KR101190529B1 - Ｉｃｅ 억제제를 사용하는 발작의 치료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 발작을 치료 또는 예방하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

ICE/카스파제-1, 발작, 경련, 간질, 웨스턴 블롯 분석, 카인산, 해마, 뇌실

Description

ＩＣＥ 억제제를 사용하는 발작의 치료{Treating seizures using ICE inhibitors}

본 발명은 ICE 억제제를 사용하여 발작을 치료 또는 예방하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

시토킨(특히, IL-1β 및 TNF-α)은 많은 질병을 유발하고 지속시킬 수 있으므로, 최적의 치료 표적이다. 다양한 전략(예: 가용성 수용체, 항체, 수용체 길항제 또는 억제제)을 사용하여 시토킨을 차단한다. 이들 특정한 항-시토킨계 요법은 많은 만성 염증성 또는 자가면역 질환에서 염증을 감소시키는 것으로 나타나며, FDA에 의해 사람에게 사용하는 것이 허용되어 있다[참조: Bresnihan et al., 1998; Mohler et al., 1993; Nuki et al., 2002; van Deventer, 1999].

인터류킨-1β 전환 효소(ICE, 카스파제-1으로도 공지됨)는 IL-1β 및 IL-18의 전구체를 활성 시토킨으로 절단하는 세포내 프로테아제이다[참조: Akita et al., 1997; Kuida et al., 1995]. (세균 및 숙주 프로테아제를 포함하는) 다른 프로테아제가 프로-IL-1β를 처리할 수 있지만, ICE-결핍(ICE^-/-) 마우스는 내독소에 반응하여 성숙한 IL-1β를 방출하지 못하는 것으로 나타났다[참조: Fantuzzi et al., 1997; Li et al., 1995].

뇌에서 호염증성 및 소염성 시토킨의 발현은 발작과 연결된다[참조: A. Vezzani et al., "Interleukin-1β Immunoreactivity and Microglia Are Enhanced in the Rat Hippocampus by Focal Kainate Application: Functional Evidence for Enhancement of Electrographic Seizures" J. Neurosci., 19, pp. 5054-5065 (1999); DeSimoni et al., "Inflammatory cytokines and related genes and are induced in the rat hippocampus by limbic status epilepticus" Eur. J. Neurosci., 12, pp. 2623-2633(2000); A. Vezzani et al., "Powerful Anticonvulsant Action of IL-Receptor Antagonist on Intracerebral Injection and Astrocytic Overexpression in Mice" PNAS, 97, pp. 11534-11539 (2000)]. 그러나, 현재 항경련 또는 항간질 치료제로서 사용하기 위해 허용된 항시토킨 또는 소염 약물은 없다.

발명의 요약

본 발명은 발작, 경련, 간질 및 관련 병태를 ICE 억제제를 투여함으로써 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 발작, 경련, 간질 또는 관련 병태를 치료 또는 예방하기 위한 화합물 또는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 병태를 치료 또는 예방하기에 유용한 제제를 확인하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 방법을 수행하기 위한 조성물 및 키트의 제조방법에 관한 것이다.

도 1은 카인산-치료된 래트의 해마에서 (웨스턴 블롯팅에 의해 평가되는) 카스파제-1 수준에 대한 화합물 1(4㎕ 중의 25㎍, 뇌실내)의 효과를 도시한다. 래트는 40ng의 카인산을 해마내에 미량주사하여 유도된 EEG 발작이 개시된 지 90분 후에 죽는다(도 2A 및 도 2B를 또한 참고).

도 2A 및 도 2B는 모의(sham) 해마에서 카인산-유도된 발작이 발생한 지 90분 후에, 화합물 1로 치료하거나 치료하지 않은, ICE/카스파제-1 및 IL-1β 수준의 웨스턴 블롯 분석의 결과를 나타낸다. 도 2A 및 도 2B는 래트 4마리로부터 평균 ±표준오차로서 도시된, 웨스턴 블롯 데이터의 히스토그램을 나타낸다. 화합물 1(25㎍/4㎕) 또는 비히클을 뇌실내에 주사한 지 45분 및 10분 후에 카인산(40ng)을 해마내에 주사한다. 화합물 1은 성숙한 형태의 카스파제-1의 발작-유도된 생성(도 1을 또한 참고) 및 성숙한 형태의 IL-1β의 발작-유도된 생성을 차단한다. 투키(Tukey) 시험에 의해 *p < 0.05; **p < 0.001. 실시예 1 및 실시예 6을 참고한다.

본 발명은 ICE 억제제를 발작을 치료 또는 예방하기에 유효한 양으로 투여하여 발작을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 출원인들은 ICE 억제제의 사용이 설치류에서 발작의 치료에 유용함을 입증하였다. 특히, 본 출원인들은 ICE 억제제를 사용하는 치료가 발작의 개시까지 시간을 연장시키고 발작 시간을 감소시킴을 입증하였다. ICE 억제제 화합물 1은 공지된 항경련성 화합물인, 고 용량의 페니토인 또는 카바마제핀만큼 유효하였다.

따라서, 본 발명의 한 양태는 발작을 억제하기 위한 치료학적 전략을 제공한다. 이들 방법을 사용하여 발작을 억제하거나, 완화시키거나, 치료하거나 예방할 수 있다. 또한 당해 방법을 사용하여 발작 질환을 완화시키거나, 치료하거나 이의 진행 및 악화를 예방할 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, 외상성 뇌 손상, 감염 또는 열성 발작 사건 후에 ICE 억제제를 투여하여 영구적 발작 질환을 예방하거나 이의 중증도를 감소시키는 것을 포함한다.

본 발명의 다른 양태는 간질, 경련 및 관련 질환을 조절, 완화, 치료 또는 예방하기 위한 치료학적 전략을 제공한다.

본 출원인들은 또한, 화합물 1 및 화합물 2가, 복강내 경로에 의해 투여되는 경우, 발작을 억제함을 밝혀냈다(표 3).

ICE 억제제 화합물은 다른 것들 중에서, 류머티스성 관절염, 피부 염증성 질환 및 염증성 장 질환의 동물 모델에서 이의 소염 활성에 대해 공지되어 있다[참조: G. Ku et al., "Selective Interleukin-1 Converting Enzyme (ICE/Caspase-1) Inhibition With Pralnacasan(HMR 3480/VX-740) Reduces Inflammation and Joint Destruction in Murine Type-II Collagen-induced Arthritis (CIA)" American College of Rheumatology, San Francisco, November 12-15, 2001; G. Ku et al. "Interleukin-lβ Converting Enzyme (ICE, Caspase-1) Inhibition with VX-765 Reduces Inflammation and Cytokine Levels in Murine Dermatitis and Arthritis Models" International Congress of Immunology, Stockholm, Sweden, July 22-27, 2001; G. Ku et al. "Interleukin-1β; Converting Enzyme (ICE, Caspase-1) Inhibition with VX-765 Reduces Inflammation and Cytokine Levels in Murine Oxazolone-induced Dermatitis" The Society for Investigative Dermatology, May 9-12, 2001 Abstract # 856; 본원에 인용된 ICE 억제제 문헌도 참조함]. 화합물 1은 또한 류마티스 관절염 환자에서 소염 활성을 갖는 것으로도 입증되었다[참조: K. Pavelka et al., "Clinical Effects of Pralnacasan (PRAL), an Orally-active Interleukin-1β Converting Enzyme (ICE) Inhibitor, in a 285 Patient PHII Trial in Rheumatoid Arthritis (RA)" American College of Rheumatology 2002 Conference Late- Breaking Abstract, New Orleans, October 25-29, 2002]. ICE 억제제는 발작 또는 발작 질환의 치료에 사용되지 않고 있었다.

동물 및 사람에 있어서 이들 화합물의 소염 활성의 기초가 되는 화합물의 약력학은 잘 이해된다. 또한, 본 출원인들은 이들 화합물이, 혈액 및 특정 말초 조직에서보다 상당히 낮은 농도이기는 하나 뇌로 침투함을 관찰하였다. 당해 특성은 항경련제 또는 항간질제의 활성에 필수적인 것으로 추정되며, 화합물에 의해 획득된 뇌 농도가 뇌에서 ICE/카스파제-1을 억제하고 IL-1β 생성 및 발작 발현에 대한 이의 관여를 억제하기에 충분한지 여부는 명백하지 않다. 본 출원인들은 그럼에도 불구하고 화합물 1 및 화합물 2가, 말초로 투여되는 경우, 항경련 활성을 가짐을 입증하였다.

발작에 대해 ICE 억제제의 유리한 효과는 ICE 억제제의 소염 활성에 직접적으로 관련되지 않는다. 공지된 소염제인 이부프로펜을 출원인들의 발작 모델에서 시험하여 복강내 경로로 투여하였다. 이부프로펜은 비히클에 비하여 발작 활성을 증가시킨다(표 4 참고). 비히클에 비하여, 이부프로펜은 간질지속증의 시간을 연장시키고, 따라서 이는 이부프로펜이 발작 활성을 증가시키거나 유도한다는 것을 나타낸다.

본원에서 제공된 실시예는 사람 간질 및 경련 질환의 좋은 모델로서 인식되는 설치류 발작 모델을 포함한다. 예를 들어, 공지된 항간질약(예: 카바마제핀 및 페니토인)은 이 모델에서, ICE 억제제가 그러하듯이 항경련 활성을 나타낸다.

본 출원인들은 화합물을 뇌실내에 및 복강내에 투여한 후에 화합물의 항경련 활성을 연구하였지만, 복강내, 경구 및 정맥내를 포함하여 다양한 말초 경로에 의해 투여된 화합물 1 및 화합물 2를 사용하는 이전의 경험은 화합물이 또한, 이들 대체 경로에 의해 투여되는 경우, 항경련 활성을 가짐을 지시한다. 바람직한 양태에서, ICE 억제제는 말초로(즉, 경구 또는 비경구이며, 두개내로는 아니다) 투여된다.

본 발명은 ICE 억제제인 화합물의 용도를 포함한다. 이러한 화합물은 ICE에 대해 선택적일 수 있다. 또는 이러한 화합물은 ICE에 대하여 활성이고 또다른 카스파제 또는 일정 범위의 다른 카스파제(예를 들어, 2 내지 14)에 대하여 활성일 수 있다. 본원에서 입증되는 바와 같이, ICE 억제 및 IL-1β 생성 억제는 발작 개시까지의 시간을 지연시키고, 발작 시간의 양을 감소시키거나 발작의 빈도를 감소시키거나 상기 하나 이상 또는 이들 모두를 포함한다. 실시예 1 및 실시예 6에서 생성된 데이터는 화합물 1의 항경련 용량이 ICE/카스파제-1의 활성화 및 IL-1β 생성에 대해 예상되는 메커니즘-관련 효과를 가짐을 입증한다.

본 발명의 방법에서, 화합물은 ICE를 억제하고, 따라서 발작(또는 다른 관련질환)을 치료하기에 유효한 양으로 투여한다. 발작(또는 다른 관련 질환)의 치료는 발작 기간을 감소시키고, 발작의 중증도를 감소시키고, 발작 개시의 감수성을 감소시키고, 발작 개시를 지연시키고, 발작의 발생을 제거함을 포함한다. 따라서, 본 발명에 의해서 발작 예방 유효량의 ICE 억제제를 투여함으로써 발작(또는 다른 관련 질환)을 예방하는 방법이 또한 제공된다.

본 발명의 방법을 사용하여 사람 및 비-사람 포유동물을 포함하는, 동물, 바람직하게는 포유동물을 치료할 수 있다. ICE를 억제하는 어떠한 화합물이라도 본 발명의 방법 및 조성물에 사용할 수 있다. 이러한 화합물은 ICE를 선택적으로 억제하는 화합물 및 카스파제 또는 ICE/CED-3 계열에서 하나 이상의 효소를 억제하는 것을 포함한다. 본 발명과 관련하여 사용하기 위한 화합물은 ICE의 촉매 활성을 가역적 또는 비가역적 방식으로 억제한다.

본 발명의 화합물은 ICE를 억제하고/하거나 IL-1, 특히 IL-1β 및 IL-18 수준을 감소시킨다. 이들 화합물은, 예를 들어, ICE를 억제하고, IL-1β 및/또는 IL-18을 생성하고, IL-1 및/또는 IL-18 수준을 조절하고/하거나 IL-1β 및/또는 IL-18 활성에 영향을 주는 이의 능력에 대하여 검정할 수 있다. 각각의 이들 활성을 시험하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있다(본원의 실시예, 국제 공개공보 제 WO 95/35308호, 국제 공개공보 제WO 97/22619호, 국제 공개공보 제WO 99/47545호 또는 국제 공개공보 제WO 01/90063호 참고). 따라서, 이들 화합물을 본원에 기술된 ICE 및/또는 IL-1 매개된 질환에서 사건을 표적화하고 억제할 수 있다.

본 발명과 관련하여 사용할 수 있는 화합물은 다음 문헌의 화합물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 국제 공개공보 제WO 04/058718호, 국제 공개공보 제WO 04/002961호, 국제 공개공보 제WO 03/088917호, 국제 공개공보 제WO 03/068242호, 국제 공개공보 제WO 03/042169호, 국제 공개공보 제WO 98/16505호, 국제 공개공보 제WO 93/09135호, 국제 공개공보 제WO 03/106460호, 국제 공개공보 제WO 03/103677호, 국제 공개공보 제WO 03/104231호, 국제 공개공보 제WO 02/085899호, 국제 공개공보 제WO 00/55114호, 국제 공개공보 제WO 00/55127호, 국제 공개공보 제WO 00/61542호, 국제 공개공보 제WO 01/05772호, 국제 공개공보 제WO 01/10383호, 국제 공개공보 제WO 01/16093호, 국제 공개공보 제WO 01/42216호, 국제 공개공보 제WO 01/72707호, 국제 공개공보 제WO 01/90070호, 국제 공개공보 제WO 01/94351호, 국제 공개공보 제WO 02/094263호, 국제 공개공보 제WO 02/42278호, 미국 특허 제6,184,210호, 미국 특허 제6,184,244호, 미국 특허 제6,187,771호, 미국 특허 제6,197,750호, 미국 특허 제6,242,422호, April 2001 American Chemical Society (ACS) meeting in San Diego, California, USA, 국제 공개공보 제WO 02/22611호, 미국 특허 공보 제2002/0058630호, 국제 공개공보 제WO 02/12638호, 국제 공개공보 제WO 95/35308, 미국 특허 제5,716,929호, 국제 공개공보 제WO 97/22619호, 미국 특허 제6,204,261호, 국제 공개공보 제WO 99/47545호, 국제 공개공보 제WO 01/90063호, 미국 특허 공보 제2004/0014753호, 미국 특허 공보 제2004/0009966호, 미국 특허 공보 제2003/0236296호, 미국 특허 제6,693,096호, 미국 특허 제6,610,683호, 미국 특허 제6,531,467호, 미국 특허 제6,528,506호, 미국 특허 제6,200,969호, 국제 공개공보 제WO 2003/072528호, 국제 공개공보 제WO 2003/032918호, 국제 공개공보 제WO 01/00658호, 국제 공개공보 제WO 98/10778호, 미국 특허 제6,716,818호, 미국 특허 제6,620,782호, 미국 특허 제6,566,338호, 미국 특허 제6,495,522호, 미국 특허 제6,355,618호, 미국 특허 제6,153,591호, 국제 공개공보 제WO 2005/003100호, 국제 공개공보 제WO 2004/002401호, 국제 공개공보 제WO 00/61542호, 국제 공개공보 제WO 00/55114호, 국제 공개공보 제WO 99/47154호, 미국 특허 제6,083,981호, 미국 특허 제5,932,549호, 미국 특허 제5,919,790호, 미국 특허 제744,451호, 국제 공개공보 제WO 2002/089749호, 국제 공개공보 제WO 99/36426호, 국제 공개공보 제WO 98/16505호, 국제 공개공보 제WO 98/16504호, WO 98/16502호, 미국 특허 제6,316,415호, 미국 특허 제5,932,549호, 미국 특허 제5,919,790호, 미국 특허 제5,744,451호, 유럽 공개특허공보 제1082127호, 유럽 공개특허공보 제1049703호, 유럽 공개특허공보 제0932600호, 유럽 공개특허공보 제0932598호, 국제 공개공보 제WO 99/56765호, 국제 공개공보 제WO 93/05071호, 유럽 공개특허공보 제0600880호 및 유럽 공개특허공보 제1378573호(본원에 기술된 바와 같이, 이들은 모두 본원에서 참조로 인용된다). 본 발명에 사용하기에 바람직한 화합물은 국제 공개공보 제WO 04/058718호, 국제 공개공보 제WO 04/002961호, 국제 공개공보 제WO 95/35308호, 국제 공개공보 제WO 97/22619호, 국제 공개공보 제WO 99/47545호 및 국제 공개공보 제WO 01/90063호의 것들을 포함한다. 본 발명에 사용하기에 바람직한 다른 화합물은 국제 공개공보 제WO 95/35308호, 국제 공개공보 제WO 97/22619호, 국제 공개공보 제WO 99/47545호 및 국제 공개공보 제WO 01/90063호의 것들을 포함한다. 더욱 바람직한 화합물은 본원의 특허청구의 범위에서 인용된 것들이다. 이들 화합물은 숙련된 개업의에게 공지된 방법 및 본원에 인용된 문헌에 기술된 방법에 의해 수득할 수 있다.

본 발명은 또한 본원의 방법에 따라 항발작, 항간질 또는 항경련 활성에 대해 화합물을 시험하기 위한 검정을 제공한다. 이러한 방법은, 예를 들어, ICE를 억제하고/하거나 발작, 경련, 간질 또는 관련 질환을 억제하는 화합물의 능력을 측정하는 단계를 포함하여, 발작, 경련, 간질 또는 관련 질환의 치료에 유용한 화합물의 확인을 포함한다. 본 발명의 다른 방법들은 항경련 활성에 대한 ICE 억제제의 검정을 포함한다. 이러한 방법 및 검정은 발작, 경련, 간질 또는 관련 질환의 치료에 사용하기 위한 화합물을 확인하기에 유용하다. 바람직한 양태에서, 검정은 실질적으로 본원에서 기술된 바와 같은 방법에 의해 수행할 수 있다(예를 들어, 실시예 1, 2 또는 3 참고).

따라서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법은 시험관내에서 또는 생체내에서 IL-1 수준 및/또는 활성을 조절하기에 유용하다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법은 생체내에서 IL-1 수준을 조절하고 본원에 기재된 질병, 장애 또는 효과를 포함한 특정 상태의 진전, 중증도 또는 효과를 치료하거나 감소시키기에 유용하다.

또 다른 양태에 따라서, 본 발명은 위에 기술된 바와 같은, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 유도체(예: 염) 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

또 다른 양태에 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법은 추가로 다른 치료제를 포함할 수 있다. 이러한 제제는 발작, 경련 또는 간질을 치료하거나 억제하기 위한 화합물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 바비투레이트(예: 메포바비탈, 펜토바비탈), 벤조디아제핀(예: 로라제팜, 클로나제팜, 클로라제페이트, 디아제팜), GABA 동족체(예: 티아가빈, 가바펜틴, 프레가발린, 비가바트린), 히단토인(예: 페니토인, 포스페니토인), 페닐트리아진(예: 라모트리진), 석신이미드(예: 메트석시미드, 에토석시미드) 또는 기타 화합물(예: 카바마제핀, 릴루졸, 발프로에이트, 디발프로엑스, 펠바메이트, 프리미돈 또는 토피라메이트), 소염제, 매트릭스 메탈로프로테아제 억제제, 리폭시게나제 억제제, 시토킨 길항제, 면역억제제, 항암제, 항바이러스제, 시토킨, 성장 인자, 면역조절제(예: 브로피리민, 항-사람 알파 인터페론 항체, IL-2, GM-CSF, 메티오닌, 엔케팔린, 인터페론 알파, 디에틸디티오카바메이트, 종양 괴사 인자, 날트렉손 및 rEPO), 프로스타글란딘 또는 항-혈관 과증식 화합물.

"약제학적으로 허용되는 담체"라는 용어는 환자에게 본 발명의 화합물과 함께 투여할 수 있으며 이의 약리학적 활성을 파괴하지 않는 비-독성 담체를 언급한다.

이들 조성물에 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체는 다음을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질(예: 사람 혈청 알부민), 완충 물질(예: 포스페이트, 글리신, 소르빈산, 칼륨 소르베이트, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예를 들어, 프로타민 설페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연염, 콜로이드성 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 라놀린(wool fat).

활성 성분으로서 본 발명의 화합물만을 포함하는 약제학적 조성물에서, 이들 조성물을 투여하는 방법은 환자에게 추가의 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 제제는 발작, 경련 또는 간질을 치료하거나 억제하기 위한 다음 화합물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 바비투레이트(예: 메포바비탈, 펜토바비탈), 벤조디아제핀(예: 로라제팜, 클로나제팜, 클로라제페이트, 디아제팜), GABA 동족체(예: 티아가빈, 가바펜틴, 프레가발린, 비가바트린), 히단토인(예: 페니토인, 포스페니토인), 페닐트리아진(예: 라모트리진), 석신이미드(예: 메트석시미드, 에토석시미드) 또는 기타 화합물(예: 카바마제핀, 릴루졸, 발프로에이트, 디발프로엑스, 펠바메이트, 프리미돈 또는 토피라메이트), 소염제, 매트릭스 메탈로프로테아제 억제제, 리폭시게나제 억제제, 시토킨 길항제, 면역억제제, 항암제, 항바이러스제, 시토킨, 성장 인자, 면역조절제(예: 브로피리민, 항-사람 알파 인터페론 항체, IL-2, GM-CSF, 메티오닌, 엔케팔린, 인터페론 알파, 디에틸디티오카바메이트, 종양 괴사 인자, 날트렉손 및 rEPO), 프로스타글란딘 또는 항-혈관 과증식 화합물. 제2 제제를 사용하는 경우, 제2 제제는 본 발명의 화합물 또는 조성물과 함께 별도의 용량 형태로서 또는 단일 용량 형태의 부분으로서 투여할 수 있다.

상기 조성물에 존재하는 화합물의 양은 질병의 중증도, 또는 ICE 억제, IL-1 수준 또는 IL-1 활성의 감지될 만한 감소를 유발하기에 충분해야 한다.

본 발명 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 이들 조성물에 사용하는 경우, 염은 바람직하게는 무기 또는 유기의 산 및 염기로부터 유도된다. 이러한 산 염 중에 다음이 포함된다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠 설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캠포레이트, 캠포 설포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 염산염, 하이드로브로마이드, 하이드로요다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말리에이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐-프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 타타레이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트. 염기 염은 암모니아염, 알칼리 금속염(예: 나트륨염 및 칼륨염), 알칼리 토금속염(예: 칼슘염 및 마그네슘염), 유기 염기와의 염, 예를 들어, 디사이클로헥실아민염, N-메틸-D-글루카민 및 아미노산과의 염(예: 아르기닌, 리신) 등을 포함한다.

또한, 염기성 질소-함유 그룹은 저급 알킬 할라이드(예: 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 요다이드); 디알킬 설페이트(예: 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 설페이트); 장쇄 할라이드(예: 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 요다이드); 아르알킬 할라이드(예: 벤질 및 펜에틸 브로마이드) 등과 같은 제제를 사용하여 4급화할 수 있다. 수용성 또는 지용성 또는 수분산성 또는 지분산성 화합물은 이에 의해 수득한다.

본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 화합물은 또한, 적합한 관능기를 부착시켜 선택적 생물학적 특성을 개선시킴으로써 개질시킬 수 있다. 이러한 개질은 당해 기술분야에 공지되어 있으며, 소정의 생물학적 시스템(예: 혈액, 임파계 또는 중추신경계)으로 생물학적 침투를 증가시키고, 경구 유용성을 증가시키고, 가용성을 증가시켜 주사에 의한 투여를 허용하게 하고, 대사작용을 변경시키고/시키거나 배출 속도를 변경시키는 것들을 포함한다.

바람직한 양태에 따라서, 본 발명의 조성물은 환자, 예를 들어, 포유동물, 바람직하게는 사람에게 약제학적 투여를 위해 제형화시킬 수 있다.

본 발명의 이러한 약제학적 조성물은 경구, 비경구, 흡입 분무에 의해, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 볼로, 질내 또는 이식된 저장소를 통해 투여할 수 있다. 본원에서 사용된 "비경구"라는 용어는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활막내, 흉골내, 난포막내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 및 주입 기술을 포함한다. 바람직하게는, 조성물을 경구 투여한다.

본 발명 조성물의 멸균 주사 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 당해 기술분야에 공지된 기술에 따라 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 제형화시킬 수 있다. 멸균 주사 제제는 또한 비독성 비경구 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 용액 또는 현탁액일 수도 있으며, 예를 들어, 1,3-부탄디올 중의 용액이다. 사용할 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균성 고정유는 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용된다. 이러한 목적으로, 합성 모노- 또는 디-글리세라이드를 포함하는 순한(bland) 고정유를 사용할 수 있다. 지방산, 예를 들어, 올레인산 및 이의 글리세라이드 유도체는 주사제의 제조에 유용한데, 이들이 특히 폴리옥시에틸화 변형으로, 천연의 약제학적으로 허용되는 오일(예: 올리브유 및 피마자유)이기 때문이다. 이러한 오일 용액 또는 현탁액은 또한, 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제, 예를 들어, 유화물 및 현탁물을 포함하여 약제학적으로 허용되는 용량 형태의 제형에 일반적으로 사용되는 카복시메틸 셀룰로스 또는 유사한 분산제를 함유할 수 있다. 다른 일반적으로 사용되는 계면활성제, 예를 들어, 트윈스(Tweens), 스판스(Spans) 및 약제학적으로 허용되는 고체, 액체 또는 다른 용량 형태의 제조에 일반적으로 사용되는 다른 유화제 또는 생물학적 유용성 증진제도 또한 제형화의 목적을 위해 사용할 수 있다.

고체 담체를 사용하는 경우, 제제를 타정하여 분말 또는 펠릿 형태 또는 트로키 또는 로젠지 형태로 경질 젤라틴 캡슐에 놓을 수 있다. 고체 담체의 양은, 예를 들어, 약 25mg 내지 400mg으로 변동할 수 있다. 액체 담체를 사용하는 경우, 제제는, 예를 들어, 시럽, 유화물, 연질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사액(예: 앰퓰 또는 비수성 액체 현탁액) 형태로 존재할 수 있다. 조성물이 캡슐 형태로 존재하는 경우, 예를 들어 경질 젤라틴 캡슐 쉘에 상기 담체를 사용하는 어떠한 일반적 봉입도 적합하다.

시럽 제형은 액체 담체(예: 에탄올, 글리세린 또는 물) 중의 화합물의 현탁액 또는 용액으로, 향미제 또는 착색제와 함께 이루어질 수 있다. 에어로졸 제제는 액체 담체(예: 물, 에탄올 또는 글리세린) 중의 화합물의 용액 또는 현탁액으로 이루어질 수 있는 한편, 분말상 무수 에어로졸 중에서, 제제는, 예를 들어, 습윤제를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형은 활성 성분을 이의 하나 이상의 허용되는 담체(들) 및 임의로 다른 치료 성분(들)과 함께 포함한다. 담체(들)은 제형의 다른 성분과 상용성이며, 이의 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용되는"이어야 한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 캡슐, 정제 및 수성 현탁제 또는 액제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 경구로 허용되는 용량 형태로 경구 투여할 수 있다. 경구용 정제의 경우에, 일반적으로 사용되는 담체는 락토스 및 옥수수 전분을 포함한다. 윤활제(예: 스테아르산마그네슘)가 또한 일반적으로 첨가된다. 캡슐 형태로 경구 투여하기 위해서, 유용한 희석제는 락토스 및 건조된 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁제가 경구용으로 필요한 경우, 활성 성분은 유화제 및 현탁제와 합친다. 필요한 경우, 특정 감미제, 향미제 또는 착색제도 첨가한다.

또는, 본 발명의 약제학적 조성물은 직장 투여하기 위한 좌제 형태로 투여할 수 있다. 실온에서 고체지만, 직장 온도에서 액체이며, 따라서 직장에서 용융되어 약물을 방출하는, 적합한 비-자극 부형제와 제제를 혼합하여 이들을 제조할 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한, 특히 치료 표적이 (예를 들어, 두개내 수술 동안을 포함하여) 국소 적용에 의해 용이하게 접근가능한 영역 또는 기관을 포함하는 경우, 국소 투여할 수 있다. 적합한 국소 제형은 각각의 이들 적용을 위하여 용이하게 제조된다.

하부 장관에 대한 국소 적용은 직장 좌제 제형에서(상기 참고) 또는 적합한 관장 제형에서 수행될 수 있다. 국소 경피 팻치도 사용할 수 있다.

국소 적용하기 위해서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 연고로 제형화시킬 수 있다. 본 발명 화합물의 국소 투여용 담체는 광유, 유동 바셀린, 백색 바셀린, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 또는, 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 로션 또는 크림으로 제형화시킬 수 있다. 적합한 담체는 광유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜 및 물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.

안과용으로 사용하기 위해서, 약제학적 조성물은 등장성의, pH 조절된 멸균 식염수 중의 미분화된 현탁제로서 또는 바람직하게는, 등장성의, pH 조절된 멸균 식염수 중의 용액으로서, 방부제(예: 염화벤질알코늄)의 존재하에 또는 부재하에 제형화시킬 수 있다. 또는, 눈에 사용하기 위해서, 약제학적 조성물은 연고(예: 바셀린)로 제형화시킬 수 있다. 한 양태에서, 조성물은 본원에서 제형화된 바와 같다. 다른 안과적 제제는, 예를 들어, 미국 특허 제6,645,994호 및/또는 미국 특허 제6,630,473호에서 발견할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한, 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여할 수 있다. 이러한 조성물은 약제학적 제형의 분야에서 익히 공지된 기술에 따라서 제조하고, 식염수 중에, 벤질 알콜 또는 다른 적합한 방부제, 생체 유용성을 증진시키는 흡수 촉진제, 플루오로카본 및/또는 당해 기술분야에 공지된 다른 통상적인 가용화제 또는 분산제를 사용하는 용액으로서 제조할 수 있다.

당해 기술분야의 숙련가는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제의 형태 및 특징이 결합시키려는 활성 성분의 양, 투여 경로 및 다른 익히 공지된 변수에 의해 지시됨을 인지한다.

상기 화합물 및 조성물은 또한, 발작 또는 경련과 연관된 특정 질환과 관련 있는 치료학적 적용에서 유용하다.

본 발명의 화합물은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제할 수 있으며, 따라서 본원에 기술된 특정 질환의 여러 병태생리학적 효과를 억제하거나 차단하기에 유용할 수 있다.

본 발명은 또한 (1) 세포로부터 IL-1 방출을 억제하고/하거나 (2) 사람을 포함하여 포유동물에서 IL-1의 과도하게 높은 조직 수준의 부적합한, 독성 또는 치사 효과를 방지함으로써 특정 질환을 치료하기 위한 치료 방법에 관한 것이다. 이 방법은 포유동물에게 유효한 ICE 억제량의 하나 이상의 ICE/CED-3 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 또한, 발작, 경련, 간질 또는 관련 질환을 포함하여, 이에 따르는 특정 질환의 예방학적 치료 또는 예방에 사용할 수 있다. 본 발명은 사람을 포함하여, 치료를 필요로 하는 포유동물에게 이러한 화합물의 유효량을 투여함으로써 이들 질환의 치료 방법을 제공한다.

ICE를 억제하고 IL-1의 방출을 차단하거나 IL-1 수준 및 활성뿐만 아니라 각각의 이들 상태에서 IL-1의 과도한 수준의 병태생리학적 작용을 감소시킴으로써 화합물은 특정 질환의 정지 또는 해결을 직접 촉진시키고, 정상 기능의 회복을 촉진시킨다. 함께, 이들 작용은 발작 및 관련 질환의 치료에서 이들의 신규한 용도에 관한 것이다.

ICE 억제는 당해 기술분야에 공지된 방법에 의해 본원에서 더욱 상세하게 기술된 바와 같이 측정할 수 있다.

화합물은 단핵구, 마크로파지, 신경원 세포, 내피 세포, 표피 세포, 간엽 세포(예: 섬유아세포, 골격 근세포, 평활근 근세포, 심장 근세포) 및 많은 다른 종류의 세포에 의한 IL-1 방출을 억제하는 데에 유용할 수 있다.

"병태(condition 또는 state)"라는 용어는 환자에게 유해한 생물학적 결과를 생성하는 질환, 장애 또는 효과를 지칭한다.

본원에서 사용된 "발작"이란 용어는 신체의 전부 또는 일부에 걸쳐서 근육의 갑작스러운 비자발적 수축을 포괄적으로 지칭하며, 이러한 수축은 중추신경계에서 신경원의 아집합의 비정상적 흥분에 의해 유발된다. 발작은 간질의 증상이다. 발작의 운동 발현은 뇌파(EEG)의 변경을 수반한다. 이들 변경은 또한, 명백한 운동 발현의 부재하에 발생할 수 있다.

환자의 혈액 또는 세포 또는 세포 조직 내(즉, 세포 또는 세포 조직 배지 내에서)의 IL-1 단백질의 수준은, 예를 들어, IL-1 또는 활성 IL-1의 존재의 결과로서 생성되는 것으로 공지된 다른 단백질에 대한 면역특이적 결합에 대하여 검정함으로써 측정할 수 있다. 이러한 방법들은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 사용할 수 있는 면역검정은 경쟁적 및 비-경쟁적 검정 시스템, 웨스턴 블롯, 방사선면역측정, ELISA(효소 결합된 면역흡착 검정), "샌드위치" 면역검정, 면역침전 검정, 침전소 반응, 겔 확산 침전소 반응, 면역확산 검정, 교착 검정, 보체-고정 검정, 면역방사계측 검정, 형광 면역검정, 단백질 A 면역검정 및 항체를 표지화한 FACS 분석을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 이러한 검정은 당해 기술분야에 익히 공지되어 있다[참조: Ausubel et al., eds., 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York, 본원에서 이의 전문이 참조로 인용되어 있음].

경쟁적 결합 검정은 또한, IL-1의 수준을 측정하는 데에 사용할 수 있다. 경쟁적 결합 검정의 일례는 증가량의 비표지 IL-1의 존재하에 IL-1 항체를 사용하여 IL-1을 발현시키는 세포로부터 표지된 단백질의 배양(예: ³H 또는 ¹²⁵I), 및 표지된 IL-1에 결합된 IL-1 항체의 검출을 포함하는 방사선면역측정이다. 특정 항원에 대해 중요한 항체의 친화도 및 결합 분리(binding off) 비율은 데이터로부터 스캐처드(Scatchard) 플롯 분석에 의해 측정할 수 있다. 제2 항체를 사용하는 경쟁은 또한, 방사선면역측정을 사용하여 측정할 수 있다. 이러한 경우에, 항원은 표지된 화합물(예: ³H 또는 ¹²⁵I)에 결합된 중요한 항체를 사용하여 증가량의 비표지 제2 항체의 존재하에 배양한다.

IL-1 수준은 또한 활성에 의해 검정할 수 있으며, 예를 들어, IL-1 수준은 시토킨 유사 IL-1 또는 성장 인자의 생물활성 수준을 검출할 수 있는 세포주에 의해 검정할 수 있다. 한 양태에 따라서, 생물학적 샘플에서 생물활성 IL-1의 수준은 이소프로필-b-D-티오갈락토피라노시드를 사용하여 유전학적으로 조작된 세포주를 항온배양하여 검출한다. 세포주는 시험되는 샘플을 사용하여 항온배양하고, 세포주에서 세포 괴사는 청색 색상의 강도를 측정하여 모니터하는데, 이는 시험 샘플에서 생물활성 시토킨 또는 성장 인자의 지표이다[참고: 예를 들어, 환자의 혈청의 IL-1 활성 검정에 대한 Burns(1994) 20(1):40-44].

약 0.01 내지 약 100mg/체중 kg/일, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 75mg/체중 kg/일, 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 50mg/체중 kg/일의 활성 성분 화합물의 용량 수준이 단일치료에 유용하다. 약 50 내지 약 200mg/kg의 용량을 시험하여 이것이 유효한 것으로 밝혀졌다(본원의 실시예 참고). 두개내 투여를 위해서, 1ng 내지 1g, 바람직하게는 100ng 내지 100mg의 활성 성분 화합물의 용량 수준이 유용하다.

일반적으로, 본 발명의 약제학적 조성물은 하루에 약 1 내지 5회 투여하거나 대안적으로는 연속적 주입으로 투여할 수 있다. 이러한 투여는 만성 또는 급성 치료법으로서 사용할 수 있다. 담체 물질과 결합하여 단일 용량 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 치료된 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 변한다. 일반적 제조는 약 5% 내지 약 95% 활성 화합물(w/w)을 함유한다. 바람직하게는, 이러한 제제는 약 20% 내지 약 80%의 활성 화합물을 함유한다.

본 발명의 조성물이 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제의 배합을 포함하는 경우, 화합물 및 추가 제제는 둘다 단일치료 섭생법에서 일반적으로 투여된 용량의 약 10% 내지 약 80%의 용량 수준으로 존재한다.

환자 상태의 개선후에, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 배합물의 투여 용량은 필요한 경우, 유지할 수 있다. 계속해서, 투여의 용량 또는 빈도 또는 둘 다는 증상의 함수로서 개선된 상태가 유지되는 수준으로 감소시킬 수 있다. 증상이 목적하는 수준으로 완화되는 경우, 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자는 질병 증상의 재발시에 장기간을 기준으로 간헐적 치료를 필요로 할 수 있다.

또한, 특정 환자에 대한 구체적인 용량 및 치료 섭생법은 사용되는 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적 건강, 성별, 식단, 투여 시간, 배출 속도, 약물 배합물 및 치료 내과의의 판단 및 치료 받는 특정 질환의 중증도를 포함하여 다양한 인자에 따른다. 활성 성분의 양은 또한, 조성물 내의 특정 화합물 및 다른 치료제(존재한다면)에 따라 다르다.

따라서, 환자에 있어서 본 발명의 질병을 치료하거나 예방하는 방법은 환자에게 본원에서 기술된 화합물, 약제학적 조성물 또는 배합물을 투여하는 단계를 포함한다.

바람직한 양태에서, 본 발명은 상기 질병 중의 하나를 갖는 포유동물에게 위에 기술된 약제학적으로 허용되는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 당해 포유동물을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 양태에서, 환자에게 또다른 치료제를 투여하는 경우, 본 발명의 화합물과 함께 단일 용량 형태로 또는 별도 용량 형태로 전달할 수 있다. 별도 용량 형태로서 투여하는 경우, 다른 치료제를 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물의 투여 전에, 이와 동시에 또는 이후에 투여할 수 있다.

본 발명에 따르는 질병을 치료하기 위한 화합물 또는 조성물을 확인하는 방법은 특정 질환(들)의 효과를 경감시키고/거나 본 발명의 특정 질환(들)을 갖는 환자의 상태를 개선시키는 이의 능력에 대해 다수의 화합물 또는 조성물을 선별하는 방법을 포함한다. 본 발명의 한 양태에 따라서, 고속 처리 선별(high throughput screening)은 미량적정 플레이트에서 다수의 웰에서 배지에 세포를 갖고, 각각의 웰에 상이한 화합물 또는 조성물을 첨가하고, 각각의 세포 배지에서 ICE 억제 및/또는 IL-1 수준 및/또는 활성을 대조 웰에서 세포 배지에 존재하는 수준 또는 활성과 비교함으로써 달성할 수 있다. 본 발명에 따른 비교 단계에 유용한 대조군은 화합물 또는 조성물로 치료하지 않은 세포 또는 환자를 포함하고, 세포 또는 환자는 ICE 억제 또는 활성에 대한 효과를 갖지 않는 것으로 공지된 화합물 또는 조성물로 치료하였다. 본 발명의 한 양태에 따라서, 고속 처리 선별을 자동화하여 화합물 또는 조성물의 첨가 후에 데이터 수집 및 분석까지 판에 세포의 첨가를 포함하는 단계가 기계에 의해 수행되도록 한다. 본 발명의 비교 단계에서 유용한 기기, 예를 들어, 표지된 대상(예: 방사성 표지된, 형광 또는 착색된 대상)을 검출할 수 있는 기기 또는 그자체가 검출가능한 대상은 시판되고/되거나 당해 기술분야에 공지되어 있다. 따라서, 본원에 기술된 특정 질환의 치료에 유용한 본 발명에 따른 화합물 또는 조성물은 신속하게 효율적으로 선별할 수 있다.

본원에 기술된 모든 특허원, 특허 및 참조문헌이 참조로 인용되어 있다. 본 발명을 더욱 완전하게 이해하기 위해서, 다음 실시예 및 시험 실시예가 기술되어 있다. 이들 실시예는 예시하기 위해서이며, 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로든 제한하는 것으로 추정해서는 안된다.

실시예 1

성숙한 스프래그-돌리(Sprague-Dawley) 래트 수컷에서 발작의 실험 모델은 자유롭게 움직이는 래트의 척추 해마에서 만성적으로 이식된 캐뉼러 및 전극을 사용하여 카인산(0.5㎕ 중의 40ng)을 한쪽에 미량주사하여 유도한다. 간단하게, 동물은 에퀴테신(1% 페노바비탈 및 4% 클로랄 수화물; 3ml/kg, 복강내)을 사용하여 깊게 마취시킨다. 이극성 니크롬 와이어 절연된 전극(60μm)을 척추 해마의 치상회(사이막 극)로 양측으로 이식하고, 가이드 캐뉼러(22게이지)를 경질막의 상단에 한쪽으로 배치하고, 카인산을 해마내 주사하기 위해서 심부 전극 중의 하나에 밀착시킨다. 해마 전극을 이식하기 위하여 브레그마(bregma)로부터 공조부가 있다[(mm 단위): 노우즈 바 -2.5, AP -3.5, L ±2.4 및 경질막 아래로 3].

추가의 가이드 캐뉼러는 화합물을 뇌실내 주사하기 위해서 경질막의 상단에 한쪽으로 배치한다[(mm 단위), 노우즈 바 -2.5; AP -1; L + 1.5]. 분쇄된 납을 비동 위에 배치하고, 이축 전극을 두정 피질 위에 양측으로 놓는다. 전극을 다수핀 소켓[제조원: 미국 뉴욕 소재의 마쉬 일렉트로닉스(March Electronics)]에 연결하고, 주사 캐뉼러와 함께, 아크릴 치과 시멘트에 의해 두개골에 고정시킨다.

화합물 1(25㎍/4㎕) 또는 동량의 비히클을 뇌실내 주사에 의해 투여한다. 발작을 기록하고, EEG 분석에 의해 다음 변수를 기준으로 하여 정량화한다: 1) 제1 발작 에피소드의 개시까지 시간, 2) 기록하는 3시간 동안 발작 에피소드의 수 및 3) 각각의 발작 사건 기간을 함께 더함으로써 계산된 발작 활성 시간. 화합물 1 치료는 경련의 개시까지 잠복기를 상당히 증가시키고, 발작 에피소드의 수 및 발작 활성의 총 시간을 감소시킨다(표 1).

ICE/카스파제-1의 활성화에 대한 화합물 1의 영향은 샘플의 웨스턴 블롯에 의해 이들 래트로부터 검출된 활성 20kD 아단위의 양을 근거로 하여 평가한다. 도 1은 화합물 1 치료가 카이네이트 발작에 의해 유도된 카스파제-1 20kD 아단위에서의 증가를 없앨 뿐만 아니라, 이러한 아단위를 매우 낮은 수준으로 감소시킴을 도시한다. 프로-카스파제-1의 불활성 45kD 아단위의 수준은 카이네이트 또는 화합물 1에 의해 변하지 않는다.

**스튜던트 t-시험에 의해 p < 0.01 대 비히클

실시예 2

래트에서 발작의 실험 모델은 자유롭게 움직이는 래트의 척추 해마에서 만성적으로 이식된 캐뉼러를 사용하여 카인산(0.5㎕ 중의 40ng)을 한쪽에 미량주사하여 유도한다. 화합물 1(30mg/kg) 또는 비히클을 복강내 주사에 의해 투여한 지 45분 및 10분 후에 카인산을 투여한다. EEG 발작은 만성적으로 이식된 해마 전극을 사용하여 기록한다. 발작 및 발작간 간질 활성은 EEG 분석에 의해 다음 변수를 기준으로 하여 정량화한다: 1) 제1 발작 에피소드의 개시까지 시간, 2) 기록하는 3시간 동안 발작 에피소드의 수 및 3) 각각의 발작 사건 기간을 함께 더함으로써 계산된 발작 활성 시간. 화합물 1 치료는 경련의 개시까지 잠복기를 상당히 증가시키고, 발작 활성의 총 시간을 -30%까지 감소시키지만, 이 차이는 통계학적 유의성에 도달하지 않는다(표 2). 이들 데이터는 보다 큰 용량이 더욱 크고 통계학적으로 유의성 있는 효과의 산출에 유용함을 암시한다. 화합물 2의 보다 큰 용량이 통계학적으로 유의성 있는 효과를 산출하는 실시예 4를 참조한다.

*스튜던트 t-시험에 의해 p < 0.01 대 비히클

실시예 3

ICE 억제

화합물은 ICE를 억제하는 이들의 능력에 대하여 당해 기술분야에 공지된 방법에 의해 시험할 수 있다(예를 들어, 도 2 내지 4에 인용된 문헌 참고).

실시예 4

EEG 발작은 성숙한 스프래그-돌리 래트 수컷에서 40ng 카인산(KA)의 해마내 주사에 의해 만성적으로 이식된 캐뉼러를 사용하여 유도시킨다. EEG 발작은 만성적으로 이식된 해마 전극을 사용하여 기록한다. 발작 및 발작간 간질 활성은 EEG 분석에 의해 다음 변수를 기준으로 하여 정량화한다: 1) 제1 발작 에피소드의 개시까지 시간, 2) 기록하는 3시간 동안 발작 에피소드의 수 및 3) 각각의 발작 사건 기간을 함께 더함으로써 계산된 발작 활성 시간. 화합물 2 또는 이의 비히클은 연속 3일 동안 복강내 주사한다(50 내지 200mg/kg). 제4일에, 래트가 화합물 2를 수용한 지 45분 및 10분 후에 카인산 0.5㎕ 중의 40ng을 해마내 주사한다.

데이터는 평균 ±표준오차이다(N = 7 내지 15마리의 래트).

**1방식 ANOVA 후에 둔네트(Dunnett) 시험에 의해 p < 0.01 대 비히클

실시예 5

발작에 대한 이부프로펜의 효과는 또한 실시예 4에 기술된 방법을 사용하여 시험한다. 래트가 이부프로펜(50mg/kg, 복강내)을 수용한 지 60분 후에 카인산 0.5㎕ 중의 40㎍을 한쪽의 해마내에 주사한다. 대조(비히클)는 식염수를 수용한다. 스튜던트 t-시험에 의해 *p < 0.05 대 비히클. 발작은 EEG에 의해 분석하고 정량화한다. 간질지속 상태는 30분 넘게 연속적으로 지속되는 연속 발작 활성을 나타낸다.

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실시예 6

카이네이트-유도된 IL-1β 생성에 대한 화합물 1의 효과는 또한 실시예 1에 기술된 바와 같이 연구한다. IL-1β 생성은, ICE/카스파제-1 활성화가 그러하듯이, 해마내 카이네이트(40ng) 미량주사한 지 90분 후에 래트로부터 수득된 해마 균등액을 웨스턴 블롯 분석에 의해 평가한다. 해마 균등액으로부터 총 단백질(170㎍)은 SDS PAGE, 10% 아크릴아미드를 사용하여 분리시키고, Hybond 니트로셀룰로스 막으로 전기블롯팅(electroblotting)에 의해 이동시킨다. ICE/카스파제-1 및 IL-1β 면역반응성은 선택적 항체를 사용하여 평가하고, 증진된 화학발광을 사용하여 검출한다. 해마내 카이네이트 주사는 ICE/카스파제-1의 활성 20kD 아단위의 형성 및 활성 17kD IL-1β의 형성을 유도한다. 뇌실내로 주사된 화합물 1(25㎍/4㎕)은, ICE/카스파제-1의 활성 20kD 아단위의 형성을 제거함으로써 증명된 바와 같이, ICE/카스파제-1의 활성화를 억제하고, 성숙한 활성 17kD IL-1β의 형성을 감소시킨다(카스파제-1 데이터에 대하여 도 1 및 도 2A 참고 및 IL-1β 데이터에 대하여 도 2B 참고).

실시예 7

정제 형성

화합물 2는 아래에서 및 표 6에 기술된 바와 같이 경구 투여하기 위하여 제형화시킬 수 있다. 약물 제품은 제형화되어 정제당 300mg의 화합물 2를 제공한다.

화합물 2, 300mg 정제의 조성

성분	양(mg/정제)		기능
화합물 A	300		활성 성분
미세결정성 셀룰로스(NF)	277.50		충전제
예비겔화된 전분(NF)	131.25		붕해제
나트륨 전분 글리콜레이트(NF)	15.00		붕해제
콜로이드성 이산화규소(NF)	11.25		활주제
활석(USP)	7.50		활주제
마그네슘 스테아레이트(NF)	7.50		윤활제
총	750

참조문헌

A. Vezzani et al., "Powerful Anticonvulsant Action of IL-Receptor Antagonist on Intracerebral Injection and Astrocytic Overexpression in Mice" PNAS, 97, pp. 11534- 11539 (2000).

B. Viviani et al., "Interleukin-lβ Enhances NMDA Receptor-Mediated Intracellular Calcium Increase through Activation of the Src Family of Kinases" J. Neurosci., 23, pp. 8692-8700 (2003).

M. Rizzi et al., "Glia Activation and Cytokine Increase in Rat Hippocampus by Kainic Acid-induced Status Epilepticus During Postnatal Development" 14, pp. 494-503 (2003).

De Simoni et al., "Inflammatory Cytokines and Related Genes and Induced in the Rat Hippocampus by Limbic Status Epilepticus" 12, pp. 2623-2633 (2000).

A. Vezzani et al., "Interleukin-lβ Immunoreactivity and Microglia are Enhanced in the Rat Hippocampus by Focal Kainate Application: Functional Evidence for Enhancement of Electrographic Seizures" J. Neurosci. 19, pp. 5054-5065 (1999).

본원에서 언급된 모든 문헌은 본원 명세서에 참조로 인용되어 있다.

본 발명의 다수의 양태가 기술되었지만, 기본 실시예들은 변경시켜 본 발명의 화합물 및 방법을 사용하는, 다른 양태를 제공할 수 있음은 명백하다. 따라서, 본 발명의 범위는 실시예에 의해 나타내어진 특정 양태에 의해서 보다는 첨부된 특허청구의 범위에 의해 한정되어야 함을 인지한다.

Claims (22)

1. ICE/카스파제-1 억제 화합물을 포함하는, 발작 기간을 감소시키거나, 발작 개시의 감수성을 감소시키거나, 발작 개시를 지연시키거나, 발작의 발생을 제거하는데 사용하기 위한 조성물로서,

   상기 화합물이,

   화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 1)을 포함하는 이의 입체이성체;

   화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체;

   화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 2)를 포함하는 이의 입체이성체; 또는

   화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체인, 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 경련 개시의 잠복기를 증가시키거나, 지연시키기 위해 사용되는, 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 발작 기간을 감소시키거나, 발작 개시를 지연시키거나, 발작의 발생을 제거하기 위해 사용되는, 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 1)을 포함하는 이의 입체이성체인, 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체인, 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 2)를 포함하는 이의 입체이성체인, 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체인, 조성물.
8. 제1항에 있어서, 항경련 화합물로서 메포바비탈, 펜토바비탈, 로라제팜, 클로나제팜, 클로라제페이트, 디아제팜, 티아가빈, 가바펜틴, 프레가발린, 비가바트린, 히단토인, 페니토인, 포스페니토인, 라모트리진, 메트석시미드, 에토석시미드, 카바마제핀, 릴루졸, 발프로에이트, 디발프로엑스, 펠바메이트, 프리미돈 또는 토피라메이트로부터 선택되는 추가 화합물을 추가로 포함하는 조성물.
9. 화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 1)을 포함하는 이의 입체이성체;

   화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체;

   화학식

   

   의 화합물, 또는

   

   (화합물 2)를 포함하는 이의 입체이성체; 또는

   화학식

   

   의 화합물, 또는 화학식

   

   의 화합물을 포함하는 이의 입체이성체로부터 선택되는 화합물, 및 상기 화합물을 사용하여 발작 기간을 감소시키거나, 발작 개시의 감수성을 감소시키거나, 발작 개시를 지연시키거나, 발작의 발생을 제거하기 위한 지침서를 포함하는 키트.
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