KR100962179B1

KR100962179B1 - 돼지 유행성 설사병 바이러스 감염을 억제하는 신규락토바실러스 루테리 에이취와이 25101 및 이를 함유하는사료첨가제

Info

Publication number: KR100962179B1
Application number: KR1020080025983A
Authority: KR
Inventors: 한은정; 이정희; 서종교; 허철성
Original assignee: 주식회사한국야쿠르트
Priority date: 2008-03-20
Filing date: 2008-03-20
Publication date: 2010-06-10
Also published as: KR20090100667A

Abstract

본 발명은 국내 자돈 분변으로부터 분리된 신규 미생물로서 내산성, 내담즙성을 가지면서 돼지 유행성 설사병 바이러스(Porcine Epidemic Diarrhea Virus) 감염 억제 및 유해 미생물의 생장 억제활성을 갖는 신규 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101, 이를 포함한 사료첨가제 및 이를 이용한 돼지 유행성 설사병과 유해미생물에 의한 설사병 예방 및 치료방법에 관한 것으로서, 자돈 등의 가축에 급여시 돼지 유행성 설사병 바이러스로 인한 자돈의 폐사가 감소하여 자돈용 사료첨가제, 생균제 등으로 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.

락토바실러스 루테리 HY 25101, 돼지 유행성 설사병 바이러스, 생균제, 사료첨가제

Description

돼지 유행성 설사병 바이러스 감염을 억제하는 신규 락토바실러스 루테리 에이취와이 25101 및 이를 함유하는 사료첨가제{A new Lactobacillus reuteri HY 25101 with inhibitory activity against porcine epidemic diarrhea virus and A Feed additive containing thereof}

본 발명은 돼지 유행성 설사병 바이러스 감염 억제활성 및 유해 미생물의 생장 억제활성을 갖는 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 국내 자돈 분변으로부터 분리된 신규 미생물로서 내산성, 내담즙성을 가지면서 돼지 유행성 설사병 바이러스 감염 억제 및 유해 미생물의 생장 억제활성을 갖는 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101, 이를 포함한 사료첨가제 및 이를 이용한 돼지 유행성 설사병과 유해미생물에 의한 설사병 예방 및 치료방법에 관한 것이다.

돼지 유행성 설사병 바이러스(Porcine Epidemic Diarrhea Virus; 이하 'PEDV'라 함)는 벨기에에서 1978년 처음으로 보고되었으며, 이후 주로 영국, 스페인 등 유럽에서 발생보고가 있었다(Chasey D. et al., Virus-like particles associated with porcine epidemic diarrhoea, Res Vet Sci., 1978, 25:255-256, Pensaert MB., et al., A new coronavirus-like particle associated with diarrhea in swine, Arch Virol., 1978, 58:243-247). PEDV는 코로나비리데(Coronaviridae)계에 속하는 매우 감염성이 높은 바이러스성 질병을 일으키는 바이러스로서 위장관 소화기 계통에 침입하여 구토, 설사로 인한 탈수와 고열을 일으키며 치사율도 높아서 축산 농가에 심각한 경제손실을 야기 시키고 있다.(Durate M., et al., Sequence of the spike protein of the porcine epidemic diarrhoea virus, J Gen Virol., 1994, 75:1195-1200). 우리나라에서는 1990년대 초반부터 매년 심각한 피해를 입고 있으며, 2003년부터 2007년까지 국립수의과학검역원의 가축전염병 발생 통계를 살펴보면 돼지 유행성 설사병은 226건, 77,206두수의 피해가 보고되었다. 특히 겨울철과 환절기에 저항력이 약한 갓 난 새끼 돼지에 많이 발생하는 소화기성 설사병으로 양돈농가에 지속적인 피해를 주고 있다. 최근에는 주로 동절기에 발생하던 유행성 설사병이 6, 7월까지도 지속적으로 발생하고 있어 계절성이 없어지는 특징을 나타내고 있다. 돼지 유행성 설사병의 주된 증상은 구토증상을 동반한 수양성 설사로서, 30~100% 범위의 이병율을 나타내며, 특히 면역이 되지 않은 이유자돈에 폭발적으로 발생한다. 폐사율은 자돈의 경우 90%, 육성돈인 경우에는 2~6% 수준이며 폐사돈은 심한 탈수상태로 위는 비어있든지 담즙이 섞인 액체로 차 있다. 소장과 대장이 활기가 없고 얇으며, 수양성 내용물로 차 있는 경우가 많고 소장점막의 융모 탈락이 심하다. 돼지 유행성 설사병은 바이러스성 질병이기 때문에 항생제나 항균제로 근본적인 치료는 할 수 없으며 현재는 포유자돈에서 설사를 예방하기 위해 돈사 의 위생관리를 철저히 하며, 임신 모돈에 백신을 예방접종하여 분만 후 초유를 통해 자돈에 모체이행항체를 이행시켜 PEDV 감염예방을 하고 있으나 백신 사용에 대한 부작용이 발생할 수 있다는 문제점이 제기되고 있다. 현재 돼지 유행성 설사병의 경우 PEDV 약독화주 백신이 개발되어 있으나, 양돈 농가의 인식부족과 낙후된 사육시설 등으로 축산농가에서 손쉽게 사용할 수 없으므로 매년 재발하고 있는 실정이다.

한편, 생균제란 프로바이오틱(probiotics) 혹은 DFM(direct-fed microbials)로 통용되며, 살아있는 미생물을 포함한 제제로서 동물의 장내에 정착하여 다른 병원성 미생물과 경쟁적 배제를 통해 유해 미생물의 성장을 억제하고, 섭취한 사료의 소화와 흡수를 도와줌으로써 동물의 성장을 촉진하고 사료효율을 개선시켜주는 미생물제제를 말한다. 지금까지 알려진 대표적인 프로바이오틱 미생물로는 유산균(Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. plantarum, L. rhamnosus, L. sporogenes), 비피더스균(Bifidobacterium lactis, B. longum), 고초균(Bacillus subtilis, B. polyfermenticus), 클로스트리디움(Clostridium butyricum, C. faecium), 효모(Saccharomyces cerevisiae) 등이 사용되고 있으나 유산균들이 주요 균주로 사용되고 있다. 많은 in vivo 및 in vitro 실험결과 생균제를 사용함으로서 기대되는 효과는 장내 유해균 증식 억제, 악취 및 유해가스 저감, 면역기능 활성화를 통한 바이러스 감염방지, 설사 발생빈도 저하, 소화율 향상 등 다양하다. 생균제는 병원체의 장점막 정착과정을 적극적으로 저해하고, 장내의 영양분을 선점함으로써 유해 미생물을 경쟁적으로 배제하여 유해균 증식을 억제한다. 또한 대사과정 에서 생산되는 유산, 유기산 등은 장관내 pH를 낮추어 병원체 증식을 방해함과 동시에 박테리오신 등의 항균물질을 생산하여 살균효과를 나타낸다.

이에 본 발명자는 국내 자돈의 분변으로부터 분리된 유산균을 대상으로 PEDV의 감염을 억제하는 신규 유산균의 탐색을 수행한 결과, 유해 미생물에 대한 억제활성과 내산성, 내담즙성 능력이 뛰어나며, 특히 PEDV의 감염을 효과적으로 억제하는 신규 유산균을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 돼지 유행성 설사병 바이러스 감염 억제활성 및 유해 미생물의 생장 억제활성을 갖는 내산성, 내담즙성의 신규 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 PEDV 감염 억제활성이 뛰어난 상기 유산균을 가축에게 투여하거나 사료첨가제, 동물약품 등으로 사용하여 사료용 생균제를 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 유산균을 이용하여 돼지 유행성 설사병 바이러스의 감염을 억제하여 돼지 유행성 설사병 또는 가축의 장내 유해 병원성 미생물의 생장을 억제하여 상기 유산균에 의한 설사를 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 돼지 유행성 설사병 바이러스 감염 억제활성 및 유해 미생물의 생장 억제활성을 갖는 락토바실러스 루테리 HY 25101, 이를 포함한 사료첨가제 및 이를 이용한 돼지 유행성 설사병과 유해미생물에 의한 설사병 예방 및 치료방법을 제공하는 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자들은 7일령에서 16일령 사이의 자돈으로부터 혐기백(Gas pack pouch, BBL사)을 이용하여 돼지 분변을 채취하고, 이를 혐기성 희석액에 희석하여 MRS 고체배지에 각각 도말하여 배양하였다. 각각의 배지에서 콜로니 모양과 크기를 기준으로 단일 콜로니를 분리하였고 콜로니 모양과 특성을 알아보았다.

각 분리한 단일 균주를 대상으로 PEDV 감염 억제 실험결과 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101과 PEDV를 함께 처리하였을 때 세포변성효과(CPE)가 관찰되지 않아 상기의 유산균은 PEDV에 대한 항바이러스성이 있는 것으로 확인되었다.

또한 본 발명은 락토바실러스 루테리 HY 25101을 동정하기 위하여 생리·생화학적 특성과 당이용성 및 16S rRNA 유전자 염기서열 분석을 수행하였다. 생리·생화학적 특성분석 결과, 상기 유산균은 그람양성의 세균으로 포자를 형성하지 않고, 호기적인 조건과 혐기적인 조건에서 모두 성장이 가능하며, 운동성이 없으며, 세포의 형태는 간균이다. 16S rRNA 유전자 염기서열은 서열번호 1과 같으며 분자계통 분류학적 분석에서 상기 유산균은 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)와 99.1%의 16S rRNA 상동성이 있음을 나타내었다. 이와 같은 균의 형태학적, 생리적 및 생장 특성에 근거하여 본 발명의 균주는 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)로 동정하고, 이를 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101로 명명하여, 한국생명공학연구원 유전자은행에 2008년 2월 27일자로 기탁하였다(수탁번호: KCTC 11291BP).

본 발명의 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101를 장기간 안정적으로 보존하기 위해 글리세롤을 포함하여 영하 80℃에서 보관하거나 멸균된 10% 탈지분유에 현탁하여 동결건조 하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101은 유해 미생물 생장억제능과 내산성, 내담즙성을 갖는다. 구체적으로 유해 미생물의 생장억제실험은 Escherichia coli KCTC 2441, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Salmonella typhimurium KCTC 12401, Salmonella enteritidis KCTC 12400, Citrobacter freundii KCTC 2006, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208 균주를 대상으로 수행하였으며 상기 6종의 유해 미생물 모두를 효과적으로 생장 억제함을 확인하였다. 내산성 확인 실험은 MRS 액체배지에서 37℃ 세포 배양기에서 16시간 배양한 후 PBS에 10배 단계 희석법(10-fold serial dilution)으로 희석한 다음 각 희석단계별로 MRS 고체배지에 도말하여 생균수를 측정하였다. 이후 10％ 염산으로 pH가 각각 pH 4.0, pH 3.0, pH 2.0으로 조정된 0.05M 멸균 인산완충액에 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY25101을 접종한 후 37℃에서 배양하면서 일정 시간마다 균액을 희석하여 MRS 고체배지를 사용하여 실험균주의 생존율을 측정하였다. 또한 내담즙성 확인실험은 MRS 액체배지에 옥스갈을 최종농도 0.1％, 0.3％ 및 0.5％가 되도록 첨가한 후 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY25101을 1％ 접종하여 37℃에서 24시간 배양한 후 PBS에 10배 단계 희석법(10-fold serial dilution)으로 희석한 다음 각 희석단계별로 MRS 고체배지에 도말하여 생균수를 측정하여 확인하였다. 위와 같은 방법으로 실험을 수행한 결과 본 발명의 신규 락토바실러스 루테리 HY25101 균주는 내산성과 내답즙성이 모두 우수함을 확인하였다.

본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101은 독립적으로 또는 가축이 섭취하기에 적합한 조성물 형태로 사용될 수 있으며, 다른 유용한 프로바이오틱 미생물 및 프리바이오틱과 함께 첨가하여 사용될 수 있다. 예컨대, 다른 유용한 프로바이오틱 미생물의 구체적인 예로는 Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae, Lactobacillus sporogenes, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Lactobacillus gasseti, Lactobacillus helviticus, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Enterococcus faecalis, Pediococcus acidophilus, Aspergillus niger, Pichia pastoris, Clostridium butyricum, Aspergillus oryzae, Lactobacillus bulgaricus, Bacillus coagulans 등을 들 수 있다. 이러한 조성물에는 안정제 및 부형제, 캡슐화제 등이 포함될 수 있으며 동결건조 분말이나 캡슐화된 형태 또는 배양액이나 건조분말의 형태가 가능 하다. 이러한 사료용 생균제는 사료에 첨가되어 돼지에게 섭취시킴으로써, 이를 섭취한 돼지에게서 돼지 유행성 설사병의 PEDV에 대한 감염 억제와 유해 미생물의 생장을 억제함으로써 설사병을 예방 또는 치료할 수 있다.

이상에서 살펴 본 바와 같이, 본 발명의 신규 미생물 락토바실러스 루테리 HY 25101은 PEDV 및 유해 병원성 미생물의 생장을 억제하는 유산균으로 내산성 및 내담즙성의 특성을 가지며 돼지 유래 미생물이기 때문에 장내에서 효과적으로 작용할 수 있는 특성을 지니기 때문에 동물약품이나 사료첨가제로 사용하여 돼지 유행성 설사병을 예방할 수 있다.

또한, 자돈 등의 가축에 급여시 PEDV로 인한 자돈의 폐사가 감소하여, 자돈용 생균제로 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.

이하 실시 예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 다음의 실시 예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.

<실시예 1>

자돈의 분변으로부터 유산균 분리

7일령에서 16일령 사이의 자돈으로부터 혐기백(Gas pack pouch, BBL사)을 이용하여 돼지 분변을 채취하고, 이를 혐기성 희석액{0.78% K₂HPO₄, 염혼합액(0.47% K₂HPO_4, 1.18% NaCl, 1.2% (NH₄)₂SO₄, 0.12% CaCl₂, 0.24% MgSO₄) 37.5㎖, L-Cystein 0.5g, 25% L-ascorbic acid 2㎖, 8% Na₂CO₃ 50㎖, 0.1% resazurin 1㎖를 증류수 860㎖에 녹이고 Agar 0.5g을 첨가}90㎖에 1:10의 비율로 희석하고, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 상기 진탕액 1㎖을 MRS 고체배지(Difco, USA)에 도말하여 37℃에서 48시간 배양하였다. 콜로니 290개를 선발하여 -80℃에서 보존하였다.

<실시예 2>

PEDV 감염억제 유산균의 동정

상기 실시예1에서 분리한 균주를 MRS 액체배지(Difco사 제품)에서 37℃ 조건으로 16시간 정치배양 하였다. 상기 분리된 균주를 동정하기 위하여 생화학적 특성 및 당이용성을 API 50 CHL(바이오메리우스사 제품)을 사용하여 확인하였으며, 16S rRNA 유전자 염기서열 분석은 윤 등(Yoon et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 993, 1997)의 방법을 사용하였다. 상기 실시예1에서 분리한 균주의 생화학적 특성은 다음과 같으며 형태는 도 1과 같다.

1) 운동성 : -

2) 포자형성능 : -

3) 공기내성(aerotolerance) : +

4) 카탈라아제(catalase) : -

5) Gas 발생 : +

6) Gram 염색 : +

7) 형태 : 간균

상기 실시예1의 균주의 당이용성은 하기 표1과 같으며 16S rRNA의 염기서열은 서열번호 1에 나타내었다.

이상의 결과로부터 본 발명의 균주는 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)로 동정되었으며, 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101로 명명하여, 한국생명공학연구원 유전자은행에 2008년 2월 27일자로 기탁하였다(수탁번호: KCTC 11291BP).

<실시예 3>

락토바실러스 루테리 HY 25101을 포함하는 사료첨가제 제조

락토바실러스 루테리 HY 25101을 엠알에스 브로스(MRS broth, Difco 사)에 접종하여 37℃에서 1일간 배양하였다. 6,500ℓ의 탱크에 1.5중량％의 시에스엘(C.S.L, 옥수수 침지 농축액, pH 4.5 이하), 0.1중량％의 효모 추출물, 0.05중량％의 탄산칼슘, 1.0중량％의 포도당, 0.1중량％의 인산제1칼륨(KH₂PO₄), 0.1중량％의 인산제2칼륨(K₂HPO₄), 0.1중량％의 수산화나트륨의 조성으로 이루어진 액체배지 5,000ℓ를 넣고 121℃에서 15분간 멸균시킨 다음, 상기에서 얻은 유산균을 접종하여 37℃에서 1일간 배양하였다. 배양한 후 원심분리하여 상기 유산균을 회수하고 10배 부피의 10% 탈지유에 분산시킨 뒤, 동결 건조하여 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101을 포함한 사료첨가제를 제조하였다. 이어서, 시중에서 시판되는 일반사료 1톤에 대하여 상기 사료첨가제 2kg을 함께 균질하게 배합한 후에 돼지에 급여하였다.

<시험예 1>

락토바실러스 루테리 HY 25101의 PEDV 감염 억제 실험

(바이러스 확보)

Vero 세포를 단층이 되게끔 키운 후 PBS로 한번 세척하고 PEDV를 30분간 흡착시킨 후 유지배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM), 1% penicillin/streptomycin, 5 ㎍/㎖ trypsin, 5% Fetal bovine serum)를 첨가하여 5% CO₂를 함유한 37℃ 세포 배양기에서 3일간 배양하여 세포변성효과[Cytopatic effect(CPE)]를 확인하였다. Vero 단층세포에 세포변성효과가 70% 정도 관찰될 때 유지배지를 포함한 감염세포를 액체질소에서 3차례 냉동과 해동을 반복한 후 원심 분리하여 세포성분을 제거한 상등액을 -80℃에 보관하면서 시험에 사용하였다.

(바이러스 정량)

24-well 세포배양 플레이트에 Vero 단층세포를 준비하고 -80℃에 보관 중인 PEDV를 10배 단계 희석법으로 희석한 후 각 희석 단계별로 각 well에 접종하고 3일간 5% CO₂를 함유한 37℃ 세포 배양기에서 배양하면서 세포변성효과를 관찰하였다. 세포변성효과 관찰결과를 토대로 Reed & Muench 방식으로 배양액 내에 존재하는 바이러스 함량을 정량하였다.

(PEDV 감염 억제 활성 확인)

PEDV를 5% fetal bovine serum이 빠진 DMEM으로 희석하여 바이러스 역가가 TCID₅₀/0.1㎖, 10 TCID₅₀/0.1㎖, 100 TCID₅₀/0.1㎖이 되도록 하였다. 24-well 세포배양 플레이트에 Vero 단층세포를 준비한 다음 100㎕의 TCID₅₀/0.1㎖, 10 TCID₅₀/0.1㎖, 100 TCID₅₀/0.1㎖을 넣고 10㎕의 분리 미생물 배양액을 각 well에 첨가한 후 5% CO₂를 함유한 37℃ 세포 배양기에서 배양하면서 3일 후에 세포변성효과를 관찰하였다. 그 결과를 표2에 나타내었다.

락토바실러스 루테리 HY 25101의 PEDV에 대한 세포변성효과

	TCID₅₀	10 TCID₅₀	100 TCID₅₀	TCID₅₀
락토바실러스 루테리 HY25101	첨가	첨가	첨가	무첨가
세포변성효과	음성	음성	음성	양성

상기 표2에서 확인할 수 있는 바와 같이, TCID₅₀,10 TCID₅₀ 및 100 TCID₅₀에서 세포변성효과가 관찰되지 않았으므로(음성) 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101은 PEDV에 대한 감염 억제 활성이 있음을 확인할 수 있었다.

<시험예 2>

내산성 확인

실시예1에서 분리한 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101를 MRS 액체배지(Difco사 제품)에서 37℃ 세포 배양기에서 16시간 배양한 후 PBS에 10배 단계 희석법(10-fold serial dilution)으로 희석한 다음 각 희석단계별로 MRS 고체배지에 도말하여 생균수를 측정하였다. 이 후 10％ 염산으로 pH가 각각 pH 4.0, pH 3.0, pH 2.0으로 조정된 0.05M 멸균 인산완충액에 상기 유산균을 접종한 후 37℃에서 배양하면서 일정 시간마다 균액을 희석하여 MRS 고체배지를 사용하여 실험균주의 생존율을 측정하였다. 그 결과를 도2에 나타내었다.

도2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101은 pH 2.0에서는 86%의 생존률을, pH 3.0과 pH 4.0에서는 98%의 생존률을 보임을 확인하여 높은 내산성을 가짐을 확인할 수 있었다.

<시험예 3>

내담즙성 확인

MRS 액체배지에 옥스갈(oxgall)을 최종농도 0.1％, 0.3％ 및 0.5％가 되도록 첨가한 후 상기 실시예1의 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101을 1％ 접종하여 37℃에서 24시간 배양한 후 PBS에 10배 단계 희석법(10-fold serial dilution)으로 희석한 다음 각 희석단계별로 MRS 고체배지에 도말하여 생균수를 측정하였다. 그 결과를 도3에 나타내었다.

도3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101은 0.5% 옥스갈이 첨가된 조건에서도 5 x 10⁸cfu/㎖ 이상의 생균수를 유지하는 결과를 보여 내담즙성을 가짐을 확인할 수 있었다.

<시험예 4>

유해 미생물 생장억제능 확인

유해 미생물 생장억제능을 확인하기 위해 구로이와 등(Kuroiwa et.al., 감염증학회지, 64, 257, 1990)의 방법을 사용하여 다음의 미생물 6종을 대상으로 실험하였다. Escherichia coli KCTC 2441, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Salmonella typhimurium KCTC 12401, Salmonella enteritidis KCTC 12400, Citrobacter freundii KCTC 2006, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208 상기의 유해 미생물들을 nutrient broth에서 37℃에서 18시간 배양한 후 배양액 0.1㎖을 nutrient agar 배지에 도말하고 건조시킨 다음 지름 8mm의 페이퍼디스크를 배지위에 올려놓았다. 본 발명의 신규 락토바실러스 루테리 HY 25101을 MRS 액체배지에서 37℃에서 18시간 배양한 후, 준비한 nutrient agar 배지 위의 지름 8mm의 페이퍼디스크에 배양액 30㎕를 접종하고 다시 37℃에서 18시간 배양하였다. 이 후 형성된 투명환(clear zone)을 측정하여 억제활성을 표3에 나타내었다.

락토바실러스 루테리 HY 25101의 유해 미생물 억제활성

유해 미생물	투명환 지름(mm)
Escherichia coli KCTC 2441	14.1
Staphylococcus aureus KCTC 1621	16.4
Salmonella typhimurium KCTC 12401	18.2
Salmonella enteritidis KCTC 12400	16.7
Citrobacter freundii KCTC 2006	20.0
Klebsiella pneumoniae KCTC 2208	15.8

상기 표3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101이 유해 미생물 생장 억제하는 억제환의 지름은 Escherichia coli KCTC 2441의 경우 14.1mm, Staphylococcus aureus KCTC 1621의 경우 16.4mm, Salmonella typhimurium KCTC 12401의 경우 18.2mm, Salmonella enteritidis KCTC 12400의 경우 16.7mm, Citrobacter freundii KCTC 2006의 경우 20.0mm, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208의 경우 15.8mm이다. 따라서 본 발명의 락토바실러스 루테리 HY 25101은 유해미생물 6종에 대해 우수한 생장억제 활성을 지니는 유산균임을 확인할 수 있었다.

도 1은 락토바실러스 루테리 HY 25101을 전자현미경으로 관찰한 사진이다.

도 2는 락토바실러스 루테리 HY 25101의 내산성을 나타낸 그래프이다.

도 3은 락토바실러스 루테리 HY 25101의 내담즙성을 나타낸 그래프이다.

<110> YANG, Ki Rak; Korea Yakult Co.,Ltd <120> A new Lactobacillus reuteri HY 25101 with inhibitory activity against porcine epidemic diarrhea virus and A Feed additive containing thereof <130> P0803-02 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1571 <212> DNA <213> Lactobacillus reuteri HY 25101 <400> 1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgcc ggcggtgtgc ctaatacatg caagtcgtac 60 gcactggccc aactgattga tggtgcttgc acctgattga cgatggatta ccagtgagtg 120 gcggacgggt gagtaacacg taggtaacct gccccggagc gggggataac atttggaaac 180 agatgctaat accgcataac aacaaaagcc acatggcttt tgtttgaaag atggctttgg 240 ctatcactct gggatggacc tgcggtgcat tagctagttg gtaaggtaac ggcttaccaa 300 ggcgatgatg catagccgag ttgagagact gatcggccac aatggaactg agacacggtc 360 catactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tgggcgcaag cctgatggag 420 caacaccgcg tgagtgaaga agggtttcgg ctcgtaaagc tctgttgttg gagaagaacg 480 tgcgtgagag caactgttca cgcagtgacg gtatccaacc agaaagtcac ggctaactac 540 gtgccagcag ccacggtcat acgtaggtgg caagcgttat ccggatttat tgggcgtaaa 600 gcgagggcag gcggttgctt aggtctgatg tgaaagcctt cggcttaacc gaagaagtgc 660 atcggaaacc gggcgacttg agtgcagaag aggacagtgg aactccatgt gtagcggtgg 720 aatgcgtaga tatatggaag tacaccagtg gcgaaggcgg ctgtctggtc tgcaactgac 780 gctgaggctc gaaagcatgg gtagcgaaca ggattagata ccctggttgt ccatgccgta 840 aacgatgagt gctaagtgtt ggagggtttc cgcccttcag tgccggagct aacgcattaa 900 gcactccgcc tggggagtac gaccgcaagg ttgaaactca aaggaattga cggcggcccg 960 cacaagctat ggagcatgtg gtttaattcg aagttacgcg aagaacctta ccaggtcttg 1020 acatcttgcg ctaaccttag agataaggcg ttccattcgg ggacgtaatg acaggtggtg 1080 catggtcgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 1140 cttgttacta gttgccagca ttaagttggg cactctagtg agactgccgg tgacaaaccg 1200 gaggaaggtg gggacgacgt cagatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc 1260 tacaatggac ggtacaacga gtcgcaagct cgcgagagta agctaatctc ttaaagccgt 1320 tctcagttcg gactgtaggc tgcaactcgc ctacacgaag tcggaatcgc tagtaatcgc 1380 ggatcagcat gccgcggtga atacgttacc gggcgttgta cacaccgccc gtcacaccat 1440 gggagtttgt aacgcccaaa gtcggtggcc taacctttat ggagggagcc gcctaaggcg 1500 ggacagatga ctggggtgaa gtcgtaacaa ggtagccgta ggagaacctg cggctggatc 1560 acctcctttc t 1571

Claims

돼지 유행성 설사병 바이러스 감염 억제활성을 갖는 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101(기탁번호: KCTC 1129BP).
제1항의 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101을 포함하는 것을 특징으로 하는 가축용 사료첨가제.
제1항의 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) HY 25101을 이용하여 돼지 유행성 설사병 바이러스의 감염을 억제하여 돼지 유행성 설사병을 예방 또는 치료하는 방법.
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