KR101182358B1 - A medicine composition for treating muscular atrophy and myasthenia gravis and method of preparing the same - Google Patents

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Abstract

본 발명의 목적은 운동 신경 질환, 진행성 근육 영양장애, 선천적 근무력증 등에 의한 근육 퇴화 및 근무력증의 의약 조성물과 그 제조 방법을 제공하는 것이다. 상기 의약 조성물은 1~10중량부의 인삼 및 1~10중량부의 삼지구엽초와 같은 전통적 한약으로부터 추출된 활성 성분을 포함한다. 상기 의약 조성물은 근위축성 측부 경화 증세가 있는 환자의 혈청으로부터 유발되는 말초 신경의 재생 능력의 억제를 반감시키고, 손상된 말초신경의 재생 및 회복을 촉진시키며, 실험용 동물의 수영 인내력을 향상시키고, 근력을 대단히 증진시키며, 근육마비 상태인 쥐에서 크레아틴 인산염 키나아제 활성의 증가를 크게 억제하고 골격근 기능을 보호하는 기능을 할 수 있다. An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for muscle degeneration and myasthenia due to motor neuron disease, progressive muscular dystrophy, congenital myasthenia and the like, and a method for producing the same. The pharmaceutical composition comprises 1-10 parts by weight of ginseng and 1-10 parts by weight of an active ingredient extracted from a traditional Chinese medicine such as trichophyte. The pharmaceutical composition halves the inhibition of the regeneration of peripheral nerves induced from serum of patients with amyotrophic lateral sclerosis, promotes regeneration and recovery of damaged peripheral nerves, improves swimming endurance of laboratory animals, and improves muscle strength. It greatly enhances and can significantly inhibit the increase in creatine phosphate kinase activity and protect skeletal muscle function in muscle paralyzed rats.

의약 조성물, 인삼, 삼지구엽초, 근무력증, 근육퇴화 Pharmaceutical composition, Ginseng, Trigeminal vinegar, Myasthenia gravis, Muscle degeneration

Description

근육 퇴화 및 근무력증 치료를 위한 의약 조성물 및 그 제조 방법 {A medicine composition for treating muscular atrophy and myasthenia gravis and method of preparing the same}A pharmaceutical composition for treating muscular atrophy and myasthenia gravis and method of preparing the same

본 발명은 근육 퇴화 및 근무력증의 치료용 의약 조성물 및 그 제조 방법에 관한 것이다, 이것은 전통 중의약 분야 및 그 제조기술에 해당된다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of muscle degeneration and myasthenia, and a manufacturing method thereof, which corresponds to the field of traditional Chinese medicine and its manufacturing technology.

근위축성측부경화(ALS), 진행성척추근위축증(PSMA), 진행성연수마비증(PBP) 및 원발성측삭경화증(PLS)을 포함하는 운동신경질환(MNDs)은 중추 신경계 내에 있는 상부 및 하부 운동신경의 큰 퇴화로 야기된다. 상기 증상은 질병이 진행됨에 따라 근육 강도감소 및 근육위축증, 식사중의 질식이나 기침/ 연하곤란/ 호흡곤란 및 사망이다. 만성 진행성 퇴화질병 중의 하나로 잘 알려지지 않은 요소로 인한 병인 ALS는 선택적으로 척수 내의 전각 세포, 뇌간 운동신경 및 추체골계를 손상시키고, 상부 및 하부 운동 신경의 손상징후를 보인다. ALS는 만성 운동신경 질병의 가장 흔한 형태이다. 서양의학에 따르면, ALS의 병인이 명백히 알려지지 않았기 때문에, 환자가 질병과 싸울 수 있도록 하기 위해서 충분한 영양, 증상개선 및 심리적 도움 을 포함하는 유지치료(MAINTENANCE THERAPY)를 제외한 특별한 치료요법이 없다. Motor neuropathy diseases (MNDs), including amyotrophic lateral sclerosis (ALS), progressive spinal muscular atrophy (PSMA), progressive palsy paralysis (PBP) and primary lateral sclerosis (PLS), are associated with the large upper and lower motor neurons in the central nervous system. Caused by degeneration. The symptoms are muscle strength loss and muscular atrophy as the disease progresses, asphyxiation or coughing / dysphagia / digestion and death during meals. One of the chronic progressive degenerative diseases, ALS, which is a disease not well known, selectively damages the cells of the spinal cord, the brainstem motor neurons and the vertebral system and shows signs of damage to the upper and lower motor neurons. ALS is the most common form of chronic motor neuron disease. According to Western medicine, since the etiology of ALS is not well known, there is no specific treatment except MAINTENANCE THERAPY, which includes sufficient nutrition, symptom improvement and psychological help to help patients fight disease.

전통 중의학(TCM)의 이론에 따르면 근위축증은 ALS에 의해 야기되며 다른 질명은 TCM 이완 증후군의 범주에 속한다. 고대 중국인들은 이완의 치료는 양명경(Yangming Channel)에 주목해야 한다고 믿는 견해를 제안했다. 리 렉시안 교수는 이 질병의 근본적 원인이 내인풍(endopathic wind) 결핍 형태가 우연히 발생하고 혈관 무능 병리 요소가 있을 때, 비장과 신장이 모두 약한 것이라고 생각했다. 그는 치료방법이 비장을 활동적이게 하고 신장을 건강하게 하며, 내인풍(endopathic wind) 증후군을 완화하고 경련과 발작을 없애며, 부수적인 장애를 제거하기 위한 혈액순환 증진에 초점을 두어야한다고 생각했다. 상기 방법은 그가 제형화한 변형된 비장 활성화 및 신장 강화 처방으로 치료효과가 있다. 뎅 티에타오 교수는 ALS 증상이 담 및 울혈이 있는 비장과 신장의 기능부전으로 발생한다고 생각했다. 그는 경구용으로 중간 지아오(Middle jiao)를 증강하고 Qi를 채우기 위해 변형한 달인 약, 정맥주사용으로 황기, ALS 환자에게 활동적 비장과 건강한 신장을 만들어 주기 위한 침술점 주입, 담을 해소하기 위해 상부 림프를 증기 처리 및 세척, 숙변 제거를 위한 관장, 침술, 마사지, 음식 치료 및 심리치료를 포함하는 보조치료를 처방했다. 그의 방법은 일부 효과가 있지만 만족스럽지는 않았다. According to the theory of Traditional Chinese Medicine (TCM), muscular dystrophy is caused by ALS, and other vaginosis belongs to the category of TCM relaxation syndrome. The ancient Chinese suggested a view that relaxation therapy should pay attention to the Yangming Channel. Lirexian thought that the root cause of the disease was a weak spleen and kidney when the endopathic wind deficiency form by chance and vascular incompetent pathology. He thought that treatment should focus on improving the blood circulation to keep the spleen active, healthy kidneys, relieve endopathic wind syndrome, eliminate cramps and seizures, and eliminate incidental disorders. The method is therapeutic with the modified spleen activation and kidney strengthening regimen formulated. Professor Deng Thiaoo thought ALS symptoms were caused by spleen and congestive spleen and kidney failure. He orally augmented the middle jiao and transformed to fill the Qi, a decoction medicine, an intravenous injection, Astragalus, an acupuncture point injection to create active spleen and healthy kidneys for ALS patients, and upper lymph to relieve phlegm. Prescribed adjuvant therapy including steam treatment and washing, enema for elimination of stool, acupuncture, massage, food therapy and psychotherapy. His method worked for some but was not satisfactory.

본 발명의 목적은 근육 퇴화 및 근무력증의 치료에 좋은 효과가 있는 의약 조성물을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition having a good effect in the treatment of muscle degeneration and myasthenia gravis.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 의약 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다. 본 발명자는 병상 실무에, 단지 비장 및 위를 조절하기 위한 치료방법을 사용할 때, 명백한 치료 효과가 없다는 것을 발견했다. 그러므로 본 발명자는 상기 전통적인 치료 방법 대신에 경락을 중요시하고 특히, 기경팔맥 중 두맥(Du Channel)을 강조한다. 발명자는 기경팔맥으로 근위축증의 병인을 연구하고, 기경팔맥의 접근을 통한 치료의 새로운 개념 및 근본 에너지를 강화, 이완을 지지, 피에 영양을 공급 및 과립화 증진의 치료 원리를 제안했다. 여분의 양(Yang)의 예열, 생명의 정수 충전 및 기경팔맥의 활성화가 강조되고 두맥(Du Channel)을 예열하고 활력 있게 하며, 많은 전통 중국식물 중에서 기질을 활력 있게 하는 일부 효과적 약초가 선택되고 제형화되었다. 그렇게 상기 의약 조성물이 발명된다. Another object of the present invention is to provide a method for producing the pharmaceutical composition. The inventors have found that in bedside practice, there is no apparent therapeutic effect when using therapeutic methods to control the spleen and stomach only. Therefore, we focus on meridians instead of the traditional methods of treatment, and in particular, emphasize the Du Channel in the pericarpal vein. The inventors studied the etiology of muscular dystrophy with the instrumental forearm and proposed a new concept of treatment through the approach of the instrumental forearm and the therapeutic principles of strengthening, supporting relaxation, nourishing the blood and enhancing granulation. Some effective herbs are selected and formulated to emphasize the extra warm-up, fill the essence of life and activate the tillering veins, preheat and energize the Du Channel, and revitalize the substrate among many traditional Chinese plants. It was mad. Thus, the pharmaceutical composition is invented.

본 발명에 따른 상기 의약 조성물에 함유되는 활성 성분은 다음과 같다.The active ingredients contained in the pharmaceutical composition according to the present invention are as follows.

1~10 중량부의 인삼 및 1~10 중량부의 삼지구엽초, 바람직하게는 2~10 중량부의 인삼 및 2~8 중량부의 삼지구엽초, 보다 바람직하게 5 중량부의 인삼 및 5 중량부의 삼지구엽초, 혹은 5 중량부의 인삼 및 2 중량부의 삼지구엽초, 혹은 9 중량부의 인삼 및 7 중량부의 삼지구엽초, 혹은 3 중량부의 인삼 및 1 중량부의 삼지구엽초와 같은 전통 중국 허브(Chinese herbs)로부터 추출된다.1-10 parts by weight of ginseng and 1-10 parts by weight of trilobite vinegar, preferably 2-10 parts by weight of ginseng and 2-8 parts by weight of trigeminal vinegar, more preferably 5 parts by weight of ginseng and 5 parts by weight of trigeminal vinegar, or 5 parts by weight It is extracted from traditional Chinese herbs such as minor ginseng and 2 parts trigeminal vinegar, or 9 parts ginseng and 7 parts trigeminal vinegar, or 3 parts ginseng and 1 part trilobite vinegar.

본 발명의 의약 조성물에 사용되는 인삼은 건뿌리 및 근경, 오가피나무(Acanthopanax gracilistylu plant)로부터 추출하는데, 전통적 중의약 방식에서 그 약의 특징은 달고, 약간 쓰며 부드럽다. 본 발명의 의약 조성물에 사용되는 삼지구엽초는, Aceranthus Sagittatus S.et Z., Epimedium Sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim, Epimedium wushanense T.S.Ying 혹은 Korean Epimedium herb, 매자나무의 건조 분말로부터 얻어지며 전통 중국의학에서 그 약의 특징은 쓰고, 달며 따뜻하다.The ginseng used in the pharmaceutical composition of the present invention is extracted from dried root, rhizome and Acanthopanax gracilistylu plant, which is characterized by sweet, slightly bitter and soft in traditional Chinese medicine. The trilobite vinegar used in the pharmaceutical composition of the present invention is obtained from the dry powder of Aceranthus Sagittatus S.et Z., Epimedium Sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim, Epimedium wushanense TSYing or Korean Epimedium herb, barberry In medicine, the characteristics of the medicine are bitter, sweet and warm.

본 발명의 의약 조성물은 전통적인 제형화 기술에 따라 주사, 캡슐, 약제, 정제 및 경구액과 같이 의학적으로 통용되는 모든 형태로 출시될 수 있다. 주사는 바람직한 투약형태이다. The pharmaceutical composition of the present invention may be released in all medically available forms such as injections, capsules, drugs, tablets and oral solutions according to conventional formulation techniques. Injection is the preferred dosage form.

본 발명의 의약 조성물의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다.The manufacturing method of the pharmaceutical composition of this invention includes the following steps.

(1) 주어진 처방에 따라 전통 중국 허브의 첨가단계:(1) Addition step of traditional Chinese herbs according to the given prescription:

(2) 알코올 강도가 60~90%인 알코올로 1~3회 인삼을 추출, 얻어진 추출물을 결합하고, 상기 혼합된 추출물을 여과 및 농축하여 농축액을 형성하고, 정제수를 농축액에 첨가하여 희석하고 균일하게 될 때까지 혼합하고, 상기 혼합물을 냉각 및 여과하고, 희석된 여과물을 거대공극의 흡착성 수지 컬럼에 도입하고, 수용성 용리제와 알코올 강도가 70~90%인 알코올로 차례대로 컬럼을 용리하고, 용리액을 수거하고 불순물을 제거하며, 용리액을 농축시키고, 건조시켜 인삼추출액을 얻는 단계;(2) Extract the ginseng 1 to 3 times with alcohol having an alcohol strength of 60 to 90%, combine the obtained extract, filter and concentrate the mixed extract to form a concentrate, add purified water to the concentrate, dilute and homogenize Until the mixture is cooled, the mixture is cooled and filtered, the diluted filtrate is introduced into a macroporous adsorbent resin column, and the column is eluted sequentially with a water soluble eluent and an alcohol having an alcohol strength of 70-90%. Collecting the eluent and removing impurities, concentrating the eluent and drying to obtain a ginseng extract;

(3) 물:삼지구엽초의 무게비가 매번 10~30 : 1인 물로 2~5회 삼지구엽초를 달이고 추출하고, 얻어진 추출물을 결합하고, 상기 결합된 추출물을 여과 및 농축하여 농축물을 형성하고, 용액의 알코올 농도가 60~80%가 될 때까지 알코올을 농축액에 첨가하고, 물을 상기 농축액에 첨가하여 균일하게 될 때 까지 혼합하고, 상기 혼합물을 냉각 및 여과하고, 얻어진 여과액을 거대공극의 흡착성 수지 컬럼에 도입하고, 수용성 용리제와 알코올 강도가 40~60%인 알코올로 차례대로 컬럼을 용리하고, 용리액을 수거하고 불순물을 제거하며, 용리액을 농축하고 건조시켜 삼지구엽초 추출물을 얻는 단계;(3) weighing and extracting trigeminal vinegar 2-5 times with water having a weight ratio of water: trilobite vinegar every 10-30: 1, combining the obtained extracts, filtering and concentrating the combined extract to form a concentrate, Alcohol is added to the concentrate until the alcohol concentration of the solution is 60-80%, water is added to the concentrate and mixed until uniform, the mixture is cooled and filtered, and the resulting filtrate is subjected to Introducing into an adsorbent resin column, eluting the column sequentially with a water soluble eluent and an alcohol having an alcohol strength of 40-60%, collecting the eluent, removing impurities, and concentrating and drying the eluent to obtain trifoliar leaf extract;

(4) 의약 조성물을 얻기 위해 전통적인 의약 보조제와 단계(2) 및 단계(3)에서 얻어진 추출물을 결합한다.(4) Combine the traditional medicinal adjuvant with the extract obtained in step (2) and step (3) to obtain a pharmaceutical composition.

단계(2)에서 상기 수지 컬럼은 pH 8~9인 암모니아수와 알코올 강도가 20%인 알코올로 용리되고, 단계(3)에서 상기 수지 컬럼은 정화된 물과 알코올 강도가 각 20%인 알코올로 용리된다.In step (2) the resin column is eluted with ammonia water at pH 8-9 and alcohol with 20% alcohol strength, and in step (3) the resin column is eluted with purified water and alcohol with 20% alcohol strength each. do.

단계(2)에서 처리된 불순물을 제거하는 단계는 다음과 같다.Removing the impurities treated in step (2) is as follows.

정제수를 얻어진 용리액에 첨가하여 40~60%의 알코올 강도를 가지도록 하는 단계; 얻어진 용액을 중성 알루미나 컬럼에 통과시켜 유출물을 수거하는 단계; 적절한 양의 활성 탄소를 유출물에 첨가한 후에 20분 동안 환류하는 단계; 유출물을 뜨겁게 유지시켜 판형 여과기로 흡입 여과하는 단계; 얻어진 여과물을 수거하고 농축액을 형성하기 위해 농축하는 단계; 농축액을 적어도 24시간, 바람직하게는 24~36시간 냉각하고 여과하는 단계;Adding purified water to the obtained eluent to have an alcohol strength of 40 to 60%; Passing the resulting solution through a neutral alumina column to collect the effluent; Refluxing for 20 minutes after adding the appropriate amount of activated carbon to the effluent; Keeping the effluent hot and suction filtration with a plate filter; Collecting the obtained filtrate and concentrating to form a concentrate; Cooling and filtering the concentrate for at least 24 hours, preferably 24-36 hours;

단계(3)에서 불순물을 제거하는 단계는 다음과 같다.The step of removing impurities in step (3) is as follows.

적절한 양의 규조토를 용리액에 첨가하고 균일하게 될 때까지 혼합하고, 무수 알코올을 사용하여 2~5회 추출히고, 추출물을 결합하여 농축한다.Appropriate amount of diatomaceous earth is added to the eluent and mixed until uniform, extracted 2-5 times with anhydrous alcohol, combined extracts and concentrated.

단계(3)에서 물로 달이는 동안에, 첨가된 물의 중량이 식물의 10~30배이고 바람직하게 15~25배이며, 첫 번째 추출시간은 30분~2시간이고 다음의 각 추출시간은 30분~1시간이다.During the decoction with water in step (3), the weight of the added water is 10-30 times of the plant, preferably 15-25 times, the first extraction time is 30 minutes-2 hours and the next extraction time is 30 minutes-1 hour. to be.

바람직하게는 단계(2)에서 컬럼에 사용되는 거대공극의 흡착성 수지는 AB-8 형태의 수지, D101 형태의 수지 및 DM-130 형태의 수지이다.Preferably the macroporous adsorbent resin used in the column in step (2) is a resin of type AB-8, a resin of type D101 and a resin of type DM-130.

바람직하게는 단계(3)에서 컬럼에 사용되는 거대공극의 흡착성 수지는 AB-8 형태의 수지, NKA 형태의 수지 및 S-8 형태의 수지이다.Preferably the macroporous adsorbent resin used in the column in step (3) is a resin of type AB-8, a resin of type NKA and a resin of type S-8.

본 발명에 따른 방법의 바람직한 실시예는 다음의 단계를 포함한다. Preferred embodiments of the method according to the invention comprise the following steps.

(1) 사용되는 전통적 중국 허브를 먼저 세척하고 분쇄하여 처방전에 따라 칭량하는 단계;(1) first washing and grinding the traditional Chinese herbs used to weigh according to a prescription;

(2) 인삼근을 알코올 강도가 60~90%인 알코올로 3회 추출하고, 첫번째에서 인삼은 1~2시간 동안 인삼의 8~12배 중량 알코올로 추출하고, 두번째로 1~2시간 동안 인삼의 6~10배 중량의 알코올로 추출하는 단계; 세번째로 30분~1시간 동안 인삼의 6~10배 중량의 알코올로 인삼을 추출한다. 얻어진 추출물은 뜨거울 때 결합 및 여과되고, 감압하에서 농축시키고, 동시에 알콜을 회수하면서 농축액을 얻고, 이 농축액은 스테인레스 스틸 용기에 보관한다. 정제수를 농축액에 가하여 균일하게 될 때까지 혼합한다. 혼합물은 24~36시간 동안 냉각되고 실온이 될 때까지 방치한 후, 판형 여과기로 여과하고, 판형 여과기는 바람직하게 적은 양의 물로 세척한다. 여과액은 정화된 물로 희석하고 사용에 준비된다. AB-8형태나 다른 적합한 수지 컬럼과 같은 거대공극의 흡착성 수지에 얻어진 희석된 여과액을 도입하고, pH 8-9의 암모니아수 및 20% 강도의 알코올로 컬럼을 각각 세척한다. 컬럼은 80%강도의 알코 올로 용리되고 용리액은 수거한다. 정제수를 첨가하여 알코올 강도가 50%인 용액을 만든다. 이 용액을 중성 알루미나 컬럼에 통과시켜 결과물을 수거하고 결합한다. 그리고 상기 수지 컬럼은 50%강도의 소량의 알코올로 세척하고, 유출물은 결합하여 사용에 제공하기 위해 보관된다. 적당량의 활성 탄소를 혼합물에 첨가하고 그것을 끓여 20분 동안 환류시킨다. 혼합물은 뜨겁게 유지하고 그것을 판형 여과기를 사용해 흡입 여과시킨다. 얻어진 여과액을 수거하여 농축시켜 농축액을 만든다. 상기 용액은 하룻밤 동안 냉각시킨다. 정화 판형 여과를 상기 용액을 만들기 위해서 수행하고, 여과된 용액은 감압하에서 건조된다. 그리하여 연노랑 흰 무정형의 분말, 즉 인삼 추출물이 얻어진다. (2) Ginseng root is extracted three times with alcohol with 60-90% alcohol strength, the first ginseng is extracted with 8-12 times the weight alcohol of ginseng for 1-2 hours, and the second time ginseng for 1-2 hours Extracting with 6 to 10 times the weight of the alcohol; Thirdly, ginseng is extracted with alcohol 6 to 10 times the weight of ginseng for 30 minutes to 1 hour. The resulting extract is combined and filtered when hot, concentrated under reduced pressure and at the same time obtaining a concentrate with recovering alcohol, which is stored in a stainless steel container. Purified water is added to the concentrate and mixed until homogeneous. The mixture is cooled for 24 to 36 hours and left until it is at room temperature, then filtered through a plate filter, and the plate filter is preferably washed with a small amount of water. The filtrate is diluted with clarified water and ready for use. The diluted filtrate obtained in the macroporous adsorbent resin, such as AB-8 type or other suitable resin column, is introduced and the column is washed with ammonia water at pH 8-9 and alcohol of 20% strength, respectively. The column is eluted with 80% strength alcohol and the eluent is collected. Purified water is added to form a solution with an alcohol strength of 50%. The solution is passed through a neutral alumina column to collect and combine the result. The resin column is then washed with a small amount of alcohol of 50% strength, and the effluent is combined and stored for use. An appropriate amount of activated carbon is added to the mixture, which is boiled and refluxed for 20 minutes. The mixture is kept hot and suction filtered using a plate filter. The obtained filtrate is collected and concentrated to form a concentrate. The solution is cooled overnight. Purification plate filtration is performed to make the solution, and the filtered solution is dried under reduced pressure. Thus a pale yellow amorphous powder, i.e. ginseng extract, is obtained.

(3) 삼지구엽초는 2~5회, 바람직하게 4회 추출된다. 각 추출물에 첨가되는 물의 중량은 바람직하게 삼지구엽초의 10~30 배이다. 첫번째로 삼지구엽초는 30분~2시간 동안 추출되고 나머지 3번은 각각 30분~1시간 동안 추출된다. 상기 추출물은 뜨거울 때 결합되고 여과되며 감압하에서 농축되어 농축액을 얻고 스테인레스 스틸 용기에 넣는다. 알코올은 용액의 알코올 농도가 70%가 될 때까지 농축액에 첨가된다. 용액은 냉각, 여과되고, 동시에 알콜을 회수한다. 정제수는 농축액에 첨가되며 균일하게 섞일 때까지 혼합된다. 혼합물은 냉각, 여과 및 사용되기 위해 준비된다. 이렇게 하여 얻은 삼지구엽초 용액은 AB-8 형태의 미세공구조 흡착성 수지 컬럼을 통과하며, 정제수 및 알코올 강도 20%인 알코올로 각각 세척한다. 컬럼은 강도가 50%인 알코올로 용리되고 용리액은 수거된다. 적당량의 규조토는 용리액에 첨가되고 균일하게 섞일 때까지 혼합된다. 무수 알코올은 2~5회 추출에 사용된다. 추출물은 결합되고, 감압하에 농축되며 동시에 알코올을 회수하면서 건조된다. 이렇게 얻어진 분말을 삼지구엽초 추출물이다. (3) The trifoliate vinegar is extracted 2-5 times, preferably 4 times. The weight of water added to each extract is preferably 10 to 30 times that of the trigeminal vinegar. First, trichophytic vinegar is extracted for 30 minutes to 2 hours, and the remaining three times for 30 minutes to 1 hour. The extract is combined when hot and filtered, concentrated under reduced pressure to give a concentrate and placed in a stainless steel container. Alcohol is added to the concentrate until the alcohol concentration of the solution is 70%. The solution is cooled, filtered and at the same time recovering alcohol. Purified water is added to the concentrate and mixed until uniformly mixed. The mixture is prepared for cooling, filtration and use. The trigeminal vinegar solution thus obtained is passed through an AB-8 type microporous adsorbent resin column and washed with purified water and alcohol having an alcohol strength of 20%, respectively. The column is eluted with 50% strength alcohol and the eluent is collected. An appropriate amount of diatomaceous earth is added to the eluent and mixed until uniformly mixed. Anhydrous alcohol is used for extraction 2-5 times. The extract is combined, concentrated under reduced pressure and dried while recovering alcohol. The powder thus obtained is trichophytic vinegar extract.

(4) 1,2-프로필렌 글리콜, 나트륨 다이하이드로겐 포스페이트 및 다이소디움 하이드로겐 포스페이트와 같은 일부 전통적인 약학 보조제 및 완충염은 단계(2) 및 단계(3)으로부터 얻어지는 추출물의 혼합물에 첨가된다. 주사용 물은 수혼합 용액의 부피가 10~20㎖가 될 때까지 용액에 첨가된다. 얻어진 용액은 열처리 후에 냉각되고, 미세공극막 및 한외여과막으로 차례로 여과된다. 여과액은 주사용 의약 조성물을 얻기 위해 채워지고, 포장되며, 살균된다. (4) Some traditional pharmaceutical aids and buffering salts such as 1,2-propylene glycol, sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate are added to the mixture of extracts obtained from steps (2) and (3). Water for injection is added to the solution until the volume of the water mixture solution is 10-20 ml. The obtained solution is cooled after the heat treatment, and subsequently filtered through a microporous membrane and an ultrafiltration membrane. The filtrate is filled, packaged and sterilized to obtain a pharmaceutical composition for injection.

유사하게, 단계(2) 및 단계(3)에서 얻어지는 추출물은 전통적인 제형화 기술에 따라 캡슐, 알약 및 정제 및 경구액과 같은 적합한 투약형태로 출시된다. 약효 실험에 의하면 의약 조성물은 근위축성측삭경화증이 있는 환자의 수지로부터 야기되는 말초신경의 재생력 억제를 반감할 수 있고, 손상된 말초신경의 재생 및 회복을 증진하며, 실험용 동물의 수영 인내력을 향상시키고, 근력을 대단히 향상시켜, 근육마비 상태인 쥐에서 크레아틴 인산염 키나아제 활성의 증가를 크게 억제하고 골격근 기능을 보호하는 기능을 할 수 있다. Similarly, the extracts obtained in steps (2) and (3) are released in suitable dosage forms such as capsules, pills and tablets and oral solutions according to conventional formulation techniques. According to the pharmacologic studies, the pharmaceutical composition can halve the inhibition of the regeneration of peripheral nerves caused by the resin of patients with amyotrophic lateral sclerosis, enhance the regeneration and recovery of damaged peripheral nerves, improve swimming endurance of the experimental animals, By greatly improving muscle strength, it can function to greatly inhibit the increase in creatine phosphate kinase activity and protect skeletal muscle function in muscle paralyzed rats.

부드러운 특성에 기반한 상기 달고 부드러운 인삼은 본 발명에 따른 의약 조성물에서 소량의 달고 따뜻한 삼지구엽초와 혼합되는데 이것은 생명의 정수와 근본적인 에너지의 강화 및 신장-양(kidney-yang)에 영양을 공급해 주는 기능이 가능한 의약 조성물을 만들 뿐 아니라, 너무 따뜻하거나 건조하지 않은 의약 조성물을 만든다. 본 발명에 따른 의약 조성물에 포함되는 활성 성분은 단지 두 가지의 전통 중국 허브로부터 추출되지만, 그 효과는 확증적이고 적합성이 정확하다. 의약 조성물은 새롭고, 효과적이며 운동신경 질환에 의한 근육 퇴화증(근위축성측삭경화증, 진행성척추근위축증, 진행성연수마비증 및 원발성측삭경화증을 포함), 진행성 근육영양장애, 선천적 근질환 및 근무력증의 치료에 안전한 전통 중의약이다. The sweet and gentle ginseng, based on its soft properties, is mixed with a small amount of sweet and warm trilobite vinegar in the pharmaceutical composition according to the present invention, which has the function of nourishing the essence of life and the essential energy and feeding the kidney-yang. In addition to making possible pharmaceutical compositions, they also make pharmaceutical compositions that are not too warm or dry. The active ingredient included in the pharmaceutical composition according to the present invention is extracted from only two traditional Chinese herbs, but the effect is conclusive and accurate in suitability. The pharmaceutical composition is a new, effective and effective method for the treatment of muscle degeneration (including muscular dystrophy, progressive spinal muscular atrophy, progressive palsy and primary lateral sclerosis) caused by motor neuropathy, progressive muscular dystrophy, congenital myopathy and myasthenia gravis. It is a safe traditional Chinese medicine.

실시예Example

본 발명의 실시예는 주사, 캡슐, 정제 및 알약의 투약 형태의 의약 조성물의 제조를 위해 다음의 실시예를 따른다.Embodiments of the present invention follow the following examples for the preparation of pharmaceutical compositions in the form of injections, capsules, tablets and pills.

실시예Example 1 One

본 실시예의 의약 조성물은 2가지의 전통 중국 식물의 비율, 즉 5중량부의 인삼 및 2중량부의 삼지구엽초로부터 만들어진다. The pharmaceutical composition of this embodiment is made from the ratio of two traditional Chinese plants, that is, 5 parts by weight of ginseng and 2 parts by weight of trilobite.

그 준비단계는 다음과 같다:The preparation steps are as follows:

(1) 상기 2가지의 전통 중국 식물은 세척 및 분쇄되며 처방전에 따라 칭량된다.(1) The two traditional Chinese plants are washed, ground and weighed according to prescription.

(2) 인삼은 알코올 강도가 70%인 알코올로 3회 추출된다. 첫번째에서 인삼의 10배인 알코올이 인삼 분말에 첨가되고 그 혼합물은 끓는 점까지 가열되며 이 온도에서 1시간 동안 추출된다. 두번째에서는 인삼의 8배 중량의 알코올이 첫번째 추출 후 인삼 잔여물에 첨가되고, 그 혼합물은 끓는 점까지 가열되며 이 온도에서 1시간 동안 추출된다. 세번째에서는 인삼의 8배 중량의 알코올이 두번째 추출 후 인삼 잔여물에 첨가되고, 그 혼합물은 끓는 점까지 가열되며 이 온도에서 30분동안 추출된다. 상기 세 개의 결과 추출물은 가열되었을 때 결합되고 여과되며, 감압하에서 농 축시켜 농축액을 얻고, 이를 스테인레스 스틸 용기에 넣는다. 정제수가 농축액에 첨가되고 균일하게 되도록 혼합된다. 상기 혼합물은 24시간 동안 냉각되고 실온이 될 때까지 방치되며, 판형 여과기로 여과된다. 판형 여과기는 바람직하게 소량의 물로 세척된다. 여과액은 정제수로 희석되고 사용되도록 준비된다. 이렇게 얻은 농축 인삼액을 미리 처리된 AB-8형태의 거대공극의 흡착 수지 칼럼을 통과하도록 하고 수지 칼럼은 각각 pH 8-9의 암모니아수 및 20% 강도의 알코올로 컬럼을 각각 세척한다. 수지 컬럼은 강도가 80%인 알코올로 용리되고 용리액은 수거된다. 정제수를 50% 강도의 알코올 용액을 만들기 위해서 용리액에 첨가된다. 이 용액을 중성 알루미나 컬럼에 통과시켜 결과물은 수거된다. 수지 컬럼은 알코올 강도가 50%인 소량의 알코올로 세척되고, 유출물은 결합된다. 적당량의 활성 탄소는 혼합된 유출물에 첨가되고 끓인 후 20분 동안 환류된다. 혼합물이 뜨겁게 유지될 때 판형 여과기를 사용해 흡입 여과가 수행된다. 얻어진 여과액은 수거되고 농축시켜 농축액을 만든다. 상기 용액은 하룻밤 동안 냉각된다. 정화 판형 여과기(clarification plate filter)는 용액을 여과하기 위해 사용되고, 여과된 용액은 감압하에서 건조된다. 그리하여 인삼 추출물이 얻어진다. (2) Ginseng is extracted three times with alcohol with 70% alcohol strength. In the first, 10 times as much alcohol as ginseng is added to the ginseng powder and the mixture is heated to boiling point and extracted for 1 hour at this temperature. In the second, eight times the weight of ginseng alcohol is added to the ginseng residue after the first extraction and the mixture is heated to boiling point and extracted for 1 hour at this temperature. In a third, eight times the weight of ginseng alcohol is added to the ginseng residue after the second extraction, and the mixture is heated to the boiling point and extracted for 30 minutes at this temperature. The three resulting extracts are combined and filtered when heated and concentrated under reduced pressure to give a concentrate which is placed in a stainless steel container. Purified water is added to the concentrate and mixed to be uniform. The mixture is cooled for 24 hours and left until it is at room temperature and filtered through a plate filter. The plate filter is preferably washed with a small amount of water. The filtrate is diluted with purified water and ready for use. The concentrated ginseng solution thus obtained is passed through an adsorbed resin column of a pretreated AB-8 type macropores, and the resin column is washed with ammonia water of pH 8-9 and alcohol of 20% strength, respectively. The resin column is eluted with alcohol of 80% strength and the eluent is collected. Purified water is added to the eluent to make a 50% strength alcohol solution. The solution is passed through a neutral alumina column and the result is collected. The resin column is washed with a small amount of alcohol with an alcohol strength of 50% and the effluent is bound. The appropriate amount of activated carbon is added to the mixed effluent and refluxed for 20 minutes after boiling. Suction filtration is performed using a plate filter when the mixture is kept hot. The filtrate obtained is collected and concentrated to form a concentrate. The solution is cooled overnight. A clarification plate filter is used to filter the solution, and the filtered solution is dried under reduced pressure. Thus ginseng extract is obtained.

(3) 삼지구엽초는 4회 추출된다. 각 추출물에 첨가되는 물의 중량은 삼지구엽초의 20배이다. 첫번째로 삼지구엽초는 1시간 동안 추출되고, 나머지 3번은 각각 30분 동안 추출된다. 상기 결과 추출물은 뜨거울 때 결합되고 여과되며 감압하에서 농축시켜 농축액을 얻고, 스테인레스 스틸 용기에 넣는다. 알코올은 용액의 알코올 농도가 70%가 될 때까지 농축액에 첨가된다. 용액은 냉각, 여과되고, 알코올을 회 수하면서 농축된다. 정제수는 농축액에 첨가되며 균일하게 되도록 혼합된다. 혼합물은 냉각 및 여과된다. 상기 삼지구엽초 용액은 AB-8 형태의 거대공극 흡착성 수지 컬럼을 통과하고, 정제수와 알코올 강도가 20%인 알코올로 세척된다. 컬럼은 강도가 50%인 알코올로 용리되고 용리액은 수거된다. 적당량의 규조토는 용리액에 첨가되고 균일하게 되도록 혼합된다. 무수 알코올은 3회 혼합물의 추출에 사용된다. 추출물은 결합되고, 알코올을 회수하면서 감압하에 농축되고, 건조된다. 이렇게 삼지구엽초 추출물이 얻어진다. (3) Trilobite vinegar is extracted four times. The weight of water added to each extract is 20 times that of trigeminal vinegar. First, trilobite vinegar is extracted for 1 hour, and the remaining three are extracted for 30 minutes each. The resulting extract is combined when hot, filtered and concentrated under reduced pressure to give a concentrate, which is placed in a stainless steel container. Alcohol is added to the concentrate until the alcohol concentration of the solution is 70%. The solution is cooled, filtered and concentrated with alcohol recovery. Purified water is added to the concentrate and mixed to be uniform. The mixture is cooled and filtered. The trigeminal vinegar solution is passed through a large pore adsorptive resin column in the form of AB-8 and washed with purified water and alcohol having 20% alcohol strength. The column is eluted with 50% strength alcohol and the eluent is collected. An appropriate amount of diatomaceous earth is added to the eluent and mixed to make it uniform. Anhydrous alcohol is used for extraction of the mixture three times. The extract is combined, concentrated under reduced pressure while recovering alcohol and dried. Thus trigeminal vinegar extract is obtained.

(4) 1,2-프로필렌 글리콜, 소디움 다이하이드로겐 포스페이트 및 다이소디움 하이드로겐 포스페이트와 같은 일부 전통적인 의약 보조제는 단계(2) 및 단계(3)으로부터 얻어지는 혼합추출물에 첨가된다. 주사용 물은 용액의 부피가 16㎖가 될 때까지 혼합물에 첨가된다. 얻어진 용액은 가열되고 30분 동안 끓이며, 실온이 될 때까지 방치되고 냉각된다. 그리고 용액은 미세공극막 및 한외여과막으로 차례로 여과된다. 여과물은 주사용 의약 조성물을 얻기 위해 채워지고, 포장되며, 살균된다. (4) Some traditional medical adjuvants, such as 1,2-propylene glycol, sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate, are added to the mixed extract obtained from steps (2) and (3). Water for injection is added to the mixture until the volume of the solution is 16 ml. The resulting solution is heated and boiled for 30 minutes, left to cool to room temperature and cooled. The solution is then filtered through a microporous membrane and an ultrafiltration membrane. The filtrate is filled, packaged and sterilized to obtain a pharmaceutical composition for injection.

실시예Example 2 2

본 실시예의 의약 조성물은 2가지의 전통 중국 허브로부터 하기와같은 중량비 즉, 5중량부의 인삼 및 5중량부의 삼지구엽초로부터 만들어진다. The pharmaceutical composition of this example is made from the following weight ratios from two traditional Chinese herbs: 5 parts by weight of ginseng and 5 parts by weight of trilobite.

자세한 의약 조성물의 제조 단계는 기본적으로 실시예 1의 단계(1)~(3)에서와 같다. 일부 의약 보조제가 첨가되고 캡슐 형태의 의약 조성물은 전통적인 제형화 기술에 따라 얻어진다.The preparation steps of the detailed pharmaceutical composition are basically the same as in the step (1) to (3) of Example 1. Some pharmaceutical supplements are added and the pharmaceutical composition in capsule form is obtained according to traditional formulation techniques.

실시예Example 3 3

본 실시예의 의약 조성물은 2가지의 전통 중국 허브, 즉 9중량부의 인삼 및 7중량부의 삼지구엽초로부터 만들어진다. The pharmaceutical composition of this embodiment is made from two traditional Chinese herbs, 9 parts by weight of ginseng and 7 parts by weight of trilobite.

자세한 의약 조성물의 제조 단계는 기본적으로 실시예 1의 단계(1)~(3)에서와 같다. 일부 전통적인 의약 보조제가 첨가되고 정제 형태의 의약 조성물은 전통적인 제형화 기술에 따라 얻어진다. The preparation steps of the detailed pharmaceutical composition are basically the same as in the step (1) to (3) of Example 1. Some traditional medical adjuvant is added and the pharmaceutical composition in tablet form is obtained according to traditional formulation techniques.

본 발명에 따른 생체 밖에서 배양된 운동 에 관한 의약 조성물의 보호효과는 다음과 같은 동물실험에 따라 더 설명될 것이다. The protective effect of the pharmaceutical composition on exercise cultured in vitro in accordance with the present invention will be further described according to the following animal experiment.

목적: 본 발명에 따른 의약 조성물(JWL)의 운동신경에 대한 보호효과를 관찰하기 위해 생체 밖에서 배양되었다. PURPOSE: To observe the protective effect of the pharmaceutical composition (JWL) according to the present invention on the motor neuron was cultured in vitro.

방법: 쥐의 배아척수 운동신경은 밀도 원심분리로 분리되고 1차 배양된다. 흥분독성이 수립된 흥분성 아미노산 모델을 얻기 위해 글루타민산이 첨가되고, 본 발명에 따른 주사용 의약 조성물(JWL)의 보호효과를 운동신경에 대하여 평가하였다. 세포 생존능력은 MTT방법으로 알 수 있었다. NF-200 면역조직화학적 착색 및 이미지 분석은 신경돌기의 줄기 길이측정에 사용되었다. 배양상청액 내의 락테이트 디하이드로게나아제(LDH)는 생화학분석기로 감지되었다. 터널(TUNEL) 양성 신경 계수가 세포의 아포토시스 관찰에 사용되었다. Methods: The rat embryonic spinal motor neuron is isolated by density centrifugation and primary culture. Glutamic acid was added to obtain an excitatory amino acid model in which excitatory toxicity was established, and the protective effect of the injectable pharmaceutical composition (JWL) according to the present invention was evaluated for motor nerves. Cell viability was determined by MTT method. NF-200 immunohistochemical staining and image analysis were used for stem length measurement of neurites. Lactate dehydrogenase (LDH) in the culture supernatant was detected by a biochemical analyzer. Tunnel positive nerve counts were used to observe apoptosis of the cells.

1. 재료 및 방법1. Materials and Methods

1.1 실험재료1.1 Experimental Materials

1.1.1 약제1.1.1 Pharmaceutical

주사 형태의 상기 의약 조성물은 본 발명의 방법에 따라 8㎖/앰플(천연 약제 0.94g/㎖와)이 준비된다. 리루텍® 리루졸은 수입 약제 등록 번호 H20020006 및 일련 번호 28097을 가진 아벤티스 사에 의해 제조되었다. 0.9%염화나트륨-0.01 N HCl로 사용 전에 용해되어야 한다.The pharmaceutical composition in the form of injection is prepared 8 ml / ampoule (with 0.94 g / ml of natural drug) according to the method of the present invention. Li Li rujol ® software itself was produced by Aventis pharmaceutical company with a registered importer and the serial number 28097 No. H20020006. Soluble with 0.9% sodium chloride-0.01 N HCl before use.

1.1.2 시약1.1.2 Reagents

L15배양 배지, 중합개시제, 파렌자임(1:250),폴리라이신, 토끼 항-NF-200 항체, 인슐린, DAB 현상제, MTT 및 DMSO 는 시그마 사로부터 구입하였다. 말혈청과 라미닌은 깁코 BRL 사에 의해 제공되었다. 소혈청 알부민은 하이클론에 의해 제공되고 터널 장비는 로체 분자 생화학에서 생산되었다. 디플로-항(diplo-anti) 표지 비오틴 및 트리 항(tri-anti) 표지 호오스 래디쉬 퍼옥시다아제는 베이징 종산 생물학품사로부터 생산된 것이다. 다른 시약들은 중국에서 분석적 순도를 가지는 것으로 시장에서 얻을 수 있는 것들이다. L15 culture medium, polymerization initiator, parenzyme (1: 250), polylysine, rabbit anti-NF-200 antibody, insulin, DAB developer, MTT and DMSO were purchased from Sigma. Horse serum and laminin were provided by Gibco BRL. Bovine serum albumin was provided by hyclones and tunnel equipment was produced in roche molecular biochemistry. Diplo-anti-labeled biotin and tri-anti-labeled horse radish peroxidases are from Beijing Zhongshan Biological Products. Other reagents have analytical purity in China and are available on the market.

1.1.3 동물1.1.3 Animals

새끼를 가진 기간이 10~14일인 청결 등급 SD 암컷 쥐는 중국, 충칭 제 삼 군약대, 대핑 병원, 수술연구소, 동물센터로부터 제공되었다. Clean grade SD female rats with offspring 10 to 14 days were provided from Chongqing Third Military Pharmacy, Daping Hospital, Surgical Research Institute, and Animal Center.

1.1.4 장비1.1.4 Equipment

효소표지 장비(상하이, DG3022A), 이미지 분석 시스템(미국, 이미지 프로 플러스 4.5), 자동화된 생화학 분석기(미국, 베크만 CX7)Enzyme Labeling Equipment (DG3022A, Shanghai), Image Analysis System (USA, Image Pro Plus 4.5), Automated Biochemistry Analyzer (Beckman CX7, USA)

1.2 방법1.2 way

1.2.1 쥐의 배아 척수 1.2.1 Rat Embryonic Spinal Cord 운동신경의Neurological 1차 배양 Primary culture

임신기간이 14일인 배아 쥐가 선택되고 뇌간면 아래의 척수를 뽑아, 뇌척수막 및 혈관이 마멸된 후에 1~2㎣로 자른다. 그리고 작은 조각은 37℃에서 0.125%의 췌장효소로 소화시켜서 부드럽게 되며 200 메쉬 강체를 통과한다. 여과된 용액은 미리 넣어둔 1㎖의 4% BSA(숫소 혈청 알부민)를 함유한 원심관에 넣으며 10분(300g)동안 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, L15의 배양 배지로 용해 및 침전시키고, 미리 넣어둔 1㎖의 6.8% 메트리자마이드를 함유한 5㎖의 원심분리 튜브에 넣고, 15분(500g)동안 원심분리하였다. 액체의 두 층 사이의 밝은 색 용액은 흡입되고 10분(300g)동안 원심분리하였다. 상청액을 분리하고, L15의 배양 배지에 용해 되고, 척수의 전각에 있는 신경세포의 단일 세포 현탁물이 얻어졌다. 상기 현탁물의 농도는 4.5×105/㎖이었다. 상기 현탁물은 24-홀 및 96-홀 배양 판형에 착상되고, 이산화탄소 배양기에서 배양되었다. 24시간 후에 유지 배양배지가 사용되어진다. 48시간 후에, 12.5㎍/㎖ 5-Fu가 첨가되고 24시간 후에 흡입되며, 신선한 유지 배지가 배양에 사용되었다.Embryonic rats with a 14-day gestation period are selected and the spinal cord below the brainstem is extracted and cut to 1-2 mm after the cerebrospinal fluid and blood vessels wear out. The small pieces are then digested with 0.125% pancreatic enzyme at 37 ° C and smoothed through a 200 mesh rigid body. The filtered solution was placed in a centrifuge tube containing 1 ml of 4% BSA (cow serum albumin) previously placed and centrifuged for 10 minutes (300 g). The supernatant was removed, dissolved and precipitated with a culture medium of L15, placed in a 5 ml centrifuge tube containing 1 ml of 6.8% methazamide preloaded and centrifuged for 15 minutes (500 g). The light color solution between the two layers of liquid was aspirated and centrifuged for 10 minutes (300 g). The supernatant was separated, dissolved in L15 culture medium, and a single cell suspension of neurons in the spinal cord sac was obtained. The concentration of the suspension was 4.5 × 10 5 / ml. The suspension was implanted into 24-hole and 96-hole culture plates and incubated in a carbon dioxide incubator. After 24 hours a maintenance culture medium is used. After 48 hours, 12.5 μg / ml 5-Fu was added and aspirated after 24 hours, fresh maintenance medium was used for the culture.

1.2.2 실험 조건 조절1.2.2 Condition adjustment

운동신경이 72시간 동안 배양된 후에, 신선한 배양 배지에 의해 희석된 본 발명에 따른 주사용 0.5%, 1% 및 5%의 상기 액체 의약 조성물은 각각 실험군에 첨가되고, 리루졸은 리루텍 군(최종 농도는 10μ몰/L)에 첨가되며, 같은 양의 배양 배지가 대조군에 첨가되었다. 상기 세 그룹은 24시간 동안 동시에 배양되었다. 글루타민산이 흥분성 아미노산 흥분독성을 위해 첨가되고(최종 농도는 0.5m몰/L) 24 시간 후에 모든 지수는 검출되었다. After the motor nerves were incubated for 72 hours, 0.5%, 1% and 5% of the injectable liquid pharmaceutical compositions according to the present invention diluted with fresh culture medium were added to the experimental group, respectively, and the relusol was added to the Lyrutec group ( Final concentration was added to 10 μmol / L) and the same amount of culture medium was added to the control. The three groups were incubated simultaneously for 24 hours. All indices were detected 24 hours after glutamic acid was added for excitatory amino acid excitatory toxicity (final concentration 0.5 mmol / L).

MTTMTT 방법으로 세포 생존력 결정: How to determine cell viability:

흡입관을 가진 96-홀 접시의 배양액을 조심스럽게 제거한 후에 10μL 5㎎/mL MTT 용액이 각 홀에 첨가되었다. 37℃에서 4시간 동안 5% 이산화탄소 증습 반응(humidification reaction)을 한 후에 상청액을 제거하고, 각 홀에 100μL의 다이메틸 설폭시드(DMSO)가 첨가되었다. 플레이트는 실온에서 5분간 진동을 위해 소형 발진기 위에 놓여졌다. 유색 물질이 완전히 용해된 후에 자동화 효소 표지 기구로 측정되었으며, 파장 λ=570㎚, 참조 파장 λ=630㎚이 측정에 사용되고, 광학 밀도값(OD)이 측정되었다. After carefully removing the culture medium from the 96-hole dish with the suction tube, 10 μL 5 mg / mL MTT solution was added to each hole. The supernatant was removed after a 5% carbon dioxide humidification reaction at 37 ° C. for 4 hours and 100 μL of dimethyl sulfoxide (DMSO) was added to each hole. The plate was placed on a small oscillator for vibration for 5 minutes at room temperature. After the colored material was completely dissolved, it was measured by an automated enzyme labeling apparatus. The wavelength λ = 570 nm and the reference wavelength λ = 630 nm were used for the measurement, and the optical density value (OD) was measured.

NFNF -200 면역조직화학 염색 :-200 immunohistochemical staining:

배양 세포는 일반적 방법으로 고정되고 6일째 되는 날에 봉인되었으며, 토끼 항- NF-200 단일클론 항체(1:100)가 첨가되었고, 24시간 후에(4℃) 다이-항- IgG(1:300) 표지 비오틴이 첨가되었다. 60분 후에(37℃) 호오스 래디쉬 퍼옥시다아제로 표지된 스트렙타비딘 퍼옥시다아제(1:300)가 60분간 반응(37℃)에 첨가되었다. 0.01 몰/LPBS는 총 3회에 걸쳐 상기 단계 사이에서 5분동안 세정을 위해 사용되었다. DAB 용액은 5분간의 착색에 사용되고, 알코올은 경사 탈수(gradient dehydration)에, 크실렌은 투명성에, 중성 껌은 봉인에 사용되었다. 음성대조군에서, NF-200 항혈청을 대체하는 PBS가 면역조직화학적 반응에 사용되었다. 두개의 커버슬립이 각각 선택되고, 50 NF-200 양성 신경은 각 커버상에 무작위로 선택되었다. 신경돌기 줄기의 길이는 Quantimet-상분석장치로 측정되었다. Cultured cells were fixed in the usual manner and sealed on day 6, rabbit anti-NF-200 monoclonal antibody (1: 100) was added, and after 24 hours (4 ° C.) di-anti- IgG (1: 300). ) Labeled biotin was added. After 60 minutes (37 ° C.) streptavidin peroxidase (1: 300) labeled with horse radish peroxidase was added to the reaction (37 ° C.) for 60 minutes. 0.01 mol / LPBS was used for washing for 5 minutes between these steps in total three times. The DAB solution was used for 5 minutes of coloring, alcohol was used for gradient dehydration, xylene was used for transparency, and neutral gum was used for sealing. In the negative control group, PBS replacing NF-200 antiserum was used for immunohistochemical reaction. Two coverslips were selected respectively, and 50 NF-200 positive neurons were randomly selected on each cover. The neurite stem length was measured with a Quantimet-Phase Analyzer.

LDHLDH 검출: detection:

배양된 세포는 24-홀 플레이트에서 꺼내졌다. 상청액은 조심스럽게 흡입되고, 분류하고 번호를 부여하였다. 상청액 속의 락테이트 디하이드로게나아제(LDH)의 활성은 자동 생화학 분석기로 검출되었다.Cultured cells were taken out of 24-hole plates. Supernatants were carefully aspirated, sorted and numbered. The activity of lactate dehydrogenase (LDH) in the supernatant was detected by an automated biochemical analyzer.

터널 검출:Tunnel Detection:

배양된 세포는 일반적 방법으로 고정되고 0.3% 과산화수소/메탄올로 30분 동안 봉인되었다. 0.1% 트리톤-0.1% 시트르산염 용액이 첨가되고 얼음에 2분 동안 놓여졌다. 말단 데옥시뉴클레오타이드 전이효소(TdT) 및 플루오레신이 표지된 dUTP가 37℃에서 2시간 배양을 위해 첨가되었다. 항플루오레신 항체와 결합한 호오스 래디쉬 퍼옥시다아제가 37℃에서 2시간 배양을 위해 첨가되었다. NBT/BCIP가 착색에 사용되었다. 0.01몰/LPBS가 총 3번에 걸쳐 상기 단계 사이에서 5분간의 세척을 위해 사용되었다. 상기 용액은 탈수되고 투명해지 후에 봉인되었다. TdT 효소는 음성대조군에는 첨가되지 않았다. 상기 실험은 각 실험군에 대하여 3번씩 반복되었다. 터널로 염색된 양성 신경의 수는 5개의 무작위 시계에서 계수되어졌다.Cultured cells were fixed in the usual manner and sealed for 30 minutes with 0.3% hydrogen peroxide / methanol. 0.1% Triton-0.1% Citrate solution was added and placed on ice for 2 minutes. Terminal deoxynucleotide transferase (TdT) and fluorescein labeled dUTP were added for 2 hours incubation at 37 ° C. Horse radish peroxidase in combination with antifluorescein antibody was added for 2 hours incubation at 37 ° C. NBT / BCIP was used for coloring. 0.01 mol / LPBS was used for a 5 minute wash between these steps in total three times. The solution was sealed after it was dehydrated and became clear. TdT enzyme was not added to the negative control. The experiment was repeated three times for each experimental group. The number of tunneled positive nerves was counted in five random clocks.

통계적 분석:Statistical analysis:

데이터는 평균 및 표준 편차(

Figure 112006039987040-pat00001
± s)로 표현되었다. t-테스트는 각 평균을 비교하는데 사용되었다. 분산분석은 군간 차이의 유의성을 비교하는데 사용되었다. Data is average and standard deviation (
Figure 112006039987040-pat00001
± s). The t-test was used to compare each mean. Analysis of variance was used to compare the significance of differences between groups.

2. 결과2. Results

2.1 척수 2.1 spinal cord 운동신경의Neurological 모폴로지Morphology

뉴로이 접종 된 후 4시간 후에 세포는 벽에 흡착되기 시작하였다. 세포는 단일이고 둥글거나 타원형이다. 신경돌기는 24시간 후에 운동신경에서 발견되며 운동 신경 속 신경돌기의 길이는 1% JWL 군보다 유의적으로 길었다. 48~72시간 동안 배양된 후에 벽에서 자란 세포는 뚜렷하게 커지고, 세포내에서 과립상 물질이 점차 나타나기 시작하며, 주위는 깨끗해지고, 신경돌기는 양과 길이가 증가하였다. 96시간 후에, 신경돌기는 십자형으로 시계에 가득 찼다. 운동신경 세포는 5~6일 자란 후에 우수한 굴절율을 가진 가장 풍부한 상태였다. 핵은 중앙 혹은 세포의 일측에 위치하였다. 핵은 연한 색상으로 밝고, 신경세포체로부터 쉽게 구별되었다. 핵과 인은 뚜렷하였다. 5일째에 배양된 대조군의 운동신경 내의 신경돌기는 글루타민산의 첨가후 24시간에 수축하기 시작하였다. 1%JWL 주사액의 배양된 신경은 적당한 밀도로 잘 자랐다. 신경돌기는 크고 두꺼우며 서로 교차되었다. 글루타민산 대조군에서 운동신경의 아포토시스 및 아포토시스체들은 상기 1%JWL 주사액에 있는 동안 터널착색에 의해 발견되고, 아포토시스체가 유의적으로 감소하였다. Four hours after neuron inoculation, cells began to adsorb to the wall. Cells are single and round or oval. Neurites were found in motor nerves after 24 hours and the length of neurites in motor nerves was significantly longer than that of 1% JWL group. After 48-72 hours of incubation, the cells growing on the wall became distinctly larger, and granular material began to appear within the cells, the surroundings became clear, and the neurites increased in quantity and length. After 96 hours, the neurites filled the clock with a cross. Motor neurons were the most abundant with good refractive index after 5-6 days of growth. The nucleus is located in the center or on one side of the cell. The nucleus is bright in color and easily distinguished from neuronal bodies. The nucleus and phosphorus were distinct. Neurites in motor neurons of the control group cultured on day 5 began to contract 24 hours after the addition of glutamic acid. Cultured nerves of 1% JWL injections were well grown to moderate density. Neurites large, thick and intersected with each other. The apoptotic and apoptotic bodies of motor neurons in the glutamic acid control group were found by tunnel staining while in the 1% JWL injection solution, and the apoptotic bodies were significantly reduced.

2.2 정상 운동신경에의 본 발명에 따른 상기 주사용 의약 조성물의 영향: 표 1 참조 (

Figure 112006039987040-pat00002
± s) 2.2 Effect of the Injectable Pharmaceutical Compositions According to the Invention on Normal Motor Neurons : See Table 1 (
Figure 112006039987040-pat00002
± s)

0.5%, 1% 및 5%의 JWL 군 및 대조군 사이에 운동신경의 세포 생존력에는 통계학적으로 차이가 있었다(p〈0.05). 1%의 JWL 군의 세포 생존력은 리루텍 군보다 명백히 우수하였다(p〈0.05). 0.5% 및 1% JWL 군에서의 척수 운동신경의 신경돌기의 성장은 리루텍 군과 비교해 다른 대조군에서보다 유의적으로 우수하였다(p〈 0.05).There was a statistical difference in the cell viability of motor neurons between the 0.5%, 1% and 5% JWL groups and the control group (p <0.05). The cell viability of the JWL group of 1% was clearly better than the relutec group (p <0.05). The growth of neurites of spinal motor neurons in the 0.5% and 1% JWL groups was significantly better than that of the other control groups (p <0.05).

그룹group 농도density OD 값OD value 신경돌기(L, ㎛)Neurites (L, μm) 대조군Control group 0.230±0.1300.230 ± 0.130 159.71±48.95159.71 ± 48.95 리루텍 군Lilutec County 10umol/L10umol / L 0.266±0.1410.266 ± 0.141 192.08±89.07192.08 ± 89.07 0.5%JWL 군0.5% JWL County 4.5㎍/L4.5 µg / L 0.317±0.054 10.317 ± 0.054 1 315.96±32.32 1,2315.96 ± 32.32 1,2 1%JWL 군1% JWL County 9㎍/L9 µg / L 0.396±0.087 1,20.396 ± 0.087 1,2 373.46±80.24 1,2373.46 ± 80.24 1,2 5%JWL 군5% JWL County 45㎍/L45 µg / L 0.329±0.097 10.329 ± 0.097 1 151.46±69.97151.46 ± 69.97

주의 1. 대조군과 비교: P〈 0.05Caution 1. Comparison with Control: P <0.05

2. 리루텍 군과 비교: P〈 0.05     2. Comparison with relutec group: P <0.05

2.3 운동신경에 대한 흥분성 아미노산 흥분독성에 의해 유도된, LDH 누설에 대한 주사형태로 주입한 상기 의약 조성물의 영향: 표 2 참조 (

Figure 112006039987040-pat00003
± s) 2.3 Effect of the above pharmaceutical composition injected in the form of an injection on LDH leakage , induced by excitatory amino acid excitatory toxicity to motor neurons : see Table 2
Figure 112006039987040-pat00003
± s)

검출결과는 0.5% JWL 및 리루텍 군의 배양상청액에 있는 LDH는 유의적인 차이가 없이(p〉0.05), 대조군(p〈0.05)보다 적다는 것을 명확하게 보여주며, 이는 0.5%의 JWL 및 리루텍군이 글루타민 산의 손상으로 인한 운동신경의 LDH 누설을 감소시킨다는 것을 시사한다. The detection results clearly show that the LDH in the culture supernatant of 0.5% JWL and relutec group was less than the control group (p <0.05), with no significant difference (p> 0.05), indicating 0.5% JWL and relu It suggests that tecgun reduces LDH leakage of motor neurons due to glutamic acid damage.

그룹group 농축concentration LDH* LDH * 글루타민산 대조군Glutamic acid control 67.75±5.1267.75 ± 5.12 리루텍 +글루타민산 군Lilutec + Glutamic Acid 10umol/L10umol / L 58.50±4.20 158.50 ± 4.20 1 0.5%JWL+ 글루타민산 군0.5% JWL + Glutamic Acid Group 4.5㎍/L4.5 µg / L 59.00±4.97 159.00 ± 4.97 1 1%JWL +글루타민산 군1% JWL + Glutamic Acid Group 9㎍/L9 µg / L 61.50±3.1161.50 ± 3.11 5%JWL +글루타민산 군5% JWL + Glutamic Acid Group 45㎍/L45 µg / L 69.00±5.35 269.00 ± 5.35 2

주의 1. 대조군과 비교: P〈 0.05Caution 1. Comparison with Control: P <0.05

2. 리루텍 군과 비교: P〈 0.05     2. Comparison with relutec group: P <0.05

*젖산 탈수소효소 * LDH

2.4 흥분성 아미노산 흥분독성으로 야기된 운동신경의 아포토시스에 대한 주사형태의 상기 의약 조성물의 영향: 표 3 참조 (

Figure 112006039987040-pat00004
± s) 2.4 Excitatory amino acids of motor neurons caused by excitatory toxicity Influence of the above pharmaceutical composition in injection form on apoptosis : see Table 3
Figure 112006039987040-pat00004
± s)

1% JWL 군과 리루텍군의 터널 양성 세포의 수는 대조군(p〈0.05)보다 적었다. 0.5% JWL 및 5% JWL의 터널 양성 세포의 수는 대조군(p〉0.05)과 비교해서 유의적인 차이 없이 감소하지만 리루텍 군(p〈0.05)과 비교해서는 유의적인 차이가 있다. The number of tunnel positive cells in the 1% JWL group and the relutec group was lower than the control group (p <0.05). The number of tunnel positive cells of 0.5% JWL and 5% JWL decreased without significant difference compared to the control (p> 0.05), but there was a significant difference compared to the relutec group (p <0.05).

그룹group 농축concentration 터널 양성세포의 수Number of tunnel-positive cells 글루타민산 대조군Glutamic acid control 19.8±5.6319.8 ± 5.63 리루텍 +글루타민산 군Lilutec + Glutamic Acid 10umol/L10umol / L 11.2±2.84 111.2 ± 2.84 1 0.5%JWL + 글루타민산 군0.5% JWL + Glutamic Acid Group 4.5㎍/L4.5 µg / L 16.2±2.08 216.2 ± 2.08 2 1%JWL +글루타민산 군1% JWL + Glutamic Acid Group 9㎍/L9 µg / L 9.8 ±4.34 19.8 ± 4.34 1 5%JWL +글루타민산 군5% JWL + Glutamic Acid Group 45㎍/L45 µg / L 16.4±3.65 216.4 ± 3.65 2

주의 1. 대조군과 비교: P〈 0.05Caution 1. Comparison with Control: P <0.05

2. 리루텍 군과 비교: P〈 0.05     2. Comparison with relutec group: P <0.05

상기 실험은 본 발명에 따른 상기 의약 조성물이 일반 운동신경 및 흥분성 아미노산 흥분독성으로 손상된 운동신경 모두에 보호 효과를 가지고 있다는 것을 증명한다. The experiment demonstrates that the pharmaceutical composition according to the present invention has a protective effect on both the motor neuron and the motor neuron damaged by excitatory amino acid excitatory toxicity.

본 발명에 따른 의약 조성물은 근위축성 측부 경화 증세가 있는 환자의 혈청으로부터 유발되는 말초 신경의 재생 능력 억제를 중화하고, 손상된 신경 말단의 재생 및 회복의 촉진시키며, 실험용 동물의 수영 인내력을 향상시키고, 근력에 큰 향상을 주며, 근육마비 상태인 쥐에서 크레아틴 인산염 키나아제 활성의 증가를 크게 억제하고 골격근 기능을 보호하는 효과가 있다. The pharmaceutical composition according to the present invention neutralizes the inhibition of regenerative ability of peripheral nerves induced from serum of patients with amyotrophic lateral sclerosis, promotes regeneration and recovery of damaged nerve endings, improves swimming endurance of laboratory animals, It greatly improves muscle strength, and greatly inhibits the increase of creatine phosphate kinase activity and protects skeletal muscle function in muscle paralyzed rats.

Claims (11)

1~10 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 1~10 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물로 이루어진 근육퇴화 및 근무력증 치료를 위한 의약 조성물.Pharmaceutical composition for the treatment of muscle degeneration and myasthenia consisting of ginseng extract extracted from 1 to 10 parts by weight of ginseng and trigeminal vinegar extract extracted from 1 to 10 parts by weight of trigeminal vinegar. 제 1항에 있어서, 2~10 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 2~8 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, comprising a ginseng extract extracted from 2 to 10 parts by weight of ginseng and a trigeminal vinegar extract extracted from 2 to 8 parts by weight of trigeminal vinegar. 제 2항에 있어서, 3. The method of claim 2, 5 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 5 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물; 또는Ginseng extract extracted from 5 parts by weight of ginseng and trigeminal vinegar extract extracted from 5 parts by weight of trifolium vinegar; or 5 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 2 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물; 또는Ginseng extract extracted from 5 parts by weight of ginseng and trigeminal vinegar extract extracted from 2 parts by weight of trifolium vinegar; or 9 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 7 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물; 또는Ginseng extract extracted from 9 parts by weight of ginseng and trigeminal leaf vinegar extracted from 7 parts by weight of trifolium vinegar; or 3 중량부의 인삼으로부터 추출된 인삼 추출물 및 1 중량부의 삼지구엽초로부터 추출된 삼지구엽초 추출물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.A pharmaceutical composition comprising a ginseng extract extracted from 3 parts by weight of ginseng and a trigeminal leaf vinegar extracted from 1 part by weight of trifolium vinegar. 제 1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약 조성물은 일반적인 의약물 보조제를 더욱 포함하고 주사, 캡슐, 알약, 정제 또는 경구액의 투약 형태로 제형화되어지는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the pharmaceutical composition further comprises a general pharmaceutical adjuvant and is formulated in a dosage form of injection, capsule, pill, tablet or oral solution. 제 4항에 있어서, 상기 의약 조성물은 주사용 투약형태로 제형화되는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the pharmaceutical composition is formulated in an injectable dosage form. (1) 주어진 처방에 따라 전통 중국 허브를 첨가하는 단계:(1) adding traditional Chinese herbs according to a given prescription: (2) 알코올 강도가 60~90%인 알코올로 1~3회 인삼을 추출, 얻어진 추출물을 결합하고, 상기 결합된 추출물을 여과 및 농축하여 농축액을 형성하고, 정제수를 농축액에 첨가하여 희석하고 균일하게 될 때까지 혼합하고, 상기 혼합물을 냉각 및 여과하고, 희석된 여과물을 거대공극의 흡착성 수지 컬럼에 도입하고, 수용성 용리제와 알코올 강도가 70~90%인 알코올로 차례대로 컬럼을 용리하고, 용리액을 수거하고 불순물을 제거하며, 용리액을 농축시키고, 건조시켜 인삼추출액을 얻는 단계;(2) Extract the ginseng 1 to 3 times with alcohol having an alcohol strength of 60 to 90%, combine the obtained extract, filter and concentrate the combined extract to form a concentrate, add purified water to the concentrate, dilute and uniform Until the mixture is cooled, the mixture is cooled and filtered, the dilute filtrate is introduced into a macroporous adsorbent resin column, and the column is eluted sequentially with a water soluble eluent and an alcohol having an alcohol strength of 70-90%. Collecting the eluent and removing impurities, concentrating the eluent and drying to obtain a ginseng extract; (3) 물:삼지구엽초의 무게비가 매번 10~30 : 1인 물로 2~5회 삼지구엽초를 달이고 추출하고, 얻어진 추출물을 결합하고, 상기 결합된 추출물을 여과 및 농축하여 농축물을 형성하고, 용액의 알코올 농도가 60~80%가 될 때까지 알코올을 농축액에 첨가하고, 물을 상기 농축액에 첨가하여 균일하게 될 때 까지 혼합하고, 상기 혼합물을 냉각 및 여과하고, 얻어진 여과액을 거대공극의 흡착성 수지 컬럼에 도입하고, 수용성 용리제와 알코올 강도가 40~60%인 알코올로 차례대로 컬럼을 용리하고, 용리액을 수거하고 불순물을 제거하며, 용리액을 농축하고 건조시켜 삼지구엽초 추출물을 얻는 단계;(3) weighing and extracting trigeminal vinegar 2-5 times with water having a weight ratio of water: trilobite vinegar every 10-30: 1, combining the obtained extracts, filtering and concentrating the combined extract to form a concentrate, Alcohol is added to the concentrate until the alcohol concentration of the solution is 60-80%, water is added to the concentrate and mixed until uniform, the mixture is cooled and filtered, and the resulting filtrate is subjected to Introducing into an adsorbent resin column, eluting the column sequentially with a water soluble eluent and an alcohol having an alcohol strength of 40-60%, collecting the eluent, removing impurities, and concentrating and drying the eluent to obtain trifoliar leaf extract; (4) 의약 조성물을 얻기 위해 전통적인 의약 보조제와 단계(2) 및 단계(3)에서 얻어진 추출물을 결합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약 조성물의 제조방법.(4) A method of producing a pharmaceutical composition comprising combining the conventional pharmaceutical supplement with the extract obtained in steps (2) and (3) to obtain a pharmaceutical composition. 제 6항에 있어서, 상기 단계(2)에서 상기 수지 컬럼은 pH 8~9인 암모니아수와 알코올 강도가 20%인 알코올로 각각 용리되고; 단계(3)에서 상기 수지 컬럼은 정제수와 알코올 강도가 20%인 알코올로 각각 용리되는 것을 특징으로 하는 제조방법.7. The method of claim 6, wherein in step (2), the resin column is eluted with ammonia water having a pH of 8-9 and an alcohol having an alcohol strength of 20%, respectively; Wherein the resin column is eluted with purified water and alcohol having an alcohol strength of 20%, respectively. 제 7항에 있어서, 상기 단계(2)에서 불순물의 제거단계는,According to claim 7, wherein the step of removing impurities in the step (2), 정제수를 얻어진 용리액에 첨가하여 40~60%의 알코올 강도를 가지도록 하는 단계; 얻어진 용액을 중성 알루미나 컬럼에 통과시켜 유출물을 수거하는 단계; 활성 탄소를 유출물에 첨가한 후에 20분 동안 환류하는 단계; 유출물을 뜨겁게 유지시켜 판형 여과기로 흡입 여과하는 단계; 얻어진 여과물을 수거하고 농축액을 형성하기 위해 농축하는 단계; 농축액을 적어도 24시간 냉각하고, 여과하는 단계;Adding purified water to the obtained eluent to have an alcohol strength of 40 to 60%; Passing the resulting solution through a neutral alumina column to collect the effluent; Refluxing for 20 minutes after adding activated carbon to the effluent; Keeping the effluent hot and suction filtration with a plate filter; Collecting the obtained filtrate and concentrating to form a concentrate; Cooling the concentrate for at least 24 hours and filtering; 단계(3)에서 불순물을 제거하는 단계,Removing impurities in step (3), 적당량의 규조토를 용리액에 첨가하고 균일하게 될 때까지 혼합하는 단계; 무수 알코올을 사용하여 2~5회 추출하는 단계; 추출물을 결합하여 혼합하고, 농축하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.Adding an appropriate amount of diatomaceous earth to the eluent and mixing until uniform; Extracting two to five times using anhydrous alcohol; Combining, extracting, and concentrating the extract. 제 6항에 있어서, 상기 단계(3)에서 물로 달이는 동안에 물 중량이 허브 중량의 15~25배이고, 첫 번째 추출시간은 30분~2시간이며 다음 추출은 30분~1시간인 것을 특징으로 하는 제조방법.The method according to claim 6, characterized in that the water weight is 15 to 25 times the weight of the herbs during the decoction with water in step (3), the first extraction time is 30 minutes to 2 hours and the next extraction is 30 minutes to 1 hour. Manufacturing method. 제 9항에 있어서, 상기 단계(2)에서 컬럼용 거대공극의 흡착성 수지가 AB-8 형태의 수지, D101 형태의 수지 및 DM-130 형태의 수지로부터 선택되고, 상기 단계(3)에서 컬럼용 거대공극의 흡착성 수지가 AB-8 형태의 수지, NKA 형태의 수지 및 S-8 형태의 수지로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.10. The method according to claim 9, wherein the adsorbent resin of the macropores for the column in step (2) is selected from a resin of type AB-8, a resin of type D101 and a resin of type DM-130, and in the step (3) A process for adsorbing a macroporous adsorbent resin is selected from AB-8 type resin, NKA type resin and S-8 type resin. 제 10항에 있어서, 상기 단계(1)에 사용된 전통 중국 허브는 먼저 세척하고 분쇄하여 소정 처방에 따라 칭량하는 단계;The method according to claim 10, wherein the traditional Chinese herbs used in step (1) are first washed, ground and weighed according to a prescribed prescription; 단계 2에서, 인삼근을 알코올 강도가 60~90%인 알코올로 3회 추출하고, 첫번째에서 인삼은 1~2시간 동안 인삼의 8~12배 중량 알코올로 추출하는 단계; 두번째로 1~2시간 동안 인삼의 6~10배 중량의 알코올로 추출하는 단계; 세번째로 30분~1시간 동안 인삼의 6~10배 중량의 알코올로 인삼을 추출하는 단계; 얻어진 추출물은 뜨거울 때 결합 및 여과되고, 감압하에서 농축시켜 농축액을 얻는 단계; 정제수를 농축액에 가하여 균일하게 될 때까지 혼합하는 단계; 혼합물은 24~36시간 동안 냉각되고 실온이 될 때까지 방치한 후, 판형 여과기로 여과하는 단계; 여과물을 정제수로 희석하는 단계; 상기 거대공극의 흡착수지 칼럼은 AB-8형태이고, 상기 수지컬럼은 80%강도의 알코올로 용리하는 단계; In step 2, the ginseng root is extracted three times with alcohol having an alcohol strength of 60-90%, and ginseng is extracted with 8-12 times the weight alcohol of ginseng for 1 to 2 hours at the first time; Secondly, extracting with alcohol of 6 to 10 times the weight of ginseng for 1-2 hours; Thirdly extracting ginseng with alcohol of 6 to 10 times the weight of ginseng for 30 minutes to 1 hour; The obtained extract is combined and filtered when hot, and concentrated under reduced pressure to obtain a concentrate; Adding purified water to the concentrate and mixing until uniform; The mixture is cooled for 24 to 36 hours and left to room temperature, followed by filtration with a plate filter; Diluting the filtrate with purified water; The macroporous adsorbent resin column is of AB-8 type, and the resin column is eluted with alcohol having 80% strength; 단계 3에서, 삼지구엽초를 4회 추출하는 단계; 첫번째로 삼지구엽초는 30 분~2시간 동안 추출되고 나머지 3번은 각각 30분~1시간 동안 추출되는 단계; 얻어진 추출물을 뜨거울때 결합, 여과하고 감압농축하여 농축물을 얻는 단계; 농축액에 알코올 농도가 70%가 될 때까지 알코올을 첨가하는 단계; 상기 거대공극의 흡착 수지컬럼은 AB-8 형태이고, 수지 컬럼은 강도가 50%인 알코올로 용리하는 단계; In step 3, extracting trilobite vinegar four times; First trigeminal vinegar is extracted for 30 minutes to 2 hours and the remaining three times are extracted for 30 minutes to 1 hour, respectively; Combining the obtained extracts when hot, filtration and concentrating under reduced pressure to obtain a concentrate; Adding alcohol to the concentrate until the alcohol concentration is 70%; Adsorbing resin column of the macropores is AB-8 form, the resin column eluting with alcohol having a strength of 50%; 단계 4에서, 1,2-프로필렌 글리콜, 소디움 다이하이드로겐 포스페이트 및 다이소디움 하이드로겐 포스페이트를 단계(2) 및 단계(3)으로부터 얻어지는 추출물의 혼합물에 첨가하는 단계; 주사용 물을 수혼합 용액의 부피가 10~20㎖가 될 때까지 용액에 첨가하는 단계; 얻어진 용액은 열처리 후에 냉각하고, 미세공극막 및 한외여과막으로 차례로 여과하는 단계; 여과물을 충전, 포장 및 살균하여 주사용 의약 조성물을 얻는 단계를 포함함을 특징으로 하는 제조방법. In step 4, 1,2-propylene glycol, sodium dihydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate are added to the mixture of extracts obtained from steps (2) and (3); Adding water for injection to the solution until the volume of the water-mixed solution becomes 10-20 ml; The obtained solution is cooled after the heat treatment, and subsequently filtered through a microporous membrane and an ultrafiltration membrane; Filling, packaging and sterilizing the filtrate to obtain an injectable pharmaceutical composition.
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