KR101081451B1 - Composition for Preventing or Treating of Obesity Comprising Secoiridoid Derivatives as Active Ingredients - Google Patents

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Abstract

본 발명은 세코이리도이드(secoiridoid) 유도체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 세코이리도이드 유도체는 지방세포 분화의 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소, 공복시 혈당 감소 및 혈중 인슐린 농도의 감소를 초래하여, 궁극적으로 비만의 예방 또는 치료 활성을 나타낸다.The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of obesity, comprising sequoidoid derivative (secoiridoid) derivative as an active ingredient. The secoirioid derivatives of the present invention can inhibit adipocyte differentiation, decrease body fat mass, decrease visceral fat mass, decrease total cholesterol concentration, decrease plasma triglyceride and hepatic triglyceride, decrease fasting blood glucose and decrease blood insulin concentration. Resulting in a prophylactic or therapeutic activity of obesity.

비만, 올레우로페인, 물푸레나무, 세코이리도이드 Obesity, oleuropein, ash, secoirioid

Description

세코이리도이드 유도체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Preventing or Treating of Obesity Comprising Secoiridoid Derivatives as Active Ingredients}Composition for Preventing or Treating of Obesity Comprising Secoiridoid Derivatives as Active Ingredients}

본 발명은 물푸레나무과 식물 추출물 또는 세코이리도이드 유도체를 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of obesity, including the ash plant or secoirioid derivatives.

생활환경의 변화에 의해 현대인들의 내장지방형 비만이 증가하면서 당뇨병, 고혈압, 지질대사이상, 인슐린저항성 등을 수반하는 대사증후군(metabolic syndrome)의 발병이 급증하고 있다. 이들 질환은 상호간의 발생위험을 증가시키며, 노화, 스트레스 및 면역기능저하 등의 다원적인 생체대사변화와 관련이 있는 공통 질환이다.Due to the change in living environment, the visceral fat type obesity of modern people has increased, and the incidence of metabolic syndrome accompanying diabetes, hypertension, lipid metabolism abnormality, insulin resistance, etc. is increasing rapidly. These diseases increase the risk of mutual development and are common diseases associated with multiple metabolic changes such as aging, stress, and immune dysfunction.

2005년 국민건강ㆍ영양조사결과에 의하면 20세 이상 한국성인의 32%가 비만으로 나타났다(성인남자의 35.2%, 여자의 28.3%). 한국인의 소아비만 발병률도 최근 급증하고 있으며, 2005년에는 초등학생의 11.3%, 중학생 10.7%, 고등학생 16% 가 비만으로 분류되었으며(BMI ≥ 25 kg/m2), 과체중(BMI ≥ 23 kg/m2) 또는 비만청소년의 17%가 대사증후군을 나타냈다.According to the 2005 National Health and Nutrition Survey, 32% of Korean adults aged 20 and over were obese (35.2% of adult men and 28.3% of women). The incidence of childhood obesity in Korea has also increased rapidly.In 2005, 11.3% of elementary school students, 10.7% of middle school students, and 16% of high school students were classified as obese (BMI ≥ 25 kg / m 2 ), and overweight (BMI ≥ 23 kg / m 2). Or 17% of obese adolescents had metabolic syndrome.

이와 같은 과체중 및 비만인구의 증가는 만성질환 유병률 증가로 이어지는데, 그 예로 2005년 30세 이상 한국인의 고혈압(남자 30.2%, 여자 25.6%), 당뇨병(남자 9.0%, 여자 7.2%), 그리고 고콜레스테롤혈증 유병률(남자 7.5%, 여자 8.8 %)이 모두 다른 나라에 비해 매우 높게 나타나고 있다. 2005년, 당뇨병으로 인한 사망률은 한국인의 경우 인구 100,000명당 35.5명으로, 일본 (5.9명), 영국 (7.5명), 또는 독일 (16.6명)에 비해 3-7배 이상 높은 것으로 조사되었다. 한국인의 당뇨병 환자수의 증가추이를 살펴보면, 3,000,000명이고, 2030년에는 5,450,000명으로 증가할 것으로 예측되는데, 이는 곧 한국인의 10%가 당뇨병환자가 된다는 것을 의미한다.This increase in overweight and obesity leads to an increase in the prevalence of chronic diseases, such as high blood pressure (30.2% male, 25.6% male), diabetes (9.0% male, 7.2% female), and high cholesterol in Koreans aged 30 and over in 2005. The prevalence of bloodemia (7.5% male and 8.8% female) is very high compared to other countries. In 2005, the mortality rate from diabetes was 35.5 per 100,000 people in Korea, more than 3-7 times higher than in Japan (5.9), the UK (7.5), or Germany (16.6). The increase in the number of diabetic patients in Korea is expected to increase to 3,000,000 and to 5,450,000 by 2030, which means that 10% of Koreans will become diabetic.

보건사회연구원의 통계에 따르면, 2006년 비만 및 비만합병증으로 인한 사회경제적 손실은 진료비와 치료에 따른 소득손실 등 간접비용까지 합해 총 2조 1천억원으로 추정된다. 이에 따라 정부는 성인비만율을 20% 이하, 그리고 청소년 비만율을 15% 이하로 낮추는 것을 2010년 국민건강증진의 주요 목표로 설정하고, 목표달성을 위한 시행전략으로 비만과 대사질환에 대한 정확한 정의와 측정방법을 모색키로 한 바 있다. According to the statistics of the Korea Institute of Health and Social Affairs, the socioeconomic losses from obesity and obesity complications in 2006 are estimated to total KRW 2.1 trillion, including indirect expenses such as medical expenses and income loss from treatment. Accordingly, the government sets the main goal of national health promotion in 2010 to reduce adult obesity rate to less than 20% and adolescent obesity rate to less than 15%, and precisely define obesity and metabolic diseases as an implementation strategy to achieve the goal. And the method of measurement was decided.

주요 비만치료제로서 효능을 가진 제품들이 수입되어 국내에서 다량으로 판매되고 있는데, 그 중에서도 제니칼, 리덕틸, 엑소리제 같은 항비만제품들이 널리 알려져 있다. 올리스타트(orlistat)를 주원료로 하는 제니칼은 세계최초의 비만치료제로서 리파아제의 작용을 억제하여 지방흡수를 억제시키고, 총콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤 농도를 감소시키는 효과가 있으며, 혈당 개선효과 및 혈압 저하효과를 보인다. 시부트라민(sibutramine)을 주원료로 하는 리덕틸은 1997년 FDA의 승인을 받아 세계 30여개 국가에서 판매 중인 제품으로 교감신경계의 세로토닌과 노르아드레날린을 고농도로 유지하여 교감신경흥분, 식욕저하 및 포만감을 유도하는 효능이 있다. 마지막으로 엑소리제는 프랑스에서 수입되는 비처방 반제품이며, 열발생을 증가시켜 신체의 기초대사량을 높여주고, 리파제활성을 억제시켜 장내 지방흡수를 30% 정도 감소시키며, 노르아드레날린 생성을 증가시킴으로써 에너지 소모량을 증가시키는 작용이 있다.Efficacy products have been imported and sold in Korea as a major obesity treatment agent. Among them, anti-obesity products such as xenical, reductyl, and excoriant are widely known. Xenical, which is an orlistat-based ingredient, is the world's first anti-obesity agent that inhibits the action of lipase to inhibit fat absorption, decreases total cholesterol and LDL cholesterol levels, improves blood sugar and lowers blood pressure. see. Reductil, the main ingredient of sibutramine (sibutramine), was approved by the FDA in 1997 and is sold in more than 30 countries around the world.It maintains high levels of serotonin and noradrenaline in the sympathetic nervous system, inducing sympathetic nervousness, appetite and satiety There is this. Lastly, Exorix is a non-prescription semi-finished product imported from France, which increases heat generation, increases the body's basic metabolism, inhibits lipase activity, reduces intestinal fat absorption by 30%, and increases the production of noradrenaline. There is an action to increase.

비만은 식사요법, 운동요법과 행동수정요법을 병행해야 최상의 치료효과를 거둘 수 있지만, 이러한 방법은 시간과 노력이 많이 소요되고 실행이 어렵기 때문에 비만치료제 또는 다이어트제품이 많이 이용되고 있다. 그러나 현재 비만 치료제로서 이용되고 있는 올리스타트는 지방변, 장내가스발생, 복부팽만감 등의 부작용이 있고, 시부트라민은 두통, 구갈, 식욕부진, 불면, 변비 등의 부작용이 알려져 있다. 또한 올리스타트는 비타민 E와 비타민 D의 흡수를 억제하고, 펜터민(phentermine)과 시부트라민은 심박수 증가, 심계항진 또는 현기증을 초래하는 부작용이 있다. Obesity can be the best treatment effect in combination with diet therapy, exercise therapy and behavioral therapy, but this method takes a lot of time and effort and difficult to implement, so many obesity treatments or diet products are used. However, Olistat, which is currently used as a treatment for obesity, has side effects such as fatty stool, intestinal gas generation, and bloating. Sibutramine is known to have side effects such as headache, dry mouth, anorexia, insomnia, and constipation. Orlistat also inhibits the absorption of vitamin E and vitamin D, while phentermine and sibutramine have side effects that lead to increased heart rate, palpitations, or dizziness.

이와 같이 합성의약품의 부작용과 만성질환의 극복에 서양의학이 한계를 보임에 따라 천연물 신약에 대한 가치가 새롭게 부각되고 있다. 이에 본 발명자들 은 자생식물로부터 비만을 억제하는 활성물질을 탐색하는 과정에서 올리브잎에 다량 함유되어 있는 파이토케미컬(phytochemical) 화합물인 세코이리도이드 유도체, 특히 올레우로페인(oleuropein)에 주목하게 되었다.As Western medicine shows limitations in overcoming the side effects and chronic diseases of synthetic drugs, the value of new natural products is emerging. Accordingly, the present inventors came to pay attention to secoirioid derivatives, particularly oleuroin, which are phytochemical compounds contained in olive leaves in the process of searching for active substances that inhibit obesity from native plants.

올레우로페인은 올리브잎에서 추출한 화학적 혼합물로 구조식은 C25H32O13이고 분자량은 540.514이다.Olerofane is a chemical mixture extracted from olive leaves and has a structural formula of C 25 H 32 O 13 and a molecular weight of 540.514.

올레우로페인의 주요기능은 항산화, 항바이러스, 항균작용이며, 더불어 혈압강하, 암과 심장관련 질환에 효과를 지닌다. 대장암세포주인 Caco-2세포에 올레우로페인을 처리한 결과, G2/M기 시간을 지연시키고 세포주기를 차단시켜 암세포의 증식이 억제되는 효과가 나타났다. 올레우로페인의 독성여부를 알아보기 위해 흰쥐를 대상으로 1 g/kg(체중)을 7일간 투여한 결과, 전혀 독성이 나타나지 않았다. 다른 여러 실험을 통해서도 LD50을 계산할 수 없을 만큼 올레우로페인이 안전하다는 결과가 나왔다. 올레우로페인의 제품화는 대부분이 식이보조제(dietary supplement)로 분류되어 있으며 앞에서 언급된 주요 생리기능을 만족시키는 용도로 판매되고 있다.Oleuropine's main functions are antioxidant, antiviral and antimicrobial activity, and it is effective in lowering blood pressure, cancer and heart related diseases. Treatment of leuuropine with Caco-2 cells, a colorectal cancer cell line, delayed G2 / M phase time and blocked the cell cycle, inhibiting the proliferation of cancer cells. To determine the toxicity of oleuropine, 1 g / kg of body weight was administered to rats for 7 days. Several other experiments have shown that oleuropine is safe enough to calculate LD50. Most of the commercialization of oleuropine is classified as a dietary supplement and is sold for satisfying the aforementioned main physiological functions.

미국 특허 제7071195호는 뉴로펩타이드 Y Y5의 리간드 작용을 하는 아민 및 아미드 유도체를 이용하여 비만을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 미국 특허 제7022722호는 당뇨, 고지혈 또는 비만을 치료하기 위한 티아졸리딘디온 유사체를 개시하고 있다.U.S. Pat. No. 70,711,95 discloses a method of treating obesity using amine and amide derivatives that act as ligands of neuropeptide Y Y5. US Pat. No. 6,702,22 discloses thiazolidinedione analogs for the treatment of diabetes, hyperlipidemia or obesity.

미국 특허 제6987131호는 페닐아세틸글루타민, 페닐아세틸이소글루타민 똔느 페닐아세트산을 포함하는 고지혈 치료용 조성물을 개시하고 있다. 미국 특허 제6942967호는 동맥경화증, 고지혈증, 비만 및 당뇨병 치료 타겟으로서의 apobec-1 단백질을 개시하고 있다.US Pat. No. 6,871,131 discloses a composition for treating hyperlipidemia comprising phenylacetylglutamine, phenylacetylisoglutamine phenylacetic acid. US Pat. No. 6942967 discloses apobec-1 protein as a therapeutic target for atherosclerosis, hyperlipidemia, obesity and diabetes.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of the cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety to better understand the state of the art to which the present invention pertains and the content of the present invention.

본 발명자들은, 항비만의 활성을 갖는 천연물질을 개발하고자 노력하였다. 그 결과 물푸레나무과(Oleaceae family) 식물의 추출물에 포함된 올레우로페인(oleuropein)이 상기의 활성을 갖는다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors have tried to develop a natural substance having anti-obesity activity. As a result, the present invention was completed by confirming that oleuropein contained in the extract of the Oleaceae family plants has the above activity.

따라서 본 발명의 목적은 올레우로페인 또는 그의 유도체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for the prevention or treatment of obesity, including oleuropein or derivatives thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 화학식 1의 세코이리도이드(secoiridoid) 유도체 또는 그의 가수분해 산물인 화학식 2의 화합물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다:According to an aspect of the present invention, the present invention provides a composition for preventing or treating obesity, comprising as an active ingredient a compound of Formula 2, which is a sequoidoid derivative of Formula 1 or a hydrolysis product thereof:

화학식 1Formula 1

Figure 112008087065581-pat00001
Figure 112008087065581-pat00001

화학식 2Formula 2

Figure 112008087065581-pat00002
Figure 112008087065581-pat00002

상기 화학식에서 R은 글리코실(glycosyl)기이고; R1은 수소, 메틸, 2-(4-하이드록시페닐)에틸 (2-(4-hydroxyphenyl)ethyl) 또는 2-(3,4-디하이드록시페닐)에틸 (2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl)이다.R in the formula is a glycosyl group; R 1 is hydrogen, methyl, 2- (4-hydroxyphenyl) ethyl (2- (4-hydroxyphenyl) ethyl) or 2- (3,4-dihydroxyphenyl) ethyl (2- (3,4-dihydroxyphenyl ethyl).

본 발명자들은, 항비만의 활성을 갖는 천연물질을 개발하고자 노력하였다. 그 결과 물푸레나무과 식물에 포함된 세코이리도이드(secoiridoid) 유도체(예컨대, 올레우로페인) 또는 그의 가수분해 산물이 상기의 활성을 갖는다는 사실을 발견하였다.The present inventors have tried to develop a natural substance having anti-obesity activity. As a result, it was found that the sequoidoid derivative (such as oleuropine) or the hydrolyzate thereof contained in the ash family has the above activity.

세코이리도이드 유도체 또는 그의 가수분해 산물은 비만의 예방 또는 치료에 매우 유효하다. Secoiridoid derivatives or hydrolysates thereof are very effective in the prevention or treatment of obesity.

하기 실시예에서 입증된 바와 같이, 올레우로페인은 지방세포 분화 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총 콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소를 초래하여 고지방 식이로 유도된 비만 현상을 현저히 완화하는 효능을 발휘한다.As demonstrated in the examples below, oleuropine leads to a high fat diet by inhibiting adipocyte differentiation, decreasing body fat mass, decreasing visceral fat mass, decreasing total cholesterol concentration, decreasing plasma triglycerides and hepatic triglycerides Efficacy in relieving marked obesity.

하기의 실시예는 세코이리도이드 유도체로서 올레우로페인을 대표적인 화합물로 하여 항비만 효능을 입증하고 있다. 그러나 올레우로페인과 동일 또는 유사한 수준의 생물학적 활성을 나타내는 것으로 알려진 화학식 1에 포함되는 세코이리도이드 유도체들도 올레우로페인과 유사한 항비만 효능을 나타낼 것이라는 것은 당업자에게 명확하다. 예컨대, 미국 특허 제6,117,844호 및 제6,455,580호에는 올레우로페인과 동일 또는 유사한 수준의 생물학적 활성을 나타내는 것으로 화학식 1에 포함되는 세코이리도이드 유도체들을 개시하고 있으며, 이들은 올레우로페인과 유사한 항비만 효능을 나타낼 수 있다. The following example demonstrates anti-obesity efficacy by using leuuropine as a representative compound as a secoirioid derivative. However, it is apparent to those skilled in the art that the secoirioid derivatives included in Formula 1, which are known to exhibit the same or similar level of biological activity as oleuropine, will also exhibit anti-obesity efficacy similar to oleuropine. For example, US Pat. Nos. 6,117,844 and 6,455,580 disclose secoiridoid derivatives included in Formula 1 that exhibit the same or similar level of biological activity as oleuropine, which exhibits anti-obesity efficacy similar to oleuropine. Can be represented.

또한, 세코이리도이드 유도체의 글리코실기가 가수분해 되어 형성된 화학식 2의 엘레놀산(elenolic acid)도 올레우로페인과 동일 또는 유사한 수준의 생물학적 활성을 나타내는 것으로 알려져 있다(참조: 미국 특허 제6,117,844호 및 제6,455,580호). 이들 엘레놀산은 세코이리도이드 유도체가 생체 내에서 대사되는 경우 형성되기도 한다. 따라서, 세코이리도이드 유도체의 가수분해 산물인 화학식 2의 화합물이 올레우로페인과 유사한 항비만 효능을 나타낼 것이라는 것은 당업자에게 명확하다.In addition, it is known that elenolic acid of Formula 2 formed by hydrolyzing glycosyl groups of secoirioid derivatives exhibits the same or similar biological activity as oleuropine (see US Patent Nos. 6,117,844 and US Pat. 6,455,580). These elenolic acids are also formed when the secoirioid derivatives are metabolized in vivo. Thus, it is clear to those skilled in the art that the compound of formula (II), the hydrolysis product of the secoirioid derivative, will exhibit similar anti-obesity efficacy as oleuropine.

세코이리도이드 유도체 또는 그의 가수분해 산물은 PCT 출원공개 제 WO96/14064호, 미국특허 제6,455,580호 및 미국특허 제6,117,844호에 기재된 내용에 따라 제조할 수 있다.Secoiridoid derivatives or hydrolysates thereof can be prepared according to the contents described in PCT Publication WO96 / 14064, US Pat. No. 6,455,580 and US Pat. No. 6,117,844.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 화학식 1 또는 2에서 R1은 2-(3,4-디하이드록시페닐)에틸이며, 가장 바람직하게는 하기 화학식 3의 구조를 갖는 올레우로페인을 유효성분으로 포함하는 것이다.According to a preferred embodiment of the present invention, in Formula 1 or 2 R 1 is 2- (3,4-dihydroxyphenyl) ethyl, and most preferably oleuropane having the structure of formula (3) as an active ingredient It is to include.

화학식 3Formula 3

Figure 112008087065581-pat00003
Figure 112008087065581-pat00003

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 세코이리도이드 유도체는 물푸레나무과 식물의 추출물 또는 분획물에 포함된 것이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the secoirioid derivative is included in the extract or fraction of the ash family.

세코이리도이드 유도체는 물푸레나무과(Oleaceae family)에 속하는 식물의 열매, 뿌리, 줄기, 특히 잎에 다량으로 함유되어있다. 세코이리도이드 유도체(특히, 올레우로페인)를 다량 함유하는 상기 물푸레나무과 식물은 24 속의 약 600 여종 이상을 포함하고 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명에서 이용되는 물푸레나무과 식물은 세코이리도이드 유도체를 포함하는 한 특별하게 제한되지 않으며, 바람 직하게는 올레아 유로파에아(올리브 나무, Olea europaea), 리구스트럼(Ligustrum) 속 식물, 시링가(Syringa) 속 식물, 프락시너스(Fraxinus) 속 식물, 자스미넘(Jasminum) 속 식물 또는 오스만터스(Osmanthus) 속 식물 등이다.Secoirioid derivatives are found in large quantities in the fruits, roots, stems, especially leaves of plants of the Oleaceae family. It is known that the ash family containing a large amount of secoirioid derivatives (especially oleuropine) contains about 600 species of 24 genera. Oleaceae plants used in the present invention is not specially limited, including the seco yirido Id derivative, particularly the oleic ah Europa wind straight-O (olive tree, Olea europaea), Liguria strum (Ligustrum) In a plant, when Manly (Syringa) in the plant, a proxy Nurse (Fraxinus) in plants, well over Smith (Jasminum) in plants or ottoman Tuscan (Osmanthus) in plants.

세코이리도이드 유도체를 포함하는 물푸레나무과 식물 추출물은 물푸레나무과 식물(바람직하게는, 물푸레나무과 식물의 잎)에 통상적인 추출용매를 이용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 (a) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (b) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름, (f) 1,3-부틸렌글리콜, (g) 헥산, (h) 디에틸에테르, (i) 부틸아세테이트 또는 (j) 물을 추출용매로 하여 얻을 수 있다.Ash tree plant extracts containing secoirioid derivatives can be obtained by using a conventional extraction solvent for ash tree (preferably, the leaves of the ash tree), and preferably (a) anhydrous having 1 to 4 carbon atoms. Or a hydrous lower alcohol (e.g. methanol, ethanol, propanol, butanol, normal-propanol, iso-propanol and normal-butanol, etc.), (b) a mixed solvent of the lower alcohol with water, (c) acetone, (d) Ethyl acetate, (e) chloroform, (f) 1,3-butylene glycol, (g) hexane, (h) diethyl ether, (i) butyl acetate or (j) water can be obtained as an extraction solvent.

세코이리도이드 유도체를 포함하는 물푸레나무과 식물 분획물은 물푸레나무과 식물 추출물을 추가적으로 분리/정제하여 얻은 보다 단리/정제된 형태(form)를 의미한다. 예컨대, 물푸레나무과 식물 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 물푸레나무과 식물 분획물에 포함되는 것이다. 올레아 유로파에아 잎의 추출물을 이용하여 올레우로페인을 수득하는 방법은 미국특허출원공개 제2003-0017217호에 상세히 기재되어있다.Ash plant fraction comprising a secoirioid derivative means a more isolated / purified form obtained by further separating / purifying the ash plant extract. For example, fractions obtained by passing an ash plant extract through an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value, separation by various chromatography (manufactured for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity), etc. The fractions obtained through the various purification methods described above are also included in the ash fraction. Ole O by the use of the O leaf extract in Europa method for obtaining oleic right pane is described in detail in U.S. Patent Application Publication No. 2003-0017217.

또한, 상기의 세코이리도이드 유도체는 화학적으로 합성할 수 있다.In addition, the secoirioid derivatives can be synthesized chemically.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 세코이리도이드 유도체는 상기 물푸레 나무과 식물에서 분리한 것 이외에 합성하여 제조된 세코이리도이드 유도체를 포함한다.According to a preferred embodiment of the present invention, the secoirioid derivatives include secoirioid derivatives prepared by synthesis in addition to those isolated from the ash tree and plants.

세코이리도이드 유도체의 합성방법은 PCT 출원공개 제WO 96/14064호에 상세히 기재되어있다. Methods of synthesizing secoirioid derivatives are described in detail in PCT Publication WO 96/14064.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 세코이리도이드 유도체를 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 또는 식품 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition or a food composition for the prevention or treatment of obesity, including secoirioid derivatives.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.When the composition of the present invention is made into a pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical compositions of the present invention are those commonly used in the preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, Calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like It doesn't happen. In addition to the above components, the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally, and preferably applied by oral administration.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환 자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다.Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention may vary depending on factors such as the formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to the patient. Can be. Preferred dosages of the pharmaceutical compositions of the invention are in the range of 0.001-100 mg / kg on an adult basis.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may be prepared in unit dose form by formulating with a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to methods which can be easily carried out by those skilled in the art. Or may be prepared by incorporation into a multi-dose container. The formulation may be in the form of solutions, suspensions, syrups or emulsions in oils or aqueous media, or in the form of extracts, powders, powders, granules, tablets or capsules, and may further comprise dispersants or stabilizers.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 세코이리도이드 유도체뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.When the composition of the present invention is made of a food composition, as an active ingredient, as well as sequoidoid derivatives, it contains components that are commonly added during food production, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, seasonings and Contains flavors. Examples of the above carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides and the like; And sugars such as conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like and xylitol, sorbitol, erythritol. As the flavoring agent, natural flavoring agents [tautin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used.

예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 세코이리도이드 유도체 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.For example, when the food composition of the present invention is prepared with a drink, the cicolic acid, liquid fructose, sugar, glucose, acetic acid, malic acid, fruit juice, tofu extract, jujube extract, licorice extract, etc. You can.

세코이리도이드 유도체를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 지방세포 분화의 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소, 공복시 혈당 감소 및 혈중 인슐린 농도의 감소를 초래하여, 궁극적으로 비만의 예방 또는 치료 활성을 나타낸다.The composition of the present invention comprising a secoirioid derivative as an active ingredient, inhibits adipocyte differentiation, decreases body fat amount, decreases visceral fat amount, decreases total cholesterol concentration, decreases plasma triglycerides and hepatic triglycerides, and decreases fasting blood glucose And a decrease in blood insulin levels, ultimately exhibiting prophylactic or therapeutic activity of obesity.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다.The features and advantages of the present invention are summarized as follows.

(ⅰ) 본 발명은 세코이리도이드 유도체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.(Iii) The present invention provides a composition for the prevention or treatment of obesity comprising a secoirioid derivative as an active ingredient.

(ⅱ) 본 발명의 조성물은 물푸레나무과 식물을 이용하여 분리할 수 있으며, 화학적 방법을 통하여도 합성 가능하다.(Ii) The composition of the present invention can be separated using the ash plant, and can also be synthesized through chemical methods.

(ⅲ) 물푸레나무과 식물 추출물 또는 세코이리도이드 유도체를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 지방세포 분화의 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소, 공복시 혈당 감소 및 혈중 인슐린 농도의 감소를 초래하여, 궁극적으로 비만의 예방 또는 치료 활성을 나타낸다.(Iii) The composition of the present invention comprising an ash plant extract or a secoirioid derivative as an active ingredient, inhibits adipocyte differentiation, decreases body fat amount, decreases visceral fat amount, decreases total cholesterol concentration, plasma triglycerides and liver tissue It results in a decrease in triglycerides, a decrease in fasting blood sugar and a decrease in insulin concentration in the blood, ultimately exhibiting a prophylactic or therapeutic activity of obesity.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention .

실시예Example

실시예 1: 마우스 지방세포주(3T3-L1)를 이용한 올레우로페인의 지방세포분화 억제효능Example 1: Inhibitory effect of oleuropine on adipocyte differentiation using mouse adipocyte line (3T3-L1)

세포배양 및 오일 레드 O 염색법(oil red O staining)Cell culture and oil red O staining

올레우로페인(Extrasynthese, France)이 지방세포의 분화 및 성장에 미치는 영향을 평가하기 위해 마우스지방세포주(3T3-L1,ATCC, American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)를 사용하였다. 지방전구세포인 3T3-L1 세포를 12-웰 플레이트에 분주하고 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% 비 필수 아미노산, 10% 우태아 혈청(FBS, fatal bovine serum)이 첨가된 DMEM(Dulbecco-modified Eagle medium) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 컨플루언트(confluent)한 상태로 자랄 때 까지 배양시켰다. 컨플루언트한 상태로 자란 3T3-L1 세포를 MDI(0.5 mM 이소부틸-메틸산틴(isobutyl-methylxanthine), 1 μM 덱사메타손(dexamethason) 및 1 ㎍/㎖ 인슐린)가 첨가된 배양액에서 이틀간 배양하여 분화 된 지방세포(differentiation adipocyte)로 만든 후, 1 ㎍/㎖ 인슐린을 포함하는 DMEM 배양액에서 이틀간 더 배양시키면서 성숙한 지방세포(mature adipocyte)로 분화시켰다. 그 후에는 이틀 간격으로 DMEM 배양액을 교체하면서 10일간 더 배양하여 완전히 분화된 지방세포를 형성시켰다.Mouse fat cell lines (3T3-L1, ATCC, American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA) were used to assess the effects of oleuropine (Extrasynthese, France) on the differentiation and growth of adipocytes. Adipocytes, 3T3-L1 cells, were dispensed in 12-well plates and added Dulbecco-modified Eagle with 1% penicillin-streptomycin, 1% non-essential amino acids, and 10% fetal bovine serum (FBS). medium) was used to incubate in a confluent state at 37 ℃, 5% CO 2 incubator. Confluent and grown 3T3-L1 cells were cultured for two days in a culture medium containing MDI (0.5 mM isobutyl-methylxanthine, 1 μM dexamethasone and 1 μg / ml insulin). After making adipocytes (differentiation adipocytes), the cells were differentiated into mature adipocytes while incubated for two more days in a DMEM medium containing 1 μg / ml insulin. Thereafter, the cells were incubated for 10 days while replacing the DMEM medium every two days to form fully differentiated adipocytes.

3T3-L1세포에 MDI를 첨가하여 분화시키는 첫 날부터 이틀 간격으로 올레우로페인을 0.1, 1, 10, 50 및 100 μM 농도로 배양액에 처리하였다. 올레우로페인은 DMSO에 녹여서 사용하였으며, DMSO만 첨가한 음성대조군(negative control)을 실험에 포함시켰다. 총 14일간 배양하여 분화가 완성된 시점에 배양액을 제거하고 분화된 지방세포에 함유된 지방구를 염색하였다. 이를 위해 PBS(phosphate buffered saline)로 세포를 2회 세척한 후 10% BNF(Buffered Neutral Formalin)로 세포를 1시간 고정하고 다시 PBS로 1회 세척한 후, 지방을 특이적으로 붉게 염색시키는 오일 레드 O 염색약 1 ㎖를 12-웰 플레이트에 가하여 1시간 동안 지방구를 염색하고 증류수로 2회 세척하였다.Oleuropine was treated in culture at concentrations of 0.1, 1, 10, 50 and 100 μM at two-day intervals from the first day of differentiation by adding MDI to 3T3-L1 cells. Oluopepine was dissolved in DMSO and used for negative control (negative control) in which only DMSO was added. After incubation for a total of 14 days, the culture solution was removed at the time of differentiation was completed, and stained fat cells contained in the differentiated adipocytes. To do this, wash the cells twice with PBS (phosphate buffered saline), fix the cells for 1 hour with 10% BNF (Buffered Neutral Formalin), wash once again with PBS, and then oil red specifically to stain red fat. 1 ml of O dye was added to a 12-well plate to stain the fat globules for 1 hour and washed twice with distilled water.

분화된 3T3-L1 세포에 함유된 중성지방농도를 측정하기 위해 염색된 지방구를 1 ㎖의 이소부탄올에 녹인 후, 600 ㎚에서 O.D 값을 측정하였다. In order to measure the concentration of triglycerides contained in the differentiated 3T3-L1 cells, stained fat globules were dissolved in 1 ml of isobutanol, and the O.D values were measured at 600 nm.

올레우로페인의 지방세포분화 억제능Inhibition of Adipocyte Differentiation by Oluuropine

도 1의 패널 A에서 제시된 바와 같이 올레우로페인을 3T3-L1 세포에 처리한 결과, 농도 의존적으로 지방전구세포의 분화를 유의하게 감소시켰다. 오일 레드 O 로 염색된 세포내 지방의 양을 분광광도법(spectrophotometry)에 의해 정량한 결 과, 역시 농도 의존적으로 O.D 값이 감소하였다(도 1, 패널 B).Treatment of oleuropine with 3T3-L1 cells as shown in panel A of FIG. 1 significantly reduced the differentiation of adipocytes in a concentration dependent manner. As a result of quantitative determination of the amount of intracellular fat stained with oil red O by spectrophotometry, the concentration of O.D also decreased (FIG. 1, Panel B).

실시예 2: 마우스를 이용한 올레우로페인의 체중 및 내장지방 감소효능Example 2: Body weight and visceral fat reduction effect of oleuropine using a mouse

실험식이 제조 및 실험동물의 사육Experimental diet preparation and breeding of laboratory animals

본 실험에서 사용한 비만유도식이는 고지방식이(high fat diet, HFD: 40% 지방 칼로리, 17 g 라아드 + 3% 옥수수 오일/ 100 g 다이어트)이며, 올레우로페인이 포함된 식이는 HFD와 조성이 동일하되 올레우로페인이 0.03% 수준으로 포함되었다. 정상식이(ND)는 AIN-76 rodent 다이어트(American Institute of Nutrition, Report of the American Institute of Nutrition ad hoc committee on standards for nutritional studies. J. Nutr. 107: 1340-1348, 1977) 조성에 준하여 조제하였다 (표 1).The obesity induction diet used in this experiment was a high fat diet (HFD: 40% fat calorie, 17 g Laad + 3% corn oil / 100 g diet), and the diet containing oleuropine is HFD and its composition. The same, but the oleuropein contained 0.03% level. Normal diet (ND) was prepared based on the composition of the AIN-76 rodent diet (American Institute of Nutrition, Report of the American Institute of Nutrition ad hoc committee on standards for nutritional studies. J. Nutr. 107: 1340-1348, 1977). (Table 1).

실험식이조성표Experimental Formula 성분ingredient 정상식이
(g/kg diet)Normal diet
(g / kg diet) 대조식이
(g/kg diet)Control diet
(g / kg diet) 인돌-3-카비놀식이
(g/kg diet)Indole-3-carbinol diet
(g / kg diet) 카제인Casein 200200 200200 200200 DL-메티오닌DL-methionine 33 33 33 옥수수 전분Corn starch 149.99149.99 110.96110.96 109.96109.96 수크로오스Sucrose 500500 370370 370370 셀룰로오스cellulose 5050 5050 5050 옥수수유Corn oil 5050 3030 3030 라아드Laad -- 170170 170170 비타민 복합물Vitamin complex 1010 1212 1212 미네랄 복합물Mineral complex 3535 4242 4242 콜린 비타르트레이트Choline Bitartrate 22 22 22 콜레스테롤cholesterol -- 1010 1010 tert-부티하이드로퀴논tert-butyhydroquinone 0.010.01 0.040.04 0.040.04 인돌-3-카비놀Indole-3-carbinol -- -- 1.001.00 총합(g)Total (g) 1,0001,000 1,0001,000 1,0001,000 지방(% 칼로리)Fat (% calories) 11.511.5 39.039.0 39.039.0 총 열량, kJ/kg dietTotal calories, kJ / kg diet 16,43916,439 19,31519,315 19,31519,315

5주령의 수컷 C57BL/6J 마우스(오리엔트, 한국)를 고형사료로 1 주일 간 실험실환경에 적응시킨 후, 난괴법에 따라 고지방식이대조군과 실험군으로 임의 배치하여, 총 10주간 사육하였다. 식이는 매일 오전 10-11시 사이에 물과 함께 공급하였으며, 식이 섭취량은 매일, 그리고 체중은 3일에 한 번씩 측정하였다. 사료섭취에 따른 갑작스런 체중변화를 막기 위해 사료통을 제거하고 2시간 후에 체중을 측정하였으며, 식이효율은 실험식이 공급일로부터 희생일까지를 총 실험기간으로 하여, 실험기간 동안의 누적체중증가량을 총 식이섭취량으로 나누어 산출하였다. 실험동물을 12시간 이상 금식시킨 후, 디에틸에테르로 마취한 상태에서 혈액, 간 및 내장지방조직(부고환지방, 신장주변지방, 장간막지방 및 후복강지방)을 채취하여 0.1 M 인산완충용액(pH 7.4)으로 세척한 후, 무게를 측정하였다. 복부대동맥으로부터 채혈한 혈액은 1000 x g에서 15분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다. Five-week-old male C57BL / 6J mice (Orient, Korea) were adapted to the laboratory environment for 1 week with solid feed, and then randomly placed into the high fat diet control group and the experimental group according to the egg mass method, and reared for a total of 10 weeks. The diet was fed with water between 10 and 11 am daily, and dietary intake was measured daily and body weight was measured every three days. In order to prevent sudden weight change due to feed intake, body weight was measured 2 hours after removing the feed container, and the dietary efficiency was the total test period from the feeding date to the sacrifice day, and the cumulative weight gain during the test period was determined by the total diet. Calculated by dividing by intake. After fasting the test animals for 12 hours or more, blood, liver and visceral fat tissues (diplordial fat, perirenal fat, mesenteric fat, and abdominal fat) were collected under anesthesia with diethyl ether to prepare 0.1 M phosphate buffer solution (pH). 7.4), and then weighed. Blood collected from the abdominal aorta was centrifuged at 1000 x g for 15 minutes to separate plasma.

체중 및 내장지방 무게Body weight and visceral fat weight

실험식이를 10주간 섭취시킨 후 최종체중 및 10주간의 체중증가량을 살펴보면, 고지방식이대조군(HFD)에 비해 실험물질인 올레우로페인을 섭취시킨 군에서 최종체중이 32%, 그리고 누적체중증가량이 52% 유의하게 감소하였다(도 2). The final weight and the weight gain of the 10 weeks after ingesting the experimental diet for 10 weeks, compared to the high-fat diet control group (HFD), the final weight was 32%, and the cumulative weight gain in the group fed the oleuropine 52% significantly decreased (FIG. 2).

실험식이를 10주간 섭취시킨 후 체중 대 부고환지방, 신장주변지방, 장간막지방 및 후복강지방 무게를 측정한 결과, 대조군(HFD)에 비해 올레우로페인 섭취군에서 단위체중으로 환산한 부고환지방무게가 51%, 신장주변지방무게가 82%, 장간막지방무게가 59%, 후복강지방무게가 60%, 그리고 총내장지방무게가 56% 유의하게 감소하였다(P < 0.001). 따라서 올레우로페인은 매우 탁월한 체중감소 및 내장지방량 감소효과가 있음이 확인되었다(도 3).After eating the experimental diet for 10 weeks, the weight of epididymal fat, peripheral fat, mesenteric fat, and abdominal fat were measured. As a result, the epididymal fat weight in terms of unit weight was higher in the oleuropaine group than the control group (HFD). 51%, peripheral fat mass 82%, mesenteric fat weight 59%, posterior cavity fat weight 60%, and total visceral fat weight 56% ( P <0.001). Therefore, it was confirmed that oleuropine has a very excellent weight loss and visceral fat reduction effect (Fig. 3).

실시예 3: 올레우로페인의 비만성 고지혈증, 지방간과 2형 당뇨의 예방 및 치료 효능Example 3 Efficacy and Prevention of Obesity Hyperlipidemia, Fatty Liver and Type 2 Diabetes with Olerofane

혈장 총콜레스테롤, 중성지방 및 포도당농도는 상업용 측정키트(Bio Clinical system)를 이용하여 각각 2회 반복 측정하였고, 인슐린농도는 마우스 인슐린 키트(Shibayaki, Japan)를 이용하여 ELISA로 측정하였다. 간조직의 지질성분을 Folch 등의 방법에 준하여 추출하였다. 0.25 g의 간조직에 1 mL의 증류수를 가한 후 polytron 균질기(IKA-WERKE GmbH & Co., Ultra-Turrax, Staufen, Germany)를 사용하여 균질화시켰다. 균질액에 클로로포름:메탄올 용액(2:1, v/v) 5 mL을 가하여 잘 혼합한 후, 1000 x g에서 10분간 원심분리하여 하층액을 분리하였고, 상층액에 다시 클로로포름:메탄올 용액(2:1, v/v) 2 mL을 첨가한 후, 동일 과정을 반복하여 간의 지질성분을 완전히 분리하였다. 이렇게 얻은 하층액에 클로로포름:메탄올:0.05% CaCl2(3:48:47, v/v/v) 용액 3 mL을 가하여 1분간 혼합한 후 1000 x g에서 10분간 원심분리하였고, 최종 하층액을 취하여 질소가스로 완전히 건조시킨 후, 건조된 지질을 1 mL의 메탄올에 용해하여 지질성분 분석에 사용하였다. 간조직 지질추출액의 중성지방 농도는 혈장의 분석을 위해 사용된 것과 동일한 상업용 지질분석 키트(Bio Clinical system)를 사용하여 측정하였다.Plasma total cholesterol, triglyceride and glucose concentration were measured twice each using a commercial clinical kit (Bio Clinical system), insulin concentration was measured by ELISA using a mouse insulin kit (Shibayaki, Japan). The lipid component of liver tissue was extracted according to the method of Folch et al. 1 mL of distilled water was added to 0.25 g of liver tissue and homogenized using a polytron homogenizer (IKA-WERKE GmbH & Co., Ultra-Turrax, Staufen, Germany). 5 mL of chloroform: methanol solution (2: 1, v / v) was added to the homogeneous solution, mixed well, and the lower layer was separated by centrifugation at 1000 xg for 10 minutes, and the chloroform: methanol solution (2: 1, v / v) 2 mL was added, and the same procedure was repeated to completely separate the liver lipid components. 3 mL of chloroform: methanol: 0.05% CaCl 2 (3:48:47, v / v / v) solution was added to the lower layer solution, mixed for 1 minute, and centrifuged at 1000 xg for 10 minutes. After completely drying with nitrogen gas, the dried lipid was dissolved in 1 mL of methanol and used for lipid component analysis. Triglyceride concentrations in hepatic lipid extracts were measured using the same commercial lipid analysis kit (Bio Clinical system) used for the analysis of plasma.

표 1에 제시된 실험식이를 10주간 섭취시킨 마우스의 혈장 지질농도를 살펴보면, 올레우로페인 섭취군에서 고지방식이대조군(HFD)에 비해 중성지방농도가 76%, 총콜레스테롤농도가 40%, LDL+VLDL 콜레스테롤농도가 30%, 유리지방산농도가 40% 유의하게 감소하였다(표 2).Plasma lipid concentrations of mice fed the experimental diet shown in Table 1 for 10 weeks were 76% triglyceride, 40% total cholesterol, and LDL + compared to the high-fat diet control group (HFD). VLDL cholesterol concentration was reduced by 30% and free fatty acid concentration by 40% (Table 2).

식이성비만 동물모델 또는 인체비만에서는 혈중 인슐린 농도가 증가하면서 동시에 공복시 혈당이 증가되는 2형 당뇨현상이 수반되는 것은 잘 알려진 사실이다. 아울러 영양소 또는 대사물질 공급과잉에 의해 발생하는 염증반응에 대하여 최근 ‘metaflammation’이라는 용어가 등장하고, 비만을 ‘만성적으로 진행되는 저수준의 염증반응(chronic and low-level inflammation)’으로 해석하는 등, 비만과 면역체계와의 상관관계에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다. 즉, 다양한 비만합병증들(2형 당뇨, 인슐린저항성, 동맥경화, 암 및 천식 등)은 비만이 진행되는 과정에서 면역체계와의 상호작용에 의해 발생되는 것이라는 새로운 시각이 제기되고 있다. 그 예로, 선천성 면역반응에 관여하는 TLR4(toll-like receptor 4)의 경우 식이성지방(특히, 포화지방산)을 리간드로 사용하여 염증반응 및 인슐린저항성 경로에서 중요한 요소로 작용하는 한편, 중추신경계에서는 식욕조절에도 관여하는 것으로 제시된다. 따라서 혈액 및 조직의 유리지방산 농도는 비만으로 인한 인슐린저항성 및 대사질환 발병의 주요한 지표로 최근 인식되고 있다. Dietary obesity It is well known that animal model or human obesity is accompanied by type 2 diabetes, which is accompanied by an increase in blood insulin concentration and fasting blood glucose. In addition, the term 'metaflammation' has recently appeared for inflammatory reactions caused by nutrient or metabolic oversupply, and obesity is interpreted as 'chronic and low-level inflammation'. There is an ongoing research into the relationship between obesity and the immune system. In other words, a variety of obesity complications (type 2 diabetes, insulin resistance, arteriosclerosis, cancer and asthma, etc.) is a new view that is caused by the interaction with the immune system in the course of obesity. For example, TLR4 (toll-like receptor 4), which is involved in the innate immune response, uses dietary fats (particularly saturated fatty acids) as ligands, acting as an important factor in the inflammatory response and insulin resistance pathways, while in the central nervous system It is also suggested to be involved in appetite control. Therefore, the concentration of free fatty acids in blood and tissues has recently been recognized as a major indicator of the development of insulin resistance and metabolic diseases caused by obesity.

본 실험에서는 고지방식이를 섭취한 마우스를 대상으로 10주간 올레우로페인을 섭취시킨 결과, 고지방식이대조군에 비해 공복시 혈당이 29% 저하되었을 뿐 아니라 혈중 인슐린농도 또한 32% 유의하게 감소되었고, 인슐린저항성지표(insulin resistance index, IRI) 또한 52% 현저히 감소하였다(표 2). 따라서 올레우로페인은 2형 당뇨 또는 인슐린저항성을 개선하는 효과가 있으며, 이와 밀접하게 연관된 대사성 염증반응을 개선하는 효과 또한 기대된다.In this experiment, oleuropine was ingested for 10 weeks in mice fed high-fat diet, and the fasting blood glucose was decreased by 29% compared to the high-fat diet control group, and the blood insulin concentration was also significantly reduced by 32%. Insulin resistance index (IRI) also decreased significantly by 52% (Table 2). Therefore, oleuropine has an effect of improving type 2 diabetes or insulin resistance, and is also expected to improve the metabolic inflammatory response closely related thereto.

올레우로페인을 섭취시킨 마우스 혈액의 비만 관련 생화학지표Obesity-related Biochemical Indicators of Mouse Blood Containing Olerofane 정상식이군Normal diet.
(ND)(ND) 고지방식이대조군High Fat Diet Control Group
(HFD)(HFD) 올레우로페인군Oleuropine County 중성지방(mmol/L)Triglycerides (mmol / L) 0.60 ± 0.090.60 ± 0.09 1.41 ± 0.121.41 ± 0.12 0.34 ± 0.09* 0.34 ± 0.09 * 총콜레스테롤(mmol/L)Total Cholesterol (mmol / L) 3.07 ± 0.093.07 ± 0.09 6.20 ± 0.546.20 ± 0.54 3.71 ± 0.43* 3.71 ± 0.43 * HDL 콜레스테롤(mmol/L)HDL cholesterol (mmol / L) 1.33 ± 0.091.33 ± 0.09 2.33 ± 0.272.33 ± 0.27 1.02 ± 0.06* 1.02 ± 0.06 * LDL+VLDL 콜레스테롤 (mmol/L)LDL + VLDL Cholesterol (mmol / L) 1.74 ± 0.061.74 ± 0.06 3.87 ± 0.573.87 ± 0.57 2.69 ± 0.45* 2.69 ± 0.45 * 유리지방산(uEq/L)Free fatty acid (uEq / L) 357 ± 26357 ± 26 534 ± 8* 534 ± 8 * 321 ± 46* 321 ± 46 * 포도당(mmol/L)Glucose (mmol / L) 6.16 ± 0.956.16 ± 0.95 8.49 ± 0.538.49 ± 0.53 6.03 ± 0.31* 6.03 ± 0.31 * 인슐린(ng/mL)Insulin (ng / mL) 0.51 ± 0.060.51 ± 0.06 0.76 ± 0.100.76 ± 0.10 0.52 ± 0.08* 0.52 ± 0.08 * IRIIRI aa 0.54 ± 0.070.54 ± 0.07 1.10 ± 0.101.10 ± 0.10 0.53 ± 0.08* 0.53 ± 0.08 *

*Significantly different from the value for HFD group by Student's t-test at P < 0.05. * Significantly different from the value for HFD group by Student's t-test at P <0.05.

aIRI(Insulin resistance index) = 10-3 pmol 인슐린 x mmol 포도당 x L-2 a Insulin resistance index (IRI) = 10 -3 pmol insulin x mmol glucose x L -2

실험식이를 10주간 섭취시킨 마우스의 체중대 간무게를 살펴보면 올레우로페인 섭취군에서 고지방식이대조군에 비해 24% 유의하게 감소하였다. 간조직의 지질농도를 살펴보면, 올레우로페인 섭취군에서 고지방식이대조군에 비해 중성지방농도가 83%, 콜레스테롤농도가 82%, 그리고 유리지방산농도가 66% 유의하게 감소하였다(표 3). 따라서 올레우로페인은 고지방식이로 유도된 비만에서 나타나는 지방간 현상을 현저히 완화시키고, 간조직에서 진행되는 비만성 염증 및 인슐린저항성을 현저히 개선하는 효과가 있음을 알 수 있다.The liver weight of the mice fed the experimental diet for 10 weeks was significantly reduced by 24% in the oleuropein group compared to the high-fat diet control group. The lipid concentrations of liver tissue were significantly lower in oleuropine-treated group than in the high-fat diet control group, with 83% triglyceride concentration, 82% cholesterol, and 66% free fatty acid concentration (Table 3). Therefore, it can be seen that oleuropine significantly relieves fatty liver phenomenon in high fat diet-induced obesity and significantly improves obesity-inflammation and insulin resistance in liver tissue.

올레우로페인을 섭취시킨 마우스 간조직의 비만 관련 생화학지표Obesity-related Biochemical Indices of Mouse Liver Tissue Ingested with Olerofane 정상식이군Normal diet.
(ND)(ND) 고지방식이대조군High Fat Diet Control Group
(HFD)(HFD) 올레우로페인군Oleuropine County 간무게(g/100 g body wt)Liver weight (g / 100 g body wt) 3.6 ± 0.13.6 ± 0.1 5.5 ± 0.35.5 ± 0.3 4.2 ± 0.3* 4.2 ± 0.3 * 중성지방(μmol/g)Triglyceride (μmol / g) 20.4 ± 0.3020.4 ± 0.30 35.1 ± 0.3235.1 ± 0.32 5.9 ± 0.40* 5.9 ± 0.40 * 콜레스테롤(μmol/g)Cholesterol (μmol / g) 21.6 ± 0.5821.6 ± 0.58 74.8 ± 0.6874.8 ± 0.68 13.1 ± 0.09* 13.1 ± 0.09 * 유리지방산(uEq/g)Free fatty acids (uEq / g) 8.56 ± 0.358.56 ± 0.35 24.3 ± 0.22* 24.3 ± 0.22 * 8.25 ± 0.07* 8.25 ± 0.07 *

*Significantly different from the value for HFD group by Student's t-test at P < 0.001. * Significantly different from the value for HFD group by Student's t-test at P <0.001.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Having described the specific part of the present invention in detail, it is apparent to those skilled in the art that the specific technology is merely a preferred embodiment, and the scope of the present invention is not limited thereto. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and equivalents thereof.

도 1은 3T3-L1 세포에서 올레우로페인의 지방분화 억제 효능을 나타낸 도면이다.1 is a diagram showing the effect of inhibiting the differentiation of oleuropine in 3T3-L1 cells.

도 2는 실험식이를 섭취한 마우스의 체중 및 체중 증가량을 나타낸 도면이다. 파란색 실선은 정상식이군(ND), 빨간색 실선은 고지방식이 대조군(HFD) 및 하늘색 실선은 올레우로페인 투여군을 나타낸다.2 is a diagram showing the body weight and weight gain of the mice ingested the experimental diet. The blue solid line represents the normal diet group (ND), the red solid line represents the high-fat diet control group (HFD), and the light blue solid line represents the oleuropine administration group.

도 3은 실험식이를 섭취한 마우스의 체중 대 부고환지방, 신장주변지방, 장간막지방, 후복강지방 및 총내장지방량 무게를 나타낸 도면이다. 파란색 막대그래프는 정상식이군(ND), 빨간색 막대그래프는 고지방식이 대조군(HFD) 및 하늘색 막대그래프는 올레우로페인 투여군을 나타낸다.3 is a diagram showing the weight vs. epididymal fat, peripheral kidney fat, mesenteric fat, celiac fat and total visceral fat weight of mice fed the experimental diet. The blue bar graph represents the normal diet group (ND), the red bar graph represents the high-fat diet control group (HFD), and the light blue bar graph represents the oleuropine-administered group.

Claims (7)

다음의 화학식 1의 세코이리도이드(secoiridoid) 유도체 또는 그의 가수분해 산물인 화학식 2의 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방세포 분화 억제용 식품 조성물:A food composition for inhibiting adipocyte differentiation comprising a sequoidoid derivative of Formula 1 or a compound of Formula 2 that is a hydrolysis product thereof as an active ingredient: 화학식 1Formula 1
Figure 112011028656812-pat00004
Figure 112011028656812-pat00004
 화학식 2Formula 2
Figure 112011028656812-pat00005
Figure 112011028656812-pat00005
 상기 화학식에서 R은 글리코실기이고; R1은 수소, 메틸, 2-(4-하이드록시페닐)에틸 또는 2-(3,4-디하이드록시페닐)에틸이다.R in the formula is a glycosyl group; R 1 is hydrogen, methyl, 2- (4-hydroxyphenyl) ethyl or 2- (3,4-dihydroxyphenyl) ethyl. 제 1 항에 있어서, 상기 화학식 1 및 화학식 2에서 R1은 2-(3,4-디하이드록시페닐)에틸인 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein in Formulas 1 and 2, R 1 is 2- (3,4-dihydroxyphenyl) ethyl. 제 1 항에 있어서, 상기 세코이리도이드 유도체는 하기 화학식 3의 올레우로페인인 것을 특징으로 하는 조성물:The composition of claim 1, wherein the secoirioid derivative is oleuropine of Formula 3 below: 화학식 3Formula 3
Figure 112008087065581-pat00006
Figure 112008087065581-pat00006
 제 1 항에 있어서, 상기 세코이리도이드 유도체는 물푸레나무과(Oleaceae family) 식물의 추출물 또는 분획물에 포함된 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the secoirioid derivative is included in an extract or fraction of the Oleaceae family plants. 제 4 항에 있어서, 상기 물푸레나무과 식물은 올레아 유로파에아(Olea europaea), 리구스트럼(Ligustrum) 속, 시링가(Syringa) 속, 프락시너스(Fraxinus) 속, 자스미넘(Jasminum) 속 및 오스만터스(Osmanthus) 속으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.The method of claim 4, wherein the Oleaceae plants ah (Olea europaea) in oleic ah Europa, Liguria strum (Ligustrum) In, when Manly (Syringa), A proxy Nurse (Fraxinus), A-party over Sumi (Jasminum) and Osman in Tuscan composition being selected from the group consisting of genus (Osmanthus). 삭제delete (a) 상기 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 조성물의 식품학적 유효량; 및 (b) 식품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 지방세포 분화 억제용 식품 조성물:(a) a food-effective amount of the composition of any one of claims 1 to 5; And (b) a food composition for inhibiting adipocyte differentiation comprising a food acceptable carrier:
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