KR101187715B1 - Novel TRPV3 inhibitor and use thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 새로운 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1) 활성 억제제 및 용도에 관한 것으로, 구체적으로 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 농도의존적으로 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 기계적 통증을 억제하므로, 상기 레졸빈 D1은 TRPA1 활성 억제제 및 TRPA1 매개 기계적 통증 억제제에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to novel TRPA1 (transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1) activity inhibitors and uses, specifically resolvin D1 (7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z). , 15E, 19Z-docosahexaenoic acid) concentration-dependently inhibited the increased TRPA1 activity by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells that overexpress TRPA1 and in spinal nerve ganglion sensory neurons. Since it suppresses mechanical pain, the resolbin D1 may be usefully used for TRPA1 activity inhibitors and TRPA1 mediated mechanical pain inhibitors.

레졸빈 D1(resolvin D1), TRPA1, TRPA1 활성 억제제, 기계적 통증 억제제. Resolvin D1, TRPA1, TRPA1 activity inhibitors, mechanical pain inhibitors.

Description

새로운 ＴＲＰＡ１ 활성 억제제 및 이의 용도{Novel TRPA１ inhibitor and use thereof}Novel TRPA1 inhibitor and use thereof

본 발명은 TRPA1 활성 억제제 및 TRPA1 매개 기계적 통증 억제제에 관한 것이다.The present invention relates to TRPA1 activity inhibitors and TRPA1 mediated mechanical pain inhibitors.

인체 생리학 및 약리학 분야의 연구를 통해 2003년에 말초감각 신경섬유에 존재하는 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1)이 발견되었다. 상기 TRPA1은 저온 자극, 염증성 자극 및 기계적 자극 등 다양한 자극을 감지하여 활성화되며, 상기 활성화에 의해 인체가 통증을 느끼게 된다. 특히 상기 TRPA1은 온도 및 통증유발 유해자극을 감지하는 통각수용체 군인 thermoTRP군(temperature-sensitive transient receptor potential ion channels)에 속해 있다. 통각수용체 TRPA1의 기능을 명확히 규명함으로써 인체의 통각 기전을 밝히고, 아울러 TRPA1 활성 조절 약물의 개발을 통해 통증 경감의 목표를 달성할 수 있으리라 예측하고 있다.Research in the fields of human physiology and pharmacology has led to the discovery of a transient receptor potential cation channel (subfamily A, member 1) in 2003 in peripheral sensory nerve fibers. The TRPA1 is activated by sensing various stimuli such as low temperature stimulation, inflammatory stimulation, and mechanical stimulation, and the human body feels pain by the activation. In particular, the TRPA1 belongs to the thermo-RPT group (temperature-sensitive transient receptor potential ion channels) for detecting temperature and pain-induced noxious stimuli. By elucidating the function of the nociceptor TRPA1, it is possible to clarify the mechanism of pain in the human body and to achieve the goal of pain relief through the development of TRPA1 activating drugs.

상기 TRPA1의 활성화 억제를 기전으로 하는 통증 억제제 개발에 쓰이는 기반 기술을 이해하기 위한 TRPA1의 특성은 다음과 같다. TRPA1은 이온채널이며, 이의 활성화를 통하여 양이온이 감각 신경세포 내부로 이동하고, 이에 의해 세포막 전류가 변화한다. 상기 세포막 전류의 변화에 의해 활동전압이 발생하고 이 전압신호가 궁극적으로 뇌로 전달되어 통증을 감지하는 것이다. 상기 TRPA1 활성화를 측정하는 기술로는 첫 번째, 세포막 전류를 증폭하여 그 변화를 측정할 수 있는 팻취클램프 전기생리학 기술과 두 번째, TRPA1이 칼슘 이온 등의 양이온을 이동시키는 데에서 착안한 세포내 칼슘 농도 변화 측정 기술이 있다. 첫 번째 기술의 경우 측정의 정밀도에 있어 두 번째 기술보다 우위에 있으며, 두 번째 기술의 경우, 첫 번째 기술 보다 고속 측정이 가능하다는 장점이 있어 서로 보완적이다. 또한, 상기 TRPA1 활성화 측정 기술들은 동물의 감각 신경세포 배양기술, 세포주 배양기술, TRPA1 DNA 관리 및 형질감염 기술이 뒷받침되어야 구현할 수 있다. 즉, 각종 TRPA1 특이적 억제제 후보물질들 및 표준 활성제를 TRPA1 과발현 세포에 각각 투여하고 TRPA1 활성화 억제 효과를 측정 및 비교함으로써, 억제제 여부 및 그 강력성을 측정할 수 있다.The characteristics of TRPA1 for understanding the underlying technology used in the development of pain inhibitors based on the inhibition of TRPA1 activation are as follows. TRPA1 is an ion channel through which its cation migrates into sensory neurons, thereby altering cell membrane currents. An action voltage is generated by the change of the cell membrane current, and this voltage signal is ultimately transmitted to the brain to sense pain. The first technique for measuring TRPA1 activation is a patch clamp electrophysiology technique that can amplify cell membrane currents and measure the change thereof, and second, intracellular calcium that TRPA1 focuses on transferring cations such as calcium ions. There is a concentration measurement technique. The first technique is superior to the second in terms of measurement accuracy, and the second technique is complementary because it has the advantage of allowing higher speed measurement than the first technique. In addition, the TRPA1 activation measurement techniques can be implemented only if supported by sensory nerve cell culture technology, cell line culture technology, TRPA1 DNA management and transfection technology of animals. That is, by administering various TRPA1-specific inhibitor candidates and standard active agents to TRPA1 overexpressing cells, respectively, and measuring and comparing the inhibitory effect of TRPA1 activation, whether or not the inhibitor can be determined and its potency.

레졸빈 D1(Resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)은 잠재적인 항-염증성 지질 매개물질이다. 레졸빈 D1은 15- 및 5-지방산화효소(lipoxygenase)에 의한 DHA의 산화에 의해 생리적으로 생성되는 오메가3 지방산 대사체이다. 또한 아스피린으로 처리된 시료로부터 레졸빈 D1의 17(R)-에피머(epimer)가 생성될 수도 있다. 상기 레졸빈 D1 및 이의 17(R) 구조는 급성 염증의 초기 반응인 인간 다핵성 백혈구(polymorphonuclear leukocyte; PMNL)가 혈관 내피 세포를 따라 이동하는 것을 30 nM의 EC50 수치로 감소시킨다. 또한, 레졸빈 D1 및 이의 아스피린에 의해 유도된 형태는 복막염에 걸린 뮤린 모델에서 백혈구 침투를 농도 의존적으로 감소시키며, 10-100 ng을 투여했을 때, 최대 35%까지 억제한다. 이와 같이 레졸빈 D1이 TRPA1의 활성을 조절한다는 것은 알려진바 없다.Resolvin D1 (7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid) is a potential anti-inflammatory lipid mediator. Resolbin D1 is an omega-3 fatty acid metabolite that is physiologically produced by the oxidation of DHA by 15- and 5-lipoxygenases. 17 (R) -epimer of resolbin D1 may also be produced from samples treated with aspirin. The resolbin D1 and its 17 (R) structure reduces the migration of human polymorphonuclear leukocytes (PMNL) along vascular endothelial cells, an early response to acute inflammation, to an EC 50 level of 30 nM. In addition, resolbin D1 and its aspirin-induced form reduces the leukocyte infiltration in a dose dependent manner in murine models with peritonitis and inhibits up to 35% when administered 10-100 ng. As such, it is not known that resolbin D1 modulates the activity of TRPA1.

이에 본 발명자들은 TRPA1을 표적으로 하는 기계적 통증 억제제를 찾고자 연구하던 중, 레졸빈 D1이 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 농도의존적으로 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 기계적 통증을 억제하므로, 이를 TRPA1 활성 억제제 및 TRPA1 매개 기계적 통증 억제제에 이용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors have been searching for a mechanical pain inhibitor that targets TRPA1, and while resolvin D1 overexpresses TRPA1 in transfected cells and spinal cord nerve ganglion sensory neurons, the present inventors have shown increased TRPA1 activity by cinnamic aldehyde, which is known as TRPA1 activator. The present invention was completed by revealing that concentration-dependent inhibition and mechanical pain based on TRPA1 activity in animal models can be used for TRPA1 activity inhibitors and TRPA1 mediated mechanical pain inhibitors.

본 발명의 목적은 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)을 이용한 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1) 활성 억제제, TRPA1 활성 억제 방법, 및 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.An object of the present invention is TRPA1 (transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1 using resolvin D1; 7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid) ) Activity inhibitor, TRPA1 activity inhibition method, and activity inhibitor screening method.

본 발명의 또 다른 목적은 레졸빈 D1을 이용한 기계적 통증 억제제, 기계적 통증 억제 방법, 및 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a mechanical pain inhibitor, a mechanical pain suppression method, and a mechanical pain inhibitor screening method using resolbin D1.

본 발명의 또 다른 목적은 레졸빈 D1을 이용한 기계적 통증 개선용 건강식품을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a mechanical food for improving pain using resolbin D1.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)을 유효성분으로 함유하는 기계적 통증 억제용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is for the mechanical pain suppression containing resolvin D1 (resolvin D1; 7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid) as an active ingredient To provide a composition.

또한, 본 발명은 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1)을 발현하는 감각신경세포 또는 피부세포에 레졸빈 D1을 처리하는 단계를 포함하는 TRPA1의 활성 억제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for inhibiting activity of TRPA1 comprising treating resolvin D1 to sensory neurons or skin cells expressing TRPA1 (transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1).

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 레졸빈 D1을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 기계적 통증 억제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of inhibiting mechanical pain comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of resolbin D1.

또한, 본 발명은In addition,

1) TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPA1 is transduced into a host cell;

2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 처리하고, 대조군으로 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformants with TRPA1 specific activators and TRPA1 activity inhibitor candidates in an experimental group, and treating TRPA1 specific activators and resolbin D1 as control groups, respectively;

3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 이온 채널 활성을 나타내는 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공한다.4) A method for screening TRPA1 activity inhibitors comprising comparing the respective measurements of step 3) to select TRPA1 activity inhibitor candidates exhibiting TRPA1 ion channel activity that is lower or similar to the control.

또한, 본 발명은In addition,

1) TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPA1 is transduced into a host cell;

2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 피검화합물을 처리하고, 대조군으로 상기 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformant with a TRPA1-specific active agent and a test compound in an experimental group, and treating the TRPA1-specific active agent and resolbin D1 as a control group, respectively;

3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 이온 채널 활성을 나타내는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 기계적 통증 억제 제 스크리닝 방법을 제공한다.4) A method for screening a mechanical pain-inhibitor comprising comparing the respective measurements of step 3) to screening for test substances exhibiting TRPA1 ion channel activity lower or similar to the control.

아울러, 본 발명은 레졸빈 D1을 유효성분으로 함유하는 기계적 통증 개선용 건강식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a mechanical pain improvement health food containing resolbin D1 as an active ingredient.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 기계적 통증을 억제하므로, 상기 레졸빈 D1은 TRPA1 활성 억제제 및 기계적 통증 억제제에 유용하게 사용될 수 있다.Resolbin D1 of the present invention inhibits the increased TRPA1 activity by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and in posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses mechanical pain based on TRPA1 activity in animal models. The resolbin D1 may be usefully used in TRPA1 activity inhibitors and mechanical pain inhibitors.

이하, 본 발명에서 사용하는 용어를 정의한다.Hereinafter, terms used in the present invention are defined.

본 발명에서 사용되는 용어 "통증"은 통각수용기와 신경섬유로 구성된 구심성 신경로를 통하여 대뇌피질과 가장자리 계통영역과 맞닿은 부위를 자극함으로써 일어나는 모든 통각 및 감각 장애를 의미한다. 본 발명에서 사용된 "통증"이라는 용어는 모든 종류의 통증을 말하며, 신경병 통증 등의 만성 통증과, 수술후 통증, 만성 아래쪽 등 통증, 군발성 두통, 포진신경통, 환지통, 중추통, 치통, 신경병 통증, 오피오이드 내성통, 창자통, 외통, 뼈 외상통, 분만 및 출산 중 통증, 햇빛화 상을 비롯한 화상으로 초래되는 통증, 분만후통, 편두통, 협심통, 및 방광염통을 비롯한 요생식로 관련 통증을 포함하는 것이고, 또한 외상수용통 또는 통각을 포함한다.As used herein, the term "pain" refers to any pain and sensory impairment that occurs by stimulating areas in contact with the cerebral cortex and marginal systemic region through the afferent neuropath consisting of nociceptors and nerve fibers. The term "pain" used in the present invention refers to all kinds of pain, chronic pain, such as neuropathic pain, postoperative pain, chronic lower back pain, cluster headache, herpes neuralgia, ring pain, central pain, toothache, neuropathic pain Urinary tract-related pain, including opioid-resistant pain, intestinal pain, external pain, bone trauma, pain during delivery and childbirth, sunburn and other burns, postpartum pain, migraine, angina pain, and cystitis pain It also includes a traumatic container or pain.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 통증의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "prevention" means any action that inhibits the symptoms of pain or delays progression by administration of a composition of the present invention.

본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 통증의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "treatment" refers to any action in which the symptoms of pain improve or benefit from administration of a composition of the present invention.

본 발명에서 사용되는 용어 "동물"은 척추동물을 의미하며, 바람직하게는 척추동물은 포유동물을 의미한다. 본 발명에서 사용된 "동물"이라는 용어는 보다 고등 척추동물인 포유류를 포함하며, 이는 사람을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.As used herein, the term "animal" refers to vertebrates, preferably vertebrate refers to mammals. The term "animal" as used herein includes mammals that are higher vertebrates, including but not limited to humans.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)을 유효성분으로 함유하는 기계적 통증 억제용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for inhibiting mechanical pain containing resolvin D1 (7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid) as an active ingredient.

상기 레졸빈 D1은 하기 [화학식 1]로 구성된 화합물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:The resolbin D1 is preferably a compound composed of the following [Formula 1], but is not limited thereto.

Figure 112009057229817-pat00001
Figure 112009057229817-pat00001

상기 기계적 통증은 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1) 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The mechanical pain is preferably based on TRPA1 (Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1) activity, but is not limited thereto.

본 발명자들은 레졸빈 D1에 의한 TRPA1의 활성의 변화를 알아보기 위해, TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 TRPA1을 발현하는 척수후근신경절 감각 신경세포에 신남알데히드와 레졸빈 D1을 함께 처리하여 팻취클램프 기법의 일종인 전세포 전압 클램프 실험 및 세포내 칼슘 농도 변화 측정 기술의 일종인 칼슘 이미지화를 실시하였다. 그 결과, TRPA1 특이적 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1의 활성을 상기 레졸빈 D1이 억제하는 것으로 나타났다(도 1, 도 2 및 도 4 참조). In order to investigate the change of TRPA1 activity by resolbin D1, the present inventors treated the cinnamic aldehyde and resolbin D1 together with transformed cells overexpressing TRPA1 and spinal cord muscle ganglion sensory neurons expressing TRPA1. The whole cell voltage clamp experiment, which is one of the two types, and calcium imaging, which is one of the measurement techniques of intracellular calcium concentration change, were performed. As a result, it was shown that the resolbin D1 inhibits the activity of TRPA1 increased by cinnamic aldehyde, which is known as a TRPA1-specific activator (see FIGS. 1, 2 and 4).

본 발명자들은 TRPA1의 GGPP 농도 의존적 반응을 알아보기 위해, TRPA1 형질전환 세포주에 0.1 내지 1000 μM 레졸빈 D1을 각각 처리하여 칼슘 이미지화를 수행하였다. 그 결과, 레졸빈 D1은 마이크로몰라 농도의 범위에서 농도 의존적으로 TRPA1을 억제하는 효과를 보였으며 TRPA1에 대한 IC50은 약 23 μM이었고, N 값은 약 1.02이었다(도 3 참조). In order to determine the GGPP concentration dependent response of TRPA1, Calcium imaging was performed by treating TRPA1 transgenic cell lines with 0.1-1000 μM Resolbin D1, respectively. As a result, resolbin D1 showed an effect of inhibiting TRPA1 concentration-dependently in the range of micromolar concentrations, the IC 50 for TRPA1 was about 23 μM, and the N value was about 1.02 (see FIG. 3).

본 발명자들은 동물 통증 행동실험을 통한 레졸빈 D1의 기계적 통증억제 작용을 확인하기 위해, 급성 침해성 행동(핥기/튀기기 행동) 분석 및 기계적 통각 과민 행동 분석을 실시한 결과, 동물모델에서 레졸빈 D1은 TRPA1 활성을 기반으로 하는 급성 침해성 행동 소요시간 및 기계적 자극에 대한 통증 감수성을 억제하는 것으로 나타났다(도 5 및 도 6 참조). The present inventors conducted acute invasive behavior (lick / fry behavior) analysis and mechanical hyperalgesia analysis to confirm the mechanical pain suppression effect of resolbin D1 through animal pain behavior experiment. It has been shown to inhibit acute invasive behavior duration and pain sensitivity to mechanical stimuli based on TRPA1 activity (see FIGS. 5 and 6).

따라서 본 발명의 레졸빈 D1은 기계적 통증을 유발하는 TRPA1의 활성을 유의적으로 저해시켜 이에 의해 유발되는 기계적 통증을 효과적으로 저해할 수 있으므로 기계적 통증의 억제, 또는 기계적 통증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.Therefore, the resolbin D1 of the present invention can significantly inhibit the activity of TRPA1, which causes mechanical pain, and effectively inhibit the mechanical pain caused thereby, and thus can be usefully used for suppressing mechanical pain or preventing and treating mechanical pain. It can be seen that.

본 발명의 기계적 통증 억제용 조성물은 레졸빈 D1에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. The composition for inhibiting mechanical pain of the present invention may further contain at least one active ingredient exhibiting the same or similar function in addition to resolbin D1.

상기 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. The composition may be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, oral formulations, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods.

경구투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투 여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.Solid form preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, and the like. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include powders, granules, tablets, capsules, sterile aqueous solutions, solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, syrups, suppositories, aerosols, etc. It can be used in the form of a formulation, and preferably used to prepare an external skin pharmaceutical composition of creams, gels, patches, sprays, ointments, warnings, lotions, liniments, pasta or cataplasma. However, it is not limited thereto. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.

본 발명에 따른 조성물은 통상적으로 사용되는 담체, 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 및 희석제등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다.The composition according to the present invention may further include conventionally used carriers, excipients, disintegrants, sweeteners, lubricants, flavoring agents and diluents. The carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The disintegrants include sodium starch glycolate, crospovidone, croscarmellose sodium, alginic acid, calcium carboxymethyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, chitosan, guar gum, low-substituted hydroxypropyl cellulose, magnesium aluminum silicate, and polyacryline Potassium and the like.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함 할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하다. In addition, the composition according to the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable additive, wherein the pharmaceutically acceptable additives are starch, gelatinized starch, microcrystalline cellulose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, hydrogen phosphate Calcium, lactose, mannitol, syrup, gum arabic, pregelatinized starch, corn starch, powdered cellulose, hydroxypropyl cellulose, opadry, sodium starch glycolate, carnauba lead, synthetic aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, aluminum stearate , Calcium stearate, white sugar, dextrose, sorbitol, talc and the like can be used. The pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 90 parts by weight based on the composition.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.The composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and it is preferable to select external or intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method for parenteral administration. .

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 레졸빈 D1의 양을 기준으로 0.0001 내지 10 중량%이고, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량%이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.The dosage of the composition of the present invention varies depending on the weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of the disease of the patient, the daily dosage is the amount of resolbin D1 0.0001 to 10% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight, and may be administered 1 to 6 times a day.

본 발명의 조성물은 기계적 통증의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the prevention and treatment of mechanical pain.

또한, 본 발명은 레졸빈 D1을 TRPA1 발현 세포에 처리하는 단계를 포함하는 TRPA1의 활성 억제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for inhibiting the activity of TRPA1 comprising the step of treating resolbin D1 to TRPA1 expressing cells.

상기 레졸빈 D1은 10 내지 100 μM의 농도로 처리하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The resolbin D1 is preferably treated at a concentration of 10 to 100 μM, but is not limited thereto.

상기 TRPA1 발현 세포는 말초 감각신경세포 또는 피부세포인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The TRPA1 expressing cells are preferably peripheral sensory neurons or skin cells, but are not limited thereto.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 기계적 통증을 억제하므로, 레졸빈 D1을 처리하여 TRPA1의 활성을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있다.Resolbin D1 of the present invention inhibits the increased TRPA1 activity by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and in posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses mechanical pain based on TRPA1 activity in animal models. It can be seen that the treatment of resolbin D1 can effectively inhibit the activity of TRPA1.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 레졸빈 D1을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 기계적 통증 억제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of inhibiting mechanical pain comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of resolbin D1.

상기 기계적 통증은 TRPA1 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.The mechanical pain is preferably based on TRPA1 activity, but is not limited thereto.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 기계적 통증을 억제하므로, 기계적 통증의 억제, 또는 기계적 통증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.Resolbin D1 of the present invention inhibits the increased TRPA1 activity by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and in posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses mechanical pain based on TRPA1 activity in animal models. It can be seen that it can be usefully used for suppressing mechanical pain, or preventing and treating mechanical pain.

상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다. 또한, 투여방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사, 자궁내 경막 주사, 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다. The subject is a vertebrate and preferably a mammal, more preferably an experimental animal such as a rat, rabbit, guinea pig, hamster, dog, cat, and most preferably an ape-like animal such as a chimpanzee or gorilla. In addition, the method of administration may be administered orally or parenterally, intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intrauterine epidural injection, intracerebroventricular injection or thoracic injection during parenteral administration. It can be administered by internal injection.

상기 레졸빈 D1은 기계적 통증 억제를 위하여 상기 개체에 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The resolbin D1 may be used alone or in combination with methods of using surgery, hormonal therapy, drug therapy and biological response modulators for mechanical pain inhibition.

상기 약학적으로 유효한 양은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.The pharmaceutically effective amount depends on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, but may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for preferred effects, it is preferable to administer at 0.0001 to 100 mg / kg, preferably at 0.001 to 100 mg / kg. The administration may be carried out once a day or divided into several times.

또한, 본 발명은 레졸빈 D1을 이용한 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for screening TRPA1 activity inhibitors using resolbin D1.

구체적으로,Specifically,

1) TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPA1 is transduced into a host cell;

2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 처리하고, 대조군으로 상기 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformant with a TRPA1-specific activator and TRPA1 activity inhibitor candidate in an experimental group, and treating the TRPA1-specific activator and resolbin D1 as a control group, respectively;

3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 상기 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring the TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 이온 채널 활성을 나타내는 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법을 제공한다.4) A method for screening TRPA1 activity inhibitors comprising comparing the respective measurements of step 3) to select TRPA1 activity inhibitor candidates exhibiting TRPA1 ion channel activity that is lower or similar to the control.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 숙주세포는 HEK 세포주, CHO 세포주, HeLa 세포주 또는 RBL-2H3 세포주를 이용하는 것이 바람직하고, HEK 세포주를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 이온 채널 활성 연구 및 고효율 억제제 검색에 이용할 수 있는 세포주라면 모두 이용가능하다.In the above method, the host cell of step 1) is preferably using a HEK cell line, a CHO cell line, a HeLa cell line or an RBL-2H3 cell line, more preferably using a HEK cell line, but not limited thereto. Any cell line that can be used for inhibitor search is available.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 TRPA1 특이적 활성제는 신남알데히드(cinnamaldehyde)인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above method, the TRPA1-specific active agent of step 2) is preferably, but is not limited to, cinnamaldehyde.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 레졸빈 D1은 10 μM에서 100 μM의 농도로 처리하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above method, the resolbin D1 of step 2) is preferably treated at a concentration of 10 μM to 100 μM, but is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 후보물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사산물 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the method, the candidate of step 2) is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi and bioactive molecules. But is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램 프 기술 또는 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above method, the measurement of the ion channel activity of step 3) is preferably performed by whole cell voltage clamp technique or calcium imaging, but is not limited thereto.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 통증을 억제하므로, TRPA1 활성에 대한 레졸빈 D1의 억제 효과와 비교하여 이와 유사하거나 보다 높은 억제 효과를 갖는 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 선별함으로써 TRPA1 활성 억제제를 스크리닝할 수 있음을 알 수 있다.Resolbin D1 of the present invention inhibits TRPA1 activity increased by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses pain based on TRPA1 activity in animal models, It can be seen that TRPA1 activity inhibitors can be screened by selecting TRPA1 activity inhibitor candidates having similar or higher inhibitory effects compared to the inhibitory effect of resolbin D1 on TRPA1 activity.

또한, 본 발명은 레졸빈 D1을 이용한 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for screening mechanical pain inhibitors using resolbin D1.

상기 기계적 통증은 TRPA1 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The mechanical pain is preferably based on TRPA1 activity, but is not limited thereto.

구체적으로,Specifically,

1) TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant in which a plasmid comprising a polynucleotide encoding TRPA1 is transduced into a host cell;

2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 피검화합물을 처리하고, 대조군으로 상기 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1을 각각 처리하는 단계;2) treating the transformant with a TRPA1-specific active agent and a test compound in an experimental group, and treating the TRPA1-specific active agent and resolbin D1 as a control group, respectively;

3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And

4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 활성을 나타내는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법을 제공한다.4) A method for screening a mechanical pain inhibitor comprising comparing the respective measurements of step 3) to selecting a test substance exhibiting TRPA1 activity lower than or similar to that of a control group.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 숙주세포는 HEK 세포주, CHO 세포주, HeLa 세포주 또는 RBL-2H3 세포주를 이용하는 것이 바람직하고, HEK 세포주를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않으며, 이온 채널 활성 연구 및 고효율 억제제 검색에 이용할 수 있는 세포주라면 모두 이용가능하다.In the above method, the host cell of step 1) preferably uses a HEK cell line, a CHO cell line, a HeLa cell line or an RBL-2H3 cell line, and more preferably, a HEK cell line is used, but not limited thereto. Any cell line that can be used for inhibitor search is available.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 TRPA1 특이적 활성제는 신남알데히드인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above method, the TRPA1-specific active agent of step 2) is preferably cinnamic aldehyde, but is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 레졸빈 D1은 10 내지 100 μM의 농도로 처리하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above method, the resolbin D1 of step 2) is preferably treated at a concentration of 10 to 100 μM, but is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 2)의 후보물질은 천연화합물, 합성화합물, RNA, DNA, 폴리펩티드, 효소, 단백질, 리간드, 항체, 항원, 박테리아 또는 진균의 대사산물 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나 이에 한정하는 것은 아니다.In the method, the candidate of step 2) is selected from the group consisting of natural compounds, synthetic compounds, RNA, DNA, polypeptides, enzymes, proteins, ligands, antibodies, antigens, metabolites of bacteria or fungi and bioactive molecules. Preferred but not limited to.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 TRPA1 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 또는 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정하는 것은 아니다.In the above method, the measurement of TRPA1 ion channel activity in step 3) is preferably performed by whole cell voltage clamp technique or calcium imaging, but is not limited thereto.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 통증을 억제하므로, TRPA1 활성에 대한 레졸빈 D1의 억제 효과와 비교하여 이와 유사하거나 보다 높은 억제 효과를 갖는 피검물질을 선별함으로써 TRPA1에 의해 매개되는 기계적 통증을 억제하는 통증 예방 및 치료제를 스크리닝할 수 있음을 알 수 있다.Resolbin D1 of the present invention inhibits TRPA1 activity increased by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses pain based on TRPA1 activity in animal models, It can be seen that by selecting a test substance having a similar or higher inhibitory effect as compared to the inhibitory effect of resolbin D1 on TRPA1 activity, it is possible to screen for pain prevention and therapeutic agents that inhibit mechanical pain mediated by TRPA1. .

아울러, 본 발명은 레졸빈 D1을 유효성분으로 함유하는 기계적 통증 개선용 건강식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a mechanical pain improvement health food containing resolbin D1 as an active ingredient.

상기 기계적 통증은 TRPA1 활성을 기반으로 하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.The mechanical pain is preferably based on TRPA1 activity, but is not limited thereto.

본 발명의 레졸빈 D1은 TRPA1을 과발현하는 형질전환 세포 및 척수후근신경절 감각 신경세포에서 TRPA1 활성제로 알려진 신남알데히드에 의해 증가된 TRPA1 활성을 억제하고, 동물모델에서 TRPA1 활성 기반의 통증을 억제하므로, 상기 레졸빈 D1은 레졸빈 D1을 기계적 통증 억제 또는 개선용 건강식품의 유효성분으로 유용라게 사용할 수 있음을 알 수 있다.  Resolbin D1 of the present invention inhibits TRPA1 activity increased by cinnamic aldehyde, known as TRPA1 activator, in transformed cells over-expressing TRPA1 and posterior spinal ganglion sensory neurons, and suppresses pain based on TRPA1 activity in animal models, It can be seen that the resolbin D1 can be usefully used as an active ingredient of resolbin D1 mechanical pain suppression or improvement for health food.

본 발명의 레졸빈 D1은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 레졸빈 D1을 원료에 대하여 0.2 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.24 내지 10 중량%로 첨가한다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.Resolbin D1 of the present invention may be added to a food as it is, or used with other foods or food ingredients, and may be suitably used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its use purpose (for prevention or improvement). In general, the resolvin D1 of the present invention is added in an amount of 0.2 to 20% by weight, preferably 0.24 to 10% by weight based on the raw materials in the preparation of food or beverage. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control purposes, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

본 발명의 건강식품은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01~0.04 중량부, 바람직하게는 약 0.02~0.03 중량부 범위에서 선택하는 것이 바람직하다.The health food of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients. Such natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The ratio of the natural carbohydrate is preferably selected in the range of 0.01 to 0.04 parts by weight, preferably about 0.02 to 0.03 parts by weight, per 100 parts by weight of the health food of the present invention.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 소세지, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of the food. Examples of the food to which the substance may be added include dairy products including drinks, sausages, chocolates, candy, snacks, sweets, gums, ice creams, beverages, alcoholic beverages, and vitamin complexes. Includes all of them.

상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않 지만 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the health food of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols. And carbonation agents used in carbonated beverages. In addition, the health food of the present invention may contain a flesh for producing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. Although the ratio of these additives is not critical, it is generally selected from the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the health food of the present invention.

이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Production Examples.

단, 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정하는 것은 아니다.However, the following Examples and Preparation Examples are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following Examples.

<< 실시예Example 1>  1> TRPA1TRPA1 형질전환 세포주의 제조 Preparation of Transgenic Cell Lines

HEK293 세포주(ATCC CRL-11268)를 mTRPA1(서열번호 : 1)의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드 DNA를 이용하여 일시적(transiently) 형질전환하였다. 구체적으로, HEK293T 세포주를 각각 24 웰 플레이트 당 0.8 ㎍ 의 mTRPA1의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 pcDNA5/FRT 벡터 및 0.2 ㎍/웰의 pCDNA3(Invitrogen Corp., USA; 녹색 형광 단백질 cDNA 포함)로 Fugene HD(Roche Diagnostics, 미국)를 이용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 형질전환하였다. 상기 형질전환된 세포를 24시간 동안 CO2 인큐베이터에서 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였고, 폴리-Ｌ-오르트린 코팅된 유리 커버 슬립에 도말한 후, 10 내지 24시간 동안 추가 배양하였다.The HEK293 cell line (ATCC CRL-11268) was transiently transformed using plasmid DNA containing the polynucleotide of mTRPA1 (SEQ ID NO: 1). Specifically, HEK293T cell lines were each prepared with Fugene HD (Roche) with pcDNA5 / FRT vector containing 0.8 μg of mTRPA1 polynucleotide per 24 well plate and 0.2 μg / well of pCDNA3 (Invitrogen Corp., USA; with green fluorescent protein cDNA). Diagnostics, USA) were used to transform according to the manufacturer's protocol. The transformed cells were incubated in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin / streptomycin in a CO 2 incubator for 24 hours, and poly-L-orthrin coated glass After plating on the cover slip, further incubation for 10 to 24 hours.

<< 실시예Example 2>  2> 척수후근신경절Spinal Cord Muscle Ganglion (( dorsaldorsal rootroot ganglia,ganglia, DRGDRG ) 감각 신경세포 준비Sensory Neuron Preparation

차가운 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)에서 성체 ICR계 생쥐(한림실험동물연구소, 한국)의 DRG를 분리하여 세절한 후, 3 ㎎/㎖ 콜라게나아제 타입 2(collagenase type 2; Invirogen, USA)를 37℃에서 45분 동안 처리한 후 기계적인 방법으로 완전히 소화시켰다. 상기 방법으로 제조한 DRG 감각 신경세포를 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 10 ng/㎖ 2.5S NGF(calbiochemn, USA)를 포함하는 DMEM/F12 배지에서 폴리-Ｌ-오르트린 코팅된 유리 커버 슬립에 도말한 후, 48 내지 72시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다.DRGs of adult ICR mice (Hallym Experimental Laboratory, Korea) were isolated from cold phosphate buffered saline (PBS), and then washed with 3 mg / ml collagenase type 2 (Invirogen, USA). ) Was treated at 37 ° C. for 45 minutes and then completely digested by mechanical method. DRG sensory neurons prepared by this method were poly-L-orthrin coated glass in DMEM / F12 medium containing 10% FBS, 1% penicillin / streptomycin and 10 ng / ml 2.5S NGF (calbiochemn, USA). After plating on the cover slips, the cells were incubated in a CO 2 incubator for 48 to 72 hours.

<< 실시예Example 3>  3> 레졸빈Resorbin D1D1 에 의한 On by TRPA1TRPA1 의 활성화 변화 확인 Activation changes

<3-1> 전기 생리학적인 방법으로 <3-1> electrophysiological method 세포내Intracellular 채널의 활성 측정 Activity measurement of the channel

상기 <실시예 1>의 방법으로 제조한 mTRPA1 형질전환 세포주에 300 μM 신남알데히드(CA: cinnamaldehyde; MP Biomedicals, USA)와 30 μM 레졸빈 D1(Resolvin D1: Cayman biochem, USA)을 함께 처리하였다. 상기 화학물질들의 저장 용액은 물 또는 디메틸설폭시드(dimethyl sulfoxide, DMSO)를 이용하여 제조하였고, 사용하기 직전에 검사용액으로 희석하여 사용하였다. 상기 방법으로 처리된 형질전환 세포에 전기 생리학적인 측정을 수행하였다. 구체적으로, 배스 용액(bath solution, 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl2, 2 mM MgCl2, 10 mM HEPES를 포함하고 NaOH를 이용하여 pH 7.4로 적정)과 피펫 용액(pipet solution, 140 mM CsCl 10mM EGTA,10mM HEPES를 포함하여 pH 7.4로 적정)을 이용하였다. 그 후, 팻취 클랩프 셋트를 이용하여 전체 세포 팻취 클램프를 실시하였고 이중 전압 전류 상관 곡선을 이용하여 이온 채널 특이적인 반응임을 확인함과 동시에 GGPP에 의해 효과적으로 활성화함을 확인하였다. 팻취 클랩프 셋트는 multiclamp 700B(molecular device, 미국)을 이용하여 미세한 신호를 증폭하고, digidata1332a(Molecular device, 미국)를 이용하여 아날로그 신호를 디지털화하였다. pClamp 10(Molecular device, 미국)을 이용하여 데이터를 수집 및 기계를 조작했고, clemp X-10(Molecular device, 미국)을 이용하여 데이터를 편집하였다. 300 μM cinnamaldehyde (CA: cinnamaldehyde; MP Biomedicals, USA) and 30 μM Resolvin D1 (Resolvin D1: Cayman biochem, USA) were treated together with the mTRPA1 transformed cell line prepared by the method of <Example 1>. The stock solution of the chemicals was prepared using water or dimethyl sulfoxide (DMSO), and diluted with test solution immediately before use. Electrophysiological measurements were performed on the transformed cells treated with the above method. Specifically, the bath solution (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl 2 , 2 mM MgCl 2 , 10 mM HEPES containing a titration to pH 7.4 using NaOH) and pipette solution (pipet solution, 140 titrated to pH 7.4 with mM CsCl 10 mM EGTA, 10 mM HEPES). Subsequently, whole cell patch clamps were performed using a patch clamp set, and a double voltage current correlation curve was used to confirm that the ion channel-specific reaction was activated by GGPP. The patch clamp set amplifies the minute signal using a multiclamp 700B (molecular device, USA) and digitized the analog signal using digidata1332a (Molecular device, USA). Data was collected and manipulated using pClamp 10 (Molecular device, USA) and data was edited using clemp X-10 (Molecular device, USA).

실험 결과는 양측 꼬리(two-tailed), 쌍을 이루지 않은(unpaired) 스튜던트 검정(Student's t-test)을 이용하여 통계적으로 분석하였고, 평균±표준편차의 형태로 나타냈으며, **P < 0.01 및 *P < 0.05이었다. 이하, 모든 실시예의 실험 결과는 이와 동일한 방법으로 나타내었다.Experimental results were statistically analyzed using a two-tailed, unpaired Student's t-test, expressed in the form of mean ± standard deviation, ** P <0.01 and * P <0.05. Hereinafter, the experimental results of all the examples are shown by the same method.

그 결과, [도 1]에서 나타낸 바와 같이, 레졸빈 D1은 신남알데히드에 의한 TRPA1 특이적 활성을 억제함을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 1, it was confirmed that resolbin D1 inhibits TRPA1-specific activity by cinnamic aldehyde.

<3-2> 칼슘 이미지화를 이용한 <3-2> Calcium Imaging 세포내Intracellular 칼슘수준변화 측정 Calcium Level Change

상기 <실시예 1>의 방법으로 제조한 mTRPA1 형질전환 세포주에 300 μM 신남알데히드와 100 μM 레졸빈 D1을 함께 처리하여 형질전환 세포의 칼슘 이미지화를 수행하였다. 구체적으로, 0.02% 풀루로닉산(pluronic acid; Invitrogen, USA)을 포함하는 배스 용액(bath solution, 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl2, 2 mM MgCl2, 10 mM HEPES를 포함하고 NaOH를 이용하여 pH 7.4로 적정)에서 상기 실시예 <3-1>의 방법으로 처리된 형질전환 세포에 Fura2-AM(5 μM; invitorgen, USA)을 37℃에서 1시간 동안 주입하였다. 그 후, fura2 calcium image system olympus 형광 현미경(Olympus, 일본)을 이용하여 칼슘 이미지화(Calcium imaging)를 수행하였고, Meta flow(Morecular device, 미국)를 이용하여 촬영이미지(time-lapse image; 340 ㎚ /380 ㎚ )를 매 3초마다 측정하여 그 비율로 나타내었다. Calcium imaging of transformed cells was performed by treating 300 μM cinnamaldehyde and 100 μM resolbin D1 together with the mTRPA1 transformed cell line prepared by the method of <Example 1>. Specifically, a bath solution containing 0.02% pluronic acid (Invitrogen, USA) (bath solution, 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mM CaCl 2 , 2 mM MgCl 2 , 10 mM HEPES and NaOH Titrated to pH 7.4 using Fura2-AM (5 μM; invitorgen, USA) at 37 ° C. for 1 hour. Calcium imaging was then performed using a fura2 calcium image system olympus fluorescence microscope (Olympus, Japan), and a time-lapse image (340 nm / m) using Meta flow (Morecular device, USA). 380 nm) was measured every 3 seconds and expressed as the ratio.

그 결과, [도 2]에서 나타낸 바와 같이, 레졸빈 D1과 신남알데히드를 함께 처리하는 기간 동안, 레졸빈 D1은 TRPA1 활성화를 억제함을 확인하였다. As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that resolbin D1 inhibited TRPA1 activation during the treatment of resolbin D1 and cinnamic aldehyde together.

<< 실시예Example 4>  4> TRPA1TRPA1 의 of GGPPGGPP 농도 의존적 반응 확인 Check concentration dependent response

상기 <실시예 1>의 방법으로 제조한 TRPA1 형질전환 세포주에 0.1 내지 1000 μM 레졸빈 D1을 각각 처리한 후, 상기 실시예 <3-2>의 방법으로 칼슘 이미지화를 수행하였다. 이후, 측정값을 Hill-plot을 이용하여 농도-반응 곡선으로 작성하였다.The TRPA1 transformed cell line prepared by the method of <Example 1> was treated with 0.1 to 1000 μM resolbin D1, respectively, and calcium imaging was performed by the method of Example <3-2>. Then, the measured value was prepared as a concentration-response curve using Hill-plot.

그 결과, [도 3]에서 나타낸 바와 같이, 레졸빈 D1의 TRPA1에 대한 IC50은 약 23.259 μM이었고, N 값은 약 1.02이었으며, 약 10 내지 100 μM 농도 범위에서 TRPA1 활성을 급격히 억제하는 것으로 나타나 레졸빈 D1이 마이크로몰라 농도의 범위에서 TRPA1에 대한 활성 효과를 가지는 것으로 확인되었다.As a result, as shown in FIG. 3, the IC 50 of resolbin D1 to TRPA1 was about 23.259 μM, the N value was about 1.02, and it was shown to rapidly inhibit TRPA1 activity in the concentration range of about 10 to 100 μM. Resolbin D1 was found to have an active effect on TRPA1 in the range of micromolar concentrations.

<< 실시예Example 5> 감각 신경세포의  5> sensory neurons 레졸빈Resorbin D1D1 특이적 반응 조사 Specific response investigation

상기 <실시예 2>에서 분리된 감각 신경세포에 100 μM 레졸빈 D1을 처리한 후, 상기 약물 처리기간 중 일부 기간 동안, 300 μM 신남알데히드를 함께 처리하였다. 상기 방법으로 처리된 형질전환 세포에 칼슘 이미지화를 수행하였다.The sensory neurons isolated in <Example 2> were treated with 100 μM resolbin D1, and then treated with 300 μM cinnamic aldehyde together for some of the drug treatment period. Calcium imaging was performed on the transformed cells treated with the above method.

그 결과, [도 4]에서 나타낸 바와 같이, 레졸빈 D1과 신남알데히드를 함께 처리하는 기간 동안, 레졸빈 D1은 DRG 감각 신경세포에서도 TRPA1 활성화를 효과적으로 억제함을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 4, it was confirmed that resolbin D1 effectively inhibits TRPA1 activation even in DRG sensory neurons during the treatment of resolbin D1 and cinnamic aldehyde together.

<< 실시예Example 6> 동물 통증 행동실험을 통한  6> Through animal pain behavior experiment 레졸빈Resorbin D1D1 통증억제 반응 확인 Confirm pain suppression

<6-1> 급성 <6-1> acute 침해성Infringement 행동(핥기/튀기기 행동) 분석 Behavior (lick / flick) analysis

하기 [표 1]의 대조군 및 실험군의 쥐의 뒷발 핥기/튀기기 행동(hindpaw licking/flicking behavior)에 걸린 시간을 Bandell M 외(Neuron 41:849-857, 2004) 및 Moqrich A 외(Science 307:1468-1472, 2005)의 방법에 따라 10분 동안 측정하였다.The time taken for the hindpaw licking / flicking behavior of the rats in the control and experimental groups of Table 1 is shown in Bandell M et al. ( Neuron 41: 849-857, 2004) and Moqrich A et al. ( Science 307: 1468). -1472, 2005) for 10 minutes.

대조군Control group 무처리No treatment 실험군 1Experiment 1 3 mM 레졸빈 D13 mM resolbin D1 실험군 2Experiment 2 10 mM 신남알데히드10 mM cinnamic aldehyde 실험군 3Experiment group 3 10 mM 신남알데히드 + 3 mM 레졸린 D110 mM Cinnamicaldehyde + 3 mM Rezoline D1

그 결과, [도 5]에서 나타낸 바와 같이, 레졸빈 D1과는 달리 신남알데히드는 동물들의 행동 소요시간을 증가시켰고, 이는 신남알데히드와 레졸빈 D1을 동시에 사용함으로써 행동 소요시간이 억제되었다.As a result, as shown in FIG. 5, unlike resolbin D1, cinnamic aldehyde increased the behavioral time of animals, which was suppressed by simultaneously using cinnamic aldehyde and resolbin D1.

<6-2> 염증성 기계적 통각 과민 행동 분석<6-2> Inflammatory Mechanical Pain Hypersensitivity Analysis

하기 [표 2]의 대조군 및 실험군을 von-frey 기계를 사용하여 바늘의 압력에 저항하는 시간을 측정하였다. 구체적으로, CFA(Complete Freund's Adjuvant)를 쥐에 주입하여 염증을 유발하고, CFA 투여 24시간 후에 레졸빈 D1을 투입하여 von-frey 기계를 이용하여 기계적 자극에 회피하는 시간을 3회 측정하였다 이때, 5마리의 생쥐를 실험에 사용하였다. The control and experimental groups of the following [Table 2] were measured for the time to resist the pressure of the needle using the von-frey machine. Specifically, CFA (Complete Freund's Adjuvant) was injected into the rat to cause inflammation, and 24 hours after CFA administration, Resolbin D1 was injected and measured 3 times to avoid mechanical stimulation using a von-frey machine. Five mice were used for the experiment.

대조군Control group 무처리No treatment 실험군 1Experiment 1 3 mM 레졸빈 D13 mM resolbin D1 실험군 2Experiment 2 CFACFA 실험군 3Experiment group 3 CFA + 3 mM 레졸린 D1CFA + 3 mM Rezoline D1

그 결과, [도 6]에서 나타난 바와 같이 레졸빈 D1 투여에 의하여 정상적인 상황에서는 기계적 자극에 대한 감수성이 변하지 않았으나, CFA로 염증을 일으킨 쥐와 레졸빈 D1을 함께 투여한 쥐를 비교하였더니 CFA염증에 의해 민감화된 반응시간이 레졸빈 D1에 의해 억제되어, 염증성 통증 시 기계적 자극 감수성이 높아진 현상을 억제하는 효과를 나타냈다.As a result, as shown in FIG. 6, the sensitivity to mechanical stimulation did not change under normal conditions by the administration of resolbin D1. However, the rats incubated with CFA compared with the rats treated with resolbin D1 were compared to CFA inflammation. Reaction time sensitized by the resolbin D1 was suppressed, showing an effect of suppressing the phenomenon of increased mechanical stimulus sensitivity during inflammatory pain.

<< 제조예Manufacturing example 1> 약학적 제제의 제조 1> Preparation of Pharmaceutical Formulations

<1-1> <1-1> 산제의Sanje 제조 Produce

레졸빈 D1 2 g2 g of resolbin D1

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

<1-2> 정제의 제조<1-2> Preparation of tablets

레졸빈 D1 100 ㎎Resolbin D1 100 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유 당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네 2 ㎎Stearic Acid Magnesium 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

<1-3> 캡슐제의 제조&Lt; 1-3 > Preparation of capsules

레졸빈 D1 100 ㎎Resolbin D1 100 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유 당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After mixing the above components, the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.

<1-4> 환의 제조&Lt; 1-4 >

레졸빈 D1 1 g1 g of resolbin D1

유당 1.5 gLactose 1.5 g

글리세린 1 gGlycerin 1 g

자일리톨 0.5 g0.5 g of xylitol

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.After mixing the above components, it was prepared to be 4 g per ring in a conventional manner.

<1-5> 과립의 제조<1-5> Preparation of granules

레졸빈 D1 150 ㎎Resolbin D1 150 mg

대두추출물 50 ㎎Soy extract 50 mg

포도당 200 ㎎Glucose 200 mg

전분 600 ㎎Starch 600 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.After mixing the above components, 100 mg of 30% ethanol was added, dried at 60 ° C. to form granules, and then filled into fabrics.

<< 제조예Manufacturing example 2> 식품의 제조 2> Manufacturing of food

<2-1> 밀가루 식품의 제조<2-1> Production of flour food

본 발명의 레졸빈 D1 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.0.5-5.0 parts by weight of resolbin D1 of the present invention was added to the flour, and the mixture was used to prepare bread, cake, cookies, crackers and noodles.

<2-2> 유제품(<2-2> dairy products ( dairydairy productsproducts )의 제조Manufacturing

본 발명의 레졸빈 D1 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.5-10 parts by weight of resolbin D1 of the present invention was added to milk, and various milk products such as butter and ice cream were prepared using the milk.

<2-3> <2-3> 선식의Solar 제조 Produce

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were dried by a known method and dried, and the mixture was granulated to a powder having a particle size of 60 mesh.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Black soybeans, black sesame seeds, and perilla seeds were steamed and dried by a conventional method, and then they were prepared into powder having a particle size of 60 mesh by a pulverizer.

본 발명의 레졸빈 D1을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.Resolvin D1 of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, and the dried product obtained by drying with a spray and a hot air dryer was pulverized with a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 레졸빈 D1을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.The grains, seeds and resolvin D1 prepared above were combined and prepared in the following ratio.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),(30 parts by weight of brown rice, 15 parts by weight of yulmu, 20 parts by weight of barley)

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),Seeds (7 parts by weight of perilla, 8 parts by weight of black beans, 7 parts by weight of black sesame seeds)

레졸빈 D1(3 중량부),Resolbin D1 (3 parts by weight),

영지(0.5 중량부),(0.5 part by weight),

지황(0.5 중량부)Foxglove (0.5 part by weight)

<< 제조예Manufacturing example 3> 음료의 제조 3> Manufacturing of beverage

건강음료의 제조Manufacture of health drinks

레졸빈 D1 1000 ㎎Resolbin D1 1000 mg

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g oligosaccharides

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 g1 g of taurine

정제수를 가하여 전체 900 ㎖Add 900 ml of purified water

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강 음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.After mixing the above components according to the conventional healthy beverage manufacturing method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and then refrigerated and stored Used to prepare a healthy beverage composition of the invention. Although the composition ratio is a composition that is relatively suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.

상기와 같이, 본 발명의 오메가3 지방산 대사체인 레졸빈 D1은 TRPA1의 활성 억제 작용을 가지므로, 기계적 통증을 효과적으로 제어하고 부작용이 적은 기계적 통증 치료제의 개발과 TRPA1의 활성 억제제 또는 기계적 통증 치료제의 탐색 및 개발을 위해 유용하게 사용될 수 있다.As described above, resolbin D1, an omega-3 fatty acid metabolite of the present invention, has an inhibitory activity of TRPA1, and thus, effectively develops a mechanical pain treatment agent that effectively controls mechanical pain and has a low side effect, and an active inhibitor or a mechanical pain treatment agent of TRPA1. And useful for development.

도 1은 세포주에서 발현된 mTRPA1이 레졸빈 D1에 의해 억제됨을 전기 생리학적인 이온 채널의 열림 억제 효과의 측정을 통해 억제효과가 있음을 나타낸 것으로, 30 μM 레졸빈 D1이 300 μM 신남알데히드에 의해 활성화된 TRPA1 반응을 전기 생리학적인 방법으로 억제함을 나타낸 그래프이다(RSD: 레졸빈 D1, CA: 신남알데히드).Figure 1 shows that mTRPA1 expressed in the cell line is inhibited by resolbin D1 through the measurement of the inhibitory effect of electrophysiological ion channel opening, 30 μM resolbin D1 is activated by 300 μM cinnamic aldehyde Is a graph showing the suppressed TRPA1 response by electrophysiological method (RSD: resolbin D1, CA: cinnamic aldehyde).

도 2는 세포주에서 발현된 mTRPA1이 레졸빈 D1에 의해 억제됨을 칼슘의 세포내 유입 억제 효과의 측정을 통해 억제효과가 있음을 나타낸 것으로, 100 μM 레졸빈 D1이 칼슘 이미지화 실험에서 유용하게 억제됨을 나타낸 그래프이다(RSD: 레졸빈 D1, CA: 신남알데히드). FIG. 2 shows that mTRPA1 expressed in the cell line was inhibited by resolbin D1 through the measurement of the inhibitory effect of intracellular influx of calcium, indicating that 100 μM resolbin D1 was usefully inhibited in calcium imaging experiments. Graph (RSD: resolbin D1, CA: cinnamic aldehyde).

도 3은 농도에 따른 TRPA1 활성화에 의한 칼슘 유입양을 나타낸 농도-반응 곡선으로서 각각의 활성을 Hill-plot 방법으로 도표화하여 나타낸 그래프이고, 이때 23.259 μM의 IC50 값을 얻었고 N 값은 1.02이었다(RSD: 레졸빈 D1, CA: 신남알데히드).FIG. 3 is a graph showing the concentration-response curves of calcium influx by TRPA1 activation according to the concentrations, and plotting each activity by the Hill-plot method, where an IC 50 value of 23.259 μM was obtained and the N value was 1.02 ( RSD: resolbin D1, CA: cinnamic aldehyde).

도 4는 6주된 성체 생쥐에서 척수후근신경절(DRG) 감각 신경세포를 추출하여 배양한 후 상기 칼슘 이미지 기법을 이용하여 감각 신경세포에서도 레졸빈 D1이 TRPA1을 효과적으로 억제함을 보여주는 것으로, 300 μM 신남알데히드에 의한 TRPA1 반응이 100 μM 레졸빈 D1에 의해 억제됨을 나타낸 그래프이다(RSD: 레졸빈 D1, CA: 신남알데히드).FIG. 4 shows that resolvin D1 effectively inhibits TRPA1 in sensory neurons using the calcium imaging technique after extracting and incubating DRG sensory neurons from 6-week-old adult mice. It is a graph showing that TRPA1 response by aldehyde is inhibited by 100 μM resolbin D1 (RSD: resolbin D1, CA: cinnamic aldehyde).

도 5는 급성 핥기/튀기기 반응 실험에서, 10 mM 신남알데히드 발바닥 주입에 의한 통증이 3 mM 레졸빈 D1을 신남알데히드 투여 10분 전에 미리 발바닥에 주입하였을 때 억제됨을 신남알데히드 투여 후 매 분마다 측정한 결과로 나타낸 그래프이다(RSD: 레졸빈 D1, CA: 신남알데히드).FIG. 5 shows that in the acute lick / splash reaction experiment, the pain caused by 10 mM cinnamic aldehyde plantar injection was suppressed when 3 mM resolbin D1 was injected into the sole 10 minutes before cinnamic aldehyde administration in advance. The result is a graph (RSD: resolbin D1, CA: cinnamic aldehyde).

도 6은 염증시 기계적 자극에 대한 통증 감수성을 von-frey 방법으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다(RSD: 레졸빈 D1, CFA:complete Freund's Adjuvant, ND: 정상상태).Figure 6 is a graph showing the results of measuring the pain sensitivity to mechanical stimulation during inflammation by von-frey method (RSD: Resolbin D1, CFA: complete Freund's Adjuvant, ND: steady state).

<110> KOREA UNIVERSITY Industry & Academy Collaboration Foundation <120> NovelTRPA1 inhibitor and use thereof <130> 9p-08-46 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 4263 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mTRPA1 <400> 1 gcgccagccg gcgtccaggt ggagtcaatg aagcgcggct tgaggaggat tctgctcccg 60 gaggaaagga aggaggtcca gggcgttgtc tatcgcggcg tcggggaaga catggactgc 120 tccaaggaat cctttaaggt ggacattgaa ggagatatgt gtagattaga agacttcatc 180 aagaaccgaa gaaaactaag caaatatgag gatgaaaatc tctgtcctct gcatcacgca 240 gcagcagaag gtcaagttga actgatggaa ctgatcatca atggttcttc gtgtgaagtg 300 ctgaatataa tggatggtta tggaaatacc ccactgcatt gtgctgcaga aaaaaatcaa 360 gttgaaagtg taaagtttct tctcagccaa ggagcaaatc caaacctccg aaatagaaac 420 atgatgtcac cccttcacat agctgtgcat ggcatgtaca acgaagtgat caaggtgttg 480 actgagcaca aggccactaa catcaattta gaaggagaga atgggaacac ggctttgatg 540 tccacgtgtg ccaaagacaa cagtgaagct ttgcaaattt tgttagaaaa aggagctaag 600 ctgtgtaaat caaataagtg gggagactac cctgtgcacc aggcagcatt ttcaggtgcc 660 aaaaaatgca tggaattaat cttagcatat ggtgaaaaga acggctacag cagggagact 720 cacattaatt ttgtgaatca caagaaagcc agccctctcc acctagcagt tcaaagcgga 780 gacttggaca tgattaagat gtgcctggac aacggtgcac acatcgacat gatggagaat 840 gccaaatgca tggccctcca ttttgctgca acccagggag ccactgacat cgttaagctc 900 atgatctcat cctataccgg aagtagtgat attgtgaatg cagttgatgg caatcaggag 960 accctgcttc acagagcctc gttatttgat caccatgacc tggcagaata cctaatatca 1020 gtgggagcag acatcaacag cactgattct gaaggacgct ctccacttat tttagcaaca 1080 gcttctgcat cctggaacat tgtgaatttg ctcctctgta aaggtgccaa agtagacata 1140 aaagatcatc ttggacgtaa ctttttgcat ttgactgtgc agcagcctta tggactaaga 1200 aatttgcggc ctgagtttat gcagatgcaa cacatcaaag agctggtgat ggatgaagac 1260 aatgacggat gcacacctct ccattatgcc tgtaggcagg gggttcctgt ctctgtaaat 1320 aacctccttg gcttcaatgt gtccattcat agcaaaagta aagataagaa gtcgcccctg 1380 cattttgcag ccagttatgg gcgcatcaat acatgtcaga gacttctgca agacataagt 1440 gatacgaggc ttttgaatga aggggatctc catgggatga cccctctcca cctggcagca 1500 aaaaatgggc atgataaagt cgttcaactc cttctgaaga aaggggcctt atttctcagt 1560 gaccacaatg gctggactgc tttgcatcac gcctccatgg gtgggtacac tcagaccatg 1620 aaggtcattc ttgatactaa cttgaaatgc acagaccgac tagatgaaga agggaacaca 1680 gcactccact ttgcagcacg ggaaggccat gccaaggctg ttgcaatgct tttgagctac 1740 aatgctgaca tcctcctgaa caagaagcaa gcttcctttc tgcatattgc cctgcacaat 1800 aagcgcaagg aagtggttct cacaaccatc agaaataaaa gatgggatga gtgtcttcaa 1860 gttttcactc ataattctcc aagcaatcga tgtccaatca tggagatggt agaatacctc 1920 cccgagtgca tgaaagttct tttagatttc tgcatgatac cttccacaga agacaagtcc 1980 tgtcaagact accatattga gtataatttc aagtatctcc aatgcccatt atccatgacc 2040 aaaaaagtag cacctaccca ggatgtggta tatgagcctc ttacaatcct caatgtcatg 2100 gtccaacata accgcataga actcctcaac caccctgtgt gtagggagta cttactcatg 2160 aaatggtgtg cctatggatt cagagcccat atgatgaacc taggatctta ttgtcttggt 2220 ctcataccca tgacccttct tgttgtcaaa atacagcctg gaatggcctt caattctact 2280 ggaataatca atggaactag tagtactcat gaggaaagaa tagacactct gaattcattt 2340 ccaataaaaa tatgtatgat tctagttttt ttatcaagta tatttggata ttgcaaagaa 2400 gtgatccaaa ttttccaaca gaaaaggaat tacttcctgg attacaacaa tgctctggaa 2460 tgggttatct atacaactag tatcatcttc gtgttgccct tgttcctcaa catcccagcg 2520 tatatgcagt ggcaatgtgg agcaatagcg atattcttct actggatgaa cttcctactg 2580 tatcttcaaa ggtttgagaa ctgtggaatt ttcattgtta tgttggaggt gatttttaaa 2640 acattgctga gatcgaccgg agtgtttatc ttcctcctac tggcttttgg cctcagcttt 2700 tatgttctcc tgaatttcca agatgccttc agcaccccat tgctttcctt aatccagaca 2760 ttcagtatga tgctaggaga catcaattat cgagatgcct tcctagaacc attgtttaga 2820 aatgagttgg catacccagt cctgaccttt gggcagctta ttgccttcac aatgtttgtc 2880 ccaattgttc tcatgaactt actgattggc ttggcggttg gggacattgc tgaggtccag 2940 aagcatgcgt cattgaagag gattgctatg caggtggaac ttcataccaa cttagaaaaa 3000 aagctgccac tctggtactt acgcaaagtg gatcagaggt ccaccatcgt gtatccaaat 3060 agacccaggc acggcaggat gctacggttt tttcattact ttcttaatat gcaagaaaca 3120 cgacaagaag taccaaacat tgacacatgc ttggaaatgg aaatattgaa acagaaatat 3180 cggctgaagg acctcacttc cctcttggaa aagcagcatg agctcatcaa actcatcatc 3240 cagaagatgg agatcatctc agagacagaa gatgaagata accattgctc tttccaagac 3300 aggttcaaga aggagaggct ggaacagatg cacagcaagt ggaattttgt cttaaacgca 3360 gttaagacta aaacacattg ttctattagc cacccggact tttagttctg tgtcttatgg 3420 gagtgggaga ctgctttaca tacttatttc agtgaatttc agtttggaaa agagcaaaga 3480 aacagaaagt tgactaacat tgctgcatgg agatcctagt tcctgcaacc tcacccatac 3540 atatgctcat atttcctgtc aattactatg tattgagaag atcctttctg acatgttcaa 3600 tttgaacatg aaggatagtc tctttcgagt gaataaaaac cagggttgtt ggaatgcata 3660 ttatggagga taagaattaa tgtaactatt aaggcagaac acaactacat aatacaagat 3720 gcatataatt ccaagtatta tatttaatct cctaccatgt taaaccttcc tgtgttataa 3780 cctgtctggg acactataat ctctgttcct actatgatta gatcatagtc tcaccctcct 3840 cgtcccatca cacatgacat cattttgagc cacatgacag aagtcctagt tagtagactg 3900 tgataagtat gaatgttaca atagaaatgt gttcccttag tgttcatcag ttgtgatggt 3960 ttaaatgaga aacgttgccc acagactcat acatttaaac ccttagtccc agttgttgct 4020 gctgcttagg ggggccacac agccttgctt gctctctcct ttctgagtgt ggagagaaat 4080 gtgatcagta agactcctgc tcctgctgcc atgctcttta ttccattatg gacttcttct 4140 gaaactgcaa gcagaaattc actgttcctt cctcaaattt cttttggtca tggtattata 4200 tcatagcaac agaaactaac ttatgtacca atggtcttaa taaagaataa agcctgtaca 4260 gtc 4263 <110> KOREA UNIVERSITY Industry & Academy Collaboration Foundation <120> NovelTRPA1 inhibitor and use <130> 9p-08-46 <160> 1 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 4263 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mTRPA1 <400> 1 gcgccagccg gcgtccaggt ggagtcaatg aagcgcggct tgaggaggat tctgctcccg 60 gaggaaagga aggaggtcca gggcgttgtc tatcgcggcg tcggggaaga catggactgc 120 tccaaggaat cctttaaggt ggacattgaa ggagatatgt gtagattaga agacttcatc 180 aagaaccgaa gaaaactaag caaatatgag gatgaaaatc tctgtcctct gcatcacgca 240 gcagcagaag gtcaagttga actgatggaa ctgatcatca atggttcttc gtgtgaagtg 300 ctgaatataa tggatggtta tggaaatacc ccactgcatt gtgctgcaga aaaaaatcaa 360 gttgaaagtg taaagtttct tctcagccaa ggagcaaatc caaacctccg aaatagaaac 420 atgatgtcac cccttcacat agctgtgcat ggcatgtaca acgaagtgat caaggtgttg 480 actgagcaca aggccactaa catcaattta gaaggagaga atgggaacac ggctttgatg 540 tccacgtgtg ccaaagacaa cagtgaagct ttgcaaattt tgttagaaaa aggagctaag 600 ctgtgtaaat caaataagtg gggagactac cctgtgcacc aggcagcatt ttcaggtgcc 660 aaaaaatgca tggaattaat cttagcatat ggtgaaaaga acggctacag cagggagact 720 cacattaatt ttgtgaatca caagaaagcc agccctctcc acctagcagt tcaaagcgga 780 gacttggaca tgattaagat gtgcctggac aacggtgcac acatcgacat gatggagaat 840 gccaaatgca tggccctcca ttttgctgca acccagggag ccactgacat cgttaagctc 900 atgatctcat cctataccgg aagtagtgat attgtgaatg cagttgatgg caatcaggag 960 accctgcttc acagagcctc gttatttgat caccatgacc tggcagaata cctaatatca 1020 gtgggagcag acatcaacag cactgattct gaaggacgct ctccacttat tttagcaaca 1080 gcttctgcat cctggaacat tgtgaatttg ctcctctgta aaggtgccaa agtagacata 1140 aaagatcatc ttggacgtaa ctttttgcat ttgactgtgc agcagcctta tggactaaga 1200 aatttgcggc ctgagtttat gcagatgcaa cacatcaaag agctggtgat ggatgaagac 1260 aatgacggat gcacacctct ccattatgcc tgtaggcagg gggttcctgt ctctgtaaat 1320 aacctccttg gcttcaatgt gtccattcat agcaaaagta aagataagaa gtcgcccctg 1380 cattttgcag ccagttatgg gcgcatcaat acatgtcaga gacttctgca agacataagt 1440 gatacgaggc ttttgaatga aggggatctc catgggatga cccctctcca cctggcagca 1500 aaaaatgggc atgataaagt cgttcaactc cttctgaaga aaggggcctt atttctcagt 1560 gaccacaatg gctggactgc tttgcatcac gcctccatgg gtgggtacac tcagaccatg 1620 aaggtcattc ttgatactaa cttgaaatgc acagaccgac tagatgaaga agggaacaca 1680 gcactccact ttgcagcacg ggaaggccat gccaaggctg ttgcaatgct tttgagctac 1740 aatgctgaca tcctcctgaa caagaagcaa gcttcctttc tgcatattgc cctgcacaat 1800 aagcgcaagg aagtggttct cacaaccatc agaaataaaa gatgggatga gtgtcttcaa 1860 gttttcactc ataattctcc aagcaatcga tgtccaatca tggagatggt agaatacctc 1920 cccgagtgca tgaaagttct tttagatttc tgcatgatac cttccacaga agacaagtcc 1980 tgtcaagact accatattga gtataatttc aagtatctcc aatgcccatt atccatgacc 2040 aaaaaagtag cacctaccca ggatgtggta tatgagcctc ttacaatcct caatgtcatg 2100 gtccaacata accgcataga actcctcaac caccctgtgt gtagggagta cttactcatg 2160 aaatggtgtg cctatggatt cagagcccat atgatgaacc taggatctta ttgtcttggt 2220 ctcataccca tgacccttct tgttgtcaaa atacagcctg gaatggcctt caattctact 2280 ggaataatca atggaactag tagtactcat gaggaaagaa tagacactct gaattcattt 2340 ccaataaaaa tatgtatgat tctagttttt ttatcaagta tatttggata ttgcaaagaa 2400 gtgatccaaa ttttccaaca gaaaaggaat tacttcctgg attacaacaa tgctctggaa 2460 tgggttatct atacaactag tatcatcttc gtgttgccct tgttcctcaa catcccagcg 2520 tatatgcagt ggcaatgtgg agcaatagcg atattcttct actggatgaa cttcctactg 2580 tatcttcaaa ggtttgagaa ctgtggaatt ttcattgtta tgttggaggt gatttttaaa 2640 acattgctga gatcgaccgg agtgtttatc ttcctcctac tggcttttgg cctcagcttt 2700 tatgttctcc tgaatttcca agatgccttc agcaccccat tgctttcctt aatccagaca 2760 ttcagtatga tgctaggaga catcaattat cgagatgcct tcctagaacc attgtttaga 2820 aatgagttgg catacccagt cctgaccttt gggcagctta ttgccttcac aatgtttgtc 2880 ccaattgttc tcatgaactt actgattggc ttggcggttg gggacattgc tgaggtccag 2940 aagcatgcgt cattgaagag gattgctatg caggtggaac ttcataccaa cttagaaaaa 3000 aagctgccac tctggtactt acgcaaagtg gatcagaggt ccaccatcgt gtatccaaat 3060 agacccaggc acggcaggat gctacggttt tttcattact ttcttaatat gcaagaaaca 3120 cgacaagaag taccaaacat tgacacatgc ttggaaatgg aaatattgaa acagaaatat 3180 cggctgaagg acctcacttc cctcttggaa aagcagcatg agctcatcaa actcatcatc 3240 cagaagatgg agatcatctc agagacagaa gatgaagata accattgctc tttccaagac 3300 aggttcaaga aggagaggct ggaacagatg cacagcaagt ggaattttgt cttaaacgca 3360 gttaagacta aaacacattg ttctattagc cacccggact tttagttctg tgtcttatgg 3420 gagtgggaga ctgctttaca tacttatttc agtgaatttc agtttggaaa agagcaaaga 3480 aacagaaagt tgactaacat tgctgcatgg agatcctagt tcctgcaacc tcacccatac 3540 atatgctcat atttcctgtc aattactatg tattgagaag atcctttctg acatgttcaa 3600 tttgaacatg aaggatagtc tctttcgagt gaataaaaac cagggttgtt ggaatgcata 3660 ttatggagga taagaattaa tgtaactatt aaggcagaac acaactacat aatacaagat 3720 gcatataatt ccaagtatta tatttaatct cctaccatgt taaaccttcc tgtgttataa 3780 cctgtctggg acactataat ctctgttcct actatgatta gatcatagtc tcaccctcct 3840 cgtcccatca cacatgacat cattttgagc cacatgacag aagtcctagt tagtagactg 3900 tgataagtat gaatgttaca atagaaatgt gttcccttag tgttcatcag ttgtgatggt 3960 ttaaatgaga aacgttgccc acagactcat acatttaaac ccttagtccc agttgttgct 4020 gctgcttagg ggggccacac agccttgctt gctctctcct ttctgagtgt ggagagaaat 4080 gtgatcagta agactcctgc tcctgctgcc atgctcttta ttccattatg gacttcttct 4140 gaaactgcaa gcagaaattc actgttcctt cctcaaattt cttttggtca tggtattata 4200 tcatagcaac agaaactaac ttatgtacca atggtcttaa taaagaataa agcctgtaca 4260 gtc 4263  

Claims (14)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 1) 시험관내(In vitro)에서, TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 분리된(isolated) 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant transduced into a plasmid-isolated host cell comprising a polynucleotide encoding TRPA1 in vitro; 2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 처리하고, 대조군으로 상기 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)을 각각 처리하는 단계;2) Treating the transformant with a TRPA1-specific activator and TRPA1 activity inhibitor candidate as an experimental group, and as a control, the TRPA1-specific activator and resolvin D1 (resolvin D1; 7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z, 15E, 19Z-docosahexaenoic acid), respectively; 3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And 4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 이온 채널 활성을 나타내는 TRPA1 활성 억제제 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법.4) TRPA1 activity inhibitor screening method comprising comparing each measurement of step 3) to select TRPA1 activity inhibitor candidates exhibiting TRPA1 ion channel activity lower or similar to the control. 제 6항에 있어서, 단계 2)의 TRPA1 특이적 활성제는 신남알데히드(cinnamaldehyde)인 것을 특징으로 하는 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법.7. The method of claim 6, wherein the TRPA1-specific active agent of step 2) is cinnanamaldehyde (cinnamaldehyde). 제 6항에 있어서, 단계 3)의 TRPA1 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 또는 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 TRPA1 활성 억제제 스크리닝 방법.7. The method of claim 6, wherein the measurement of TRPA1 ion channel activity of step 3) is performed by whole cell voltage clamp technique or calcium imaging. 1) 시험관내(In vitro)에서, TRPA1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드가 분리된(isolated) 숙주세포에 형질도입된 형질전환체를 제조하는 단계;1) preparing a transformant transduced into a plasmid-isolated host cell comprising a polynucleotide encoding TRPA1 in vitro; 2) 상기 형질전환체에 실험군으로 TRPA1 특이적 활성제와 피검물질을 처리하고, 대조군으로 상기 TRPA1 특이적 활성제와 레졸빈 D1(resolvin D1; 7S,8R,17S-trihydroxy-4Z,9E,11E,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid)을 각각 처리하는 단계;2) Treating the transformant with a TRPA1-specific activator and test substance in the experimental group, and as a control, the TRPA1-specific activator and resolvin D1 (resolvin D1; 7S, 8R, 17S-trihydroxy-4Z, 9E, 11E, 13Z). , 15E, 19Z-docosahexaenoic acid), respectively; 3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 TRPA1 이온 채널 활성을 각각 측정하는 단계; 및,3) measuring TRPA1 ion channel activity of the experimental group and the control group of step 2), respectively; And 4) 단계 3)의 각각의 측정치를 비교하여 대조군보다 낮거나 유사한 TRPA1 이온 채널 활성을 나타내는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 염증을 동반한 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법.4) A method for screening mechanical pain inhibitors with inflammation comprising comparing each measurement of step 3) to select a test substance that exhibits TRPA1 ion channel activity lower or similar to a control. 제 9항에 있어서, 단계 2)의 TRPA1 특이적 활성제는 신남알데히드(cinnamaldehyde)인 것을 특징으로 하는 염증을 동반한 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법.10. The method of claim 9, wherein the TRPA1-specific activator of step 2) is cinnamaldehyde. 제 9항에 있어서, 단계 3)의 TRPA1 이온 채널 활성의 측정은 전세포 전압 클램프 기술 또는 칼슘 이미지화에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 염증을 동반한 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법.10. The method of claim 9, wherein the measurement of TRPA1 ion channel activity in step 3) is performed by whole cell voltage clamp technique or calcium imaging. 제 9항에 있어서, 기계적 통증은 TRPA1 활성을 기반으로 하는 것을 특징으로 하는 염증을 동반한 기계적 통증 억제제 스크리닝 방법.10. The method of claim 9, wherein the mechanical pain is based on TRPA1 activity. 삭제delete 삭제delete
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