KR101222525B1

KR101222525B1 - Compositions and methods for suppressing pain and screening methods for pain suppressant using TRPV3 inhibition

Info

Publication number: KR101222525B1
Application number: KR1020110000309A
Authority: KR
Inventors: 황선욱; 방상수
Original assignee: 고려대학교 산학협력단
Priority date: 2011-01-03
Filing date: 2011-01-03
Publication date: 2013-01-15
Also published as: KR20120078981A

Abstract

본 발명은 피부 세포에 발현하는 통증수용체 TRPV3 이온 채널을 특이적 타겟 으로하는 통증 억제제에 관한 것으로, 구체적으로 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효성분으로 포함하는 통증 억제 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 TRPV3에 의해 야기되는 통증을 제어하고 부작용이 적은 통증 치료제 개발을 가능하게 한다.
The present invention relates to a pain inhibitor that specifically targets a pain receptor TRPV3 ion channel expressed in skin cells, and more particularly, to a pain inhibitory composition comprising 17R resolbin D1 or a salt thereof as an active ingredient. The present invention enables the development of pain medications that control pain caused by TRPV3 and have fewer side effects.

Description

ＴＲＰＶ3 활성 억제를 이용한, 통증 억제용 조성물, 통증 억제 방법 및 통증 억제제 스크리닝 방법{Compositions and methods for suppressing pain and screening methods for pain suppressant using TRPV3 inhibition}Compositions for inhibiting pain, methods for suppressing pain and screening methods for suppressing pain using TRPV3 activity {Compositions and methods for suppressing pain and screening methods for pain suppressant using TRPV3 inhibition}

본 발명은 TRPV3 활성 억제를 통한 통증 억제용 조성물, 통증 억제 방법 및 통증 억제제 스크리닝 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for inhibiting pain, a method for inhibiting pain and a method for screening pain inhibitors by inhibiting TRPV3 activity.

인체 생리학 및 유전학 분야의 연구를 통해 인체에 존재하는 TRPV3 (transient receptor potential vanilloid 3)가 2002년에 발견되었고, 다양한 조직에서 생존유지에 필수기능을 수행할 것으로 예측되었다. 상기 TRPV3은 외부의 자극을 감지하는 피부 세포 및 감각 신경 세포에 발현되어 있으며, 온도 및 통증유발 유해자극을 감지하는 통각수용체군인 thermoTRP군 (temperature-sensitive transient receptor potential ion channels)에 속해 있다. Research in human physiology and genetics has revealed that TRPV3 (transient receptor potential vanilloid 3) in humans was discovered in 2002 and is expected to play a vital role in the survival of various tissues. The TRPV3 is expressed in skin cells and sensory neurons that sense external stimuli, and belongs to the thermoTRP group (temperature-sensitive transient receptor potential ion channels), which is a nociceptor group that detects temperature and pain-induced noxious stimuli.

통각수용체 TRPV3의 기능을 명확히 규명하고 이를 제어함으로써 통증질환 및 피부 질환 경감의 목표를 달성할 수 있으리라 예측되고 있다. 따라서 상기 TRPV3의 기능 규명과 조절 약물 개발을 위해서 TRPV3의 활성을 조절할 수 있는 특이적인 조절제 개발이 요구되고 있는 실정이다. By clearly identifying and controlling the function of nociceptor TRPV3, it is expected to achieve the goal of alleviating pain and skin diseases. Therefore, the development of specific regulators that can regulate the activity of TRPV3 in order to identify the function of the TRPV3 and the development of regulatory drugs is required.

상기 TRPV3의 조절제 개발에 쓰이는 기반 기술을 이해하기 위한 TRPV3 수용체의 특성은 다음과 같다. TRPV3은 이온채널이며, 이의 활성화를 통하여 양이온이 감각 신경 세포 또는 피부 세포 내부로 이동하고, 칼슘 의존적인 신호 전달 체계가 발생한다. The characteristics of the TRPV3 receptor for understanding the underlying technology used to develop the regulator of TRPV3 are as follows. TRPV3 is an ion channel, through its activation, cations move inside sensory neurons or skin cells, and calcium-dependent signaling systems occur.

또한 TRPV3은 33℃ 이상의 온도에 반응하며, 온도 자극에 의한 통증 또는 피부질환을 매개할 것으로 예상된다. 피부의 경우 이러한 칼슘 신호 전달 체계는 세포의 생장과 분화를 조절하고, 궁극적으로는 세포의 운명을 결정한다. TRPV3 also responds to temperatures above 33 ° C and is expected to mediate pain or skin diseases caused by temperature stimulation. In the skin, these calcium signaling systems regulate cell growth and differentiation and ultimately determine cell fate.

상기 TRPV3의 활성화를 측정하는 기술로는 첫째, 세포막 전류를 증폭하여 그 변화를 측정할 수 있는 팻취클램프 전기생리학 기술과, 둘째, TRPV3가 칼슘 이온 등의 양이온을 이동시키는 데에서 착안한 세포 내 칼슘 농도 변화 측정 기술이 있다. 첫 번째 기술의 경우 측정의 정밀도에 있어 두 번째 기술보다 우위에 있으며, 두 번째 기술의 경우, 첫 번째 기술 보다 고속 측정이 가능하다는 장점이 있어 서로 보완적이다. 또한 상기한 TRPV3 활성화 측정 기술들은, 세포주 배양기술, TRPV3 DNA 관리 및 형질감염 기술이 뒷받침되어야 구현할 수 있다. 즉, 각종 TRPV3 활성의 특이적 조절제 후보물질들을 TRPV3 과발현 세포에 투여하여 TRPV3 활성화를 측정함으로써 조절제 여부 및 그 강도를 측정할 수 있다. As a technique for measuring the activation of TRPV3, first, a patch clamp electrophysiology technique that can amplify the cell membrane current and measure the change, and second, intracellular calcium that TRPV3 focuses on transferring cations such as calcium ions. There is a concentration measurement technique. The first technique is superior to the second in terms of measurement accuracy, and the second technique is complementary because it has the advantage of allowing higher speed measurement than the first technique. In addition, the above-described TRPV3 activation measurement techniques, cell line culture technology, TRPV3 DNA management and transfection technology can be implemented to be supported. In other words, the specific regulator candidates of various TRPV3 activity can be administered to TRPV3 overexpressing cells to measure TRPV3 activation to determine whether the modulator is present and its intensity.

또, 피부 세포와 신경 세포와의 연관 관계는 염증성 통증이나 만성 통증에 있어 매우 중요한 메커니즘으로 알려져 있다. 칼슘유입에 의하여 활성화된 피부 세포에서 분비되는 염증 유발 물질은 신경세포를 흥분시켜 급성 통증을 유발한다. 장기적인 신경의 흥분으로 인해서는 신경 자체에서 substance P 또는 CGRP 와 같은 신경성 염증 유발 물질이 역방향으로 분비되어 피부 세포를 재차 활성화시키는 악순환 고리를 형성한다. 이러한 신경과 피부조직 간의 상호 피드백 작용을 통해 만성적인 통증성 질병을 유발하는 것으로 알려져있다. 그러므로 통증을 완화하는데 있어서 감각 신경 세포와 피부 세포의 활성화를 억제함으로써 효율적으로 통증을 억제할 수 있다고 보인다. In addition, the relationship between skin cells and nerve cells is known as a very important mechanism for inflammatory pain or chronic pain. Inflammatory substances secreted from skin cells activated by calcium influx excite neurons and cause acute pain. Long-term excitability of the nerves causes the nerves themselves to release neuro-inflammatory substances, such as substance P or CGRP, in the reverse direction, forming a vicious loop that reactivates skin cells. It is known to cause chronic pain diseases through the interaction feedback between the nerve and skin tissue. Therefore, it seems that the pain can be effectively suppressed by suppressing the activation of sensory neurons and skin cells in relieving pain.

일반적인 레졸빈 D1은 7S, 8R, 17S-트리하이드록시-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-도코사헥사에노익에시드를 의미한다. 이는 15- 및 5-지방산화효소에 의한 DHA의 산화에 의해 생리적으로 생성되는 오메가3 지방산 대사체이다. 다만 레졸빈 D1에 아스피린을 처리하는 인위적 조작을 통해 17R 형태의 에피머를 제조할 수 있고, 이를 17R 레졸빈 D1이라고 부른다. Common resolvin D1 means 7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid. It is an omega-3 fatty acid metabolite that is physiologically produced by the oxidation of DHA by 15- and 5-fatty oxidase. However, by artificial manipulation of aspirin treatment with resolbin D1, 17R type epimers can be prepared, which is called 17R resolbin D1.

상기 17R 레졸빈 D1은 급성 염증의 초기 반응인 인간 다핵성 백혈구 (polymorphonuclear leukocyte; PMNL)가 혈관 내피 세포를 따라 이동하는 것을 30 nM의 EC₅₀으로 감소시킨다. 또한 복막염에 걸린 뮤린 모델에서 백혈구 침투를 농도 의존적으로 감소시키고, 10-100 ng을 투여했을 때에는 최대 35%까지 억제한다. 다만, 현재까지 17R 레졸빈 D1이 TRPV3의 활성을 특이적으로 조절한다는 것은 알려진 바 없다. The 17R resolbin D1 reduces the migration of human polymorphonuclear leukocytes (PMNL), which is an early response to acute inflammation, along vascular endothelial cells to an EC ₅₀ of 30 nM. In addition, the murine model with peritonitis reduces leukocyte infiltration in a dose-dependent manner and inhibits up to 35% at 10-100 ng. However, to date, it is not known that 17R resolbin D1 specifically regulates the activity of TRPV3.

이에 본 발명자들은 TRPV3을 표적으로 하는 통증 억제제를 찾고자 연구하던 중, 17R 레졸빈 D1을 TRPV3를 발현하는 세포주에 처리한 결과, TRPV3의 활성화를 억제하여 세포 내부로의 칼슘 유입을 차단하는 것을 확인하였으며, 염증이 유발된 동물 개체의 행동실험에서도 TRPV3 매개 통증인 열자극 통증의 반응 역치가 17R 레졸빈 D1 투여에 의해 정상 수준으로 회복됨을 확인하였다. 또한, 17R 레졸빈 D1은 TRPV3만 억제하여 특이성에서 장점이 있는 것을 확인하였다. 종합하면 17R 레졸빈 D1이 TRPV3 매개의 통증을 억제하므로, TRPV3 관련 통증에 대한 억제 물질로 유용하게 사용될 수 있다는 것을 인식하여 본 발명을 완성하게 되었다.
The inventors of the present invention, while studying to find a pain inhibitor targeting TRPV3, treated 17R resolbin D1 in a cell line expressing TRPV3. In the behavioral experiments of animals with inflammation, it was confirmed that the response threshold of TRPV3-mediated pain, thermal stimulation pain, was restored to normal level by the administration of 17R resolbin D1. In addition, 17R resolbin D1 was confirmed to have an advantage in specificity by inhibiting only TRPV3. Taken together, the present invention was completed by recognizing that 17R resolbin D1 suppresses TRPV3-mediated pain and thus can be usefully used as an inhibitor for TRPV3-related pain.

본 발명의 목적은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 이용하여 통증 억제용 조성물, 통증 억제 방법 및 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a composition for inhibiting pain, a method for suppressing pain, and a method for screening pain inhibitors using 17R resolbin D1 or salts thereof.

본 발명의 다른 목적은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 이용한 TRPV3 활성 억제 방법 및 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공하는 것이다. It is another object of the present invention to provide a method for inhibiting TRPV3 activity and a method for screening inhibitors of TRPV3 activity using 17R resolbin D1 or salts thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 이용한 통증 개선용 건강 식품을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention to provide a health food for pain improvement using 17R resolbin D1 or salts thereof.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 통증 억제용 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for inhibiting pain, containing 17R resolbin D1 or a salt thereof as an active ingredient.

또, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 인간을 제외한 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 통증 억제 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for inhibiting pain, comprising administering a pharmaceutically effective amount of 17R resolbin D1 or a salt thereof to a mammal other than a human.

또, 본 발명은 In addition,

1) TRPV3을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPV3 is transduced into a host cell;

2) 상기 형질전환체에 실험군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 피검물질을 처리하고, 대조군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformants with TRPV3 specific activators and test substances as experimental groups, and treating TRPV3 specific activators with 17R resolbin D1 or salts thereof as controls;

3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPV3 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및, 3) measuring the TRPV3 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군 보다 낮거나 유사한 TRPV3 이온 채널 활성을 나타내는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공한다. 4) providing a pain inhibitor screening method comprising comparing each measurement of step 3) to select a test substance exhibiting TRPV3 ion channel activity lower or similar to a control.

또, 본 발명은 TRPV3을 발현하는 감각 신경 세포 또는 피부 세포에 17R 레졸빈 D1을 처리하는 단계를 포함하는 TRPV3 활성 억제 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for inhibiting TRPV3 activity, comprising treating 17R resolbin D1 to sensory neurons or skin cells expressing TRPV3.

또, 본 발명은 In addition,

2) 상기 형질전환체에 실험군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 TRPV3 활성 억제제 후보물질을 처리하고, 대조군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformants with TRPV3 specific activators and TRPV3 activity inhibitor candidates as experimental groups, and treating TRPV3 specific activators with 17R resolbin D1 or salts thereof as a control group, respectively;

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군 보다 낮거나 유사한 TRPV3 이온 채널 활성을 나타내는 TRPV3 활성 억제제 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공한다. 4) A method for screening a TRPV3 activity inhibitor comprising comparing the respective measurements of step 3) to select TRPV3 activity inhibitor candidates exhibiting TRPV3 ion channel activity lower or similar to the control.

또한, 본 발명은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효성분으로 포함하는 통증 개선용 건강식품을 제공한다.
In addition, the present invention provides a health food for pain improvement comprising 17R resolbin D1 or salts thereof as an active ingredient.

본 발명의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 포함하는 조성물은 특이적으로 TRPV3의 활성화를 억제함으로써 TRPV3에 의해 매개되는 통증을 효과적으로 억제할 수 있다. 또한 17R 레졸빈 D1 및 그 염은 TRPV3에 관련된 통증을 억제할 수 있는 물질을 스크리닝 할 수 있도록 한다. 또한 본 발명의 TRPV3 억제방법 및 TRPV3 억제제 스크리닝 방법을 통해 TRPV3 관련 질병을 치료, 예방 할 수 있으며, 본 발명의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효성분으로 하는 건강식품을 통해 통증에 대한 치료, 예방 효과를 얻을 수도 있다.
The composition comprising 17R resolbin D1 or a salt thereof of the present invention can effectively suppress the pain mediated by TRPV3 by specifically inhibiting the activation of TRPV3. 17R Resolbin D1 and its salts also allow for the screening of substances that can inhibit pain associated with TRPV3. In addition, the TRPV3 inhibitory method and the TRPV3 inhibitor screening method of the present invention can treat and prevent TRPV3-related diseases. You might get the effect.

도 1은 세포주에서 발현된 hTRPV3가 17R 레졸빈 D1 에 의해 억제됨을 칼슘의 세포 내 유입을 억제하는 효과의 측정을 통해 억제효과가 있음을 나타낸 도이다 camp은 캄파를, men은 멘톨을, 17R-RvD은 17R 레졸빈 D1을 각각 의미한다.
도 1a는 3 μM 17R 레졸빈 D1이 4 mM 캄파에 의한 TRPV3 활성화를 억제함을 fura2 칼슘 이미지 기법으로 측정한 것을 나타낸 도이다.
도 1b는 3 μM 17R 레졸빈 D1이 30 μM 2-APB (2-aminoethoxydiphenyl borate)에 의한 TRPV3 활성화를 억제함을 fura2 칼슘 이미지 기법으로 측정한 것을 나타낸 도이다
도 1c는 3 μM 17R 레졸빈 D1이 2 mM 멘톨에 의한 TRPV3 활성화를 억제함을 fura2 칼슘 이미지 기법으로 측정한 것을 나타낸 도이다.
도 1d는 3 μM 17R 레졸빈 D1이 열에 의한 TRPV3 활성화를 fura2 칼슘 이미지 기법으로 측정한 것을 나타낸 도이다.
도 2는 전기 생리학적인 기법을 사용했을 시에도 캄파, 멘톨, 2-APB, 열에 의한 TRPV3 활성화가 3 μM 17R 레졸빈 D1에 의해 억제됨을 확인한 도이다. Men 또는 men은 멘톨, 2APB 혹은 2apb는 2-APB를, camp는 캄파를, 17r은 17R 레졸빈 D1을 의미한다.
도 3은 6가지 thermoTRP를 과발현시킨 세포주에 17R 레졸빈 D1 및 17S 레졸빈 D1을 각각 처리한 후 칼슘 이미지화를 통해 각 TRP에 대한 억제효과를 나타낸 도이다.
도 3a는 17R 레졸빈 D1에 대한 6가지 thermoTRP channel 에 대해 실험한 결과 TRPV3 활성 억제에 특이적임을 나타낸 도이다.
도 3b는 17S 레졸빈 D1에 대한 6가지 thermoTRP channel 에 대해 실험한 결과 TRPV3, TRPV4 그리고 TRPA1의 활성의 억제를 나타낸 도이다
도 4는 농도에 따른 TRPV3 활성화에 의한 칼슘 유입량을 나타낸 농도-반응 곡선으로서 각각의 활성을 Hill-plot 방법으로 나타낸 도이다. IC₅₀은 397 nM, N값은 1.17이었다.
도 5는 3 μM 17R 레졸빈 D1이 4 mM 캄파에 의한 TRPV3 활성화를 억제함을 fura2 칼슘 이미지 기법으로 측정한 것을 나타낸 도이다.
도 6은 열조사법에 의해 열을 조사한 쥐에서 열자극에 대한 회피 시간을 평균하여 나타낸 도이다. 그 결과, CFA로 인해 유발된 염증 때문에 열자극에 대한 회피 시간이 빨라졌으며 이를 17R 레졸빈 D1이 유의성 있게 회복시킴을 나타낸다. Figure 1 shows that hTRPV3 expressed in the cell line is inhibited by 17R resolbin D1 through the measurement of the effect of inhibiting the intracellular influx of calcium, camp is camphor, men are menthol, 17R RvD means 17R resolbin D1, respectively.
FIG. 1A shows the measurement of 3 μM 17R resolbin D1 inhibiting TRPV3 activation by 4 mM campa by fura2 calcium imaging technique.
FIG. 1B is a diagram showing that 3 μM 17R resolbin D1 inhibited TRPV3 activation by 30 μM 2-APB (2-aminoethoxydiphenyl borate) by fura2 calcium imaging.
FIG. 1C shows that 3 μM 17R resolbin D1 inhibits TRPV3 activation by 2 mM menthol, measured by fura2 calcium imaging technique. FIG.
1D is a diagram showing that 3 μM 17R resolbin D1 measured TRPV3 activation by heat using a fura2 calcium imaging technique.
FIG. 2 shows that even when electrophysiological techniques were used, TRPV3 activation by campa, menthol, 2-APB, and heat was inhibited by 3 μM 17R resolbin D1. Men or men means menthol, 2APB or 2apb means 2-APB, camp means campa and 17r means 17R resolbin D1.
Figure 3 is a diagram showing the inhibitory effect on each TRP through calcium imaging after treatment with 17R resolbin D1 and 17S resolbin D1 in the cell line overexpressed six thermoTRP.
FIG. 3a shows the results of experiments on six thermoTRP channels for 17R resolbin D1, which are specific for inhibition of TRPV3 activity.
Figure 3b is a diagram showing the inhibition of TRPV3, TRPV4 and TRPA1 activity of six thermoTRP channels for 17S resolbin D1
Figure 4 is a concentration-response curve showing the calcium influx by TRPV3 activation according to the concentration, each activity is a diagram showing the Hill-plot method. The IC ₅₀ was 397 nM and the N value was 1.17.
FIG. 5 shows the measurement of 3 μM 17R resolbin D1 inhibiting TRPV3 activation by 4 mM campa by fura2 calcium imaging technique.
Figure 6 is a view showing the average avoidance time for heat stimulation in mice irradiated with heat by heat irradiation method. As a result, the avoidance of heat stimulation was faster due to the inflammation induced by CFA, indicating that 17R resolbin D1 recovered significantly.

이하, 본 명세서에서 사용하는 용어를 정의한다. Hereinafter, the terms used in the present specification are defined.

본 명세서에서 사용되는 용어 "통증"은 통각수용기와 신경섬유로 구성된 구심성 신경로를 통하여 대뇌피질과 가장자리 계통영역과 맞닿은 부위를 자극함으로써 일어나는 모든 통각 및 감각 장애를 의미한다. 본 발명에서 사용된 "통증"이라는 용어는 모든 종류의 통증, 즉, 신경병 통증 등의 만성 통증과, 수술 후 통증, 만성 아래쪽 등 통증, 군발성 두통, 포진 신경통, 환지통, 중추통, 치통, 신경병 통증, 오피오이드 내성통, 창자통, 외통, 뼈 외상통, 분만 및 출산 중 통증, 햇빛화상을 비롯한 화상으로 초래되는 통증, 편두통, 협심통, 및 방광염통을 비롯한 요생식로 관련 통증을 포함하는 것이고, 또한 외상수용통 또는 통각을 포함한다. As used herein, the term "pain" refers to all pain and sensory disorders that occur by stimulating the site of contact with the cerebral cortex and marginal systemic region through the afferent neuropath consisting of nociceptors and nerve fibers. As used herein, the term "pain" refers to all kinds of pain, namely chronic pain, such as neuropathic pain, postoperative pain, chronic lower back pain, cluster headache, herpes neuralgia, ring pain, central pain, toothache, neuropathy. Pain, opioid-resistant pain, intestinal pain, external pain, traumatic bone pain, pain during delivery and childbirth, pain resulting from burns including sunburn, migraine, angina pain, and urinary tract pain, including cystitis pain And may also include trauma or pain.

본 명세서에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 통증의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "prevention" means any action that inhibits the symptoms of pain or delays progression by administration of a composition according to the invention.

본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 통증의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "treatment" refers to any action by which administration of a composition according to the present invention improves or advantageously alters the symptoms of pain.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효 성분으로 포함하는 통증 억제용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for inhibiting pain, comprising 17R resolbin D1 or a salt thereof as an active ingredient.

17R 레졸빈 D1은 하기 [화학식 1]의 구조를 갖는다. 17R resolbin D1 has a structure of the following [Formula 1].

상기 통증은 TRPV3 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. The pain is preferably based on TRPV3 activity, but is not limited thereto.

본 발명의 한 구현예에서는 TRPV3 특이적 활성제로 알려진 화합물 (예를 들면, 캄파, 멘톨, 2-APB (2-aminoethoxydiphenyl borate; 이하 2-APB라고 한다)과 열자극에 의해 증가된 활성을 상기 17R 레졸빈 D1이 억제하는 것을 확인하였다 (도 1 및 도 2 참조). 또, 17R 레졸빈 D1은 TRPV3을 선택적으로 억제하는 것을 확인하였다 (도 3a 참조). In one embodiment of the present invention, a compound known as a TRPV3-specific activator (eg, camphor, menthol, 2-APB (2-aminoethoxydiphenyl borate; hereinafter 2-APB)) and thermal stimulation increased activity of the 17R. It was confirmed that resolbin D1 inhibited (see Figs. 1 and 2.) In addition, it was confirmed that 17R resolbin D1 selectively inhibited TRPV3 (see Fig. 3A).

또한, 본 발명의 다른 한 구현예에서는 17R 레졸빈 D1이 동물모델에서 Complete Freund's Adjuvant (CFA)에 의한 염증시 열자극에 대한 과도한 감수성을 회복시킴을 확인하였다 (도 6 참조). 또한 이러한 열자극에 의한 감수성은 TRPV1 결핍 쥐에게서도 유사한 결과를 확인할 수 있었으며, 이는 17R 레졸빈 D1이 TRPV3 의존적으로 열자극을 억제한다는 것을 의미한다. In another embodiment of the present invention, it was confirmed that 17R resolbin D1 restores excessive sensitivity to heat stimulation upon inflammation by Complete Freund's Adjuvant (CFA) in an animal model (see FIG. 6). In addition, the susceptibility caused by heat stimulation was similar in TRPV1 deficient mice, indicating that 17R resolbin D1 inhibits heat stimulation in a TRPV3-dependent manner.

따라서 본 발명의 17R 레졸빈 D1은 열자극 통증을 유발하는 TRPV3의 활성을 유의적으로 저해시켜 이에 의해 유발되는 열자극 통증을 효과적으로 저해할 수 있으므로 열자극 통증의 억제, 또는 열자극 통증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. Therefore, 17R resolbin D1 of the present invention can significantly inhibit the activity of TRPV3 causing heat stimulation pain and effectively inhibit the heat stimulation pain caused by it, thereby suppressing heat stimulation pain, or preventing heat stimulation pain and It can be seen that it can be usefully used for treatment.

상기 17R 레졸빈 D1은 염의 형태로 사용될 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 포함된다. 이때 허용가능한 염으로는 유리산 (free acid)에 의해 형성된 부가염이 유용하다. 적합한 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산 및 인산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 구연산 (citric acid), 초산, 젖산, 주석산 (tartariac acid), 말레인산, 푸마르산 (fumaric acid), 포름산, 프로피온산 (propionic acid), 옥살산, 트리플루오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. The 17R resolbin D1 may be used in the form of a salt, and includes all salts, hydrates, and solvates prepared by conventional methods. As the acceptable salt, addition salts formed by free acid are useful. Suitable free acids can be used organic and inorganic acids, inorganic acids can be hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid, etc. As organic acids citric acid, acetic acid, lactic acid, tartariac acid, maleic acid, Fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, galluxuronic acid, embonic acid, glutamic acid or aspartic acid Etc. may be used, but the present invention is not limited thereto.

본 발명의 통증 억제용 조성물은 17R 레졸빈 D1외에 추가적으로 그와 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 더 포함할 수도 있다. The composition for inhibiting pain of the present invention may further include one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to 17R resolbin D1.

본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. Compositions according to the present invention may be used in the form of oral dosage forms, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions in accordance with conventional methods, but is not limited thereto. It doesn't work.

경구투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. Solid preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, pills and the like. Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, syrups, and the like, and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents.

비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액,액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. Preparations for parenteral administration include powders, granules, tablets, capsules, sterile aqueous solutions, solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, syrups, suppositories, aerosols, etc. It may be used in the form of a formulation, and preferably, an external skin pharmaceutical composition of cream, gel, patch, spray, ointment, warning agent, lotion agent, linen agent, pasta agent or cataplasma agent may be prepared and used. It is not limited to this.

비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like may be used, but are not limited thereto.

좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like may be used, but are not limited thereto.

본 발명에 따른 조성물은 통상적으로 사용되는 담체, 부형제, 희석제, 붕해제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. The composition according to the present invention may further comprise conventionally used carriers, excipients, diluents, disintegrants and the like. The carrier, excipient and diluent may include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxy benzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The disintegrants include sodium starch glycolate, crospovidone, croscarmellose sodium, alginic acid, carboxymethyl cellulose calcium, carboxymethyl cellulose sodium, chitosan, guar gum, low-substituted hydroxypropyl cellulose, magnesium aluminum silicate, and polyacryline Potassium and the like.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강사태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 구체적으로는 본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 17R 레졸빈 D1 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 내지 1 중량%로, 바람직하게는 0.0001 내지 0.1 중량% 를 포함하며 하루 1~6회 투여될 수 있다. The dosage of the composition of the present invention varies depending on the weight, age, sex, health situation, diet, time of administration, method of administration, rate of excretion and severity of the patient. Specifically, the composition of the present invention comprises 1 wt% to 17 wt% of 17R resolbin D1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, preferably 0.0001 to 0.1 wt%, based on the total weight of the composition, 1 to 6 times a day. May be administered.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. In addition, the composition according to the present invention may be administered orally or parenterally, and when parenteral administration is selected for external skin or intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method. It is preferable.

본 발명에 따른 조성물은 통증의 예방 및 치료를 위해 단독으로, 또는 수술, 방사선치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. The composition according to the invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the prevention and treatment of pain.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 통증 억제 방법을 제공한다. The present invention also provides a method of inhibiting pain, comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of 17R resolbin D1 or a salt thereof.

본 발명의 한 구현예에 따르면 17R 레졸빈 D1은 통증을 유발하는 TRPV3의 활성을 유의적으로 저해할 수 있으므로 (도 1 내지 6 참조) 통증의 억제, 또는 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 이는 곧, 17R 레졸빈 D1을 개체에 투여하는 방법으로 통증을 억제, 또는 예방 및 치료할 수 있음을 의미한다. According to one embodiment of the present invention, 17R resolbin D1 may significantly inhibit the activity of TRPV3 causing pain (see FIGS. 1 to 6), and thus may be useful for suppressing, preventing, or treating pain. This means that administration of 17R resolbin D1 to a subject can inhibit, prevent or treat pain.

상기 개체는 척추동물이고, 바람직하게는 인간을 제외한 척추동물이며, 더욱 바람직하게는 인간을 제외한 포유동물이다. 구체적으로는 쥐, 토끼, 기니피그, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물을 예로 들 수 있다. The subject is a vertebrate, preferably a vertebrate except human, more preferably a mammal except human. Specifically, experimental animals such as rats, rabbits, guinea pigs, hamsters, dogs, and cats, and most preferably, ape-like animals such as chimpanzees and gorillas are mentioned.

또한, 투여방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 복강내주사, 직장주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내주사, 자궁내 경막 주사, 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다. In addition, the method of administration may be administered orally or parenterally, intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intrauterine epidural injection, intracerebroventricular injection or intrathoracic injection It can be administered by injection.

또한, 상기 17R 레졸빈 D1 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 통증 억제를 위하여 상기 개체에 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. In addition, the 17R resolbin D1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be used alone or in combination with methods of using surgery, hormonal therapy, drug treatment and biological response modulators for pain inhibition.

본 발명에서 통증의 치료 및 예방에 사용되는 약학적으로 유효한 양은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 1일 100 ng/kg 내지 10000 ng/kg으로, 바람직하게는 100 ng/kg 내지 10000 ng/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. The pharmaceutically effective amount used for the treatment and prevention of pain in the present invention depends on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the drug form, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. However, it is preferable to administer 100 ng / kg to 10000 ng / kg, preferably 100 ng / kg to 10000 ng / kg per day for the desired effect. The administration may be carried out once a day or divided into several times.

또한, 본 발명은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 이용한 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for screening pain inhibitors using 17R resolbin D1 or salts thereof.

본 발명의 구현예에서는 TRPV3 특이적 활성제로 알려진 화합물과 열자극에 의해 증가된 활성을 17R 레졸빈 D1이 TRPV3 선택적으로 억제하는 것을 확인하였으므로, TRPV3 과발현 형질세포주에서 TRPV3 활성제에 의해 증가된 TRPV3 활성에 대한 17R 레졸빈 D1의 억제효과와 비교하여 이와 유사하거나 보다 높은 억제 효과를 갖는 물질을 선별함으로써 TRPV3에 의해 매개되는 통증을 억제하는 통증 예방 및 치료제를 스크리닝 할 수 있다. In the embodiment of the present invention, it was confirmed that 17R resolbin D1 selectively inhibits TRPV3 activity by a compound known as a TRPV3 specific activator and thermal stimulation. Therefore, TRPV3 activity is increased by TRPV3 activator in TRPV3 overexpressing plasma cell line Screening for pain prevention and therapeutic agents that inhibit pain mediated by TRPV3 can be screened by screening for substances with similar or higher inhibitory effects compared to the inhibitory effect of 17R resolbin D1.

구체적으로는,Specifically,

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 2)의 피검물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사 산물, 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. In the screening method, the test substance of step 2) is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi, and bioactive molecules. It is preferably one or two or more substances selected, but is not limited thereto.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 1)의 숙주세포는 바람직하게는 HEK 세포주, CHO 세포주, HeLa 세포주, RBL-2H3 세포주를, 더 바람직하게는 HEK 세포주를 이용하는 것이 좋지만 이에 한정되지는 않고, 이온 채널 활성 연구 및 고효율 억제제 검색에 이용할 수 있는 세포주라면 모두 이용 가능하다. In the screening method, the host cell of step 1) is preferably HEK cell line, CHO cell line, HeLa cell line, RBL-2H3 cell line, more preferably using HEK cell line, but not limited thereto, ion channel activity Any cell line that can be used for research and high efficiency inhibitor screening is available.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 2)의 TRPV3 특이적 활성제는 캄파, 멘톨 또는 2-APB로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것이 바람직하지만 이에 한정되지는 않는다. In the screening method, the TRPV3 specific active agent of step 2) is preferably, but not limited to, one or two or more substances selected from the group consisting of camphor, menthol or 2-APB.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 3)의 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 및 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지는 않는다. In the above screening method, the measurement of the ion channel activity of step 3) is preferably performed by whole cell voltage clamp technique and calcium imaging, but is not limited thereto.

상기 통증은 TRPV3의 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정하지는 않는다. The pain is preferably based on the activity of TRPV3, but is not limited thereto.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 2)의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염은 (100 nM 내지 3 μM의 농도)로 처리하는 것이 바람직하지만 이에 한정되지는 않는다. In the above screening method, 17R resolbin D1 or a salt thereof of step 2) is preferably treated with (concentration of 100 nM to 3 μM), but is not limited thereto.

또, 본 발명은 TRPV3를 발현하는 분리된 피부 세포에 상기 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 처리하는 단계를 포함하는 TRPV3의 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명의 한 구현예에서는 TRPV3 특이적 활성제로 알려진 캄파에 의해 증가된 활성을 상기 17R 레졸빈 D1이 억제하는 것을 확인하였다 (도 5 참조). In another aspect, the present invention provides a method for inhibiting the activity of TRPV3 comprising the step of treating the 17R resolbin D1 or salts thereof in isolated skin cells expressing TRPV3. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that the 17R resolbin D1 inhibited the activity increased by camphor known as TRPV3 specific activator (see FIG. 5).

이때 상기 17R 레졸빈 D1은 피부세포에 (100 nM 내지 3 μM의 농도)로 처리하는 것이 바람직하나 이에 한정되지는 않는다. At this time, the 17R resolbin D1 is preferably treated with skin cells (concentration of 100 nM to 3 μM), but is not limited thereto.

또한 본 발명은 17R 레졸빈 D1을 이용한 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for screening inhibitors of TRPV3 activity using 17R resolbin D1.

구체적으로는, Specifically,

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 1)의 숙주세포는 바람직하게는 HEK 세포주, CHO 세포주, HeLa 세포주, RBL-2H3 세포주를, 더 바람직하게는 HEK 세포주를 이용하는 것이 좋지만 이에 한정되지는 않고, 이온 채널 활성 연구 및 고효율 억제제 검색에 이용할 수 있는 세포주라면 모두 이용 가능하다.In the screening method, the host cell of step 1) is preferably HEK cell line, CHO cell line, HeLa cell line, RBL-2H3 cell line, more preferably using HEK cell line, but not limited thereto, ion channel activity Any cell line that can be used for research and high efficiency inhibitor screening is available.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 2)의 후보물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사 산물, 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. In the screening method, the candidate of step 2) is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi, and bioactive molecules. It is preferably one or two or more substances selected, but is not limited thereto.

상기 스크리닝 방법에 있어서, 단계 2)의 17R 레졸빈 D1은 (100 nM 내지 3 μM)의 농도로 처리하는 것이 바람직하지만 이에 한정되지는 않는다. In the above screening method, 17R resolbin D1 in step 2) is preferably treated at a concentration of (100 nM to 3 μM), but is not limited thereto.

본 발명의 구현예에서는 17R 레졸빈 D1이 TRPV3만을 선택적으로 억제한다는 것을 확인하였으므로, TRPV3가 과발현된 형질세포주에서 TRPV3 활성제에 의해 증가된 TRPV3 활성에 대한 17R 레졸빈 D1의 억제효과와 비교하여 이와 유사하거나 이보다 높은 억제 효과를 갖는 피검물질을 선별함으로써 TRPV3 활성 억제제를 스크리닝 할 수 있음을 알 수 있다. Embodiments of the present invention have confirmed that 17R resolbin D1 selectively inhibits only TRPV3, similar to the inhibitory effect of 17R resolbin D1 on TRPV3 activity increased by TRPV3 activator in TRPV3 overexpressed plasma cell lines. It can be seen that screening TRPV3 activity inhibitors can be achieved by screening for test substances that have a higher or higher inhibitory effect.

또한 본 발명은 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 통증 개선용 건강식품을 제공한다. 상기 통증은 TRPV3 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하지만, 이에 한정되지는 않는다. In another aspect, the present invention provides a health food for pain improvement containing 17R resolbin D1 or salts thereof as an active ingredient. The pain is preferably based on TRPV3 activity, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 17R 레졸빈 D1 또는 그 염은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 원료에 대하여 0.2 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.24 내지 10 중량%로 첨가한다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취시 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있고, 안전성 면에서 아무런 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수도 있다. The 17R resolbin D1 or a salt thereof of the present invention may be added to a food as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed may be appropriately determined depending on the purpose of use thereof. Generally, 17R resolbin D1 or a salt thereof is added in an amount of 0.2 to 20% by weight, preferably 0.24 to 10% by weight based on the raw material in the manufacture of food or beverage. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

본 발명의 건강식품은 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01~0.04 중량부, 바람직하게는 약 0.02~0.03 중량부 범위에서 선택하는 것이 바람직하다. The health food of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates and the like as additional ingredients. The above-mentioned natural carbohydrates are sugars such as monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The ratio of the natural carbohydrate is preferably selected in the range of 0.01 to 0.04 parts by weight, preferably about 0.02 to 0.03 parts by weight, per 100 parts by weight of the health food of the present invention.

본 발명의 상기 외에 건강식품은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.0001~0.001 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. In addition to the above, the health food includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, And a carbonation agent used for the carbonated beverage. In addition, the health food of the present invention may contain a flesh for producing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. Although the ratio of such an additive is not critical, it is generally selected in the range of 0.0001 to 0.001 parts by weight per 100 parts by weight of the health food of the present invention.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 소세지, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 유제품, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다. There is no particular limitation on the kind of the food. Examples of foods to which the substance may be added include drinks, sausages, chocolates, candy, snacks, sweets, gums, dairy products including ice cream, beverages, alcoholic beverages, and vitamin complexes. It includes everything.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<< 실시예Example 1> 1> TRPV3TRPV3 형질전환 세포주 제조 Transformation cell line preparation

HEK293 세포주 (ATCC CRL-11268)를 hTRPV3 (서열번호 3)의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드 DNA를 이용하여 일시적 (transiently)으로 형질전환하였다. The HEK293 cell line (ATCC CRL-11268) was transformed transiently using plasmid DNA containing the polynucleotide of hTRPV3 (SEQ ID NO: 3).

구체적으로, HEK293T 세포주를 각각 24 웰 플레이트 당 0.8 ㎍의 hTRPV3의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 pcDNA5/FRT 벡터 및 0.2 ㎍/웰의 pCDNA3 (Invitrogen Corp., USA; 녹색 형광 단백질 cDNA 포함)로 Fugene HD (Roche Diagnostics, 미국)를 이용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 형질전환하였다. 상기 형질전환된 세포를 24 시간 동안 CO₂인큐베이터에서 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하고, 폴리-L-오르트린 코팅된 유리 커버 슬립에 도말한 후, 10 내지 24 시간 동안 추가 배양하였다. Specifically, HEK293T cell lines were each prepared with Fugene HD (Roche) with pcDNA5 / FRT vector containing 0.8 μg of hTRPV3 polynucleotide per 24 well plate and 0.2 μg / well of pCDNA3 (Invitrogen Corp., USA; with green fluorescent protein cDNA). Diagnostics, USA) were used to transform according to the manufacturer's protocol. The transformed cells were incubated in DMEM medium containing 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin in a CO ₂ incubator for 24 hours, plated on a poly-L-orthrin coated glass cover slip, and then 10 to Further incubation for 24 hours.

이하, 모든 실시예의 실험 결과는 양측 꼬리 (two-tailed), 쌍을 이루지 않은 (unpaired) 스튜던트 검정 (Student's t-test)을 이용하여 통계적으로 분석하였고, 평균±S.E.M.의 형태로 나타내었다. 또한, **P <0.01 및 *P <0.05였다. Hereinafter, the experimental results of all the examples were statistically analyzed using a two-tailed, unpaired Student's t-test, and are expressed in the form of mean ± S.E.M. In addition, ** P <0.01 and * P <0.05.

<< 실시예Example 2> 피부 세포의 준비 2> Preparation of Skin Cells

피부세포는 HaCat human keratinocyte cell line 을 사용했으며 세포는 CO₂인큐베이터에서 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지에서 배양했다. Skin cells were used in HaCat human keratinocyte cell line and cells were cultured in DMEM medium containing 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin in CO ₂ incubator.

<< 실시예Example 3> 3> TRPV3TRPV3 억제제에 의한 By inhibitor TRPV3TRPV3 의 활성화 변화 조사Investigation of activation

<3-1> 화학물질 처리<3-1> Chemical Treatment

실시예 1의 방법으로 제조한 hTRPV3 형질전환 세포주에 4 mM 캄파 (camphor;MP Biomedicals, USA), 2 mM 멘톨 (menthol;MP Biomedicals, USA), 30 μM 2-APB (Cayman Biochemicals, USA)를 처리한 후, 상기 약물 처리기간 중 일부 기간 동안, 0.3 μM 또는 3 μM 17R 레졸빈 D1 (17R Resolvin D1: Cayman biochem, USA)을 함께 처리하였다. 상기 화학물질들의 저장 용액은 에탄올을 이용하여 제조하였고, 사용하기 직전에 검사용액으로 희석하여 사용하였다. The hTRPV3 transformed cell line prepared by the method of Example 1 was treated with 4 mM camphor (MP Biomedicals, USA), 2 mM menthol (MP Biomedicals, USA), 30 μM 2-APB (Cayman Biochemicals, USA) Then, during some of the drug treatment period, 0.3 μM or 3 μM 17R Resolvin D1 (17R Resolvin D1: Cayman biochem, USA) was treated together. The stock solution of the chemicals was prepared using ethanol and diluted with test solution immediately before use.

<3-2> 칼슘 이미지화를 이용한 세포 내 칼슘수준변화 측정<3-2> Intracellular Calcium Level Change Using Calcium Imaging

상기 실시예 3-1의 화학물질 처리 방법으로 처리된 형질전환 세포주에 칼슘 이미지화를 수행하였다. Calcium imaging was performed on the transformed cell lines treated by the chemical treatment method of Example 3-1.

구체적으로, 0.02% 풀루로닉산 (pluronic acid; Invitrogen, USA)을 포함하는 배스 용액 (bath solution; 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl₂ _,2mMMgCl₂ _,10mMHEPES을 포함하고 NaOH를 이용하여 pH 7.4로 적정)에서 상기 실시예 4-1의 방법으로 처리된 형질전환 세포에 Fura2-AM (5 μM; invitorgen, USA)을 37에서 1시간 동안 주입하였다. 이후, fura2 calcium image system olympus 형광 현미경 (Olympus, 일본)을 이용하여 칼슘 이미지화 (Calcium imaging)를 수행하였고, Meta flow (Morecular device, 미국)를 이용하여 촬영이미지 (time-lapse image; 340 ㎚/380 ㎚)를 매 3초마다 측정하여 그 비율로 나타내었다. Specifically, the bath solution containing 0.02% pluronic acid (Invitrogen, USA) (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl ₂ _, 2mMMgCl ₂ _, 10mMHEPES and using NaOH pH Titrated to 7.4), Fura2-AM (5 μM; invitorgen, USA) was injected into the transformed cells treated by the method of Example 4-1 for 37 to 1 hour. Afterwards, calcium imaging was performed using a fura2 calcium image system olympus fluorescence microscope (Olympus, Japan) and time-lapse image (340 nm / 380) using Meta flow (Morecular device, USA). Nm) was measured every 3 seconds and expressed as a ratio.

그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 17R 레졸빈 D1은 TRPV3의 활성화를 억제함을 확인하였다. As a result, as shown in Figure 1 17R resolbin D1 was confirmed to inhibit the activation of TRPV3.

<3-3> 전기 생리학적인 방법으로 세포 내 채널의 활성 측정<3-3> Measurement of intracellular channel activity by electrophysiological method

상기 실시예 3-1의 방법으로 처리된 형질전환 세포에 전기 생리학적인 측정을 수행하였다. Electrophysiological measurements were performed on the transformed cells treated by the method of Example 3-1.

구체적으로, 세포외 용액인 배스 용액 (bath solution)의 조성은 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 2mM MgCl₂, 10mM HEPES를 포함하고 NaOH를 이용하여 pH 7.4로 조정하였다. 그리고 유리 피펫에 사용된 피펫 용액 (pipet solution)의 조성은 140 mM CsCl, 10 mM EGTA, 10 mM HEPES를 포함하고 pH 7.4로 조정하였다. 이런 용액하에서 세포에 존재하는 이온 채널의 활성은 유리 피펫을 이용하여 측정하였고 세포는 상기 실시예 1의 방법으로 처리된 형질전환 세포를 사용하였다. 이후, 패치 클램프 세트 (patch clamp set)를 이용하여 전체 세포 패치 클램프 (whole cell patch clamp)를 실시하였고, 이중 전압 전류 상관 곡선을 이용하여 이온 채널 특이적인 반응임을 확인함과 동시에 17R 레졸빈 D1이 이온 채널을 효과적으로 억제함을 나타내었다. 패치 클램프 세트는 multiclamp 700B (molecular device, 미국)을 이용하여 미세한 신호를 증폭하고, digidata1332a (Molecular device, 미국)를 이용하여 아날로그 신호를 디지털화하였다. pClamp 10 (Molecular device, 미국)을 이용하여 데이터를 수집 및 기계를 조작했고 clemp X-10 (Molecular device, 미국)을 이용하여 데이터를 편집했다. Specifically, the composition of the extracellular bath solution (bath solution) contains 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl ₂ , 2 mM MgCl ₂ , 10 mM HEPES and adjusted to pH 7.4 using NaOH. And the composition of the pipette solution (pipet solution) used in the glass pipette contains 140 mM CsCl, 10 mM EGTA, 10 mM HEPES and adjusted to pH 7.4. The activity of the ion channels present in the cells under this solution was measured using a glass pipette and the cells were using transformed cells treated by the method of Example 1 above. Subsequently, a whole cell patch clamp was performed using a patch clamp set, and a double voltage current correlation curve was used to confirm that the ion channel-specific reaction and 17R resolbin D1 was performed. It has been shown to effectively inhibit ion channels. The patch clamp set amplifies fine signals using a multiclamp 700B (molecular device, USA), and digitized the analog signal using digidata1332a (Molecular device, USA). Data was collected and manipulated using pClamp 10 (Molecular device, USA) and data was edited using clemp X-10 (Molecular device, USA).

그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이 17R 레졸빈 D1은 TRPV3 채널을 억제함을 확인하였다. As a result, as shown in Figure 2 17R resolbin D1 was confirmed to inhibit the TRPV3 channel.

<< 실시예Example 4> 17R 4> 17R 레졸빈Resorbin D1D1 의 of TRPV3TRPV3 에 대한 선택적 억제 반응 조사Selective Inhibition Response to

실시예 1의 방법으로 제조한 rTRPV1 (서열번호 1), rTRPV2 (서열번호 2), hTRPV3 (서열번호 3), rTRPV4 (서열번호 4), mTRPA1 (서열번호 5) 및 mTRPM8 (서열번호 6) 형질전환 세포주에 {3 mM} 17R 레졸빈 D1을 처리하였다. 이후 실시예 3-2의 방법으로 칼슘 이미지화를 수행하였다. RTRPV1 (SEQ ID NO: 1), rTRPV2 (SEQ ID NO: 2), hTRPV3 (SEQ ID NO: 3), rTRPV4 (SEQ ID NO: 4), mTRPA1 (SEQ ID NO: 5) and mTRPM8 (SEQ ID NO: 6) Converting cell lines were treated with {3 mM} 17R resolbin D1. Calcium imaging was then performed by the method of Example 3-2.

17R 레졸빈 D1은 통증 전달에 관여하는 것으로 알려진 6개의 TRP 중에서 TRPV3만을 선택적으로 억제하였으나 (도 3a 참조), 17s 레졸빈은 TRPV3 뿐만 아니라 TRPV4, TRPA1을 동시에 억제하는 것을 확인할 수 있었다 (도 3b 참조). 17R resolbin D1 selectively inhibited only TRPV3 out of six TRPs known to be involved in pain delivery (see FIG. 3A), while 17s resolbin inhibited TRPV4 and TRPA1 as well as TRPV3 (see FIG. 3B). ).

따라서 17R 레졸빈 D1은 선택적인 TRPV3 억제제로서 본 발명에 따른 효과를 얻을 수 있음을 알 수 있다. Therefore, it can be seen that 17R resolbin D1 can obtain the effect according to the present invention as a selective TRPV3 inhibitor.

<< 실시예Example 5> 5> TRPV3TRPV3 의 17R Of 17R 레졸빈Resorbin D1D1 농도 의존적 반응 조사 Concentration-dependent reaction investigation

실시예 1의 방법으로 제조한 TRPV3 형질전환 세포주에 0.1 내지 10 μM 17R 레졸빈 D1을 각각 처리한 후, 실시예 3-2의 방법으로 칼슘 이미지화를 수행하였다. 이후, 측정값을 Hill-plot을 이용하여 농도-반응 곡선으로 작성하였다. The TRPV3 transformed cell line prepared by the method of Example 1 was treated with 0.1 to 10 μM 17R resolbin D1, respectively, and then calcium imaging was performed by the method of Example 3-2. Then, the measured value was prepared as a concentration-response curve using Hill-plot.

그 결과, 도 4에서 나타난 바와 같이 17R 레졸빈 D1의 TRPV3에 대한 IC₅₀은 대략 397 nM이었고, N 값은 1.13이었다As a result, as shown in FIG. 4, the IC ₅₀ for TRPV3 of 17R resolbin D1 was approximately 397 nM and the N value was 1.13.

<< 실시예Example 6> 6> 피부세포에서의In skin cells 17R 17R 레졸빈Resorbin D1D1 의 특이적 반응 조사Specific response of

실시예 2에서와 같이 culture 한 HaCat 피부세포는 17R 레졸빈 D1과 캄파 함께 처리하였다. 상기 방법으로 처리된 세포에 실시예 3-2의 방법으로 칼슘 이미지화를 수행하였다. HaCat skin cells cultured as in Example 2 were treated with 17R resolbin D1 and camphor. Calcium imaging was performed by the method of Example 3-2 on the cells treated by the above method.

그 결과, (도 5 참조)에서 나타난 바와 같이 17R 레졸빈 D1은 피부세포에서도 TRPV3 활성화를 효과적으로 억제함을 확인하였다. As a result, as shown in (see FIG. 5), it was confirmed that 17R resolbin D1 effectively inhibits TRPV3 activation in skin cells.

<< 실시예Example 7> 7> 동물통증행동실험을Animal Pain Behavior Experiment 통한 17R Via 17R 레졸빈Resorbin D1D1 통증억제 반응 조사 Pain suppression response investigation

염증 유발 및 Inflammation and 열자극에In thermal stimulation 의한 행동 분석 Behavior analysis

하기 실험군의 뒷발에 CFA (Sigma, USA)를 10 ul씩 주입한 후 24 시간 후에 열자극 기계 장치를 이용하여 주사한 후 자극에 대해 회피하는 시간을 측정하였다. 열자극 기계 장치는 Hagrvess test (Ugo bassle, Italy)를 사용하였고 IR 강도는 30을 사용했다. 실험 마우스는 각각 무작위로 실험 약물 및 대조 약물을 주입한 후 무작위로 3회 각각 측정한 후 통계 처리하였다. After injecting 10 μl of CFA (Sigma, USA) into the hind paws of the following experimental group, the time of avoiding stimulation after injection using a thermal stimulation machine was measured 24 hours later. The thermal stimulation machine used the Hagrvess test (Ugo bassle, Italy) and an IR intensity of 30. Experimental mice were randomly injected with experimental drug and control drug, respectively, and then randomly measured 3 times and statistically treated.

대조군 : 무처리;Control group: no treatment;

실험군 1. 30 μM 의 17R 레졸빈 D1;Experimental group 1. 30 μM of 17R resolbin D1;

실험군 2. 24H CFA;Experimental Group 2. 24H CFA;

실험군 3. 24H CFA + 17R 레졸빈 D1;Experimental Group 3. 24H CFA + 17R Resolbin D1;

실험군 4. TRPV1 결핍 마우스 + 30 μM 의 17R 레졸빈 D1Experimental group 4. TRPV1 deficient mice + 30 μM of 17R resolbin D1

실험군 5. TRPV1 결핍 마우스 + 24H CFA;Experimental Group 5. TRPV1 Deficient Mice + 24H CFA;

실험군 6. TRPV1 결핍 마우스 + 24H CFA + 17R 레졸빈 D1;Experimental group 6. TRPV1 deficient mice + 24H CFA + 17R resolbin D1;

그 결과, 도 6에서 나타난 바와 같이 17R 레졸빈 D1은 염증 유발 전에는 감각이상을 보이지 않았고, 염증을 유발한 후에는 염증에 의해 비정상적으로 짧아진 열자극에 의한 회피 시간을 통계적으로 유의성 있게 회복시키는 효과를 보였다. As a result, as shown in FIG. 6, 17R resolbin D1 did not show any sensory abnormalities before inducing inflammation, and statistically significant recovery of avoidance time due to heat stimulation abnormally shortened by inflammation after inducing inflammation. Showed.

<< 제조예Manufacturing example 1> 17R 1> 17R 레졸빈Resorbin D1D1 또는 그 염의 Or salts thereof 제형화Formulation

1. 산제의 제조1. Preparation of powder

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.002 g17R resolbin D1 or its salt 0.002 g

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다. The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

2. 정제의 제조2. Preparation of Tablets

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.01 ㎎17R resolbin D1 or its salt 0.01 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유 당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다. After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

3. 캡슐제의 제조3. Preparation of Capsule

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.01 ㎎17R resolbin D1 or its salt 0.01 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유 당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다. After mixing the above components, the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.

4. 환의 제조4. Manufacture of rings

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.01 ㎎17R resolbin D1 or its salt 0.01 mg

유당 1.5 gLactose 1.5 g

글리세린 1 g1 g of glycerin

자일리톨 0.5 gXylitol 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환당 4 g이 되도록 제조하였다. After mixing the above components, it was prepared to be 4 g per ring in a conventional manner.

5. 과립의 제조5. Preparation of Granules

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.01 ㎎17R resolbin D1 or its salt 0.01 mg

대두 추출물 50 ㎎Soybean Extract 50mg

포도당 200 ㎎Glucose 200 mg

전분 600 ㎎Starch 600 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다. After mixing the above components, 100 mg of 30% ethanol was added and dried at 60 ° C. to form granules, and then filled in fabric.

<제조예 2> 식품의 제조 Preparation Example 2 Preparation of Food

1. 유제품의 제조1. Manufacture of dairy products

본 발명의 17R 레졸빈 D1 또는 그 염 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다. 5-10 parts by weight of 17R resolbin D1 or salts thereof of the present invention was added to milk, and various milk products such as butter and ice cream were prepared using the milk.

2. 음료의 제조2. Manufacture of beverage

17R 레졸빈 D1 또는 그 염 0.01 ㎍0.01 g of 17R resolbin D1 or salts thereof

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g oligosaccharides

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 g1 g of taurine

정제수를 가하여 전체 900 ㎖Purified water was added to a total of 900 ml

통상의 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
After mixing the above components according to the conventional beverage production method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and then refrigerated and stored in the present invention Used to prepare beverage compositions. Although the composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and intended use.

서열목록 전자파일 첨부Attach an electronic file to a sequence list

Claims

삭제delete

1) TRPV3을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;
2) 상기 형질전환체에 실험군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 피검물질을 처리하고, 대조군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 각각 처리하는 단계;
3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPV3 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,
4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군 보다 낮거나 유사한 TRPV3 이온 채널 활성을 나타내는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 통증 억제제 스크리닝 방법.
1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPV3 is transduced into a host cell;
2) treating the transformants with TRPV3 specific activators and test substances as experimental groups, and treating TRPV3 specific activators with 17R resolbin D1 or salts thereof as controls;
3) measuring the TRPV3 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And
4) pain inhibitor screening method comprising comparing each measurement of step 3) and selecting a test substance exhibiting TRPV3 ion channel activity lower or similar to a control.

제5항에 있어서, 상기 피검물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사 산물, 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것을 특징으로 하는 통증 억제제 스크리닝 방법.
The method of claim 5, wherein the test substance is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi, and bioactive molecules. Pain inhibitor screening method, characterized in that the species or two or more substances.

제5항에 있어서, 상기 단계 2)의 TRPV3 특이적 활성제는 캄파, 멘톨, 2-APB로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것을 특징으로 하는 통증 억제제 스크리닝 방법.
The method of claim 5, wherein the TRPV3 specific active agent of step 2) is one or two or more substances selected from the group consisting of camphor, menthol and 2-APB.

제5항에 있어서, 단계 3)의 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 및 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것인 통증 억제제 스크리닝 방법.
The method of claim 5, wherein the measurement of ion channel activity of step 3) is performed by whole cell voltage clamp technique and calcium imaging.

제5항에 있어서, 상기 통증은 TRPV3 활성을 기반으로 하는 것을 특징으로 하는 통증 억제제 스크리닝 방법.
6. The method of claim 5, wherein said pain is based on TRPV3 activity.

삭제delete

1) TRPV3을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;
2) 상기 형질전환체에 실험군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 TRPV3 활성 억제제 후보물질을 처리하고, 대조군으로서 TRPV3 특이적 활성제와 17R 레졸빈 D1 또는 그 염을 각각 처리하는 단계;
3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPV3 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,
4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군 보다 낮거나 유사한 TRPV3 이온 채널 활성을 나타내는 TRPV3 활성 억제제 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법.
1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPV3 is transduced into a host cell;
2) treating the transformants with TRPV3 specific activators and TRPV3 activity inhibitor candidates as experimental groups, and treating TRPV3 specific activators with 17R resolbin D1 or salts thereof as a control group, respectively;
3) measuring the TRPV3 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And
4) TRPV3 activity inhibitor screening method comprising comparing each measurement of step 3) to select a TRPV3 activity inhibitor candidate exhibiting TRPV3 ion channel activity lower or similar to the control.

제11항에 있어서, 상기 TRPV3 활성 억제제 후보물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사 산물, 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것을 특징으로 하는 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법.
The method of claim 11, wherein the TRPV3 activity inhibitor candidate is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi, and bioactive molecules. TRPV3 activity inhibitor screening method, characterized in that one or two or more substances selected.

제11항에 있어서, 상기 단계 2)의 TRPV3 특이적 활성제는 캄파, 멘톨, 2-APB로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 물질인 것을 특징으로 하는 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법.
The method according to claim 11, wherein the TRPV3 specific active agent of step 2) is one or two or more substances selected from the group consisting of camphor, menthol and 2-APB.

제11항에 있어서, 단계 3)의 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 및 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것인 TRPV3 활성 억제제 스크리닝 방법.
The method of claim 11, wherein the measurement of ion channel activity of step 3) is performed by whole cell voltage clamp technique and calcium imaging.

삭제delete