KR100991279B1 - 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 신규 화합물을유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 신규 화합물 4,7,7'-트리히드록시-3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드(4,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide :이하 ‘PT-MC-H’라 함)을 유효성분으로 함유하는 조성물 관한 것으로, 상세하게는 PT-MC-H 화합물은 마우스 대식세포인 RAW 264.7 세포에서 LPS-유도된 NO 생성량, p-IkBα단백질 발현, iNOS 단백질 발현 및 iNOS mRNA의 발현의 함량을 유의적으로 감소함을 확인함으로써, 상기 조성물을 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용할 수 있다.

4,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide, NO생성, IkBα, p-IkBα, iNOS, 염증성 질환

Description

담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 신규 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물 {A composition comprising the novel compound isolated from the extract of Parthenocissus tricuspidata for preventing and treating inflammatory disease}

본 발명은 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 신규화합물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

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염증반응은 병원체에 의한 감염이나 조직의 손상과 같은 다양한 요인에 의해 일어나는 생체방어반응으로 감염부위나 손상부위에만 피해를 국한시키기 위한 초기 보호작용을 수행한다. 대부분의 경우, 이러한 염증반응은 내재면역의 구성 요소를 이용한 병원성 요인의 제거 및 특이적 적응면역의 유도 등으로 이어진다 (Hawiger J., Innate Immunity and Inflammation: A Transcriptional Paradigm. Immunologic Research. 23, pp.99109, 2001). 염증에 수반되는 특징으로서 알려진 발적 (rubor), 부종 (tumor), 열 (calor), 통증 (dolor) 등은 염증부위에서의 염증 매개체와 사이토카인 등의 작용에 의한 혈관의 확장에 따른 국소혈류의 증가 및 국소혈류속도의 감소, 혈관의 투과성증가에 따른 혈장성분의 혈관외 유출 증가, 혈관내피세포의 순환면역세포에 대한 부착성 증가에 따른 면역세포의 혈관외 유출 증가 및 화학주성에 의한 감염부위로의 이동 증가와 같은 연속적인 면역반응들의 결과이다 (Gallo RL, Murakami M, Takaaki O, Zaiou M., Biology and clinical relevance of naturally occurring antimicrobial peptides. J. Allergy. Clin. Immunol. 110 , pp.823-831. 2002; Graeme B. Ryan, MB, and Guido M., Acute Inflammation. American Journal of Pathology. 86 (1), pp.185-274, 1977). 조직손상에 대한 반응으로서 일부 세포들에서 생성되는 히스타민, 그리고 혈액 내에서 비활성화 상태로 존재하다가 조직손상에 의해 활성화되는 저분자 펩티드성 키닌도 염증관련 혈관확장과 혈관의 투과성 증가에 기여한다 (Yamaki K, Thorlacius H, Xie X, Lindbom L, Hedqvist P, Raud J., Characteristics of histamine-induced leukocyte rolling in the undisturbed microcirculation of the rat mesentry. British J. Pharmacol . 123, pp.390-399, 1998; Brocklehurst WE, Role of Kinins and Prostaglandins in Inflammation. Proc . Roy . Soc . Med . 64, pp.4-6, 1971). 특히 키닌의 일종인 브라디키닌은 피부의 통점을 자극하는 작용을 한다. 한편, 손상된 조직에서의 혈관의 확장과 혈관의 투과성 증가는 또한 혈액응고효소들이 조직으로 유출되게 하고 뒤이어 이들 효소의 연쇄반응에 의해 혈액응고의 주요 요소인 불용성의 섬유소가닥이 생성되게 한다. 응고된 섬유소 가닥은 손상된 조직부위를 통한 감염이 다른 부위로 확산되는 것을 차단하는 방어벽 역할을 한다 (Esmon CT, The interactions between inflammation and coagulation. British Journal of Haematology . 131, pp.417430, 2005). 일반적으로 급성염증반응은 빠르게 진행되고 짧은 기간 유지되며, 급성염증에는 급성기 반응이라는 전신성 반응이 동반된다. 한편 감염이나 자가면역질환과 같은 일부 질환과 관련하여 지속적인 면역활성화의 결과로서 만성염증이 유발될 수 있으며, 대식세포 (macrophages)의 축적과 활성화는 만성염증반응의 증거가 된다 (Huang AL, Vita JA, Effects of Systemic Inflammation on Endothelium-Dependent Vasodilation. Trends, Cardiovasc. Med. 16, pp.1520, 2006). 그러나 지속적인 만성염증반응의 경우, 숙주세포나 조직에 심각한 손상을 유발할 수 있다.

감염부위에서의 염증반응은 병원체에 대한 대식세포의 반응에 의해 개시된다. 병원체에 의해 활성화된 대식세포가 생성하는 반응성 활성산소종 및 활성질소 종, 프로스타글란딘, 루코트리엔 등과 같은 염증매개체, 그리고 TNF-α, IL-6 및 IL-8 등과 같은 염증유발성 사이토카인 등이 염증반응에 관여되는 것으로 알려져 있다 (Renauld JC, New insights into the role of cytokines in asthma. J. Clin . Pathol. 54, pp.577589, 2001; Blake GJ, Ridker PM, Tumour necrosis factor-α, inflammatory biomarkers, and atherogenesis. Eur . Heart J. 23, pp.345347, 2002). 이러한 염증매개체들의 생성에 관련된 유전자들의 전사인자인 NF-κB의 활성화가 대식세포의 염증관련 작용에 매우 중요하다. 대식세포 내에서 유도성 산화질소 합성효소 (inducible nitric oxide synthase, iNOS2), 시클로옥시게나제 (cyclooxygenase, COX-2), TNF-α, IL-6, IL-8 등의 염증관련 유전자들이 NF-κB에 의해 전사되는 것으로 보고되었다.

산화질소 (nitric oxide, NO)는 지속력이 짧은 자유라디칼로서 산화질소 합성효소 (nitric oxide synthase, NOS)의 촉매작용에 의해 L-아르기닌 (L-arginine)의 산화반응이 일어날 때, L-아르기닌으로부터 L-시트룰린 (L-citrulline)과 함께 산화질소가 생성된다는 사실은 이미 널리 알려져 있다. 생체 내에서 산화질소는 다양한 면역관련 기능을 나타내지만 (Moncada S, Palmer RM, Higgs EA, Nitric oxide: Physiology, pathophysiology , and pharmacology . Pharmacol . Rev. 43, pp.109-142, 1991), 과도한 산화질소의 생성은 오히려 세포독성을 나타낼 수 있으므로 숙주세포 및 조직의 손상을 초래할 뿐만 아니라 동맥경화, 발암 등 다양한 병리적 현상에 관여할 수도 있다 (Mordan LJ, Burnett TS, Zang LK, Tom J, Cooney RV, Inhibitors of endogenous nitrogen oxide formation block the promotion of neoplastic transformation in C3H10T1/2 fibroblasts. Carcinogenesis. 14, pp.1555-1559, 1993; Lirk P, Hoffmann G, Rieder J, Inducible nitric oxide synthase. Time for reappraisal. Curr. Drug. Targets. Inflamm. Allergy. 1, pp.89-108, 2002). NO 생성을 촉매하는 산화질소 합성효소 (NOS)에는 세 가지 유형이 알려져 있는데, 이들 중 신경 산화질소 합성효소 (neuronal NOS, nNOS, NOS1)와 내피 산화질소 합성효소 (endothelial NOS, eNOS, NOS3)는 구성적으로 항상 발현되는 반면, iNOS는 식세포 (phagocytes)가 세균성 내독소인 지질다당류 (lipopolysaccharide, LPS)에 의해 자극될 때 활성화되는 전사인자 NF-κB에 의해 비로소 전사되는 유도성이다.

대식세포 내에서 전사인자 NF-κB는 그 저해제인 IκB와 결합하여 불활성 상태로 세포질에 존재하지만, 세포표면의 Toll-유사 수용체 (Toll-like receptor)에 세균성 LPS가 결합할 때 유도되는 신호전달과정에 의해 IκB가 인산화되어 NF-κB/IκB로부터 해리되고 프로테아좀 분해작용에 의해 제거됨에 따라 NF-κB는 비로소 활성화 상태로 된다. 이어서 NF-κB는 핵으로 이동하여 다양한 염증 관련 유전자의 전사를 유도한다. 이러한 NF-κB의 활성화에는 Akt 신호전달 (Hattori Y, Hattori S, Kasai K, Lipopolysaccharide activates Akt in vascular smooth muscle cells resulting in induction of inducible nitric oxide synthase through nuclear factor-kappa B activation. Eur . J. Pharmacol, 481, pp.153-158, 2003)과 ERK, c-jun- 및 p38-MAPK 신호전달 경로가 관여하는 것으로 보고되었다 (Kim SH, Johnson VJ, Shin TY, Sharma RP, Selenium attenuates lipopolysaccharide- induced oxidative stress responses through modulation of p38 MAPK and NF-κB signaling pathways. Exp . Biol . Medicine . pp.565-701, 2004; Robinson MJ, and Cobb MH, Mitogen-activated protein kinase pathways. Cur. Opi. Cell Biol. 9, pp.180-186, 1997).

염증반응에 있어서 iNOS의 전사단계에서의 발현조절은 NO의 지속시간과 생성정도를 결정하는데 있어서 대단히 중요하다. 그러므로 iNOS의 발현조절기전 및 iNOS의 효소활성은 만성염증관련 질환의 개선을 위한 새로운 항염증 약제를 분리하고자 하는 연구에서 약제작용의 표적으로 이용되고 있다.

이에 본 발명자는 마우스 대식세포주인 RAW264.7을 세균성 LPS로 처리할 때 일어나는 NO 생성을 저해하는 새로운 약제를 찾기 위하여, 담쟁이덩굴 (Parthenocissus tricuspidata)로부터 분리 정제한 단일물질들을 대상으로 RAW264.7 세포의 NO 생성에 대한 저해능을 조사하였다. 그 결과, 담쟁이덩굴 유래의 단일물질로서 구조분석에 의해 4,7,7'-트리히드록시-3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드 (이하 ‘PT-MC-H’라 함)로 확인된 신규 화합물이 RAW264.7 세포에 있어서 LPS의 처리에 의해 유도되는 NO의 생성을 저해하는 기능이 있음을 최초로 확인하였으며, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 세포에서 LPS-유도된 NO 생성뿐만 아니라 p-IkBα단백질 발현, iNOS 단백질 발현 및 iNOS mRNA의 발현의 함량을 유의적으로 감소함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 담쟁이 추출물로부터 분리된 하기 구조식 (Ⅰ) 로 표기되는 4,7,7'-트리히드록시-3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드(4 ,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

(Ⅰ)

상기 구조식 (Ⅰ)으로 표기되는 본 발명의 화합물은 당해기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동일한 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p- 톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐릭산 및 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 하이드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명의 'PT-MC-H' 화합물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 담쟁이덩굴 조추출물을 수득하는 방법을 설명하면, 우선 담쟁이 덩굴을 채취하여 음건한 다음 세절하여 마쇄기로 갈아 미세분말화한 후, 담쟁이덩굴 시료 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 1 내지 5배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C1 내지 C4의 저급알콜 또는 이들의 혼합용매로, 바람직하게는 메탄올, 더욱 바람직하게는 50 내지 100% 메탄올로 10℃ 내지 100℃, 바람직하게는 50℃ 내지 90℃에서 1 내지 20시간, 바람직하게는 5 내지 15시간동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류추출방법을 사용하여, 진공여과에 의해 상층액을 회수한 다음, 상기의 과정을 2 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복 수행하여 상층액을 모으고 감압농축하여 본 발명의 담쟁이덩굴 메탄올 조추출물 수득할 수 있다.

상기에서 수득한 메탄올 조추출물을 물과 메틸렌클로라이드의 혼합용매에 혼합하여 분획한 후, 감압 농축하여 본 발명의 담쟁이덩굴 수가용성 분획물 또는 메틸렌클로라이드 가용성 분획물을 수득하였고, 상기 메틸렌클로라이드 가용성 분획물을 용출용매로 컬럼크로마토그래피를 수행하여 36개의 분획으로 분리한 후, 하부분획을 순차적으로 컬럼크로마토그래피로 정제분리하여 본 발명의 화합물 PT-MC-H을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제법으로 얻어진 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 신규화합물‘PT-MC-H’또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염 증성 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한, 담쟁이덩굴은 오랫동안 식용되거나 생약으로 사용되어 오던 약재로서 본 발명의 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 화합물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.

본원에서 정의되는 추출물은 담쟁이덩굴의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 메탄올, 더욱 바람직하게는 50~100% 메탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 상기 비극성용매 가용 추출물은 메틸렌클로라이드, 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트, 바람직하게는 메틸렌클로라이드에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 염증성 질환은 상기 염증성 질환은 아토피피부염, 관절염, 요도염, 방광염, 동맥경화증, 알러지 질환, 비염, 천식, 급성통증, 만성통증, 치주염, 치은염, 염증성 장질환, 통풍, 심근경색, 울혈성 심부전, 고혈압, 협심증, 위궤양, 뇌경색, 다운증후군, 다발성 경화증, 비만, 당뇨, 치매, 우울증, 정신분열증, 결핵, 수면장애, 패혈증, 화상 또는 췌장염 바람직하게는 아토피피부염, 관절염, 요도염, 방광염 또는 치주염, 더욱 바람직하게는 치주염, 요도염 또는 방광염인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량 %로 포함한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose) 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 및 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지 및 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 0.0001 ~ 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 ~ 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 화합물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 50 중량%의 함량으로 배합될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 및 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 신규화합물 PT-MC-H 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 화합물은 염증성 질환의 예방 및 치료를 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 및 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제 및 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 화합물은 염증성 질환의 예방 및 치료를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0.3 내지 10 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 신규화합물 PT-MC-H은 마우스 대식세포인 RAW 264.7 세포에서 LPS-유도된 NO 생성, IkBα, p-IkBα, iNOS 또는 COX-2 단백질 발현 및 iNOS mRNA의 발현의 함량을 유의적으로 감소함을 확인함으로써, 상기 조성물은 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용할 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 담쟁이덩굴 조추출물의 제조

1-1. 담쟁이덩굴 조추출물의 제조

2002년 8월 대구시 팔공산에서 소나무를 감고 올라간 담쟁이덩굴을 채취하여 음건한 다음 마쇄기로 갈아 미세 분말화 한 후, 미세 분말 시료 10kg에 95% 메탄올 40.5ℓ를 가하여 80℃에서 10시간 추출한 다음, 진공 여과하여 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 후, 감압 농축하여 담쟁이덩굴 메탄올 조추출물 1222.6g을 수득하였다.

1-2. 담쟁이덩굴 가용 추출물의 제조

상기 실시예 1-1에서 얻은 담쟁이덩굴 메탄올 조추출물 1222.6g을 물 2.1ℓ에 현탁시킨 후에, 메틸렌클로라이드로 용매 분획하였다. 먼저 물 2.1ℓ에 현탁시킨 담쟁이덩굴 메탄올 가용 추출물에 메틸렌클로라이드 1ℓ을 첨가하여 용해한 다음, 이를 분획여두에서 메틸렌클로라이드층에 용해되는 성분만 분리해서 진공 건조하였다. 이 과정을 3회 반복 수행하여 메틸렌클로라이드 가용 분획물 127.6g을 수득하였다.

실시예 2. 담쟁이덩굴 추출물로부터 신규화합물의 분리

상기 실시예 1-2에서 수득한 메틸렌클로라이드 가용 분획물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(flash column chromatography)(YMC Gel ODS-A, 60 A, 220 mesh)로 즉, 길이 35cm, 직경 9cm의 컬럼에 230~240 메쉬(mesh) 실리카겔(silica gel)을 채우고 100% 헥산(Hexane)으로 용리(elution)하여 고정상(stationary phase)를 균일한 상태로 만든 후, 상기 실시예 1-2에서 수득한 메틸렌클로라이드 가용성 분획물 127.6g을 실리카겔(70~230 메쉬)에 흡착시켜 컬럼에 로딩하였다. 이어서, 헥산 : 에틸아세테이트 = 98 : 2, 96 : 5, 90: 10, 85 : 15, 80 : 20, 75 : 25순으로 이동상(mobile phase)의 극성을 높여서 용리(elution) 시켜 TLC 패턴을 기준으로 PT-MC-1 ~ PT-MC-36의 분획물을 분획하였다.

상기 분획물 중에 PT-MC-20 분획물 2.0g을 RP C18 컬럼 크로마토그래피, 즉 길이 57cm, 지름 3.5cm에 RP C18(40-63μM)을 22cm 채우고 MeOH : H₂0 = 2 : 8 혼합용액을 용리(elution) 시켜 균일한 상태로 만든 후, 상기 PT-MC-20 분획물 2.0g을 100% 메탄올에 완전히 녹여 로딩하였다. 이어서 MeOH의 비율을 단계적으로 높이면서 용리(elution) 시켜 PT-MC-20A ~ PT-MC-20R로 나누었다. 그 중 PT-MC-20-B 분획물을 규소 오픈 컬럼 크로마토그래피;(SiO₂ open colunm chromatography)를 실시하였으며 컬럼(I.D. 53cm X 2.3cm)에 실리카겔(70메쉬 이하)을 약 15cm정도 채우고 100% 헥산으로 용리(elution)시켜 고정상을 균일한 상태로 만든 후 PT-MC-20-B를 21.5 mg을 실리카겔 소량에 흡착시켜 컬럼에 로딩하여 CH₂Cl₂:MeOH = 90: 1의 혼합 용액을 이동상으로 용리(elution)시켜 본 발명의 화합물 4,7,7'-트리히드록시-3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드(4,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide) 11.3mg을 분리정제하여 수득하였다.

상기 화합물의 구조는 핵자기 공명(nuclear magnetic resonance) 스펙트럼과 고해상 질량분석 데이터에 의하여 결정되었고, 핵자기 공명 스펙트럼에서 1H-NMR 시그날과 13C-NMR 시그날에 대한 위치지정(assignment)은 COSY, TOCSY 등의 다차원 핵자기 공명 실험을 통하여 이루어졌다.

화합물 1 :4,7,7’- 트리히드록시 -3,3,’4- 트리메톡시리그난 -9,9’- 올리드

분자식 : C₂₁H₂₄O₈

분자량 : 404.15

색 : 미황색 무정형 고체

수율 : 0.001 %

R_f= 0.75 (Methylene chloride : methanol = 7 : 1) ;

₁H NMR(CDCl₃) : δ ppm 6.79(s, 1H), 6.90-6.97(m, 1H), 6.83-6.89(m, 1H), 5.35(d, J= 4.0Hz, 1H), 3.46(dd, J= 8.5, 4.0Hz, 1H), 6.90(s, 1H), 6.90-6.97(m, 1H), 6.75-6.80(m, 1H), 5.33(d, J= 4.0Hz, 1H), 3.23-3.26 (m, 1H), 4.04(dd, J= 9.5, 4.5Hz, 1H), 4.34(dd, J= 9.5, 7.0Hz, 1H), 3.91(s, 9H), 5.61(s, 1H), 5.68(s, 1H), 3.51(s, 1H);

₁₃C NMR(CDCl₃) : δ ppm 132.2(C-1), 118.3(C-2), 146.0(C-3), 145.2(C-4), 114.7(C-5), 108.0(C-6), 84.6(C-7), 53.3(C-8), 177.0(C-9), 131.0(C-1'), 117.9(C-2'), 146.7(C-3'), 146.9(C-4'), 114.4(C-5'), 107.7(C-6'), 83.3(C-7'), 49.9(C-8'), 72.6(C-9'), 56.0(C-OCH₃);

FABMS(m/z) : 372(M-MeOH)₊

참고예 1. 실험재료의 준비

DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium), FBS(fetal bovine serum), 스트렙토마이신-페니실린(streptomycin-penicillin) 등의 세포 배양용 시약들은 Gibco BRL사 (Grand Island, USA)에서 구입하였으며, SDS(Sodium Dodesyl Sulfate), Acrylamide, Bis, Protein assay reagent는 Bio-Rad사 (Hercules, USA)에서 구입하였고, NP-40, CAPS, tween 20, protease inhibitors 등은 Sigma사 (St. Louis, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 1차 항체인 anti-IkBα, anti-p-Ikbα 또는 iNOS monoclonal antibody (mAb) 및 2차 항체인 anti-rabbit 또는 anti-mouse IgG horseradish peroxidase (HRP)-conjugated antibody는 SantaCruz Biotechnology사 (Santa Cruz, CA)에서 구입하였다. Griess Reagent System은 Promega사 (Madison, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 모든 시약은 분석용 등급이상으로 사용하였다.

참고예 2. 세포배양

마우스의 대식세포주인 RAW 264.7 세포 (한국세포주은행 (KCLB))를 10% FBS과 1% 페니실린-스트렙토마이신 (penicillin-streptomycin)을 포함하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에 37℃, 5% CO₂의 조건에서 배양하여 하기 실험에 사용하였다.

실험예 1. 세포독성 측정

상기 실시예 2에서 얻은 PT-MC-H 화합물의 세포독성을 측정하기 위하여 기존문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같은 실험을 하였다 (Do Youn Jun, Seok Woo Rue, Kyu Hyun Han, Dennis Taub, Young Sup Lee, Young Seuk Bae and Young Ho Kim. Biochemical Pharmacology 66, p2291, 2003).

세포독성 분석을 위해 96-웰 마이크로티터 플레이트(96-well microtiter plate)에 세포농도 1× 10⁴ cells/well로 조절하여 Raw264.7 세포를 분주한 후 16시간 배양하고, 상기 실시예 2의 PT-MC-H 화합물을 농도별로 1 시간 전처리하고 LPS 0.1 μg/ml을 처리한 후 12 시간 동안 배양한 후 50 μl의 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]를 첨가하고 4 시간 반응시켜 포르마잔(formazan)을 형성시킨 후, 상등액을 200 μl 제거하고 DMSO 150 μl/well을 가하여 포르마잔을 녹인 다음 ELISA reader(Variokan, Thermo Electron)를 이용하여 540 nm 파장에서 측정하였다.

실혐결과, 도 1에서 나타내는 바와 같이 6.25 또는 12.5 μg/ml 농도의 PT-MC-H 화합물 처리에 의해서는 RAW264.7 세포에 대한 세포생존율이 크게 영향을 받지 않았으나, 25 μg/ml 농도에서는 세포생존율이 대조구에 비해 약 50% 정도로 감소되는 것으로 나타나 25 μg/ml 농도에서는 대식세포 RAW264.7 세포에 대하여 세포독성 효과가 있음을 확인하였다(도 1 참조). 따라서 PT-MC-H 화합물은 RAW264.7 세포에 대해 세포독성을 나타내지 않는 12.5μg/ml 이하의 농도에서 하기의 실험을 하였다.

실험예 2. NO 의 생성량 측정

NO의 생성량을 측정하기 위해 문헌 (Wang S et al., J. Ethnopharmacol ., 114(3), pp458-462, 2007)에 기재되어 있는 방법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다.

NO생성량 측정을 위해 96-웰 마이크로티터 플레이트(96-well microtiter plate)에 세포농도 2× 10⁵ cells/well 로 희석하여 Raw264.7 세포를 분주한 후 16 시간 배양하고, 상기 실시예 2의 PT-MC-H 화합물을 농도별로 1 시간 전처리하고, LPS 0.1 μg/ml을 처리한 후 12 시간 동안 배양한 후 상등액 100 μl를 회수하여 그리스 반응액 (Griess Reagent) 100μl을 넣어주고 10분간 상온에서 반응 시킨 후 Automatic ELISA reader (precision microplate reader, Molecular Devices, BIO-TEX EL800uv-PC, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산 나트륨 (sodium nitrite)의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액 내의 NO 농도를 결정하였다.

실험결과, 도 2에 나타난 바와 같이 PT-MC-H 화합물은 6.25 μg/ml 농도조건에서 마우스 대식세포주 RAW264.7의 NO 생성을 거의 60% 정도로 저해하는 효과를 나타내었으므로(도 2참조), RAW24.7 세포의 NO 생성을 저해할 수 있는 최소농도를 규명하기 위하여 PT-MC-H 화합물을 2.5 μg/ml, 5 μg/ml 또는 10 μg/ml 농도로 첨가하는 경우에도 LPS에 의한 RAW264.7 세포의 NO 생성이 저해되는지를 확인하였다. 그 결과, 도 3A에서 나타내는 바와 같이 2.5 μg/ml, 5 μg/ml 또는 10 μg/ml 농도조건에서는 LPS에 의한 RAW264.7 세포의 NO 생성이 농도 의존적으로 저해되어 13%, 25% 및 70%로 각각 저해되는 것으로 확인하였으며(도 3A 참조), 동일한 농도조건에서 MTT assay로 확인한 PT-MC-H 화합물은 도 3B에서 나타내는 바와 같이 세포독성이 나타나지 않음을 확인하였다(도 3B 참조).

실험예 3. 웨스턴 블롯 분석법 ( Western blot analysis )

IkBα, p-IkBα, 또는 iNOS 단백질 발현 측정을 하기 위해 허 등의 방법 (Heo et al., J. Immunol ., 179(9), pp6305-6310, 2007)을 이용하여 웨스턴 블롯 분석법을 하기와 같이 수행하였다.

참고예 2의 방법으로 배양된 4× 10⁶cells/well 세포에 TBS(ice-cold Tris buffered saline: 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 137 mM NaCl)으로 3회 세척한 후, 용해 완충액 (lysis buffer: TBS, 1% NP-40, 1 mM sodium orthovanadata, 10 ㎍/㎖ aprotinin, 10 ㎍/㎖ leupeptin 및 1 mM PMSF)으로 현탁하고 초음파 분쇄기로 파쇄한 다음, 4℃에서 30분간 반응시키고 14000rpm에서 20분간 원심 분리하여 상층액을 모았다. 동일한 양의 단백질을 7.5% SDS-PAG(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresisE)로 분리시킨 후, 단백질을 Immobilon-P 멤브레인(membrane)에 전이 (transfer)하였다. 이 멤브레인을 항체의 비특이적 결합을 차단하기 위하여 블로킹 용액 (blocking buffer: 3% non-fat milk와 0.1% Tween 20을 함유한 TBS 용액)에서 1시간 동안 반응시킨 후, 각 단백질에 대한 항체 (anti-iNOS 및 anti-COX2)를 가하여 1 내지 2 시간 동안 반응시켰다. 이어서 0.1% Tween 20을 함유한 TBST 용액으로 10 분씩 3회 세척한 다음, 2차 항체 (anti-mouse 또는 anti-rabbit IgG horseradish peroxidase-conjugated antibody)로 90 분에서 2 시간 동안 반응시켰다. 이어서 ECL system으로 반응 시킨 후에 X-ray 필름 (AGFA, Belgium) 상에서 단백질을 확인하였다. 각 시료의 단백질 정량은 브래드포드 단백질 어세이키트(Bradford protein assay kit)를 사용하여 562 nm에서 흡광도를 측정하여 실시하였다.

참고로, 대식세포는 염증반응의 개시와 확대에서 중요한 역할을 하는 세포로서, 세균성 LPS에 의해 세포표면의 Toll-유사 수용체 (Toll-like receptor)가 자극되는 대식세포는 세포내 신호전달과정을 통해 전사인자인 NF-κB를 활성화하며, 이어서 활성화된 NF-κB의 작용으로 유도성 산화질소생성효소 (iNOS)의 발현을 증가시킨다. 그 결과 증가된 iNOS의 촉매작용으로 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 염증매개체 중의 하나인 NO의 생성이 증진됨을 알 수 있다 (Haiqi He, Kenneth J. Genovese, David J. Nisbet and Michael H. Kogut. Molecular Immunology 43, p783, 2006).

실험결과, 도 4에 나타난 바와 같이, LPS의 처리에 의해 전사인자 NF-κB의 활성화와 관련된 IκB 단백질의 인산화가 현저히 증가하였으나 PT-MC-H 화합물의 존재하는 조건에서는 농도 의존적으로 IκB의 인산화가 현저히 감소되는 경향을 나타내었으며, 동일한 조건하에서 iNOS의 수준도 PT-MC-H 화합물에 의해 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다.

실험예 4. 역전사중합효소연쇄반응( RT - PCR )

PT-MC-H 화합물의 NO 생성 억제능이 iNOS mRNA의 발현 억제에 의한 것인지 확인하기 위해 기존의 문헌에 기재된 방법 (Lee et al., J. Ethnopharmacol., 97, pp561-566, 2005)을 이용하여 RT-PCR을 하기와 같이 수행하였다.

RAW264.7 세포에 실시예 2의 화합물 PT-MC-H(4,7,7-trihydroxy-3,3,4-trimethoxylignan-9,9-olide)을 2.5~10 μg/ml의 농도로 1 시간 처리하여 반응시킨 후, 0.1 μg/ml의 LPS 4시간 전처리하여 NO 생성을 유도하였다. LPS 처리하고 4시간 경과 후, 세포를 트립신(Trypsin)-EDTA를 처리하여 회수하고 total RNA를 트리졸(TRIzole: Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 분리하였다. 첫 번째 가닥 cDNA는 총 RNA의 2μg으로부터 MMLV-역전사 효소(reverse transcriptase:Gibco BRL)를 사용하여 합성하였다. 프라이머(Primer) 의 염기서열은 하기의 표 1에 나타내었다.

	GAPDH (349 bp)	iNOS (449 bp)
sense primer	5-CCACTGGCGTCTTCACCAC-3	5-ATGTCCGAAGCAAACATCAC-3
anti- sense primer	5-CCTGCTTCACCACCTTTTG-3'	5-TAATGTCCAGGAAGTAGGTG-3

PCR은 98 ℃에서 2 분간 가열한 후 98 ℃에서 10 초, 50 ℃에서 30 초, 72 ℃에서 1 분간 반응하는 순서로 20 회 반복하고, 이후에 72 ℃에서 5 분간 반응하였다. PCR 생성물은 1.2% 아가로스 젤 (agarose gel)에서 전기영동하고 ETBR(ethidium bromide) (0.5 μg/ml)로 염색하여 확인하였다.

실험결과, 도 5에서 나타내는 바와 같이 PT-MC-H 화합물을 전처리하지 않고 LPS를 반응시킨 RAW264.7 세포에서는 LPS를 처리하지 않은 세포와 비하여, iNOS mRNA 발현 수준이 현저히 증가하였으나 PT-MC-H 화합물와 LPS를 함께 처리한 경우에는 PT-MC-H 화합물의 농도 의존적으로 iNOS mRNA 수준이 감소하는 것을 확인할 수 있었다 (도 5 참조). 따라서 PT-MC-H 화합물에 의하여 iNOS의 유전자 발현이 억제되기 때문에 NO 생성이 억제되는 것을 확인하였다.

이러한 결과는, 도 6에서 나타내는 바와 같이 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리되는 신규화합물 4,7,7'-트리히드록시-3,3',4'-트리메톡시리그난- 9,9'-올리드 (PT-MC-H)는 IκB의 인산화를 감소시킴으로 LPS에 의해 유도되는 RAW264.7 세포내의 전사인자인 NF-κB 활성화를 저해하며, 이를 통해 LPS에 의해 유도되는 iNOS의 전사를 저해하므로 iNOS 단백질의 수준을 낮출 수 있고, 따라서 LPS 처리에 의한 NO 생성을 저해하는 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

실시예 2의 PT-MC-H 화합물 300 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B₁ 0.25 g

비타민 B₂ 0.3 g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

도 1은 PT-MC-H 화합물의 세포독성을 나타낸 도이며,

(0, 6.25, 12.5, 25 ug/ml)

도 2는 PT-MC-H 화합물의 NO 생성감소량을 나타낸 도이고,

(0, 2.5, 5, 10 ug/ml)

도 3은 PT-MC-H 화합물의 세포독성을 나타낸 도이며,

(0, 2.5, 5, 10 ug/ml)

도 4는 PT-MC-H 화합물의 염증성 관련 단백질의 생성감소량을 나타낸 도이고,

(IkBα, p-IkBα, iNOS)

도 5는 PT-MC-H 화합물의 iNOS mRNA발현 억제를 나타낸 도이며,

도 6은 대식세포주 Raw264.7의 염증성 신호전달을 모식화한 도이다.

<110> Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> A composition comprising the novel compound isolated from the extract of Parthenocissus tricuspidata for preventing and treating inflammatory disease <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH-sense primer <400> 1 ccactggcgt cttcaccac 19 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH-anti-sense primer <400> 2 cctgcttcac caccttttg 19 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS-sense primer <400> 3 atgtccgaag caaacatcac 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS-anti-sense-primer <400> 4 taatgtccag gaagtaggtg 20

Claims (8)

1. 담쟁이덩굴(parthenocissus tricuspidata) 추출물로부터 분리된 하기 구조식 (Ⅰ)로 표기되는 신규화합물 4,7,7'-트리히드록시- 3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드(4 ,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

   

   (Ⅰ)
2. 담쟁이덩굴 추출물로부터 분리된 제 1항의 구조식(Ⅰ)으로 표기되는 신규 화합물 4,7,7'-트리히드록시- 3,3',4'-트리메톡시리그난-9,9'-올리드(4,7,7'-trihydroxy-3,3',4'-trimethoxylignan-9,9'-olide) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 치주염, 요도염 또는 방광염의 예방 및 치료용 약학조성물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 추출물은 담쟁이덩굴의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 하는 약학조성물.
4. 삭제
5. 제 3항에 있어서, 상기 비극성용매 가용 추출물은 메틸렌클로라이드, 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트에 가용한 추출물을 포함함을 특징으로 하는 약학조성물.
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제

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