KR101203399B1 - Diagnostic kit for influenza virus H1N1 using rapid immunochromatography - Google Patents

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Abstract

신속 면역크로마토그라피법을 이용하여 A형 신종 인플루엔자 바이러스(Influenza A, H1N1)를 진단할 수 있는 진단 키트가 개시된다. 상기 신종 인플루엔자 진단 키트는 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 포함한다. 여기서, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 다공성 멤브레인 패드에 고정되어 있으며, 상기 신종 인플루엔자 진단 키트는 육안 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있는 시그널을 발생시키는 라벨에 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 접합시킨 항체-라벨 접합체를 함유하는 접합체 패드를 더욱 포함하는 것이 바람직하다.A diagnostic kit is disclosed that can diagnose influenza A virus (Influenza A, H1N1) using rapid immunochromatography. The swine influenza diagnostic kit includes antibodies against the hemagglutinin (HA) antigen of swine influenza virus. Here, the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen is immobilized on the porous membrane pad, and the new influenza diagnostic kit is designed to generate a signal that can be detected using the naked eye or a sensor. It is further preferred to further comprise a conjugate pad containing the antibody-label conjugate to which the antibody against the magglutinin (HA) antigen is conjugated.

Description

신속 면역크로마토그라피법을 이용한 신종 인플루엔자 진단 키트{Diagnostic kit for influenza virus H1N1 using rapid immunochromatography}Diagnostic kit for influenza virus H1N1 using rapid immunochromatography

본 발명은 신종 인플루엔자 진단 키트에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는, 신속 면역크로마토그라피법(Immunochromatography)을 이용하여 A형 신종 인플루엔자 바이러스(Influenza A, H1N1)를 진단할 수 있는 진단 키트에 관한 것이다.
The present invention relates to a swine influenza diagnostic kit, and more particularly, to a diagnostic kit capable of diagnosing type A swine influenza virus (Influenza A, H1N1) using rapid immunochromatography (Immunochromatography).

신종 인플루엔자 바이러스(Influenza A, H1N1)는, 인플루엔자 바이러스의 일종으로서, 사람, 조류 및 돼지 인플루엔자 바이러스의 유전물질이 혼합된 새로운 종류의 바이러스이다. 현재까지 보고된 바에 의하면, 신종 인플루엔자 바이러스는 확산속도가 빠르지만, 대다수 환자들에게서 경미한 증상만을 유발하고, 또한 계절인플루엔자와 비슷한 수준의 치명률을 나타낸다. 하지만, 대부분의 사람들이 신종 인플루엔자 바이러스에 대한 면역력이 없어, 대규모 유행의 가능성을 배재할 수 없으므로, 세계 각국과 WHO에서는 이에 대한 대책에 만전을 기하고 있다. 신종 인플루엔자의 증상은, 대부분 전형적인 인플루엔자 유사증상(influenza-like illness, ILI)을 보이지만, 전형적인 ILI 외에도, 중증 폐렴, 패혈증, 다발성 장기부전에 이르기까지 다양한 스펙트럼의 임상 양상을 나타내기도 하며, 열이 없는 경우도 있다. 신종 인플루엔자 확진 환자는 발열, 오한, 두통, 상기도 증상(기침, 인후통, 콧물, 호흡곤란), 근육통, 관절통, 피로감 등의 증상을 나타나며, 계절 인플루엔자와는 달리 약 25%의 환자에서 구토, 설사 등의 소화기증상을 동반하는 것으로 알려져 있다. 대부분의 건강한 신종인플루엔자 환자는, 항바이러스제 치료 없이도 1주일 이내에 자연 치유된다. 신종인플루엔자 환자의 치사율은 국가마다 다양하나, 현재 선진국에서는 0.2% 이하로 매우 낮으며, 중증질환 및 사망으로 진행되는 사례의 대부분(60 내지 70%)은 만성질환, 임신부, 영유아 등 고위험군에서 발생된다. 신종인플루엔자의 주된 전파 경로는 호흡기 비말전파, 접촉전파 등으로서, 계절인플루엔자 바이러스의 전파양상과 유사하다. 예를 들면, 감염된 사람이 기침이나 재채기를 할 때, 바이러스를 포함하는 물방울(비말)이 입에서 배출되어 보통 1~2미터를 날아가, 다른 사람의 손에 묻거나 직접 호흡기 또는 눈으로 들어가 전파된다. 또한, 신종인플루엔자 바이러스가 묻은 물체에 손이 닿고, 손에 묻은 바이러스가 다시 호흡기나 눈으로 들어가서 전파되기도 한다.
The new influenza virus (Influenza A, H1N1) is a type of influenza virus that is a new type of virus mixed with genetic material of human, avian and swine influenza viruses. Reported to date, the new influenza virus has a rapid spread, but causes only minor symptoms in most patients and also has a similar mortality rate as seasonal influenza. However, most people do not have immunity against the new influenza virus and cannot rule out the possibility of a massive epidemic. Symptoms of swine flu usually show typical influenza-like illness (ILI), but in addition to the typical ILI, they also exhibit a broad spectrum of clinical features ranging from severe pneumonia, sepsis to multiple organ failure, and without fever. In some cases. Patients diagnosed with swine flu have symptoms such as fever, chills, headache, upper respiratory symptoms (cough, sore throat, runny nose and shortness of breath), myalgia, joint pain, and fatigue. Unlike seasonal influenza, about 25% of patients have vomiting or diarrhea. It is known to be accompanied by digestive symptoms. Most healthy swine flu patients heal naturally within a week without antiviral treatment. The mortality rate of H1N1 flu patients varies from country to country, but is currently less than 0.2% in developed countries, and most cases of severe disease and death (60 to 70%) occur in high-risk groups such as chronic diseases, pregnant women, and infants. . The main propagation pathways of H1N1 influenza are respiratory droplet propagation and contact propagation, which are similar to those of seasonal influenza virus. For example, when an infected person coughs or sneezes, droplets (viruses) containing the virus are released from their mouths and usually fly 1-2 meters, buried in the hands of others, or directly into the respiratory or eyes to spread. . In addition, the new influenza virus is touched by an object, the virus in the hand can enter the respiratory or eye again and spread.

인플루엔자 바이러스는 1931년 Shope에 의해 돼지에서 처음 분리되었고, 사람 인플루엔자는 1933년 Smith, Andrews 및 Laidlow에 의해 처음 분리되었다. 인플루엔자 바이러스는 오르소믹소바이러스(Orthomyxovirus)과에 속하고, 단일가닥 RNA를 유전물질로 가지며, 서로 다른 8개의 RNA 분절로부터 여러 종류의 단백질이 만들어진다. 인플루엔자 바이러스의 주요 단백질로는, 바이러스 외피를 둘러싸고 있는 HA(Hemagglutinin)와 NA(Neuraminidase), RNA와 결합한 핵단백질인 NP(Nucleoprotein), 폴리머라제(polymerase) 역할을 하는 PB2, PB1, PA, 표피를 구성하고 있는 M(Matrix) 단백질이 있다. 형태학적으로, 인플루엔자 바이러스는, 평균 약 80 내지 120 nm의 직경을 가지며, 외부에 돌기가 있는 구형 입자 형태이지만, 유정란, 감수성 세포 등에서 분리된 직후의 바이러스는 약 400 nm 길이의 필라멘트 형태를 가지는 경우도 있다. 비리온은 외막(Envelope)을 가지며, 에테르, 열, pH 등에 민감한 특징이 있다. 인플루엔자 바이러스는 항원의 변이가 빈번하고 많은 아형이 존재하므로, 세계보건기구에서 제안한 표기 방법으로 구분한다. 2009년에 유행하고 있는 신종인플루엔자 바이러스의 경우, HA, NP, NS 유전자는 북미 지역의 돼지인플루엔자 바이러스에서, PB2, PA 유전자는 북미 지역의 조류인플루엔자 바이러스에서, PB1 유전자는 사람인플루엔자 바이러스 A(H3N2)에서, NA, M 유전자는 유럽 돼지인플루엔자 바이러스에서 유래한 것으로 추정된다.
Influenza viruses were first isolated from pigs by Shope in 1931 and human influenza was first isolated by Smith, Andrews and Laidlow in 1933. Influenza viruses belong to the Orthomyxovirus family, have single-stranded RNA as a genetic material, and various proteins are produced from eight different RNA segments. The major proteins of influenza viruses include HA (Hemagglutinin), NA (Neuraminidase), and RNA (Nucleoprotein), which bind to RNA, and PB2, PB1, PA, and epidermis, which act as polymerases. There is a M (Matrix) protein constituting. Morphologically, the influenza virus has an average diameter of about 80 to 120 nm and is in the form of spherical particles with external projections, but the virus immediately after separation from fertilized eggs, susceptible cells, etc. has a filament shape of about 400 nm in length. There is also. The virion has an envelope and is sensitive to ether, heat, pH, and the like. Influenza viruses are classified according to the notation proposed by the World Health Organization because of frequent antigenic variations and many subtypes. Influenza virus epidemic in 2009, HA, NP, NS genes in the swine flu virus in North America, PB2, PA genes in avian influenza virus in North America, PB1 gene in human influenza virus A (H3N2) , The NA, M gene is presumed to be derived from the European swine flu virus.

현재, 신종 인플루엔자 바이러스의 감염 진단은 바이러스의 분리와 바이러스 핵산 검출 및 면역크로마토그라피법을 이용한 신속항원검사 등으로 수행된다. 신종인플루엔자 바이러스의 분리는 환자의 시료를 매딘-다비 케이나인 키드니(Madin-Darby canine kidney: MDCK) 세포에 접종하여 혈구응집능이 있는 바이러스를 확인함으로서 수행되고, 바이러스 핵산의 검출은 실시간(Real time) RT-PCR법으로 수행된다. 최근 국내외 병원에서 주로 이용되는 면역크로마토그라피법은, 사람 인플루엔자 바이러스 항원 래피드 검사 키트를 이용하는 것으로서, 이와 같은 검사 키트로는 종래의 계절 인플루엔자와 신종 인플루엔자를 감별 진단할 수 없는 단점이 있다. 따라서, 신종인플루엔자 바이러스에 특이적인 신속 면역크로마토그라피 검사 키트의 개발이 요구되고 있다.
Currently, the diagnosis of infection of the new influenza virus is performed by isolation of the virus, detection of viral nucleic acid, and rapid antigen test using immunochromatography. Isolation of the H1N1 influenza virus is performed by inoculating a patient's sample into Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells to identify a hemagglutination virus, and detection of viral nucleic acid is performed in real time. ) RT-PCR method. Recently, immunochromatography, which is mainly used in domestic and foreign hospitals, uses human influenza virus antigen rapid test kits, and such a test kit has a disadvantage in that it is not possible to differentially diagnose conventional influenza and swine flu. Therefore, there is a need for the development of a rapid immunochromatography test kit specific for the influenza virus.

본 발명의 목적은, 사람의 코 또는 인후 분비물로부터, A형 신종 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 신속하게 진단할 수 있는 진단 키트를 제공하는 것이다.SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a diagnostic kit capable of rapidly diagnosing type A swine flu virus infection from human nose or throat secretions.

본 발명의 다른 목적은, 일반 병원, 의원 등에서, 특별한 검사 장비 없이도, 신종 인플루엔자 바이러스 감염 유무를 단시간에 용이하게 진단할 수 있는, 신속 면역크로마토그라피법을 이용한 신종 인플루엔자 진단 키트를 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a new influenza diagnosis kit using a rapid immunochromatography method, which can easily diagnose the presence of a new influenza virus infection in a short time in a general hospital, a clinic, or the like without any special test equipment.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은, 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 포함하며, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 기탁 번호 KCLRF-BP-00228 및/또는 KCLRF-BP-00229로 기탁된 잡종 세포주에 의하여 생성되는 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트를 제공한다. 또한, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 다공성 멤브레인 패드에 고정되어 있으며, 상기 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트는 육안 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있는 시그널을 발생시키는 라벨에 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 접합시킨 항체-라벨 접합체를 함유하는 접합체 패드를 더욱 포함하는 것이 바람직하다.
In order to achieve the above object, the present invention includes an antibody against hemagglutinin (HA) antigen of the new influenza virus, the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen is deposited No. KCLRF-BP-00228 And / or a new influenza (H1N1) diagnostic kit, produced by a hybrid cell line deposited with KCLRF-BP-00229. In addition, the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen is immobilized on a porous membrane pad, and the swine flu (H1N1) diagnostic kit is a swine flu label on a label that generates a signal that can be detected by the naked eye or a sensor. It is preferred to further comprise a conjugate pad containing an antibody-labeled conjugate to which the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen of the virus is conjugated.

본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트는, 사람의 코 또는 인후 분비물을 검체로 사용하고, 신속 면역크로마토그라피법을 이용하여, 특별한 검사 장비 없이, 현장에서 간편하고 신속하게, 신종 인플루엔자 바이러스 감염여부를 진단 할 수 있다.
Swine flu diagnostic kit according to the present invention, using a human nose or throat secretion as a sample, and rapid immunochromatography, using a rapid immunochromatography method, to diagnose the swine flu virus infection easily and quickly in the field, without special testing equipment can do.

도 1a 및 1b는 각각 본 발명의 일 실시예에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트의 측면도 및 평면 사진.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트에 검체를 적용시킨 결과를 보여주는 사진.1A and 1B are side and plan views, respectively, of a swine flu diagnostic kit according to one embodiment of the invention.
Figure 2 is a photograph showing the results of applying the sample to the new influenza diagnostic kit according to an embodiment of the present invention.

본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트는, A형 신종 인플루엔자 바이러스의 특이적인 항원인 헤마글루티닌(HA)에 대한 항체를 포함하며, 신속 면역크로마토그라피법을 이용하여, 검체(검사 재료)인 사람의 코 또는 인후 분비물 중의 신종 인플루엔자 바이러스 존재 여부를 신속하게 검사한다. 여기서, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 기탁 번호 KCLRF-BP-00228 및/또는 KCLRF-BP-00229로 기탁된 잡종 세포주에 의하여 생성된다.
The new influenza diagnostic kit according to the present invention includes an antibody against hemagglutinin (HA), which is a specific antigen of the type A influenza virus, and is a human specimen (test material) using rapid immunochromatography. The presence of the new influenza virus in the nasal or throat secretions of the patient is promptly examined. Wherein the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen is produced by a hybrid cell line deposited with accession numbers KCLRF-BP-00228 and / or KCLRF-BP-00229.

도 1a 및 1b는 각각 본 발명의 일 실시예에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트의 측면도 및 평면 사진이다. 도 1a 및 1b에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트(10)는, 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체가 고정된 검사선(16a)이 형성되어 있는 다공성 멤브레인 패드(16)를 포함한다. 또한, 필요에 따라, 본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트는, 액상 검체를 수용하는 검체 패드(12), 육안 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있는 시그널을 발생시키는 라벨(예를 들면, 금)을 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체에 접합시킨 항체-라벨 접합체를 함유하는 접합체 패드(14), 액상 검체를 최종적으로 수용하는 흡습 패드(18) 등을 더욱 포함할 수 있으며, 이러한 패드(12, 14, 16, 18)들은 연결 부위가 서로 중첩된 형태로 플라스틱 지지체(20)의 상부에 연속적으로 배열되어 스트립을 형성할 수 있다. 즉, 상기 다공성 멤브레인 패드(16)의 양단에는 진단될 액상 검체를 수용하는 검체 패드(12) 및 상기 다공성 멤브레인 패드(16)를 통과한 액상 검체를 최종적으로 수용하는 흡습 패드(18)가 더욱 형성되어 있을 수 있다.
1A and 1B are side and plan views, respectively, of a swine flu diagnostic kit according to one embodiment of the present invention. As shown in FIGS. 1A and 1B, the swine flu diagnosis kit 10 according to the present invention has a porosity in which a test line 16a in which an antibody against hemagglutinin (HA) antigen of swine flu virus is fixed is formed. Membrane pad 16. In addition, if necessary, the new influenza diagnostic kit according to the present invention, a label (for example, gold) for generating a signal that can be detected using a sample pad 12, the naked eye or a sensor containing a liquid sample. A conjugate pad 14 containing an antibody-labeled conjugate conjugated to an antibody against a hemagglutinin (HA) antigen of a new influenza virus, a hygroscopic pad 18 for finally receiving a liquid sample, and the like. In addition, the pads 12, 14, 16, and 18 may be continuously arranged on the top of the plastic support 20 in such a manner that the connection sites overlap each other to form a strip. That is, both ends of the porous membrane pad 16 are further provided with a sample pad 12 for receiving a liquid sample to be diagnosed and a moisture absorbing pad 18 for finally receiving a liquid sample passed through the porous membrane pad 16. It may be.

본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트를 제조하기 위해서는, 먼저, A형 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 헤마글루티닌(HA) 항원을 분리 및 정제하고, 상기 항원에 대한 단일클론 항체를 제조한다. 면역크로마토그라피법으로, A형, B형, 및 신종 인플루엔자 바이러스의 존재 여부를 동시에 감별 진단하기 위해서는, 멤브레인 패드(16)의 검사선 A(도 2의 "A형" 선), 검사선 B(도 2의 "B형" 선), 검사선 H1N1(도 2의 "신종"선 및 도 1의 16a) 위치에, 각각 A형 인플루엔자에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항체, B형 인플루엔자에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항체 및 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 헤마글루티닌(HA) 항체를 흡착시킨다. 즉, 멤브레인 패드(16)에는, A형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 항체, B형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 항체 및 신종 인플루엔자 바이러스에만 특이적인 항체가 각각 일정한 위치에 흡착되어 있다. 본 발명에 따른 진단 키트에 사용될 수 있는 멤브레인(membrane)은 통상의 진단 스트립 물질로 이루어질 수 있으며, 예를 들면, 니트로셀룰로우즈, 셀룰로우즈, 셀룰로우즈 아세테이트, 폴리에틸렌 등의 각종 합성 중합체로 이루어질 수 있고, 바람직하게는 니트로셀룰로우즈로 이루어진다. 다음으로, 금 입자에도 각각의 항체를 접합시켜, 항체-금 접합체를 만들고, 이들을 일정 비율로 혼합하여, 패드에 흡착(함침) 및 건조시켜, 항체-금 접합체 패드(14)를 만들고, 외부로부터 검체를 받아들여, 멤브레인 패드(16) 내부로 침투되도록 하는 검체 패드(12) 및 멤브레인 패드(16)에서 반응하지 않은 시료들을 흡수하는 흡습 패드(18)를 준비한다. 여기서, 상기 항체-금 접합체가 함침되는 패드(14, 모재)는 폴리에스테르, 유리섬유 등으로 이루어지고, 상기 검체 패드(12) 및 흡습 패드(18)는 셀룰로우즈로 이루어지며, 상기 검체 패드(12)는 계면활성제 처리되어 있는 것이 바람직하다. 다음으로, 건조된 항체-금 접합체 패드(14)와 검체 패드(12)를 중첩하여 멤브레인 패드(16)에 부착하고, 필요에 따라, 스톱라인 (stop-line) 표시용 스티커를 부착하며, 멤브레인 패드(16)의 반대편 위치에는 흡습 패드(18)를 부착시켜, 도 1에 도시된 바와 같은 테스트 스트립을 제조한다.
In order to prepare a new influenza diagnostic kit according to the present invention, first, hemagglutinin (HA) antigens specific for type A influenza virus are isolated and purified, and monoclonal antibodies directed against the antigens are prepared. In the immunochromatography method, in order to simultaneously discriminate the presence or absence of type A, type B, and new influenza virus, test line A ("type A" line in FIG. 2) and test line B ( "N-type" line in FIG. 2), test line H1N1 ("new" line in FIG. 2, and 16a in FIG. 1), respectively, common to nucleoprotein (NP) antibodies common to type A influenza and type B influenza Hemagglutinin (HA) antibodies specific for innucleoprotein (NP) antibodies and new influenza viruses are adsorbed. That is, in the membrane pad 16, antibodies common to the influenza A virus, antibodies common to the influenza B virus, and antibodies specific to the new influenza virus are respectively adsorbed at fixed positions. Membrane that can be used in the diagnostic kit according to the present invention may be made of a conventional diagnostic strip material, for example, with various synthetic polymers such as nitrocellulose, cellulose, cellulose acetate, polyethylene, etc. It may be made, preferably made of nitrocellulose. Next, each antibody is conjugated to gold particles to form an antibody-gold conjugate, and these are mixed at a predetermined ratio, adsorbed (impregnated) and dried on a pad to form an antibody-gold conjugate pad 14, A sample pad 12 for absorbing a sample and penetrating into the membrane pad 16 and a moisture absorbing pad 18 for absorbing unreacted samples in the membrane pad 16 are prepared. Here, the pad 14 (base material) to which the antibody-gold conjugate is impregnated is made of polyester, glass fiber, and the like, and the sample pad 12 and the moisture absorption pad 18 are made of cellulose and the sample pad. It is preferable that (12) is surfactant-treated. Next, the dried antibody-gold conjugate pad 14 and the sample pad 12 are overlapped and attached to the membrane pad 16, and if necessary, a stop-line marking sticker is attached and the membrane A moisture absorbent pad 18 is attached to the opposite side of the pad 16 to produce a test strip as shown in FIG.

본 발명에 따른 진단 키트를 이용한 신종 인플루엔자의 진단 과정은 다음과 같다. 먼저, 추출용액(예를 들면, 약 300㎕)이 담겨 있는 테스트 튜브에, 사람의 코 또는 인후 분비물이 채취된 스왑(Swab)을 넣고 충분히 추출한 후, 테스트 스트립(10)의 화살표가 아래로 가도록 테스트 스트립(10)을 테스트 튜브에 넣으면, 검체 중에 존재하는 A형, B형 또는 신종 인플루엔자 바이러스가 금 입자에 부착된 각각의 항체와 반응하면서, 모세관 현상에 의해서, 멤브레인 패드(16) 위로 전개된다. 이때, 검체 중에, 해당 바이러스 항원이 존재하면, 검체 중의 바이러스 항원과 금-입자에 접합된 항체가 반응하여 결합하고, 상기 바이러스 항원이 멤브레인 패드(167)에 흡착된 항체(16a)와 다시 반응하여, 해당 위치에 금-입자에 의한 보라색 밴드를 형성한다. 대조선(도 2의 c) 위치에는, 항-마우스 IgG를 흡착시켜, 검체 중의 바이러스 항원의 존재 여부에 무관하게, 마우스 IgG가 흡착된 금-입자와 대조선의 항-마우스 IgG가 항상 반응하여 보라색 밴드를 나타내도록 되어 있다. 또한, 반응하지 않은 검체는 흡습패드(18)에 스며들어, 검사창의 멤브레인이 깨끗한 흰색으로 나타나도록 함으로서, 검사선(16a)에 형성되는 밴드를 쉽게 판독할 수 있도록 하는 것이 바람직하다. 즉, 검체 중에 신종 인플루엔자 바이러스가 일정량 이상 존재하면, A형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 항원에 대한 단일클론 항체가 흡착된 검사선 A 위치, 신종 인플루엔자 바이러스 특이 항원에 대한 단일클론 항체가 흡착된 검사선 H1N1 위치, 및 대조선 위치에 보라색 밴드를 나타낸다. 한편, 검체 중에 신종 인플루엔자 바이러스가 존재하지 않으면, 대조선 위치에만 보라색 밴드가 형성된다.
The diagnosis process of swine flu using the diagnostic kit according to the present invention is as follows. First, insert a swab from a human nose or throat secretion into a test tube containing an extraction solution (for example, about 300 μl), and extract enough, so that the arrow of the test strip 10 goes downward. When the test strip 10 is placed in a test tube, the type A, B or swine influenza virus present in the sample reacts with each antibody attached to the gold particles and is developed onto the membrane pad 16 by capillary action. . At this time, if the virus antigen is present in the sample, the virus antigen in the sample and the antibody conjugated to the gold-particle react with each other, and the virus antigen reacts with the antibody 16a adsorbed on the membrane pad 167 again. , To form a purple band by gold-particles at that location. At the control line (c in Fig. 2), anti-mouse IgG was adsorbed, and the anti-mouse IgG of the control line and the anti-mouse IgG of the control line always reacted regardless of the presence or absence of the viral antigen in the sample. To indicate In addition, it is preferable that the unreacted sample penetrates into the moisture absorption pad 18 so that the membrane of the inspection window appears in a clean white color so that the band formed on the inspection line 16a can be easily read. In other words, if a certain amount of the new influenza virus is present in the sample, the test line A position where the monoclonal antibody is adsorbed against the antigen common to the influenza A virus, and the test line H1N1 with the monoclonal antibody adsorbed against the new influenza virus specific antigen. Purple bands at position and control line position. On the other hand, if no swine flu virus is present in the sample, a purple band is formed only at the control line position.

본 발명에 있어서, "단클론 항체"란 단일한 항원성 부위(단일 에피토프)에 대해서 지시되어 이와 특이적 결합을 하는 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 단클론 항체는 A형 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)에 특이적으로 결합하는 단백질 분자이다. 또한, 본 발명의 단클론 항체는, A형 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)에 특이적으로 결합하는 상기 단클론 항체의 기능성 단편들도 포함한다. 여기서, 항체의 "기능성 단편" 이란, 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 항체의 단편 또는 가변영역을 의미한다. 본 발명에 따른 진단 키트에는, 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체 뿐만 아니라, 면역학적 분석의 분야에서 일반적으로 사용되는 도구, 시약 등이 포함될 수 있다. 이러한 도구 및 시약으로는, 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 라벨(표지 물질), 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함될 수 있다. 표지 물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 적합한 담체로는, 가용성 담체로서, 생리학적 완충액, 예를 들어 PBS를 사용할 수 있고, 불용성 담체로는, 예를 들어 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 등을 사용할 수 있다. 항원-항체 복합체 형성은 조직면역 염색, 방사능면역분석법(RIA), 효소면역분석법(ELISA), 웨스턴 블럿(Western Blotting), 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산 분석법(Immunodiffusion assay) 등으로 분석될 수 있다. 항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하는 라벨에는 금 입자 외에도, 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자, 방사선 동위원소 등이 사용될 수 있다.
In the present invention, "monoclonal antibody" refers to a protein molecule that is directed to a single antigenic site (single epitope) and specifically binds thereto. For the purposes of the present invention, the monoclonal antibodies of the present invention are protein molecules that specifically bind to hemagglutinin (HA) of the influenza A virus. The monoclonal antibodies of the present invention also include functional fragments of the monoclonal antibodies that specifically bind to hemagglutinin (HA) of the type A swine flu virus. Here, the "functional fragment" of an antibody means the fragment or variable region of an antibody which has at least an antigen binding function. The diagnostic kit according to the present invention may include tools, reagents, and the like generally used in the field of immunological analysis, as well as antibodies to hemagglutinin (HA) antigens of the new influenza virus. Such tools and reagents may include suitable carriers, labels (labelled substances) capable of producing a detectable signal, solubilizers, cleaners, buffers, stabilizers, and the like. If the labeling substance is an enzyme, it may include a substrate and a reaction terminator capable of measuring enzyme activity. As a suitable carrier, as a soluble carrier, a physiological buffer such as PBS can be used, and as an insoluble carrier, for example, polystyrene, polyethylene, polypropylene and the like can be used. Antigen-antibody complex formation can be analyzed by tissue immunostaining, radioimmunoassay (RIA), enzyme immunoassay (ELISA), Western blotting, immunoprecipitation assay, immunodiffusion assay, etc. Can be. In addition to gold particles, enzymes, fluorescent materials, ligands, luminescent materials, microparticles, redox molecules, radioisotopes, and the like can be used for labels that qualitatively or quantitatively determine the formation of antigen-antibody complexes.

이하, 본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여, 바람직한 실시예를 제공한다. 그러나, 본 발명이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, to facilitate understanding of the present invention, preferred embodiments are provided. However, the present invention is not limited by the following examples.

실시예 1. 신종 인플루엔자 진단용 항체 제조Example 1. Preparation of swine influenza diagnostic antibody

(1) 헤마글루티닌(HA) 항원 정제 (1) Hemagglutinin (HA) antigen purification

국내에서 분리된 신종 인플루엔자 바이러스(A/Korea/01/2009 (H1N1) pdm)로부터 헤마글루티닌(HA) 항원을 농축 및 정제하기 위하여, 다음과 같이, S. Kodiballi 등(1993)의 방법을 이용하였다. 먼저, 신종 인플루엔자 바이러스를 β-프로피오락톤(propiolactone)으로 불활화시키고, 4,000xg에서 30분간 1차 원심분리한 후, 상층액을 2차로 70,000xg에서 3시간 동안 초원심분리(L8-70M, Beckman, USA)하였다. 원심분리된 펠렛(pellet)을 수크로오즈(sucrose)에 재부유시키고(sucrose양의 1/25배), 수크로오즈 밀도 구배 초원심분리(sucrose density gradient ultracentrifugation, 100,000xg, 90분)를 수행한 다음, 혈구응집능을 보이는 분획(fraction)을 분리하였다. 이렇게 농축된 바이러스 분획에 5%(w/v) n-옥틸-b-D-글루코피라노시드(n-octyl-b-D-gluco pyranoside)를 첨가하고 22℃에서 2시간 처리하여 바이러스를 파괴(disruption)시켰다. 그 후, 70,000xg에서 90분간 원심분리하고, 얻어진 펠렛을 0.1M NaCl로 용해시킨 후, 다시 10,000xg에서 30분간 원심분리하여, 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA)을 분리하였다.
In order to concentrate and purify the hemagglutinin (HA) antigen from the new influenza virus (A / Korea / 01/2009 (H1N1) pdm) isolated in Korea, the method of S. Kodiballi et al. (1993) is as follows. Was used. First, the influenza virus was inactivated with β-propiolactone, first centrifuged at 4,000xg for 30 minutes, and then the supernatant was secondarily separated at 70,000xg for 3 hours (L8-70M, Beckman, USA). Centrifuged pellets were resuspended in sucrose (1/25 times the amount of sucrose) and sucrose density gradient ultracentrifugation (100,000xg, 90 min) was performed. Then, fractions showing hemagglutination activity were separated. 5% (w / v) n-octyl-bD-glucopyranoside was added to the concentrated virus fraction and treated for 2 hours at 22 ° C. to disrupt the virus. . Thereafter, the resultant pellet was centrifuged at 70,000xg for 90 minutes, the obtained pellet was dissolved in 0.1M NaCl, and then centrifuged at 10,000xg for 30 minutes to separate hemagglutinin (HA) of the H1N1 influenza virus.

(2) 신종 인플루엔자 바이러스에 공통적인 항체 제조 (2) Production of antibodies common to swine influenza viruses

상기 단계에서 정제된 항원을 면역원으로 사용하여 BALB/c 마우스에 면역시켰다. 이후, 마우스의 비장 세포를 분리하여 골수종 세포(myeloma cell)와 접합시켜, 신종 인플루엔자 바이러스 항원에 대한 단클론 항체를 분비하는 잡종 세포주를 ELISA 방법으로 선별하고, 단계 희석 방법으로 단세포군을 확립하였다. 그 결과 얻어진 세포주를 2010. 02. 19 자로 한국세포주연구재단(KCLRF, Korean Cell Line Research Foundation)에 기탁하였다(기탁번호: KCLRF-BP-00228 및 KCLRF-BP-00229). 이들 세포주를 대량 배양하여 BALB/c 마우스 복강에 접종하여, 항체가 다량 함유된 복수를 얻고 프로틴(protein) A/G 겔(gel)을 이용하여 IgG 항체를 정제하였다. 얻어진 항체는, A형 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 헤마글루티닌(HA) 항원을 면역원으로 하여 제조된 마우스 단일클론 항체이다.
The antigen purified in this step was used as an immunogen to immunize BALB / c mice. Then, spleen cells of the mouse were isolated and conjugated with myeloma cells, hybrid cell lines secreting monoclonal antibodies against swine influenza virus antigens were selected by ELISA method, and a single cell group was established by the step dilution method. The resulting cell line was deposited on February 19, 2010 to the Korean Cell Line Research Foundation (KCLRF) (accession numbers: KCLRF-BP-00228 and KCLRF-BP-00229). These cell lines were cultured in large quantities and inoculated into the abdominal cavity of BALB / c mice to obtain ascites containing a large amount of antibody and to purify IgG antibodies using protein A / G gels. The obtained antibody is a mouse monoclonal antibody prepared by using a hemagglutinin (HA) antigen specific for a type A influenza virus as an immunogen.

실시예 2. 진단스트립의 제조Example 2 Preparation of Diagnostic Strips

(1) 멤브레인 코팅공정 (1) membrane coating process

니트로셀룰로우즈 멤브레인의 검사선 "A" 위치에 A형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항원에 대한 항체를 코팅하고, 검사선 "B" 위치에 B형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항원에 대한 항체를 코팅하고, 검사선 "H1N1" 위치에는 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 코팅하고, 대조선 "C" 위치에는 산양 항 마우스 항체를 각각 코팅하였다. 여기서, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는, PBS(phosphate buffered saline)를 이용하여 1mg/ml 농도로 희석하여, 멤브레인의 검사선 "H1N1" 위치에 코팅하였다.
Coating an antibody against a nucleoprotein (NP) antigen common to type A influenza virus at the test line "A" position of the nitrocellulose membrane and a nucleo to type B influenza virus at the test line "B" position Coating an antibody against a protein (NP) antigen, coating an antibody against a hemagglutinin (HA) antigen specific for the swine flu virus at the test "H1N1" position, and a goat anti mouse antibody at the control "C" position Were coated respectively. Herein, the antibody against the hemagglutinin (HA) antigen was diluted to a concentration of 1 mg / ml using PBS (phosphate buffered saline) and coated at the test line "H1N1" position of the membrane.

(2) 항체-금 접합체 제조 공정 (2) Antibody-Gold Conjugate Preparation Process

A형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항원에 대한 항체, B형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항원에 대한 항체 및 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 헤마글루티닌(HA)에 대한 항체를 금 콜로이드(Gold colloid)와 각각 결합시켰다. 구체적으로, 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시켜, 532nm에서의 흡광도가 10± 1이 되도록, 약 40nm 크기의 금 입자를 제조하였다. 상기 금 입자를 PEG(poly(ethylene glycol)) 용액으로 안정화시킨 후, 정제된 A형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 NP 항원에 대한 항체, B형 인플루엔자 바이러스에 공통적인 NP 항원에 대한 항체 및 신종 인플루엔자 바이러스에 특이적인 HA 항원에 대한 항체를 각각 일정 비율(예를 들면, 10㎍/㎖)로 혼합하고, 폴리에스테르 또는 유리 섬유에 함침 및 건조시켜, 금-패드를 제조하였다. 상기 금-입자에 결합된 헤마글루티닌(HA)에 대한 항체는 실시예 1의 (2)와 동일한 방법으로 제조하였다.
Antibodies to nucleoprotein (NP) antigens common to influenza A virus, antibodies to nucleoprotein (NP) antigens common to influenza B virus, and hemagglutinin (HA) specific to the new influenza virus Antibodies were bound to gold colloids, respectively. Specifically, gold chloride was reduced to sodium citrate solution to prepare a gold particle of about 40 nm size so that the absorbance at 532 nm was 10 ± 1. After stabilizing the gold particles with PEG (poly (ethylene glycol)) solution, the antibody against NP antigen common to purified influenza A virus, the antibody against NP antigen common to influenza B virus and new influenza virus Antibodies to specific HA antigens were each mixed in a proportion (eg 10 μg / ml), impregnated and dried in polyester or glass fibers to prepare gold-pads. Antibodies to hemagglutinin (HA) bound to the gold-particles were prepared in the same manner as in Example (2).

(3) 흡습 패드 제조 및 스트립 조립 (3) Hygroscopic pad manufacturing and strip assembly

상기 니트로셀룰로오스 멤브레인 상단에 건조된 흡습 패드를 부착하여, 니트로셀룰로오스 멤브레인을 통과한 반응 용액이 잘 흡수될 수 있도록 하였다.
The dried moisture absorbent pad was attached to the nitrocellulose membrane, so that the reaction solution passed through the nitrocellulose membrane could be absorbed well.

실시예 3. 신속 면역크로마토그라피법에 의한 신종 인플루엔자의 진단Example 3 Diagnosis of Swine Influenza by Rapid Immunochromatography

검체 희석액이 담긴 테스트 튜브에 검체(사람의 코 또는 인후 분비물)를 넣고, 실시예 2에서 제조한 진단스트립(테스트 스트립)을 넣어 반응시킨다. 이때, 검체 중에 신종 인플루엔자 바이러스가 일정량 이상 존재하면, 금-접합체 패드의 금 입자에 접합되어 있는 A형 인플루엔자 바이러스 공통 항체, 신종 인플루엔자 바이러스 특이 항체와 1차 반응하며, 이후 면역크로마토그라피법 원리에 의해, 검체가 멤브레인을 따라 이동하면서, 멤브레인의 검사선 "A" 및 "H1N1" 위치에 있는 다른 단일 클론의 A형 인플루엔자 바이러스 공통 뉴클레오프로테인 항체 및 신종 인플루엔자 바이러스 특이 헤마글루티닌 항체와 2차적으로 결합하여, 항체-항원-항체 복합체를 형성하여, 대조선, 검사선 "A" 및 "H1N1"의 3개의 보라색 밴드가 나타나거나, 대조선과 검사선 "H1N1"의 2개의 보라색 밴드를 나타낸다. 한편, 신종 인플루엔자 또는 A형 인플루엔자 음성인 경우에는, 대조선에서만 보라색 밴드를 나타낸다. 도 2는 본 발명의 신종 인플루엔자 진단 키트에 다양한 검체를 적용시킨 결과를 보여주는 사진으로서, 좌측으로부터 첫 번째 진단키트는 인플루엔자 음성(대조선 C만 발색), 2번째 진단 키트는 A형 인플루엔자 양성(A선만 발색), 3번째 진단 키트는 신종 인플루엔자 양성, 4번째 진단 키트는 신종 인플루엔자 양성, 5번째 진단 키트는 B형 인플루엔자 양성인 경우의 진단 결과를 보여준다.
A sample (human nose or throat secretion) is placed in a test tube containing the sample dilution solution, and the diagnostic strip (test strip) prepared in Example 2 is added and reacted. At this time, if a certain amount of new influenza virus is present in the sample, the primary reaction with the common influenza A virus and the new influenza virus specific antibody conjugated to the gold particles of the gold-conjugated pad, and then by the immunochromatography principle , As the sample travels along the membrane, secondary to the other monoclonal type A influenza virus consensus nucleoprotein antibody and the new influenza virus specific hemagglutinin antibody at the test line "A" and "H1N1" positions of the membrane. Bound to form an antibody-antigen-antibody complex, showing three purple bands of control line, test line “A” and “H1N1”, or two purple bands of control line and test line “H1N1”. On the other hand, in the case of swine flu or type A influenza negative, only the control line shows a purple band. Figure 2 is a photograph showing the results of applying a variety of samples to the new influenza diagnostic kit of the present invention, the first diagnostic kit from the left is influenza negative (color control C only), the second diagnostic kit influenza A positive (A line only) Color)), the third diagnostic kit is swine flu positive, the fourth diagnostic kit is swine flu positive, and the fifth diagnostic kit is positive for influenza B.

실시예 4. 신종 인플루엔자 진단 효능 시험Example 4. Swine Flu Diagnostic Efficacy Test

(1) 신종 인플루엔자 바이러스 검출 한계 시험 (1) swine flu virus detection limit test

신종 인플루엔자 바이러스의 검출 한계를 시험하기 위하여, 신종 인플루엔자 바이러스의 농도를 희석하면서, 실시예 3의 신종 인플루엔자 진단과 혈구응집반응 시험을 각각 실시하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다. 구체적으로, 혈구응집반응 역가(Hemagglutination Titer)는, U형 바닥(bottom)의 96 웰 플레이트(well plate)의 전체 웰(well)에 PBS(pH7.2)를 50ul씩 첨가하고, 1번 웰(well)에 신종 인플루엔자 바이러스를 50ul 첨가한 후, 2배 단계 희석하였다. 그 후, 1% 닭 적혈구 부유액을 50ul 첨가하고 잘 흔든 다음, 실온에서 40분간 정치하였다. 혈구응집반응 역가는 적혈구를 응집시키는 최고 희석배수로 결정하였다. 하기 표 1로부터, 본 발명에 따른 신종 인플루엔자 진단 키트는 혈구응집반응 1 HAU 인 신종 인플루엔자 바이러스를 1/16 HAU까지 검출할 수 있음을 알 수 있다(HAU: Hemagglutinin Unit).In order to test the detection limit of the H1N1 virus, the H1N1 influenza diagnosis and the hemagglutination reaction test of Example 3 were carried out while diluting the H1N1 concentration, and the results are shown in Table 1 below. Specifically, the hemagglutination titer, 50 μl of PBS (pH 7.2) is added to the entire well of the 96 well plate of the U-type bottom, and the first well ( 50 ul of H1N1 influenza virus was added to the wells, and then diluted twice. Thereafter, 50ul of 1% chicken erythrocyte suspension was added, shaken well, and left standing at room temperature for 40 minutes. Hemagglutination titer was determined as the highest dilution factor that aggregates red blood cells. From Table 1, it can be seen that the swine influenza diagnostic kit according to the present invention can detect swine influenza virus of hemagglutination 1 HAU up to 1/16 HAU (Hmag: Hemagglutinin Unit).

희석 배수Dilution drainage 실시예 3의 신종 인플루엔자 진단 결과Swine Flu Diagnosis Results of Example 3 혈구응집반응 결과Hemagglutination Result 21 (1 HAU)2 1 (1 HAU) ++ ++ 22 (1/2 HAU)2 2 (1/2 HAU) ++ -- 23 (1/4 HAU)2 3 (1/4 HAU) ++ -- 24 (1/8 HAU)2 4 (1/8 HAU) ++ -- 25 (1/16 HAU)2 5 (1/16 HAU) ++ -- 26 (1/32 HAU)2 6 (1/32 HAU) -- --

(2) 민감도와 특이도 시험 (2) sensitivity and specificity testing

본 발명의 실시예 2에 따라 제조된 진단 스트립의 민감도와 특이도를 6개 시?도 보건환경연구원 및 그 지역 인플루엔자 감시병원 실험실의 협조로 시험하였다. 감시병원에 내원하는 신종 인플루엔자 의심환자 391명으로부터 검체를 채취하여, 실시예 2에 따라 제조된 진단 스트립 및 Applied Biosystems사의 실시간(Real time) RT-PCR 방법으로 신종 인플루엔자 감염 여부를 진단하여, 검출율을 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시간 RT-PCR에 의해 양성으로 확인된 검체 159건을 실시예 2의 진단 스트립으로 검사한 결과 108건이 양성으로 나타났다. 또한, 실시간 RT-PCR에 의해 음성으로 확인된 검체 232건을 실시예 2의 진단 스트립으로 검사한 결과 1건이 양성으로, 나머지 231건이 음성으로 나타났다. 따라서, 본 발명 실시예 2의 진단 스트립의 민감도는 67.9%, 특이도는 99.6%였다.The sensitivity and specificity of the diagnostic strips prepared according to Example 2 of the present invention were tested in cooperation with six state and local health and environmental research institutes and local influenza surveillance hospital laboratories. Samples were collected from 391 suspected swine influenza patients who visited the surveillance hospital, and the detection rate of the new influenza infection was diagnosed by a diagnostic strip prepared according to Example 2 and a real time RT-PCR method of Applied Biosystems. Were compared, and the results are shown in Table 2 below. As shown in Table 2 below, 108 samples were found to be positive when the 159 samples identified as positive by real-time RT-PCR were examined with the diagnostic strip of Example 2. In addition, 232 samples confirmed as negative by real-time RT-PCR were tested with the diagnostic strip of Example 2, and one was positive and the remaining 231 were negative. Thus, the diagnostic strip of Example 2 of the present invention had a sensitivity of 67.9% and a specificity of 99.6%.

신종 인플루엔자 진단 시약 Swine Flu Diagnostic Reagent Real time RT-PCRReal time RT-PCR 양성positivity 음성voice 합계Sum
본 진단 키트
This diagnostic kit
양성positivity 108108 1One 109109 음성voice 5151 231231 282282 합계Sum 159159 232232 391391

(3) 교차반응 시험 (3) cross-reaction test

A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 패널(panel), 그 외 바이러스 및 세균 패널을 이용하여 교차반응 시험을 실시하였으며, 그 결과를 표 3 내지 5에 나타내었다. 표 3으로부터, A형 및 B형 인플루엔자 바이러스를 2배 희석하여 시험한 결과, 돼지 인플루엔자 바이러스 이외에는 교차 반응을 일으키지 않으며, 표 4 및 5로부터 인플루엔자 이외 바이러스 및 세균을 10배, 100배, 1,000배, 10,000배 희석하여 시험하여도 교차 반응을 일으키지 않음을 알 수 있다.Cross-reaction tests were performed using influenza A panel virus (B) and other panels of virus and bacteria, and the results are shown in Tables 3 to 5. From Table 3, the test was performed by diluting the influenza A and B influenza viruses twice, and no cross reaction occurred except for the swine influenza virus, and from Tables 4 and 5, the virus and bacteria other than influenza were 10, 100, 1,000, It can be seen that even when the test is diluted 10,000 times, no cross reaction occurs.

번호number 바이러스 이름Virus name
HAU
HAU 결과 result 신종 H1N1New H1N1 A A BB 1One Seasonal A/H1N1
(A/PR/8/34)Seasonal A / H1N1
(A / PR / 8/34) 27 2 7 -- ++ -- 22 Seasonal A/H1N1
(A/Brisbane/59/2007)Seasonal A / H1N1
(A / Brisbane / 59/2007) 27 2 7 -- ++ -- 33 Seasonal A/H1N1
(A/Solomon Islands/3/2006)Seasonal A / H1N1
(A / Solomon Islands / 3/2006) 28 2 8 -- ++ -- 44 Seasonal A/H1N1
(A/New Caledonis/20/99)Seasonal A / H1N1
(A / New Caledonis / 20/99) 27 2 7 -- ++ -- 55 Swine A/H1N1Swine A / H1N1 26 2 6 +/-+/- ++ -- 66 A/H2N2A / H2N2 27 2 7 -- ++ -- 77 A/H3N2A / H3N2 26 2 6 -- ++ -- 88 A/H3N5A / H3N5 27 2 7 -- ++ -- 99 A/H3N8A / H3N8 25 2 5 -- ++ -- 1010 A/H4N6A / H4N6 27 2 7 -- ++ -- 1111 A/H5N3A / H5N3 26 2 6 -- ++ -- 1212 A/H6N5A / H6N5 27 2 7 -- ++ -- 1313 A/H7N1A / H7N1 24 2 4 -- ++ -- 1414 A/H8N4A / H8N4 26 2 6 -- ++ -- 1515 A/H9N2A / H9N2 28 2 8 -- ++ -- 1616 A/H10N7A / H10N7 27 2 7 -- ++ -- 1717 A/H10N9A / H10N9 28 2 8 -- ++ -- 1818 A/H11N6A / H11N6 28 2 8 -- ++ -- 1919 A/H11N8A / H11N8 27 2 7 -- ++ -- 2020 B 형 Type B 25 2 5 -- -- ++

패널panel 균주명Strain name 스트레인Strain 농도density 희석배수Dilution factor 1:101:10 1:102 1:10 2 1:103 1:10 3 1:104 1:10 4





바
이
러
스





bar
this
Naughty
The Adenovirus 3Adenovirus 3 GBGB 1mg/ml1mg / ml -- -- -- -- Adenovirus 6Adenovirus 6 Tonsil 99Tonsil 99 1.2mg/ml1.2mg / ml -- -- -- -- Adenovirus 21Adenovirus 21 AV-1645/128AV-1645 / 128 1mg/ml1mg / ml -- -- -- -- CMVCMV Towne Towne 1.5mg/ml1.5mg / ml -- -- -- -- Echovirus 2Echovirus 2 CornelisCornelis 1.3mg/ml1.3mg / ml -- -- -- -- Echovirus 5Echovirus 5 NoyceNoyce 0.9mg/ml0.9mg / ml -- -- -- -- Echovirus 11Echovirus 11 GregoryGregory 1mg/ml1mg / ml -- -- -- -- Herpes simplex virus 1Herpes simplex virus 1 FF 0.25mg/ml0.25mg / ml -- -- -- -- Herpes simplex virus 2Herpes simplex virus 2 GG 0.115mg/ml0.115mg / ml -- -- -- -- Mumps virusMumps virus EndersEnders 1.8mg/ml1.8mg / ml -- -- -- -- Parainfluenza Virus 1Parainfluenza Virus 1 SendaiSendai 1.5mg/ml1.5mg / ml -- -- -- -- Parainfluenza Virus 2Parainfluenza Virus 2 CA/GreerCA / Greer 3.9mg/ml3.9 mg / ml -- -- -- -- Parainfluenza Virus 3Parainfluenza Virus 3 C243C243 1.93mg/ml1.93mg / ml -- -- -- -- Respiratory Syncytial virus Respiratory Syncytial virus A-2A-2 1mg/ml1mg / ml -- -- -- -- Respiratory Syncytial virusRespiratory Syncytial virus LongLong 0.42mg/ml0.42 mg / ml -- -- -- --


패널
panel
균주명
Strain name
농도
density 희석배수Dilution factor 1:101:10 1:102 1:10 2 1:103 1:10 3 1:104 1:10 4








세균








Germ BordetellaBordetella pertussispertussis 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- EnterococcusEnterococcus faecalisfaecalis 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- EscherichiaEsherichia colicoli 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- HaemophilusHaemophilus influenzaeinfluenzae 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- KlebsiellaKlebsiella pneumoniaepneumoniae 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- LegionellaLegionella pneumophilapneumophila 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- MycobacteriumMycobacterium aviumavium 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- MycobacteriumMycobacterium intracellulareintracellulare 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- MycobacteriumMycobacterium tuberculosistuberculosis 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- MycoplasmaMycoplasma pneumoniaepneumoniae 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- NeisseriaNeisseria gonorrhoeaegonorrhoeae 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- NeisseriaNeisseria meningitidismeningitidis 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- ProteusProteus vulgarisvulgaris 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- PseudomonasPseudomonas aeruginosaaeruginosa 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- StaphylococcusStaphylococcus pneumoniaepneumoniae 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- -- StaphylococcusStaphylococcus pyogenespyogenes 1x108cells/ml1x10 8 cells / ml -- -- -- --

한국세포주연구재단Korea Cell Line Research Foundation KCLRFBP00228KCLRFBP00228 2010021920100219 한국세포주연구재단Korea Cell Line Research Foundation KCLRFBP00229KCLRFBP00229 2010021920100219

Claims (7)

신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 포함하며,
상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 기탁 번호 KCLRF-BP-00228로 기탁된 잡종 세포주, 기탁 번호 KCLRF-BP-00229로 기탁된 잡종 세포주 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 잡종 세포주에 의하여 생성되는 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트.Includes antibodies against hemagglutinin (HA) antigens of the H1N1 influenza virus,
The antibody against the hemagglutinin (HA) antigen is a hybrid cell line selected from the group consisting of a hybrid cell line deposited with accession number KCLRF-BP-00228, a hybrid cell line deposited with accession number KCLRF-BP-00229, and mixtures thereof. Swine flu (H1N1) diagnostic kit, which is produced by. 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체는 다공성 멤브레인 패드에 고정되어 있는 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트.The swine influenza (H1N1) diagnostic kit of claim 1, wherein the antibody against hemagglutinin (HA) antigen is immobilized on a porous membrane pad. 제3항에 있어서, 육안 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있는 시그널을 발생시키는 라벨에 신종 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(HA) 항원에 대한 항체를 접합시킨 항체-라벨 접합체를 함유하는 접합체 패드를 더욱 포함하는, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트.4. The conjugate pad according to claim 3, wherein the conjugate pad containing an antibody-labeled conjugate is prepared by conjugating an antibody against a hemagglutinin (HA) antigen of the new influenza virus to a label that generates a signal that can be detected by the naked eye or a sensor. Further comprising, swine flu (H1N1) diagnostic kit. 제3항에 있어서, 상기 다공성 멤브레인 패드의 양단에는 진단될 액상 검체를 수용하는 검체 패드 및 상기 다공성 멤브레인 패드를 통과한 액상 검체를 최종적으로 수용하는 흡습 패드가 더욱 형성되어 있는 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트.The method of claim 3, wherein both ends of the porous membrane pad further comprises a sample pad for receiving a liquid sample to be diagnosed and a hygroscopic pad for finally receiving the liquid sample passed through the porous membrane pad, swine influenza ( H1N1) diagnostic kit. 제3항에 있어서, 상기 다공성 멤브레인 패드에는 A형 인플루엔자에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항체 및 B형 인플루엔자에 공통적인 뉴클레오프로테인(NP) 항체가 더욱 고정되어 있는 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트. 4. The swine influenza (H1N1) according to claim 3, wherein the porous membrane pad is further immobilized with a nucleoprotein (NP) antibody common to influenza A and a nucleoprotein (NP) antibody common to influenza B. A) diagnostic kit. 제5항에 있어서, 상기 액상 검체는 사람의 코 또는 인후 분비물인 것인, 신종 인플루엔자(H1N1) 진단 키트. According to claim 5, The liquid sample is human nose or throat secretion, swine flu (H1N1) diagnostic kit.
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