KR101034010B1 - Skin whitening composition comprising patchouli alcohol - Google Patents
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Abstract
본 발명은 패출리(Patchouli) 알코올을 유효성분으로 포함하는 피부미백용 조성물 및 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for skin whitening comprising patchouli alcohol as an active ingredient, and a method for preparing patchouli alcohol from the broad fragrance.
광곽향, 패출리 알코올, 피부미백, 멜라닌 생성 억제 Inhibition of broad fragrance, patchouli alcohol, skin whitening, melanin production
Description
본 발명은 패출리(patchouli) 알코올을 유효성분으로 포함하는 피부미백용 조성물 및 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for skin whitening comprising a patchouli alcohol as an active ingredient, and a method for producing a patchouli alcohol from a broad fragrance.
인간의 피부색은 피부 내부의 멜라닌 색소의 농도 및 분포에 따라 결정된다. 정상 상태에서는 멜라닌의 과다 생성이 일어나지 않지만, 피부가 자외선, 환경 오염, 스트레스 등과 같은 외부 자극이나 호르몬, 염증 유발인자 등과 같은 내적 요인에 대해 반응하면 멜라닌 색소가 과다 생성되고, 정상적으로 피부로부터 배출되지 못하고 피부에 축적되면 색소 침착이 유발된다. Human skin color is determined by the concentration and distribution of melanin pigments inside the skin. Under normal conditions, melanin overproduction does not occur, but when the skin reacts to external stimuli such as ultraviolet rays, environmental pollution, stress, or internal factors such as hormones or inflammation factors, the melanin is overproduced, and it is not normally released from the skin. Accumulation on the skin causes pigmentation.
최근 환경오염, 오존층의 파괴로 인한 자외선의 증가 등으로 인하여, 피부에 대한 자극이 증가되면서 피부의 건강, 특히 미백에 대한 소비자의 관심이 높아지고 있다. 주로 멜라닌 색소의 합성에서 주요한 속도 결정 단계를 수행하는 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 억제하는 작용제들이 피부미백을 위해 개발되어 이용되고 있다. Recently, due to environmental pollution, the increase of ultraviolet light due to the destruction of the ozone layer, and as the stimulation to the skin is increased, the consumer's interest in skin health, in particular, whitening is increasing. Agents that inhibit tyrosinase activity, which performs a major rate determining step mainly in the synthesis of melanin pigments, have been developed and used for skin whitening.
대표적으로, 천연물에서 수득된 하이드로퀴논(hydroquinone), 코직산(kojic acid), 아스코르빈산(ascorbic acid) 및 그 유도체 등이 티로시나아제 활성의 억제에 의한 피부미백과, 햇볕에 의한 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증 개선의 목적으로 연고, 에센스 등의 화장료에 첨가제로 이용되었다. 그러나, 하이드로퀴논은 소정의 미백효과를 발휘하지만, 피부에 대한 자극성이 높아 안전성 문제로 인해 화장료로 사용되지 못하고 있으며, 코직산은 용액 내에서 불안전하여 화장료의 제조공정이 복잡해진다는 단점이 있다. 또한 아스코르빈산은 산화하기 쉬워 이를 배합한 화장료는 변색, 변취되는 등의 문제가 발생이 되어 미백 원료로는 적합하지 않다. 따라서, 멜라닌 색소의 과다 생성을 억제하고, 피부에 대한 독성이 낮으며 안정성이 높은 피부미백용 활성 물질에 대한 요구가 여전히 존재한다. Typically, hydroquinone, kojic acid, ascorbic acid and derivatives thereof obtained from natural products include skin whitening due to inhibition of tyrosinase activity, blemishes caused by sun, freckles, etc. It was used as an additive in cosmetics such as ointments and essences for the purpose of improving skin hyperpigmentation. However, although hydroquinone exhibits a predetermined whitening effect, it is not used as a cosmetic due to safety problems due to high irritation to the skin, and kojic acid is unstable in a solution, which complicates the manufacturing process of the cosmetic. In addition, ascorbic acid is easy to oxidize, and cosmetics containing the same cause problems such as discoloration and deodorization, which is not suitable as a whitening raw material. Therefore, there is still a need for an active substance for skin whitening that suppresses the excessive production of melanin pigments, has low toxicity to the skin and high stability.
따라서, 본 발명자들은 높은 미백 활성과 안정성 및 안전성을 갖는 미백 활성 물질을 탐색하여, 광곽향 추출물에서 분리, 정제한 패출리 알코올이 세포독성 없이 높은 멜라닌 생성 억제 활성을 갖는다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the present inventors have searched for a whitening active substance having high whitening activity and stability and safety, and found that patcholic alcohol isolated and purified from the medicinal extract has high melanin production inhibitory activity without cytotoxicity. Completed.
본 발명의 목적은 피부 독성이 낮고, 안정성 및 피부미백 활성이 높은 활성 물질을 포함하는 피부미백용 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a composition for skin whitening comprising an active substance having low skin toxicity and high stability and high skin whitening activity.
본 발명의 또 다른 목적은 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a method for preparing patchouli alcohol from broad fragrance.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 패출리 알코올을 유효성분으로 포함하는 피부미백용 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for skin whitening comprising a patchouli alcohol as an active ingredient.
본 발명의 피부미백용 조성물에 유효성분으로 포함되는 패출리 알코올은 피부 세포의 흑화를 방지하는 활성이 우수할 뿐 아니라, 물질 자체의 안정성이 매우 우수하여 그 활성이 장기간 유지되며, 피부 자극이 거의 없는 안전성이 매우 우수한 물질이다. 패출리 알코올은 광곽향으로부터 추출, 정제될 수 있으며, 본 발명의 이전에는 멜라닌 생성 억제 활성은 물론, 피부미백제로서의 용도에 관해 전혀 보고된 바 없었다. Patchouli alcohol included as an active ingredient in the skin whitening composition of the present invention is not only excellent in preventing the blackening of the skin cells, but also excellent in the stability of the material itself, the activity is maintained for a long time, almost irritating the skin It is a very good material with no safety. Patchouli alcohol can be extracted and purified from broad fragrance, and there has been no previous report on melanin production inhibitory activity as well as its use as a skin lightening agent.
광곽향은 꿀풀과의 광곽향(Pogostemon cablin Bentham)의 지상부를 건조한 것으로서, 땀이 나게 해서 더위 먹은 것을 없애며, 기를 잘 통하게 하고, 비위의 기능을 강화하여 소화를 돕고, 구토, 복통, 두통 등의 개선을 위해 사용된다. 광곽향은 위액 분비 촉진, 진정, 지사, 건위, 및 해열 효과를 갖는 것으로 보고되었다. 그러나, 광곽향 추출물 중에 포함된 미백 활성 물질은 규명되지 않았으며, 광곽향 추출물 자체에는 미백 활성 물질 외에도 다른 물질들이 혼합되어 있고 이들 간의 상호작용이 미백 효과에 미치는 영향은 알려져 있지 않다. 일반적으로 생약 조추출물 자체를 피부미백용 조성물의 유효성분으로 사용하는 경우, 조추출물 내에는 미백 활성 물질 외에도 다른 성분들이 포함되어 있기 때문에, 일부 성분들이 미백 활성 물질과 바람직하지 않은 반응에 의해 미백 활성이나 안정성에 부정적으로 영향을 미칠 수 있고 또는 원하는 미백 활성을 위해 첨가되어야 하는 유효 성분의 양이 증가되어 피부미백용 조성물의 제조에 제한 요인이 될 수 있다. 실제로, 광곽향 추출물 자체와 본원 발명에서 유효성분으로 사용한 패출리 알코올은 멜라노마 세포를 대상으로 한 멜라닌 생성 억제에서 그 억제 활성을 나타내는 지표인 IC50이 각각 14.4 ㎍/㎖ 및 4.0 ㎍/㎖로 확인되었다. 즉, 광곽향으로부터 추출, 정제된 미백 활성 물질인 패출리 알코올이 광곽향 추출물 자체보다 훨씬 높은 미백 활성을 가지며, 따라서 보다 낮은 농도로 효과적으로 이용될 수 있다는 것을 보여준다. Gwanghyang is the dry part of the ground of Pogostemon cablin Bentham, which makes it sweaty, eliminating heat, breathes well, strengthens the stomach and helps digestion, vomiting, abdominal pain, headache, etc. Used for improvement. Broad fragrance has been reported to have gastric juice secretion, sedation, branch, dry and antipyretic effects. However, the whitening active substance contained in the extract of the broad-spectrum has not been identified, and in addition to the whitening active substance, the broadening extract itself is mixed with other substances, and the effect of the interaction between them on the whitening effect is not known. Generally, when the crude crude extract itself is used as an active ingredient of the skin whitening composition, since the crude extract contains other ingredients besides the whitening active substance, some components are whitening activity by undesirable reaction with the whitening active substance. However, it may negatively affect the stability or increase the amount of the active ingredient to be added for the desired whitening activity may be a limiting factor in the preparation of the composition for skin whitening. In fact, the light gwakhyang extract itself, as an active ingredient a patchouli alcohol indicator of IC 50 is 14.4 ㎍ / ㎖ and 4.0 ㎍ / ㎖ respectively, indicating the inhibitory activity on the generation of melanin that targets a melanoma cell suppression used by the present invention Confirmed. That is, the patchouli alcohol, a whitening active substance extracted and purified from broad fragrance, has much higher whitening activity than the broad fragrance extract itself, and thus can be effectively used at lower concentration.
또한, 광곽향으로부터 추출 및 정제한 패출리 알코올은 공지된 피부미백 활성 물질들과 비교할 때, 멜라닌 생성 억제 효과가 현저하게 우수하다. 패출리 알코올과 공지된 미백 활성 물질인 알부틴 및 코직산를 각각 여러 농도로 함유시킨 배 지에서 B16F10 멜라노마 세포를 72시간 배양한 후 흑화 정도를 비교한 결과, 알부틴은 100㎍/㎖의 농도에서 유의성 있는 세포의 흑화 억제 활성을 보이고(IC50=84㎍/㎖), 코직산은 150㎍/㎖의 농도에서 유의성 있는 세포의 흑화 억제 활성을 보이는 반면(IC50=124㎍/㎖), 패출리 알코올은 이들보다 훨씬 낮은 5㎍/㎖의 농도(IC50=4.0㎍/㎖)에서 유의성 있는 세포의 흑화 억제 활성을 보였다. 이는 패출리 알코올이 미백활성 물질로 사용되고 있는 알부틴 및 코직산에 비해 미백 활성이 탁월하다는 것을 의미하므로, 패출리 알코올은 보다 효과적인 미백 활성물질로 사용될 수 있다. In addition, the patchouli alcohol extracted and purified from the broad fragrance is remarkably excellent in melanin production inhibitory effect compared with known skin lightening active substances. After 72 hours of B16F10 melanoma cells were cultured in various concentrations of patcholic alcohol and known whitening active agents, arbutin and kojic acid, arbutin was significantly increased at a concentration of 100 µg / ml. Cells showed blackening inhibitory activity (IC 50 = 84 μg / ml), kojic acid showed significant blackening inhibitory activity of cells at a concentration of 150 μg / ml (IC 50 = 124 μg / ml), while patcholic alcohol Significantly lowered blackening inhibitory activity of cells at concentrations of 5 μg / ml (IC 50 = 4.0 μg / ml) much lower than these. This means that patchouli alcohol has excellent whitening activity compared to arbutin and kojic acid, which are used as whitening active substances, and therefore, patchouli alcohol can be used as a more effective whitening active substance.
본 발명에 따른 피부미백용 조성물에서 패출리 알코올은 화학적으로 합성되거나 또는 광곽향을 포함한 천연 약재로부터 추출, 정제된 것일 수 있다. Patchouli alcohol in the composition for skin whitening according to the present invention may be chemically synthesized or extracted and purified from natural medicines including a broad fragrance.
본 발명에 따른 피부미백용 조성물에서 패출리 알코올은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 10.0중량%인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 10.0중량%이다. 피부미백용 조성물에서 패출리 알코올의 함량이 0.0001중량% 미만이면 뚜렷한 멜라닌 생성 억제 효과 및 미백효과를 기대하기 어려우며, 10.0중량%를 초과하면 함량 증가에 따른 효과 증진이 크지 않다. 패출리 알코올을 피부미백 효과를 위하여 사용하는 경우, 사용 목적에 따라 그 농도를 달리하여 피부미백용 조성물을 제조할 수 있지만, 일반적인 피부미백용 조성물의 제제, 즉 로션이나 크림 등에는 상기 함량으로 이용된다. Patchouli alcohol in the skin whitening composition according to the present invention is preferably 0.0001 to 10.0% by weight, more preferably 0.005 to 10.0% by weight based on the total weight of the composition. When the content of patchouli alcohol in the skin whitening composition is less than 0.0001% by weight, it is difficult to expect a clear melanin production inhibitory effect and a whitening effect, and when it exceeds 10.0% by weight, the effect of increasing the content is not large. When the patchouli alcohol is used for the skin whitening effect, the composition for skin whitening may be prepared by varying its concentration according to the purpose of use, but the above-mentioned content is used for the preparation of the general skin whitening composition, that is, lotion or cream. do.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 피부미백용 조성물은 화장수, 크림, 팩, 파 운데이션, 및 메이크업 베이스로 구성되나, 이에 한정되지 않는 군으로부터 선택되는 제형일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the composition for skin whitening may be a formulation selected from the group consisting of, but not limited to, lotion, cream, pack, foundation, and makeup base.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 피부미백용 조성물은 유효 성분인 패출리 알코올 외에, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온성 또는 비이온성 유화제, 충전제, 보존제, 습윤제, 오일, 염료, 리포좀 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분을 더 포함할 수 있다. 이와 같은 성분들은 화장품에 통상적으로 사용되는 양으로 포함될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the skin whitening composition of the present invention, in addition to the patchouli alcohol as an active ingredient, organic solvents, solubilizers, thickeners, gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, It may further comprise surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, preservatives, wetting agents, oils, dyes, liposomes or any other ingredients conventionally used in cosmetics. Such ingredients may be included in amounts commonly used in cosmetics.
본 발명은 또한, 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법을 제공한다. The present invention also provides a method of preparing patchouli alcohol from broad fragrance.
본 발명에 따른 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법은 Method for producing a patchouli alcohol from the fragrance according to the present invention
광곽향을 수증기 증류에 의해 12-24시간 동안 처리하여 정유 성분을 추출하는 단계, Processing the fragrance for 12-24 hours by steam distillation to extract essential oil components,
상기에서 추출된 광곽향의 정유 성분을 노르말 헥산에 용해시켜 추출액을 수득하는 단계,Dissolving the essential oil component of the above-mentioned aromatic fragrance in normal hexane to obtain an extract;
상기 추출액을 농축하여 정유 성분의 추출물을 수득하는 단계, 및Concentrating the extract to obtain an extract of an essential oil component, and
상기 정유 성분의 추출물을 크로마토그래피에 의해 정제하여 정제된 추출물을 수득하는 단계를 수득하는 단계를 포함한다.Purifying the extract of the essential oil component by chromatography to obtain a step of obtaining a purified extract.
본 발명에 따른 패출리 알코올의 제조방법은 광곽향을 수증기 증류 추출법으로 처리하여 정유 성분을 추출하는 단계를 포함한다. 상기 수증기 증류 추출법은 2-4회 또는 필요에 따라 그 이상 반복 수행될 수 있다. The method for producing patchouli alcohol according to the present invention includes the step of extracting essential oil components by treating the fragrance with steam distillation extraction. The steam distillation extraction method may be repeated 2-4 times or more times as necessary.
본 발명에 따른 패출리 알코올의 제조방법은 수증기 증류 추출에 의해 수득된 광곽향의 정유 성분을 노르말 헥산에 용해시켜 노르말 헥산에 용해된 정유 성분을 포함하는 추출액을 수득하는 단계를 포함한다. The method for producing a patchouli alcohol according to the present invention comprises dissolving the essential oil component of the broad fragrance obtained by steam distillation extraction in normal hexane to obtain an extract containing the essential oil component dissolved in normal hexane.
본 발명에 따른 패출리 알코올의 제조방법은 상기 추출액을 농축하여 정유 성분의 추출물을 수득하는 단계를 포함한다. 상기 농축은 노르말 헥산에 용해된 정유 성분을 포함하는 추출액을 회전 진공 농축기를 이용하여 약 10-30℃에서 증발시키는 방법을 포함하나, 이에 한정되지 않는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 공지된 통상적인 방법에 의해 수행될 수 있다. The method for producing a patchouli alcohol according to the present invention includes the step of concentrating the extract and obtaining an extract of the essential oil component. The concentration includes a method of evaporating an extract including an essential oil component dissolved in normal hexane at about 10-30 ° C. using a rotary vacuum concentrator, but is not limited thereto, and is a conventional method known in the art. It can be performed by.
본 발명에 따른 패출리 알코올의 제조방법은 광곽향으로부터 수증기 증류 추출, 노르말 헥산에 의한 용해 및 농축에 의해 수득된 정유 추출물을 크로마토그래피에 의해 정제하는 단계를 포함한다. 상기 정유 추출물을 크로마토그래피에 의해 정제하는 단계는 실리카겔 컬럼(Merck, Art 7734) 및 노르말 헥산:에틸아세테이트(50:1, 구배농도)를 용리액으로 한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분획을 수득하는 단계, 상기 분획을 노르말 헥산:에틸아세테이트(50:1, 구배농도)를 이용한 박층 크로마토그래피(TLC)에 의해 전개시켜 확인, 분리하고 멜라닌 생성 억제 활성이 가장 높은 분획을 선별하는 단계, 및 상기에서 선별된 분획을 C18-수지를 충진제로 충진한 컬럼 및 물:메탄올(15:85) 용액을 용리액으로 한 역상 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리, 정제하고 멜라닌 생성 억제 활성이 가장 높은 분획을 선 별하는 단계를 포함할 수 있다.The method for producing a patchouli alcohol according to the present invention comprises the step of purifying the essential oil extract obtained by steam distillation extraction, dissolving and concentrating with normal hexane from the broad fragrance. Purifying the essential oil extract by chromatography was performed by silica gel column chromatography using a silica gel column (Merck, Art 7734) and normal hexane: ethyl acetate (50: 1, gradient) as eluent to obtain a fraction. , The fractions are developed by thin layer chromatography (TLC) using normal hexane: ethyl acetate (50: 1, gradient concentration), identified and separated, and the fractions having the highest melanogenesis inhibitory activity are selected, and the screening is performed. The purified fractions were separated and purified by column packed with C 18 -resin with a filler and reversed phase column chromatography using a water: methanol (15:85) solution as eluent and selecting the fraction having the highest melanogenesis inhibitory activity. It may include.
상기 크로마토그래피에 의해 정제하는 단계는 수득하고자 하는 패출리 알코올의 수율 및 활성에 따라 필요한 만큼 반복될 수 있다. Purification by chromatography can be repeated as necessary depending on the yield and activity of the patchouli alcohol to be obtained.
상기 정제 단계에서, 멜라닌 생성 억제 활성이 가장 높은 분획을 선별하는 단계는 멜라닌 생성 억제 활성을 측정하는 것에 의해 수행될 수 있다. In the purification step, the step of selecting the fraction with the highest melanogenesis inhibitory activity can be carried out by measuring the melanogenesis inhibitory activity.
본 발명에 따른 광곽향으로부터 패출리 알코올을 제조하는 방법은 상기 크로마토그래피에 의한 정제 단계 후에 정제된 추출물을 수집하고 증발시켜 정유 상태의 패출리 알코올을 수득하는 단계를 더 포함할 수 있다. The method for producing patchouli alcohol from the broad fragrance according to the present invention may further include the step of collecting and evaporating the purified extract after the purification step by chromatography to obtain the patchouli alcohol in the essential oil state.
본 발명의 일 구체예에서, 패출리 알코올의 제조는 하기와 같이 수행될 수 있다. 광곽향을 수증기 증류 추출법으로 12-24시간 동안 처리하여 정유 성분을 추출한다. 상기 추출액에 노르말 헥산을 가하여 용해시키고 분배에 의해 헥산층을 수득한다. 상기에서 수득된 헥산층을 회전 진공 농축기로 약 10-30℃에서 증발시켜 정유 성분의 추출물을 수득하고, 실리카겔 컬럼(Merck, Art 7734) 및 노르말 헥산:에틸아세테이트(50:1, 구배농도)를 용리액으로 이용하여 크로마토그래피를 실시한다. 이때 용리액을 250㎖ 단위로 분획하여 전개시키고 얻은 각각의 분획물을 동일 용리액을 이용하여 박층크로마토그래피(Merck, Art 5554)를 실시하여 확인한 후 멜라닌 생성 억제력을 평가하여 그 활성이 가장 높은 분획을 선별하고 수집한다. 상기에서 수집된 분획을 대상으로 물:메탄올(15:85)을 용리액으로 C18-수지를 충진제로 한 역상 컬럼 크로마토그래피를 수행하고 정제된 분획을 수득한다. 이때 용리액 을 20㎖ 단위로 분획하여 전개시키고 수득한 각각의 분획물에 대하여 멜라닌 생성 억제력을 평가하여 그 활성이 가장 높은 분획을 모아 증발시키고 정유 상태의 패출리 알코올을 수득한다. In one embodiment of the present invention, the preparation of patchouli alcohol can be carried out as follows. The ginseng is treated with steam distillation for 12-24 hours to extract essential oils. Normal hexane is added to the extract to dissolve it, and a hexane layer is obtained by partitioning. The hexane layer obtained above was evaporated at about 10-30 ° C. with a rotary vacuum concentrator to obtain an extract of essential oil components, and silica gel column (Merck, Art 7734) and normal hexane: ethyl acetate (50: 1, gradient concentration) were obtained. Chromatography is carried out using the eluent. At this time, the eluate was developed by dividing the eluent into 250 mL units, and each fraction obtained was identified by thin layer chromatography (Merck, Art 5554) using the same eluent, and the fraction having the highest activity was selected by evaluating the inhibition of melanin production. Collect. The collected fractions were subjected to reverse phase column chromatography using water: methanol (15:85) as eluent with C 18 -resin as a filler to obtain purified fractions. At this time, the eluate was developed by dividing the eluent in 20 ml units, and each fraction obtained was evaluated for its ability to inhibit melanin production, and the fractions having the highest activity were collected and evaporated to obtain an essential oil of patchouli alcohol.
본 발명에 따른 패출리 알코올을 유효성분으로 포함하는 피부미백용 조성물은 멜라닌 생성의 억제에 의한 피부미백 효과가 뛰어나며 독성이나 부작용에 대한 우려없이 안전하게 이용될 수 있다. Skin whitening composition comprising a patchouli alcohol according to the present invention as an active ingredient is excellent skin whitening effect by the inhibition of melanin production and can be safely used without concern for toxicity or side effects.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것에 불과하며, 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 의도되지 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail by Examples and Experimental Examples. However, the following examples are only intended to illustrate the invention and are not intended to limit the scope of the invention.
실시예 1. 패출리 알코올의 제조 Example 1 Preparation of Patchouli Alcohol
(1) 패출리 알코올의 분리 및 정제(1) Isolation and Purification of Patchouli Alcohol
광곽향 600g에 3차 증류수 5ℓ를 가하고 약 100℃에서 24시간 가열한 후 정유 상태의 추출물을 수득하였다. 상기 추출물을 물과 노르말 헥산의 1:1 혼합액 800 ㎖에 용해시키고 3회 분배 추출하여 헥산 층을 수득하였다. 상기에서 수득된 헥산 층을 진공 건조하여 약 10g의 추출물을 수득하였다. 이 추출물 중 패출리 알코올의 함량은 GC(HP5890 SERIES II, HP-1 capillary column)를 이용하여 분석한 결과 약 0.7% 였다. After tertiary distilled water (5 L) was added to 600 g of Gwangyang fragrance and heated at about 100 ° C. for 24 hours to obtain an essential oil extract. The extract was dissolved in 800 mL of a 1: 1 mixture of water and normal hexane and extracted three times to obtain a hexane layer. The hexane layer obtained above was dried in vacuo to yield about 10 g of extract. The content of patchouli alcohol in the extract was about 0.7% when analyzed using GC (HP5890 SERIES II, HP-1 capillary column).
상기에서 수득된 추출물을 노르말 헥산:에틸아세테이트(50:1, 구배농도)를 용리액으로 이용한 실리카겔(Merck, Art 7734) 컬럼크로마토그래피에 의해 정제하였다. 이때 용리액을 250㎖ 단위로 분획하여 전개시키고 얻은 각각의 분획물을 동일한 용리액에 의한 박층크로마토그래피를 실시하여 전개를 확인하고 분리한 후 멜라닌 생성 억제력을 평가하여 그 활성이 가장 높은 분획을 선별하였다. 선별된 분획을 물:메탄올(15:85)을 용리액으로 하여 C18-수지를 충진제로 한 역상 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 이 때 용리액은 20㎖ 단위로 분획하여 전개시키고 얻은 각각의 분획물에 대하여 멜라닌 생성 억제력을 평가하여 그 활성이 가장 높은 분획을 모아 증발시켜 정유 상태의 미백 활성 물질을 수득하였다. The extract obtained above was purified by silica gel (Merck, Art 7734) column chromatography using normal hexane: ethyl acetate (50: 1, gradient) as the eluent. At this time, the eluate was developed by dividing the eluent into 250 ml units, and each fraction obtained by thin layer chromatography using the same eluent was confirmed to develop and separated, and the melanin production inhibition was evaluated to select the fraction having the highest activity. The selected fractions were separated by reverse phase column chromatography using water: methanol (15:85) as eluent with C 18 -resin as a filler. At this time, the eluate was fractionated and developed in 20 ml units, and the melanin production inhibitory power was evaluated for each of the obtained fractions, and the fractions having the highest activity were collected and evaporated to obtain a whitening active substance in a refined state.
(2) 패출리 알코올의 구조 확인(2) Confirmation of the structure of patchouli alcohol
상기 (1)에서 수득된 미백 활성 물질을 시료로 NMR System: 500 Spectrophotometer(Varia, Palo Alto, CA)를 이용한 NMR 분석을 수행하여 표 1의 데이터를 수득하고(GC/MS m/z = 222[M]+), 패출리 알코올로 확인하였다. 패출리 알코올은 정유 상태로서, 그 구조는 하기 화학식 1과 같았다. NMR analysis using NMR System: 500 Spectrophotometer (Varia, Palo Alto, CA) was performed using the whitening active material obtained in (1) as a sample to obtain the data shown in Table 1 (GC / MS m / z = 222 [ M] + ), Patchouli alcohol. Patchouli alcohol is an essential oil, and its structure is represented by the following Chemical Formula 1.
<화학식 1> <Formula 1>
표 1. 패출리 알코올의 1H, 13C-NMR 데이터Table 1. 1 H, 13 C-NMR data of patchouli alcohol
실시예 2. 패출리 알코올의 세포독성 및 피부미백 활성Example 2. Cytotoxicity and Skin Whitening Activity of Patchouli Alcohol
실시예 1에서 제조된 패출리 알코올의 세포 독성 및 피부미백 효과를 확인하기 위해 B16F10 멜라노마 세포를 이용하여 MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide, Sigma Chemical Co. USA) 분석 및 멜라닌 생성 저해 분석을 수행하였다. 본 실시예에서 사용된 B16F10 멜라노마 세포는 멜라닌을 분비하는 마우스에서 유래된 세포주이며, 미국세포주은행(ATCC)으로부터 구입하여 사용하였다. MTT (3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H using B16F10 melanoma cells to confirm the cytotoxicity and skin lightening effect of the patchouli alcohol prepared in Example 1 -tetrazolium bromide (Sigma Chemical Co. USA) analysis and melanogenesis inhibition assay. The B16F10 melanoma cells used in this example are cell lines derived from mice that secrete melanin, and were purchased from the American Cell Line Bank (ATCC).
(1) 패출리 알코올의 세포독성 (1) Cytotoxicity of Patchouli Alcohol
패출리 알코올의 세포독성을 평가하기 위해 B16F10 멜라노마 세포에 대해 MTT 분석을 실시하였다. 트립신 처리(trypsinization)에 의해 회수한 B16F10 멜라노마 세포를 10% 우태혈청(Fetal Bovine Serum)과 1% 항생제(페니실린+스트렙토마이신, Lonza)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 현탁시킨 후 96-웰 조직배양용 플레이트의 각 웰에 세포 현탁액(5×103 세포/웰)을 접종한 다음, 37℃에서 5% CO2 조건으로 5시간 배양하였다. 5시간 배양 후 패출리 알코올을 디메틸설폭시드(DMSO, dimethyl sulfoxide)에 용해시킨 용액을 하기 표 2에 열거한 농도별로 처리한 후 72시간 더 배양하였다. 배양이 끝난 후 생리 식염수에 용해시킨 MTT 용액 20㎕(4㎎/㎖)을 각 웰에 첨가하여 4시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 200㎕의 DMSO를 첨가하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 용해시킨 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader)를 이용하여 595㎚에서 농도 별로 흡광도를 측정하였다. 상기 세포독성 시험에서 대조군은 패출리 알코올 용액 대신, 패출리 알코올을 용해시키기 위해 이용한 DMSO로 처리한 것을 제외하고는 동일한 방법으로 처리하였다. MTT assay was performed on B16F10 melanoma cells to assess the cytotoxicity of patchouli alcohol. B16F10 melanoma cells recovered by trypsinization were suspended in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) with 10% Fetal Bovine Serum and 1% antibiotics (penicillin + streptomycin, Lonza). Each well of the plate for well tissue culture was inoculated with a cell suspension (5 × 10 3 cells / well), and then incubated at 37 ° C. under 5% CO 2 conditions for 5 hours. After 5 hours of incubation, the solution of the patcholic alcohol dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, dimethyl sulfoxide) was treated for each concentration listed in Table 2, followed by further 72 hours of incubation. After incubation, 20 µl (4 mg / ml) of MTT solution dissolved in physiological saline was added to each well and incubated for 4 hours. After incubation, the medium was removed, and formazan crystals formed by dissolving 200 μl of DMSO were dissolved, and the absorbance was measured at a concentration of 595 nm using a microplate reader. In the cytotoxicity test, the control group was treated in the same manner except that it was treated with DMSO used to dissolve the patchouli alcohol instead of the patchouli alcohol solution.
하기 식을 이용하여 세포 생존율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나 타내었다.Cell viability was calculated using the following equation, and the results are shown in Table 2 below.
세포 생존율 (%) = 100 - (1 - 각 시료의 흡광도/대조군의 흡광도) × 100Cell viability (%) = 100-(1-absorbance of each sample / absorbance of control) × 100
표 2. 패출리 알코올의 세포독성Table 2. Cytotoxicity of Patchouli Alcohol
(2) 멜라닌 생성 저해율 측정(2) melanin production inhibition rate measurement
실시예 1에서 제조된 패출리 알코올의 미백효과를 검정하기 위해, B16F10 멜라노마 세포에 대한 멜라닌 생성 저해율을 측정하였다. In order to assay the whitening effect of the patchouli alcohol prepared in Example 1, the rate of melanogenesis inhibition against B16F10 melanoma cells was measured.
B16F10 멜라노마 세포의 멜라닌 생성 저해 효과 측정은 하기와 같이 수행하였다. B16F10 멜라노마 세포를 10% 우태혈청과 1% 항생제(페니실린+스트렙토마이신, Lonza)를 첨가한 DMEM에 현탁시킨 후, 조직배양용 배지를 담은 24-웰 플레이트의 각 웰에 상기 세포현탁액(4x104 세포/웰)을 접종하고 5시간 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 α-MSH(melanocyte stimulating hormone)와 IBMX (3-isobutyl-1-methylxanthine)가 보충된 DMEM 배지에 독성을 유발하지 않는 농도(1-20㎍/㎖)로 패출리 알코올을 첨가한 배지로 교체하여 72시간 동안 배양하였다. 음성 대조군은 시료 대신 시료를 용해시키기 위해 사용한 DMSO를 처리하고, 양성 대조군은 패출리 알코올 대신, 기존에 멜라노마에서 멜라닌 저해 효과를 갖는 것으로 알려진 알부틴(arbutin)과 코직산(kojic acid)을 농도 별로 처리하여 사용하였다. 배양 후 멜라닌 함량을 측정할 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 원심 분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내의 멜라닌 정량은 Lotan(Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 변형하여 실시하였다. 원심분리에 의해 수득된 세포 펠렛(pellet)에 1N NaOH + 10% DMSO를 첨가하여 멜라닌을 추출하고 용해시킨 후, 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정하였다. The melanin production inhibitory effect of B16F10 melanoma cells was measured as follows. B16F10 melanoma cells were suspended in DMEM with 10% fetal calf serum and 1% antibiotics (penicillin + streptomycin, Lonza), and then the cell suspension ( 4 × 10 4) in each well of a 24-well plate containing tissue culture medium. Cells / well) were inoculated and incubated at 5% CO 2 , 37 ° C. for 5 hours. Afterwards, DMEM medium supplemented with α-MSH (melanocyte stimulating hormone) and IBMX (3-isobutyl-1-methylxanthine) was added with patcholic alcohol at a concentration (1-20 μg / ml) that did not cause toxicity. Replace and incubate for 72 hours. The negative control treated with DMSO used to dissolve the sample instead of the sample, and the positive control treated with arbutin and kojic acid by concentration instead of patcholic alcohol, which had previously been known to have melanin inhibitory effects in melanoma. Was used. After incubation, the cells to be measured for melanin content were removed with trypsin-EDTA and centrifuged to recover the cells. The melanin quantification in cells was performed by modifying the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). Melanin was extracted and dissolved by adding 1N NaOH + 10% DMSO to the cell pellet obtained by centrifugation, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm using a microplate reader.
하기 식을 이용하여 멜라닌 생성 저해율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 하기 표 3에서, IC50은 멜라닌 생성 저해율 50%를 달성하기 위해 소요되는 시료의 농도로서 다른 물질과 상대적으로 비교할 때 사용하는 지표이며 값이 작을수록 멜라닌 생성 저해율이 높다는 것을 나타낸다. Melanin inhibition was calculated using the following formula, and the results are shown in Table 3 below. In Table 3 below, IC 50 is a sample concentration used to achieve 50% melanogenesis inhibition rate, which is an indicator used in comparison with other substances, and the smaller the value, the higher the melanogenesis inhibition rate.
멜라닌 생성 저해율(%) = 100 - (각 시료의 흡광도/음성 대조군의 흡광도 X 100)% Melanogenesis inhibition = 100-(absorbance X 100 of each sample / absorbance of negative control)
표 3. 멜라닌 생성 저해Table 3. Melanin Production Inhibition
(3) 인 비보 머쉬룸 티로시나아제(mushroom tyrosinase) 활성 저해 시험(3) In vivo mushroom tyrosinase activity inhibition test
티로시나아제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화 과정을 촉진하여 멜라닌의 생성에 관여하는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 티로신의 산화에 의해 멜라닌이 형성되는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S.H., J. Biochem., 24:161-168, 1966)을 응용하여 실시예 1에서 제조된 패출리 알코올의 미백 효과를 평가하였다. Tyrosinase is an enzyme involved in the production of melanin by promoting the oxidation process of a substance called tyrosine in vivo. In this Example, the method of inhibiting the activity of the enzyme to measure the degree of inhibition of melanin formation by the oxidation of tyrosine (Pomerantz SH, J. Biochem., 24: 161-168, 1966) was applied to the Example The whitening effect of the patchouli alcohol prepared in 1 was evaluated.
B16F10 멜라노마를 10% 우태혈청과 1% 항생제(페니실린+스트렙토마이신, Lonza)를 첨가한 DMEM에 현탁시킨 후, 조직배양용 배지를 담은 6-웰 프레이트의 각 웰에 상기 세포 현탁액을 5×105 세포/웰의 밀도로 접종하고 5시간 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 하기 표 4에 표시된 농도로 패출리 알코올 용액을 처리하여 72시간 동안 배양했다. 대상 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 원심 분리하여 세포를 회수하고 세포용해 용액 (PBS + Triton X-100)으로 세포를 용해시켰다. 상기 세포 용해액을 원심분리하여 수득한 세포 용해물 80㎕에 L-도파 20㎕를 넣고 37℃에서 5 내지 10분간 반응시킨 후 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나아제에 대한 저해율을 측정하였다. 인 비보 티로시나아제 활성 저해 시험에서 음성 대조군은 시료 대신 시료를 용해시키기 위해 이용된 DMSO를 넣은 것을 제외하고는 동일한 방법으로 처리하였다. 양성 대조군은 알부틴을 100㎍/㎖ 농도로 처리한 것을 제외하고는 동일한 방법으로 처리하였다. 하기 식를 이용하여 인 비보 티로시나아제 활성 저해율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 표시하였다. The cell suspension was 5 × 10 5 per well of B16F10 melanoma dry 10% fetal calf serum and 1% antibiotic 6-well containing the freight were suspended in a DMEM added (penicillin + streptomycin, Lonza), tissue culture medium Inoculated at a density of cells / well and incubated at 5% CO 2 , 37 ° C. for 5 hours. Thereafter, the patchouli alcohol solution was treated at the concentrations shown in Table 4 below and incubated for 72 hours. The cells were detached with trypsin-EDTA and centrifuged to recover the cells, and the cells were lysed with cytolysis solution (PBS + Triton X-100). 20 μl of L-dopa was added to 80 μl of the cell lysate obtained by centrifugation of the cell lysate, followed by reaction for 5 to 10 minutes at 37 ° C., and then absorbance at 490 nm using a microplate reader. Inhibition rate was measured. In the in vivo tyrosinase activity inhibition test, the negative control was treated in the same manner except that the DMSO used to dissolve the sample was added instead of the sample. The positive control was treated in the same way except that arbutin was treated at a concentration of 100 μg / ml. In vivo tyrosinase activity inhibition rate was calculated using the following formula, and the results are shown in Table 4 below.
인 비보 티로시나아제 활성 저해율 (%) = 100 - (각 시료의 흡광도/음성대조군의 흡광도 x 100)In vivo tyrosinase activity inhibition rate (%) = 100-(absorbance of each sample / absorbance of negative control x 100)
표 4. 인 비보 티로시나아제 활성 저해Table 4. Inhibition of In vivo Tyrosinase Activity
(4) 갈색 기니아 피그(Brown guinea pig)에 대한 피부미백 활성 확인 (4) Confirmation of Skin Whitening Activity against Brown Guinea Pigs
갈색 기니아 피그는 사람과 같이 자외선, UV, 알레르기 반응 등에 의해 색소침착이 발생하는 동물이다. 갈색 기니아 피그는 털과 피부의 빛깔이 동일하기 때문에 털의 빛깔이 균일하게 갈색인 것을 고르면 제모한 뒤에 광범위한 부위를 피부에 대한 활성 시험을 위해 사용할 수 있다. 하기에 기재된 방법으로 색소 침착을 유발하고, 그 색소 침착 부위에 미백제를 도포하는 방법에 의해, 색소 침착의 개선 효과를 평가할 수 있다. 또한, 이 방법에 의해 색소 침착의 개선 효과가 확인된 물질은 사람의 자외선 색소 반에서의 평가에도 효과가 나타날 확률이 높기 때문에 일차 인 비보 활성 시험으로 유용하게 사용될 수 있다.Brown guinea pigs, like humans, are animals that cause pigmentation due to ultraviolet rays, UV rays, and allergic reactions. Brown guinea pigs have the same color of hair and skin, so if you choose a uniform brown color, you can use a wide range of areas for skin activity testing after depilation. Pigmentation is induced by the method described below, and the improvement effect of pigmentation can be evaluated by the method of apply | coating a whitening agent to the pigmentation site | part. In addition, the substance whose pigmentation improvement effect is confirmed by this method can be usefully used as a primary in vivo activity test because it is highly likely to show an effect also in the evaluation of a person's ultraviolet pigment half.
① 자외선 색소반의 형성① Formation of UV Pigment
자외선(UVB)에 의한 색소침착의 유발은, 갈색 기니아피그의 배후의 털을 제거한 피부에 3×3cm의 정방형의 개구부가 6개 뚫린 차광용 알루미늄 호일을 접착시킨 후, SE 램프(파장 290-320nm, Toshiba)로 자외선(UVB)을 1,350 mJ/㎠ 조사하였다. 조사 후, 알루미늄 호일을 벗겨내고, 하기의 도포법으로 시험물질의 미백효과를 평가하였다. 자외선 조사 후 색소 침착은 2 내지 3일 후에 나타나며, 약 1 내지 2주 후에 정점에 도달한다. 생성된 자외선 색소반의 색조가 동일하며 얼룩이 생기 지 않는 것이 중요하고, 자외선 색소반의 형성이 좋지 않은 개체는 좋은 결과를 위해 쓰지 않는 편이 좋다. Induction of pigmentation by ultraviolet light (UVB) was performed by attaching a light shielding aluminum foil having six openings of 3 × 3 cm square to the skin from which the hairs of the brown guinea pig were removed, followed by an SE lamp (wavelength 290-320nm). , Toshiba) was irradiated with ultraviolet (UVB) 1,350 mJ / ㎠. After irradiation, the aluminum foil was peeled off and the whitening effect of the test substance was evaluated by the following coating method. Pigmentation after ultraviolet irradiation appears 2 to 3 days later and peaks after about 1 to 2 weeks. It is important that the resulting UV pigments have the same color tone and that no stains occur. Individuals with poor UV pigment formation should not be used for good results.
② 미백제의 도포② Application of whitening agent
자외선 조사 후 미백제의 도포는 색소 침착이 정점에 도달하는, 즉 색소 침착이 유발된 후 약 10일 후에 시작하였다. 도포 횟수는 l일 1회 또는 2회로 하여, 30일간 도포를 계속하였다. 도포 물질은 표 5의 시험물질을 부형제(프로필렌글리콜:에탄올:정제수=5:3:2의 혼합용매)에 누적 자극이 나타나지 않는 농도로 용해시킨 것으로, 면봉으로 도포하며 도포 부위와 구별되는 다른 부위에 부형제만을 도포하여, 이를 대조군으로 하였다.Application of the whitening agent after ultraviolet irradiation began about 10 days after the pigmentation reached its peak, ie, the pigmentation was induced. The frequency | count of application | coating was once or twice a day, and application | coating was continued for 30 days. The coating material is obtained by dissolving the test material in Table 5 at a concentration that does not show cumulative stimulation in an excipient (propylene solvent: ethanol: purified water = 5: 3: 2 mixed solvent), and is coated with a cotton swab and is distinguished from the application site. Only excipients were applied to, to make it a control.
③ 효과의 판정③ determination of effect
Chroma Meter CR-400(Minolta, Japan)을 사용하여 피부의 흑백 정도를 측정함으로써, 미백 효과를 판정하였다. 색을 표시하는 데에는 L* a* b*표색계를 사용하였으며, L* 값은 정해진 백판으로 교정하고, 측정은 1개 부위당 5회 이상 측정하여 색소 침착부를 균등하게 측정하였다. 도포 시작 시점과 완료 시점의 피부색의 차이(△L*)를 하기 식에 따라 계산하여, 이를 표 6에 나타내었다. 미백 효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L* 의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소에 대한 미백 효과가 우수한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백효과가 있다고 판정할 수 있다.The whitening effect was determined by measuring the black-and-white degree of skin using Chroma Meter CR-400 (Minolta, Japan). L * a * b * colorimeter was used to display the color, the L * value was calibrated with a predetermined white plate, and the measurement was carried out five times or more per one site to measure the pigmentation part evenly. The difference in skin color (ΔL * ) between the start time and the completion time of application was calculated according to the following equation, which is shown in Table 6. The whitening effect is determined by comparing ΔL * between the sample application site and the control site. When the value of ΔL * is about 2, the whitening effect on the deposited pigment is excellent, and when about 1.5 or more, the whitening effect is determined. Can be.
△L* = 도포 30일 후의 L* 값 - 도포 개시할 때의 L* 값△ L * = L * value after 30 days application - L * values at the time of start of the coating
표 5. 갈색 기니어 피그에서의 피부미백 효과Table 5. Skin Whitening Effects in Brown Guinea Pigs
실시예 3. 패출리 알코올을 포함하는 피부미백용 조성물Example 3. A composition for skin whitening containing patchouli alcohol
상기 실시예 1의 방법에 의해 패출리 알코올과 통상적인 방법으로 제조한 미백용 크림 조성물을 준비하였다. 준비된 미백용 크림 조성물 100g에 패출리 알코올 1g 혼합하여 패출리 알코올을 미백 활성 물질로 포함하는 미백용 크림 조성물을 제조하였다. 대조군는 패출리 알코올을 제외한 나머지 성분만으로 동일한 방법에 의해 미백용 크림을 제조하였다.The patchouli alcohol and the whitening cream composition prepared by the conventional method were prepared by the method of Example 1. A whitening cream composition containing patchouli alcohol as a whitening active material was prepared by mixing 1 g of patchouli alcohol with 100 g of the prepared whitening cream composition. As a control, a whitening cream was prepared by the same method using only the remaining ingredients except patchouli alcohol.
상기에서 제조된 패출리 알코올을 포함하는 시험군 미백용 크림 및 대조군 미백용 크림의 피부미백효과 및 피부자극을 평가하기 위하여, 하기와 같이 관능시험을 실시하였다.In order to evaluate the skin whitening effect and skin irritation of the test group whitening cream and the control whitening cream containing the patchouli alcohol prepared above, the sensory test was carried out as follows.
건강한 남녀 20명을 대상으로 패출리 알코올을 포함하는 시험군 미백용 크림과 패출리 알코올을 포함하지 않은 대조군 미백용 크림을 일반적인 사용방법에 따라 3개월 동안 사용하여 피부자극 및 미백 효과를 평가하게 하였다. 특히 피부의 미백효과는 대조군 크림을 기준으로 패출리 알코올을 포함하는 크림이 나타내는 미백효과를 상대적으로 평가하게 하였다, 관능평가는 매우 우수(5점), 우수(3점), 보통(0점), 나쁨(-3점), 매우 나쁨(-5점)의 오점법 기준에 의거하여 수행하였으며, 그 결과는 하기 표 7에 표시하였다. 하기 표 7에서 피부자극 항목은 피부자극이 없는 정도를 나타낸다.Twenty healthy men and women were tested for skin irritation and whitening by using a whitening cream containing patcholic alcohol and a control whitening cream containing no patchouli for three months according to the general method of use. . In particular, the skin whitening effect was relatively evaluated by the cream containing the patchouli alcohol based on the control cream, sensory evaluation was very good (5 points), excellent (3 points), moderate (0 points) , Bad (-3 points), very bad (-5 points) was performed according to the blot method criteria, the results are shown in Table 7 below. In Table 7, the skin irritation item represents the degree of no skin irritation.
평가항목인 피부자극은 피부의 가려움, 따가움 및 홍반 등의 현상에 대한 평가이며, 미백효과는 상대적으로 피부의 맑아짐 및 밝아짐 정도에 대한 평가이다.The skin irritation, which is an evaluation item, is an evaluation of phenomena such as itching, stinging and erythema of the skin, and the whitening effect is an evaluation of the degree of skin clearing and brightening.
표 6. 피부미백 및 자극에 대한 관능 시험Table 6. Sensory Tests for Skin Whitening and Irritation
(대조군 크림 대비 패출리 알코올 함유 크림의 효과)Whitening effect
(Effect of Patchouli Alcohol Containing Cream Compared to Control Cream)
상기 표 6에 표시된 바와 같이, 본 발명에 따른 패출리 알코올을 포함하는 미백용 크림에 대한 피부자극 평가점수는 4.05점으로 매우 우수하게 평가되어, 패출리 알코올을 포함하지 않는 대조군과 마찬가지로 피부자극 정도가 낮아 피부 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다.As shown in Table 6, the skin irritation evaluation score for the whitening cream containing the patchouli alcohol according to the present invention was evaluated very good as 4.05, the degree of skin irritation as the control does not contain patchouli alcohol It was confirmed that the low skin safety is excellent.
또한, 대조군 대비 본 발명에 따른 패출리 알코올을 포함하는 미백용 크림의 상대적인 피부미백효과는 평가점수 4.15점으로 대조군 대비 미백효과가 매우 우수 함을 확인할 수 있었다.In addition, the relative skin lightening effect of the whitening cream containing the patchouli alcohol according to the present invention compared to the control was 4.15 points, it was confirmed that the whitening effect is very excellent compared to the control.
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