KR101017650B1 - 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 헤스페리딘은 감마선 등의 방사선 조사에 따른 세포 손상에 대하여 세포를 보호하고, 세포에 독성을 나타내지 않는 등 안전하기 때문에 방사선 노출에 있어서 세포 보호제로서 유용하게 사용될 수 있다.

헤스페리딘, 방사선 조사, 세포 보호, γ선 조사, 지질 과산화작용, 항산화제, 간독성

Description

헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물{Composition for protection against cellular damage containing hesperidin or pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient}

본 발명은 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물에 관한 것이다.

인간은 우주선(宇宙線), 지구에서 발견되는 방사성 동위원소 등의 자연적 또는 매우 다양한 인공적 원인에 의한 전리 방사선(ionizing radiation)에 끊임없이 노출되고 있다. 현재, 전리 방사선은 전력 생산, 새롭고 다양한 고수율의 작물 개발, 살균 및 식품의 저장 기간 증대(식품 방사선) 등과 같은 다양한 분야에 적용되고 있다. 이러한 전리 방사선의 광범위한 적용으로 말미암아 방사선에 인간이 노출되는 것은 필수불가결한 일이 되었다.

또한, 전리 방사선은 암 세포를 제거하거나 이의 성장을 저해함으로써 여러 조직의 암 치료에 널리 사용되고 있다. 현재, 암 환자의 절반 이상에 대하여 방사선 치료법이 적용되고 있다. 그러나, 우수한 치료학적 지표에도 불구하고, 상기 방사선 치료법은 장기 암 생존자들의 정상 조직에 손상을 유발할 수 있다[Meister, M., 2005. In: The health effects of low-level radiation. American council on Science and Health, New York, pp. 2-4]. 상기 방사선 치료법이 암 환자의 삶을 연장시키고 이들 중 상당 수를 치료하고 있으나, 많은 환자들에게서 2차 암으로 발전되며, 이들 중 일부는 1차 암보다 훨씬 심각하다[Little, M.P., 2001. Cancer after exposing to radiation in the course of treatment for the benign and malignant disease. Lancet Oncol. 2, 212-220].

따라서 방사선 치료시 방사선 노출에 의해 유발되는 정상 세포의 손상을 막기 위하여 세포를 보호하는 방법의 개발이 절실히 필요하다.

전리 방사선에 의한 세포 손상은 자유라디칼 및 생성되는 활성산소종에 의해 지배적으로 매개된다는 연구 결과가 보고된 바 있다[Weiss, J.F., Landauer, M.R., 2003. Protection against ionizing radiation by antioxidant nutrients and phytochemicals, Toxicology. 189, 1-20]. 전리 방사선과 주요한 세포 구성성분인 물이 반응하여 1차 수 라디칼 화학종(primary water radical species)이 생성된다. 물의 방사선 분해 과정에서 생성되는 이들 1차 라디칼은 2차 라디칼을 생성하는 H₂O₂ 및 O₂ ^-와 같은 분자들과 반응하는데, 이들은 매우 반응성이 높고 DNA, 단백질, 막과 같은 중요 세포성 표적에 확산될 수 있어, 결국 암 또는 세포사를 일으킨다[Pandey, B.N., Mishra, K.P., 1999. Radiation biology for cancer therapy Adv Radiat Biol Peace, 45-51; Mates, JM., Sanchez-Jimenez, F.M., 2000. Role of reactive oxygen species in apoptosis: implications for cancer therapy. Int J Biochem Cell Biol. 32, 157-1570]. 자유라디칼은 방사선 유발 독성의 개시(inintiation) 및 진행(progression)에 중요한 역할을 하기 때문에, 식품 또는 치료제에 있어서 항산화제의 사용은 방사선 유발 손상에 대한 보호를 제공할 것이다. 최근, 많은 연구들이 산화 손상(oxidative damage)을 방지하기 위하여 자유라디칼 포착제(scavenger)로서 플라보노이드(flavonoid)의 잠재적 이용에 초점을 맞추고 있다[Van Acker, F.A., Schouten, O., Haenen, R.M., van der Vijh, W.J.F., Bast, A., 2000. Flavanoid can replace tocopherol as an antioxidant. FEBS Lett. 473, 145-148].

한편, 헤스페리딘(Hesperetin-7-rhamnoglucoside)은 분자식이 C₂₈H₃₄O₁₅이고 분자량은 610이며, 담황색 또는 담갈황백색의 결정 또는 결정성 분말로 냄새와 맛이 거의 없고, 이당류 루티노스(rutinose)와 결합하여 플라보노이드계 색소중의 플라마논 배당체 형태로 존재한다. 레몬, 오렌지와 같은 감귤류 껍질의 과육과 하얀 부분에 1.5~3% 포함되어 있으며, 미숙과에 많다. 또한 녹색 채소에도 포함되어 있다. 상기 헤스페리딘은 모세혈관 투과성을 유지하는데 필요한 물질로 비타민 P의 하나이며, 항염증 효과 모세혈관 보호 및 항암작용, 콜레스테롤을 낮추는 작용을 하며 모세관의 삼투압을 조절하여 모세혈관 건전성을 개선시키는 역할을 한다. 또한 유선세포로부터 히스타민의 방출을 억제하여 알러지 증상과 열을 줄여주며, 폴리아민 합성을 억제함으로서 항암효과를 나타낸다. 난소적제술을 시행한 쥐에서는 혈청과 간의 콜레스테롤을 감소시킬 뿐만 아니라 파골세포 수를 감소시켜 뼈손실을 줄여주는 역할을 한다. 다른 연구에서는 감귤에서 추출한 헤스페리딘이 대변을 통해 오염물질인 카드뮴 배설효과가 크고, 혈중 중성지방 및 혈중 콜레스테롤 저하효과가 현저함을 발견하였고, 우리 몸에 좋은 혈중 HDL-콜레스테롤 상승효과가 현저하다고 보고하였다.

상기 헤스페리딘과 관련된 종래기술로는 대한민국 특허등록 제276979호에서 헤스페리딘 또는 헤스페레틴을 포함하는 혈소판 응집억제용 조성물을 개시하였고, 대한민국 특허등록 제184244호에서는 알파-글리코실 헤스페리딘을 함유시킨 화장품을 개시하였으며, 대학민국 특허공개 제1999-0039368호에서는 헤스페리딘을 포함하는 혈압 강하용 조성물을 개시하였다. 그러나 상기 헤스페리딘의 방사선 조사에 대한 세포 보호 효과는 아직 보고된 바 없다.

이에, 본 발명자들은 방사선에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 세포를 보호할 수 있는 방법을 연구하던 중, 상기 헤스페리딘이 방사선에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 세포 보호 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 헤스페리딘은 감마선 등의 방사선 조사에 따른 세포 손상에 대하여 세포를 보호하고, 세포에 독성을 나타내지 않는 등 안전하기 때문에 방사선 노출에 있어서 세포 보호제로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 방사선에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 보호하는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 X선, α선, β선, γ선 등의 방사선에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 보호하는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 γ선 방사선에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 보호하는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 방사선에 의하여 유발되는 간세포 손상에 대하여 보호하는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 방사선 노출 후 감소되는 체중, 간중량 및 비장 지수를 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 방사선 노출 후 증가되는 혈청 표식 효소의 활성을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 방사선 노출 후 감소되는 간 조직 내 표식 효소의 활성을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 방사선 노출 후 증가하거나 감소되는 아스파테이트 트랜스아미나제(AST), 알라닌 트랜스아미나제(ALT), 알칼린 포스파타제(ALP), 락테이트 탈수소효소(LDH), 감마-글루타밀 트랜스펩티다제(γ-GT) 등의 표식 효소의 활성을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유 하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 방사선 노출 후 증가하는 간 조직 내 지질 과산화작용을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 방사선 노출 후 감소하는 간 조직 내 활성산소 제거효소(SOD) 또는 글루타치온 퍼옥시다제(GPx)와 같은 효소성 항산화제의 활성을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 방사선 노출 후 감소하는 간 조직 내 글루타치온, 비타민 C, 비타민 E 등의 비효소성 항산화제의 활성을 회복시키는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 상기 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 세포 보호용 건강식품을 제공한다.

본 발명에 따른 상기 헤스페리딘은 분자식이 C₂₈H₃₄O₁₅이고 분자량은 610이며, 이당류 루티노스(rutinose)와 결합하여 플라보노이드(flavonoids)계 색소중의 플라마논 배당체 형태로 존재한다. 레몬, 오렌지와 같은 감귤류 껍질의 과육과 하얀 부분에 1.5~3% 포함되어 있으며, 미숙과에 많다. 또한 녹색 채소에도 포함되어 있다. 상기 헤스페리딘은 본 발명의 기술분야에서 널리 알려진 방법에 의하여 감귤류로부터 추출하거나 공지된 합성 방법에 의하여 합성된 것, 또는 상업적으로 구입한 것을 사용할 수 있다. 이때, 감귤류란 하귤, 당유자, 오렌지, 레몬, 감귤, 자몽, 유자 등을 말하며, 감귤류 과피 추출물의 제조 방법은 머크 인덱스(Merck Index) 등의 문헌 및 특허 등에 다수 공개되어 있다.

본 발명은 상기 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물을 모두 포함한다.

본 발명의 헤스페리딘은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이 설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 헤스페리딘을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.

동량의 헤스페리딘 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과 하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명에 따른 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 X선, α선, β선, γ선 등의 방사선, 바람직하게는 감마선(γ선)에 의하여 유발되는 세포 손상에 대하여 보호작용을 나타낸다. 구체적으로 방사선에 대한 헤스페리딘의 효과 실험에서, 상기 헤스페리딘은 방사선 노출 후 감소되는 랫트의 체중, 간중량 및 비장 지수를 회복시키고(표 1 참조), 방사선 노출 후 증가되는 혈청 표식 효소 또는 방사선 노출 후 감소되는 간 조직 내 표식 효소의 활성을 회복시키고(표 2 및 표 3, 도 1 내지 도 5 참조), 방사선 노출 후 증가하는 간 조직 내 지질 과산화작용을 회복시키고(표 4 및 도 6 참조), 방사선 노출 후 감소하는 활성산소 제거효소(SOD), 글루타치온 퍼옥시다제(GPx) 등의 간 조직 내 효소성 항산화제, 또는 글루타치온, 비타민 C, 비타민 E 등의 간 조직 내 비효소성 항산화제의 활성을 회복시키는 것으로 나타났다.

이때, 상기 표식 효소는 아스파테이트 트랜스아미나제(AST), 알라닌 트랜스아미나제(ALT), 알칼린 포스파타제(ALP), 락테이트 탈수소효소(LDH) 또는 감마-글루타밀 트랜스펩티다제(γ-GT)인 것이 바람직하다.

또한, 상기 헤스페리딘 단독 처리한 간 조직은 세포 괴사 또는 사멸 현상이 일어나지 않았으며, 대조군과 비교하여 중심소엽성 영역(centrilobular region)에 서 손상되지 않은 간세포, 정상 간세포 플레이트 및 정상 내피 세포를 나타내었다(표 1~4, 도 1~10 참조). 따라서, 본 발명에 따른 헤스페리딘 단독 투여로 세포의 측정되는 거의 모든 파라미터가 변경되지 않음을 알 수 있으며, 이로부터 본 발명에 따른 헤스페리딘 투여가 세포에 독성을 나타내지 않음을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 헤스페리딘은 감마선 등의 방사선 조사에 따른 세포 손상에 대하여 세포를 보호하고, 세포에 독성을 나타내지 않는 등 안전하기 때문에 방사선 노출에 있어서 세포 보호제로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 조성물은 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 헤스페리딘은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 또한, 제제화할 경우에는 유효성분인 헤스페리딘 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.

경구투여를 위한 고형 제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형 제제는 헤스페리딘에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토 오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

또한, 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사에 의한다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 상기 헤스페리딘을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.

더불어, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량 또는 복용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 복용하는 경우 의사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 성인을 기준으로 250~3000 ㎎을 1일 1회 내지 수회에 나누어 복용할 수 있다.

나아가, 본 발명은 방사선에 대한 세포 보호 효과를 나타내는 헤스페리딘 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 방사선에 대한 세포 보호용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 식품 조성물은 방사선으로 인해 유발되는 세포 손상에 대하여 세포 보호를 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 헤스페리딘을 첨가물로 사용할 경우, 상기 헤스페리딘을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 헤스페리딘은 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 음료, 껌, 비타민 복합제 또는 건강보조식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트 린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01-0.04 g, 바람직하게는 약 0.02-0.03 g이다.

그 외, 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 헤스페리딘의 방사선에 의한 세포 손상 보호 효과

본 발명에 따른 헤스페리딘의 방사선에 의한 세포 손상 보호 효과를 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.

먼저, SD계의 수컷 랫트를 대한민국 서울에 있는 중앙실험동물(주)에서 구입하여 사용하였다. 상기 랫트는 150±5 g 이며, 23±2 ℃의 온도 55±5%의 습도, 및 12시간 간격의 낮과 밤의 싸이클로 사육되었다. 상기 랫트를 6마리씩 11군으로 나누어 각 군마다 하기와 같이 처리하였다.

(1) 1군 : 대조군으로서, 7일 동안 식염수를 제공하였다.

(2) 2군 : 1 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 방치하였다.

(3) 3군 : 1 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 50 mg/kg으로 경구투여하였다.

(4) 4군 : 1 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 100 mg/kg으로 경구투여하였다.

(5) 5군 : 3 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 방치하였다.

(6) 6군 : 3 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 50 mg/kg으로 경구투여하였다.

(7) 7군 : 3 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 100 mg/kg으로 경구투여하였다.

(8) 8군 : 5 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 방치하였다.

(9) 9군 : 5 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 50 mg/kg으로 경구투여하였다.

(10) 10군 : 5 Gy의 감마선을 조사한 후, 7일 동안 체중당 헤스페리딘 100 mg/kg으로 경구투여하였다.

(11) 11군 : 7일 동안 체중당 헤스페리딘 100 mg/kg으로 경구투여하였다.

마지막 헤스페리딘 투여 후, 24시간이 지난 다음 상기 랫트를 에테르로 마취시키고, 후안와총(retro orbital plexus)으로부터 무균 모세관을 이용하여 혈액을 채취하였다. 상기 혈액은 3000 rpm으로 20분 동안 원심분리하고 혈청을 분리하여 4 ℃에서 저장하였다. 이후, 랫트를 사망시키고 간 및 비장을 적출하여 냉식염수로 세척한 후, 건조시켜 무게를 측정하였다. 상기 간 조직을 Wisestir^TM HS 30E 균질화기기를 이용하여 인산염 완충액(0.1 M, pH 7.4)에서 10% 균질화 용액(homogenate)으로 균질화시켰다. 상기 조 균질화 용액(crude homogenate)을 4 ℃에서 1500 rpm으로 10분 동안 원심분리시키고 상청액을 생화학적 분석에 사용하였다. 간 조직 역시 조직병리학적 분석을 위해 10% 포르말린에 고정시켰다.

상기 혈청 및 간 조직 균질 현탁액 내 아스파테이트 트랜스아미나제(AST) 및 알라닌 트랜스아미나제(ALT)의 분석은 Bergmeyer 외의 방법[Bergmeyer, H.U., Scheibe, P., Wahlefeld, A.W., 1978. Optimization of methods for aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase. Clin. Chem. 24, 58-61]에 따라 수행되었다. 상기 혈청 및 간 조직 균질 현탁액 내 알칼린 포스파타제(ALP)는 기질로서 디소디움 페닐포스페이트를 이용하여 King의 방법[King, J., 1965a. The phosphohydrolases-acid and alkaline phosphatases. In: Practical Clinical Enzymology. Van Nostrand, D., Co Ltd., London, pp. 191-208]으로 분석되었다. 락테이트 탈수소효소(LDH)는 기질로서 리튬 락테이트를 사용하여 King의 방법[King, J., 1965a. The phosphohydrolases-acid and alkaline phosphatases. In: Practical Clinical Enzymology. Van Nostrand, D., Co Ltd., London, pp. 191-208]으로 분석되었다. 감마 글루타밀 트랜스펩티다제(γ-GT)는 기질로서 L-γ-글루타밀-p-니트로아닐라이드를 사용하여 Rosalki 및 Rau의 방법[Rosalki, S.B., Rau, D., 1972. Serum-γ-glutamyl transpeptidase activity in alcoholism. Clin Chim Acta. 39, 41-47]을 이용하여 측정되었다. 단백질은 기준물질로서 소 혈청 알부민을 사용하여 Bradford에 의해 기재된 방법[Bradford, M.M., 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-254]을 이용하여 측정되었다. 상기 혈청 내 세룰로플라스민(Ceruloplasmin) 등급은 기질로서 N,N-디메틸-p-페닐렌디아민 모노히드로클로라이드를 이용하여 Curzon 및 Vallet의 방법[Curzon, G., Vallet, L., 1960. The purification of human caeruloplasmin. Biochem J. 74, 279-287]에 의해 측정되었다. 간 조직 내 지질 과산화작용(Lipid peroxidation)은 Ohkawa 외의 방법[Ohkawa, H., Ohishi, N., Yagi, K., 1979. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal. Biochem. 95, 351-358]에 의해 측정되었다. 활성산소 제거효소(SOD) 및 카탈라제는 상업적으로 사용되는 분석 키트(Calbiochem, 독일)를 이용하여 분석되었다. 글루타치온 퍼옥시다제(GPx)는 Rotruck 외의 방법[Rotruck, J.T., Pope, A.L., Ganther, H.E., Swanson, A.B., Hafeman, D.G., Hoekstra, W.G., 1973. Selenium: biochemical role as a component of glutathione peroxidase. Science 179, 588-590]에 의해 측정되었다. 간 글루타치온(GSH) 내용물은 Beutler 외의 방법[Beutler, E., Duron, O., Kelly, B.M., 1963. Improved method for the determination of blood glutathione. J. Lab. Clin. Med. 61, 882-888]에 의해 측정되었다. 간 조직 내 비타민 C는 Omaye 외의 방법[Omaye, S.T., Turnbull, J.D., Sauberlich, H.E., 1979. Selected methods for the determination of ascorbic acid in animal cells, tissues and fluids. Methods Enzymol. 62, 1-11]에 의해, 비타민 E는 Kayden 외의 방법[Kayden, H.J., Chow, C.K., Bjornson, L.K., 1973. Spectrophotometric method for determination of tocopherol in red blood cells. J Lipid Res 14, 533-540]에 의해 측정되었다. 상기 간 조직의 조직병리는 상기 간 조직을 에탄올과 크실렌에 순차적으로 세척하고, 파라핀 왁스에 넣는 과정을 진행함으로써 수행되었다. 상기 간 조직을 마이크로톤(Leica Microsystems, 독일)을 이용하여 5개의 마이크로 두께의 부분으로 자르고, 상기 부분들은 왁스를 제거시키고 헤마톡실린(Hematoxylin) 및 에오신(Eosin)으로 염색시켜 현미경(Nikon Eclipse E 400) 및 사진으로 관찰되었다. 비장 수치는 하기 수학식 1에 의해 계산되었다.

(비장 무게/체중)×100

통계 분석은 일차원 분산분석(ANOVA)을 이용하여 수행되었고, 내부 군 비교 는 터키(Tukey) 다중 비교 테스트(Tukey's multiple comparison test)를 이용하여 수행되었다. 수치는 각 군의 6마리에 대하여 평균 ± S.D.로 표현되었다. P 값 < 0.05인 경우 유의한 것으로 고려되었다.

A. 체중, 간중량 및 비장 수치에 대한 헤스페리딘의 효과

상기 실험 후, 각 군에 대한 체중, 간중량 및 비장 수치를 측정하여 표 1에 나타내었다.

	체중 (g)	간중량 (g)	비장 수치
1군	155.51 ± 4.02	5.62 ± 0.54	0.358 ± 0.013
2군	149.76 ± 1.05 a***	4.70 ± 0.14 a***	0.291 ± 0.032 a***
3군	155.06 ± 3.79 b***	5.13 ± 0.19 b***	0.352 ± 0.014 b***
4군	155.65 ± 1.15 b***	5.26 ± 0.13 b***	0.348 ± 0.012 b***
5군	146.85 ± 1.06 a***	3.96 ± 0.14 a***	0.220 ± 0.012 a***
6군	151.53 ± 1.11 c***	4.51 ± 0.14 c***	0.326 ± 0.013 c***
7군	152.40 ± 1.44 c***	4.89 ± 0.18 c***	0.341 ± 0.008 c***
8군	142.63 ± 1.85 a***	3.82 ± 0.20 a***	0.150 ± 0.007 a***
9군	148.87 ± 1.06 d***	4.34 ± 0.13 d***	0.261 ± 0.012 d***
10군	150.99 ± 1.61 d***	4.84 ± 0.08 d***	0.349 ± 0.009 d***
11군	154.24 ± 1.14 aNS	5.28 ± 0.11 aNS	0.354 ± 0.004 aNS
a: 1군과 비교 b: 2군과 비교 c: 5군과 비교 d: 8군과 비교 ***P<0.001

표 1에 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면(2군, 5군 및 8군) 체중, 간중량, 비장 수치가 대조군(1군)보다 감소하나, 헤스페리딘을 투여하면(3군, 4군, 6군, 7군, 9군 및 10군) 그 수치가 정상(대조군;1군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다.

B. 간세포 손상의 혈청 표식 효소( serum marker enzyme )의 상태에 대한 헤스페리딘의 효과

상기 실험 후, 각 군에 대한 혈청 내 표식 효소(AST, ALT, ALP, LDH, γ-GT 및 세룰로플라스민)의 상태를 표 2 및 표 3에 나타내었다.

	AST	ALT	ALP
1군	41.79 ± 2.26	43.70 ± 1.16	93.53 ± 2.45
2군	60.30 ± 1.28 a***	52.00 ± 1.58 a***	114.98 ± 3.69 a***
3군	45.95 ± 1.09 b***	46.08 ± 1.04 b***	97.76 ± 1.93 b***
4군	42.60 ± 1.77 b***	43.36 ± 1.18 b***	95.85 ± 3.61 b***
5군	69.10 ± 1.89 a***	63.27 ± 1.90 a***	140.59 ± 2.84 a***
6군	48.32 ± 1.66 c***	51.02 ± 1.14 c***	111.04 ± 2.38 c***
7군	46.02 ± 1.24 c***	45.83 ± 1.04 c***	99.88 ± 3.49 c***
8군	78.68 ± 4.40 a***	72.73 ± 2.08 a***	155.47 ± 3.97 a***
9군	53.78 ± 2.69 d***	56.50 ± 4.03 d***	112.90 ± 6.80 d***
10군	50.29 ± 1.12 d***	48.26 ± 2.17 d***	99.63 ± 4.12 d***
11군	41.38 ± 1.74 aNS	43.73 ± 1.30 aNS	91.38 ± 1.92 aNS
a: 1군과 비교 b: 2군과 비교 c: 5군과 비교 d: 8군과 비교 ***P<0.001

	LDH	γ-GT	세룰로플라스민
1군	142.99 ± 2.42	91.77 ± 1.84	20.72 ± 1.05
2군	153.59 ± 2.87 a***	113.49 ± 2.41 a***	17.52 ± 0.86 a***
3군	145.16 ± 3.61 b***	96.35 ± 2.10 b***	19.75 ± 0.53 b***
4군	143.14 ± 2.63 b***	91.33 ± 1.10 b***	19.73 ± 1.08 b***
5군	176.02 ± 2.70 a***	144.39 ± 2.70 a***	13.39 ± 1.84 a***
6군	148.47 ± 1.58 c***	116.29 ± 1.76 c***	18.34 ± 1.49 c***
7군	144.38 ± 1.22 c***	98.47 ± 2.29 c***	20.56 ± 1.14 c***
8군	216.38 ± 3.81 a***	171.25 ± 2.16 a***	11.70 ± 1.26 a***
9군	159.73 ± 4.19 d***	120.05 ± 8.37 d***	17.23 ± 1.31 d***
10군	151.66 ± 2.15 d***	108.47 ± 2.94 d***	18.74 ± 0.55 d***
11군	142.83 ± 2.05 aNS	91.11 ± 1.47 aNS	20.54 ± 0.81 aNS
a: 1군과 비교 b: 2군과 비교 c: 5군과 비교 d: 8군과 비교 ***P<0.001

표 2 및 표 3에 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면(2군, 5군 및 8군) 혈청 내 표식 효소(AST, ALT, ALP, LDH, γ-GT 및 세룰로플라스민)의 활성이 대조군(1군)에 비하여 급격하게 상승하나, 헤스페리딘을 투여하고 7일 후(3군, 4군, 6군, 7군, 9군 및 10군) 그 수치가 정상(대조군; 1군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다.

이로 인해 헤스페리딘이 감마선 조사에 따른 혈청 내 표식 효소의 활성 상승을 유의적으로 억제하여 세포 손상을 억제하고 세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

또한, 감마선이 5 Gy 조사되었을 때에는 보호효과를 위하여 헤스페리딘이 100 mg/kg 이상이 필요하나, 1 Gy 및 3 Gy의 감마선에서는 50 mg/kg의 헤스페리딘으로도 충분히 세포 손상에 대하여 세포를 보호할 수 있음을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 헤스페리딘은 방사선 조사에 따른 세포 손상에 대하여 유의적으로 세포를 보호할 수 있으므로 방사선 치료 부작용을 감소시키는 데에 유용하게 이용될 수 있다.

C. 간세포 손상의 조직 표식 효소( tissue marker enzyme )의 상태에 대한 헤스페리딘의 효과

상기 실험 후, 각 군에 대한 조직 내 표식 효소(AST, ALT, ALP, LDH 및 γ-GT)의 상태를 각각 도 1 내지 도 5에 나타내었다.

도 1 내지 도 5에서 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면(2군, 5군 및 8군) 간 조직 내 표식 효소(AST, ALT, ALP, LDH 및 γ-GT)의 활성이 대조군(1군)에 비하여 감소하나, 헤스페리딘을 투여하고 7일 후(3군, 4군, 6군, 7군, 9군 및 10군) 그 수치가 정상(대조군; 1군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다.

이로 인해 헤스페리딘이 감마선 조사에 따른 조직 내 표식 효소의 활성 감소를 유의적으로 억제하여 세포 손상을 억제하고 세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

D. 간 조직 내 지질 과산화작용의 상태에 대한 헤스페리딘의 효과

지질 과산화작용 수준은 상기 랫트의 간 조직 내 TBARS(Thiobarbuturic Acid Reactive Substance)의 농도를 측정함으로써 결정하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면 대조군과 비교하여 TBARS의 농도가 급격하게 증가되나, 헤스페리딘을 투여하고 7일 후 그 수치가 상당히 감소됨으로써 정상(대조군; 1군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다. 상기 헤스페리딘은 1 Gy, 3 Gy 및 5 Gy에 노출된 랫트에 대하여 용량을 50 mg/kg으로 하여 투여하였을 때에는 94.5%, 69.61% 및 64.53%의 보호효과를 나타내었고, 용량을 100 mg/kg으로 하여 투여하였을 때에는 97.59%, 95.8% 및 88.7%의 보호효과를 나타내었다.

이로 인해 헤스페리딘이 감마선 조사에 따른 혈청 내 간 조직 내 지질 과산화작용 상승을 유의적으로 억제하여 세포 손상을 억제하고 세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

E. 간 조직 내 효소성 항산화제 상태에 대한 헤스페리딘의 효과

상기 실험 후, 각 군에 대한 조직 내 효소성 항산화제(SOD, 카탈라제 및 GPx)의 상태를 각각 도 7 내지 도 9에 나타내었다.

도 7 내지 도 9에서 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면(2군, 5군 및 8군) 간 조직 내 효소성 항산화제(SOD, 카탈라제 및 GPx)의 활성이 대조군(1군)에 비하여 상당히 감소하나, 헤스페리딘을 투여하고 7일 후(3군, 4군, 6군, 7군, 9군 및 10군) 그 수치가 정상(대조군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다.

이로 인해 헤스페리딘이 감마선 조사에 따른 조직 내 효소성 항산화제의 활성 감소를 유의적으로 억제하여 세포 손상을 억제하고 세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

F. 간 조직 내 비효소성 항산화제 상태에 대한 헤스페리딘의 효과

상기 실험 후, 각 군에 대한 조직 내 비효소성 항산화제(글루타치온, 비타민 C 및 비타민 E)의 상태를 표 4에 나타내었다.

	글루타치온	비타민 C	비타민 E
1군	22.71 ± 1.73	0.838 ± 0.013	5.49 ± 0.66
2군	17.93 ± 1.08 a***	0.692 ± 0.027 a***	3.93 ± 0.13 a***
3군	20.91 ± 1.70 b***	0.836 ± 0.04 b***	5.12 ± 0.13 b***
4군	22.70 ± 1.53 b***	0.836 ± 0.019 b***	5.71 ± 0.36 b***
5군	14.87 ± 1.49 a***	0.593 ± 0.013 a***	3.08 ± 0.14 a***
6군	18.15 ± 0.78 c***	0.767 ± 0.015 c***	4.72 ± 0.15 c***
7군	19.71 ± 1.02 c***	0.804 ± 0.015 c***	5.01 ± 0.11 c***
8군	9.92 ± 1.16 a***	0.545 ± 0.014 a***	2.06 ± 0.13 a***
9군	16.31 ± 0.93 d***	0.664 ± 0.023 d***	3.94 ± 0.83 d***
10군	18.24 ± 1.47 d***	0.762 ± 0.019 d***	5.19 ± 0.17 d***
11군	23.82 ± 1.36 aNS	0.835 ± 0.03 aNS	5.64 ± 0.32 aNS
a: 1군과 비교 b: 2군과 비교 c: 5군과 비교 d: 8군과 비교 ***P<0.001

표 4에 나타난 바와 같이, 랫트에 감마선이 조사되면(2군, 5군 및 8군) 조직 내 비효소성 항산화제(글루타치온, 비타민 C 및 비타민 E)의 활성이 대조군(1군)에 비하여 급격하게 감소하나, 헤스페리딘을 투여하고 7일 후(3군, 4군, 6군, 7군, 9군 및 10군) 그 수치가 정상(대조군; 1군)에 근접하게 회복되는 것을 알 수 있다.

이로 인해 헤스페리딘이 감마선 조사에 따른 조직 내 비효소성 항산화제의 활성 감소를 유의적으로 억제하여 세포 손상을 억제하고 세포를 보호하는 것을 알 수 있다.

G. 간의 조직 관찰

정상, 감마선 조사 또는 본 발명에 따른 헤스페리딘 처리한 랫트의 간을 적출하여 조직학적 관찰하여 도 10에 나타내었다.

도 10의 (a)는 정상 랫트로부터 적출한 간을 나타내는 사진이며, 이는 정상 간세포 구조를 나타내었다.

도 10의 (b)는 1 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트로부터 적출한 간을 나타내는 사진이며, 상기 간 조직은 혈관이 두꺼워지고, 문정맥(portal vein) 손상, 및 세포질소포형성(cytoplasmic vacuolation)과 간세포 플레이트의 조정 손실로 인하여 간세포가 증대됨이 나타났다.

도 10의 (c) 및 (d)는 상기 1 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트를 이후 7일 동안 헤스페리딘 처리((c): 50 mg/kg; (d): 100 mg/kg)한 후 적출한 간을 나타내는 사진이며, 문정맥 및 담관(bile duct)이 손상으로부터 보호됨이 나타났다.

도 10의 (e)는 3 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트로부터 적출한 간을 나타내는 사진이며, (f) 및 (g)는 상기 3 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트를 이후 7일 동안 헤스페리딘 처리((f): 50 mg/kg; (g): 100 mg/kg)한 후 적출한 간을 나타낸다.

도 10의 (e) 내지 (g)에서 나타난 바와 같이, 감마선이 노출되었을 때에는 간 조직은 혈관이 두꺼워지고, 문정맥(portal vein) 손상, 및 세포질소포형성(cytoplasmic vacuolation)과 간세포 플레이트의 조정 손실로 인하여 간세포가 증대되나, 헤스페리딘을 처리한 후에는 이러한 효과가 감소됨을 알 수 있다.

도 10의 (h)는 5 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트로부터 적출한 간을 나타내는 사진이며, (i) 및 (j)는 상기 5 Gy의 감마선을 노출시킨 랫트를 이후 7일 동안 헤스페리딘 처리((i): 50 mg/kg; (j): 100 mg/kg)한 후 적출한 간을 나타낸다.

도 10의 (h) 내지 (j)에서 나타난 바와 같이, 감마선이 노출되었을 때에는 간 조직은 혈관이 두꺼워지고, 문정맥(portal vein) 손상, 및 세포질소포형성(cytoplasmic vacuolation)과 간세포 플레이트의 조정 손실로 인하여 간세포가 증대되나, 헤스페리딘을 처리한 후에는 이러한 효과가 감소됨을 알 수 있다.

도 10의 (k)는 감마선 노출 없이 헤스페리딘 처리한 후 적출한 간을 나타낸다.

도 10의 (k)에서 나타나는 바와 같이, 상기 헤스페리딘 단독 처리한 간 조직은 세포 괴사 또는 사멸 현상이 일어나지 않았으며, 대조군과 비교하여 중심소엽성 영역(centrilobular region)에서 손상되지 않은 간세포, 정상 간세포 플레이트 및 정상 내피 세포를 나타내었다. 따라서, 본 발명에 따른 헤스페리딘 단독 투여로 세포의 측정되는 거의 모든 파라미터가 변경되지 않음을 알 수 있으며, 이로부터 본 발명에 따른 헤스페리딘 투여가 세포에 독성을 나타내지 않음을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 헤스페리딘은 감마선 등의 방사선 조사에 따른 세포 손상에 대하여 세포를 보호하고, 세포에 독성을 나타내지 않는 등 안전하기 때문에 방사선 노출에 있어서 세포 보호제로서 유용하게 사용될 수 있다.

< 제제예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

헤스페리딘 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

헤스페리딘 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

헤스페리딘 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사액제의 제조

헤스페리딘 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 헤스페리딘을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

< 제제예 2> 식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명에 따른 헤스페리딘 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙( gravies )의 제조

본 발명에 따른 헤스페리딘 0.1 내지 5 중량부를 스프 및 육즙 100 중량부에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 유제품( dairy products )의 제조

본 발명에 따른 헤스페리딘 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-4> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입고 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검은콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명에 따른 헤스페리딘을 진공 농축기에서 감압, 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명에 따른 헤스페리딘을 다음과 같은 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검은깨 7 중량부),

헤스페리딘(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부).

< 제제예 3> 음료의 제조

<3-1> 건강 음료의 제조

액상과당 0.5 중량부, 올리고당 2 중량부, 설탕 2 중량부, 식염 0.5 중량부, 물 75 중량부와 같은 부재료와 헤스페리딘 10 중량부를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강 음료를 제조하였다.

<3-2> 야채 주스의 제조

본 발명의 헤스페리딘 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1 ℓ에 가하여 건강 증진용 야채 주스를 제조하였다.

<3-3> 과일 주스의 제조

본 발명의 헤스페리딘 1 g을 사과 또는 포도 주스 1 ℓ에 가하여 건강 증진용 과일 주스를 제조하였다.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 다양한 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 아스파테이트 트랜스아미나제(AST)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 다양한 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 알라닌 트랜스아미나제(ALT)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 알칼린 포스파타제(ALP)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 락테이트 탈수소효소(LDH)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 감마-글루타밀 트랜스펩티다제(γ-GT)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 지질 과산화작용의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 7은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 활성산소 제거효소(SOD)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 8은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 카탈라제의 활성 변화를 나타내는 그래프이다.

도 9는 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직 내의 글루타치온 퍼옥시다제(GPx)의 활성 변화를 나타내는 그래프이다.

도 10은 본 발명의 일실시예에 따른 헤스페리딘 처리에 따른 감마선 노출 후 랫트의 간 조직을 나타내는 사진이다((a) 대조군; (b)1 Gy의 감마선 조사; (c) 1 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(50 mg/kg); (d) 1 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(100 mg/kg); (e) 3 Gy의 감마선 조사; (f) 3 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(50 mg/kg); (g) 3 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(100 mg/kg); (h) 5 Gy의 감마선 조사; (i) 5 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(50 mg/kg); (j) 5 Gy의 감마선 조사 후, 헤스페리딘 처리(100 mg/kg); 및 (k) 헤스페리딘 처리(100 mg/kg)).

Claims (16)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하여, 방사선 조사로 인한 손상된 간세포를 회복시키는 것을 특징으로 하는, 간암 방사선 치료 보조제 조성물:

   <화학식 1>

   

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4. 제1항에 있어서, 상기 방사선은 γ선인 것을 특징으로 하는 헤스페리딘 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 간암 방사선 치료 보조제 조성물.
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