KR101164923B1 - Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof - Google Patents

Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof Download PDF

Info

Publication number
KR101164923B1
KR101164923B1 KR1020090120295A KR20090120295A KR101164923B1 KR 101164923 B1 KR101164923 B1 KR 101164923B1 KR 1020090120295 A KR1020090120295 A KR 1020090120295A KR 20090120295 A KR20090120295 A KR 20090120295A KR 101164923 B1 KR101164923 B1 KR 101164923B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
delta
gene
leu
plant
Prior art date
Application number
KR1020090120295A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20110063923A (en
Inventor
박종석
김종범
노경희
김정봉
김순희
김소연
장요순
Original Assignee
대한민국
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대한민국 filed Critical 대한민국
Priority to KR1020090120295A priority Critical patent/KR101164923B1/en
Publication of KR20110063923A publication Critical patent/KR20110063923A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101164923B1 publication Critical patent/KR101164923B1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8257—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits for the production of primary gene products, e.g. pharmaceutical products, interferon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
    • C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
    • C12Y114/19003—Linoleoyl-CoA desaturase (1.14.19.3)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소(Delta-6 desaturase) 단백질, 상기 단백질을 코딩하는 유전자, 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 상기 재조합 벡터로 숙주 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 숙주 세포에서 감마-리놀렌산(γ-linolenic acid) 또는 스테아리돈산(stearidonic acid)을 생산하는 방법, 상기 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체 및 이의 종자 및 상기 유전자를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하기 위한 조성물에 관한 것이다. The present invention is a dome ( Sparus) delta-6 desaturase protein derived from aurata ), a gene encoding the protein, a recombinant vector comprising the gene, a host cell transformed with the recombinant vector, and a host cell transformed with the recombinant vector A method for producing gamma-linolenic acid or stearridonic acid in a host cell comprising the step of converting, the method comprising transforming a plant cell with the recombinant vector gamma-linolenic acid or stearic acid. A method for producing a plant that produces arydonic acid, a plant for producing gamma-linolenic acid or stearic acid produced by the method, and a seed thereof and a composition for producing gamma-linolenic acid or stearic acid comprising the gene will be.

delta-6 불포화효소, pYES2, Sparus aurata, Saccharomyces cervisiae delta-6 desaturase, pYES2, Sparus aurata, Saccharomyces cervisiae

Description

돔 유래의 델타-6 불포화효소 유전자 및 이의 용도{Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof}Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses approximately

본 발명은 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로, delta-6 불포화효소 유전자를 분리하고 기능분석을 통하여 혈중 콜레스테롤 수치를 낮추며 혈행개선에 효과가 있는 감마-리놀렌산(γ-linolenic acid)과 스테아리돈산(stearidonic acid)을 생산하는 유지작물 육종소재 개발에 이용하고자 한다. The present invention relates to a delta-6 desaturase gene derived from Dome ( Sparus aurata ) and its use. Gamma-linolenic acid is effective in separating blood delta-6 desaturase gene and lowering blood cholesterol levels through functional analysis. (γ-linolenic acid) and stearridonic acid (stearidonic acid) to produce a breeding material for oil crops.

불포화지방산(Unsaturated fatty acid)은 한 분자 속에 하나 이상의 이중결합을 가지는 사슬 모양 화합물로 동식물 속에 널리 분포하며, 일반적으로 탄소수 12 내지 20개 정도의 짝수 개로 구성되어 있다. 지방산 분자가 단 하나의 이중결합을 갖고 있으면 단일불포화지방산이라고 하며, 두 개 이상의 이중결합을 갖고 있으며 다가불포화지방산이라고 부른다. 불포화지방산은 이중결합 바로 다음의 수소원자가 결합된 형태에 따라 시스 형(cis configuration)과 트랜스 형(trans configuration)으로 나뉜다. 시스 형은 인접한 수소원자가 이중결합과 같은 방향에 있는 것을 말하며, 트랜스 형은 다음 2개의 수소원자가 이중결합과 반대의 방향으 로 결합한 것을 말한다. 지방산 사슬에서 이중결합이 형성되면 수소원자가 제거되어야 하는데, 이 때문에 포화지방산에서 '포화'라는 용어는 수소원자가 포화되었다는 것을 의미한다. 세포내 대사에서 수소-탄소 결합은 에너지 생산을 위해 결합이 깨지거나 산화된다. 따라서 불포화지방산은 같은 크기의 포화지방산에 비해 에너지를 더 적게 함유한다. 또한, 불포화지방산은 더 낮은 녹는점을 갖고 있어서 세포막의 유동성을 증가시키는 작용도 하는 것으로 알려졌다. Unsaturated fatty acid (Unsaturated fatty acid) is a chain-like compound having one or more double bonds in one molecule, widely distributed in the flora and fauna, and is usually composed of an even number of about 12 to 20 carbon atoms. When a fatty acid molecule has only one double bond, it is called monounsaturated fatty acid, and it has two or more double bonds and is called polyunsaturated fatty acid. Unsaturated fatty acids are divided into cis-form (cis configuration) and trans (trans configuration) according to the double bond immediately after the hydrogen atom bonded form. The cis type means that adjacent hydrogen atoms are in the same direction as the double bond, and the trans type means that the next two hydrogen atoms are bonded in the opposite direction to the double bond. When a double bond is formed in the fatty acid chain, the hydrogen atom must be removed, which means that the term 'saturated' in saturated fatty acid means that the hydrogen atom is saturated. In intracellular metabolism, hydrogen-carbon bonds are broken or oxidized for energy production. Therefore, unsaturated fatty acids contain less energy than saturated fatty acids of the same size. In addition, unsaturated fatty acids are known to have a lower melting point, thereby increasing the fluidity of the cell membrane.

포화지방산의 섭취는 고콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia), 동맥경화(atherosclerosis) 등과 같은 심혈관계 질환(cardiovascular disease)의 위험성과 관련이 깊은 반면, 불포화지방산의 섭취는 혈중 콜레스테롤의 감소 및 동맥경화의 발병 위험 감소와 관련이 있는 것으로 잘 알려져 있다. 불포화지방산의 예로는 팔미톨레산(palmitoleic acid), 올레산(oleic acid), 미리스톨레산(myristoleic acid), 리놀레산(linoleic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에이코사펜타엔산(eicosapentaenoic acid, EPA), 도코사헥사엔산(docosahexaenoic acid, DHA) 등이 있으며, 이러한 불포화지방산을 함유하는 식품으로는 아보카도, 견과류, 카놀라유나 올리브유와 같은 식물성 기름 등이 있다. 비록 불포화지방산이 포화지방산보다는 건강에 유익하지만, 미 식품의약국(FDA)에서는 불포화지방산의 섭취량이 하루 칼로리 섭취량의 30%를 넘지 않도록 권고한다. Consumption of saturated fatty acids is associated with the risk of cardiovascular diseases such as hypercholesterolemia and atherosclerosis, while ingesting unsaturated fatty acids reduces blood cholesterol and reduces the risk of developing arteriosclerosis. It is well known to be associated with. Examples of unsaturated fatty acids include palmitoleic acid, oleic acid, myristoleic acid, linoleic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, and EPA. And docosahexaenoic acid (DHA), and foods containing such unsaturated fatty acids include avocados, nuts, vegetable oils such as canola oil and olive oil. Although unsaturated fatty acids are healthier than saturated fatty acids, the Food and Drug Administration (FDA) recommends that intakes of unsaturated fatty acids not exceed 30% of calorie intake per day.

불포화지방산 중 리놀레산과 알파-리놀렌산(alpha-linolenic acid)은 인간의 체내에서 합성할 수 없으므로 반드시 음식으로부터 섭취해야 하는 필수지방산이며, 이들은 식물성 기름에 널리 존재하는 것으로 알려져 있다. 필수지방산은 면역반응, 염증반응 및 혈압조절에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있는데, 리놀레산은 체내에서 delta-6 불포화효소에 의해 감마-리놀렌산으로 전환된 후, 아라키돈산으로 전환된다. 이 아라키돈산은 체내 중요한 염증인자인 프로스타글란딘(prostaglandin)의 전구체이다. 스테아리돈산 또한 delta-6 불포화효소에 의해 알파-리놀렌산으로부터 생합성된다. 이러한 delta-6 불포화효소는 사람에 따라 제 기능을 못하거나 결핍되어 있을 수 있으므로, 리놀레산 및 알파-리놀렌산 보다 더 불포화된 감마-리놀렌산 및 스테아리돈산의 직접적인 섭취는 건강유지에 있어서 더 큰 이점이 있을 수 있다. Among the unsaturated fatty acids, linoleic acid and alpha-linolenic acid are essential fatty acids that must be obtained from food because they cannot be synthesized in the human body, and they are widely known in vegetable oils. Essential fatty acids are known to play an important role in immune response, inflammatory response and blood pressure control. Linoleic acid is converted to gamma-linolenic acid by delta-6 desaturase in the body and then to arachidonic acid. This arachidonic acid is a precursor to prostaglandin, an important inflammatory factor in the body. Stearic acid is also biosynthesized from alpha-linolenic acid by delta-6 desaturase. Since these delta-6 desaturases may be impaired or deficient in humans, direct intake of gamma-linolenic acid and stearic acid, which is more unsaturated than linoleic acid and alpha-linolenic acid, may have a greater benefit in maintaining health. Can be.

본 발명은 돔(Sparus aurata)로부터 분리된 delta-6 불포화효소 유전자의 기능을 분석 및 확인하여 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 고부가 유지작물 육종소재 개발에 이용하고자 한다. 돔으로부터 분리된 delta-6 불포화효소 유전자는 형질전환 작물 개발시 기존의 미생물 유래의 것보다 잠재적인 위험도가 낮아 더 안전할 수 있다. The present invention intends to use the development of a high value-added oilseed crop breeding material that produces gamma-linolenic acid or stearic acid by analyzing and confirming the function of the delta-6 desaturase gene isolated from the dome ( Sparus aurata ). The delta-6 desaturase gene isolated from the dome may be safer with lower potential risks than that of conventional microorganisms in transgenic crop development.

한국특허등록 제0316068호에는 시아노박테리아(Cyanobacteria) 유래 delta-6 불포화효소 유전자를 이용하여 감마-리놀렌산 함량이 증가된 식물체의 제조방법이 개시되어 있으며, 한국특허등록 제0606612호에는 녹차 어린잎 유래 delta-6 불포화효소 유전자를 이용한 형질전환체의 제조방법이 개시되어 있다. Korean Patent Registration No. 0316068 discloses a method for producing a plant having an increased gamma-linolenic acid content by using a delta-6 unsaturated enzyme gene derived from cyanobacteria, and Korean Patent Registration No. 0606612 discloses green tea young leaves. A method for producing a transformant using the delta-6 unsaturated enzyme gene is disclosed.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 안출된 것으로서, 돔(Sparus aurata)의 cDNA 라이브러리로부터 delta-6 불포화효소 유전자를 분리하고, 이를 효모에서 발현시킨 후, 효모에서 발현된 재조합 단백질의 효소 활성을 검정함으로써 본 발명을 완성하였다. The present invention has been made in accordance with the above requirements, and isolated delta-6 desaturase gene from the cDNA library of the dome ( Sparus aurata ), expressed in yeast, and then assayed the enzymatic activity of the recombinant protein expressed in yeast By this, the present invention was completed.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 단백질을 제공한다. In order to solve the above problems, the present invention provides a delta-6 desaturase protein derived from the dome ( Sparus aurata ).

또한, 본 발명은 상기 단백질을 코딩하는 유전자를 제공한다. The present invention also provides a gene encoding the protein.

또한, 본 발명은 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. The present invention also provides a recombinant vector comprising the gene.

또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다. The present invention also provides a host cell transformed with the recombinant vector.

또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 숙주 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 숙주 세포에서 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for producing gamma-linolenic acid or stearic acid in a host cell comprising the step of transforming the host cell with the recombinant vector.

또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물세의 제조 방법을 제공한다. The present invention also provides a method for producing plant tax, which produces gamma-linolenic acid or stearic acid, comprising transforming plant cells with the recombinant vector.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체 및 이의 종자를 제공한다. The present invention also provides plants and their seeds which produce gamma-linolenic acid or stearic acid produced by the above method.

또한, 본 발명은 상기 유전자를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하기 위한 조성물을 제공한다. The present invention also provides a composition for producing gamma-linolenic acid or stearic acid containing the gene.

본 발명은 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자인 SaD6DES를 효모(Saccharomyces cerevisiae)에 형질전환하여 필수지방산인 리놀레산과 알파-리놀렌산이 감마-리놀렌산 및 스테아리돈산으로 각각 전환됨을 가스크로마토그래피 분석을 통하여 증명한 첫 번째 실험이다. 감마-리놀렌산 및 스테아리돈산은 혈중콜레스테롤 수치를 낮춰주며 혈행 개선 등의 생리활성 기능이 알려져 있어서 건강보조식품으로 현재 많이 시판되고 있다. 돔에서 분리된 delta-6 불포화효소 유전자의 기능을 확인하고 유채 등 유지작물에 적용할 경우 고부가의 기능성 감마-리놀렌산 및 스테아리돈산을 생산하는 유지작물들이 개발되어 농가소득 제고에 기여하게 될 것이다. According to the present invention, SaD6DES , a delta-6 desaturase gene derived from Dome ( Sparus aurata ), is transformed into yeast ( Saccharomyces cerevisiae ). This is the first experiment proved through the graphic analysis. Gamma-linolenic acid and stearic acid are known to lower blood cholesterol levels and are known for their physiological activity, such as improving blood circulation, and are currently commercially available as health supplements. When the function of the delta-6 desaturase gene isolated from the dome is confirmed and applied to oil crops such as rapeseed, oil crops producing high value-added functional gamma-linolenic acid and stearic acid will be developed to contribute to raising farm income.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진, 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 단백질 SaD6DES를 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a delta-6 desaturase protein SaD6DES derived from Dome ( Sparus aurata ) consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2.

해양생물인 돔(Sparus aurata)으로 부터 분리된 delta-6 불포화효소 유전자인 SaD6DES를 진핵생물의 모델 시스템인 효모에서 발현시켜 가스 크로마토그래피로 분석하여 그 기능을 밝힌 것은 이번이 처음이다. This is the first time that SaD6DES , a delta-6 desaturase gene isolated from marine organisms, Sparus aurata , is expressed in yeast, a model system of eukaryotes, and analyzed by gas chromatography.

본 발명에 따른 SaD6DES 단백질의 범위는 돔으로부터 분리된 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다. "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 2로 표시되는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다. "실질적으로 동질의 생리활성"이란 식물체 내에서 리놀레산 및 알파-리놀렌산을 감마-리놀렌산 및 스테아리돈산으로 각각 전환시키는 활성을 의미한다.The range of SaD6DES proteins according to the present invention includes proteins having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 isolated from the dome and functional equivalents of the proteins. Is at least 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, still more preferably 90% or more, more preferably 90% or more, Quot; refers to a protein having a homology of at least 95% with a physiological activity substantially equivalent to that of the protein represented by SEQ ID NO: 2. By "substantially homogeneous physiological activity" is meant the activity of converting linoleic acid and alpha-linolenic acid to gamma-linolenic acid and stearic acid, respectively, in a plant.

또한, 본 발명은 상기 SaD6DES 단백질을 코딩하는 유전자를 제공한다. 본 발명의 유전자는 SaD6DES 단백질을 코딩하는 게놈 DNA와 cDNA를 모두 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 유전자는 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 포함할 수 있다.The present invention also provides a gene encoding the SaD6DES protein. Genes of the invention include both genomic DNA and cDNA encoding the SaD6DES protein. Preferably, the gene of the present invention may include the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1.

또한, 상기 염기 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 상기 유전자는 서열번호 1의 염기 서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.Variants of the above base sequences are also included within the scope of the present invention. Specifically, the gene has a nucleotide sequence having a sequence homology of at least 70%, more preferably at least 80%, even more preferably at least 90%, most preferably at least 95% with the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 . The "% sequence homology" for a polynucleotide is identified by comparing two optimally arranged sequences with a comparison region, wherein part of the polynucleotide sequence in the comparison region is the reference sequence (addition or deletion) for the optimal alignment of the two sequences. It may include the addition or deletion (ie, gap) compared to).

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 SaD6DES 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 상기 재조합 벡터는 바람직하게는 효모 재조합 벡터일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 도 4에 기재된 pYES2-SaD6DES 벡터일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The present invention also provides a recombinant vector comprising the SaD6DES gene according to the present invention. The recombinant vector may be preferably a yeast recombinant vector, and more preferably may be a pYES2- SaD6DES vector described in FIG. 4, but is not limited thereto.

용어 "재조합"은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하거나 또는 펩티드, 이종의 펩티드 또는 이종의 핵산에 의해 암호된 단백질을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다. 재조합 세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는 유전자 또는 유전자 절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한 재조합 세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는 유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기 유전자는 변형된 것으로서 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.The term "recombinant" refers to a cell in which a cell replicates a heterologous nucleic acid, expresses the nucleic acid, or expresses a protein encoded by a peptide, heterologous peptide or heterologous nucleic acid. The recombinant cell can express a gene or a gene fragment that is not found in the natural form of the cell in one of the sense or antisense form. In addition, the recombinant cell can express a gene found in a cell in its natural state, but the gene has been modified and reintroduced intracellularly by an artificial means.

용어 "벡터"는 세포 내로 전달하는 DNA 단편(들), 핵산 분자를 지칭할 때 사용된다. 벡터는 DNA를 복제시키고, 숙주세포에서 독립적으로 재생산될 수 있다. 용어 "전달체"는 흔히 "벡터"와 호환하여 사용된다. 용어 "발현 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다. 진핵세포에서 이용 가능한 프로모터, 인핸서, 종결신호 및 폴리아데닐레이션 신호는 공지되어 있다.The term "vector" is used to refer to a DNA fragment (s), nucleic acid molecule, which is transferred into a cell. The vector replicates the DNA and can be independently regenerated in the host cell. The term "carrier" is often used interchangeably with "vector". The term “expression vector” refers to a recombinant DNA molecule comprising a coding sequence of interest and a suitable nucleic acid sequence necessary to express a coding sequence operably linked in a particular host organism. Promoters, enhancers, termination signals and polyadenylation signals available in eukaryotic cells are known.

본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예컨대, pLλ프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, T7 프로모터, tac 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 리보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주 세포로서 대장균(E. coli)이 이용되는 경우, E. coli 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위, 그리고 파아지 λ의 좌향 프로모터 (pLλ프로모터)가 조절 부위로서 이용될 수 있다.Vectors of the invention can typically be constructed as vectors for cloning or expression. In addition, the vector of the present invention can be constructed using prokaryotic or eukaryotic cells as hosts. For example, when the vector of the present invention is an expression vector and the prokaryotic cell is a host, a strong promoter (for example, a pLλ promoter, a trp promoter, a lac promoter, a T7 promoter, a tac promoter, etc.) capable of promoting transcription, It is common to include ribosomal binding sites and transcription / detox termination sequences for initiation of translation. When E. coli is used as a host cell, a promoter and an operator site of the E. coli tryptophan biosynthetic pathway, and a phage λ left promoter (pLλ promoter) can be used as regulatory sites.

한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예: pSC101, ColE1, pBR322, pUC8/9, pHC79, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지 (예: λgt4?λB, λ-Charon, λΔz1 및 M13 등) 또는 바이러스 (예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.On the other hand, vectors that can be used in the present invention include plasmids (eg, pSC101, ColE1, pBR322, pUC8 / 9, pHC79, pGEX series, pET series and pUC19, etc.), phages (eg, λgt4? ΛB) which are often used in the art. , λ-Charon, λΔz1 and M13, etc.) or viruses (eg SV40, etc.).

한편, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 (예: 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.On the other hand, when the vector of the present invention is an expression vector and the eukaryotic cell is a host, a promoter derived from the mammalian cell genome (for example, metallothionine promoter) or a promoter derived from a mammalian virus (for example, adeno) Late viral promoter, vaccinia virus 7.5K promoter, SV40 promoter, cytomegalovirus promoter and tk promoter of HSV) can be used and generally have a polyadenylation sequence as a transcription termination sequence.

본 발명의 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.The vector of the present invention may include an antibiotic resistance gene commonly used in the art as an optional marker, for example, ampicillin, gentamicin, carbenicillin, chloramphenicol, streptomycin, kanamycin, geneticin, neomycin And resistance genes for tetracycline.

본 발명은 또한, 본 발명의 재조합 벡터로 형질전환된 숙주세포를 제공한다. 본 발명의 벡터를 원핵세포에 안정되면서 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주세포는 당업계에 공지된 어떠한 숙주세포도 이용할 수 있으며, 예컨대, E. coli JM109, E. coli BL21, E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있다. The present invention also provides a host cell transformed with the recombinant vector of the present invention. The host cell capable of continuously cloning and expressing the vector of the present invention in a prokaryotic cell while being stable can be used in any host cell known in the art, for example, E. coli JM109, E. coli BL21, E. coli RR1. , Bacillus genus strains, such as E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, and Salmonella typhimurium, Serratia marcensons, and various Pseudomonas Enterobacteria such as species and strains.

또한, 본 발명의 벡터를 진핵 세포에 형질전환시키는 경우에는 숙주세포로서, 효모(Saccharomyce cerevisiae), 곤충세포, 사람세포 (예컨대, CHO 세포주 (Chinese hamster ovary), W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, 3T3, RIN 및 MDCK 세포주) 및 식물세포 등이 이용될 수 있다. 숙주세포는 바람직하게는 효모이다. In addition, when transforming the vector of the present invention into eukaryotic cells, yeast ( Saccharomyce cerevisiae ), insect cells, human cells (e.g., CHO cell line (Chinese hamster ovary), W138, BHK, COS-7, 293) as host cells. , HepG2, 3T3, RIN and MDCK cell lines) and plant cells and the like can be used. The host cell is preferably yeast.

본 발명의 벡터를 숙주세포 내로 운반하는 방법은, 숙주 세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법, 하나한 방법 (Hanahan, D., J. Mol. Biol., 166:557-580(1983)) 및 전기천공 방법 등에 의해 실시될 수 있다. 또한, 숙주세포가 진핵세포인 경우에는, 미세주입법, 칼슘포스페이트 침전법, 전기천공법, 리포좀-매개 형질감염법, DEAE-덱스트란 처리법, 및 유전자 밤바드먼트 등에 의해 벡터를 숙주세포 내로 주입할 수 있다.The method of carrying the vector of the present invention into a host cell is performed by using the CaCl 2 method or one method (Hanahan, D., J. Mol. Biol., 166: 557-580 (1983)) when the host cell is a prokaryotic cell. And the electroporation method. When the host cell is a eukaryotic cell, the vector is injected into the host cell by microinjection, calcium phosphate precipitation, electroporation, liposome-mediated transfection, DEAE-dextran treatment, and gene bombardment .

본 발명은 또한, 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 숙주 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 숙주 세포에서 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서, delta-6 불포화효소 유전자 및 재조합 벡터는 전술한 바와 같다. 또한, 상기 숙주 세포는 바람직하게는 효모이다.The present invention also provides a method for producing gamma-linolenic acid or stearic acid in a host cell comprising transforming the host cell with a recombinant vector comprising a delta-6 desaturase gene from Dome ( Sparus aurata ). do. In the method of the present invention, the delta-6 desaturase gene and the recombinant vector are as described above. In addition, the host cell is preferably yeast.

본 발명은 또한, 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체의 제조 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서, delta-6 불포화효소 유전자는 전술한 바와 같다. The present invention also provides a method of producing a plant for producing gamma-linolenic acid or stearic acid, comprising transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a delta-6 desaturase gene derived from a dome ( Sparus aurata ). do. In the method of the present invention, the delta-6 desaturase gene is as described above.

재조합 벡터의 바람직한 예는 아그로박테리움 투머파시엔스와 같은 적당한 숙주에 존재할 때 그 자체의 일부, 소위 T-영역을 식물 세포로 전이시킬 수 있는 Ti-플라스미드 벡터이다. 다른 유형의 Ti-플라스미드 벡터 (EP 0 116 718 B1호 참조)는 현재 식물 세포, 또는 잡종 DNA를 식물의 게놈 내에 적당하게 삽입시키는 새로운 식물이 생산될 수 있는 원형질체로 잡종 DNA 서열을 전이시키는데 이용되고 있다. Ti-플라스미드 벡터의 특히 바람직한 형태는 EP 0 120 516 B1호 및 미국 특허 제4,940,838호에 청구된 바와 같은 소위 바이너리(binary) 벡터이다. 본 발명에 따른 DNA를 식물 숙주에 도입시키는데 이용될 수 있는 다른 적합한 벡터는 이중 가닥 식물 바이러스(예를 들면, CaMV) 및 단일 가닥 바이러스, 게미니 바이러스 등으로부터 유래될 수 있는 것과 같은 바이러스 벡터, 예를 들면 비완전성 식물 바이러스 벡터로부터 선택될 수 있다. 그러한 벡터의 사용은 특히 식물 숙주를 적당하게 형질전환하는 것이 어려울 때 유리할 수 있다.Preferred examples of recombinant vectors are Ti-plasmid vectors which, when present in a suitable host such as Agrobacterium tumerfaciens, can transfer a portion of themselves, the so-called T-region, to plant cells. Other types of Ti-plasmid vectors (see EP 0 116 718 B1) are currently used to transfer hybrid DNA sequences to plant cells or protoplasts in which new plants capable of properly inserting hybrid DNA into the plant's genome can be produced have. A particularly preferred form of the Ti-plasmid vector is a so-called binary vector as claimed in EP 0 120 516 B1 and U.S. Patent No. 4,940,838. Other suitable vectors that can be used to introduce the DNA according to the invention into the plant host include viral vectors such as those that can be derived from double-stranded plant viruses (e. G., CaMV) and single- For example, from non -complete plant virus vectors. The use of such vectors may be particularly advantageous when it is difficult to transform the plant host properly.

발현 벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 것이다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질전환된 세포를 비형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해 당된다. 그 예로는 글리포세이트(glyphosate) 또는 포스피노트리신(phosphinothricin)과 같은 제초제 저항성 유전자, 카나마이신(kanamycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The expression vector will preferably comprise one or more selectable markers. The marker is typically a nucleic acid sequence having properties that can be selected by chemical methods, such as all genes capable of distinguishing transformed cells from non-transformed cells. Examples include herbicide resistance genes such as glyphosate or phosphinothricin, antibiotics such as kanamycin, G418, Bleomycin, hygromycin, chloramphenicol, Resistant genes, but are not limited thereto.

본 발명의 재조합 벡터에서, 프로모터는 CaMV 35S, 액틴, 유비퀴틴, pEMU, MAS 또는 히스톤 프로모터일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. "프로모터"란 용어는 구조 유전자로부터의 DNA 업스트림의 영역을 의미하며 전사를 개시하기 위하여 RNA 폴리머라아제가 결합하는 DNA 분자를 말한다. "식물 프로모터"는 식물 세포에서 전사를 개시할 수 있는 프로모터이다. "구성적(constitutive) 프로모터"는 대부분의 환경 조건 및 발달 상태 또는 세포 분화하에서 활성이 있는 프로모터이다. 형질전환체의 선택이 각종 단계에서 각종 조직에 의해서 이루어질 수 있기 때문에 구성적 프로모터가 본 발명에서 바람직할 수 있다. 따라서, 구성적 프로모터는 선택 가능성을 제한하지 않는다.In the recombinant vector of the present invention, the promoter may be CaMV 35S, actin, ubiquitin, pEMU, MAS, or histone promoter, but is not limited thereto. The term "promoter " refers to the region of DNA upstream from the structural gene and refers to a DNA molecule to which an RNA polymerase binds to initiate transcription. A "plant promoter" is a promoter capable of initiating transcription in plant cells. A "constitutive promoter" is a promoter that is active under most environmental conditions and developmental conditions or cell differentiation. Constructive promoters may be preferred in the present invention because the choice of transformants can be made by various tissues at various stages. Thus, the constitutive promoter does not limit the selection possibilities.

본 발명의 재조합 벡터에서, 통상의 터미네이터를 사용할 수 있으며, 그 예로는 노팔린 신타아제(NOS), 벼 α-아밀라아제 RAmy1 A 터미네이터, 파세올린(phaseoline) 터미네이터, 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)의 옥토파인(Octopine) 유전자의 터미네이터 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 터미네이터의 필요성에 관하여, 그러한 영역이 식물 세포에서의 전사의 확실성 및 효율을 증가시키는 것으로 일반적으로 알려져 있다. 그러므로, 터미네이터의 사용은 본 발명의 내용에서 매우 바람직하다.In the recombinant vector of the present invention, conventional terminators can be used. Examples thereof include nopaline synthase (NOS), rice α-amylase RAmy1 A terminator, phaseoline terminator, Agrobacterium tumefaciens (Agrobacterium tumefaciens ) Octopine gene terminator, but the present invention is not limited thereto. Regarding the need for terminators, it is generally known that such regions increase the certainty and efficiency of transcription in plant cells. Therefore, the use of terminators is highly desirable in the context of the present invention.

식물의 형질전환은 DNA를 식물에 전이시키는 임의의 방법을 의미한다. 그러한 형질전환 방법은 반드시 재생 및(또는) 조직 배양 기간을 가질 필요는 없다. 식물 종의 형질전환은 이제는 쌍자엽 식물뿐만 아니라 단자엽 식물 양자를 포함한 식물 종에 대해 일반적이다. 원칙적으로, 임의의 형질전환 방법은 본 발명에 따른 잡종 DNA를 적당한 선조 세포로 도입시키는데 이용될 수 있다. 방법은 원형질체에 대한 칼슘/폴리에틸렌 글리콜 방법(Krens, F.A. et al., 1982, Nature 296, 72-74; Negrutiu I. et al., June 1987, Plant Mol. Biol. 8, 363-373), 원형질체의 전기천공법(Shillito R.D. et al., 1985 Bio/Technol. 3, 1099-1102), 식물 요소로의 현미주사법(Crossway A. et al., 1986, Mol. Gen. Genet. 202, 179-185), 각종 식물 요소의 (DNA 또는 RNA-코팅된) 입자 충격법(Klein T.M. et al., 1987, Nature 327, 70), 식물의 침윤 또는 성숙 화분 또는 소포자의 형질전환에 의한 아그로박테리움 투머파시엔스 매개된 유전자 전이에서 (비완전성) 바이러스에 의한 감염(EP 0 301 316호) 등으로부터 적당하게 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 바람직한 방법은 아그로박테리움 매개된 DNA 전달을 포함한다. 특히 바람직한 것은 EP A 120 516호 및 미국 특허 제4,940,838호에 기재된 바와 같은 소위 이원 벡터 기술을 이용하는 것이다.Transformation of a plant means any method of transferring DNA to a plant. Such transformation methods do not necessarily have a regeneration and / or tissue culture period. Transformation of plant species is now common for plant species, including both terminal plants as well as dicotyledonous plants. In principle, any transformation method can be used to introduce the hybrid DNA according to the present invention into suitable progenitor cells. Method is calcium / polyethylene glycol method for protoplasts (Krens, FA et al., 1982, Nature 296, 72-74; Negrutiu I. et al., June 1987, Plant Mol. Biol. 8, 363-373), protoplasts Electroporation (Shillito RD et al., 1985 Bio / Technol. 3, 1099-1102), microscopic injection into plant elements (Crossway A. et al., 1986, Mol. Gen. Genet. 202, 179-185 ), (DNA or RNA-coated) particle bombardment of various plant elements (Klein TM et al., 1987, Nature 327, 70), Agrobacterium tumulopasis by plant infiltration or transformation of mature pollen or vesicles And infection with (incomplete) virus (EP 0 301 316) in en mediated gene transfer. A preferred method according to the present invention comprises Agrobacterium mediated DNA delivery. Especially preferred is the use of the so-called binary vector technology as described in EP A 120 516 and US Pat. No. 4,940,838.

본 발명은 또한, 상기 방법에 의해 제조된 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체 및 이의 종자를 제공한다. The invention also provides plants and their seeds which produce gamma-linolenic acid or stearic acid produced by the above process.

본 발명에 따른 상기 식물체는 벼, 밀, 보리, 옥수수, 대두, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수로 이루어진 군에서 선택된 식량작물류; 애기장대, 배추, 무, 고추, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파 및 당근으로 이루어진 군에서 선택된 채소작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채로 이루어진 군에서 선택된 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 자두, 살구 및 바나나로 이루어진 군에서 선택된 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립으로 이루어진 군에서 선택된 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스로 이루어진 군에서 선택된 사료작물류일 수 있다.The plant according to the present invention is a food crop selected from the group consisting of rice, wheat, barley, corn, soybean, potato, wheat, red beans, oats and sorghum; Vegetable crops selected from the group consisting of Arabidopsis, Chinese cabbage, radish, red pepper, strawberry, tomato, watermelon, cucumber, cabbage, melon, pumpkin, green onion, onion, and carrot; Special crops selected from the group consisting of ginseng, tobacco, cotton, sesame, sugar cane, sugar beet, perilla, peanut and rapeseed; Fruit trees selected from the group consisting of apple trees, pear trees, jujube trees, peaches, lambs, grapes, citrus fruits, persimmons, plums, apricots and bananas; Flowers selected from the group consisting of roses, gladiolus, gerberas, carnations, chrysanthemums, lilies and tulips; And fodder crops selected from the group consisting of lysis, redclover, orchardgrass, alphaalpha, tolsquescue and perennial lygragrass.

본 발명은 또한, 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하는, 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하기 위한 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물에서, 상기 delta-6 불포화효소 유전자는 전술한 바와 같다. 본 발명의 조성물은 유효 성분으로서 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하며, 상기 delta-6 불포화효소 유전자를 식물체에 형질전환시킴으로써 식물체에서 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산할 수 있는 것이다.The present invention also provides a composition for producing gamma-linolenic acid or stearic acid, comprising a delta-6 desaturase gene from Dome ( Sparus aurata ). In the composition of the present invention, the delta-6 desaturase gene is as described above. The composition of the present invention includes a delta-6 desaturase gene derived from Dome ( Sparus aurata ) as an active ingredient, and the plant can produce gamma-linolenic acid or stearic acid by transforming the delta-6 desaturase gene into a plant. It is.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1: 돔(Example 1: Dome Sparus aurataSparus aurata )으로부터 delta-6 불포화효소 유전자 분리 및 염기서열 분석Delta-6 desaturase gene isolation and sequencing

돔(Sparus aurata)으로부터 delta-6 불포화효소 유전자(SaD6DES)를 5'-, 3'- RACE 방법 (SMART RACE cDNA Amplification kit)을 이용 양 말단 단편을 분리, 부분 염기서열을 확인하고(도 1), delta-6 불포화효소(SaD6DES) 유전자의 full length 클론을 확보할 수 있는 프라이머를 재작성 후 RACE-PCR 반응을 통하여 SaD6DES 유전자를 확보하였다. 확보된 SaD6DES 유전자는 pGEM T-Easy vector에 삽입 후 제한효소 절단(EcoRI)을 통하여 크기를 확인하고(도 2), 염기서열 분석을 실시하였다. 염기서열 분석 결과 SaD6DES 유전자는 1,338bp(445 a.a.)크기의 Open reading frame(ORF)로 구성되어있음을 확인하였다. 또한 돔 유래의 delta-6 불포화효소를 타 생물유래의 delta-6 불포화효소 유전자와의 아미노산 상동성을 비교한 결과 타 어류 유래의 delta-6 불포화효소 유전자와 65~75%의 상동성을 보였으며, 식물 유래의 delta-6 불포화효소와는 상동성을 보이지 않았다(도 3).The delta-6 desaturase gene ( SaD6DES ) from the dome ( Sparus aurata ) was separated from both terminal fragments using the 5'-, 3'- RACE method (SMART RACE cDNA Amplification kit) to confirm partial sequencing (FIG. 1). , SaD6DES gene was obtained through RACE-PCR reaction after rewriting primer to secure full length clone of delta-6 desaturase ( SaD6DES ) gene. The secured SaD6DES gene was inserted into the pGEM T-Easy vector and confirmed its size through restriction enzyme digestion ( Eco RI) (FIG. 2), followed by sequencing. Sequencing Results SaD6DES The gene was confirmed to consist of 1,338bp (445 aa) open reading frame (ORF). Also dome Comparison of amino acid homology with delta-6 desaturase genes derived from other organisms showed 65-75% homology with delta-6 desaturase genes derived from other fish. No homology with the derived delta-6 desaturase (FIG. 3).

실시예 2: Delta-6 불포화효소 유전자의 효모(Example 2: Yeast of Delta-6 Desaturase Gene Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae )) 발현 형질전환 운반체 제작 및 형질전환 확인Expression transgenic carrier construction and transformation confirmation

돔( Sparus aurata)으로부터 분리한 delta-6 불포화효소(SaD6DES) 유전자를 효모(S. cerevisiae) 발현 운반체인 pYES2에 제한효소 HindIII와 XhoI를 이용하여 삽입하였다. 삽입된 여부의 확인은 pYES-SaD6DES 운반체를 동일한 제한효소 절단을 통하여 확인하였다(도 4).Dome ( Sparus The delta-6 desaturase ( SaD6DES ) gene isolated from aurata ) was inserted into pYES2 , a yeast ( S. cerevisiae ) expression carrier, using restriction enzymes Hind III and Xho I. Confirmation of insertion was confirmed through the same restriction enzyme cleavage of the pYES- SaD6DES carrier (FIG. 4).

구축된 벡터는 lithium acetate법을 이용하여 S. cerevisiae에 형질전환되고 우라실(uracil)이 결핍된 최소 배지에서 선발되었다. 선발된 클론은 PCR 분석을 통하여 대조군인 벡터만 있는 pYES2와 비교하여 삽입된 SaD6DES 유전자가 있음을 확 인하였고, 이 클론들을 다시 대장균에 역 형질전환하여 올바른 클론임을 확인하였다(도 5). The constructed vector was selected from minimal media transformed into S. cerevisiae using uracil and lack uracil. The selected clones were confirmed to have the inserted SaD6DES gene compared to pYES2 containing only the control vector through PCR analysis, and the clones were reversely transformed into Escherichia coli to confirm that they were correct clones (FIG. 5).

실시예 3: Delta-6 불포화효소 유전자 형질전환 효모의 감마-리놀렌산(오메가-6)과 스테아리돈산(오메가-3) 생합성 검정Example 3: Gamma-linolenic acid (omega-6) and stearic acid (omega-3) biosynthesis assays of Delta-6 desaturase gene transformed yeast

Delta-6 불포화효소 유전자가 삽입된 효모(pYES2-SaD6DES)를 이용한 SaD6DES 유전자의 기능을 확인하기 위하여 우라실 결핍 및 라피노스/갈락토스를 첨가한 배지에서 28℃ 조건으로 종균 배양(seed culture) 하였다. 종균 배양액을 새로운 배지에 최종농도 OD600=0.5가 되도록 계대하고 기질인 리놀레산(LA, C18:2) 및 알파-리놀렌산(ALA, C18:3)을 각각 최종농도 0.5 mM 되게 첨가하고, 기질이 배지에 잘 융합하도록 0.1%(v/v) tergitol NP-40을 첨가하였다. 20℃에서 3일간, 15℃에서 3일간 공동배양하여 추가된 기질로부터 새로운 산물로의 전환을 유도하였다. 대조구(pYES2)에 비하여 pYES2-SaD6DES 형질전환 효모에서는 리놀레산과 알파-리놀렌산의 카르복실기로부터 6번째 탄소에 새로운 이중결합이 추가로 형성되어 각각 감마-리놀렌산(GLA, C18:3) 및 스테아리돈산(STA, C18:4)이 합성됨을 가스크로마토그래피를 이용하여 확인하였다(도 6, 7). 지방산 생합성 분석을 위한 가스크로마토그래피 시험결과 기질로 사용된 리놀레산은 감마-리놀렌산으로 26% 전환되었고, 알파-리놀렌산은 스테아리돈산으로 36% 전환됨을 확인하였다(도 8). In order to confirm the function of the SaD6DES gene using the yeast (pYES2- SaD6DES ) in which the Delta-6 desaturase gene was inserted, seed culture was performed at 28 ° C. in a medium containing uracil deficiency and raffinose / galactose. The spawn culture was passaged to a fresh medium at a final concentration of OD600 = 0.5 and the substrates linoleic acid (LA, C18: 2) and alpha-linolenic acid (ALA, C18: 3) were added to a final concentration of 0.5 mM, and the substrate was added to the medium. 0.1% (v / v) tergitol NP-40 was added to fuse well. Co-culture at 3O < 0 > C for 3 days and 3 [deg.] C at 15 [deg.] C. resulted in the conversion of the added substrate to the new product. Compared to the control (pYES2), in the pYES2- SaD6DES transformed yeast, a new double bond was formed at the sixth carbon from the carboxyl groups of linoleic acid and alpha-linolenic acid, respectively, to gamma-linolenic acid (GLA, C18: 3) and stearic acid (STA). , C18: 4) was synthesized using gas chromatography (FIGS. 6 and 7). Gas chromatographic tests for fatty acid biosynthesis analysis showed that linoleic acid used as a substrate was 26% converted to gamma-linolenic acid, and alpha-linolenic acid was converted to stearic acid 36% (FIG. 8).

도 1은 5'-RACE PCR (레인 5'-1과 5'-2)과 3'-RACE PCR (레인 3'-1과 3'-2)에 의한 delta-6 불포화효소 유전자의 양방향 단편 분리를 보여준다. Figure 1 shows bidirectional fragment separation of delta-6 desaturase gene by 5'-RACE PCR (lanes 5'-1 and 5'-2) and 3'-RACE PCR (lanes 3'-1 and 3'-2). Shows.

도 2는 Full length delta-6 불포화효소(SaD6DES) 유전자 분리 및 제한효소 절단(EcoRI)을 통한 유전자 삽입 및 그 크기를 확인한 것이다. Figure 2 shows the gene insertion and its size through full length delta-6 desaturase ( SaD6DES ) gene separation and restriction enzyme digestion ( Eco RI).

도 3은 돔으로부터 분리된 delta-6 불포화효소 유전자(SaD6DES)의 아미노산 서열과 기존 알려진 어류와 인간의 delta-6 혹은 delta-5 불포화효소 유전자의 아미노산 서열의 상동성 비교 (SaD6DES: Sparus aurata, SsD5DES: Salmo salar, GenBank Accession no. NP_001117014, SsD6DES: Salmo salar, GenBank Accession no. NP_001117047, OmD6DES: Oncorhynchus mykiss, GenBank Accession no. NP_001117759, DrD6DES: Danio rerio, GenBank Accession no. NP_571720, HsD6DES: Homo sapiens, GenBank Accession no. NP_004256)를 나타낸다. Putative cytochrome b5 domain은 밑줄로 표시하였고, putative transmembrane domains은 네모상자로 표시, 3개의 putative histidine-rich regions은 1과 2, 3 숫자와 함께 밑줄로 표시하였다. Figure 3 is a homology of the amino acid sequence of the delta-6 desaturase gene ( SaD6DES ) isolated from the dome and the amino acid sequence of the known delta-6 or delta-5 desaturase gene (SaD6DES: Sparus aurata , SsD5DES) : Salmo salar, GenBank Accession no NP_001117014 , SsD6DES:.. Salmo salar, GenBank Accession no NP_001117047, OmD6DES: Oncorhynchus mykiss, GenBank Accession no NP_001117759, DrD6DES:.. Danio rerio, GenBank Accession no NP_571720, HsD6DES: Homo sapiens, GenBank Accession no.NP_004256). Putative cytochrome b5 domains are underlined, putative transmembrane domains are boxed down, and three putative histidine-rich regions are underlined with 1, 2, and 3 numbers.

도 4는 Delta-6 불포화효소 유전자 발현용 효모 형질전환 운반체의 제작 및 확인을 나타낸다. Figure 4 shows the production and confirmation of the yeast transform carrier for Delta-6 desaturase gene expression.

도 5는 최소배지에서 선발된 Delta-6 불포화효소 유전자 발현 운반체(pYES2-SaD6DES)의 효모 형질전환을 확인한 것이다. Figure 5 confirms the yeast transformation of Delta-6 desaturase gene expression carrier (pYES2- SaD6DES ) selected in minimal medium.

도 6은 pYES2와 pYES2-SaD6DES 형질전환 효모의 기질 리놀레산으로부터 감마 -리놀렌산의 생합성을 분석한 지방산 가스크로마토그래피이다.Figure 6 is a fatty acid gas chromatography analyzing the biosynthesis of gamma-linolenic acid from the substrate linoleic acid of pYES2 and pYES2- SaD6DES transgenic yeast.

도 7은 pYES2와 pYES2-SaD6DES 형질전환 효모의 기질 알파-리놀렌산으로부터 스테아리돈산의 생합성을 분석한 지방산 가스크로마토그래피이다.Figure 7 is a fatty acid gas chromatography analyzing the biosynthesis of stearic acid from substrate alpha-linolenic acid of pYES2 and pYES2- SaD6DES transgenic yeast.

도 8은 Delta-6 불포화효소 유전자 발현에 의한 형질전환 효모의 기질 리놀레산 및 알파-리놀렌산으로부터 감마-리놀렌산과 스테아리돈산으로의 전환 확인을 나타낸다. 지방산의 조성은 총 지방산 메틸 에스테르의 농도를 %로 표시한 것이다.Fig. 8 shows the confirmation of conversion from substrate linoleic acid and alpha-linolenic acid to gamma-linolenic acid and stearic acid in the transformed yeast by Delta-6 desaturase gene expression. The composition of the fatty acids is the percentage of the total fatty acid methyl ester.

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof <130> PN09254 <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1338 <212> DNA <213> Sparus aurata <400> 1 atgggaggtg gaggccagct cacggagcca ggggagccgg gcagcaggcg agctggtggc 60 gtttacacct gggaggaggt gcagagccac agcagcaggg atgaccagtg gctggtgata 120 gatcgaaagg tctacaacgt cacaaagtgg gccaagaggc acccgggagg attccgggtc 180 atcaaccact atgctggaga ggatgccacg gaggcgttca ctgcttttca ccctgatttg 240 aagtttgtgc ggaagtttct gaagcctctg ctgattggag agctggcagc aacggagccc 300 agccaggacc gaaataaaaa tgcggcggtc attcgggatt tccacacttt acgcgtgcag 360 gcggagagcg acggtctgtt ccgagctcag ccgctgttct tctgcctcca cctgggtcac 420 atcctgctgc tggaggccct cgcctggctc atcatctggc tgtggggaac cagctggaca 480 ctgacgtttc tgatatcgat catcctggca actgctcagg cgcaggccgg ctggctgcag 540 cacgacttcg gccacctgtc tgtcttcaag aagtccagct ggaatcacat tttgcacaag 600 tttgtcatcg gtcatttaaa gggagcctct gccaactggt ggaatcatcg gcatttccag 660 catcacgcta aacccaacat cttcagcaag gaccctgatg tcaacatgtt gcacatcttt 720 gtgctcgggg acactcagcc agtcgagtac ggcattaaga agatcaaata tctgccctat 780 catcaccagc accagtactt cctcctcgtc ggaccgccgc tcctcattcc ggtttacttc 840 cacattcaga ttattcgcac catgatttcc cgtcacgact gggtggatct ggcctggtct 900 atgtcttact acctgcgcta cctgtgctgt tacgttcccc tgtacggcct gtttggctca 960 gtggcgctca tcagcttcgt caggtttttg gagagtcact ggtttgtctg ggtgactcag 1020 atgaatcatc tgccaatgga catcgaccac gagaagcacc acgactggct gaccatgcag 1080 ctacaagcca cctgcaacat tgagaagtcc gtcttcaacg actggttcag cggacacctc 1140 aactttcaga tcgagcacca tttgttccct acgatgccgc gccacaacta ccacctggtg 1200 gccccgctgg tccacgcact gtgtgagaaa catgggatcc cttaccaggt gaaaacaatg 1260 tggcagggca tcgtcgacgt tatcaggtca ctgaagaact caggggacct ctggctggat 1320 gcttatctcc ataaatga 1338 <210> 2 <211> 445 <212> PRT <213> Sparus aurata <400> 2 Met Gly Gly Gly Gly Gln Leu Thr Glu Pro Gly Glu Pro Gly Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gly Gly Val Tyr Thr Trp Glu Glu Val Gln Ser His Ser Ser 20 25 30 Arg Asp Asp Gln Trp Leu Val Ile Asp Arg Lys Val Tyr Asn Val Thr 35 40 45 Lys Trp Ala Lys Arg His Pro Gly Gly Phe Arg Val Ile Asn His Tyr 50 55 60 Ala Gly Glu Asp Ala Thr Glu Ala Phe Thr Ala Phe His Pro Asp Leu 65 70 75 80 Lys Phe Val Arg Lys Phe Leu Lys Pro Leu Leu Ile Gly Glu Leu Ala 85 90 95 Ala Thr Glu Pro Ser Gln Asp Arg Asn Lys Asn Ala Ala Val Ile Arg 100 105 110 Asp Phe His Thr Leu Arg Val Gln Ala Glu Ser Asp Gly Leu Phe Arg 115 120 125 Ala Gln Pro Leu Phe Phe Cys Leu His Leu Gly His Ile Leu Leu Leu 130 135 140 Glu Ala Leu Ala Trp Leu Ile Ile Trp Leu Trp Gly Thr Ser Trp Thr 145 150 155 160 Leu Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ile Leu Ala Thr Ala Gln Ala Gln Ala 165 170 175 Gly Trp Leu Gln His Asp Phe Gly His Leu Ser Val Phe Lys Lys Ser 180 185 190 Ser Trp Asn His Ile Leu His Lys Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly 195 200 205 Ala Ser Ala Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys 210 215 220 Pro Asn Ile Phe Ser Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His Ile Phe 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Thr Gln Pro Val Glu Tyr Gly Ile Lys Lys Ile Lys 245 250 255 Tyr Leu Pro Tyr His His Gln His Gln Tyr Phe Leu Leu Val Gly Pro 260 265 270 Pro Leu Leu Ile Pro Val Tyr Phe His Ile Gln Ile Ile Arg Thr Met 275 280 285 Ile Ser Arg His Asp Trp Val Asp Leu Ala Trp Ser Met Ser Tyr Tyr 290 295 300 Leu Arg Tyr Leu Cys Cys Tyr Val Pro Leu Tyr Gly Leu Phe Gly Ser 305 310 315 320 Val Ala Leu Ile Ser Phe Val Arg Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val 325 330 335 Trp Val Thr Gln Met Asn His Leu Pro Met Asp Ile Asp His Glu Lys 340 345 350 His His Asp Trp Leu Thr Met Gln Leu Gln Ala Thr Cys Asn Ile Glu 355 360 365 Lys Ser Val Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile 370 375 380 Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Tyr His Leu Val 385 390 395 400 Ala Pro Leu Val His Ala Leu Cys Glu Lys His Gly Ile Pro Tyr Gln 405 410 415 Val Lys Thr Met Trp Gln Gly Ile Val Asp Val Ile Arg Ser Leu Lys 420 425 430 Asn Ser Gly Asp Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys 435 440 445 <110> REPUBLIC OF KOREA (MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses <130> PN09254 <160> 2 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 1338 <212> DNA <213> Sparus aurata <400> 1 atgggaggtg gaggccagct cacggagcca ggggagccgg gcagcaggcg agctggtggc 60 gtttacacct gggaggaggt gcagagccac agcagcaggg atgaccagtg gctggtgata 120 gatcgaaagg tctacaacgt cacaaagtgg gccaagaggc acccgggagg attccgggtc 180 atcaaccact atgctggaga ggatgccacg gaggcgttca ctgcttttca ccctgatttg 240 aagtttgtgc ggaagtttct gaagcctctg ctgattggag agctggcagc aacggagccc 300 agccaggacc gaaataaaaa tgcggcggtc attcgggatt tccacacttt acgcgtgcag 360 gcggagagcg acggtctgtt ccgagctcag ccgctgttct tctgcctcca cctgggtcac 420 atcctgctgc tggaggccct cgcctggctc atcatctggc tgtggggaac cagctggaca 480 ctgacgtttc tgatatcgat catcctggca actgctcagg cgcaggccgg ctggctgcag 540 cacgacttcg gccacctgtc tgtcttcaag aagtccagct ggaatcacat tttgcacaag 600 tttgtcatcg gtcatttaaa gggagcctct gccaactggt ggaatcatcg gcatttccag 660 catcacgcta aacccaacat cttcagcaag gaccctgatg tcaacatgtt gcacatcttt 720 gtgctcgggg acactcagcc agtcgagtac ggcattaaga agatcaaata tctgccctat 780 catcaccagc accagtactt cctcctcgtc ggaccgccgc tcctcattcc ggtttacttc 840 cacattcaga ttattcgcac catgatttcc cgtcacgact gggtggatct ggcctggtct 900 atgtcttact acctgcgcta cctgtgctgt tacgttcccc tgtacggcct gtttggctca 960 gtggcgctca tcagcttcgt caggtttttg gagagtcact ggtttgtctg ggtgactcag 1020 atgaatcatc tgccaatgga catcgaccac gagaagcacc acgactggct gaccatgcag 1080 ctacaagcca cctgcaacat tgagaagtcc gtcttcaacg actggttcag cggacacctc 1140 aactttcaga tcgagcacca tttgttccct acgatgccgc gccacaacta ccacctggtg 1200 gccccgctgg tccacgcact gtgtgagaaa catgggatcc cttaccaggt gaaaacaatg 1260 tggcagggca tcgtcgacgt tatcaggtca ctgaagaact caggggacct ctggctggat 1320 gcttatctcc ataaatga 1338 <210> 2 <211> 445 <212> PRT <213> Sparus aurata <400> 2 Met Gly Gly Gly Gly Gln Leu Thr Glu Pro Gly Glu Pro Gly Ser Arg   1 5 10 15 Arg Ala Gly Gly Val Tyr Thr Trp Glu Glu Val Gln Ser His Ser Ser              20 25 30 Arg Asp Asp Gln Trp Leu Val Ile Asp Arg Lys Val Tyr Asn Val Thr          35 40 45 Lys Trp Ala Lys Arg His Pro Gly Gly Phe Arg Val Ile Asn His Tyr      50 55 60 Ala Gly Glu Asp Ala Thr Glu Ala Phe Thr Ala Phe His Pro Asp Leu  65 70 75 80 Lys Phe Val Arg Lys Phe Leu Lys Pro Leu Leu Ile Gly Glu Leu Ala                  85 90 95 Ala Thr Glu Pro Ser Gln Asp Arg Asn Lys Asn Ala Ala Val Ile Arg             100 105 110 Asp Phe His Thr Leu Arg Val Gln Ala Glu Ser Asp Gly Leu Phe Arg         115 120 125 Ala Gln Pro Leu Phe Phe Cys Leu His Leu Gly His Ile Leu Leu Leu     130 135 140 Glu Ala Leu Ala Trp Leu Ile Ile Trp Leu Trp Gly Thr Ser Trp Thr 145 150 155 160 Leu Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ile Leu Ala Thr Ala Gln Ala Gln Ala                 165 170 175 Gly Trp Leu Gln His Asp Phe Gly His Leu Ser Val Phe Lys Lys Ser             180 185 190 Ser Trp Asn His Ile Leu His Lys Phe Val Ile Gly His Leu Lys Gly         195 200 205 Ala Ser Ala Asn Trp Trp Asn His Arg His Phe Gln His His Ala Lys     210 215 220 Pro Asn Ile Phe Ser Lys Asp Pro Asp Val Asn Met Leu His Ile Phe 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Thr Gln Pro Val Glu Tyr Gly Ile Lys Lys Ile Lys                 245 250 255 Tyr Leu Pro Tyr His His Gln His Gln Tyr Phe Leu Leu Val Gly Pro             260 265 270 Pro Leu Leu Ile Pro Val Tyr Phe His Ile Gln Ile Ile Arg Thr Met         275 280 285 Ile Ser Arg His Asp Trp Val Asp Leu Ala Trp Ser Met Ser Tyr Tyr     290 295 300 Leu Arg Tyr Leu Cys Cys Tyr Val Pro Leu Tyr Gly Leu Phe Gly Ser 305 310 315 320 Val Ala Leu Ile Ser Phe Val Arg Phe Leu Glu Ser His Trp Phe Val                 325 330 335 Trp Val Thr Gln Met Asn His Leu Pro Met Asp Ile Asp His Glu Lys             340 345 350 His His Asp Trp Leu Thr Met Gln Leu Gln Ala Thr Cys Asn Ile Glu         355 360 365 Lys Ser Val Phe Asn Asp Trp Phe Ser Gly His Leu Asn Phe Gln Ile     370 375 380 Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Tyr His Leu Val 385 390 395 400 Ala Pro Leu Val His Ala Leu Cys Glu Lys His Gly Ile Pro Tyr Gln                 405 410 415 Val Lys Thr Met Trp Gln Gly Ile Val Asp Val Ile Arg Ser Leu Lys             420 425 430 Asn Ser Gly Asp Leu Trp Leu Asp Ala Tyr Leu His Lys         435 440 445  

Claims (14)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 숙주 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 숙주 세포에서 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 방법.A method of producing gamma-linolenic acid or stearic acid in a host cell comprising transforming the host cell with a recombinant vector comprising a delta-6 desaturase gene derived from a dome ( Sparus aurata ) consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. Way. 제8항에 있어서, 상기 숙주 세포는 효모인 것을 특징으로 하는 방법. The method of claim 8, wherein said host cell is yeast. 삭제delete 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 돔(Sparus aurata) 유래의 delta-6 불포화효소 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 식물 세포를 형질전환시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체의 제조 방법.Preparation of a plant producing gamma-linolenic acid or stearic acid, comprising transforming a plant cell with a recombinant vector comprising a delta-6 desaturase gene derived from a dome ( Sparus aurata ) consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 Way. 제11항의 방법에 의해 제조된 감마-리놀렌산 또는 스테아리돈산을 생산하는 식물체. A plant that produces gamma-linolenic acid or stearic acid produced by the method of claim 11. 제12항에 따른 식물체의 종자. Seeds of plants according to claim 12. 삭제delete
KR1020090120295A 2009-12-07 2009-12-07 Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof KR101164923B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090120295A KR101164923B1 (en) 2009-12-07 2009-12-07 Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090120295A KR101164923B1 (en) 2009-12-07 2009-12-07 Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110063923A KR20110063923A (en) 2011-06-15
KR101164923B1 true KR101164923B1 (en) 2012-07-20

Family

ID=44397444

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020090120295A KR101164923B1 (en) 2009-12-07 2009-12-07 Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101164923B1 (en)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101278614B1 (en) * 2011-07-28 2013-06-25 대한민국 Delta-6 desaturase gene from Muraenesox cinereus
KR101437605B1 (en) * 2012-06-29 2014-09-15 대한민국 Method for producing a transgenic Brassica napus

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Comparative Biochemistry and Physiology, Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 2004, Vol. 139, No. Issue 2, 페이지 269-279.*
GenBank Accession Number AY055749*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110063923A (en) 2011-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102197208B1 (en) Production of long chain polyunsaturated fatty acids in plant cells
JP4515904B2 (en) Fatty acid desaturase from fungi
EP1656449B1 (en) Fatty acid desaturases from primula
JP4755109B2 (en) Transgenic plant with reduced level of saturated fatty acid and method for producing the same
CN101365788A (en) Delta-9 elongases and their use in making polyunsaturated fatty acids
RO122151B1 (en) Process for modifying concentration levels of secondary metabolic compounds in plants
EP1799027B1 (en) Plants with no saturate or reduced saturate levels of fatty acids in seeds, and oil derived from the seeds
US11078547B2 (en) Algal and fungal genes and their uses for taurine biosynthesis in cells
KR101164923B1 (en) Delta-6 desaturase gene from Sparus aurata and uses thereof
KR20220147361A (en) IbFAD8 gene from sweetpotato for improving cold storage stability and increasing omega-3 fatty acid content in tuberous root of sweetpotato and uses thereof
EP1412488B1 (en) Method for producing arachidonic acid in transgenic organisms
KR101492402B1 (en) Method for increasing total fatty acid content and useful fatty acid ratio in transgenic microalgae overexpressing FAB2 gene
KR101491777B1 (en) Fatty acid chain elongase gene from muraenesox cinereus and uses thereof
KR20110063920A (en) Fatty acid elongase gene from sparus aurata and uses thereof
JPH07501924A (en) Plant medium chain thioesterase
KR101594985B1 (en) A RcLPAT299 genes derived from Ricinus communis L. and their uses in ricinoleic fatty acid
KR101424154B1 (en) CvFatB1 gene and their uses in palmitic acid biosynthesis
KR102054762B1 (en) FATTY ACID CHAIN ELONGASE GENE FROM Berryteuthis magister AND USES THEREOF
US20230235347A1 (en) Improved Camelina Plants and Plant Oil, and Uses Thereof
KR20150050642A (en) Nucleotide for modify the content of fatty acid in seeds and uses thereof
KR101424116B1 (en) Transgenic perrilla plant transformed with delta-6 desaturase gene from phytophthora citrophthora and the method for producing the same
KR101570771B1 (en) Recombinant vector for polyunsaturated fatty acids biosynthesis and plant transformed by the same
KR101278614B1 (en) Delta-6 desaturase gene from Muraenesox cinereus
JP2022114271A (en) Plant and method for producing 9,10-α-ketol linolenic acid
KR20150109321A (en) RcLPAT376 genes specific to Ricinus communis L. anther and their uses in hydroxy fatty acid

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant