성) 질환에 걸친 기질(stroma) 질환에 밀접한 영향을 미친다.

단백질 키나아제는 티로신 키나아제(TK) 및 세린-트레오닌 키나아제(STK)로 분류할 수 있다.

티로신 키나아제의 활성의 주요 양태들 중의 하나는 이것이 성장 인자 수용체와 관련이 있다는 것이다. 성장 인자 수용체는 세포 표면 단백질로서, 성장 인자 리간드에 결합된 경우에는 성장 인자 수용체가 활성 형태로 전환되어 세포막의 내부 표면상의 단백질과 상호 작용하여, 상기 수용체와 기타 단백질의 티로신 잔사 상에서 인산화가 유발되고, 세포 내부에 각종 세포질성 시그널링 분자와의 복합체가 형성되어 궁극적으로는 수많은 세포 반응, 예를 들면, 세포 성장, 분화 및 증식, 세포외 미소환경에 대한 대사성 효과 발현 등이 나타난다(Schleessinger and Ullrich, Neuron. 1992 9, 303-391).

티로신 키나아제의 활성을 지닌 성장 인자 수용체는 수용체 티로신 키나아제(Receptor tyrosine kinase, RTK)로서 알려져 있다. 상기 수용체 티로신 키나아제는 다양한 생물학적 활성을 나타내는 큰 계열의 막관통(transmembrane)수용체를 포함한다.

종래에 19개 이상의 "HER RTK"로 명명되는 것과 같은 아계열의 수용체 티로신 키나아제가 알려져 있고, 상기 HER RTK에는 상피 성장 인자 수용체(EGFR), HER2, HER3, HER4 등이 포함된다. 상기 수용체 티로신 키나아제는 세포외 글리코실화리간드 결제조 도메인, 막관통 도메인 및 단백질 상의 티로신 잔사를 인산화시킬 수 있는 세포내 세포질성 도메인으로 이루어진다.

또한, 수용체 티로신 키나아제 아계열은 인슐린 수용체(IR), 인슐린 유사 성장 I 수용체(IGF-1R) 및 인슐린 수용체 관련 수용체(IRR)로 이루어진다. IR 및 IGF-IR은 인슐린, IGF-I 및IGF-II와 상호 작용하여, 세포막을 가로지르고 키나아제 도메인을 함유하는 2개의 β소단위체와 2개의 완전하게 세포외 글리코실화된 α소단위체의 이종사량체(heterotetramer)를 형성한다.

또한, 수용체 티로신 키나아제 아계열은 혈소판 유도된 성장 인자 수용체(PDGFR)로서 명명되는 PDGFRα, PDGFRβ, CSFIR, c-Kit 및 c-Fms을 포함한다. 상기 수용체는 가변수의 면역글로블린 유사 루프와 세포내 도메인으로 구성된 글리코실화 세포외 도메인으로 이루어진다. PDGFR 아계열과의 유사성으로 인해 상기 PDGFR 그룹에 포함되는 태아 간 키나아제(Flk) 수용체 아계열이 알려져 있다. 상기 Flk 아계열은 키나아제 삽입물 도메인-수용체 태아 간 키나아제-1(KDR/Flk-1), Flk-1R, Flk-1, Fms-유사 티로신 키나아제 1 또는 3(Flt-1 또는 Flt-3) 등으로 이루어진다.

티로신 키나아제 성장 인자 수용체 계열로서 MET은 c-Met으로서 명명되고 사람 간세포 성장 인자 수용체 티로신 키나아제(hHGFR)로서 1차적 종양 성장 및 전이에 일정 역할을 하는 것으로 여겨지고 있다(Plowman et al.,DN&P, 1994, 7, 6, 334-339).

수용체 티로신 키나아제 이외에도, 비수용체 티로신 키나아제 또는 세포성 티로신 키나아제(CTK)로 불리우는 특정 계열의 완전한 세포내 TK가 존재한다. 상기 비수용체 티로신 키나아제는 세포외 도메인과 막관통 도메인을 함유하지 않고, Src, Frk, Btk, Csk Abl, Zap70, Fes, Fak, Jak 및 Ack 아계열로 이루어진다. 이중 Src 아계열은 Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr, AUR1(Aurora-B), AUR2(Aurora-A), AUR3(Aurora-C), Yrk 등을 포함한다(Bolen, Oncogene. 1993, 8, 2025-2031).

수용체 티로신 키나아제 및 비수용체 티로신 키나아제와 관련된 병원성 질환은 건선, 간경변, 당뇨병, 혈관형성, 재발 협착증, 안과질환, 류마티스성 관절염, 자가면역 질환, 죽상경화증, 신장 장애 등이 포함된다.

상기에서 살펴본 PK 중에서 Bcr-Abl, EGFR, VEGFR 등의 수용체 티로신 키나아제는 좋은 항암제 타겟으로 많이 연구되어 왔으며, 글리벡^®, 이레사^® 등의 항암제가 개발되어 시판되고 있다.

또한, 항암제 타겟으로 연구되고 있는 RTK 중에서도 간세포 성장인자(Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor, HGF/SF) 수용체인 c-Met (Hepatocyte Growth Factor Receptor: HGFR)을 타겟으로 하는 항암제가 많이 개발되고 있다(J. G. Christensen, J. Burrows et al., Cancer Letters, 2005, 225, 1-26; WO 2004/076412; WO 2006/021881 A; WO 2006/021886; WO 2007/064797).

c-Met은 종양 형성, 증대된 세포 운동성 및 침입성 하에서의 종양 진행, 및 전이에 수반되는 폐암, 위암, 피부암, 신장암, 직장암, 췌장암 등의 많은 인간 암에서 과발현 또는 활성화되어 있다(J. G. Christensen et al., Cancer Letters, 2005, 225, 1-26; W. G. Jiang et al., Critical Reviews in Oncology/Hematology, 2005, 53, 35-69). c-Met 및 이의 리간드인 HGF는 많은 조직에서 발현되지만, 정상적으로는 주로 상피 및 간엽 기원의 세포 각각으로 한정되어 발현된다. c-Met 및 HGF/SF는 정상적인 포유동물의 발육에 필요하며, 세포 전이, 세포 증식 및 생존, 형태 형성성 분화 및 3-차원적 관상 구조물(신 세뇨관 세포, 선 형성 등)의 조직화에서 중요한 것으로 밝혀졌다. HGF/SF는 신생혈관생성 인자이며, 상피 세포에서의 c-Met 신호전달은 신생혈관생성에 필수적인 세포 반응(증식, 운동성, 침입성 등)을 유도한다.

또한 c-Met 및 이의 리간드인 HGF는 다양한 인간 암에서 증가된 수준으로 공-발현되는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 수용체 및 리간드는 통상적으로 상이한 세포 유형에 의해 발현되기 때문에, c-Met 신호전달은 대부분 보편적으로 종양-기질 (tumor-stroma) 상호작용에 의해 조절된다.

또한, c-Met의 유전자 증폭, 돌연변이 및 재배열이 다양한 인간 암에서 관찰되었다. c-Met 키나아제를 활성화시키는 생식계 돌연변이를 갖는 부류는 다중 신장 종양 및 다른 조직의 종양에 걸리기 쉽다.

c-Met 및/또는 HGF/SF의 발현은 상이한 유형의 암(폐, 결장, 유방, 전립선, 간, 췌장, 뇌, 신장, 난소, 위, 피부, 뼈 등의 암)의 질환 진행 상태와 연관되어 있으며, c-Met 또는 HGF/SF의 과발현은 폐, 간, 위 및 유방을 포함한 많은 주요 인간 암에서 나쁜 예후 및 질환 결과와 상관되는 것으로 밝혀졌다. 또한, c-Met은 췌장암, 신경교종 및 간세포암과 같은 성공적인 치료법이 없는 암에 직접 관련되어 있다고 보고되었으며, c-Met이 과발현되면서 ERBB3 신호전달체계 활성화로 야기된 폐암이 게피티니브(Gefitinib; 이레사(상품명:Irresa))에 내성을 갖게 된다고 보고되었다 (J. A. Engelman, K. Zejnullahu et. al. Science, 2007, 316, 1039-1043).

HGF/SF는 c-Met의 세포외 도메인에 결합하여 c-Met을 활성화시키며, c-Met의 활성화는 각각 Gab1 및 Grb2 매개된 PI3-키나제 및 Ras/MAPK 활성화를 통한 티로신 포스포릴화 및 다운스트림 시그널화를 이끌어, 세포 운동성 및 증식을 유도한다.

c-Met은 수용체 활성화, 형질전환 및 침습을 이끄는 다른 단백질과 상호작용하는 것으로 밝혀졌고, 또한 c-Met은 초점부착(focal adhesion)을 형성하는 α6β4 인테그린(Integrin:라미닌과 같은 세포외 기질(ECM) 성분에 대한 수용체)과 상호작용하여 HGF/SF 의존적 침습적 성장을 촉진하는 것으로 보고되었다.

이에, 본 발명자들은 단백질 키나아제 억제제를 개발하기 위한 연구를 수행하 던 중, 단백질 키나아제에 대한 우수한 저해 활성을 갖는 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체가 이상 세포 성장의 치료에 유용한 c-Met, Ron, KDR, Lck, Flt1, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf, Aurora-A 등과 같은 단백질 키나아제에 대한 억제효과를 나타내므로, 이상 세포 성장 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 단백질 키나아제에 대한 우수한 저해 활성을 나타내는바, 이상 세포 성장질환의 치료에 유용한 다양한 단백질 키나아제, 예를들면 c-Met, Ron, KDR, Lck, Flt1, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf, Aurora-A 등에 대하여 우수한 억제효과를 나타내므로, 이상 세포 성장 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

(상기 화학식 1에서,

R¹은 수소; C₁~C₃ 직쇄 또는 측쇄 알킬; 니트로; 아미노; 또는 -NHCONHR⁵이고, 이때, R⁵는 C₁~C₃ 직쇄 또는 측쇄 알킬; 또는 C₆~C₁₂ 아릴이고,

R² 및 R³은 각각 수소; 히드록시; C₁~C₄의 할로알킬; C₁~C₄의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C₆~C₁₂ 아릴; C₅~C₁₂ 헤테로아릴; -NHR⁶; -NHCONHR⁶; -CONHR⁶; -NHCONHSO₂R⁶; -OR⁷; -NHC(O)R⁷; -NHSO₂R⁷; -OS(O)₂R⁷이고, 이때, 상기 R⁶는 C₁~C₄의 직쇄 또는 측쇄 알킬; 또는 C₆~C₁₂ 아릴이고, 상기 R⁷은 C₁~C₄의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C₆~C₁₂의 아릴; C₆~C₁₂의 헤테로아릴; 또는 벤질이고,

R⁴는 수소; 히드록시; -NHR⁸; -NH(CH₂)_nNR⁸; 또는 -NH(CH₂)_nNR⁹이고, 이때, R⁸은 수소; C₁~C₄의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C₃~C₈의 사이클로알킬; C₆~C₁₂의 아릴; 또는 C₅~C₁₂의 헤테로아릴이고, n은 1-5이고, R⁹은 C₃~C₈의 사이클로알킬 아민, C₅~C₁₂의 아릴 또는 C₅~C₁₂의 헤테로아릴이다.)

바람직하게 상기 R¹은 수소; 니트로; 아미노; 또는 -NHCONHR⁵이고, 이때, R⁵는 4-메톡시페닐이고,

상기 R² 및 R³은 각각 수소; 히드록시; 메틸; 페닐; 4-메톡시페닐; 이미다졸릴; 피리딜; 피라졸릴; -OR⁶; -NHR⁶; -NHCONHR⁶; NHC(O)R⁶; -NHCONHSO₂R⁶; -CONHR⁷; -NHSO₂R⁷; 또는 -OS(O)₂R⁷이고, 이때, 상기 R⁶는 메틸; 이소프로필; 페닐; 4-플루오로페닐; 4-트리플루오로페닐; 2,4-다이클로로페닐; p-톨릴; 4-메톡시페닐; 벤질; 6-인다졸릴; 피리딜; 2,5-피리미딜; 2,4-피리미딜; 5-클로로피리딜; 4-시아노피리딜; 또는 7-페닐피리다지닐이고, 상기 R⁷은 메틸; 이소프로필; 4-메톡시페닐; 4-플루오로페닐; 2,5-다이클로로페닐; C₆~C₁₂의 헤테로아릴; 또는 벤질이고,

상기 R⁴는 수소; 메틸; 히드록시; 할로겐; N-피롤리디닐; -OR⁸; -OSO₂R⁸; -NHR⁸; -NH(CH₂)_nNR⁸; 또는 -NH(CH₂)_nNR⁹이고, 이때 R⁸은 수소; 에틸; 이소프로필; 3-벤질옥시페닐; 3-티오페닐메틸; N,N-디메틸프로필; N-메틸-피페라지닐; 모폴리닐; 또는 4-메틸피페리디닐이고, n은 1-5이고, R⁹은 C₃~C₈의 사이클로알킬 아민; 페닐; 6-인다졸릴; 2-피리딜; 2,5-피리미디닐이다.

본 발명의 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체의 구체적인 화합물은 하기와 같다.

1) 3-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

2) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-아민;

3) N-2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-7-일)-N,N-다이메틸프로판-1,3-다이아민;

4) 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(7-(피롤리딘-1-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민;

5) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-4-일)-N-(싸이오펜-2-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민;

6) 3-(7-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈[d]옥사졸-2일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

7) 3-(7-모폴리노벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

8) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-N-(피페리딘-4-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민;

9) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-N-(3-(벤질옥시)페닐)벤즈[d]옥사졸-7-아민;

10) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)메탄설폰아마이드;

11) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)-3-(4-메톡시페닐)우레아;

12) 3-(6-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

13) 3-(6-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

14) 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(6-(피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민;

15) 3-(6-(1H-피라졸-5-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

16) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(4-플루오로페닐)우레아;

17) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(2,4-다이클로로페닐)우레아;

18) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-페닐우레아;

19) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일카바모일-4-메틸벤젠설폰아마이드;

20) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)메탄설폰아마이드;

21) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-메톡시벤젠설폰아마이드;

22) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-플루오로벤젠설폰아마이드;

23) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-2,5-다이클로로벤젠설폰아마이드;

24) 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)-3-(4,5,7-트리클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민;

25) 3-(5,7-다이클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민;

26) 3-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민;

27) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-7-올;

28) 3-(5-클로로-7-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민;

29) 3-(5-클로로-6-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민;

30) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일) 피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드;

31) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일) 피리딘-3-일)-6-히드록시-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드;

*32) 3-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

33) 3-(6-히드록시-5-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

34) 3-(5-히드록시-6-에틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

35) 3-(3,5-디메틸-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

36) 3-(6-히드록시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

37) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-7-(1H-인돌-6-일)벤즈[d]옥사졸-6-올;

38) 3-(7-(1H-인돌-6-일)-6-메톡시벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;

39) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-7-페닐벤즈[d]옥사졸-6-올; 및

40) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-7-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-6-올.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 약학적으로 허용가능한 염이란 표현은 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 화학식 1의 염기 화합물의 이로운 효능을 떨어뜨리지 않는 화학식 1의 염기 화합물의 어떠한 유기 또는 무기 부가염을 의미한다. 이들 염은 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 질산, 황산, 과염소산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 말레산, 푸마린산, 글루콘산, 메탄설폰산, 글리콘산, 숙신산, 타타르산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산, 아스파르트산, 옥살산, (D) 또는 (L) 말산, 말레산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 4-톨루엔술폰산, 살리실산, 시트르산, 벤조산 또는 말론산 등을 사용할 수 있다. 또한, 이들 염은 알칼리 금속염(나트륨염, 칼륨염 등) 및 알칼리 토금속염(칼슘염, 마그네슘염 등) 등을 포함한다. 예를들면, 산부가염으로는 아세테이트, 아스파테이트, 벤즈에이트, 베실레이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 보레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에실레이트, 포메이트, 퓨마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루큐로네이트, 헥사플루오로포스페이트, 하이벤제이트, 하이드로클로라이드/클로라이드, 하이드로브로마이드/브로마이드, 하이드로요오디드/요오디드, 이세티오네이트, 락테이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 메실레이트, 메틸설페이트, 나프틸레이트, 2-나프실레이트, 니코티네이트, 나이트레이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/수소 포스페이트/이수소 포스페이트, 사카레이트, 스테아레이트, 석시네이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트리플루오로아세테이트, 알루미늄, 알기닌, 벤자틴, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디올아민, 글라이신, 라이신, 마그네슘, 메글루민, 올아민, 칼륨, 나트륨, 트로메타민, 아연염 등이 포함될 수 있으며, 이들 중 하이드로클로라이드 또는 트리플루오로아세테이트가 바람직하다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체는 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 이성질체, 수화물, 용매화물을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

본 명세서에서 이성질체는 동일한 화학식 또는 분자식을 가지지만 광학적 또는 입체적으로 다른 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미하며, 상기 이성질체 및 이들의 혼합물 역시 본 발명의 범위에 포함된다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1의 화합물은 하기 반응식 1~9에 나타낸 바와 같은 방법으로 제조될 수 있다.

이하, 상기 제조방법을 반응식을 이용하여 설명한다.

제조방법 1

하기 반응식 1로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

출발물질인 화학식 2의 화합물을 치환반응시켜 화학식 4의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 제조된 화학식 4의 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5의 화합물을 제조하는 단계(단계 2);

상기 단계 2에서 제조된 화학식 5의 화합물과 아민화합물을 치환반응시켜 화학식 6의 화합물을 제조하는 단계(단계 3);

상기 단계 3에서 제조된 화학식 6의 화합물과 화학식 7의 화합물을 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 8의 화합물을 제조하는 단계(단계 4);

상기 단계 4에서 제조된 화학식 8의 화합물을 수소화반응시켜 화학식 9의 화합물을 제조하는 단계(단계 5);

상기 단계 5에서 제조된 화학식 9의 화합물을 화학식 10의 화합물과 부가반응시켜 화학식 11의 화합물을 제조하는 단계(단계 6); 및

상기 단계 6에서 제조된 화학식 11의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1a의 화합물을 제조하는 단계(단계 7)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 1

(상기 반응식 1에서, 화학식 1a는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 화학식 1에서 정의한 R⁵ 또는 R⁷이고, Et₃N는 트리에틸아민, PPTS는 파라톨루엔 피리디늄염, Pd(dppf)Cl₂는 1,1`-비스(디페닐포스피노)페로센다이클로로 팔라듐, Pd(Ph₃P)₂Cl₂는 비스트리페닐포스핀다이클로로팔라듐, NCO는 이소시아네이트, TFA는 트리플루오로아세트산, Boc는 t-부톡시카보닐이다.)

제조방법 2

하기 반응식 2로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 9의 화합물을 화학식 13으로 표시되는 아릴설포닐이소시아네이트와 부가반응시켜 화학식 14의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 제조된 화학식 14의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1c의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 2>

(상기 반응식 2에서, 화학식 1c는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 화학식 1에서 정의한 R⁵ 또는 R⁷이고, ArSO₂NCO는 아릴설포닐이소시아네이트이다.)

제조방법 3

하기 반응식 3으로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 9의 화합물을 화학식 15로 표시되는 아릴설포닐클로라이드 혹은 알킬설포닐 클로라이드와 부가반응시켜 화학식 16의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 제조된 화학식 16의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1d의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 3>

(상기 반응식 3에서, 화학식 1d는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar(또는 R)은 화학식 1에서 정의한 R⁵ 또는 R⁷이고, ArSO₂Cl는 아릴설포닐클로라이드이다.)

제조방법 4

하기 반응식 4로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 2의 화합물을 화학식 17의 화합물과 반응시켜 화학식 18의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 제조된 화학식 18의 화합물을 고리화반응시켜 화학식 19의 화합물을 제조하는 단계(단계 2);

상기 단계 2에서 제조된 화학식 19의 화합물과 아민화합물을 치환반응시켜 화학식 20의 화합물을 제조하는 단계(단계 3);

상기 단계 3에서 제조된 화학식 20의 화합물과 화학식 6의 화합물을 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 21의 화합물을 제조하는 단계(단계 4);

상기 단계 4에서 제조된 화학식 21의 화합물을 수산화칼륨과 스즈키 커플링 (Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 22의 화합물을 제조하는 단계(단계 5);

상기 단계 5에서 제조된 화학식 22의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1e의 화합물을 제조하는 단계(단계 6)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 4>

(상기 반응식 4에서, 화학식 1e는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, R¹은 화학식 1에서 정의한 바와 같다.)

제조방법 5

하기 반응식 5로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 22의 화합물을 화학식 23 화합물에 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 24의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

단계 1에서 제조된 화학식 24의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1f의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 5>

(상기 반응식 5에서, 화학식 1f는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 화학식 1에서 정의한 R⁷이고, ArBr은 브로모아렌, X-Phos는 디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필바이페닐, K₃PO₄는 삼인산포스페이트이다.)

제조방법 6

하기 반응식 6으로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 25의 화합물을 염화알킬과 반응시켜 화학식 26의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

단계 1에서 제조된 화학식 26의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1h의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 6>

(상기 반응식 6에서, 화학식 1h는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 화학식 1에서 정의한 R⁴ 중 비치환 또는 C₁~C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬이나 C₁~C₄ 알콕시로 치환된 C₆~C₁₂ 아릴; 또는 비치환 또는 C₁~C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬이나 C₁~C₄ 알콕시로 치환된 C₅~C₁₂ 헤테로아릴이고, R은 C₁~C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬이고, DMF는 N,N-디메틸포름아마이드이다.)

제조방법 7

하기 반응식 7로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 21의 화합물을 아릴보론산과 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 27의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

단계 1에서 제조된 화학식 27의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1i의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 7>

(상기 반응식 7에서, 화학식 1i는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 화학식 1에서 정의한 R⁴ 중 비치환 또는 C₁~C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬이나 C₁~C₄ 알콕시로 치환된 C₆~C₁₂ 아릴; 또는 비치환 또는 C₁~C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬이나 C₁~C₄ 알콕시로 치환된 C₅~C₁₂ 헤테로아릴이다.)

제조방법 8

하기 반응식 8로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 28의 화합물을 염화반응과 부가반응을 수행하여 화학식 29의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

단계 1에서 제조된 화학식 29의 화합물을 니트로화을 수행하여 화학식 30의 화합물을 제조하는 단계(단계 2);

상기 단계 2에서 제조된 화학식 30의 화합물을 수소화 반응을 수행하여 화학식 31의 화합물을 제조하는 단계(단계 3);

상기 단계 3에서 제조된 화학식 31의 화합물과 아민화합물을 치환반응시켜 화학식 32의 화합물을 제조하는 단계(단계 4);

상기 단계 4에서 제조된 화학식 32의 화합물을 고리화반응을 수행하여 화학식 33의 화합물을 제조하는 단계(단계 5);

상기 단계 5에서 제조된 화학식 33의 화합물을 아민의 부가반응을 수행하여 화학식 34의 화합물을 제조하는 단계(단계 6);

상기 단계 6에서 제조된 화학식 34의 화합물과 화학식 6의 화합물을 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 35의 화합물을 제조하는 단계(단계 7);

단계 7에서 제조된 화학식 35의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1j의 화합물을 제조하는 단계(단계 8)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 8>

(상기 반응식 8에서, 화학식 1j는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, R은 이소프로필이고, DEE는 다이에톡시에틸에테르이다.)

제조방법 9

하기 반응식 9로 표시되는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은

화학식 35의 화합물을 수산화칼륨과 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 36의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

단계 1에서 제조된 화학식 36의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1k의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 9>

(상기 반응식 9에서, 화학식 1k는 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, R은 이소프로필이다.)

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이때, 상기 이상세포 성장 질환은 폐암, 뼈암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 주위 암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 나팔관 암, 자궁내막 암, 자궁경부암, 질암, 외음부암, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신세포암, 신우암, 중추 신경계(CNS) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종 등이 바람직하다.

또한, 상기 이상세포 성장 질환은 건선, 양성 전립선 비대 또는 망막증인 것이 바람직하다.

나아가, 상기 이상세포 성장 질환은 양성 증식성 질환인 것이 바람직하며, 상기 양성 증식성 질환은 섬유선종, 경화성 선질환, 유두종 등이 바람직하다.

상기 화학식 1로 표시되는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 및 수화물은 c-Met, Ron, KDR, Lck, Flt1, Flt3, Tie2, TrkA, TrkB, b-Raf, Aurora-A 등의 단백질 키나아제를 억제할 수 있다.

상기 단백질 키나아제 중 c-Met은 항암제 타겟으로 연구되고 있는 간세포 성장인자(HGF/SF) 수용체로서, 이를 타겟으로 하는 항암제가 많이 보고되어 있다(J. G. Christensen, J. Burrows et al., Cancer Letters, 2005, 225, 1-26; WO 2004/076412; WO 2006/021881 A; WO 2006/021886; WO 2007/064797).

또한 c-Met 및 이의 리간드인 HGF는 다양한 인간 암에서 증가된 수준으로 공-발현되는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 수용체 및 리간드는 통상적으로 상이한 세포 유형에 의해 발현되기 때문에, c-Met 신호전달은 대부분 보편적으로 종양-기질(tumor-stroma) 상호작용에 의해 조절된다.

또한, c-Met은 유전자 증폭, 돌연변이 및 재배열이 다양한 인간 암에서 관찰되었다. c-Met 키나아제를 활성화시키는 생식계 돌연변이를 갖는 부류는 다중 신장 종양 및 다른 조직의 종양에 걸리기 쉽다.

c-Met 및/또는 HGF/SF의 발현은 상이한 유형의 암(폐, 결장, 유방, 전립선, 간, 췌장, 뇌, 신장, 난소, 위, 피부, 뼈 등의 암)의 질환 진행 상태와 연관되어 있으며, c-Met 또는 HGF/SF의 과발현은 폐, 간, 위 및 유방을 포함한 많은 주요 인간 암에서 나쁜 예후 및 질환 결과와 상관되는 것으로 밝혀졌다. 또한, c-Met은 췌장암, 신경교종 및 간세포암과 같은 성공적인 치료법이 없는 암에 직접 관련되어 있다고 보고되었으며, c-Met이 과발현되면서 ERBB3 신호전달체계 활성화로 야기된 폐암이 게피티니브(Gefitinib; 이레사(상품명:Irresa))에 내성을 갖게 된다고 보고되었다 (J. A. Engelman, K. Zejnullahu et. al. Science, 2007, 316, 1039-043).

본 발명에 따른 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 c-Met 키나아제 활성 실험에서 IC₅₀가 10 μM 이하의 c-Met 키나아제 저해 활성을 갖는 결과를 나타내었다.

따라서, 본 발명에 따른 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적인 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 c-Met의 발현으로부터 유도되는 상술한 각종 암을 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001~100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01~35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07~7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7~2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

하기 실시예에서, "Et"는 에틸을 의미하고, "Me"는 메틸을 의미하고, "t-Bu"는 t-부틸을 의미하고, "Boc"는 t-부톡시카보닐을 의미하고, "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 의미하고, "NEt₃" 또는 "Et₃N"은 트리에틸아민을 의미하고, "Et₂O"는 디에틸에테르를 의미하고, "MeOH"는 메탄올을 의미하고, "DMSO"는 디메틸설폭사이드를 의미하고, "CDCl₃"는 중수소화 클로로폼을 의미하고, "CH₂Cl₂"는 메틸렌클로라이드(이염화탄소)를 의미하고, "DMF"는 디메틸 폼아마이드를 의미하고, "SOCl₂"는 티오닐클로라이드를 의미하고, "MsCl"는 메탄설포닐클로라이드를 의미하고, "PPTS"는 파라톨루엔설폰산-피리딘 염을 의미하고, "TFA"는 트리플루오로아세트산을 의미하고, "X-Phos"는 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리아이소프로필바이페닐을 의미하고, "t-Butyl X-Phos"는 2-디-t-부틸포스피노-2',4',6'-트리아이소프로필바이페닐을 의미하고, "Pd(Ph₃P)₂Cl₂"는 비스트리페닐포스핀다이클로로팔라듐을 의미하고, "Pd₂(dba)₃"는 트리스(디벤질리딘아세톤)디팔라듐을 의미하고, "Pd(dppf)Cl₂"는 1,1'-비스(디페닐포스피노페로센)디클로팔라듐을 의미하고, "t-BuONa"는 나트륨t-부톡사이드를 의미하고, "Na₂CO₃"는 탄산나트륨를 의미하고, "K₂CO₃"는 탄산칼륨을 의미하고, "KI"는 요오드화칼륨을 의미하고, "MgSO₄"는 황산마그네슘을 의미하고, "KOH"는 수산화칼륨을 의미한다.

< 제조예 1> t-부틸-4-(4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-1H-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카복실레이트의 제조

문헌(WO 2006/021881)에 기재된 방법을 이용하여 제조하였다.

< 실시예 1> 3-(4- 니트로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: 5- 브로모 -2-옥소-1,2- 디하이드로피리딘 -3- 카복실산의 제조

2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산으로부터 문헌(A. D. Cale, Jr., T. W. Gero et. al. J. Med. Chem. 1989, 32, 2178-2199; 미국특허 등록번호 5,034,531)에 개시된 방법으로 목적화합물을 얻었다.

단계 2: 5- 브로모 -2- 클로로니코티노일 클로라이드의 제조

반응용기에 5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실산(20.0 g, 91.7 mmol), 티오닐클로라이드(SOCl₂, 91.7 mL)와 DMF(1.4 mL)를 차례로 넣은 후, 70-80 ℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물의 온도를 실온으로 낮추고 반응물을 감압농축하여 주황색 고체의 목적화합물(5-브로모-2-클로로니코티노일 클로라이드)을 얻었다(22.7 g 97%). 상기 화합물을 더 이상의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 3: 5- 브로모 -2- 클로로 -N-(6-니트로-2- 히드록시페닐 ) 니코틴아마이드의 제조

2-아미노-3-니트로페놀(3.3 g, 21.4 mmol))과 트리에틸아민(3.0 mL, 21.5 mmol)이 용해되어 있는 이염화탄소용액에 5-브로모-2-클로로니코티노일 클로라이드(5.0 g, 19.6 mmol)를 얼음중탕을 이용하여 0 ℃에서 천천히 넣었다. 반응물의 온도를 실온으로 높이고 질소분위기 하에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물에 넣고 30분 동안 교반한 후 유기층을 분리하고, 수층을 메틸렌클로라이드를 이용하여 추출하였다. 혼합한 유기층을 무수 황산마그네슘을 이용하여 건조시키고, 감압농축하였다. 상기 농축물에 에틸에테르를 넣고 30분 동안 교반한 후, 여과하여 갈색 고체의 목적화합물(5-브로모-2-클로로-N-(6-니트로-2-히드록시페닐)니코틴아마이드)을 얻었다(7.3 g, 99%). 상기 화합물은 더 이상의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 4: 2-(5- 브로모 -2- 클로로피리딘 -3-일)-4- 니트로벤즈[d]옥사졸의 제조

반응용기에 5-브로모-2-클로로-N-(6-니트로-2-히드록시페닐) 니코틴아마이드(7.3 g, 20.6 mmol), 파라톨루엔설폰산 피리딘염(10.7 g, 39.8 mmol) 및 크실렌(xylene, 150 mL)을 넣고, 150-170 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물의 온도를 약 80 ℃ 로 낮추고 반응 중 생성된 타르가 흘러나오지 않게 반응물을 여과하고, 뜨거운 크실렌으로 생성된 타르를 여러 번 씻고 여과하였다. 여액을 감압농축하고, 에틸에테르에 농축물을 넣고 30분 동안 교반하였다. 에틸에테르에 용해되지 않은 고체를 여과하고, 차가운 에틸아세테이트로 씻어 준 후 건조하여 노란색 고체의 목적화합물(2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-4-니트로벤즈[d]옥사졸)을 얻었다(6.9 g, 98%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.70 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.51 (m, 1H).

단계 5: 5- 브로모 -N-t-부틸-3-(4- 니트로벤즈[d]옥사졸 -2-일) 피리딘-2- 아민 의 제조

고압반응용기(sealed tube)에 2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-4-니트로벤즈[d]옥사졸(6.9 g), t-부틸아민(20.1 mL) 및 디메틸포름아마이드(60 mL)를 넣고 마개를 막아 밀봉하였다. 반응물을 50-70 ℃에서 18시간 동안 교반한 후 감압농축하였다. 고체 농축물에 에틸에테르를 넣고 40-50 ℃에서 30분 동안 교반한 후, 얼음 중탕을 이용하여 냉각시켰다. 생성된 고체를 여과하고 차가운 에틸에테르로 씻어주어 노란색 고체의 목적화합물(5-브로모-N-t-부틸-3-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민)을 얻었다(3.5 g, 46%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.75 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.35 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.25 (d , J = 2.4 Hz, 1H), 7.51 (m, 1H), 1.51 (s, 9H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₁₆H₁₅NBrN₄O₃(M⁺) 391.0, found 391.2.

단계 6: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(4- 니트로벤즈[d]옥사졸 -2-일)피 리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조

반응용기에 5-브로모-N-t-부틸-3-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일) 피리딘-2-아민(648 mg, 1.66 mmol), t-부틸-4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카복실레이트(939 mg), Pd(Ph₃P)₂Cl₂(58 mg) 및 1,4-다이옥산(4 mL)을 넣고 질소분위기 및 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물에 1 M 탄산나트륨 수용액(4.98 mL)을 넣고 2시간 동안 110 ℃에서 교반하였다. 실온으로 냉각한 후 반응물을 셀라이트를 이용하여 여과하고 여액을 농축하였다. 농축물에 물을 넣어 주고 메틸렌클로라이드로 여러 번 추출하였다. 혼합한 유층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압농축하였다. 농축물에 에틸에테르를 넣고 10분 동안 교반하고 여과하여 초록색 고체의 목적화합물(t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트)을 얻었다(445 mg, 54%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.94 (s, 1H), 7.78 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.57(s, 1H), 7.42 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 6.2, 1H), 4.22-4.31 (m, 3H), 2.83 (m, 2H), 1.91-2.01 (m, 2H), 1.76-1.87 (m, 2H), 1.38 (d, J= 2.8 Hz, 9H), 1.21 (s, 9H) ; GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₉H₃₅N₇O₅ (M⁺) 561.4, found 561.6.

단계 7: 3-(4- 니트로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 - 4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트(59 mg, 0.11 mmol) 및 트리플루오로아세트산(4 mL) 반응물을 60 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물의 온도를 실온으로 낮추고 감압농축하였다. 농축물에 에틸에테르를 넣고 30분 동안 교반한 후 여과하여 연두색 고체의 목적화합물(3-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염)을 얻었다(44 mg, 63%).

¹H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.96 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.45 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 7.12 (dd, J = 2.4, 1.2 Hz, 2H), 7.08 (dd, J = 4.2, 1.2 Hz, 1H), 4.41-4.50 (m, 1H), 3.47-3.51 (m, 2H), 3.12-3.17 (m, 2H), 2.12-2.28 (m, 4H) ; GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₀H₁₉N₇O₃(M⁺) 405.5, found 405.4.

< 실시예 2> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

실시예 1에서 사용한 t-부틸아민 대신 2,4-다이메톡시페닐메틸아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 1 내지 단계 7과 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-아민의 삼트리플루오로아세트산염)을 얻었다(38 mg, 89%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.68 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.42 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 8.1, 8.0 Hz, 1H), 4.30-4.36 (m, 1H), 3.25 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 1.96-2.07 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₀H₂₁N₇ (M⁺) 375.2, found 375.4.

< 실시예 3> N-2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-7-일)-N,N-다이메틸프로판-1,3-다이아민의 사트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 다이메틸프로판다이아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(N-2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-7-일)-N,N-다이메틸프로판-1,3-다이아민의 사트리플루오로아세트산염)을 얻었다(16 mg, 45%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.38 (dd, J = 12.6, 2.4 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.06 (t, J = 15.9, 7.9 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.20-4.26 (m, 1H), 4.10 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 3.28 (t, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H), 3.19 (s, 4H), 2.61-2.66 (m, 2H), 2.35 (s, 6H), 1.81-1.84 (m, 5H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₅H₃₂N₈O (M₊) 460.5, found 460.5.

< 실시예 4> 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)-3-(7-( 피롤리딘 -1-일) 벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 피롤리딘을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(7-(피롤리딘-1-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염)을 얻었다(37 mg, 73%).

¹H NMR (300MHz, CD₃OD) δ 8.64 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 4.51-4.61 (m, 1H), 3.55-3.64 (m, 2H), 3.20-3.26 (m, 6H), 2.28-2.39 (m, 4H), 2.01-2.08 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₄H₂₇N₇O (M⁺) 429.5, found 429.2.

< 실시예 5> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-4-일)-N-(싸이오펜-2-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 싸이오펜-2-일메탄아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-4-일)-N-(싸이오펜-2-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 삼트리플루오로아세트산염)을 얻었다(27 mg, 65%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.47 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.43 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.24- 7.31 (m, 2H), 6.20 (t, J = 4.2, 2.1 Hz, 1H), 5.4 (s, 2H), 4.45-4.48 (m, 1H), 3.44-3.47 (m, 2H), 3.20-3.43 (m, 3H), 2.21-2.28 (m, 3H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₅H₂₅N₇OS (M⁺) 471.5, found 471.5.

< 실시예 6> 3-(7-(4- 메틸피페라진 -1-일) 벤즈 [d] 옥사졸 -2일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 사트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 1-메틸피페라진을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(3-(7-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈[d]옥사졸-2일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 사트리플루오로아세트산염)을 얻었다(13 mg, 58%).

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8.96 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.48 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.76-5.77 (m, 1H), 4.71-4.75 (m, 2H), 4.5 (s, 3H), 4.36-4.39 (m, 2H), 3.48-3.57 (m, 6H), 3.30-3.35 (m, 6H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₅H₃₀N₈O (M⁺) 458.5, found 458.2.

< 실시예 7> 3-(7- 모폴리노벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 모폴린을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(3-(7-모폴리노벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염)을 얻었다(8 mg, 57%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 9.46 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.95 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.86 (dd, J = 3.2, 1.2 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.48 (dd, J = 6.8, 1.2 Hz, 1H), 5.76-5.77 (m, 1H), 4.71-4.76 (m, 4H), 4.33-4.39 (m, 2H), 3.47-3.59 (m, 6H), 3.30-3.35 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₄H₂₇N₇O₂ (M⁺) 445.5, found 445.2.

< 실시예 8> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-N-(피페리딘-4-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 사트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 피페리딘-4-일 메탄아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-N-(피페리딘-4-일메틸)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 사트리플루오로아세트산염)을 얻었다(23 mg, 76%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.25 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.99-4.03 (m, 6H), 3.00-3.05 (m, 4H), 2.88-2.91 (m, 2H), 2.39-2.50 (m, 2H), 1.58-1.75 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₆H₃₂N₈O (M⁺) 472.5, found 472.2.

< 실시예 9> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-N-(3-(벤질옥시)페닐)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

2,4-다이메톡시아민 대신 3-(벤질옥시)벤젠아민을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-N-(3-(벤질옥시)페닐)벤즈[d]옥사졸-7-아민의 삼트리플루오로아세트산염)을 얻었다(32 mg, 96%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.46 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.82 (s, 2H), 7.79 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 7.44-7.48 (m, 3H), 7.31-7.33 (m, 2H), 6.21 (t, J = 4.2, 2.0 Hz, 2H), 4.80 (s, 2H), 4.43-4.48 (m, 1H), 3.22-3.51 (m, 2H), 3.19-3.22 (m, 2H), 2.11-2.26 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₃₃H₃₁N₇O₂ (M⁺) 557.6, found 557.6.

< 실시예 10> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)메탄설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

t-부틸-4-(3-(5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.04 mmol)를 다이클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 피리딘(3.5 μL, 0.044 mmol)과 메탄설포닐클로라이드 클로라이드(9 mg, 0.044 mmol)를 가한 뒤 실온에서 교반시켰다. 반응이 종결되면 물을 가하고 추출한 뒤 MgSO₄로 건조하고 에테르로 세척하여 엷은 노란색 고체의 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-메탄설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 71 %)를 얻었다.

다음으로, 실시예 2에서의 방법과 동일한 방법으로 수행하여 고체의 목적화합물(N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)메탄설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산 염)을 얻었다(14 mg, 96%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.94 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 15.2, 7.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.18 (t, J = 4.2, 2.1 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.23-4.29 (m, 2H), 4.07-4.15 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 1.78-1.82 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₁H₂₃N₇O₃S (M⁺) 453.5, found 453.2.

< 실시예 11> 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)-3-(4-메톡시페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(4-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(25 mg, 0.05 mmol)를 테트라히드로퓨란(1 mL)에 녹이고, 0 ℃에서 4-플루오로페닐 이소시아네이트(6 μL, 0.056 mmol)을 적가한 뒤, 실온에서 교반시켰다. 반응이 종결되면 휘발성 물질을 제거한 뒤 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 엷은 노란색 고체의 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(4-(3-(4-메톡시오르벤질)유레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(22 mg, 66%)를 얻었다.

다음으로 실시예 2의 방법대로 수행하여 목적화합물(1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-4-일)-3-(4-메톡시페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산 염)을 얻었다(17 mg, 34%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.06 (s, 1H), 7.88 (s, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.57 (dd, J = 3.2, 1.3 Hz, 3H), 7.38 (dd, J = 7.4, 1.7 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 2.4, 1.2 Hz, 1H), 4.54-4.61 (m, 1H), 3.57-3.62 (m, 2H), 3.56 (s, 3H) 3.19-3.28 (m, 2H), 2.28-2.38 (m, 4H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₈H₂₈N₈O₃ (M⁺) 524.5, found 524.2.

< 실시예 12> 3-(6-(4- 메톡시페닐 ) 벤즈 [d] 옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(4- 메톡시페닐 ) 벤즈 [d] 옥사졸 - 2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

압력반응기에 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(50 mg, 0.09 mmol)을 1.4-다이옥산(1 mL)에 녹이고, Pd(pph₃)₂Cl₂(10 mg, 0.005 mmol), 4-메톡시페닐보론산(21 mg, 0.14 mmol)을 가하고, 실온에서 30분간 교반시킨 후, 1M Na₂CO₃(38 mg, 0.36 mmol)를 가하고, 110 ℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응이 종결되면, 상온으로 냉각한 후 감압농축하고, 여기에 에틸아세테이트와 물을 가하여, 생성물을 유기층으로 추출한 다음, Na₂SO₄를 이용하여 건조하고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(10 mg, 18%)를 얻었다.

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.74 (s, 1H), 8.44 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.79-7.72 (m, 3H), 7.66 (s, 1H), 7.6-7.56 (m, 3H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H) 4.36-4.28 (m, 3H), 3.87 (s, 3H), 2.92-2.88 (m, 2H), 2.22-2.17 (m, 2H), 2.03-1.95 (m, 2H), 1.63 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2: 3-(6-(4- 메톡시페닐 ) 벤즈 [d] 옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

압력반응기에 상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(54 mg, 0.089 mmol)를 넣고 트리플루오로아세트산(3 mL)을 가한 다음, 60 ℃에서 13시간 동안 교반시켰다. 반응이 종결되면 상온으로 냉각시키고 감압농축하였다. 여기에 에테르를 가하여 생성된 고체를 여과하여 3-(6-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염(20 mg, 32 %)을 얻었다.

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.94 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.75-7.66 (m, 3H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.65-4.62 (m, 1H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.3-3.2 (m, 2H), 2.39-2.3 (m, 4H); LC-MS m/z calcd for C₂₇H₂₆N₆O₂ (MH⁺) 465.7, found 466.98.

< 실시예 13> 3-(6- 페닐벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6- 페닐벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리 딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

4-메톡시페닐보론산 대신 페닐보론산을 사용한 것을 제외하고는 실시예 12의 단계 1과 동일한 방법으로 수행하여 노란색 고체의 목적화합물 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 얻었다(38 mg, 71%).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.80 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.8-7.77(m, 3H), 7.69-7.6 (m, 4H), 7.53-7.43 (m, 2H), 7.43-7.28 (m, 1H), 4.35-4.29 (m, 3H), 2.94 (m, 2H), 2.3-2.19 (m, 2H), 2.10-1.90 (m, 2H), 1.51 (s, 9H).

단계 2: 3-(6- 페닐벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4- 일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 출발물질로 사용하여, 실시예 12의 단계 2와 동일하게 수행하여 목적화합물 3-(6-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염을 얻었다(35 mg, 85 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.86 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.03-7.99 (m, 1H), 7.91 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.78-7.72 (m, 2H), 7.6-7.42 (m, 4H), 4.67-4.61 (m, 1H), 3.64-.47 (m, 2H), 3.26-3.23 (m, 2H), 2.39-2.32 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₆H₂₄N₆O (MH⁺) 436.2, found 437.02.

< 실시예 14> 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)-3-(6-(피리딘-3-일) 벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: 4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(피리딘-3-일) 벤즈 [d] 옥사졸 -2-일)피 리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

4-메톡시페닐보론산 대신 3-피리딜보론산을 사용한 것을 제외하고는 실시예 12의 단계 1과 동일한 방법으로 수행하여 노란색 고체의 목적화합물 4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 얻었다(5 mg, 9 %).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.92 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.64 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.83-7.39 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.58 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.57-7.39 (m, 1H), 4.36-4.27 (m, 3H), 2.96-2.88 (m, 2H), 2.21-2.04 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.63 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2: 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)-3-(6-(피리딘 -3-일) 벤즈 [d] 옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염의 제조

상기 4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 출발물질로 사용하여 실시예 12의 단계 2와 동일하게 수행하여 목적화합물 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-3-(6-(피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 삼트리플루오로아세트산염을 얻었다(4 mg, 61 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 9.06 (s, 1H), 8.77 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.75-8.7 (m, 1H), 8.5-8.45 (m, 2H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.00-7.98 (m, 2H), 7.86-7.83 (m, 3H), 4.65-4.61 (m, 1H), 3.6-3.54 (m, 2H), 3.26-3.22 (m, 2H), 2.4-2.37 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₅H₂₃N₇O (MH⁺) 436.2, found 437.9.

< 실시예 15> 3-(6-(1H- 피라졸 -5-일) 벤즈 [d] 옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

실시예 12의 방법대로 목적화합물 3-(6-(1H-피라졸-5-일)벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민이트리플루오로아세트산염을 얻었다(40 mg, 75 %).

¹H NMR (300MHz, CD₃OD) δ 8.88 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.93-7.84 (m, 2H), 7.74 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.65-4.59 (m, 1H), 3.62-3.58 (m, 2H), 3.26-3.20 (m, 2H), 2.41-2.30 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₃H₂₂N₈O (MH⁺) 451.3, found 452.2.

< 실시예 16> 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(4-플루오로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(3-(4- 플루오로벤질 ) 우레이 도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(25 mg, 0.05 mmol)를 테트라히드로퓨란(1 mL)에 녹이고, 0 ℃에서 4-플루오로페닐 이소시아네이트(6 ㎕, 0.056 mmol)를 적가한 뒤, 실온에서 교반시켰다. 반응이 종결되면 휘발성 물질을 제거한 뒤 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-(4-플루오로벤질)우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(22 mg, 연한 노란색 고체, 66%)를 얻었다.

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.64 (s, 1H), 8.43 (d, J = 2.4 Hz, H), 8.3 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.65-7.6 (m, 2H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.13-6.91 (m, 3H), 6.90 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.31-4.13 (m, 3H), 2.97-2.89 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.07-1.95 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H); LC/MS m/z calcd for C₃₆H₄₁FN₈O₄ (MH⁺) 667.76, found 668.76.

단계 2: 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일) 벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(4-플루오로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-(4-플루오로벤질)우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(22 mg, 0.033 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 12의 단계 2와 동일하게 수행하여 목적화합물 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(4-플루오로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염을 얻었다(22 mg, 90%).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.82 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.26 (s, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.22 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.09-7.03 (m, 2H), 4.83-4.82 (m, 1H), 3.62-3.57 (m, 2H), 3.29-3.37 (m, 2H), 2.37-2.33 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₇H₂₅FN₈O₂ (MH⁺) 512.05, found 513.05.

< 실시예 17> 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘 -3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(2,4-다이클로로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t- 부틸아미노 -4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(3-(2,4- 다이클로로페 닐)우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(25 mg, 0.05 mmol)를 이용하여 실시예 16의 단계 1의 방법과 동일하게 수행하여 목적화합물 t-부틸아미노-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-(2,4-다이클로로페닐)우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 얻었다(27 mg, 75%).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.67 (brs, 1H), 8.44 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.7-7.65 (m, 2H), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.3-7.2 (m, 1H), 7.06 (brs, 1H), 6.7 (brs, 1H), 4.35-4.23 (m, 3H), 2.96-2.89 (m, 2H), 2.20-2.17 (m, 2H), 2.05-1.92 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2: 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일) 벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(2,4-다이클로로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸아미노-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-(2,4- 다이클로로페닐)우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(27 mg, 0.038 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 16의 단계 2와 동일하게 수행하여 목적화합물 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(2,4-다이클로로페닐)우레아의 이트리플루오로아세트산염을 얻었다(3 mg, 10 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.69 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 2.25 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 1.89 Hz, 1H), 8.17-8.14 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 2.46 Hz, 1 H), 7.28 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 4.58-4.55 (m, 1H), 3.58-3.49 (m, 2H), 3.2-3.0 (m, 2H), 2.33-2.25 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₇H₂₄Cl₂N₈O₂ (MH⁺) 562.04, found 563.05.

< 실시예 18> 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-페닐우레아의 이트리플루오로아세트산의 제조

단계 1 : t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(3- 페닐우레이도 ) 벤즈 [d] 옥사 졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

*t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(25 mg, 0.05 mmol)를 이용하여 실시예 16의 단계 1의 방법과 동일하게 수행하여 목적화합물(t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸 아미노)-5-(6-(3-페닐우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트)를 얻었다(23 mg, 71%).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.64 (s, 1H), 8.43 (d, J = 2.46 Hz, 1H), 8.3 (d, J = 2.46 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.63 (dd, J = 11.6, 3.0 Hz, 3H), 7.4-7.38 (m, 3H), 7.19-7.09 (m, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.31-4.13 (m, 3H), 2.97-2.17 (m, 2H), 2.07-1.95 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H); LC/MS m/z calcd for C₃₆H₄₂N₈O₄ (MH⁺) 650.15, found 651.15.

단계 2 : 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3- 일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-페닐우레아의 이트리플루오로아세트산의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-페닐우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(23 mg, 0.04 mmol)를 사용하여 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 반응하여 목적화합물(1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-페닐우레아의 이트리플루오로아세트산)을 얻었다(21 mg, 83%).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.87 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.25 (s, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.37-7.29 (m, 2H), 7.22 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.07-7.05 (m, 1H), 4.67-4.6 (m, 1H), 3.62-3.53 (m, 2H), 3.24-3.2 (m, 2H), 2.36-2.29 (m, 4H).

< 실시예 19> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일카바모일-4-메틸벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(3- 토실우레이드 ) 벤즈 [d] 옥사 졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(3-(5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.04 mmol)를 THF(1 mL)에 녹이고 0 ℃에서 4-메틸벤젠설포닐 이소시아네이트(12 μL, 0.08 mmol)를 적가한 뒤 실온으로 올려 교반시켰다. 반응이 종결되면 휘발성 물질을 제거한 뒤 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-토실우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(37 mg)를 얻었다.

단계 2: N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일) 벤즈[d]옥사졸-6-일카바모일)-4-메틸벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(3-토실우레이도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(37 mg, 0.051 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일카바모일)-4-메틸벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(25 mg, 61 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.8 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.83-7.78 (m, 2H), 7.62 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 4.66-4.6(m, 1H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.27-3.09 (m, 2H), 2.45-2.31 (m, 7H).

< 실시예 20> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)메탄설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-( 메틸설폰아미도 ) 벤즈 [d] 옥사 졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(3-(5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.04 mmol)를 메틸렌클로라이드 1 mL에 녹이고 피리딘(3.5 μL, 0.044 mmol)과 메탄설포닐클로라이드(4 μL, 0.044 mmol)을 가한뒤 실온하에서 교반시켰다. 반응이 종결되면 물을 넣고 2~3회 추출한 뒤 MgSO₄로 건조하고 에테르로 씻어주어 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(메틸설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 82 %)를 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 300MHz) δ 8.6 (s, 1H), 8.45 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.3 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.69-7.61 (m, 3H), 7.14 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 4.33-4.27 (m, 3H), 3.04 (s, 3H), 2.93-2.88 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 1.99-1.95 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2 : N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3- 일)벤즈[d]옥사졸-6-일)메탄설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조도니 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(메틸설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.04 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)메탄설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(11.4 mg, 51 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300MHz) δ 8.77 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.81-7.75 (m, 2H), 7.29 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 4.67-4.61 (m, 1H), 3.59-3.54 (m, 2H), 3.34-3.22 (m, 2H), 3.03 (s, 3H), 2.44-2 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₁H₂₃N₇O₃S (MH⁺) 452.52, found 453.9.

< 실시예 21> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-메톡시벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 -5-(6-(4- 메톡시페닐설폰아미도 ) 벤 즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(3-(5-(6-아미노벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.04 mmol)를 다이클로로메탄 (1 mL)에 녹이고, 피리딘(3.5 μL, 0.044 mmol)과 4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드(9 mg, 0.044 mmol)를 가한 뒤 실온에서 교반시켰다. 반응이 종결되면 물을 가하고 추출한 뒤 MgSO₄로 건조하고 에테르로 씻어주어 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-메톡시페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 엷은 노란색 고체, 71 %)를 얻었다.

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.59 (s, 1H), 8.43 (d, J = 2.49 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.49 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.69-7.65 (m, 3H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H) 6.89-6.85(m, 2H), 6.78 (s, 1H), 4.36-4.27 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.97-2.88 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.04-1.92 (m, 2H), 1.59 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2 : N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3- 일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-메톡시벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4- 메톡시페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.028 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-메톡시벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(18 mg, 84 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.78 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.4 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.76-7.62 (m, 4H), 7.06 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 7(d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.67-3.54 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.64-3.56 (m, 2H), 3.26-3.23 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₇H₂₇N₇O₄S (MH⁺) 544.82, found 545.93.

< 실시예 22> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-플루오로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(4- 플루오로페닐설폰아미도 ) 벤 즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 대신 4-플루오로벤젠-1-설포닐 클로라이드(8.6 mg, 0.04 mmol)를 사용하는 것을 제외하고 실시예 21의 단계 1의 방법과 동일하게 수행하여 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-플루오로페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 목적화합물로 얻었다(20 mg, 72%).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.59 (s, 1H), 8.44 (d, J = 2.49Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.49 Hz, 1H), 7.77-7.73 (m, 3H), 7.65 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.95 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.37-4.27 (m, 3H), 2.97-2.89 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.0-1.94 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2 : N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3- 일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-플루오로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(4-플루오로페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(20 mg, 0.103 mmol)을 출발물질로 사용하여 실시예 21의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-플루오로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(6 mg, 8 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.76 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.4 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.88-7.83 (m, 2H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.27- 7.21 (m, 2H), 7.1 (dd, J=8.6, 2.0 Hz, 1H), 4.63-4.6 (m, 1H), 3.64-3.52 (m, 2H), 3.26-3.23 (m, 2H), 2.42-2.31 (m, 4H); LC/MS m/z calcd for C₂₆H₂₄FN₇O₃S (MH⁺) 532.82, found 533.9.

< 실시예 23> N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-2,5-다이클로로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-(2,5- 다이클로로페닐설폰아미 도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 대신 2,5-다이클로로벤젠-1-설포닐 클로라이드(11 mg, 0.04 mmol)를 가하는 것을 제외하고는 실시예 21의 단계 1의 방법과 동일하게 수행하여 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(2,5-다이클로로페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 목적화합물로 얻었다(5 mg, 17%).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.58 (s, 1H), 8.46 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.3 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.8 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.66-7.45 (m, 4H), 7.18 (s, 1H), 7.1-7.05 (m, 1H), 4.34-4.28 (m, 3H), 2.94-2.89 (m, 2H), 2.23-2.19 (m, 2H), 2.06-1.94 (m, 2H), 1.59 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2 : N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3- 일)벤즈옥사졸-6-일)-2,5-다이클로로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-(2,5-다이클로로페닐설폰아미도)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(5 mg, 0.02 mmol)를 출발물질로 사용하여 실시예 21의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-2,5-다이클로로벤젠설폰아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(1 mg, 6%).

LC/MS m/z calcd for C₂₆H₂₃Cl₂N₇O₃S (MH⁺) 584.48, found 586.97.

< 실시예 24> 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)-3-(4,5,7- 트리클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

2-아미노-3-니트로페놀 대신 2,3,6-트리클로로페놀을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)-3-(4,5,7-트리클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염(19 mg, 41 %)을 목적화합물로 얻었다.

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.57(s, 1H), 8.49(s, 1H), 8.18(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.73 (s, 1H), 4.62-4.6(m, 1H), 3.64-3.55(m, 2H), 3.27-3.08(m, 2H), 2.39-2.31(m, 4H): LC-MS m/z calcd for C₂₀H₁₇Cl₃N₆O (MH⁺) 463.75 found 464.86.

< 실시예 25> 3-(5,7- 다이클로로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

2-아미노-3-니트로페놀 대신 2,6-다이클로로페놀을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 3-(5,7-다이클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염(3 mg, 30 %)을 목적화합물로 얻었다.

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (d, J = 1.83 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 1.86 Hz, 1H), 4.53-4.48 (m, 1H), 3.52-3.4 (m, 2H), 3.2-3.1 (m, 2H), 2.28-2.19 (m, 4H): LC-MS m/z calcd for C₂₀H₁₈Cl₂N₆O (MH⁺) 428.09 found 428.92.

< 실시예 26> 3-(7- 클로로 -5- 플루오로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(7- 클로로 -5- 플루오로벤즈[d]옥사 졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

5-브로모-N-t-부틸-3-(4-니트로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민 대신 5-브로모-N-t-부틸-3-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민(190 mg, 0.48 mmol)을 사용하는 것을 제외하고 실시예 1의 단계 6의 방법과 동일하게 수행하여 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 목적화합물로 얻었다(64 mg, 23 %).

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.52 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.6 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 1H), 4.36-4.31(m, 3H), 2.96-2.87 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.6 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 2 : 3-(7- 클로로 -5- 플루오로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4- 일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1의 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 출발물질로 사용하여 실시예 1의 단계 7의 방법과 동일하게 수행하여 3-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산을 목적화합물로 얻었다(15 mg, 노란색 고체, 90 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.57 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 4.65-4.58 (m, 1H), 3.63-3.5 (m, 2H), 3.26-3.22 (m, 2H), 2.42-2.3 (m, 4H): LC-MS m/z calcd for C₂₀H₁₈ClFN₆O (MH⁺) 412.12 found 412.94.

< 실시예 27> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-7-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(3-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(5- 플루오로 -7- 히드록시벤즈[d]옥 사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-클로로-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(39 mg, 0.068 mmol)를 압력반응기에 가하고 수산화칼륨(12 mg, 0.2 mmol), t-butyl X-phos(4.6 mg, 0.01 mmol), Pd₂(dba)₃(2.5 mg, 0.003 mmol) 및 1,4-다이옥산:물(1:1, 2 mL)을 가하고, 100 ℃에서 13시간 동안 교반시켰다. 반응이 종결되면 냉각하고, 휘발성 물질을 제거한 다음, pH = 7로 중화시킨 뒤 MgSO₄로 건조하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-플루오로-7-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(12 mg, 32%)를 얻었다.

LC-MS m/z calcd for C₂₉H₃₅FN₆O₄ (MH⁺) 550.27 found 551.1.

단계 2: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -3-일)피리딘-3-일)-5- 플루오로벤즈[d]옥사졸-7-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

상기 단계 1에서 제조된 t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-플루오로-7-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 출발물질로 사용하여 실시예 1의 단계 7의 방법과 동일한 방법으로 수행하여 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)-5-플루오로벤즈[d]옥사졸-7-올의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(1.5 mg, 베이지색 고체, 64%).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 9.07 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.1 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 6.76 (dd, J=8.2, 2.3 Hz, 1H), 4.7-4.63 (m, 1H), 3.64-3.54 (m, 2H), 3.4-3.2 (m, 2H), 2.4-2.33 (m, 4H).

< 실시예 28> 3-(5- 클로로 -7- 플루오로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-클로로-7-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(2.7 mg, 0.005 mmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 7의 방법과 동일하게 수행하여 3-(5-클로로-7-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(3 mg, 94%).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.57 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 1H), 4.7-4.62 (m, 1H), 3.65-3.52 (m, 2H), 3.3-3.2 (m, 2H), 2.38-2.3 (m, 4H): LC-MS m/z calcd for C₂₀H₁₈ClFN₆O (MH⁺) 412.12 found 412.93.

< 실시예 29> 3-(5- 클로로 -6- 플루오로벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

t-부틸-4-(3-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-클로로-6-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(27 mg, 0.047 mmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 7의 방법과 동일하게 수행하여 3-(5-클로로-6-플루오로벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(21 mg, 70 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.0-7.98 (m, 2H), 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.79-4.76 (m, 1H), 3.64-3.52 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 4H): LC-MS m/z calcd for C₂₀H₁₈ClFN₆O (MH⁺) 412.12 found 412.85.

< 실시예 30> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일) 피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1 : 2- 클로로 -4-히드록시-N- 이소프로필벤즈아마이드의 제조

2-클로로-4-히드록시벤조산(2.8 g, 0.011 mol)을 티오닐클로라이드(10 mL)에 녹이고, 13시간 동안 환류시켰다. 반응이 종결되면, 반응물을 감압증류하여 농축하고 여기에 이소프로필아민(1.8 mL)와 트리에틸아민(3.0 mL)을 0 ℃에서 가하고, 2시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되면 감압농축하고, 물과 에틸아세테이트를 가하여 생성물을 유기층으로 추출하였다. 무수망초로 건조, 여과한 후, 감압농축하여 얻은 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적화합물(2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필벤즈아마이드)을 얻었다(2.5 g, 48 %).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.21 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 1H)

단계 2 : 2- 클로로 -4-히드록시-N-이소프로필-5- 니트로벤즈아마이드의 제조

2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필벤즈아마이드(560 mg, 2.62 mmol)를 초산 (10 mL)에 녹이고 여기에 질산(1 mL)을 가하였다. 상온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 농축하였다. 여기에 에틸아세테이트와 헥산을 이용하여 고체를 석출시키고, 여과하여 2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필-5-니트로벤즈아마이드를 목적화합물로 얻었다(413 mg, 61 %)

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 10.65 (s, 1H), 8.49 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 1.5hz, 1H), 4.34-4.23 (m, 1H), 1.29 (s, 1H), 1.27 (s, 1H)

단계 3: 5-아미노-2- 클로로 -4-히드록시-N- 이소프로필벤즈아마이드의 제조

2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필-5-니트로벤즈아마이드(200 mg, 0.78 mmol)를 에탄올(10 mL)에 녹이고, 여기에 이염화주석(444 mg, 2.3 mmol)을 가하였다. 반응혼합물을 5시간 동안 가열 환류한 후, 반응물을 농축시키고, 중탄산나트륨 용액으로 중화시켰다. 에틸아세테이트를 가하여, 생성물을 유기층으로 추출하고, 무수망초로 건조, 감압농축하여 얻은 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 5-아미노-2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필 벤즈아마이드를 목적화합물로 얻었다(180 mg, 41 %).

¹H NMR(MeOH-d₄, 300 MHz) δ 6.76 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.15 ~ 4.08 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 1.21 (s, 3H)

단계 4: N-(5-( 이소프로필카바모일 )-4- 클로로 -2- 히드록시페닐 )-5- 브로모 -2- 클로로피리딘-3-카르복스아마이드의 제조

2-아미노-3-니트로페놀 대신 5-아미노-2-클로로-4-히드록시-N-이소프로필벤즈아마이드(180 mg, 0.79 mmol)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 3의 방법과 동일하게 수행하여 N-(5-(이소프로필카바모일)-4-클로로-2-히드록시페닐)-5-브로모-2-클로로피리딘-3-카르복스아마이드를 목적화합물로 얻었다(77 mg, 21 %).

¹H NMR(MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.60 (d, J = 2.4 hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.16 ~ 4.12 (m, 1H), 1.25 (s, 3H), 1.23 (s, 3H)

단계 5: 2-(5- 브로모 -2- 클로로피리딘 -3-일)-6- 클로로 -N-이소프로필 벤즈[d] 옥사졸-5-카르복스아마이드의 제조

N-(5-(이소프로필카바모일)-4-클로로-2-히드록시페닐)-5-브로모-2-클로로피리딘-3-카르복스아마이드(77 mg, 0.16 mmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 4와 동일하게 수행하여 2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드를 목적화합물로 얻었다(67 mg, 87 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.11 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 6: 2-(2-(t- 부틸아미노 )-5- 브로모피리딘 -3-일)-6- 클로로 -N- 이소프로필 벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 제조

2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드(67 mg, 0.021 mmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 5와 동일하게 수행하여 2-(2-(t-부틸아미노)-5-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드를 목적화합물로 얻었다(27 mg, 41 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.23 (s, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.11 (m, 1H), 1.30 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 7: t-부틸-4-(4-(5-(5-( 이소프로필카바모일 )-6- 클로로벤즈[d]옥사졸 -2- 일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트

2-(2-(t-부틸아미노)-5-브로모피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드(27 mg, 0.058 mmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 단계 6의 방법과 동일하게 수행하여 t-부틸-4-(4-(5-(5-(이소프로필 카바모일)-6-클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 목적화합물로 얻었다(34 mg, 92 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.58 (s, 1H), 8.46 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.15 (m, 4H), 2.95 (m. 2H), 2.20 (m, 2H), 2.20 (m, 2H), 1.90 (m, 2H), 1.30 (d, J = 6.4 Hz, 3H).

단계 8: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-6- 클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

출발물질로 4-(4-(5-(5-(이소프로필카바모일)-6-클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(5 mg, 7.8 μmol)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-6-클로로-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 목적화합물로 얻었다(5 mg, 81 %).

¹H NMR (acetone-d₆, 300 MHz ) δ 8.97 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.44-4.27 (m, 1H), 3.07-3.01 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H), 1.89 (m, 4H), 1.35 (d, J = 6.5 Hz, 6H): LC-MS m/z calcd for C₂₄H₂₇N₇O₂Cl (MH⁺) 463.22 found 464.12.

< 실시예 31> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일) 피리딘-3-일)-6-히드록시-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: 4-(4-(5-(5-( 이소프로필카바모일 )-6- 히드록시벤즈[d]옥사졸 -2-일)- 6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

압력반응기에 t-부틸-4-(4-(5-(5-(이소프로필카바모일)-6-클로로벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(26 mg, 0.041 mmol), 2-디-t-부틸포스피노-2,4,5,-트리이소프로필바이페닐(2.7 mg, 6.5 μmol), Pd₂dba₃(1.47 mg, 1.6 umol), KOH(6.9 mg, 0.12 mmol)을 1,4-다이옥산(1 mL)와 물(1 mL)에 녹이고 100 ℃에서 13 시간 반응시켰다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트로 희석하고 셀라이트를 통과시켰다. 에틸아세테이트와 물을 가하여 생성물을 유기층으로 추출하고, 무수망초로 건조, 여과한 뒤, 감압농축하여 얻은 생성물을 관트로마토 그래피로 정제하여 t-부틸-4-(4-(5-(5-(이소프로필카바모일)-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-yl)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 목적화합물로 얻었다(12 mg, 46 %).

¹H NMR (acetone-d₆, 300 MHz) δ 12.8 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.44-4.27 (m, 3H), 3.07-3.01 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.20 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.61 (s, 9H), 1.49 (s, 9H), 1.34 (d, J = 6.6 Hz, 6H).

단계 2: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-6- 히드록시-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염의 제조

출발물질로서 4-(4-(5-(5-(이소프로필카바모일)-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)-6-(t-부틸아미노)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(12 mg, 19 μmol)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 16의 단계 2의 방법과 동일하게 수행하여 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-6-히드록시-N-이소프로필벤즈[d]옥사졸-5-카르복스아마이드의 이트리플루오로아세트산염을 얻었다(9 mg, 68 %).

¹H-NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.75 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.62 (m, 2H), 4.27 (m, 2H), 3.65 (m, 3H), 2.35 (m, 4H), 1.37 (d, J = 6.5 Hz, 6H); LC/MS m/z calcd for C₂₄H₂₇N₇O₃ (MH⁺) 461.52, found 462.24.

< 실시예 32> 3-(5-히드록시-6- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

단계 1: 5- 브로모 -2- 클로로 -N-(5- 클로로 -2-히드록시-4- 메틸 페닐 ) 니코틴아마 이드의 제조

문헌(R. G. Clewley, G. G. Cross et. al. Tetrahedron. 1989, 45, 1299-1310)에 개시된 방법대로 4-클로로-3-메틸페놀로부터 4-클로로-3-메틸-2-니트로페놀을 얻었다.

상기 4-클로로-3-메틸-2-니트로페놀(8.5 g, 45 mmol)을 에탄올(90 mL)에 녹이고 라니-니켈(0.5 mL)을 넣어 주었다. 반응혼합물을 교반하면서 하이드라진(19.7 mL)를 0 ℃에서 천천히 넣었다. 반응물을 질소 대기하에 70 ℃에서 2시간 동안 교반한 후 식혀주었다. 반응물을 셀라이트로 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 농축물을 에틸아세테이트에 녹이고 물로 씻어주고, 유층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압농축하였다. 농축물에 이염화탄소를 넣고 30분간 교반한 후 여과하여 고체의 목적화합물 2-아미노-4-클로로-3-메틸페놀(4.2 g, 59%)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 6.65 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 2.15 (s, 3H).

5-브로모-2-클로로니코티노일 클로라이드(8.5 g, 33.3 mmol)가 녹아있는 디메틸포름아마이드(34 mL) 용액에 2-아미노-4-클로로-3-메틸페놀(4.9 g)과 트리에틸아민(4.3 mL)을 얼음중탕을 이용하여 0 ℃에서 천천히 넣었다. 반응물의 온도를 실온으로 높이고 질소분위기 하에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물에 넣고 생성된 침전물을 여과하여 목적화합물 5-브로모-2-클로로-N-(5-클로로-2-히드록시-4-메틸페닐)니코틴아마이드를 얻었다. 상기 화합물을 더 이상의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 2: 2-(5- 브로모 -2- 클로로피리딘 -3-일)-5- 클로로 -4- 메틸벤즈[d]옥사졸의 제조

반응용기에 위의 정제되지 않은 5-브로모-2-클로로-N-(5-클로로-2-히드록시-4-메틸페닐)니코틴아마이드, 파라톨루엔설폰산 피리딘염(2 g) 및 크실렌(xylene, 300 mL)을 넣고, 150~170 ℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응물의 온도를 약 100 ℃ 로 낮추고 반응 중 생성된 타르가 흘러나오지 않게 반응물을 여과하고, 뜨거운 톨루엔으로 생성된 타르를 여러 번 씻고 여과하였다. 여액을 감압농축하고, 에틸아세테이트에 농축물을 넣고 30분 동안 교반하였다. 에틸에테르에 용해되지 않은 고체를 여과하여 연두색 고체의 목적화합물(2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-5-클로로-4-메틸벤즈[d]옥사졸)을 얻었다(2.2 g, 18%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 8.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 2.54 (s, 3H).

단계 3: 5- 브로모 -N-t-부틸-3-(5- 클로로 -4- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리딘- 2-아민의 제조

고압반응용기(sealed tube)에 2-(5-브로모-2-클로로피리딘-3-일)-5-클로로 벤즈[d]옥사졸(2.2 g), t-부틸아민(20 mL) 및 디메틸포름아마이드(20 mL)를 넣고 마개를 막아 밀봉하였다. 반응물을 50-70 ℃에서 84시간 동안 교반한 후 반응혼합물양이 5-7 mL 되도록 감압농축하였다. 농축물을 여과하고 걸러진 고체를 차가운 에틸아세테이트로 씻어주어 등황색 고체의 목적화합물(5-브로모-N-t-부틸-3-(5-클로로-4-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민)을 얻었다. 여액을 농축하고, 농축물을 에틸아세테이트로 재결정하여 5-브로모-N-t-부틸-3-(5-클로로-4-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민)을 더 얻었다 (1.9 g, 79%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.64 (s, 1H), 8.30 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 2.51 (s, 3H), 1.56 (s, 9H).

단계 4: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(5- 클로로 -4- 메틸 벤즈[d]옥사졸 - 2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조

반응용기에 5-브로모-N-t-부틸-3-(5-클로로-4-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-2-아민(1.9 g, 4.8 mmol), t-부틸-4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카복실레이트(1.3 g), Pd(Ph₃P)₂Cl₂(169 mg) 및 1,4-다이옥산(16 mL)을 넣고 질소분위기 및 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물에 1 M 탄산나트륨 수용액(14.4 mL)을 넣고 2시간 동안 110 ℃에서 교반하였다. 실온으로 냉각한 후 반응물을 셀라이트를 이용하여 여과하고 여액을 농축하였다. 농축물에 물을 넣어 주고 메틸렌클로라이드로 여러 번 추출하였다. 혼합한 유층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압농축하였다. 농축물에 에틸에테르를 넣고 10분 동안 교반하고 여과하여 초록색 고체의 목적화합물(t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-클로로벤즈-4-메틸[d]옥사졸-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트)을 얻었다(1.6 g, 60%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.63 (s, 1H), 8.44 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 4.40-4.20 (m, 3H), 3.00-2.90 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.05-1.94 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 5: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(5-히드록시-6- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조

고압반응용기에 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-클로로-6- 메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트(1.47 g, 2.59 mmol), 수산화칼륨(436 mg), 트리스(디벤질리딘아세톤)디팔라듐(95 mg), 2-다이-t-부틸포스피노-2',4,'6'-트리이소프로필바이페닐(176 mg) 및 증류수/1,4-다이옥산(1/1, 8.6 mL)를 넣고 질소로 반응용기의 공기를 치환한 후 밀봉하였다. 반응물을 105 ℃에서 24시간 동안 교반하고, 반응물의 온도를 실온으로 냉각시킨 후 메틸렌클로라이드로 희석하고 셀라이트를 이용하여 여과하였다. 여액을 농축하고 농축물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 연두색 고체의 목적화합물(t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트)을 얻었다(960 mg, 68%).

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.67 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.33-4.27 (m, 3H), 2.92 (t, J = 12.8 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.25-2.15 (m, 2H), 2.10-1.85 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.49 (s, 9H).

단계 6: 3-(5-히드록시-6- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)- 1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

반응용기에 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트(960 mg, 1.76 mmol) 및 트리플루오로아세트산(6 mL)을 넣고 60 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물의 온도를 실온으로 낮추고, 감압농축하였다. 농축물에 에틸에테르를 넣고 30분 동안 교반한 후 여과하여 연두색 고체의 목적화합물 (3-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염)을 얻었다.

상기 3-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염을 메탄올에 녹이고 4N-HCl 다이옥산 용액을 넣어주고 5분간 교반한 후 농축하였다. 농축물을 다시 메탄올에 녹이고 4N-HCl 다이옥산 용액을 넣어주고 5분간 교반한 후 농축하였다. 농축물에 에테르를 넣고 교반한 후 여과하여 연두색 고체의 목적화합물 (3-(5-에톡시벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염)을 얻었다(596 mg, 75%).

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 9.01 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 3.68-3.59 (m, 3H), 3.40-3.24 (m, 2H), 2.42-2.35 (m, 7H); LC-MS (CI) m/z calcd for C₂₁H₂₃N₆O₂(MH₊) 391.2, found 391.2.

< 실시예 33> 3-(6-히드록시-5- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

4-클로로-3-메틸페놀 대신 3-클로로-4-메틸페놀을 사용한 것을 제외하고는 실시예 32의 단계 1 내지 단계 6과 동일한 방법으로 수행하여 연두색 고체의 목적화합물(3-(6-히드록시-5-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.95 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 3.68-3.59 (m, 3H), 3.40-3.24 (m, 2H), 2.42-2.35 (m, 7H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₂₁H₂₂N₆O₂(M⁺) 390.2, found 390.1.

< 실시예 34> 3-(5-히드록시-6- 에틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-( 피페리 -4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

4-클로로-3-메틸페놀 대신 4-클로로-3-에틸페놀을 사용한 것을 제외하고는 실시예 32의 단계 1 내지 단계 6와 동일한 방법으로 수행하여 연두색 고체의 목적화합물(3-(5-히드록시-6-에틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 9.00 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.68-4.60 (m, 1H), 3.74-3.55 (m, 2H), 3.40-3.20 (m, 2H), 2.78 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.40-2.32 (m, 4H), 1.27 (t, J= 7.5 Hz, 3H).

< 실시예 35> 3-(3,5-디메틸-6- 히드록시벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

4-클로로-3-메틸페놀 대신 4-클로로-3,5-디메틸페놀을 사용한 것을 제외하고는 실시예 32의 단계 1 내지 단계 6과 동일한 방법으로 수행하여 연두색 고체의 목적화합물(3-(3,6-디메틸-5-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, D₂O) δ 8.06 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.82 (d, J = 2.1Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.65-4.45 (m, 1H), 3.58 (d, J= 13.1 Hz, 2H), 3.24-3.15 (m, 2H), 2.45-2.10 (m, 4H), 2.08 (s, 3H).

< 실시예 36> 3-(6-히드록시-7- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

단계 1: 3-( 벤질옥시 )-2- 메틸 -6-니트로페놀의 제조

질산(0.6 mL, 60% 수용액)과 아세틱앤하이드리드(1.0 mL) 혼합물에 2-메틸레조시놀(1.0 g, 8.1 mmol)을 0 ℃에서 강하게 교반하면서 천천히 넣었다. 0 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물에 쏟아 붇고 이염화탄소로 여러 번 추출하였다. 유층을 모아 무수 황산마그네슘으로 건조하고 농축하였다. 농축물은 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 고체인 목적화합물(2-메틸-4-니트로벤젠-1,3-디올)(500 mg, 37%)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 11.14 (s, 1H), 7.99 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.43-7.35 (m, 5H), 6.58 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 2.22 (s, 3H); GC-MS (EI) m/z calcd for C₁₄H₁₃NO₄(M⁺) 259.1, found 259.1.

2-메틸-4-니트로벤젠-1,3-디올(3.7 g, 21.9 mmol)을 아세톤(50 mL)에 녹이고 벤질브로마이드(2.6 mL)와 탄산칼륨(1.5 g)을 넣었다. 반응혼합물을 48시간 동안 끓인 후 식히고 감압 농축하였다. 농축물에 물을 넣고 이염화탄소로 여러번 추출하였다. 유층을 황산마그네슘으로 건조하고 감압농축하였다. 농축물에 에테르를 넣고 1시간 동안 교반한 후 여과하여 고체의 목적화합물(3-(벤질옥시)-2-메틸-6- 니트로페놀)(3.4 g, 60%)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.45-7.30 (m, 5H), 6.68 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.01 (s, 2H), 2.05 (s, 3H).

단계 2: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6- 벤질옥시 -7- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조

실시예 32의 단계 3에서 사용한 4-클로로-3-메틸-2-니트로페놀 대신 3-(벤질옥시)-2-메틸-6-니트로페놀을 사용한 것을 제외하고는 실시예 32의 단계 1 내지 단계 4과 동일한 방법으로 수행하여 연두색 고체의 목적화합물(t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-벤질옥시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트)을 50% 순도로 얻었으며 더 이상의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 3: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-히드록시-7- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-벤질옥시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트(150 mg)를 테트라하이드로퓨란과 메탄올 혼합용액(2.0 mL, 2/1)에 녹이고 Pd/C(52 mg)을 넣었다. 반응혼합물을 수소대기하에서 24시간 동안 교반한 후 셀라이트로 여과하였다. 여액을 농축하고, 농축물에 메탄올을 넣고 30분간 교반한 후 여과하여 80% 순도의 연두색 고체의 목적화합물(t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-벤질옥시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트)(30 mg)을 얻었다. 더 이상의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

단계 4: 3-(6-히드록시-7- 메틸벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)- 1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 대신 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-벤질옥시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카복실레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 32의 단계 6과 동일한 방법으로 수행하여 연두색 고체의 목적화합물(3-(6-히드록시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이염산염)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7.97 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.60-4.40 (m, 1H), 3.57 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 3.30-3.10 (m, 2H), 2.45-2.10 (m, 4H), 1.91 (s, 3H); LC-MS (CI) m/z calcd for C₂₁H₂₃N₆O₂ (MH⁺) 391.2, found 391.1.

< 실시예 37> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7-(1H-인돌-6-일)벤즈[d]옥사졸-6-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(7-(1-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일)-1H-인돌-6-일)-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

반응물로서 6-브로모(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인돌을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 36의 단계 2와 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 제조하였다(11 mg, 39 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.65 (br s, 1H), 8.36 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.3, 0.6 Hz, 1H),7.91 (m, 1H), 7.64 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 8.3, 1.3 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.35 (m, 1H), 4.28 (m, 3H), 3.97 (m, 1H), 3.69 (m, 1H), 2.92 (m, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.19 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.48 (s, 9H).

단계 2: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7- (1H-인돌-6-일)벤즈[d]옥사졸-6-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

반응물로서 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인돌-6-일)-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 36의 단계 3과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 얻었다(8 mg, 28 %).

¹H-NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.55 (d, J = 2.2 Hz,1H), 8.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 8.5, 0.7 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.63 (m, 1H), 3.53 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 2.39 (m, 4H): LC-MS calcd for C₃₂H₂₅F₆N₇O₄ (MH⁺) 492.2 found 493.34.

< 실시예 38> 3-(7-(1H-인돌-6-일)-6- 메톡시벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(7-(1-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일)-1H-인돌-6-일)-6-메톡시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인돌-6-일)-6-메톡시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(10 mg, 13 μM), 요오드화메탄(4 g , 26 μmol) 및 탄산칼륨(9 mg, 52 μmol)을 N,N-디메틸포름아마이드(0.5 mL)에 가하고, 13시간 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되면, 실시예 27의 단계 1의 방법과 동일하게 수행하여 목적화합물을 얻었다(8 mg, 80 %).

¹H NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.65 (br s, 1H), 8.39 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.5 Hz,1H), 8.08 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.83 (dd, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.72 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 5.61 (m, 1H), 4.37-4.15 (m, 3H), 3.97-3.84 (m, 3H), 3.97-3.84 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 2.89 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.21 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.50 (s, 9H).

단계 2: 3-(7-(1H-인돌-6-일)-6- 메톡시벤즈[d]옥사졸 -2-일)-5-(1-(피페리딘- 4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민의 이트리플루오로아세트산염의 제조

반응물로서 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(7-(1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인돌-6-일)-6-메톡시벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 36의 단계 3과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 얻었다(5 mg, 65 %).

¹H-NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.65 (br s, 1H), 8.39 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.83 (dd, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.72 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 5.61 (m, 1H), 4.37-4.15 (m, 3H), 3.97-3.84 (m, 3H), 3.97-3.84 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 2.89 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.21 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.50 (s, 9H).

< 실시예 39> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7-페닐벤즈[d]옥사졸-6-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-히드록시-7- 페닐벤즈[d]옥사졸 -2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

반응물로서 브로모벤젠을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 36의 단계 2와 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 제조하였다(13 mg, 15 %).

¹H-NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 8.65 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.71-7.48 (m, 6H), 7.15 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.42-4.25 (m, 3H), 2.96 (m, 1H), 2.18 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.50 (s, 9H).

단계 2: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7- 페닐벤즈[d]옥사졸-6-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

반응물로서 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-히드록시-7-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 36의 단계 3과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 얻었다(4 mg, 26 %).

¹H-NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.48 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.5, 1.4Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.67-4.51 (m, 3H), 3.65-3.54 (m, 2H), 3.31-3.21 (m, 2H), 2.44-2.25 (m, 4H): LC-MS calcd for C₂₆H₂₄N₆O₂ (MH⁺) 452.51 found 453.18.

< 실시예 40> 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-6-올의 이트리플루오로아세트산염의 제조

단계 1: t-부틸-4-(4-(6-(t- 부틸아미노 )-5-(6-히드록시-7-(4- 메톡시페닐 ) 벤 즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

실시예 37의 단계 1과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 얻었다(7 mg, 7 %).

¹H-NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 8.76 (br s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.61-7.50 (m, 1H), 7.11 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.36-4.17 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 2.91 (m, 2H), 2.80 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.52 (s, 9H).

단계 2: 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-7- (4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-6-올의 제조

반응물로서 t-부틸-4-(4-(6-(t-부틸아미노)-5-(6-히드록시-7-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-2-일)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 37의 단계 2과 동일한 방법으로 수행하여 목적화합물을 얻었다(8 mg, 80 %)

¹H-NMR (MeOH-d₄, 300 MHz) δ 8.48 (br s, 1H), 8.30 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.72 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.59-4.38 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.59-3.48 (m, 2H), 3.29-3.21 (m, 2H), 2.39-2.32 (m, 4H): LC-MS calcd for C₃₁H₂₆F₆N₆O₅ (MH⁺) 482.2 found 483.18

< 실험예 1> c- Met 키나아제 억제활성 실험

본 발명에 따른 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 이상세포의 증식억제활성을 세포단계에서 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

c-Met 키나아제에 대한 저해활성을 시간분해형광도(Time-resolved fluorescence, TRF)의 일종인 분리 증강된 란탄족플루오로 면역 분석(Dissociation Enhanced Lanthanide Fluoro Immuno Assay, DELFIA; Perkin Elmer)을 이용하여 분석하였다.

그레이너 96웰 V형 바닥 플레이트에 시험화합물(10 μL)을 가하고 c-Met 효소를 섞은 타이로신 키나아제 버퍼(20 μL)를 가한 후, 상기 효소 및 화합물의 혼합물을 15분 동안 혼합하여 배양하였다. 여기에 ATP용액(10 μL)을 가하여 상온에서 30분 동안 키나아제 반응을 시킨후, 50 mM 에틸렌다이아민테트라아세트산 용액(EDTA, 40 μL)을 가하여 반응을 중지시켰다. 스트렙트아비딘이 코팅된 플레이트에 반응물을 옮기고 진탕하에 배양하고 2시간 후 PBS-T 완충액(PBS 0.05% 트윈20)으로 3회 세척하였다.

유로퓸이 붙은 항-포스포타이로신 항체를 1:2,500으로 희석시켜 웰 당 100 μL씩 가하고 진탕하에 배양하고 1시간 후, PBS-T 완충액(PBS 0.05% 트윈20)으로 5회 세척하였다.

개선제(enhancement solution, 100 μL)를 가하고 5분 동안 진탕배양한 후, 왈락 인비전 2103(Wallac Envision 2103) 기기로 615/665 nm의 파장 범위에서 판독하였다.

상기 실험을 수행한 화합물의 IC₅₀는 2개씩의 데이터 세트로 결정하였고 프리즘(버전 5.01, 그래프패드) 소프트웨어를 이용하여 구하였다.

c-Met 키나아제 효소활성을 50%로 감소시키는 상기 화합물의 IC₅₀는 하기 표 1에 나타내었다.

c- Met 키나아제에 대한 저해활성분석[IC ₅₀ (μM)]

실시예	c-Met	실시예	c-Met	실시예	c-Met
1	<10	15	0.218	29	0.186
2	<10	16	0.009	30	<10
3	<10	17	0.0019	31	<10
4	0.135	18	0.138	32	0.027
5	<10	19	0.046	33	0.18
6	<5	20	0.088	34	0.089
7	<5	21	0.036	35	0.029
8	<5	22	0.067	36	0.0002
9	<5	23	0.375	37	0.0012
10	<10	24	0.126	38	0.042
11	<10	25	0.14	39	0.048
12	6.7	26	0.057	40	0.0177
13	0.0067	27	0.196
14	0.062	28	0.042

표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물의 IC₅₀가 10 μM 이하로 측정되었으며, 특히, 실시예 13, 14, 17, 26, 32, 36, 37 및 40의 화합물의 IC₅₀가 0.1 μM 이하로 측정되었다. 이로부터 본 발명에 따른 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 c-Met 키나아제에 대한 우수한 억제효과가 있음을 알 수 있다.

< 실험예 2> 키나아제 억제활성 실험

Millipore(Upstate)의 키나아제 프로파일링 서비스(IC₅₀ profiler express)를 이용하여 실시예 37에서 제조된 화합물의 다양한 키나아제의 저해 활성을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

키나아제	저해활성(IC₅₀, nM)
Flt3	0.5
Ron	14
Aurora-A	18
KDR	30

표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 Flt3, Ron, Aurora-A, KDR에 대한 우수한 억제효과가 있음을 알 수 있다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

< 제제예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

화학식 1의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

화학식 1의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사액제의 제조

화학식 1의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체를 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

Claims

다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 있어서, 상기 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체는
13) 3-(6-페닐벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;
16) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(4-플루오로페닐)우레아;
17) 1-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-3-(2,4-다이클로로페닐)우레아;
21) N-(2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)벤즈[d]옥사졸-6-일)-4-메톡시벤젠설폰아마이드;
32) 3-(5-히드록시-6-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;
35) 3-(3,5-디메틸-6-히드록시벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;
36) 3-(6-히드록시-7-메틸벤즈[d]옥사졸-2-일)-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민;
37) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-7-(1H-인돌-6-일)벤즈[d]옥사졸-6-올 및
40) 2-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-7-(4-메톡시페닐)벤즈[d]옥사졸-6-올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
삭제
하기 반응식 1로 표시되는 바와 같이,
출발물질인 화학식 2의 화합물을 치환반응시켜 화학식 4의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 4의 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5의 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 제조된 화학식 5의 화합물과 아민화합물을 치환반응시켜 화학식 6의 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
상기 단계 3에서 제조된 화학식 6의 화합물과 화학식 7의 화합물을 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 8의 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
상기 단계 4에서 제조된 화학식 8의 화합물을 수소화반응시켜 화학식 9의 화합물을 제조하는 단계(단계 5);
상기 단계 5에서 제조된 화학식 9의 화합물을 화학식 10의 화합물과 부가반응시켜 화학식 11의 화합물을 제조하는 단계(단계 6); 및
상기 단계 6에서 제조된 화학식 11의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1a의 화합물을 제조하는 단계(단계 7)를 포함하는 제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법:
[반응식 1]

(상기 반응식 1에서, 화학식 1a는 제1항의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 4-플루오로페닐 또는 2,4-다이클로로페닐이고, Et₃N는 트리에틸아민, PPTS는 파라톨루엔 피리디늄염, Pd(dppf)Cl₂는 1,1`-비스(디페닐포스피노)페로센다이클로로 팔라듐, Pd(Ph₃P)₂Cl₂는 비스트리페닐포스핀다이클로로팔라듐, NCO는 이소시아네이트, TFA는 트리플루오로아세트산, Boc는 t-부톡시카보닐이다).
하기 반응식 3으로 표시되는 바와 같이,
화학식 9의 화합물을 화학식 15로 표시되는 아릴설포닐클로라이드 혹은 알킬설포닐 클로라이드와 부가반응시켜 화학식 16의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 16의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1d의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법:
[반응식 3]

(상기 반응식 3에서, 화학식 1d는 제1항의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar(또는 R)은 4-메톡시페닐이고, ArSO₂Cl는 아릴설포닐클로라이드이다).
하기 반응식 4로 표시되는 바와 같이,
화학식 2의 화합물을 화학식 17의 화합물과 반응시켜 화학식 18의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 18의 화합물을 고리화반응시켜 화학식 19의 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 제조된 화학식 19의 화합물과 아민화합물을 치환반응시켜 화학식 20의 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
상기 단계 3에서 제조된 화학식 20의 화합물과 화학식 6의 화합물을 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 21의 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
상기 단계 4에서 제조된 화학식 21의 화합물을 수산화칼륨과 스즈키 커플링 (Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 22의 화합물을 제조하는 단계(단계 5);
상기 단계 5에서 제조된 화학식 22의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1e의 화합물을 제조하는 단계(단계 6)를 포함하는 제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법:
[반응식 4]

(상기 반응식 4에서, 화학식 1e는 제1항의 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, R¹은 메틸, 4-메톡시페닐 또는 1H-인돌-6-일이다).
하기 반응식 7로 표시되는 바와 같이,
화학식 21의 화합물을 아릴보론산과 스즈키 커플링 반응(Suzuki coupling reaction)을 수행하여 화학식 27의 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
단계 1에서 제조된 화학식 27의 화합물을 탈보호반응시켜 화학식 1i의 화합물을 제조하는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법:
[반응식 7]

(상기 반응식 7에서, 화학식 1i는 제1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, n은 1~3의 정수이며, Ar은 페닐이다).
제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 폐암, 뼈암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 주위 암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 나팔관 암, 자궁내막 암, 자궁경부암, 질암, 외음부암, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신세포암, 신우암, 중추 신경계(CNS) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 건선, 양성 전립선 비대 또는 망막증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제1항의 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 섬유선종, 경화성 선질환 또는 유두종의 예방 및 치료용 약학적 조성물.