KR101199545B1

KR101199545B1 - Brewing yeast Saccharomyces cerevisiae 90-1 and brewed alcohol made therewith

Info

Publication number: KR101199545B1
Application number: KR1020100119652A
Authority: KR
Inventors: 안병학; 김재호; 김혜련; 권영희
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2010-11-29
Filing date: 2010-11-29
Publication date: 2012-11-12
Also published as: KR20120058042A

Abstract

본 발명은 명품 약주 발효균주 사카로마이세스 세레비지애 90-1 (KCTC11813BP) 및 이러한 균주로 제조된 약주, 탁주 등의 알코올에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신균주인 Y90-1 균주는 전통누룩에서 분리된 야생 양조효모로 발효능이 우수하며, 에탄올 18%까지 내성이 있어 고 알코올 함량에서도 생존하며, 이러한 효모를 이용한 약주에 살구(apicot), 바나나, 파인애플 등과 같은 과일 향을 내는 에틸 카프릴레이트(ethyl caprylate)와 달고(sweet), 오일-넛 유사(oil-nut like) 향 특성이 있는 데카노익 산 에일 에스터(Decanoic acid ethyl ester)(Ethyl caprate)가 상대적으로 다량 존재하여 약주가 과일 향을 내면서도 부드러운 바디감을 주고, 또 감칠맛을 내는 신맛 특성이 있는 호박산(succinic acid) 함량이 높아 관능특성이 우수하다.The present invention relates to alcohols, such as medicinal liquor fermented strain Saccharomyces cerevisiae 90-1 (KCTC11813BP) and medicinal liquor, Takju prepared by such strains. The strain Y90-1 according to the present invention is a wild brewing yeast isolated from traditional yeast and has excellent fermentation ability and is resistant to ethanol 18% and survives even in high alcohol content. Ethyl caprylate and sweet, oil-nut-like fragrance with fruit flavors such as bananas, pineapples, and the like.Decanoic acid ethyl ester (Ethyl caprate) is present in a relatively large amount, so the medicinal liquor gives a fruity scent and a soft body feeling, and has a high acid content of succinic acid which gives a rich taste, and the sensory properties are excellent.

Description

발효 효모 사카로마이세스 세레비지애 90-1 및 이를 이용하여 제조한 발효주{Brewing yeast Saccharomyces cerevisiae 90-1 and brewed alcohol made therewith}Fermented yeast Saccharomyces cerevisiae 90-1 and fermented liquor prepared using the same {Brewing yeast Saccharomyces cerevisiae 90-1 and brewed alcohol made therewith}

본 발명은 약주, 탁주 등의 제조에 이용되는 사카로마이세스 세레비지애 균주 및 이러한 균주를 이용하여 제조된 약주, 탁주 등의 섭취용 알코올에 관한 것이다. The present invention relates to Saccharomyces cerevisiae strains used for the production of medicinal herbs, Takju and the like and alcohols for ingestion of medicinal herbs, Takju and the like prepared using such strains.

술은 자연적으로 발생되어 지역, 민족, 기후, 풍토 및 문화적 차이에 따라 여러 형태의 개성 있는 술로 발전되었다. 세균, 효모 등의 존재가 발견되기 이전에는 현대적인 발효 기술이 없었으므로, 누룩 등에 존재하는 자생 효모에 의하여 발효주를 제조하였다. 그러나 자생 효모들을 이용하면 우수하고 일정한 발효능을 유지하기가 어려운 문제점이 있었다. 이 문제점을 해결하기 위해, 근대에 들어서는 자생 효모들 중에서 우수한 특성을 갖는 효모를 선별, 분리하여 발효를 수행함으로써, 우수하고 일정한 발효능을 유지하여 우수한 발효주를 생산하기 시작했다.Alcohol is naturally occurring and has evolved into several types of unique sake depending on region, ethnicity, climate, climate and cultural differences. Since there was no modern fermentation technology before the existence of bacteria, yeast, etc., The fermented bean was prepared by the native yeast present in the yeast. However, there is a problem in that it is difficult to maintain good and constant efficacy by using native yeasts. In order to solve this problem, yeast having excellent characteristics among the native yeasts in modern times was selected and separated to carry out fermentation, and excellent and constant efficacy was maintained to produce excellent fermented beverage.

현재 맥주, 청주 또는 포도주 등 흔히 접할 수 있는 대표적인 발효주들은 모두 엄선된 발효 효모에 의해 발효된 것이며, 계속적으로 새로운 발효 효모를 탐색하는 작업이 이루어지고 있다. Currently, typical fermented liquor that is commonly encountered such as beer, sake or wine are all fermented by carefully selected fermented yeast, and the work of continuously searching for new fermented yeast is being performed.

이러한 탐색을 위해서는 실험실에서 선별된 균주들을 일일이 발효시킨 후 각각의 발효능 등의 특성을 측정해야 하므로, 많은 시간과 비용을 필요로 한다.
For such a search, since the strains selected in the laboratory are fermented one by one and the characteristics of each fermentation capacity are measured, it requires a lot of time and cost.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 발효능이 우수할 뿐만 아니라, 내알코올성이 우수하고, 내당성 등의 알코올 발효를 위한 특성이 양호하며, 우수한 향미를 나타내고, 관능 특성이 매우 뛰어난 알코올 발효용 효모 균주를 제공하는 것이다.Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is not only excellent fermentation ability, but also excellent alcohol resistance, good properties for alcohol fermentation such as sugar resistance, good flavor, and alcohol fermentation yeast with excellent sensory properties. To provide a strain.

본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 상기 효모 균주를 이용하여 제조된 약주, 탁주 등의 섭취용 알코올을 제공하는 것이다.Another technical problem to be achieved by the present invention is to provide an alcohol for ingestion, such as medicinal herbs, Takju prepared using the yeast strain.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 새롭게 분리 동정된 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 90-1 (KCTC11813BP)를 제공한다.In order to achieve the above technical problem, the present invention provides a newly isolated Saccharomyces cerevisiae 90-1 (KCTC11813BP).

본 발명자들은 다양한 누룩으로부터 수많은 효모 균주를 분리한 후 발효능, 내알코올성, 내당성, 침강성, 향의 특성, 관능감 등을 종합적으로 평가하여 최적의 효모를 선별하였으며, 선별된 효모를 동정하여 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)임을 확인하였으며, 이를 Y90-1 균주라고 명명하고, 2010년 11월 24일자로 한국생명공학연구원에 기탁번호 KCTC11813BP로 기탁하였다.After separating numerous yeast strains from various yeasts, the present inventors selected the optimal yeast by comprehensively evaluating fermentation ability, alcohol resistance, sugar resistance, sedimentation property, flavor characteristics, and sensory properties, and identifying the selected yeast. Saccharomyces cerevisiae ( Saccharomyces cerevisiae ) was identified as, Y90-1 strain, and was deposited on November 24, 2010 to the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology as deposit number KCTC11813BP.

본 발명에 따른 발효균주 Y90-1 균주는 전통누룩에서 분리된 야생 양조효모로 발효능이 우수하며, 이화학적, 유전학적 특성에 대한 분석을 통해 동정한 결과 포도주 효모, 맥주효모 및 일본의 청주효모와는 다른 신 균주임을 확인하였고, 이를 이용하여 약주를 양조할 경우 에탄올 18%까지 내성이 있어 고 알코올 함량에서도 생존하며, 이러한 효모를 이용한 약주는 살구(apicot), 바나나, 파인애플 등과 같은 과일 향을 내는 에틸 카프릴레이트(ethyl caprylate)와 달고(sweet), 오일-넛 유사(oil-nut like) 향 특성이 있는 데카노익 산 에틸 에스터(Decanoic acid ethyl ester)(Ethyl caprate)가 상대적으로 다량 존재하여 약주가 과일 향을 내면서도 부드러운 바디감을 주며, 또 감칠맛을 내는 신맛 특성이 있는 호박산(succinic acid) 함량이 높아 관능특성이 우수한 것으로 판명하여, 본 발명을 완성하게 되었다.The fermented strain Y90-1 strain according to the present invention is a wild brewing yeast isolated from traditional yeast and has excellent fermentation ability. As a result of the analysis through the analysis of physicochemical and genetic characteristics, wine yeast, beer yeast and Japanese yeast yeast It was confirmed that it is a new strain, and when it is brewed, it is resistant to 18% ethanol, and it survives even in high alcohol content. There are relatively large amounts of ethyl caprylate and sweet decanoic acid ethyl ester (Ethyl caprate) with sweet, oil-nut-like fragrance. It has proved to be excellent in sensory properties because it has high succinic acid content with sour taste that gives Yakju a fruity aroma and soft taste. It was completed the people.

본 발명에 따른 효모 균주는 통상적인 사카로마이세스 속 효모의 배양법에 의해 대량으로 배양할 수 있다. 배양배지로는 탄소원, 질소원, 비타민 및 미네랄로 구성된 배지를 사용할 수 있다. 예를 들어, yeast malt extract agar (YM agar) 배지, potato dextrose agar (PDA) 배지에서 25~30℃, pH 5.6±0.2, 36~72시간, 호기적인 조건에서 배양하여 4℃에서 보관하면서 계대하여 사용할 수 있다.Yeast strain according to the present invention can be cultured in large quantities by a conventional method of culturing Saccharomyces sp. The culture medium may be a medium consisting of a carbon source, nitrogen source, vitamins and minerals. For example, incubate in yeast malt extract agar (YM agar) medium, potato dextrose agar (PDA) medium at 25-30 ° C., pH 5.6 ± 0.2, 36-72 hours, aerobic conditions and store at 4 ° C. Can be used.

따라서 본 발명은 또한 상기 Y90-1 균주를 이용하여 제조된 약주, 탁주, 막걸리, 청주, 포도주, 과실주 등의, 하지만 이에 한정되지 않는, 발효주를 제공하며, 또한 상기 Y90-1 균주를 이용하여 발효주를 제조하는 방법을 제공한다.Accordingly, the present invention also provides fermented wines, including, but not limited to, medicinal wine, Takju, Makgeolli, Cheongju, wine, fruit wine, etc. prepared using the Y90-1 strain, and also fermented wine using the Y90-1 strain. It provides a method of manufacturing.

예를 들어, 본 발명에 따른 발효주는 (S1) 전분질 원료(예를 들어, 찹쌀), 누룩 및 본 발명 균주에 물을 첨가하여 밑술을 제조하는 단계; (S2) 상기 (S1)단계에서 수득한 밑술에 증자한 전분질 원료, 누룩 및 물을 추가로 첨가하여 발효시키는 담금단계; (S3) 상기 (S2)단계에서 수득한 발효액을 여과하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있으며, 상기 (S1) 또는 (S2)단계 이후에 동충하초, 적하수오, 발효홍삼, 대추, 감초 등의 식물 약재, 매실, 포도 등의 과실 등 여러 가지 성분이 첨가될 수도 있다. 예를 들어, 상기 밑술을 제조하는 단계는 5~30℃에서 2~20일간 발효시켜 수행될 수 있으며, 상기 담금단계는 5~30℃에서 2~30일간 수행될 수 있다. 다만, 본 발명에 따른 발효주의 제조 방법은 이러한 구체적 방법들에 한정되는 것은 아니다.
For example, the fermented liquor according to the present invention (S1) is prepared by adding water to the starch raw material (for example, glutinous rice), yeast and strain of the present invention; (S2) a immersion step of adding fermented starch raw material, yeast and water further to the base liquor obtained in step (S1) to ferment; (S3) can be prepared by a method comprising the step of filtering the fermentation broth obtained in the step (S2), and after the (S1) or (S2) step Cordyceps, drizzle, fermented red ginseng, jujube, licorice, etc. Various ingredients, such as medicinal herb, plum, fruit such as grapes may be added. For example, the step of preparing the base liquor may be carried out by fermentation for 2 to 20 days at 5 ~ 30 ℃, the immersion step may be performed for 2 to 30 days at 5 ~ 30 ℃. However, the method of preparing fermented wine according to the present invention is not limited to these specific methods.

본 발명은 여러 가지 유용한 특성을 지닌 새로운 분리 효모 사카로마이세스 세레비지애 90-1 (KCTC11813BP) 및 이러한 효모를 이용하여 제조된 발효주와 이러한 발효주의 제조 방법을 제공한다.
The present invention provides novel isolated yeast Saccharomyces cerevisiae 90-1 (KCTC11813BP) having a variety of useful properties and fermented liquor prepared using such yeast and methods of making such fermented liquor.

도 1은 본 발명에 따른 Y90-1 균주와 동일 종의 공지 균주들 사이의 염기서열을 비교한 도면이다. 도 1에서 1은 Saccharomyces cerevisiae CBS4054 (partial 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and partial 26S rRNA gene, type strain CBS4054)의 서열이며, 2는 Saccharomyces cerevisiae isolate NN691 (18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence)의 서열이고, 11은 Saccharomyces cerevisiae ITEM10466 (partial ITS1, 5.8S rRNA gene and partial ITS2, strain ITEM10466)의 서열이다.1 is a diagram comparing the nucleotide sequence between the Y90-1 strain according to the present invention and known strains of the same species. 1 to 1 is a sequence of Saccharomyces cerevisiae CBS4054 (partial 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and partial 26S rRNA gene, type strain CBS4054), 2 is Saccharomyces cerevisiae isolate NN691 (18S ribosomal RNA gene, partial sequence ; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence), 11 is Saccharomyces cerevisiae ITEM10466 (partial ITS1, 5.8S rRNA gene and partial ITS2) , strain ITEM10466).

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following embodiments. Embodiments of the invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.

<신규 효모의 선별 및 선별방법><Selection and screening method of new yeast>

경상남도 합천 등 다양한 지방에서 입수한 약 300여개의 누룩을 10진 희석법으로 희석하여 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지를 이용하여 15~30℃에서 24~76시간 동안 집식 배양하였으며, 10⁴~10⁶ 플레이트 상에서의 집락이 생성된 모든 효모를 분리하였다. 총 약 1200개의 집락이 분리되었으며, 이중 아래와 같은 방법을 통하여 약주 제조를 위한 최적의 효모를 단계적으로 선별하였고, 후술하는 내알코올성, 내당성, 침강성, 향미 등을 종합적으로 평가하여 다시 최적의 효모를 선별하였다.Gyeongsangnam Hapcheon such jipsik were cultured and diluted to a yeast of about 300 available from various fat decimal dilution method using a (Potato Dextrose Agar) PDA medium at 15 ~ 30 ℃ for 24 to 76 hours, 10 ⁴ to 10 ⁶ Plate Colonies in the phases were isolated from all yeasts produced. A total of about 1200 colonies were separated, and among them, the optimal yeast for the production of medicinal herbs was selected in stages through the following method, and the optimal yeast was again evaluated by comprehensively evaluating alcohol resistance, sugar resistance, sedimentation, flavor, etc. which will be described later. Screened.

먼저 100 : 300 : 10 비율의 찹쌀: 물: 누룩[개량누룩(SP1800)과 진주곡자(SP300)를 4: 1 비율로 혼합 사용] 혼합물을 55℃에서 4시간 당화시키고(14Brix 당화액), 여기에 상기 분리된 효모를 1.0 X 10⁷CFU/mL의 비율로 첨가하였다. 약 15℃에서 약 일주일 동안 발효시킨 후 산 생성(indicator BCG(Bromocresol green) 사용), 가스 생성(Gas(CO₂) 생성 확인 durham tube 사용) 등을 확인하였으며, 알코올 생성, 생성된 향 등을 비교하여 약 225개의 효모들을 선별하였다.First, 100: 300: 10 ratio of glutinous rice: water: koji [modified yeast (SP1800) and pearl grains (SP300) in a ratio of 4: 1) The mixture was saccharified at 55 ° C. for 4 hours (14Brix saccharified solution), and To the isolated yeast was added at a rate of 1.0 × 10 ⁷ CFU / mL. After fermentation at about 15 ℃ for about a week, acid production (using indicator BCG (Bromocresol green)) and gas production (Gas (CO ₂ ) production confirmation using durham tube) were checked. About 225 yeasts were selected.

다음 단계로 300 ml의 약주를 제조하여 효모를 다시 선별하였다. 110 : 180 : 10 비율의 찹쌀: 물: 누룩[개량누룩(SP1800)과 진주곡자(SP300)를 4: 1 비율로 혼합 사용] 혼합물을 55℃에서 4시간 당화시키고, 선별된 각각의 효모를 1.0 X 10⁷CFU/mL의 비율로 첨가하고, 15℃에서 7~15일 발효시켜 생성된 약주들의 알코올 함량, pH, 산도, 당도, 향 생성 등을 비교하여 약 50개의 효모를 2차 선별하였고, 하기 추가적인 평가실험 등을 통하여 Y90-1 균주를 최종 선별하였다.
In the next step, 300 ml of medicinal liquor was prepared to reselect yeast. 110: 180: 10 ratio of glutinous rice: Water: Nuruk [Used mixture of improved Nuruk (SP1800) and Pearl Grain (SP300) in 4: 1 ratio) The mixture was glycosylated at 55 ° C. for 4 hours, and each selected yeast was 1.0. About 50 yeasts were secondarily selected by comparing the alcohol content, pH, acidity, sugar content, fragrance production, etc., of the chemicals produced by adding X 10 ⁷ CFU / mL and fermentation at 15 ° C. for 7-15 days. Y90-1 strain was finally selected through the following additional evaluation experiment.

<찹쌀 약주의 제조(발효방법)><Preparation of glutinous rice wine (fermentation method)>

전체 술 양의 2%로 주모(효모 0.01%, 찹쌀: 누룩(SP 300): 물 = 1: 0.2: 1.4)를 20℃에서 1일간 배양하고, 그 주모에 찹쌀: 누룩 (첨가량의 5배 물로 1시간 교반 후 착즙, SP 300): 물 = 1: 0.4: 11.27로 전체 술 양의 66%로 밑술을 하여 15℃에서 4일간 발효한 후, 찹쌀: 누룩: 엿기름 = 1: 0.037: 0.029로 전체 술 양의 32%로 덧술을 하여 15℃에서 17일간 발효하여 찹쌀 약주를 제조하였다.
2% of the total amount of liquor was incubated with yeast (0.01% yeast, glutinous rice: koji (SP 300): water = 1: 0.2: 1.4) at 20 ° C for 1 day, and the rice cake boiled with glutinous rice: koji (5 times water added). After stirring for 1 hour, juice, SP 300): water = 1: 0.4: 11.27 and fermented at 15 ° C. for 4 days with 66% of the total amount of sake, then glutinous rice: malt: malt = 1: 0.037: 0.029 It was added with 32% of the amount of liquor and fermented at 15 ° C. for 17 days to prepare glutinous rice wine.

<효모의 알코올 내성 및 내당성><Alcohol tolerance and sugar resistance of yeast>

알코올 내성은 YPD(glucose 2%, yeast extract 0.5%, bactopeptone 1%: Sigma, USA) 액체 배지에 효모 접종 직후 무수에탄올을 16, 18, 20, 22%(v/v)가 되도록 각각 첨가하여 20℃에서 72시간 배양한 후 660 nm에서의 흡광도를 측정하여 비교하였고, 내당성은 20, 25, 30, 35, 40% 글루코스가 함유된 각각의 YPD 액체배지를 이용하여 20℃에서 48시간 배양한 후 660 nm에서의 흡광도를 측정하여 비교하였다. 그 결과를 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.Alcohol resistance was measured by adding anhydrous ethanol 16, 18, 20, 22% (v / v) to YPD (2% glucose, 0.5% yeast extract, 1% bactopeptone: Sigma, USA) immediately after inoculation. After 72 hours of incubation, the absorbance at 660 nm was measured and compared. The glucose tolerance was incubated for 48 hours at 20 ° C. using each YPD broth containing 20, 25, 30, 35, and 40% glucose. Absorbance at 660 nm was measured and compared. The results are shown in Tables 1 and 2 below.

Yeast No.Yeast No. Ethanol-resistance^a(OD_660nm) (n=3)Ethanol-resistance ^a (OD _660nm ) (n = 3) 1616 1818 2020 2222 Y90-1Y90-1 1.38±0.081.38 ± 0.08 1.09±0.261.09 ± 0.26 0.03±0.010.03 ± 0.01 0.02±0.000.02 ± 0.00 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 0.53±0.10^c 0.53 ± 0.10 ^c 0.04±0.010.04 0.01 0.02±0.010.02 ± 0.01 0.02±0.010.02 ± 0.01

상기 표 1에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 신균주 Y90-1은 16% 에탄올 농도의 배지에서는 생육이 매우 양호하였으며, 18% 에탄올 함유 배지에서 생육이 양호하였고, 20% 에탄올 함유 배지부터 생육이 급격히 저하되었다. As shown in Table 1, the new strain Y90-1 according to the present invention was very good growth in the medium of 16% ethanol concentration, good growth in the medium containing 18% ethanol, growth from the medium containing 20% ethanol It was sharply lowered.

일반적으로 일정 알코올 농도에서는 효모의 생육이 저해되어 더 이상 에탄올 발효가 일어나지 않는 것으로 알려져 있으며, 고농도의 에탄올 생산을 위하여 주조시 이용되는 효모는 에탄올 내성을 가지는 것이 필수적이다. 통상적인 에탄올 내성의 평가시 에탄올 함량을 5%, 10%, 15%로 평가하는데, 본 발명에 따른 균주는 16% 및 18% 에탄올 함유 배지에서 생육이 가능하여 약주 등의 생산에 매우 유용할 것이다. 예를 들어, 본 발명자들이 동일한 기원으로부터 분리한 다른 효모 Yaaa의 경우 본 발명에 따른 Y90-1 균주에 비해 내알코올성이 현저히 떨어졌다.In general, it is known that the growth of yeast is inhibited at a constant alcohol concentration so that ethanol fermentation no longer occurs, and the yeast used in casting for the production of high concentration of ethanol is essential to have ethanol resistance. Evaluate the ethanol content of 5%, 10%, 15% in the evaluation of the conventional ethanol resistance, the strain according to the present invention will be able to grow in 16% and 18% ethanol containing medium will be very useful for the production of medicine, etc. . For example, the other yeast Yaaa, which we isolated from the same origin, has significantly lower alcohol resistance compared to the Y90-1 strain according to the present invention.

Yeast No.Yeast No. Sugar-resistance^b(OD_660nm) (n=3)Sugar-resistance ^b (OD _660nm ) (n = 3) 2020 2525 3030 3535 4040 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 1.66±0.411.66 ± 0.41 0.66±0.080.66 ± 0.08 0.73±0.040.73 ± 0.04 0.83±0.110.83 ± 0.11 0.72±0.270.72 ± 0.27 Y90-1Y90-1 1.57±0.041.57 ± 0.04 1.38±0.101.38 ± 0.10 1.36±0.081.36 ± 0.08 0.80±0.050.80 ± 0.05 0.74±0.150.74 ± 0.15

상기 표 2에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 신균주 Y90-1은 내당성이 매우 우수하여 30% 글루코스 함유 배지에서도 생육이 양호하였다. As shown in Table 2, the new strain Y90-1 according to the present invention was very excellent in glucose tolerance, and was well grown even in a medium containing 30% glucose.

주조에 이용되는 효모는 고농도의 당에서 충분히 생육을 하면서 알콜발효를 하여야 한다. 본 발명에 따른 균주 Y90-1은 높은 내당성을 가져 알코올 발효에 유용할 것으로 생각된다.
Yeast used for casting should be fermented with alcohol while growing sufficiently in high concentration of sugar. Strain Y90-1 according to the present invention is thought to have high sugar resistance and be useful for alcohol fermentation.

<효모의 침강성 평가><Sedimentation Evaluation of Yeast>

침강성은 PDB(Potato dextrose broth, Difco, Detroit Michigan, USA) 액체배지를 이용하여 25℃에서 48시간 진탕 배양한 후 원심 분리하여 각각을 A와 B로 나누어 처리를 달리하였다. A는 pellet에 증류수와 0.5M EDTA solution을 넣고 현탁하였다. B는 pellet에 CaSO₄ solution을 첨가하여 현탁한 후, 다시 원심분리를 하여 pellet에 CaSO₄ buffer solution을 첨가하여 현탁하여 6분 동안 정치하였다. 각각을 10배로 희석하여 600 nm에서의 흡광도를 측정하여 비교하였다(Flocculence, %= (A-B) X 100/A). 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.Sedimentation was agitated for 48 hours at 25 ℃ using PDB (Potato dextrose broth, Difco, Detroit Michigan, USA) liquid medium and centrifuged to separate each of the A and B treatment. A was suspended in distilled water and 0.5M EDTA solution in a pellet. B was suspended by adding CaSO ₄ solution to the pellet, followed by centrifugation, and suspended by adding CaSO ₄ buffer solution to the pellet. Each was diluted 10-fold and measured for absorbance at 600 nm and compared (Flocculence,% = (AB) X 100 / A). The results are shown in Table 3 below.

참고로 침강성이 약 80% 이상일 경우 very flocculent yeast로 분류하며, 약 20~60%일 경우 moderately flocculent yeast로, 20% 미만일 경우 non-flocculent yeast로 분류한다.For reference, more than 80% of sedimentation is classified as very flocculent yeast, about 20 ~ 60% is classified as moderately flocculent yeast, and less than 20% is classified as non-flocculent yeast.

Yeast No.Yeast No. Flocculence(%)Flocculence (%) 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 23.4023.40 Y90-1Y90-1 27.9927.99

상기 표 3에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 균주 Y90-1은 침강성이 약 28% 정도이었다.
As shown in Table 3, strain Y90-1 according to the present invention was about 28% sedimentation.

<효모 이용 약주의 이화학적 특성>Physicochemical Properties of Yakju

Y90-1 균주를 이용하여, 상기 기재된 바와 같이 제조한 약주의 이화학적 특성을 아래아 같이 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 4(단위 mg/ml, n=3)에 나타내었다.Using the Y90-1 strain, the physicochemical properties of the medicinal herbs prepared as described above were evaluated as follows, and the results are shown in Table 4 (unit mg / ml, n = 3).

알코올 함량은 시료를 0.45㎛ 필터로 여과하여 GC로 분석하였다. 칼럼은 DB-ALC2(30mx 0.53 mm I.d x 2 μm film thickness)를 사용하였고 Oven 70℃ isothermal, Inlet 200℃, Detector FID 250℃ 그리고 carrier gas로 helium을 사용하였으며 표준물질 농도와 peak area로부터 표준곡선을 작성하여 각각의 알코올함량을 산출하였다. 고형분 함량은 hand refractometer로 측정하여 °Bx로 표시하였고 pH는 pH meter를 이용하여 측정하였다. 총산은 시료 10 mL에 phenolphthalein 지시약 2-3 방울을 가하여 표준 후탈산수소칼륨으로 표정한 0.1 N NaOH 용액으로 담녹색을 나타낼 때까지의 적정 mL수를 succinic acid로 나타내었고 아미노산은 시료 10 mL을 취해 phenolphthalein 지시약 2-3 방울을 가하여 중화한 후, 중성 formalin 용액 5 mL을 가하여 유리된 아미노산을 표준 후탈산수소칼륨으로 표정한 0.1 N NaOH 용액으로 담홍색을 나타낼 때까지 적정한 mL수를 glycine으로 나타내었다. 착색도는 시료를 430 nm에서 흡광도를 측정하여, 흡광도/셀의 두께(mm)×10에 의해, 자외부흡수는 시료를 25배 희석하여 280 nm에서 흡광도를 측정하여, 흡광도/셀의 두께(mm)×10×희석배수에 의해 산출하였으며, 환원당은 Dinitrosalicylic acid Method에 따라 UV/VIS spectrophotometer를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하고 표준물질 글루코스를 농도별로 제조하여 정량하였다.Alcohol content was analyzed by GC by filtration of the sample with 0.45 μm filter. The column used DB-ALC2 (30mx 0.53 mm Id x 2 μm film thickness), Oven 70 ° C isothermal, Inlet 200 ° C, Detector FID 250 ° C and helium as carrier gas. Each alcohol content was calculated. Solid content was measured by hand refractometer and expressed in ° Bx and pH was measured using a pH meter. Total acid was added with 2-3 drops of phenolphthalein indicator to 10 mL of sample, and the appropriate number of mL until it became light green with 0.1 N NaOH solution expressed with standard potassium hydrogen dehydrogenate was indicated as succinic acid. After neutralization by adding 2-3 drops, the appropriate number of mL was expressed as glycine until 5 mL of neutral formalin solution was added, and the free amino acid was pink with 0.1 N NaOH solution expressed with standard potassium dehydrogenate. The chromaticity measured the absorbance at 430 nm, the absorbance / thickness of the cell (mm) × 10, the ultraviolet absorption diluting the sample 25 times to measure the absorbance at 280 nm, the absorbance / cell thickness (mm The reduced sugar was measured by absorbance at 550 nm using UV / VIS spectrophotometer according to the Dinitrosalicylic acid method, and standard glucose was prepared for each concentration.

유리당은 시료 1 mL을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 Aminex HPX-87C(300 mm×7.8 mm, Bio-rad, CA, USA) 칼럼을 사용하였고 이동상 흐름속도 0.6 mL/min, column oven 온도 60℃, injection volume 10㎕, RI(Refractive Index) 검출기를 사용하여 분석하였다. 유기산은 시료 1 mL을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 Aminex HPX-87H(300 mm×7.8 mm, Bio-rad, CA, USA) 칼럼을 사용하였으며 이동상 흐름속도 0.6 mL/min, column oven 온도 35℃ injection volume 10㎕, UV 210㎚에서 분석하였다. 기기는 HPLC를 사용하였다.Free sugar was filtered using a Aminex HPX-87C (300 mm × 7.8 mm, Bio-rad, CA, USA) column with 1 mL of sample filtered through a 0.45 μm filter. Mobile phase flow rate 0.6 mL / min, column oven temperature 60 ° C, injection 10 μl of volume, RI (Refractive Index) detector was used for analysis. The organic acid was filtered using a Aminex HPX-87H (300 mm × 7.8 mm, Bio-rad, CA, USA) column with 1 mL of sample filtered through a 0.45 μm filter. Mobile phase flow rate 0.6 mL / min, column oven temperature 35 ° C injection volume 10 μl, UV 210 nm. The instrument used HPLC.

Yeast No.Yeast No. Alcohol (%)Alcohol (%) pHpH Total acidTotal acid Amino acidAmino acid °Bx° Bx Coloring degreeColoring degree UV absorbanceUV absorbance Red
ucing sugarRed
ucing sugar 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 17.2
±0.2817.2
± 0.28 3.86
±0.123.86
± 0.12 0.31
±0.100.31
± 0.10 0.35
±0.010.35
± 0.01 11.6
±0.1011.6
± 0.10 0.16
±0.010.16
± 0.01 2.46
±0.082.46
± 0.08 15.94
±0.0515.94
± 0.05 Y90-1Y90-1 17.3
±0.3117.3
± 0.31 3.95
±0.033.95
± 0.03 0.30
±0.050.30
± 0.05 0.38
±0.060.38
± 0.06 11.4
±0.0811.4
± 0.08 0.15
±0.010.15
± 0.01 2.34
±0.022.34
± 0.02 14.43
±0.2614.43
± 0.26

Y90-1 균주를 이용하여, 상기 기재된 바와 같이 제조한 약주의 유기산 및 유리 당(free sugar) 함량을 하기 표 5(단위 mg/ml, n=3)에 나타내었다.Using the Y90-1 strain, the organic acids and free sugar contents of the medicinal liquors prepared as described above are shown in Table 5 (unit mg / ml, n = 3).

Yeast No.Yeast No. CitricCitric MalicMalic SuccinicSuccinic LacticLactic AceticAcetic PyroglutamicPyroglutamic MaltoseMaltose GlucoseGlucose FructoseFructose 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 0.02
±0.000.02
± 0.00 0.06
±0.010.06
± 0.01 0.74
±0.120.74
± 0.12 3.89
±0.163.89
± 0.16 0.14
±0.020.14
± 0.02 0.01
±0.000.01
± 0.00 2.14
±0.102.14
± 0.10 10.11
±0.5210.11
± 0.52 0.48
±0.020.48
± 0.02 Y90-1Y90-1 0.03
±0.020.03
± 0.02 0.07
±0.020.07
± 0.02 1.921.92
±0.24± 0.24 3.21
±0.123.21
± 0.12 0.03
±0.010.03
± 0.01 0.01
±0.000.01
± 0.00 1.74
±0.131.74
± 0.13 8.40
±0.268.40
± 0.26 0.25
±0.010.25
± 0.01

상기 표 5에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 균주를 이용하여 제조한 약주는 호박산의 함량이 높아 감칠맛을 내는 신맛 특성이 우수할 것으로 생각된다.
As shown in Table 5, the medicinal herbs prepared by using the strain according to the present invention is considered to have a high sour taste characteristic of high flavor of succinic acid.

<효모 이용 약주의 휘발성 향기성분 평가><Evaluation of Volatile Flavor Components in Yeast Wines>

Y90-1 균주를 이용하여, 상기 기재된 바와 같이 제조한 약주의 휘발성 화합물(향기성분)을 아래와 같이 평가하였다. 그 결과를 표 6 및 표 7(단위 피크 면적 %; ^a)Retention indices were determined using C10~C25 as external reference; ^b)Average of relative percentage of total peak area; N.D. No Detection)에 나타내었다.Using the Y90-1 strain, the volatile compounds (fragrance components) of the medicinal herbs prepared as described above were evaluated as follows. The results are shown in Table 6 and Table 7 (unit peak area%; ^a) Retention indices were determined using C10 ~ C25 as external reference; ^b) Average of relative percentage of total peak area; ND No Detection).

발효액 20 mL를 60℃로 20분 동안 평형시킨 후 40분 동안 100 ㎛ polydimethylsiloxane fiber에 포집하여 SPME(Solid Phase Microextraction)를 이용하여 GC에 1분 동안 주입하였다. 휘발성 화합물 분석은 Hewlett Packard 7890A GC/ Hewlett Packard 5975C mass selective detector (MSD)를 사용하였다. 칼럼은 Stabilwax-DA(30 m length x 0.25 mm I.d x 0.25 μm film thickness)를 사용하였고 Oven 온도는 50℃에서 5분간 유지한 후 200℃까지 3℃/분의 속도로 승온시켰으며 Injector 250℃ carrier gas는 helium을 사용하였고 flow rate는 2 mL/min 조건이었다. MSD 조건은 capillary direct interface temperature 250℃, ion source temperature 230℃, EI ionization voltage 70 eV, mass range 45-550 a.m.u, 그리고 scan rate 2.2 scan/sec였고 휘발성 화합물 동정은 retention indices(RI), mass spectra와 aroma properties를 비교하여 확인하였다. 하기 표 6 및 7에 있어서 Yaaa는 비교 균주인 사카로마이세스 세레비지애 Yaaa를 의미한다.20 mL of the fermentation broth was equilibrated at 60 ° C. for 20 minutes, collected in 100 μm polydimethylsiloxane fiber for 40 minutes, and injected into GC using SPME (Solid Phase Microextraction) for 1 minute. Volatile compounds were analyzed using a Hewlett Packard 7890A GC / Hewlett Packard 5975C mass selective detector (MSD). The column used Stabilwax-DA (30 m length x 0.25 mm Id x 0.25 μm film thickness) and the Oven temperature was maintained at 50 ° C for 5 minutes and then heated up to 200 ° C at a rate of 3 ° C / min. Injector 250 ° C carrier Gas was helium and flow rate was 2 mL / min. MSD conditions were capillary direct interface temperature 250 ° C, ion source temperature 230 ° C, EI ionization voltage 70 eV, mass range 45-550 amu, and scan rate 2.2 scan / sec. Volatile compounds were identified by retention indices (RI), mass spectra and The aroma properties were compared and confirmed. In Tables 6 and 7, Yaaa means Saccharomyces cerevisiae Yaaa which is a comparative strain.

상기 표 6 및 7의 결과에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 균주 Y90-1로 제조된 약주는 휘발성 화합물로 에틸 카프로에이트, 에틸 카프릴레이트, 에틸 카프레이트, 페닐에틸 알코올 등이 비교 균주인 Yaaa 대비 상대적으로 다량 생성되었다. 즉, 살구(apicot), 바나나, 파인애플 등과 같은 과일 향을 내는 에틸 카프릴레이트(ethyl caprylate)와 달고(sweet), 오일-넛 유사(oil-nut like) 향 특성이 있는 에틸 카프레이트(Ethyl caprate)가 상대적으로 다량 존재하여 본 발명에 따른 균주로 발효된 약주가 과일 향을 내면서도 부드러운 바디감을 줄 것으로 생각된다.As shown in the results of Tables 6 and 7, Yaaa produced by strain Y90-1 according to the present invention is a volatile compound, which is a comparative strain, such as ethyl caproate, ethyl caprylate, ethyl caprate, phenylethyl alcohol, etc. It was produced in relatively large amounts. That is, ethyl caprylate with fruit flavors such as apricot, banana, pineapple, etc., and ethyl caprate with sweet, oil-nut like flavor characteristics. It is believed that the fermented Yakju fermented with the strain according to the present invention has a relatively large amount of) and gives a soft body feeling while giving off fruit flavor.

참고로 이소아밀 아세테이트는 가벼운 과일 향으로 top note에 성숙감과 둥근 모양을 나타내는 특성이 있으며, 에틸 카프로에이트는 청주의 향기 성분으로 알려진 강하고 보급력이 있는 fruity-winey odor이며, 에틸 카프레이트는 oily-brandy like odor 특성이 있고, 이소아밀 알코올은 단(sweet) 바나나 향기를 부여하여 향기와 맛에 큰 영향을 미치며, 테트라데카노익 산 에틸 에스터는 Orris 뿌리 또는 제비꽃과 유사한 와인 같은 부드럽고, oily한 맛 특성을 부여할 수 있는 것으로 알려져 있다.
For reference, isoamyl acetate is a light fruity fragrance that has a mature and rounded appearance on the top note. Ethyl caproate is a strong and pervasive fruity-winey odor known as the fragrance of cheongju, and ethyl caprate is oily-brandy. isoamyl alcohol has a sweet banana scent that gives it a great effect on aroma and taste, while tetradecanoic acid ethyl ester is a soft, oily taste trait like wine like Orris root or violet. It is known that it can give.

<관능 검사><Sensory test>

야생 효모를 이용하여 발효주(생주)를 제조한 후 제조된 발효 생주의 맛을 평가하였다. 9점 척도(1점: 대단히 싫다, 5점: 좋지도 싫지도 않다, 9점: 대단히 좋다)에 의해 향 및 전체적인 기호도를 평가하였고 시료는 상온에서 난수표로 표기되어 유리컵에 제시되었으며 무작위로 제시된 시료에 대해 평가하였다. 검사원은 20~40대, 60명(여성40명, 남성20명)으로 구성되었다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.Fermented liquor was prepared using wild yeast and then the taste of the fermented liquor prepared was evaluated. The fragrance and overall palatability were evaluated by a 9-point scale (1 point: dislikes, 5 points: good or dislikes, 9 points: very good). The samples were evaluated. The inspectors consisted of 60s (40 females and 20 males). The results are shown in Table 8 below.

YakjuYakju 향기호도Fragrance 전반적 기호도Overall likelihood 사카로마이세스 세레비지애 YaaaSaccharomyces cerevisiae Yaaa 5.67 ^c 5.67 ^c 6.00 ^cd 6.00 ^cd Y90-1Y90-1 7.00 ^ab 7.00 ^ab 6.56 ^abc 6.56 ^abc

상기 abcd는 세로로 같은 줄에서 같은 알파펫이 같은 수준임을 의미함.Abcd means that the same alphapet is the same level in the same row in the vertical direction.

상기 표 8에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 균주로 제조된 약주는 향기호도 및 전반적인 기호도가 매우 높음을 알 수 있었다.
As shown in Table 8, it was found that the medicinal herbs prepared by the strain according to the present invention is very high in the flavor preference and overall preference.

<Y90-1 균주의 동정><Identification of Y90-1 Strain>

미생물 동정은 다음과 같이 수행하였다. DNA 추출(99℃, 10min) 후 ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'), ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3') 프라이머를 사용하여 PCR 하였다. 증폭된 DNA를 정제 후, ABI PRISMBigDyeTM Terminator Cycle Sequencing Kit를 사용하고, PCR과 동일한 프라이머를 이용하여 18S rRNA 염기서열을 시퀀싱(ABI PRISM3730XL DNA Analyzer, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)하였다. 분석된 염기서열을 BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov) 프로그램을 이용하여 동정하였다. Microbial identification was performed as follows. DNA extraction (99 ° C., 10 min) was followed by PCR using ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3 ′) and ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3 ′) primers. After amplified DNA was purified, ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit was used and 18S rRNA sequences were sequenced using the same primers as PCR (ABI PRISM3730XL DNA Analyzer, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). The analyzed sequences were identified using the BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) program.

분석 결과 본 발명에 따른 균주 Y90-1은 Saccharomyces cerevisiae (strain M01614 internal transcribed spacer 1, partial sequence)와 18S rRNA 서열이 98%의 상동성을 나타내어, Saccharomyces cerevisiae 균주임을 확인하였다.As a result, strain Y90-1 according to the present invention showed 98% homology between Saccharomyces cerevisiae (strain M01614 internal transcribed spacer 1, partial sequence) and 18S rRNA sequence, confirming that it is a Saccharomyces cerevisiae strain.

또 NCBI 등록된 Saccharomyces cerevisiae들과 균주 Y90-1과 염기서열 비교하여 본 발명에 따른 균주가 새롭게 동정된 균주임을 확인하였다. 그 염기서열 비교분석 결과를 도 1에 나타내었으며(도 1에서 1은 Saccharomyces cerevisiae partial 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and partial 26S rRNA gene, type strain CBS4054이며, 2는 Saccharomyces cerevisiae isolate NN691 18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence이고, 11은 Saccharomyces cerevisiae partial ITS1, 5.8S rRNA gene and partial ITS2, strain ITEM10466임), Y90-1 균주의 18S rRNA 서열을 서열번호 1에 나타내었다.
In addition, NCBI-registered Saccharomyces cerevisiae and strain Y90-1 compared with the nucleotide sequence confirmed that the strain according to the invention is a newly identified strain. The results of the nucleotide sequence comparison are shown in FIG. 1 (in FIG. 1, 1 is Saccharomyces cerevisiae partial 18S rRNA gene, ITS1, 5.8S rRNA gene, ITS2 and partial 26S rRNA gene, type strain CBS4054 , 2 is Saccharomyces cerevisiae isolate NN691) 18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 26S ribosomal RNA gene, partial sequence, 11 is Saccharomyces cerevisiae partial ITS1, 5.8S rRNA gene and partial ITS2, strain ITEM10466 ), 18S rRNA sequence of strain Y90-1 is shown in SEQ ID NO: 1.

<Y90-1 균주의 당/산 이용성 분석 결과><Sugar / acid availability analysis of Y90-1 strain>

Y90-1 균주의 당/산 이용성 분석 결과는 아래 표 9와 같다.The sugar / acid availability analysis of the Y90-1 strain is shown in Table 9 below.

탄소원Carbon source 이용성(유/무)Usability (Yes / No) 탄소원Carbon source 이용성(유/무)Usability (Yes / No) D-아라비노스 D-Arabinose -- stachyosestachyose ++ L-아라비노스 L-Arabinose -- turanoseturanose ++ D-리보스D-ribose -- D-psicoseD-psicose -- D-크실로스 D-Xylose -- salicinsalicin -- D-글루코스 D-glucose ++ gentiobiosegentiobiose -- ^*D-갈락토스 ^* D- galactose ++ D-glucosamineD-glucosamine -- L-람노스L-Rhamnose -- D-arabitolD-arabitol -- L-솔보스L-Solbos -- xylitolxylitol -- *말토스Maltose ++ L-sorboseL-sorbose -- *슈크로스* Sucrose ++ β-methyl-D-glucosideβ-methyl-D-glucoside -- *메리비오스* Merribios -- maltitolmaltitol ++ 셀로비오스Cellobiose -- acetic acidacetic acid -- 트레할로스Trehalose ++ formic acidformic acid -- *라피노스Raffinose ++ propionic acidpropionic acid -- 멜레지토스Melezitos ++ succinic acidsuccinic acid -- 메틸-D-글루코시드Methyl-D-glucoside ++ methyl succinatemethyl succinate -- N-아세틸글루코사민N-acetylglucosamine -- L-aspartic acidL-aspartic acid -- 덱스트린dextrin ++ L-glutamic acidL-glutamic acid -- 이눌린Inulin -- L-prolineL-proline -- 아도니톨Adonitol -- D-gluconic acidD-gluconic acid -- 에리스리톨Erythritol -- fumaric acidfumaric acid -- D-만니톨 D-mannitol -- L-malic acidL-malic acid -- D-솔비톨 D-sorbitol -- bormo succinic acidbormo succinic acid -- 글리세린glycerin -- γ-amino butyric acidγ-amino butyric acid -- maltotriosemaltotriose ++ α-keto-glutaric acidα-keto-glutaric acid -- palatinosepalatinose ++ 2-keto-D-gluconic acid2-keto-D-gluconic acid --

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC11813BPKCTC11813BP 2010112420101124

서열목록 전자파일 첨부Attach an electronic file to a sequence list

Claims

사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 90-1 (KCTC11813BP) Saccharomyces cerevisiae ) 90-1 (KCTC11813BP)

사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 90-1 (KCTC11813BP)를 이용하여 제조된 발효주. Saccharomyces cerevisiae ) fermented strain prepared using 90-1 (KCTC11813BP).

사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 90-1 (KCTC11813BP)를 이용하여 발효시키는 것을 특징으로 하는 발효주의 제조 방법. Saccharomyces cerevisiae ) Fermented by using 90-1 (KCTC11813BP).