KR101248549B1 - Salvia plebeia extract, 3′,4′,5,6,7-pentahydroxyflavanone and Method for manufacturing the same, Cosmetic composition produced therefrom - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있으며 피부 미백 효과도 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention has an anti-inflammatory and antibacterial performance, prevents skin aging or wrinkles, and also has a skin whitening effect, 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone and a method for producing the same, It relates to a cosmetic composition prepared therefrom.
Description
본 발명은 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화를 방지하며 피부 미백을 증진시킬 수 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to Morel cabbage extract, 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone and a method for preparing the same, and a cosmetic composition prepared therefrom, and more specifically, having anti-inflammatory and antibacterial properties and having a skin It relates to morel cabbage extract, 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone and a method for preparing the same, a cosmetic composition prepared therefrom, which can prevent aging and enhance skin whitening.
피부의 노화는 활성화된 자유 라디칼에 의해 생체 내에 존재하는 항산화 방어막이 파괴되고, 그로 인해 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화됨으로써 피부 세포 및 조직이 파괴되어 발생할 수 있다. Aging of the skin can occur by activating free radicals, which destroys the antioxidant protective film present in the living body, thereby destroying skin cells and tissues by oxidizing lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are the major constituents of the skin.
이러한 피부 노화를 방지하기 위해서는 여러 원인에 의해 발생하는 자유 라디칼을 소거함으로써 피부 손상을 방지하고 활발한 신진 대사를 통해 이미 손상된 세포를 재생 및 증식시켜 피부를 회복시켜야 한다. In order to prevent such skin aging, it is necessary to prevent skin damage by eliminating free radicals caused by various causes and to restore skin by regenerating and proliferating already damaged cells through active metabolism.
또한, 피부 노화는 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해효소(Matrix Metalloproteinase, 이하 "MMP"라 한다)에 의해서 촉진될 수 있다. 즉, 노화가 진행되면 콜라겐 합성이 감소하고 콜라겐 분해효소인 MMP의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 생기게 된다. 따라서, 피부 노화 및 주름발생을 방지하기 위해서는 세포 내에서 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제해야 한다. In addition, skin aging can be promoted by matrix metalloproteinase (hereinafter referred to as "MMP") which is a collagen degrading enzyme. In other words, as aging progresses, collagen synthesis decreases and the expression of collagen degrading enzyme MMP is promoted, resulting in decreased skin elasticity and wrinkles. Therefore, in order to prevent skin aging and wrinkles, it is necessary to regulate MMP expression or inhibit its activity in cells.
한편, 피부 노화와 별개로 피부색이 변화하는 문제가 있는데, 이러한 피부색변화의 주요 원인은 색소 침착이다. 일반적으로, 피부색에 영향을 미치는 색소는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 이중 멜라닌은 자체적으로 활성 산소를 발생시키고 멜라닌 구조 내의 카테콜 또는 퀴논에 의해서 다른 물질을 환원 또는 산화시키며 자체적으로 자유 라디칼의 성질을 나타내기도 한다. 따라서, 피부 변색을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성을 억제할 필요가 있다. On the other hand, there is a problem that the skin color changes independently of skin aging, the main cause of the skin color change is pigmentation. In general, pigments affecting skin color include melanin, melanoids, carotene, hemoglobin, etc. Of these, melanin generates free radicals on its own and reduces or oxidizes other substances by catechol or quinone in the melanin structure and It also indicates the nature of free radicals. Therefore, in order to prevent skin discoloration, it is necessary to suppress melanin production.
이에 따라 피부 노화를 방지하고 피부 미백을 향상시키기 위한 새로운 물질의 개발이 절실한 상태이다. Accordingly, the development of new materials to prevent skin aging and improve skin whitening is urgently needed.
본 발명은 상기 문제점을 해결하고자 하는 것으로서, 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있으며 피부 미백 효과도 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. The present invention is to solve the above problems, has the anti-inflammatory and antimicrobial performance and can prevent skin aging or wrinkles, and also the skin whitening cabbage extract, 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydr An object of the present invention is to provide oxyflavanone and a method for producing the same, and a cosmetic composition prepared therefrom.
상기 목적을 달성하기 위한 일 측면으로서 본 발명은, 다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone)을 포함하는 곰보 배추 추출물을 제공한다. As one aspect to achieve the above object, the present invention provides a morel cabbage cabbage extract comprising 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone (pentahydroxyflavanone) represented by the following formula.
[화학식][Chemical Formula]
다른 측면으로서 본 발명은, 상기 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 또는 피부주름 개선용 또는 피부 미백용 또는 항염 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다. As another aspect, the present invention provides a cosmetic composition for preventing skin aging or for improving skin wrinkles or for skin whitening or anti-inflammatory or antibacterial comprising the morel cabbage extract as an active ingredient.
또 다른 측면으로서 본 발명은, 곰보 배추 추출물로부터 추출되고 상기 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone)을 제공한다. As another aspect, the present invention provides a 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone extracted from Morel cabbage extract and represented by the above formula.
또 다른 측면으로서 본 발명은, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 또는 피부주름 개선용 또는 피부 미백용 또는 항염 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다. As another aspect, the present invention, the skin's anti-aging or wrinkle improvement or skin whitening or anti-inflammatory or antibacterial cosmetic comprising the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxy flavanone as an active ingredient To provide a composition.
또 다른 측면으로서 본 발명은, 곰보 배추에 알코올을 첨가하고 교반하여 여액을 얻는 공정; 및 상기 여액을 감압 건조하는 공정을 포함하는 곰보 배추 추출물의 제조방법을 제공한다. As another aspect, the present invention, the step of adding alcohol to the Chinese cabbage and stirring to obtain a filtrate; And it provides a method for producing the morel cabbage extract comprising the step of drying the filtrate under reduced pressure.
또 다른 측면으로서 본 발명은, 상기 곰보 배추 추출물을 제조하는 공정; 상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조하는 공정; 상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매 및 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조하는 공정; 상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 및 상기 클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하는 공정을 포함하는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법을 제공한다. As another aspect, the present invention, the step of preparing the morel cabbage extract; Preparing a fraction by sequentially fractionating the morel cabbage extract with n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, and water; Preparing an ethyl acetate / methanol fraction by chromatography of the dichloromethane fraction in the fraction in a column containing a mixed solvent of ethyl acetate and methanol and a column of 230-400 mesh; Performing a thin membrane chromatography on the ethyl acetate / methanol fraction to produce a concentrate having an Rf fractionated from 0.43 to 5.0; Chromatographically treating the concentrate in a trichloromethane / methanol mixed solvent to produce a trichloromethane / methanol fraction; And recrystallizing the chloromethane / methanol fraction by using a mixed solvent of ethyl acetate and methanol, to provide a method of preparing 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone.
본 발명은 다음과 같은 효과가 있다. The present invention has the following effects.
첫째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 MMP-1의 생성을 억제하고 콜라겐의 합성을 증진시킴으로써 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있다. First, 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone and the cosmetic composition comprising the same as the active ingredient and the cosmetic composition comprising the extract and more as an active ingredient according to the present invention The composition can prevent skin aging or wrinkles by inhibiting the production of MMP-1 and enhancing the synthesis of collagen.
둘째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 멜라닌 생성을 억제할 수 있기 때문에 피부 미백 효과가 있다. Second, 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone and the cosmetic composition comprising the same as the active ingredient and the cosmetic composition comprising the extract and more as an active ingredient according to the present invention The composition has a skin whitening effect because it can inhibit melanin production.
셋째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과 및 곰팡이 및 박테리아 등에 대해 항균 효과가 있다. Third, 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone and the cosmetic composition comprising the same as the active ingredient and the cosmetic composition comprising the extract and more as an active ingredient according to the present invention The composition has an anti-inflammatory effect and an antimicrobial effect against mold and bacteria by inhibiting inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation.
도 1은 실험예 2의 자유 라디칼 소거율 실험에서 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 농도에 따른 자유 라디칼 소거율을 나타낸 그래프이다. 1 is a graph showing free radical scavenging rate according to concentration of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone in a free radical scavenging rate experiment of Experimental Example 2. FIG.
이하, 본 발명에 대해서 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.
먼저, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 이로부터 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논에 대해서 상세히 설명하기로 한다. First, the morel cabbage extract of the present invention and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared therefrom will be described in detail.
본 발명의 곰보 배추 추출물은 다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함한다. Morel cabbage extract of the present invention includes 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone represented by the following formula.
[화학식][Chemical Formula]
또한 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 상기 곰보 배추 추출물로부터 추출되고 상기 화학식으로 표시된다. In addition, the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone of the present invention is extracted from the morel cabbage extract and represented by the above formula.
본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 피부노화방지 또는 피부주름방지 용도로 사용될 수 있다. Morel cabbage extract of the present invention and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone may be used for anti-aging or anti-wrinkle use.
구체적으로, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 후술하는 실험예 1 및 2에서 알 수 있듯이 항산화 효과를 나타냄에 따라 피부노화방지 용도로 사용될 수 있고, 후술하는 실험예 3 및 실험예 4에서 알 수 있듯이 MMP-1 생성 억제 효과와 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄에 따라 피부주름개선 용도로 사용될 수 있다. Specifically, the morel cabbage extract of the present invention and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone have anti-aging effects as shown in Experimental Examples 1 and 2 to be described later. It can be used, as can be seen in Experimental Example 3 and Experimental Example 4 to be described later can be used to improve the skin wrinkles by exhibiting the effect of inhibiting MMP-1 production and collagen synthesis.
즉, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 1 및 2에서 나타낸 바와 같이, 활성산소 또는 자유 라디칼을 소거함으로써 피부 세포 및 조직의 산화를 방지함에 따라 피부 노화를 방지할 수 있다. 또한, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 3에서 나타낸 바와 같이, MMP-1 생성을 억제함으로써 콜라겐의 분해를 방지함에 따라 피부 탄력 저하 및 피부 주름 생성을 방지할 수 있다. 또한, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 4에서 나타낸 바와 같이, 콜라겐 합성을 증진시킴으로써 피부 탄력 저하 및 피부 주름 생성을 방지할 수 있다. That is, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experimental Examples 1 and 2, oxidation of skin cells and tissues by scavenging free radicals or free radicals By preventing the skin aging can be prevented. In addition, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experiment 3, by inhibiting the production of collagen by inhibiting the production of MMP-1 skin elasticity Degradation and skin wrinkles can be prevented. In addition, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experiment 4, by preventing collagen synthesis can be reduced skin elasticity and the formation of skin wrinkles have.
본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 피부 미백 용도로 사용될 수 있다. Morel cabbage extract and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone of the present invention can be used for skin whitening applications.
구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 후술하는 실험예 5에서 알 수 있듯이, 멜라닌 생성을 억제함에 따라 피부 미백 용도로 유용하게 사용될 수 있다. Specifically, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as can be seen in Experimental Example 5 to be described later, can be usefully used for skin whitening by inhibiting melanin production Can be.
즉, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 5에서 나타낸 바와 같이, 색소 침착을 일으킬 수 있는 멜라닌 색소의 생성을 억제함으로써 피부 변색을 방지할 수 있다. That is, the morel cabbage extract and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experimental Example 5, the skin discoloration by inhibiting the production of melanin pigment that can cause pigmentation It can prevent.
본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항염증 용도로 사용될 수 있다. Morel cabbage extract and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone of the present invention can be used for anti-inflammatory applications.
구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 6에서 나타낸 바와 같이, 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과를 나타낼 수 있기 때문에 항염 용도로 유용하게 사용될 수 있다. Specifically, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experiment 6, exhibit an anti-inflammatory effect by inhibiting inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation. It can be useful for anti-inflammatory applications.
본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항균 용도로 사용될 수 있다. Morel cabbage extract and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone of the present invention can be used for antibacterial purposes.
구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 10에서 나타낸 바와 같이 상기 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료가 항균 효과를 나타냄에 따라 이로부터 간접적으로 항균 효과가 있다는 것을 알 수 있다. Specifically, the morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, as shown in Experiment 10, the cosmetic containing the morel cabbage extract as an active ingredient shows an antimicrobial effect According to this it can be seen that there is an antimicrobial effect indirectly.
다음, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법에 대해서 상세히 설명한다. Next, the manufacturing method of the morel cabbage extract of the present invention and 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone will be described in detail.
우선, 본 발명의 곰보 배추 추출물은 다음의 공정을 통해 제조된다. First, the morel cabbage extract of the present invention is prepared through the following process.
상기 곰보 배추 추출물은, 곰보 배추에 알코올을 첨가하고 교반하여 여액을 얻은 후, 상기 여액을 감압 건조시켜 제조한다. The morel cabbage extract is prepared by adding alcohol to the morel cabbage and stirring to obtain a filtrate, and then drying the filtrate under reduced pressure.
상기 추출용 용매인 알코올은 메탄올, 에탄올 또는 이들 혼합물을 사용할 수 있다. Alcohol, which is the extraction solvent, may be methanol, ethanol or a mixture thereof.
상기 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 다음의 공정을 통해 제조된다. The 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone of the present invention is prepared through the following process.
상술한 방법에 의해 곰보 배추 추출물을 제조한다. The morel cabbage extract is prepared by the method described above.
이어서, 상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조한다. Subsequently, the Morel cabbage extract is partitioned into n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, and water in order to prepare a fraction.
이어서, 상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 전개용매인 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조한다. 이때, 크로마토그래피는 230-400 메쉬가 충진된 컬럼을 이용하여 수행하고, 상기 에틸아세테이트/메탄올을 30:1에서 0:1의 구배로 흘려주면서 소정의 양씩 분획하여 수행할 수 있다. Subsequently, the dichloromethane fractions in the fractions are chromatographed in a mixed solvent of ethyl acetate and methanol as a developing solvent to prepare an ethyl acetate / methanol fraction. In this case, chromatography may be performed using a column packed with 230-400 mesh, and fractionated by a predetermined amount while flowing the ethyl acetate / methanol in a gradient of 30: 1 to 0: 1.
이어서, 상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조한다. Subsequently, the ethyl acetate / methanol fraction is subjected to thin layer chromatography to prepare a concentrate having an Rf fraction of 0.43 to 5.0.
이어서, 상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조한다. 이때, 상기 크로마토그래피는 세파덱스(sepadex) 20이 충진된 컬럼에서 수행될 수 있다. The concentrate is then chromatographed in trichloromethane / methanol mixed solvent to produce trichloromethane / methanol fractions. In this case, the chromatography may be performed in a column filled with Sephadex (sepadex) 20.
이어서, 상기 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하여 최종적으로 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논이 완성된다. Subsequently, the trichloromethane / methanol fraction is recrystallized using a mixed solvent of ethyl acetate and methanol to finally complete 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone.
다음, 본 발명의 화장료 조성물에 대해 상세히 설명한다. Next, the cosmetic composition of the present invention will be described in detail.
상기 화장료 조성물은 상술한 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함한다. The cosmetic composition comprises the above-mentioned Morel cabbage extract or 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone as an active ingredient.
상기 곰보 배추 추출물의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.000001 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있다. 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone of the Morel cabbage extract may be included in an amount of 0.000001 to 30.0 wt% based on the total cosmetic composition.
상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.000001 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.0001 내지 10.0 중량%로 포함될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 5.0 중량%로 포함될 수 있다. 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 함량이 0.000001 중량% 미만일 경우에는 상술한 바와 같은 효능이 미미하게 발현될 수 있고, 상기 3’,4’,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 함량이 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 효능이 뚜렷하게 향상되지 않기 때문에 경제성이 떨어질 수 있다. The 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone may be included in an amount of 0.000001 to 30.0 wt% based on the total cosmetic composition, preferably 0.0001 to 10.0 wt%, and more preferably May be included as 0.001 to 5.0% by weight. When the content of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone is less than 0.000001% by weight, the above-described efficacy may be insignificantly expressed, and the 3 ′, 4 ′, 5,6 When the content of, 7-pentahydroxyflavanone is more than 30.0% by weight, the economical efficiency may be lowered because the efficacy is not significantly improved.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효 성분인 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하는데, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제와 담체를 포함한다. The cosmetic composition according to the present invention includes components commonly used in cosmetic compositions in addition to the active ingredient morel cabbage cabbage extract or 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone, for example, antioxidants, And conventional auxiliaries and carriers such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings.
상기 화장료 조성물은 상술한 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함함에 따라 피부노화 및 피부주름개선 효능이 있고, 피부미백 효능이 있으며, 항염 및 항균 효능이 있다. The cosmetic composition includes the above-mentioned Morel cabbage extract or 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone, which has an effect on skin aging and wrinkle improvement, skin whitening effect, anti-inflammatory and antibacterial effect. It is effective.
예를 들어, 상기 화장료 조성물은, 실험예 7에서 알 수 있듯이, 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과를 나타낼 수 있기 때문에 피부 항염 용도로 유용하게 사용될 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은, 실험예 10에서 알 수 있듯이, 항균 효과를 나타내기 때문에 항균 용도로 유용하게 사용될 수 있다. For example, the cosmetic composition, as can be seen in Experimental Example 7, because it can exhibit an anti-inflammatory effect by inhibiting the inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation can be usefully used for skin anti-inflammatory applications. In addition, the cosmetic composition, as can be seen in Experimental Example 10, because it exhibits an antimicrobial effect can be usefully used for antibacterial purposes.
상기 화장료 조성물은 상술한 효능 외에도, 후술하는 실험예 8에서 알 수 있듯이, 피부 자극을 완화시키는 효과가 있고, 또한 후술하는 실험예 9에서 알 수 있듯이, 보습 효과가 있다. In addition to the above-described efficacy, the cosmetic composition, as can be seen in Experimental Example 8 to be described later, has an effect of alleviating skin irritation, and also as described in Experimental Example 9 to be described later, has a moisturizing effect.
이와 같이 상기 화장료 조성물은 상술한 노화방지와 같은 특정 효능 이외에도 피부보습과 같은 다양한 효능을 보유하고 있기 때문에 유용한 화장재료로써 사용될 수 있다. As such, the cosmetic composition may be used as a useful cosmetic material because it possesses various effects such as skin moisturization in addition to specific effects such as the above-described anti-aging.
본 발명의 화장료 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클린징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩, 맛사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있다. The cosmetic composition of the present invention is a formulation selected from the group consisting of suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, cleansing, oils, powder foundations, emulsion emulsions, wax foundations, packs, massage creams and sprays. It can be formulated as.
구체적으로는, 상기 화장료 조성물은, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. Specifically, the cosmetic composition may be prepared in the form of a flexible lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. When the formulation is a paste, cream or gel, an animal oil, a vegetable oil, a wax, a paraffin, a starch, a tracer, a cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component .
상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로는 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. If the formulation is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, especially in the case of spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane / Propellant such as butane or dimethyl ether.
상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로는 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용된다. When the formulation is a solution or emulsion, a carrier, solubilizer or emulsion may be used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1, Fatty acid esters of 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan are used.
상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로는 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation is a suspension, the carrier component may be water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로는 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation is surfactant-containing cleansing, the carrier component may be aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether. Sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
이하, 구체적인 제조예를 통하여 본 발명에 대해서 보다 상세히 설명하기로 한다. 이들 제조예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 제조예로 한정되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific production examples. These preparations are merely for illustrating the present invention in more detail, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited to these preparations.
제조예Manufacturing example 1 : 곰보 배추 추출물 및 이로부터 추출된 3′,4′,5,6,7- 1: Morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7- extracted therefrom 펜타하이드록시플라바논의Of pentahydroxyflavanone 제조 Produce
음건한 곰보 배추 약 1.0 ㎏에 70% 에탄올 5L를 가하여 환류 교반시킨 후 여과하여 여액을 얻고 상기 여액을 감압 건조하였는데, 이러한 공정을 2회 반복하여 약 230g의 곰보 배추 추출물을 얻었다. 얻어진 곰보 배추 추출물을 증류수에 녹인 후, n-헥산, 디클로로메탄(CH2Cl2), 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 분획하여 분획물을 얻고, 이들 중 디클로로메탄층을 실리카 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에 로드하고 전개용매로서 에틸아세테이트와 메탄올을 30:1에서 0:1 구배로 흘러주면서 20 ㎖씩을 분획하여 에틸아세테이트와 메탄올 분획물을 얻었다. 얻어진 에틸아세테이트와 메탄올 분획물을 얇은 막 크로마트그래프을 이용하여 Rf=0.43-5.0까지 분획을 농축하였으며, 얻어진 농축물을 세파덱스(sepadex)20이 충진된 컬럼에서 트리클로로메탄:메탄올(1:1)로 분획하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 얻었다. 이후 얻어진 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올로 재결정하여 약 100 ㎎의 재결정물을 얻었다. 5 L of 70% ethanol was added to about 1.0 kg of the dried Morel cabbage, and the mixture was stirred under reflux, filtered to obtain a filtrate, and the filtrate was dried under reduced pressure. This process was repeated twice to obtain about 230 g of Morel cabbage extract. The obtained Morel cabbage extract was dissolved in distilled water, and then fractionated with n-hexane, dichloromethane (CH 2 Cl 2 ), ethyl acetate, n-butanol, and water to obtain a fraction. Among them, the dichloromethane layer was filled with silica 230-400 mesh. 20 mL of ethyl acetate and methanol were flowed in a gradient of 30: 1 to 0: 1 as a developing solvent to obtain ethyl acetate and methanol fractions. The obtained ethyl acetate and methanol fractions were concentrated by a thin membrane chromatograph to Rf = 0.43-5.0, and the obtained concentrate was purified by trichloromethane: methanol (1: 1) in a column filled with sepadex20. Trichloromethane / methanol fractions were obtained. The trichloromethane / methanol fractions thus obtained were recrystallized from ethyl acetate and methanol to obtain about 100 mg of recrystallized matter.
얻어진 상기 재결정물은 NMR 및 Mass 분석기를 이용하여 구조를 분석하였다. 아래 분석결과와 같이 상기 재결정물의 구성성분은 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논으로 확인되었다. The obtained recrystallized material was analyzed by NMR and Mass analyzer. As shown in the analysis results below, the components of the recrystallized product were identified as 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone.
yellow powder ESI-MS m/z: 305 [M+H]+ 1H-NMR (MeOD- d4, 400 MHz): 6.97 (1H, d, J = 1.6Hz, H-2'), 6.85 (1H, dd, J = 1.6 Hz, H-6'), 6.79 (1H, d, J = 8.0 Hz H-5'), 5.94 (1H, s, H-8), 5.33(1H, dd, J = 12.4, 2.8 Hz, H-2), 3.13 (1H, dd, J = 12.4, 17.2 Hz, H-3), 2.74 (1H, dd, J = 17.2, 3.2 Hz, H-3) 13C-NMR (MeOD- d4,, 100 MHz): 79.77 (C-2), 43.04 (C-3), 196.78 (C-4), 149.23 (C-5), 125.57 (C-6), 156.84 (C-7), 95.44 (C-8), 156.36 (C-9), 101.97 (C-10), 130.56 (C-1'), 113.81 (C-2'), 145.30 (C-3'), 145.77 (C-4'), 115.05(C-5'), 118.39 (C-6')yellow powder ESI-MS m / z : 305 [M + H] + 1H-NMR (MeOD - d 4, 400 MHz): 6.97 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2 '), 6.85 (1H, dd, J = 1.6 Hz, H-6 '), 6.79 (1H, d, J = 8.0 Hz H-5'), 5.94 (1H, s, H-8), 5.33 (1H, dd, J = 12.4, 2.8 Hz, H-2), 3.13 (1H, doublet of doublets, J = 12.4, 17.2 Hz, H-3), 2.74 (1H, doublet of doublets, J = 17.2, 3.2 Hz, H-3) 13C-NMR (MeOD - d 4 ,, 100 MHz): 79.77 (C-2), 43.04 (C-3), 196.78 (C-4), 149.23 (C-5), 125.57 (C-6), 156.84 (C-7), 95.44 (C-8), 156.36 ( C-9), 101.97 (C-10), 130.56 (C-1 '), 113.81 (C-2'), 145.30 (C-3 '), 145.77 (C-4'), 115.05 (C-5 ' ), 118.39 (C-6 ')
실험예Experimental Example 1. One. NBTNBT 법을 이용한 항산화 효과 측정 Antioxidant effect measurement
상기 제조예 1에 따라 제조된 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 효과는 NBT법을 이용하여 측정하였다. The antioxidant effect of the morel cabbage extract and 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was measured using the NBT method.
즉, 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 효과는 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소를 NBT법에 의해 측정하고 이러한 활성 산소에 대한 소거율을 통해 평가하였다. 이러한 활성 산소 소거율은 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응함으로써 생성된 청색을 560 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하여 얻었다. In other words, the antioxidant effect of morel cabbage extract and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone was measured by the NBT method to determine the active oxygen produced by xanthine and xanthine oxidase. Evaluation was made through the elimination rate for. This active oxygen scavenging rate was obtained by measuring the absorbance at 560 nm of the blue color produced by reacting the active oxygen produced by xanthine and xanthine oxidase with Nitro Blue Tetrazolium (NBT).
구체적인 측정방법은 다음과 같다. The specific measuring method is as follows.
1) 바이알병에 2.4㎖의 0.05M Na2CO3, 0.1㎖의 3mM 크산틴 용액, 0.1㎖의 3mM EDTA 용액, 0.1㎖의 BSA 용액, 및 0.1㎖의 0.72mM NBT 용액을 가하고, 여기에 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료 0.1㎖를 첨가한 후 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후, 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액을 가하여 고속으로 교반하고 25℃에서 20분간 배양한다. 그 후, 0.1㎖의 6mM CuCl2 용액을 가하여 반응을 정지시키고 560 ㎚에서의 흡광도(St)를 측정한다. 1) To a vial bottle was added 2.4 ml of 0.05M Na 2 CO 3 , 0.1 ml of 3mM xanthine solution, 0.1ml of 3mM EDTA solution, 0.1ml of BSA solution, and 0.1ml of 0.72mM NBT solution Chinese cabbage extract or 0.1 ml of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone sample is added and then left at 25 ° C. for 10 minutes. Then, 0.1 ml of xanthine oxidase solution is added, stirred at high speed, and incubated at 25 ° C for 20 minutes. Thereafter, 0.1 ml of 6 mM CuCl 2 solution is added to stop the reaction, and the absorbance (St) at 560 nm is measured.
2) 시료의 블랭크(Blank)는 상기 1)에서 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도(So)를 측정하여 얻는다. 2) Blank of the sample is obtained by measuring the absorbance (So) in the same manner as in 1) except that distilled water is used instead of 0.1 ml of xanthine oxidase solution in 1).
3) 공시험은 상기 1)에서 상기 시료 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도(Bt)를 측정하여 얻는다. 3) The blank test is obtained by measuring the absorbance (Bt) in the same manner as in 1) except that distilled water is used instead of the sample in 1).
4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 3)과 동일하게 조작하여 흡광도(Bo)를 측정하여 얻는다. 4) Blank in blank test is obtained by measuring the absorbance (Bo) in the same manner as in 3) except that distilled water is used instead of 0.1 ml of xanthine oxidase solution in 3).
상기 활성 산소 소거율은 하기 수학식 1에 의하여 산출하였고, 그 결과는 하기 표 1과 같다. The active oxygen scavenging rate was calculated by
[수학식 1][Equation 1]
활성 산소 소거율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)]×100Active oxygen scavenging rate (%) = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] × 100
상기 수학식 1에서, St는 시료의 효소 반응 후 560 ㎚의 파장에서 흡광도이고, Bt는 공시험의 효소 반응 후 560 ㎚의 파장에서 흡광도이고, So는 시료의 효소 무첨가시 반응 전의 560 ㎚의 파장에서 흡광도이며, Bo는 공시험의 효소 무첨가시 반응 전의 560 ㎚의 파장에서 흡광도이다. In
위 표 1에서 알 수 있듯이, 곰보 배추 추출물과 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도의존적으로 항산화력이 증가하였다. 특히, 곰보 배추 추출물 농도가 20ppm 이상, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 농도가 5 ppm 이상인 경우에는 항산화력이 90% 이상이었다. 상기 곰보 배추 추출물에서 분리한 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항산화력이 상기 곰보 배추 추출물보다 우수하다는 것을 알 수 있다. 이에 따라, 아래 모든 실험에서는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 이용하여 실험하였다. As can be seen in Table 1, the extract of Morel cabbage and 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone increased the antioxidant capacity in a concentration-dependent manner. In particular, when the concentration of Morel cabbage extract of 20ppm or more, the concentration of 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone was 5 ppm or more, the antioxidant power was 90% or more. 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone isolated from the Morel cabbage extract can be seen that the antioxidant power is superior to the Morel cabbage extract. Accordingly, all experiments below were performed using 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone.
실험예Experimental Example 2 : 2 : DPPHDPPH 법을 이용한 항산화 활성 측정Measurement of antioxidant activity
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 활성은 DPPH법을 이용하여 측정하였다. Antioxidant activity of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was measured using the DPPH method.
이러한 DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리 라디칼의 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하는 것이다. 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료의 항산화 활성은 시료에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 560 ㎚의 파장에서 흡광도를 측정하여 자유 라디칼 소거율을 측정하여 얻는다. This DPPH method is to measure the antioxidant activity by reducing power using free groups of DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl) free radical. Antioxidant activity of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone samples was measured by measuring the absorbance at the wavelength of 560 nm by comparing the absorbance of the blank with the DPPH reduction by the sample. It is obtained by measuring the free radical scavenging rate.
이때, 시약으로는 DPPH 프리 라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76, 0.1 mM 용액) 61.88 ㎎을 메탄올에 용해하여 100㎖로 만든 것을 사용하였다. In this case, 61.88 mg of DPPH free radical (Aldrich Chem. Co., MW = 618.76, 0.1 mM solution) was dissolved in methanol to make 100 ml.
구체적인 측정방법은 다음과 같다. The specific measuring method is as follows.
1) 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15㎖ 및 시료 0.15㎖를 가하여 고속에서 교반하고 25℃에서 10분간의 배양한다. 그 후, 560 ㎚의 파장에서 흡광도(St')를 측정한다. 1) Add 0.15 ml of 0.1 mM DPPH solution and 0.15 ml of sample to a 96-well plate, stir at high speed and incubate for 10 minutes at 25 ° C. Thereafter, the absorbance St 'is measured at a wavelength of 560 nm.
2) 시료의 블랭크(Blank)는 상기 1)에서 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일한 방법으로 흡광도(So')를 측정한다. 2) The blank of the sample is measured for absorbance (So ') in the same manner as in 1) except that methanol is used instead of 0.1mM DPPH solution in 1).
3) 공시험은 상기 1)에서 시료 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일한 방법으로 흡광도(Bt')를 측정한다. 3) In the blank test, absorbance (Bt ') is measured in the same manner as in 1) except that distilled water is used instead of the sample in 1).
4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 3)과 동일한 방법으로 흡광도(Bo')를 측정한다. 4) Blank in blank test measures the absorbance (Bo ') in the same manner as in 3), except that methanol was used instead of the 0.1 mM DPPH solution in 3).
상기 자유 라디칼 소거율은 하기 수학식 2에 의하여 산출하였다. The free radical scavenging rate was calculated by the following equation.
[수학식 2]&Quot; (2) "
자유 라디칼 소거율(%) = [1-(St'-So')/(Bt'-Bo')]×100% Free radical scavenging rate = [1- (St'-So ') / (Bt'-Bo')] × 100
도 1에서 알 수 있듯이, DPPH에 의한 자유 라디칼 소거시험에서 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도의존적으로 항산화력이 증가하였고, 5 ppm의 농도에서 90% 이상의 자유 라디칼을 소거하였다. As can be seen in Figure 1, in the free radical scavenging test by
실험예Experimental Example 3 : 3: MMPMMP -1 생성 억제 효과-1 suppression effect
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성 억제 효과는 다음의 방법을 통해 측정하였다. The inhibitory effect of MMP-1 production, collagen degrading enzyme of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was measured by the following method.
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1×106 세포가 되도록 접종하고, 37℃의 온도 및 DMEM 배지(Sigma, 미합중국)에서 24시간 동안 배양한 후, 실험군으로 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 상기 시료가 포함하지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. Fibroblasts (Korean Cell Line Bank, South Korea), which are human normal skin cells, were seeded in 48-well microplates (Nunc, Denmark) at 1 × 10 6 cells per well, and at a temperature of 37 ° C. and DMEM medium (Sigma, USA). After 24 hours of incubation in the serum-free DMEM medium to which the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone sample was added to the experimental group and the serum-free DMEM medium not containing the sample as a control group Further incubation for 48 hours.
추가 배양된 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 상기 실험군 및 대조군의 MMP-1의 양(ng/㎖)을 각각 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하고, 그 결과는 표 2에 나타내었다. The supernatants of each of the wells incubated were collected, and the amount of MMP-1 (ng / ml) of the experimental group and the control group was measured using an MMP-1 assay kit (Amersham, USA), and MMP according to Equation 3 below. The inhibition of -1 production was calculated and the results are shown in Table 2.
[수학식 3]&Quot; (3) "
MMP-1 생성 억제율(%) = [1-(실험군의 MNP-1의 양/대조군의 MMP-1의 양)]×100% Inhibition of MMP-1 production = [1- (amount of MNP-1 in the experimental group / amount of MMP-1 in the control group)] × 100
위 표 2에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도 의존적으로 MMP-1의 활성을 감소시켰다. As can be seen in Table 2, the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone reduced the activity of MMP-1 in a concentration-dependent manner.
실험예Experimental Example 4 : 콜라겐 합성 증진 효과 4: collagen synthesis promoting effect
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 합성 증진 효과는 다음의 방법을 통해 측정하여 확인하였다. The collagen synthesis enhancing effect of 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was determined by measuring through the following method.
인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰 당 1× 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 실험군으로 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 상기 시료를 포함하지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. Fibroblasts, human normal epithelial cells, were seeded in 48-well microplates at 1 × 10 6 cells per well and incubated in DMEM medium for 24 hours. Afterwards, the serum-free DMEM medium to which the 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone sample was added to the experimental group and the serum-free DMEM medium not containing the sample to the control group was further added for 48 hours. Incubated.
추가 배양된 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 IC-펩타이드(PICP) 양을 측정하고 이를 ng/㎖ 단위로 환산하여 실험군 및 대조군의 콜라겐 양을 측정하였다. The supernatant of each additionally cultured well was collected and measured by the collagen kit (Takara, Japan) to measure the amount of procollagen (procollagen) type IC-peptide (PICP) and converted to ng / ml. Was measured.
상기 콜라겐 생성 증가율은 하기 수학식 4에 따라 계산하였고, 그 결과는 표 3에 나타내었다. The collagen production increase rate was calculated according to Equation 4 below, the results are shown in Table 3.
[수학식 4]&Quot; (4) "
콜라겐 생성 증가율(%) = [(실험군의 콜라겐 양/대조군의 콜라겐 양)-1]×100Collagen production increase rate (%) = [(collage amount of experimental group / collagen amount of control group) -1] × 100
위 표 3에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 생성 증가율이 농도의존적으로 증가하였다. As can be seen in Table 3, the increase rate of collagen production of the 3 ', 4', 5, 6, 7-penta hydroxyflavanone increased concentration-dependently.
실험예Experimental Example 5 : B16F1 멜라닌 형성 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과 5: Effect of Inhibiting Melanogenesis Using B16F1 Melanin-forming Cells
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 피부 미백 효과는 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 측정하여 판단하였다. The skin whitening effect of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was determined by measuring the degree of inhibition of melanogenesis against B16F1 melanin forming cells.
실험예 5에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포 균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포로서, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. 상기 멜라닌 생성 억제 효과는 상기 세포의 인공 배양 중에 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 처리하여 멜라닌 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하여 확인하였다. The B16F1 melanin forming cell used in Experimental Example 5 is a cell strain derived from a mouse, and secreted a black pigment called melanin, which was distributed from ATCC (American Type Culture Collection). The melanin production inhibitory effect was confirmed by comparing and evaluating the degree of melanin reduction by treating the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone samples during artificial culture of the cells.
상기 B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과는 다음과 같은 방법을 통해 확인하였다. The melanin biosynthesis inhibitory effect of the B16F1 melanin forming cells was confirmed by the following method.
B16F1 멜라닌 형성 세포를 6 웰 플레이트에 각 웰 당 2×105 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 이렇게 부착된 세포를 독성을 유발하지 않는 농도로 상기 시료로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 이렇게 배양된 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980) 방법을 약간 변형하여 수행하였다. 구체적으로, 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 상기 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 ㎚의 파장에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 melanin forming cells were divided into 6 well plates at a concentration of 2 × 10 5 per well, and the cells were attached, and the cells thus attached were treated with the sample at a concentration that does not cause toxicity and incubated for 72 hours. The cultured cells were detached with trypsin-EDTA and the cells were counted and then centrifuged to recover the cells. Quantification of recovered melanin was performed by slightly modifying the method of Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980. Specifically, the cell pellet was washed once with PBS, and then 1 ml of homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added to vortex for 5 minutes to disrupt the cells. Melt the extracted melanin by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then measured the absorbance of melanin at a wavelength of 405 nm with a microplate reader, and then quantitated melanin. The melanin production inhibition rate (%) of the sample was measured.
상기 B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 5에 의하여 계산하였고, 그 결과는 표 4에 나타내었다. Melanin production inhibition rate (%) of the B16F1 melanin forming cells was calculated by the following
표 4에서 IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도를 의미한다. 이때 비교군으로는 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 하이드로퀴논 및 알부틴을 사용하였다. IC 50 values in Table 4 refer to concentrations of substances that inhibit melanin production by 50%. At this time, the hydroquinone and arbutin known to have melanin production inhibitory effect were used.
[수학식 5][Equation 5]
멜라닌 생성 저해율(%) =[(A-B)/A]×100Melanin production inhibition rate (%) = [(A-B) / A] × 100
이때, 상기 A는 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양이고, 상기 B는 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양이다.In this case, A is the melanin amount of the well to which the sample is not added, and B is the melanin amount of the well to which the sample is added.
위 표 4에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하고, 특히 양성대조군으로 사용된 알부틴이나 하이드로퀴논보다 더 적은 농도에서 멜라닌 생성을 저해하였다. As can be seen in Table 4, the 3 ', 4', 5, 6, 7-penta hydroxyflavanone significantly inhibits the production of melanin in B16F1 melanin-forming cells, especially than the arbutin or hydroquinone used as a positive control group At lower concentrations it inhibited melanin production.
실험예Experimental Example 6 : 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과 6: Effect of Inhibiting Inflammatory Cytokine Expression by Ultraviolet Irradiation
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과는 다음의 방법으로 평가하였다. The inhibitory effect of inflammatory cytokine expression expressed by ultraviolet irradiation of 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 was evaluated by the following method.
사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×104개씩 넣고 24 시간 동안 부착시킨 후, 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이러한 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 이러한 세포배양 배지가 첨가된 각 웰에 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양된 각 웰의 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로써 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. 이때, 상기 IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였다. Fibroblasts isolated from human epidermal tissue (5 × 10 4 ) were placed in 24-well test plates and attached for 24 hours, and then each well was washed once with PBS and 500 μl of PBS was added to each well. . These fibroblasts were irradiated with UV 10 mJ /
상기 염증성 사이토카인(IL-1α)의 발현 억제율은 하기 수학식 6에 의해 계산하였고, 그 결과는 표 5에 나타내었다. Inhibition rate of the inflammatory cytokine (IL-1α) was calculated by the following Equation 6, the results are shown in Table 5.
[수학식 6]&Quot; (6) "
염증성 사이토카인 발현 억제율(%) = [1-(St"-Bo")/(Bt"-Bo")]×100 Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) = [1- (St "-Bo") / (Bt "-Bo")] × 100
이때, 상기 Bo"은 자외선을 조사하지 않고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이고, 상기 Bt"는 자외선을 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이며, 상기 St"는 자외선을 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량이다. In this case, Bo " is the amount of IL-1α generated in the wells not irradiated with UV light and the sample is not treated, and Bt " Is the amount of IL-1α production of the wells that were irradiated and the samples were treated.
위 표 5에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 억제하였다. As can be seen in Table 5, the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone inhibited the production of IL-1α, an inflammatory cytokine by ultraviolet light.
제조예Manufacturing example 2 : 2 : 실시예Example 1 및 1 and 비교예Comparative example 1~2의 1 ~ 2 화장료Cosmetics 조성물 제조 Composition manufacturing
상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 화장료에 대한 효과를 측정하기 위해, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 화장료 조성물(실시예 1), 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 대신에 보습제로서 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교예 1) 및 이들 모두를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교예 2)을 하기 표 6과 같은 함량으로 제조하였다. 이때, 상기 표 6에서의 함량 단위는 중량%이다. In order to measure the effect on the cosmetic comprising 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone prepared according to Preparation Example 1 as an active ingredient, the 3 ′, 4 ′, 5,6 Cosmetic composition containing (7) -pentahydroxyflavanone (Example 1), glycerin, 1,3-butylene glycol as a moisturizer instead of the 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone And a cosmetic composition comprising sorbitol (Comparative Example 1) and a cosmetic composition (Comparative Example 2) not containing all of them were prepared in an amount as shown in Table 6. In this case, the content unit in Table 6 is weight%.
실험예Experimental Example 7 : 7: 화장료Cosmetics 조성물의 항염증 효과(귀 부종 실험) Anti-inflammatory effect of the composition (ear edema experiment)
상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예1 및 비교예 1,2)의 항염증 효과는 다음과 같이 측정하였다. The anti-inflammatory effect of the cosmetic composition prepared in Preparation Example 2 (Example 1 and Comparative Examples 1 and 2) was measured as follows.
건강한 쥐 16마리를 대상으로 4그룹으로 나누어 1개 시료당 4마리씩 실험하였다. 우선 쥐의 양쪽 귀를 에탄올로 잘 닦고, 상기 화장료 조성물 시료를 각각 4 ㎕씩 바른 다음, 1시간 경과 후 실험군으로 왼쪽 귀에는 아세톤 20 ㎕를 발라주고 대조군으로 오른쪽 귀에는 염증유발 양성대조 물질인 아라키돈산을 발라주었다. 다시 1시간 경과 후 마이크로미터를 이용하여 양쪽 귀의 두께를 2회씩 반복 측정하여 그 평균치를 구한 후, 하기 수학식 7에 따라 항염증 효과를 계산하였고, 그 결과를 표 7에 나타내었다.Sixteen healthy mice were divided into four groups and four animals were tested per sample. First, clean both ears of rats with ethanol, apply 4 μl of each of the cosmetic composition samples, and after 1 hour, apply 20 μl of acetone to the left ear as an experimental group and arachidone as a control to the right ear. I applied a mountain. After 1 hour, the thickness of both ears was repeatedly measured using a micrometer, and the average value thereof was obtained. The anti-inflammatory effect was calculated according to Equation 7 below, and the results are shown in Table 7.
[수학식 7][Equation 7]
항염증 효과(%) = (B-A) / B × 100Anti-inflammatory effect (%) = (B-A) / B × 100
이때, A는 실험군에서 귀의 부풀은 두께이고, B는 대조군에서 귀의 부풀은 두께이었다. At this time, A was the swelling thickness of the ear in the experimental group, B was the swelling thickness of the ear in the control group.
위 표 7에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 실시예 1의 화장료 조성물이 비교예 1,2의 화장료 조성물보다 월등히 우수한 항염 효과를 나타내었다. As can be seen in Table 7, the cosmetic composition of Example 1 containing the 3 ', 4', 5, 6, 7-pentahydroxyflavanone has a superior anti-inflammatory effect than the cosmetic composition of Comparative Examples 1 and 2 Indicated.
실험예Experimental Example 8 : 피부 자극성 시험 8: skin irritation test
상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예1 및 비교예 1,2)의 피부 자극성 시험은 다음의 방법으로 측정하였다. Skin irritation test of the cosmetic composition prepared in Preparation Example 2 (Example 1 and Comparative Examples 1 and 2) was measured by the following method.
실시예 1, 비교예 1,2 에 따른 화장료 조성물에 자극원으로써 락틱산 0.3%를 첨가하여 pH가 5.5가 되도록 시료를 준비한 다음, 건강한 성인 남,여 30명을 대상으로 양팔 하박부의 5 × 20 ㎝ 부위에 0.3% 락틱산 용액 단독 및 상기 준비한 시료 0.1 g을 각각 24시간 동안 첩포한 후 제거하고 1시간 및 24시간이 경과한 다음, 하기의 판정 기준에 의하여 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였다. Samples were prepared by adding lactic acid 0.3% as an irritant to the cosmetic compositions according to Examples 1 and Comparative Examples 1 and 2 to pH 5.5, and then, 5 × 20 The 0.3% lactic acid solution alone and 0.1 g of the prepared sample were patched for 24 hours and then removed for 1 hour and 24 hours, and then the skin condition change was visually read according to the following criteria.
상기 자극률은 하기 수학식 8에 따라 계산하였고, 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다. The stimulation rate was calculated according to Equation 8 below, the results are shown in Table 8.
판정기준Criteria
-: 홍반이나 특이한 현상 없음-: No erythema or unusual symptoms
+-: 주위보다 약간 붉어짐+-: Slightly redder than the surroundings
+: 주위보다 현저히 붉어짐+: Significantly redder than the surroundings
++: 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음++: reddens and swells more heavily than the surroundings
[수학식 8][Equation 8]
자극률(%) = [(+-)수×1 + (+)수×2 + (++)수×3]/[(전체수)×3]×100Stimulus rate (%) = [(+-) number × 1 + (+) number × 2 + (++) number × 3] / [(total number) × 3] × 100
위 표 8에서 알 수 있듯이, 락틱산에 의한 자극 완화 효과 실험에서 본 발명의 실시예 1의 화장료 조성물은 대조군 대비 자극율이 감소하였다.
As can be seen in Table 8, the cosmetic composition of Example 1 of the present invention in the stimulation relaxation effect experiments by lactic acid has a reduced stimulation rate compared to the control.
실험예Experimental Example 9 : 보습 효과 9: moisturizing effect
상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예 1 및 비교예 1,2 )에 대한 보습 효과는 다음과 같은 방법으로 측정하였다. Moisturizing effect on the cosmetic composition prepared in Preparation Example 2 (Example 1 and Comparative Examples 1 and 2) was measured by the following method.
설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 100 명을 무작위로 20 명씩 3개 그룹(A, B, C)으로 나눈 후, 각각 실시예 1 및 비교예 1, 2의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. After surveying 100 healthy adult men and women who feel dry skin through the survey randomly divided into three groups (A, B, C) of 20 people each, the cosmetic composition of Example 1 and Comparative Examples 1 and 2, respectively, 1 day each Apply twice to face for 8 weeks.
상기 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820(Corage+Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였고, 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.The moisturizing effect was evaluated using Corneometer CM 820 (Corage + Khazaka, Germany) every two weeks from the start of the practical test and after the end, and the results are shown in Table 9 below.
위 표 9에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 1의 화장료가 일반적인 보습제를 포함한 화장료(비교예 1,2)보다 보습효과가 더 우수하였다.
As can be seen in Table 9, the cosmetic of Example 1 of the present invention was more excellent moisturizing effect than cosmetics containing a general moisturizer (Comparative Examples 1, 2).
제조예Manufacturing example 3 : 3: 실시예Example 2~5 및 2-5 and 비교예Comparative example 3~4 조성물 제조 3-4 composition preparation
하기 표 10의 조성과 같이, 실시예 1의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 화장료(실시예 2~5), 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하지 않는 화장료(비교예 3), 및 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 대신에 방부제로써 메칠파라벤과 이미다졸리디닐우레탄을 포함하는 화장료(비교예 4)를 각각 제조하였다. 이때, 표 10에서 각 조성 성분의 함량 단위는 중량%이었다. As shown in Table 10, the cosmetic composition containing 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone of Example 1 (Examples 2 to 5), 3 ′, 4 ′, 5, Cosmetics that do not contain 6,7-pentahydroxyflavanone (Comparative Example 3), and methylparaben and imidazolidinyl as preservatives instead of the 3 ', 4', 5,6,7-pentahydroxyflavanone Cosmetics containing urethane (Comparative Example 4) were prepared, respectively. At this time, the content unit of each composition component in Table 10 was weight%.
실험예Experimental Example 10 : 항균력 실험 10: antimicrobial activity test
상기 제조예 3에 따른 제조된 화장료 조성물의 박테리아 및 곰팡이에 대한 항균 효과는 다음의 방법으로 측정하였다. Antibacterial effect on the bacteria and fungi of the cosmetic composition prepared according to Preparation Example 3 was measured by the following method.
먼저, 박테리아의 경우, 상기 실시예 2-5의 화장료 조성물, 비교예 3-4의 화장료 조성물 20-30g에 대장균(Escherichia coli ; ATCC 8739), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa ; ATCC9027) 및 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus ; ATCC6538)의 혼합 균액을 시료당 초기 농도가 107 cfu/g 되도록 첨가 혼합하였다. 이들을 30-32℃ 항온조에서 4주간 배양하면서 1, 7, 14, 21 및 28일 간격으로 각 화장료를 1 g씩 취하여 생균수를 측정하였다. First, in the case of bacteria, 20-30 g of the cosmetic composition of Example 2-5, the cosmetic composition of Comparative Example 3-4 Escherichia coli ( Escherichia coli ; ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC9027) and Staphylococcus aureus (ATCC6538) were mixed and added so that the initial concentration per sample was 10 7 cfu / g. 1 g of each cosmetic was taken at 1, 7, 14, 21 and 28 days intervals while culturing them in a thermostat at 30-32 ° C for 4 weeks, and the number of viable cells was measured.
다음, 곰팡이의 경우, 칸디다 알비칸스(Candida albicans ;ATCC10231), 페니실리움 씨트리눔(Penicillium citrinum ; KCTC2123) 및 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger ; ATCC16404)의 혼합균액을 시료당 107cfu/g이 되도록 첨가 혼합한 후 25℃ 항온조에서 배양하면서 7일 간격으로 변취 유무와 시료표면의 균사 및 포자발생 유무를 관찰하였다. Next, in the case of the fungus, Candida albicans (Candida albicans ; ATCC10231), Penicillium cytrinum citrinum ; KCTC2123) and Aspergillus niger ; ATCC16404) was mixed to add 10 7 cfu / g per sample, and then cultured in a 25 ° C. incubator at 7 days intervals to observe the presence of odor and mycelia and spores on the sample surface.
그 결과를 하기의 표 11에 나타내었다.The results are shown in Table 11 below.
- : 8주간 변취 및 균사와 포자 발생이 없고 양호-: No spawning and mycelium spawning for 8 weeks and good
+ :４주 이내에 기벽이나 뚜껑에 곰팡이 발생+: Molding on the wall or lid within 4 weeks
++ :４주 이내에 변취 및 표면 일부에 곰팡이 발생++: mending within 4 weeks and mold on part of the surface
+++ : 4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이 발생+++: Odor and mold on entire surface within 4 weeks
위 표 11에서 알 수 있듯이, 방부제를 사용하지 않은 비교예 3의 화장료 조성물은 4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이가 발생하고, 1일만 지나도 박테리아 균이 현저하게 증가하였다. 그러나, 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 실시예 2-5의 화장료 조성물은 박테리아 및 곰팡이에 대해 농도의존적으로 항균효과를 나타내었으며, 약 28일이 경과한 후에는 2.0%의 함량으로 사용했을 때 기존의 방부제(비교예 4)와 유사하거나 더 우수한 방부력을 나타내었고, 배양일 전체로 판단했을 때에도 0.5% 이상의 함량으로 사용했을 때 기존의 방부제에 비해 훨씬 우수한 방부력을 나타내었다. As can be seen in Table 11, the cosmetic composition of Comparative Example 3, which did not use a preservative, the bad smell and the entire surface occurs within four weeks, bacterial bacteria significantly increased even after one day. However, the cosmetic composition of Example 2-5 including 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone of the present invention showed a concentration-dependent antimicrobial effect against bacteria and fungi, about 28 After the lapse of 2 days, the preservatives were similar to or better than the preservatives (Comparative Example 4) when used at a content of 2.0%. It showed much better antiseptic properties than preservatives.
실험예Experimental Example 11 : 피부 주름 개선효과 11: skin wrinkle improvement
상기 실시예 1에 따른 제조된 화장료 조성물의 피부 주름 개선효과에 대한 임상 실험을 실시하였다. 이러한 임상실험은 하기와 같이 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. A clinical experiment was conducted on the skin wrinkle improvement effect of the cosmetic composition prepared according to Example 1. These clinical trials were evaluated through the actual use test of each cosmetic as follows.
실험자 (20세 - 35세의 여성) 30명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1의 화장료 조성물을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. Thirty test subjects (women aged 20 to 35 years) were applied to the cosmetic composition of Example 1 on the right side of the face, and the cosmetic composition of Comparative Example 1 on the left side of the face, twice a day for 2 consecutive months.
실험 완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후의 각 피검자의 주름 개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 12에 나타내었다. After completion of the experiment, the skin wrinkle improvement effect was evaluated by visual observation by an experienced doctor before and after using the product for two months. The experimental results are shown in Table 12 below.
Effectiveness%
위 표 12에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물이 비교예 1에 따른 화장료 조성물에 비하여 높은 주름개선 효과를 보여주었다. 또한 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물을 피부에 도포한 피검자들의 피부에서는 피부자극을 관찰할 수 없었다. As can be seen in Table 12, the cosmetic composition according to Example 1 of the present invention showed a higher wrinkle improvement effect than the cosmetic composition according to Comparative Example 1. In addition, the skin irritation could not be observed in the skin of the subjects applying the cosmetic composition according to Example 1 of the present invention to the skin.
Claims (13)
[화학식]
[Chemical Formula]
상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 상기 화장료 조성물 전체 함량에 대해서 0.000001 내지 30 중량%로 포함된 화장료 조성물. 10. The method according to any one of claims 7 to 9,
The 3 ′, 4 ′, 5,6,7-pentahydroxyflavanone is a cosmetic composition containing 0.000001 to 30% by weight based on the total content of the cosmetic composition.
상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조하는 공정;
상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매 및 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조하는 공정;
상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조하는 공정;
상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 및
상기 클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하는 공정을 포함하는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법. Adding alcohol to the morel cabbage and stirring to obtain a filtrate, and drying the filtrate under reduced pressure to produce morel cabbage extract;
Preparing a fraction by sequentially fractionating the morel cabbage extract with n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, and water;
Preparing an ethyl acetate / methanol fraction by chromatography of the dichloromethane fraction in the fraction in a column containing a mixed solvent of ethyl acetate and methanol and a column of 230-400 mesh;
Performing a thin membrane chromatography on the ethyl acetate / methanol fraction to produce a concentrate having an Rf fractionated from 0.43 to 5.0;
Chromatographically treating the concentrate in a trichloromethane / methanol mixed solvent to produce a trichloromethane / methanol fraction; And
Method for producing 3 ', 4', 5, 6, 7- pentahydroxyflavanone comprising the step of recrystallizing the chloromethane / methanol fraction using a mixed solvent of ethyl acetate and methanol.
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