KR101126618B1 - Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient - Google Patents

Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient Download PDF

Info

Publication number
KR101126618B1
KR101126618B1 KR1020090105129A KR20090105129A KR101126618B1 KR 101126618 B1 KR101126618 B1 KR 101126618B1 KR 1020090105129 A KR1020090105129 A KR 1020090105129A KR 20090105129 A KR20090105129 A KR 20090105129A KR 101126618 B1 KR101126618 B1 KR 101126618B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
stem cells
vitamin
hair growth
hair
composition
Prior art date
Application number
KR1020090105129A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20110048363A (en
Inventor
조대호
방사익
정민경
박유림
송지혜
박정민
Original Assignee
사회복지법인 삼성생명공익재단
숙명여자대학교산학협력단
일양약품주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 사회복지법인 삼성생명공익재단, 숙명여자대학교산학협력단, 일양약품주식회사 filed Critical 사회복지법인 삼성생명공익재단
Priority to KR1020090105129A priority Critical patent/KR101126618B1/en
Publication of KR20110048363A publication Critical patent/KR20110048363A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101126618B1 publication Critical patent/KR101126618B1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • A61K31/592—9,10-Secoergostane derivatives, e.g. ergocalciferol, i.e. vitamin D2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • A61K31/593—9,10-Secocholestane derivatives, e.g. cholecalciferol, i.e. vitamin D3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 발모 촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 비타민 D로 활성화된 지방 줄기세포를 포함하는 발모 촉진용 조성물, 상기 지방 줄기세포를 포함하는 탈모 또는 무모증의 예방 및 치료용 조성물 및 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 지방 줄기세포는 비타민 D에 의해서 발모능이 향상되어 더 우수한 발모 효과를 나타내게 된다. 따라서 본 발명의 조성물 및 발모능 증진방법은 발모가 필요한 경우나 탈모/무모증의 예방 및 치료를 위하여 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for promoting hair growth, more specifically, a composition for promoting hair growth comprising fat stem cells activated with vitamin D, a composition for preventing and treating hair loss or alopecia comprising the fat stem cells, and fat stem It relates to a method for enhancing the hair growth capacity of the cell. In the present invention, the adipose stem cells have improved hair growth ability by vitamin D, thereby exhibiting a better hair growth effect. Therefore, the composition and the method of enhancing hair growth capacity of the present invention can be usefully used for the prevention and treatment of hair loss / hair loss.

지방 줄기세포, 발모, 탈모, 무모증 Fat stem cells, hair growth, hair loss, alopecia

Description

비타민 Ｄ를 유효성분으로 포함하는 지방 줄기세포의 발모능 증진용 조성물{Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient}Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient}

본 발명은 지방 줄기세포의 발모능 증진을 위한 비타민 D의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 비타민 D를 유효성분으로 포함하는 지방 줄기세포의 발모능 증진용 조성물, 비타민 D를 포함하는 배지에서 지방 줄기세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법 및 상기 방법에 의한 지방 줄기세포를 포함하는 발모 촉진용 조성물 및 탈모 또는 무모증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel use of vitamin D for enhancing the hair growth capacity of fat stem cells, and more particularly, a composition for enhancing hair growth ability of fat stem cells comprising vitamin D as an active ingredient, a medium comprising vitamin D. The present invention relates to a method for enhancing hair growth ability of adipose stem cells, and a composition for promoting hair growth comprising adipose stem cells according to the above method, and a composition for preventing and treating alopecia or alopecia.

일반적으로 인체의 모발은 약 10만 ~ 15만개 정도이며 각각의 모발은 서로 다른 주기를 가지며 성장기 (활발한 모발성장), 퇴행기(과도기), 휴지기(새로 성장하기 전에 모간이 빠지는 정지시기)를 통해 성장한다. 이러한 주기는 3 ~ 6년에 걸쳐 반복되는데, 두피상의 모발의 약 88%는 성장기에 속하고 약 1%만이 퇴행기에 속 하며 나머지는 휴지기에 속한다. 탈모가 진행될수록 급격히 높은 비율의 모발이 휴지기에 속하게 되고, 이에 상응하여 활발한 성장기에 속하는 모발의 비율은 더 낮아진다.Generally, the human hair is about 100,000 to 150,000 pieces, and each hair has a different cycle and grows through the growth phase (active hair growth), the regression phase (transitional period), and the resting period (the time when the hair falls out before new growth). do. This cycle is repeated over three to six years, with about 88% of the hair on the scalp in the growing phase, only about 1% in the retrograde phase, and the rest in the resting phase. As hair loss progresses, a sharply high rate of hair belongs to the resting phase, and accordingly, the proportion of hair belonging to an active growth phase is lower.

탈모는 나이가 들면서 남성과 여성에 나타나는 두피 탈모가 특징인 안드로겐성 탈모(AGA)가 일반적이다. 다른 탈모로는 미시적 염증성으로 보통 복원이 가능하고 국부적 탈모증이라고 지칭되는 원형 탈모증(AA) 및 화학요법 또는 방사선 치료와 관련된 탈모증(2차 탈모증)이 있다.Hair loss is generally characterized by androgenetic alopecia (AGA), which is characterized by scalp hair loss in men and women as they age. Other hair loss includes alopecia areata (AA), which is usually microscopic inflammatory and can be restored and called local alopecia, and alopecia (secondary alopecia) associated with chemotherapy or radiation therapy.

일반적으로 탈모 현상은 여성보다는 남성에게서 월등하게 그 발생빈도가 높다. 모발이 잘 빠지거나 거칠며 영양이 없는 원인은 아직 과학적으로 명확하게 구명되지는 않았지만, 이는 유전적 소인이 가장 큰 것으로 알려져 있고, 그 밖에 내분비계의 장애, 자율신경계의 이상, 알레르기, 모근의 영양결핍, 세균 감염, 노화 등의 원인으로 추정되고 있다. 최근에 현대인들은 환경오염과 같은 외부 환경적 요인과, 과다한 정신적인 스트레스 등으로 인해여 탈모증의 발생비율이 높아지는 추세다. In general, hair loss is more frequent in men than in women. The cause of hair loss, roughness, and malnutrition has not yet been scientifically clearly identified, but this is known to have the largest genetic predisposition, and other disorders of the endocrine system, abnormalities of the autonomic nervous system, allergies, and malnutrition of the hair roots. , Bacterial infections, and aging. Recently, the incidence rate of alopecia is increasing due to external environmental factors such as environmental pollution and excessive mental stress.

현재, 이러한 탈모치료를 위해서 현재 가장 많이 쓰이고 있는 방법은 자기 자신의 머리털을 이용하여 이식하는 자가모발이식(자기모발이식)이며, 두피에 충분한 혈액을 순환시키기 위한 혈관 확장제(염화카프로니움, 미녹시딜 및 각종 식물의 추출물 등)나 모유두(毛乳頭)에 부착하여 모발을 탈락시키는 남성 호르몬의 작용을 억제하기위한 호르몬제(에스트로겐, 에스트라지올, 프로게스테론 등의 여성 호르몬제) 또는 남성 호르몬 활성화 억제제(펜타데칸산, 휘나스테리드)등을 이용한 약물치료가 널리 시술되고 있다. 그 중 미국의 식품의약국(FDA)로부터 탈모치료제로 허가를 받은 약물은 두 종류(미녹시딜 및 프로페시아)로서 바르는 치료제인 미녹시딜은 혈관 확장작용에 의해, 경구용인 프로페시아는 피나스테라이드를 주제로 한 남성 호르몬의 활성화 억제작용에 의해 탈모방지 효과가 우수한 제제로 많이 이용되고 있다. 하지만, 약물치료의 효과는 투여할 당시에는 그 발모효능이 나타나지만 치료가 중단되면 탈모가 다시 진행되며, 미녹시딜의 경우에는 성기능 장애 등의 부작용이 단점으로 알려져 있다 (Bouhanna, P., Dermatol Surg., 29:1130, 2003; Thiboutot, D., Arch Dermatol., 135:1417, 1999; Messenger, A.G. and Rundegren J., Br J Dermatol., 150:186, 2004). 아울러, 발모 효과를 나타낸다고 보고되어 있는 화합물 또는 천연물들은 그 효과가 미약하거나 전혀 없고, 과학적 혹은 의학적으로도 검증되지 않은 것이 많아 오히려 문제를 일으킬 소지가 있는 것들도 많다. Currently, the most widely used method for the treatment of hair loss is self hair transplantation (self hair transplantation), which is performed by transplanting hair using its own hair, and vasodilators (capronium chloride, minoxidil and Extracts of various plants, etc.) or hormones (female hormones such as estrogen, estradiol, progesterone, etc.) to inhibit the action of male hormones that fall off the hair by attaching it to the nipples or pentadecane Drug treatment using acid, fenasteride) and the like are widely used. Among them, two drugs (Minoxidil and Propecia) that are approved by the US Food and Drug Administration (FDA) for hair loss treatment are Minoxidil, which is a drug applied by vasodilator action, and oral Propecia is a male hormone based on finasteride. It is widely used as an agent having excellent anti-hair loss effect by the activation inhibitory effect. However, the effect of the drug treatment is the hair growth effect at the time of administration, but when the treatment is stopped, hair loss progresses again, and side effects such as sexual dysfunction in minoxidil are known as disadvantages (Bouhanna, P., Dermatol Surg., 29: 1130, 2003; Thiboutot, D., Arch Dermatol., 135: 1417, 1999; Messenger, AG and Rundegren J., Br J Dermatol., 150: 186, 2004). In addition, compounds or natural products that are reported to have a hair growth effect have a weak or no effect, and many have not been scientifically or medically verified, and many may cause problems.

최근, 분자생물학적 기법이 발전함에 따라서, 탈모와 관련된 유전자를 모낭에 전달하거나 유전자 발현을 차단하는 방법으로 시술되는 유전자 치료나 줄기세포를 이용한 탈모치료가 새롭게 부각되고 있다. 하지만, 유전자 치료는 치료의 효능성, 치료비용, 안정성 등에 대해 불확실하고, 치료법이 안전하게 현실화되기까지는 상당한 기간이 걸릴 수 있다는 단점 때문에 임상적용이 용이하지 않은 단점이 있다. Recently, with the development of molecular biological techniques, gene therapy or hair loss treatment using stem cells is newly emerging as a method of transferring genes related to hair loss to hair follicles or blocking gene expression. However, there is a disadvantage that gene therapy is not easy for clinical application because it is uncertain about the efficacy of treatment, cost of treatment, stability, etc., and it may take a considerable time before the treatment is safely realized.

아울러, 줄기세포를 이용한 방법은 줄기세포가 가지고 있는 다분화능을 이용하여, 탈모 또는 무모의 증상을 나타내는 곳에 줄기세포를 주입하여 모낭세포로 분화하도록 유도하는 과정으로 시술되는 방법으로, 지방(fat) 및 지방세포(Adipocyte)가 지방세포형성 및 모포(hair follicle) 형성이 밀접한 관계로 발모에 효과를 보이며, 최근, 지방 줄기 세포(Adipose stem cell)의 주입이 보다 효과적이라고 보고된 바가 있다(Am. J. Anat. 161:85-100, 1981). 하지만, 줄기세포 사용하여 발모효과를 유도하기 위해서는 많은 양의 줄기세포가 필요하지만 아직까지 조직에서 분리한 줄기세포를 임상에 적용할 수 있을 정도로 충분한 양을 얻을 수 있는 배양기술이 미미하여, 실제로 임상에 적용하기에는 어려운 실정이다.In addition, the method using the stem cells is a method of inducing the differentiation of hair follicle cells by injecting stem cells into the hair loss or hair loss showing a symptom of hair loss by using the multipotency of the stem cells, fat (fat) And adipocytes have an effect on hair growth because adipocyte formation and hair follicle formation are closely related, and recently, injection of adipose stem cells has been reported to be more effective (Am. J. Anat. 161: 85-100, 1981). However, in order to induce the hair growth effect using stem cells, a large amount of stem cells are required, but there is still insufficient culture technology to obtain sufficient amount to apply the stem cells isolated from the tissue to the clinical practice. It is difficult to apply.

이에 본 발명자들은 지방 줄기세포를 이용하여 발모를 촉진하고, 탈모를 예방 및 치료하기 위한 효과적은 방법을 개발하고자 연구한 결과, 비타민 D를 포함하는 배지에서 배양하여 비타민 D로 활성화된 지방 줄기세포를 이용하는 경우 지방 줄기세포에 비해서 우수한 발모효과를 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. Therefore, the present inventors have studied to develop an effective method for promoting hair growth and preventing and treating hair loss using fat stem cells. As a result, the present inventors have cultured vitamin D-activated fat stem cells by culturing in a medium containing vitamin D. When used, the present invention was completed by confirming that the hair growth effect was superior to that of fat stem cells.

따라서 본 발명의 목적은 지방 줄기세포의 발모능 증진을 위한 비타민 D의 신규한 용도를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel use of vitamin D for enhancing the hair growth capacity of fat stem cells.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 비타민 D를 유효성분으로 포함하는 지방 줄기세포의 발모능 증진용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for enhancing hair growth ability of fat stem cells containing vitamin D as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 비타민 D를 포함하는 배지에서 지방 줄기세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a method for enhancing the hair growth capacity of fat stem cells, characterized in that the culture of fat stem cells in a medium containing vitamin D.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해서 발모능이 증진된 지방 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a composition for promoting hair growth comprising adipose stem cells enhanced hair growth ability by the method of the present invention as an active ingredient.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해서 발모능이 증진된 지방 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 탈모 또는 무모증의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the another object of the present invention, the present invention provides a composition for the prevention and treatment of hair loss or alopecia comprising fat stem cells enhanced hair growth capacity by the method of the present invention as an active ingredient.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 비타민 D를 포함하는 배지에서 배양되어 비타민 D에 의해서 활성화된 지방 줄기세포가 보다 우수한 발모 촉진 효과를 보인다는 점에 착안하여 비타민 D를 유효성분으로 포함하는 지방 줄기세포의 발모능 증진용 조성물, 비타민 D를 포함하는 배지에서 지방 줄기세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법 및 상기 방법에 의한 지방 줄기세포를 포함하는 탈모 또는 무모증의 예방 및 치료용 조성물 및 발모 촉진용 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.The present invention focuses on the fact that the fat stem cells activated by the vitamin D cultured in a medium containing vitamin D show a better hair growth promoting effect, and thus promote the hair growth ability of the fat stem cells containing vitamin D as an active ingredient. A composition, a method for enhancing hair growth ability of fat stem cells, comprising culturing fat stem cells in a medium containing vitamin D, and a composition for preventing and treating hair loss or alopecia comprising fat stem cells according to the method and promoting hair growth. It is characterized by providing a composition for.

본 발명에서 지방 줄기세포(지방유래 줄기세포)는 개체의 지방조직에서 얻을 수 있는 성체줄기세포(Adult stem cells)를 말한다. 이러한 지방 줄기세포는 지방세포는 물론 근육세포, 연골세포, 뼈세포 등 다양한 종류의 세포로 분화될 수 있는 능력을 가진 다분화능력세포(Multipotent stem cell)이며, 스스로 증식할 수 있는 능력이 있다. 본 발명에서의 지방 줄기세포는 이에 한정되지는 않으나, 주로 인간의 피하지방조직에서부터 지방흡입(liposuction) 방법으로 수득할 수 있으며, 바람직하게는 자신의 피하지방조직에서 수득한 자가 지방 줄기세포일 수 있다.Adipose stem cells (fat-derived stem cells) in the present invention refers to adult stem cells (Adult stem cells) obtained from adipose tissue of an individual. These fat stem cells are multipotent stem cells having the ability to differentiate into various types of cells such as muscle cells, chondrocytes, bone cells, as well as fat cells, and have the ability to proliferate on their own. Adipose stem cells in the present invention is not limited thereto, but can be obtained mainly from the subcutaneous fat tissue of humans by a liposuction method, preferably the autologous adipose stem cells obtained from their subcutaneous fat tissue. have.

상기에서 지방흡입 방법은 주사기를 이용하여 몸에서 지방을 채취하는 것으로 일반적으로, 복부나 둔부의 피하 지방조직에서 미세도관을 이용해 지방을 흡입한 후 이를 원심분리를 하여 정제하는 방법을 말한다. 이러한 방법을 통하여 비교 적 많은 양의 세포를 추출할 수도 있으나, 충분히 지방세포로 분화되지 않은 세포는 이식 후 발모와 관련된 지방세포 등으로의 분화를 확신할 수 없으며, 완전히 성숙한 지방세포는 세포수집 과정에서 손실되거나 이식 후 생착율이 떨어지는 등 효율이 낮고, 대부분의 경우 발모 촉진이나 탈모 예방/치료에 활용하기에는 충분하지 않은 양으로 추출되므로 본 발명에서와 같이 발모능을 높이는 경우 큰 의미가 있다.The liposuction method is to collect fat from the body by using a syringe. In general, it refers to a method of inhaling fat from the subcutaneous adipose tissue of the abdomen or buttocks by inhaling fat and then centrifuging it to purify it. In this way, a relatively large amount of cells can be extracted, but cells that have not been sufficiently differentiated into adipocytes cannot be sure of differentiation into adipocytes associated with hair growth after transplantation. The efficiency is low, such as loss in engraftment loss or loss after transplantation, and in most cases it is extracted in an amount that is not sufficient to promote hair growth or hair loss prevention / treatment, as shown in the present invention has a great meaning.

발모능을 높이기 위하여 처리되는 비타민 D는 10-8 내지 10-4M의 농도로 처리되는 것이 바람직하다. 더 바람직하게는 10-7 내지 10-4M의 농도로, 가장 바람직하게는 10-7 내지 10-5M의 농도로 처리될 수 있다. 이는 지방 줄기세포의 배양시 비타민 D를 추가로 넣은 배지에서 3 내지 36시간동안 배양하는 것에 의해서 수행될 수 있다. 즉, 비타민 D를 포함하는 배지에 지방 줄기세포를 접종하고 3 내지 36시간동안 배양하는 것에 의해서 수행될 수 있다. Vitamin D treated to increase hair growth is preferably treated at a concentration of 10 -8 to 10 -4 M. More preferably at a concentration of 10 −7 to 10 −4 M, most preferably at a concentration of 10 −7 to 10 −5 M. This can be carried out by culturing for 3 to 36 hours in a medium containing additional vitamin D in the culture of fat stem cells. That is, it can be carried out by inoculating fat stem cells in a medium containing vitamin D and incubating for 3 to 36 hours.

비타민 D는 골격 형성에 필요한 칼슘을 대장과 콩팥에서 흡수시키는 데 기여하며, 부갑상선에서 생산되는 파라트호르몬(Parathormone) 과 칼키토닌(Calcitonin)과 협동으로 칼슘을 알맞게 골수로 운반하여 뼈대가 제모양으로 크도록 하는데 결정적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 화학적 구조로 볼 때 비타민 D2(Ergocalciferol])와 D3(Cholecalciferol)로 구분하며, 피부에서 7-디하이드 로코르스테린(7-Dehydrochorsterin)이 태양의 자외선을 받아 형성된다. 본 발명의 비타민 D는 비타민 D2 및 비타민 D3를 모두 포함하며, 이를 처리하는 경우 지방 줄기세포의 발모능이 증진됨이 확인되었다.Vitamin D contributes to the absorption of calcium from the large intestine and kidneys, which are necessary for the formation of the skeleton, and in cooperation with Parathormone and Calcitonin, produced by the parathyroid gland, calcium is properly transported to the bone marrow to make bones look like It is known to play a decisive role in making it large. In terms of chemical structure, it is divided into vitamin D2 (Ergocalciferol]) and D3 (Cholecalciferol). In the skin, 7-dehydrochorsterin is formed under the sun's ultraviolet rays. Vitamin D of the present invention includes both vitamin D2 and vitamin D3, it was confirmed that the hair growth capacity of the fat stem cells when treated.

본 발명에서 배양은 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 배양과정은 당업자라면 용이하게 조정하여 사용할 수 있다. 이러한 다양한 배양 방법은 다양한 문헌(예를 들면, James et al., Biochemical Engineering, Prentice-Hall International Editions)에 개시되어 있다. 세포의 성장방식에 따라 현탁배양과 부착배양을 배양방법에 따라 회분식과 유가식 및 연속배양식의 방법으로 구분된다.Cultivation in the present invention can be made according to suitable media and culture conditions known in the art. Such a culturing process can be easily adjusted and used by those skilled in the art. Such various culture methods are disclosed in various documents (eg, James et al., Biochemical Engineering, Prentice-Hall International Editions). Suspension cultures and adherent cultures are classified into batch, fed-batch and continuous cultures according to the culture method.

배양에 사용되는 배지는 지방 줄기세포의 배양 요구조건을 적절하게 만족시켜야 하다. 상기 배지는 다양한 탄소원, 질소원, 미량원소 성분 및 성장인자 등을 포함한다. 사용될 수 있는 탄소원의 예로는, 포도당, 자당, 유당, 과당(fructose), 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유와 같은 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤 및 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 탄소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 질소원의 예로는, 펩톤, 효모 추출물, 육즙, 맥아추출물, 옥수수 침지액(CSL), 및 대두밀과 같은 유기 질소원 및 요소, 황산암모늄, 염화암모늄, 인산암모늄, 탄산암모늄 및 질산암모늄과 같은 무기 질소원이 포함된다. 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 상기 배지에는 인원으로서, 인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨 및 대응되는 소듐-함유 염이 포함될 수 있다. 또한, 황산마그네슘 또는 황산철과 같은 금속염을 포함할 수 있다. 그 외에, 아미노산 및 적절한 전구체 등이 포함될 수 있다. 배양 중에 수산화암모늄, 수산화칼륨, 암모니아, 인산 및 황산과 같은 화합물을 적절한 방식으로 첨가하여, pH를 조정할 수 있다. 또한, 배양 중에는 지방산 폴리글리콜 에스테르와 같은 소포제를 사용하여 기포 생성을 억제할 수 있다. 바람직하게 본 발명에서 배양 배지는 동물세포 배양 기술분야에서 통상적으로 사용되는 배지를 사용할 수 있으며, 상업적으로 입수가능한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium), DMEM-F12, MEM(Minimum Essential Medium), IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium), α-MEM, RPMI 1640 배지 등을 사용할 수 있으며, 상기 배지를 기본으로 사용하여 상기한 바와 같이 비타민 D를 추가로 첨가한 것을 사용할 수 있다. 아울러, 필요시 우태아 혈청(fetal bovine serum, FBS)이나 성장인자 또는 분화관련 인자를 추가로 포함할 수 있으며, 줄기세포 배양을 위해 통상적으로 사용되는 항생제, 예를 들어, 페니실린(penicillin), 스트렙토마이신(streptomycin), 카나마이신(kanamycin), 암피실린(ampicillin) 또는 암포테리신 B(amphotericin B) 등과 같은 항생제를 단독으로 또는 혼합하여 첨가할 수 있다. 배양시에는 통상의 동물세포의 배양조건에서와 같이 일정농도(예를 들어 5%)의 CO2를 유지시킬 수 있다. 배양시의 온도는 보통 20 ℃ 내지 45 ℃, 바람직하게는 25 ℃ 내지 40 ℃를 유지할 수 있다. The medium used for culturing must adequately meet the culture requirements of fat stem cells. The medium includes various carbon sources, nitrogen sources, trace element components, growth factors, and the like. Examples of carbon sources that may be used include glucose, sucrose, lactose, fructose, maltose, starch, carbohydrates such as cellulose, soybean oil, sunflower oil, castor oil, fats such as coconut oil, palmitic acid, stearic acid, linoleic acid Fatty acids such as, glycerol and alcohols such as ethanol, organic acids such as acetic acid. These carbon sources may be used alone or in combination. Examples of nitrogen sources that can be used include organic nitrogen sources and urea such as peptone, yeast extract, gravy, malt extract, corn steep liquor (CSL), and soybean wheat, such as ammonium sulfate, ammonium phosphate, ammonium phosphate, ammonium carbonate and ammonium nitrate Inorganic nitrogen sources are included. These nitrogen sources may be used alone or in combination. The medium may include potassium dihydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate and the corresponding sodium-containing salts as a person. It may also include metal salts such as magnesium sulfate or iron sulfate. In addition, amino acids and suitable precursors may be included. During incubation, compounds such as ammonium hydroxide, potassium hydroxide, ammonia, phosphoric acid and sulfuric acid can be added in an appropriate manner to adjust the pH. In addition, during the culture, antifoaming agents such as fatty acid polyglycol esters can be used to suppress bubble generation. Preferably, the culture medium in the present invention may use a medium commonly used in the animal cell culture art, commercially available Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), DMEM-F12, Minimum Essential Medium (MEM), IMDM (Iscove's) Modified Dulbecco's Medium), α-MEM, RPMI 1640 medium and the like can be used, and using the medium as a base may be used to add vitamin D as described above. In addition, fetal bovine serum (FBS) or growth factor or differentiation-related factors may be additionally included if necessary, and antibiotics commonly used for culturing stem cells, for example, penicillin and streptoto Antibiotics such as streptomycin, kanamycin, ampicillin or amphotericin B may be added alone or in combination. At the time of cultivation, CO 2 can be maintained at a constant concentration (for example, 5%) as in the culture conditions of normal animal cells. The temperature at the time of cultivation can normally be maintained at 20 ° C to 45 ° C, preferably 25 ° C to 40 ° C.

배양 종료 후에 배양액과 지방 줄기세포를 분리하기 위해 원심분리(centrifugation) 또는 여과(filtration)과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 당업자가 필요에 따라 수행할 수 있다.After the end of the culture may be subjected to centrifugation (filtration) or filtration (separation) process to separate the culture medium and fat stem cells, these steps can be performed by those skilled in the art as needed.

본 발명의 일실시예에서는 비타민 D에 의한 지방 줄기세포의 활성화를 확인하기 위하여 비타민 D 처리 후 발모 억제 관련 인자인 인터페론 감마의 발현율을 확인하였다. 그 결과, 비타민 D2 또는 비타민 D3의 처리에 의하여 인터페론 감마의 발현이 감소되는 것을 확인하였다. In one embodiment of the present invention was confirmed the expression rate of interferon gamma, a factor related to hair growth inhibition after vitamin D treatment in order to confirm the activation of fat stem cells by vitamin D. As a result, it was confirmed that the expression of interferon gamma is reduced by the treatment of vitamin D2 or vitamin D3.

본 발명의 다른 실시예에서는 비타민 D가 활성화된 지방 줄기세포의 안전성을 확인하기 위하여 지방 줄기세포의 이식에 따른 면역반응 유발 정도를 확인하였다. 그 결과, 이식한 마우스의 비장이 대조군과 차이가 없어 안전성에 문제점이 없음을 알 수 있었다.In another embodiment of the present invention, in order to confirm the safety of the vitamin D-activated fat stem cells, the degree of immune response following the transplantation of fat stem cells was confirmed. As a result, the spleen of the transplanted mouse was not different from the control group, it can be seen that there is no problem in safety.

본 발명의 또다른 실시예에서는 털이 제거된 마우스의 등 부위에 비타민 D가 활성화된 지방 줄기세포를 이식하여 모발 생성 효과를 확인하였다. 대조군으로 생리식염수만 주입한 그룹 및 비타민 D로 활성화되지 않은 지방 줄기세포를 이식한 그룹을 사용하여 비교하였다. 그 결과, 비타민 D로 활성화된 지방 줄기세포를 이식한 그룹이 대조군에 비하여 모발이 더 빠르고 풍부하게 생성되어 더 우수한 모발 증식 효과가 있음을 알 수 있었다. 특히, 비타민 D의 활성화로 지방 줄기세포의 발모능이 더 높아짐을 알 수 있었다.In another embodiment of the present invention, the hair growth effect was confirmed by transplanting the vitamin D-activated fat stem cells to the back of the mouse hair removal. The control group was compared with physiological saline-only group and vitamin D-inactivated adipose stem cells. As a result, the group transplanted with vitamin D-activated adipose stem cells was found to have a faster and more abundant hair than the control group, resulting in a better hair growth effect. In particular, the activation of vitamin D was found to increase the hair growth capacity of fat stem cells.

따라서, 본 발명은 비타민 D로 활성화된 지방 줄기세포를 포함하는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a composition for promoting hair growth comprising fat stem cells activated with vitamin D.

본 발명에서 발모 촉진은 탈모된 부위 또는 털이 없는 부위(무모 부위)에 모낭을 형성하여 털이 나도록 유도하는 것을 말한다.In the present invention, hair growth promotion refers to inducing hair to form hair follicles in a hair loss site or a hairless site (hair loss site).

본 발명에 따른 조성물은 본 발명의 방법에 의해서 발모능이 증진된 지방 줄기세포를 단독으로 함유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.The composition according to the present invention may contain adipose stem cells having enhanced hair growth ability by the method of the present invention alone or may further contain one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. As used herein, 'pharmaceutically acceptable' refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic or similar reaction when administered to a human.

본 발명의 발모용 조성물은 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구적으로 투여할 수 있다. 더 바람직하게는 경피 투여 또는 피하 내에 투여될 수 있다.The hair growth composition of the present invention can be administered to a mammal by any method, and preferably, parenterally. More preferably percutaneously or subcutaneously.

본 발명의 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 비경구 투여용 제제 로 제형화 할 수 있으며, 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.The compositions of the present invention may be formulated into preparations for parenteral administration according to the route of administration as described above, which formulations are formulas generally known in all pharmaceutical chemistries (Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack). Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour.

본 발명의 지방 줄기세포의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 탈모 상태에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으며, 그 유효 투여량은 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.The total effective amount of the adipose stem cells of the present invention may be administered to a patient in a single dose, or may be administered by a fractionated treatment protocol that is administered for a long time in multiple doses. . The composition of the present invention can vary the content of the active ingredient according to the state of hair loss, the effective dosage is not only the route of administration and the number of treatment, but also the age, weight, health status, sex, severity of the disease, diet and excretion rate of the patient. One of ordinary skill in the art will be able to determine the appropriate effective dosage, taking into account various factors. The composition according to the present invention is not particularly limited to the formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is shown.

본 발명의 발모 촉진용 조성물에 함유된 지방 줄기세포는 체내에 투여된 후 지방세포로 분화하여 모낭세포가 발모 기능을 원활하게 수행하도록 간접적 역할을 수행하여 발모가 촉진될 수도 있으며, 모낭세포 자체로 분화하여 발모에 직접적으로 관여할 수도 있다.Adipose stem cells contained in the composition for promoting hair growth of the present invention may be administered into the body and then differentiate into adipocytes, thereby inducing a follicle cell to perform hair growth functions smoothly, thereby promoting hair growth, Differentiation may directly contribute to hair growth.

한편, 본 발명은 비타민 D로 활성화된 지방 줄기세포를 포함하는 탈모 또는 무모증 치료 및 예방용 조성물을 제공한다.On the other hand, the present invention provides a composition for the treatment and prevention of hair loss or alopecia comprising fat stem cells activated with vitamin D.

본 발명의 조성물이 적용될 수 있는 부위는 두피 뿐만 아니라 발모를 필요로 하는 신체 부위라면 어디나 적용할 수 있다. 예를 들면, 외상으로 인한 흉터로 모발 또는 털이 손상된 부위 또는 단순 미용효과를 목적으로 하는 넓은 이마 또는 M형 이마, 속눈썹 또는 눈썹 및 무모증의 상태 호전에도 사용할 수 있다.The site to which the composition of the present invention can be applied can be applied to any part of the body that requires hair growth as well as the scalp. For example, it may be used to improve the condition of hair or hair damaged areas or wide forehead or M forehead, eyelashes or eyebrows, and alopecia for the purpose of simple cosmetic effect due to trauma scars.

한편, 본 발명에서 비타민 D의 처리로 인해 지방 줄기세포의 발모능이 향상되므로 본 발명은 비타민 D를 포함하는 배지에서 지방 줄기세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법을 제공한다.On the other hand, since the hair growth ability of fat stem cells is improved by the treatment of vitamin D in the present invention, the present invention provides a method for enhancing hair growth ability of fat stem cells, characterized in that the culture of fat stem cells in a medium containing vitamin D. .

참고로, 본 발명에서 언급한 뉴클레오타이드 및 단백질 작업에는 다음의 문헌을 참조할 수 있다(Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.(1982); Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989); Deutscher, M., Guide to Protein Purification Methods Enzymology, vol. 182. Academic Press. Inc., San Diego, CA(1990)). For reference, reference may be made to the nucleotide and protein operations referred to in the present invention (Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1982); Sambrook et. al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Deutscher, M., Guide to Protein Purification Methods Enzymology, vol. 182. Academic Press. Inc., San Diego, CA ( 1990).

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에서 지방 줄기세포는 비타민 D에 의해서 발모능이 향상되어 더 우수한 발모 효과를 나타내게 된다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 발모능 증진방법은 발모가 필요한 경우나 탈모/무모증의 예방 및 치료를 위하여 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the fat stem cells in the present invention is improved hair growth ability by the vitamin D will exhibit a more excellent hair growth effect. Therefore, the composition and the method of enhancing hair growth ability of the present invention can be usefully used for when hair growth is necessary or for prevention and treatment of hair loss / hair loss.

이하. 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Below. The present invention will be described in detail by way of examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

비타민 D 처리에 의한 지방 줄기세포의 활성화 및 이의 확인Activation and Confirmation of Adipose Stem Cells by Vitamin D Treatment

<1-1> 지방 줄기세포의 배양<1-1> Adipose Stem Cell Culture

지방세포로 분화가 가능한 마우스 3T3-L1 세포주를 이용하여 실험을 하였으며, 실험에 사용된 세포의 배양은 37℃, 5% CO2로 설정된 항온항습기에서 10% FBS를 함유된 DMEM 배지에서 배양하였으며, 주 1회 트립신을 처리하여 계대배양을 하였다.Experiments were performed using a mouse 3T3-L1 cell line capable of differentiating into adipocytes, and the cells used in the experiment were cultured in DMEM medium containing 10% FBS in a thermohygrostat set at 37 ° C and 5% CO2. One trypsin treatment was used for subculture.

비타민 D의 처리를 위하여 10% FBS가 함유된 DMEM 배지에서 세포를 키우다가 컨플루언시(confluency)가 70% 정도가 되었을 때, 비타민 D를 첨가하고 일정시간동안 배양 후에 세포를 수득하였다. Cells were grown in DMEM medium containing 10% FBS for the treatment of vitamin D. When the confluency reached 70%, vitamin D was added and cells were obtained after incubation for a period of time.

<1-2> 비타민 D3에 의한 지방줄기세포의 활성화 유도 및 확인<1-2> Induction and Identification of Adipose Stem Cells by Vitamin D3

비타민 D3 처리에 의하여 지방줄기세포의 활성화 유도를 확인해 보기 위해서 RT-PCR 실험을 시행하였다. 지방줄기세포에 비타민 D3(10-7 M)를 시간별로, 0, 3, 6, 12시간 동안 처리한 후, 인터페론 감마(interferon gamma) mRNA 양(level)을 살펴보았다. RT-PCR was performed to confirm the activation of adipose stem cells by vitamin D3 treatment. Adipose stem cells were treated with vitamin D3 (10 -7 M) hourly, 0, 3, 6 and 12 hours, and then examined the interferon gamma mRNA level.

그 결과, 도 1에서 보듯이, 하우스키핑 유전자(house keeping gene)인 베타-액틴(beta actin)은 거의 동일하게 발현되지만, 발모 억제 관련 인자인 인터페론 감마(Br J Dermatol. 2005 Apr;152(4):623-31)의 발현율은 비타민 D3 처리에 의하여 감소되는 것을 확인하였다. 이와 같은 결과로 비타민 D3(10-7 M) 처리에 의해, 지방줄기세포가 발모촉진 형태로 활성화 되는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 1, the beta-actin (house keeping gene) is expressed almost the same, but interferon gamma (Br J Dermatol. 2005 Apr; 152 (4 ): 623-31) was confirmed to be reduced by vitamin D3 treatment. As a result, it was confirmed that the adipose stem cells are activated in the form of hair growth by treatment with vitamin D3 (10 -7 M).

<1-3> 비타민 D2에 의한 지방줄기세포의 활성화 유도 및 확인<1-3> Induction and Confirmation of Adipose Stem Cells by Vitamin D2

비타민 D2 처리에 의하여 지방줄기세포의 활성화 유도를 확인해 보기 위해서 RT-PCR 실험을 시행하였다. 지방줄기세포에 비타민 D2를 10-7,10-6,10-5,10-4 M의 농도별로, 12시간 동안 처리한 후, 인터페론 감마(interferon gamma) mRNA 양(level)을 살펴보았다. RT-PCR was performed to confirm the activation of adipose stem cells by vitamin D2 treatment. After a 12-hour treatment with vitamin D2 at concentrations of 10 −7 , 10 −6 , 10 −5 , 10 −4 M, the adipose stem cells were examined for interferon gamma mRNA levels.

그 결과, 도 2에서 보듯이, 하우스키핑 유전자(house keeping gene)인 베타-액틴(beta actin)은 거의 동일하게 발현되지만, 발모 억제 관련 인자인 인터페론 감마(Br J Dermatol. 2005 Apr;152(4):623-31)의 발현율은 비타민 D2 처리에 의하여 감소되는 것을 확인하였다. 이와 같은 결과로 비타민 D2 처리에 의해, 지방줄기세포가 발모촉진 형태로 활성화 되는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 2, the beta-actin (house keeping gene) is expressed almost the same, but interferon gamma (Br J Dermatol. 2005 Apr; 152 (4 ): 623-31) was confirmed to be reduced by vitamin D2 treatment. As a result, it was confirmed that the fat stem cells are activated in the form of hair growth by the treatment of vitamin D2.

<실시예 2><Example 2>

지방 줄기세포 및 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 안전성 확인Confirmation of the Safety of Adipose Stem Cells and Adipose Stem Cells Treated with Vitamin D3

모발 생장 촉진시 사용되는 지방 줄기 세포 및 비타민 D3 처리의 안전성을 확인하기 위하여 지방세포의 주입에 따른 면역반응 유발 정도를 다음과 같이 알아보았다.In order to confirm the safety of fat stem cells and vitamin D3 treatment used to promote hair growth, the induction of immune response following the injection of fat cells was examined as follows.

10% FBS가 함유된 DMEM 배지에서 배양한 지방 줄기세포를 비타민 D3(10-7 M) 처리를 한 군 및 처리 하지 않은 군으로 나누어 배양한 후, 배양배지를 확실히 제거한 다음, 각각의 지방 줄기 세포 (1.5 x 107 / 200 μl)를 C57BL6 마우스(8주령, (주)오리엔트 바이오)의 피하(등부위)에 이식하였다. 음성대조군으로 같은 부피의 생리식염수를 주입한 군을 사용하였다. 이식된 마우스는 공조시스템하에서 22ㅁ2ㅀC의 조건으로 30일간 사육한 후 비장을 적출하여 그 크기를 비교하였다. 면역 거부 반응 발생 시, 림프구와 같은 면역세포의 생성 및 활성이 증대 되고, 이들의 생성과 밀접한 관련이 있는 비장의 크기 비대해지게 된다. 따라서 면역거부반응의 정도를 비장의 크기를 비교함으로써 살펴볼 수 있다.Adipose stem cells cultured in DMEM medium containing 10% FBS were divided into groups treated with and without vitamin D3 (10 -7 M), and then cultured. a (1.5 x 10 7/200 μl ) were implanted subcutaneously (upper dorsal) of C57BL6 mice (8 weeks of age, Ltd. Orient bio). As a negative control group, a group in which the same volume of saline was injected was used. The transplanted mice were reared for 30 days under the condition of 22 W2 ㅀ C under the air conditioning system, and their spleens were extracted and their sizes were compared. When an immune rejection reaction occurs, the production and activity of immune cells such as lymphocytes is increased, and the size of the spleen is closely related to their production. Therefore, the degree of immune rejection can be examined by comparing the size of the spleen.

그 결과, 도 3에서 보듯이 생리식염수만 넣어준 마우스와 비타민 D3 처리 또는 미처리한 지방 줄기 세포를 넣어준 마우스에 대해서 각각 비장의 크기가 거의 같음을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명의 지방 줄기 세포를 사용하여도 지방 줄기 세포에 의한 면역 거부반응 유도가 없어 안전성에 별다른 문제가 없음을 알 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 3, the spleens were almost the same in the mice fed with saline only and the mice fed with vitamin D3 treated or untreated fat stem cells. Therefore, even when using the adipose stem cells of the present invention, there was no problem in safety because there is no induction of immune rejection by the adipose stem cells.

<실시예 3><Example 3>

비타민 D3로 활성화된 지방 줄기세포의 효과 확인Confirmation of the Effect of Adipose Stem Cells Activated by Vitamin D3

본 발명의 비타민 D3로 활성화된 지방 줄기세포의 이식시의 모발생장효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다. C57BL6 마우스(8주령)의 등 부위의 털을 제거한 후, 음성 대조군으로 생리식염수(200 μl) 단독 주입군, 지방 줄기세포(1.5 x 107 / 200 μl)를 이식한 군 및 비타민 D3(10-7 M)로 활성화한(비타민 D3를 포함하는 배지에서 24시간 동안 배양) 지방 줄기세포(1.5 x 107 / 200 μl)를 이식한 군으로 나누어 각각 마우스 피하에 이식하였다. 이식된 마우스는 공조시스템하에서 22ㅁ2ㅀC의 조건으로 15일간 사육한 후 마우스 등쪽 모발 생성 정도를 살펴보았다.In order to confirm the hair growth effect of the transplantation of the activated fat stem cells with vitamin D3 of the present invention was carried out as follows. After removing the parts fur, such as the C57BL6 mice (8 weeks old), as a negative control saline solution (200 μl) alone treated group, fat stem cells (1.5 x 10 7/200 μl ) the transplanted group, and vitamin D3 (10 - 7 M) a (incubated for 24 hours in a medium containing vitamin D3 as active) by dividing the group transplanted fat stem cells (1.5 x 10 7/200 μl ) were each implanted subcutaneously in mice. The transplanted mice were reared for 15 days under conditions of 22 ㅁ 2 ㅀ C under an air conditioning system, and the degree of dorsal hair production was examined.

그 결과, 도 4 및 도 5에서 보듯이, 지방 줄기 세포를 주입한 부분을 중심으로 모발이 생성됨을 확인할 수 있었으며, 본 발명에서의 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 발모능이 아무런 처리가 없는 지방 줄기세포의 발모능에 비해서 훨씬 우수함을 알 수 있었다. As a result, as shown in Figures 4 and 5, it was confirmed that the hair is generated around the portion injected with the fat stem cells, the hair growth capacity of the fat stem cells treated with vitamin D3 in the present invention is no fat treatment It was found to be much superior to the hair growth ability of stem cells.

발모 스코어(score)를 측정한 것에 대해서도 음성대조군인 생리식염수를 투여한 군 및 지방 줄기세포만을 이식한 군에 비해 비타민 D3로 활성화한 지방 줄기세포를 이식한 군의 발모 스코어가 높아, 본 발명에서의 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 발모능이 아무런 처리가 없는 지방 줄기세포의 발모능에 비해서 훨씬 우수함을 알 수 있었다. 이 때, 발모 스코어 평가는 훈련된 3인의 평가결과를 평균하였으며, 그 기준은 다음과 같다: 0점: 검은색 20% 미만, 1점: 검은색 50% 미만, 육안으로 털 보이지 않음, 2점: 검은색 50% 이상, 육안으로 털 보이지 않음, 3점: 검은색 50% 이상, 짧은 털 보임, 4점: 검은색 70% 이상, 털이 길어지는 현상 관찰, 5점: 검은색 90% 이상, 제모부위와 제모하지 않은 부위의 구별이 되지 않음.In the present invention, the hair growth score of the group transplanted with the vitamin D3-activated fat stem cells was higher than that of the group treated with the normal saline solution and the group transplanted with only the fat stem cells. It was found that the hair growth ability of the fat stem cells treated with vitamin D3 was significantly superior to that of the fat stem cells without any treatment. At this time, the hair growth score evaluation averaged the evaluation results of the three trained, the criteria are as follows: 0 points: less than 20% black, 1 point: less than 50% black, no visible hair, 2 points : 50% black, no visible hair, 3 points: 50% black, short hairs, 4 points: 70% black, longer hairs, 5 points: 90% black, There is no distinction between the depilatory area and the depilatory area.

따라서, 비타민 D3의 처리로 인해서 지방 줄기세포가 활성화되어 지방 줄기세포가 가지는 발모능이 한층 더 향상됨을 알 수 있었다. Therefore, it can be seen that the adipose stem cells are activated by the treatment of vitamin D3, thereby improving the hair growth ability of the fat stem cells.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에서 지방 줄기세포는 비타민 D에 의해서 발모능이 향상되어 더 우수한 발모 효과를 나타내게 된다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 발모능 증진방법은 발모가 필요한 경우나 탈모/무모증의 예방 및 치료를 위하여 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the fat stem cells in the present invention is improved hair growth ability by the vitamin D will exhibit a more excellent hair growth effect. Therefore, the composition and the method of enhancing hair growth ability of the present invention can be usefully used for when hair growth is necessary or for prevention and treatment of hair loss / hair loss.

도 1은 비타민 D3로 처리된 지방줄기세포에서의 인터페론 감마(IFN-γ) mRNA 발현율을 확인함으로써, 지방줄기세포의 활성화를 확인한 것이다.Figure 1 confirms the interferon gamma (IFN-γ) mRNA expression rate in adipose stem cells treated with vitamin D3, confirming the activation of adipose stem cells.

도 2는 비타민 D2로 처리된 지방줄기세포에서의 인터페론 감마(IFN-γ) mRNA 발현율을 확인함으로써, 지방줄기세포의 활성화를 확인한 것이다.Figure 2 confirms the interferon gamma (IFN-γ) mRNA expression rate in adipose stem cells treated with vitamin D2, confirming the activation of adipose stem cells.

도 3은 지방 줄기세포 및 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 체내 안전성을 확인한 것이다.(A: 생리식염수 주입군, B : 지방 줄기 세포 단독 이식군, C: 비타민 D3 처리 지방 줄기세포 이식군)Figure 3 confirms the safety of the body stem cells and fat stem cells treated with vitamin D3 (A: physiological saline injection group, B: fat stem cell transplant group, C: vitamin D3 treatment fat stem cell transplant group)

도 4는 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 발모능을 확인한 것이다. (A: 생리식염수 주입 직후 , B: 지방 줄기세포 단독 이식 직후, C: 비타민 D3 처리 지방 줄기세포 이식 직후, D: 생리식염수 주입 15일후 , E: 지방 줄기 세포 단독 이식 15일후, F: 비타민 D3 처리 지방 줄기세포 이식 15일후)Figure 4 confirms the hair growth capacity of fat stem cells treated with vitamin D3. (A: Immediately after physiological saline injection, B: Immediately after fat stem cell transplantation alone, C: Immediately after fat stem cell transplantation, D: 15 days after physiological saline injection, E: 15 days after fat stem cell alone implantation, F: Vitamin D3 15 days after transplantation of treated fat stem cells)

도 5는 비타민 D3로 처리된 지방 줄기세포의 발모능을 제시된 기준에 의해 스코어링(scoring)을 나타낸 것이다. 이는 지방줄기세포 이식 직후와 이식 15일 후의 것을 데이터화 확인한 것이다5 shows scoring of hair growth ability of adipocytes treated with vitamin D3 by the indicated criteria. This data was confirmed immediately after fat stem cell transplantation and 15 days after transplantation.

Claims (8)

비타민 D를 유효성분으로 포함하는 지방 줄기세포의 발모능 증진용 조성물.A composition for enhancing hair growth ability of fat stem cells comprising vitamin D as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 비타민 D는 비타민 D2 또는 비타민 D3인 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the vitamin D is vitamin D2 or vitamin D3. 제1항에 있어서, 상기 지방 줄기세포는 자가 지방 줄기세포인 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the adipocytes are autologous adipocytes. 비타민 D를 포함하는 배지에서 지방 줄기세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 지방 줄기세포의 발모능 증진 방법.A method for enhancing hair growth ability of fat stem cells, comprising culturing fat stem cells in a medium containing vitamin D. 제4항에 있어서, 상기 배양은 비타민 D를 포함하는 배지에 지방 줄기세포를 접종하고 3시간 내지 36시간동안 배양하는 것임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 4, wherein the culturing is inoculating fat stem cells in a medium containing vitamin D and culturing for 3 to 36 hours. 제5항에 있어서, 상기 비타민 D는 10-8 내지 10-4M의 농도로 배지에 포함되는 것임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 5, wherein the vitamin D is characterized in that it is included in the medium at a concentration of 10 -8 to 10 -4 M. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항의 방법에 의해서 발모능이 증진된 지방 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for promoting hair growth comprising fat stem cells having enhanced hair growth by the method of any one of claims 4 to 6 as an active ingredient. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항의 방법에 의해서 발모능이 증진된 지방 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 탈모 또는 무모증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing and treating hair loss or alopecia comprising fat stem cells having enhanced hair growth by the method of any one of claims 4 to 6 as an active ingredient.
KR1020090105129A 2009-11-02 2009-11-02 Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient KR101126618B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090105129A KR101126618B1 (en) 2009-11-02 2009-11-02 Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090105129A KR101126618B1 (en) 2009-11-02 2009-11-02 Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110048363A KR20110048363A (en) 2011-05-11
KR101126618B1 true KR101126618B1 (en) 2012-03-26

Family

ID=44239524

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020090105129A KR101126618B1 (en) 2009-11-02 2009-11-02 Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101126618B1 (en)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080109725A (en) * 2006-01-27 2008-12-17 (주)프로스테믹스 Mass producing method of growth factor using adipose derived adult stem cells

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080109725A (en) * 2006-01-27 2008-12-17 (주)프로스테믹스 Mass producing method of growth factor using adipose derived adult stem cells

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dermatology online journal, 4(1), 2, 1998*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110048363A (en) 2011-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110540958B (en) Preparation of umbilical cord mesenchymal stem cell secretory factor and application thereof in hair growth
CN114699446A (en) Exosome compound liquid for treating alopecia and preparation method thereof
KR101810385B1 (en) Composition comprising GDF11 and uses thereof
KR102456734B1 (en) A genus of Staphylococcus strain and uses thereof
CN112402358B (en) Probiotic plant fermentation product with hair loss prevention function and preparation method thereof
KR100802144B1 (en) Compositions for inhibiting hair loss or promoting hair growth
US20160287511A1 (en) Formulation for Treatment of Hairs
CN110548031B (en) Composition for enhancing hair growth induction ability of adipose-derived stem cells comprising udenafil as active ingredient
KR102003606B1 (en) Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising Minoxidil as an active ingredient
KR101374277B1 (en) Composition for promoting hair growth containing fermented extracts of herb mixture
KR101656511B1 (en) Conditioned culture medium cultivated with adipose-derived stem cells having improved hair growth and hair loss prevention activity and method for preparing the same
KR101126618B1 (en) Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising vitamin D as an active ingredient
JP2019026573A (en) Hair restorer
KR100903283B1 (en) Hair growing material which contains a deer antler ingredient and its manufacturing method
CN105477357A (en) Preparation method of extract capable of promoting hair growth
KR102124272B1 (en) Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem cell comprising HB-EGF as an active ingredient
KR20190003303A (en) Composition for anti-aging containing epidermal stem cell conditioned medium and use thereof
KR101893339B1 (en) Composition comprising GDF11 and uses thereof
KR101111094B1 (en) Method for manufacturing hair-restorer and fallen hair prevention
KR20220096031A (en) Brevibacillus borstelensis strain and its use for improving hair or scalp condition
KR20130116972A (en) Hair growth material and product using culture another adipose-derived stem cells and manufacturing method of it
JP3357746B2 (en) Hair restorer
CN110923197A (en) Culture medium for hair follicle source cells
CN116350535A (en) Hair-fixing and developing composition and application thereof
KR102280994B1 (en) Composition for preventing hair loss or promoting hair growth comprising thrombopoietin

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150224

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160226

Year of fee payment: 5

LAPS Lapse due to unpaid annual fee