KR100954386B1 - The Manufacturing Process of extraction of the deer velvet and the deer velvet extract manufactured by the same method - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것으로, 녹용이 가지고 있는 항산화 효과를 지닌 유효 미세 성분의 추출을 제조 공정에 의한 손실을 최소화하는 것을 특징으로 하며 이로 인해 ATP 합성 능력 향상에 의해 세포 성장 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing an antler extract having an excellent antioxidant effect, and an antler extract prepared thereby, characterized in that the extraction of effective microcomponents having an antioxidant effect possessed by the antler is minimized by the manufacturing process. Therefore, the present invention relates to a method for preparing an antler extract having excellent antioxidant effect, and a antler extract prepared thereby, which provides a cell growth effect by improving ATP synthesis ability.
항산화제, 녹용, 초음파 추출, ATP 합성 Antioxidant, Deer Antler, Ultrasonic Extraction, ATP Synthesis
Description
도 1은 본 발명에 의해 제조된 녹용 추출물의 농도에 따른 ATP 합성 능력을 나타내는 그래프1 is a graph showing the ability of ATP synthesis according to the concentration of antler extract prepared by the present invention
본 발명은 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 녹용이 가지고 있는 항산화 효과를 지닌 유효 미세 성분의 추출을 제조 공정에 의한 손실을 최소화하는 것을 특징으로 하며 이로 인해 ATP 합성 능력 향상에 의해 세포 성장 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 제조함에 있어서, 녹용을 추출하는 단계에서 특정 항산화제가 처리되어 기존 녹용을 추출하는 단계보다 항산화 효과가 우수한 영양 성분의 활성을 유지하고 안정화시키는 기능을 보강하였을 뿐만 아니라, 녹용 추출물의 고유취를 마스킹하는 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing an antler extract having an excellent antioxidant effect, and more particularly, to extracting an effective fine component having an antioxidant effect possessed by the antler, minimizing the loss by the manufacturing process. In the manufacture of the antler extract with excellent antioxidant effect, characterized in that it provides a cell growth effect by improving the ability of ATP synthesis, thereby extracting the antler from a specific antioxidant process in the step of extracting the existing antler Method for preparing an antler extract with excellent antioxidant effect, characterized in that it not only reinforces the function of maintaining and stabilizing the activity of nutritional ingredients with excellent antioxidant effect, but also provides an effect of masking the natural odor of the antler extract. It relates to an antler extract.
일반적으로 녹용은 한방에서 그 성질이 따뜻하고 맛이 달며 독이 없다. 이러한 녹용을 삶아서 섭취하면 전신이 쇠약하여 근력 및 뼈의 기능이 약해져 발생하는 일체의 질병을 치료할 수 있다고 알려져 있다.In general, the antler is warm in nature, tastes sweet and is not poisonous. Boiled and eaten such antler is known to be able to cure any disease caused by weakening the whole body and weak muscle strength and bone function.
녹용이란 수사슴의 뿔이 딱딱하게 각질화되기 전 잘라서 약으로 사용하는 것을 말하며 사슴의 뿔은 사슴의 종류와 년생에 따라 자르는 시기가 조금씩 차이는 있으나 평균 5월 내지 8월 사이에 자르는데 이것을 절각(折角)이라고 한다. 뿔을 절각한 후 머리에 남는 부위는 딱딱하게 굳어지게 되고 이듬해 2월 내지 3월경에 저절로 떨어지게 되는데 이것을 낙각(落角)이라고 한다. 낙각된 후에 그 자리에 새로운 뿔이 돋아나기 시작하며 낙각한 시기를 기준으로 절각을 하기도 하는데 꽃사슴의 경우는 낙각후 65일, 엘크의 경우는 80일, 레드 디어의 경우는 70일 후에 절각해 녹용으로 사용한다. 뿔을 자르지 않고 그대로 놔두면 뿔은 점점 골질(骨質)로 변화되는데 이것을 녹각이라고 하며 시간이 흐르면 흐를수록 뼈처럼 단단하게 굳어져 저절로 떨어지게 된다. Deer antler means that the horn of a deer is cut and used as a medicine before it is hard keratinized. The deer's horn is cut between May and August depending on the type of deer and the year of birth. It is called). After cutting the horns, the remaining areas on the head become hardened and fall on their own in February to March of the following year. After the fall, new horns start to appear on the spot, and they may be carved at the time of the fall. For deer, 65 days after the fall, 80 days for the elk, 70 days after the red deer, Used as If you leave the horns without cutting them, the horns gradually change to bone quality. This is called rusting and as time passes, it hardens like a bone and falls on its own.
사슴 뿔은 여름을 전후해서 새로 돋아나는데 이때 새로 돋아난 연한 뿔을 채취하여 건조한 것이 녹용이다. 녹용의 기질은 부드러우며 연약하다. 그 속에는 피가 많이 들어 있고 표면에는 부드러운 털이 많이 있다. 녹용은 특히 기질이 허약한 사람, 기력이 부족한 사람, 정력이 부족한 사람들에게 대단히 좋은 보약이다. Deer horns are newly sprouted around summer, and the new antler is harvested and dried. Deer Antler's substrate is soft and fragile. It contains a lot of blood and a lot of soft hairs on its surface. Deer antler is a very good remedy especially for those who are weak in temperament, those who lack energy, and those who lack energy.
<본처비요>에서 언급되어진 녹용에 대한 설명은 정기를 발생시키는 혈액의 영양이 되면 현기증에 특효가 있고 양기를 보하여 성욕을 왕성하게 하며 뼈와 힘줄 을 곧게 하고 신기허약과 냉한 것을 다스리며 관절이 아프거나 기운이 없을 때 효과가 좋고 냉대하를 고치는 작용을 하며 모든 허손과 노상을 회복시킨다고 기록되어 있다.The description of the antler mentioned in <Bonjebiyo> is effective for dizziness when it comes to nourishing regular blood, and it is effective for dizziness, stimulating sexual desire by nourishing the body, straightening bones and tendons, and controlling the weakness and cold. It is said to be effective and heal cold, and to restore all futility and hearth when it is cold or weak.
특히 일반인들은 녹용을 보약으로만 아는데 녹용은 보약이자 치료제의 역할을 한다고 여러 문헌에서 보고되어 있다. 녹용의 효과는 고대 한방 문헌으로서 동의보감, 신농본초경, 명의별록, 신수본초, 본초강목 등에 수록되어 현대에 전해지고 있다. 현대에 이르러서는 과학적인 임상실험을 통해 그 효과가 입증되고 있다. 특히 현대 의학의 검증에 따르면 녹용추출물은 백혈병 치료제, 비아그라와 같은 기능성 강장제 등의 원료로 쓰인다 이러한 것으로 보아 녹용은 신이 내린 최고의 영약으로 보약이자 치료제로 활용되고 있다. 녹용 추출물로 임상실험을 통해 골수모세포 증식에 도움을 주는 것으로 밝혀져 백혈병 등 치료법에 이용될 수 있다는 연구가 발표되기도 하였다. 현재 알려져 있는 녹용(鹿茸)의 현대 의학적 약효는 첫째, 조혈 기능을 항진시키고 둘째, 세포성 면역기능을 증강시키며 셋째, 간장 기능의 개선에 작용될 뿐 아니라 넷째, 피로나 쇠약상태에 있는 장기, 혈관운동 조직 및 신경세포 등에 매우 유익한 작용을 하는 것으로 확인되었다. 또한 녹용이나 녹혈에는 아미노산을 비롯한 강글리오사이드와 같은 기능성 물질이 발견됐으며 이와 같은 다양한 녹용 구성 물질은 인류의 건강에 지대한 영향을 끼치고 있음을 확인할 수가 있다. 근대에 이르러 녹용, 녹혈에 관한 현대 의학적 연구가 실험동물을 통하여 많이 이루어지고 있다. In particular, the general public only knows deer antler as a medicine, and it has been reported in the literature that antler serves as both a medicine and a medicine. The effect of deer antler is an ancient Chinese literature, and it is recorded in Dongbobogam, Sinnonboncho, Myeongseung, Sinsuboncho, and Herbal Wood. In modern times, its effectiveness has been proven through scientific clinical trials. In particular, according to the verification of modern medicine, antler extract is used as a raw material for the treatment of leukemia and functional tonics such as Viagra. As such, antler is used as a medicine and medicine as the best medicine from God. It has been shown that the antler extract can be used for the treatment of myelogenous cells such as leukemia because it has been shown to help myeloid cell proliferation through clinical trials. The modern medical effects of deer antler are known as: 1) to enhance hematopoietic function, 2) to enhance cellular immune function, 3) to improve liver function, 4) to organs and blood vessels in fatigue or weakness. It has been found to have a very beneficial effect on motor tissues and neurons. In addition, functional substances such as gangliosides, including amino acids, have been found in antler and erythropoietic blood, and these various antler components can be confirmed to have a profound effect on human health. In modern times, modern medical researches on antler and lysis are being conducted through experimental animals.
그러나 녹용을 추출하여 농축할 경우 그 특유의 냄새로 인하여 식품 원료로 적용하는데 어려움이 있어 다양한 소재로서 녹용의 활용가치를 높이려면 관능 개선 및 추출 방법에 대한 연구가 더 필요하다.However, when the antler is extracted and concentrated, it is difficult to apply it as a food ingredient due to its peculiar smell. Therefore, in order to increase the utilization value of the antler as a variety of materials, further research on sensory improvement and extraction method is needed.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 개발하기 위한 연구의 일환으로 각종 추출 조건법을 검토한 결과, 다양한 항산화제를 초음파 추출 단계에서 동시에 사용시 초음파 추출 방법에 의해 제조된 녹용 추출물이 항산화 효과가 우수하고, 상기 녹용 추출물과 항산화효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법, 그리고 이를 함유하는 식품 및 의약품을 제공하는 것이다. The present invention is to solve the above problems, as a part of the research to develop an antler extract with excellent antioxidant effect, as a result of examining various extraction conditions method, the ultrasonic extraction method when using various antioxidants simultaneously in the ultrasonic extraction step The antler extract prepared by the present invention has an excellent antioxidant effect, and provides a method of preparing the antler extract and the antler extract excellent in antioxidant effects, and a food and pharmaceutical composition containing the same.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 녹용 추출물의 조성물로서 건조된 녹용의 건조 중량을 기준으로 하여 95.0 ~ 99.99 중량%, 추출 안정화 제제로서 항산화제 0.01 ~ 5.0 중량%로 구성되어 진다. 이때 추출 안정화 제제로서 사용되는 항산화제는 유성비타민A지방산에스테르, dl-α-토코페릴아세테이트, , d-α-토코페릴호박산, d-토코페롤(혼합형), d-α-토코페롤, 비타민 E, 비타민 C, 아스코르빌팔미테이트, L-아스코르빈산나트륨 중의 1종 이상으로 구성되어지는 것을 특징으로 한다. In order to achieve the above object, the present invention is composed of 95.0 to 99.99% by weight, based on the dry weight of the dried antler as a composition of the antler extract, 0.01 to 5.0% by weight of the antioxidant as an extract stabilizing agent. The antioxidants used as extraction stabilization agents are oily vitamin A fatty acid esters, dl-α-tocopheryl acetate,, d-α-tocopheryl pumpkin acid, d-tocopherol (mixed type), d-α-tocopherol, vitamin E, vitamin C, ascorbyl palmitate, and L- ascorbate.
본 발명의 녹용 추출물의 제조 방법은 침지에 의한 열수 추출이 가진 한계점인 추출 효율을 개선한 저온의 초음파 추출 방법을 사용한 것으로, 이를 더욱 상세 하게 설명하면 아래와 같다.The preparation method of the antler extract of the present invention uses a low-temperature ultrasonic extraction method that improves the extraction efficiency which is the limit of hot water extraction by immersion, which will be described in more detail below.
본 발명에 사용되어진 초음파 추출 방법은 분쇄, 혼합 및 추출 공정 등에서 빠른 반응 시간에 좋은 효율을 얻기 위하여 적용된 방법으로, 기존의 전통 추출 방법인 열수 추출 방법은 본 발명에 사용된 초음파 추출 방법에 비해 추출 효율이 낮으며 에너지 소비가 많으며 열로 인한 많은 유용성분의 파괴와 산화 및 손실, 단백질의 변이, 열에 대한 불안정한 단점을 가지고 있다. 이에 비해 초음파 추출 방법은 추출 공정의 효율을 높이고 기능성 성분의 추출 원료에 적용시 많은 생리 활성 물질을 안전하게 그리고 효과적으로 얻을 수 있는 장점을 가지고 있다.The ultrasonic extraction method used in the present invention is a method applied to obtain good efficiency for fast reaction time in the grinding, mixing and extraction processes, and the conventional water extraction method, which is a conventional extraction method, is extracted compared to the ultrasonic extraction method used in the present invention. It has low efficiency, high energy consumption, and has the disadvantages of destruction and oxidation and loss of many useful components due to heat, mutation of protein, and unstable heat. In contrast, the ultrasonic extraction method has the advantage of increasing the efficiency of the extraction process and safely and effectively obtain a large number of bioactive substances when applied to the extraction material of the functional ingredient.
특히 본 발명은 항산화제를 함유한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물을 제조함에 있어서, 녹용 추출물에 특정 항산화물질이 함유되도록 하여 기존 녹용 추출물이 가지고 있는 영양 성분의 활성을 유지하고 안정화시키는 기능을 보강하였을 뿐만 아니라, 녹용 추출물의 고유취를 마스킹하는 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.In particular, the present invention in the preparation method of the antler extract containing antioxidant and the antler extract prepared by this, to maintain the activity of the nutritional components of the existing antler extract by allowing the specific antler extract to contain the specific antioxidants Not only reinforcing the function of, but also relates to a method for producing an excellent antler extract having an antioxidant effect, characterized in that it provides an effect of masking the natural odor of the antler extract, and the antler extract produced thereby.
본 발명에 사용된 초음파 추출 방법에서 초음파란 소리(음파)이면서 인간의 귀로는 들을 수 없는 높은 진동수의 소리를 말하며, 여기서 저온이라 함은 70℃ 이하를 나타내며, 또한 이 때 녹용은 일반적으로 고온 또는 극저온 수준의 추출 온도를 회피 설계하여 불필요한 성분의 선택적 제거 및 유효 성분의 선택적 강화를 목적으로 하였으며, 용매의 부적절한 선택성에 따른 단점을 초음파 추출 방법으로 극복하였다. 즉, 추출 중에 발생할 수 있는 녹용 추출물의 조성 변화에 영향을 최소 화하도록 추출 전단계에서 항산화제를 배합하였으며, 이러한 초음파 추출 방법은 각종 유용성분의 불안정한 구조를 안정화시키며 다양한 범위의 초음파에 의하여 동물 및 식물 유래 원료에 깊게 침투하여 천연물의 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있는 기존의 초음파 추출 방법보다 우수한 생리활성을 유지하는 추출 장점을 가진다. In the ultrasonic extraction method used in the present invention, the ultrasonic wave refers to a sound (sound wave) and a high frequency sound which cannot be heard by the human ear, wherein the low temperature refers to 70 ° C. or less, and the antler is generally high or By avoiding the cryogenic extraction temperature, the aim was to selectively remove unnecessary components and to strengthen the active ingredients, and to overcome the disadvantages caused by inappropriate selectivity of the solvent by ultrasonic extraction. In other words, antioxidants were formulated in the pre-extraction step to minimize the effect on the compositional changes of the antler extract that may occur during extraction. Such ultrasonic extraction method stabilizes the unstable structure of various useful components and produces various animals and plants by ultrasonic waves. Deeply penetrates deeply into the derived raw materials and has the advantage of extracting superior physiological activity than conventional ultrasonic extraction method that can effectively extract the active ingredient of natural products.
본 발명인 녹용 추출물의 제조에 사용된 초음파 추출 방법의 장점은 추출하고자 하는 원료에 따라 초음파 에너지 변화의 세기를 조절할 수 있는 특징을 가진다. 그리하여 원료에 따라 추출 효율이 매우 높으며 약리 활성을 나타내는 유효 성분의 변성 및 파괴 가능성을 최소화시키며, 생산 속도가 기존의 전통적 열수 추출 방법보다 빠르므로 추출시간을 단축시키며, 이로 인하여 저비용 저에너지 사용이라는 특징을 가지는 것을 확인하였다.Advantages of the ultrasonic extraction method used in the preparation of the present invention antler extract has a feature that can adjust the intensity of the ultrasonic energy change depending on the raw material to be extracted. Therefore, the extraction efficiency is very high depending on the raw materials, and the possibility of denaturation and destruction of active ingredients exhibiting pharmacological activity is minimized, and the extraction time is shortened because the production speed is faster than that of the conventional hydrothermal extraction method, which results in low cost and low energy use. It was confirmed to have.
본 발명에 따른 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물은 통상의 적용을 가질 수 있으며, 예를 들어 한방 음료, 유아용 음료, 주스, 유음료, 캔디류, 제과류, 제빵 류 등의 식품 원료로 사용될 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 항산화 효과를 가지는 녹용 추출물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 건강 및 기호 등 상태에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.Deer antler extract having excellent antioxidant effect according to the present invention may have a conventional application, for example, it can be used as food raw materials, such as herbal beverages, baby drinks, juices, milk drinks, candy, confectionery, bakery. The composition of each of these formulations may contain a variety of bases and additives necessary for the formulation of the formulation and are suitable, and the types and amounts of these components can be readily selected by those skilled in the art. In addition, the antler extract having an antioxidant effect according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may vary depending on the state of health and preference of the user.
이하 본 발명의 실시예를 통하여 본 발명의 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 보다 상세히 설명하지만 본 발명이 이들 실시예에만 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the antler extract excellent in the antioxidant effect of the present invention will be described in more detail through examples of the present invention, but the present invention is not limited to these examples.
실시예 1 : 녹용 추출물의 제조Example 1 Preparation of Deer Antler Extract
녹용 추출물은 잘 건조된 녹용을 분말화하여 사용하였다.Deer antler extract was used to powder a well dried antler.
본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법으로서는 녹용 추출 용매로서 정제수를 선택하여 녹용 시료에 대한 추출용매 비율을 일정하게 하여 추출 용액의 단위 부피당 초음파 출력과 추출 시간을 공정 및 시스템 변수로 하여 실온에서 추출 실험을 실시하였으며, 초음파 발생기는 20 kHz에서 작동하는 고출력용을 사용하였으며, 고출력용 초음파 발생기를 사용하여 400, 1200, 2400, 4000 W/L의 출력을 가하였다. As a method for preparing the antler extract according to the present invention, by selecting purified water as the antler extract solvent, the extraction solvent ratio for the antler sample is constant, and the extraction experiment at room temperature using the ultrasonic power and the extraction time per unit volume of the extraction solution as the process and system variables. The ultrasonic generator was used for high power operating at 20 kHz, and the output of 400, 1200, 2400, 4000 W / L was applied using the high power ultrasonic generator.
본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 저출력용 초음파 발생기를 사용시 초음파 처리 시간에 따른 약리 활성 성분의 추출 효과가 미약하게 나타난 것을 확인하였으며, 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조방법에 있어서는 상기 고출력용의 2400W/L의 출력을 적용하였다. 그 이유로서는 상기 3시간의 고출력 초음파를 처리하였을 때 녹용 추출물의 수율이 1200 ~ 2400W/L의 출력에서는 순도의 저하가 두드러지게 나타나지 않았으며 녹용 추출물의 수율이 가장 좋게 나타났다. 2400 W/L의 출력 이상에서는 추출 수율이 크게 증가하지 않았다. 그러므로 본 발명에 따른 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 3시간의 고출력 초음파를 처리하여 1200 ~ 2400W/L의 출력에서 가장 좋은 유효 수율을 얻을 수 있었다. 또한 추출 용매로서 정제수의 비율이 증가할수록 유효 수율은 감소하는 것으로 나타났다. 즉 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 추출 용매로서 정제수를 사용할 때 적정 범위는 예비 실험의 범위 10, 20, 30, 50, 70, 100g/L (녹용/정제수 비율)에서 50g/L 범위가 넘어가면 유효 수율은 20g/L의 60% 수준으로 낮아짐을 확인하였다. 그러므로 추출 용매로서 정제수를 사용시 유효 범위는 20 ~ 50g/L 가 가장 적당함을 알 수 있었다. 이때 20g/L 미만으로 정제수를 사용시 추출 용매의 단위 부피당 녹용 시료의 양을 너무 과다하게 첨가하는 형태가 되어 녹용 추출물의 농축 효과가 크게 저하되는 것을 확인하였다. In the method for preparing the antler extract according to the present invention, it was confirmed that the extraction effect of the pharmacologically active ingredient according to the ultrasonic treatment time was weak when using the low power ultrasonic generator, and in the method for preparing the antler extract according to the present invention for the high output A power of 2400W / L was applied. The reason for this was that when the high-power ultrasonic treatment for 3 hours was performed, the yield of the antler extract was not remarkably decreased at the output of 1200 to 2400 W / L, and the yield of the antler extract was the best. Above 2400 W / L, the extraction yield did not increase significantly. Therefore, in the manufacturing method of the antler extract according to the present invention was able to obtain the best effective yield at the output of 1200 ~ 2400W / L by treatment with high power ultrasound of 3 hours. In addition, the effective yield decreased as the ratio of purified water increased as the extraction solvent. That is, when using purified water as the extraction solvent of the antler extract according to the present invention, the appropriate range is effective when the range of 10, 20, 30, 50, 70, 100 g / L (detox antler / purified water ratio) exceeds 50 g / L Yield was confirmed to be lowered to the level of 60% of 20g / L. Therefore, when using purified water as the extraction solvent, the effective range was found to be the most suitable 20 ~ 50g / L. In this case, when the purified water was used at less than 20 g / L, the amount of the antler sample per unit volume of the extraction solvent was excessively added, thereby confirming that the concentration effect of the antler extract greatly decreased.
하기 표 1에 나타난 바와 같이 본 발명의 녹용 추출물의 제조에 사용된 녹용의 추출 방법은 원물을 1차로 정제수로 세척한 다음, 잘게 분쇄하고 분쇄물 20 내지 50 중량%를 1시간 동안 20g/L 수준의 정제수에 침지하여 3시간 동안 25℃에서 초음파 추출 방법을 사용하여 녹용 추출물의 유효성분을 추출을 극대화하였다. As shown in Table 1 below, the extraction method of the antler used in the preparation of the antler extract of the present invention first washed the raw material with purified water, then finely pulverized and 20 to 50% by weight of the pulverized product 20g / L level for 1 hour It was immersed in purified water to maximize the extraction of the active ingredient of the antler extract using the ultrasonic extraction method at 25 ℃ for 3 hours.
본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법으로서는 녹용 추출 용매로서 정제수를 선택하여 녹용 시료에 대한 추출용매 비율을 일정하게 하여 추출 용액의 단위 부피당 초음파 출력과 추출 시간을 공정 및 시스템 변수로 하여 실온에서 추출 실험을 실시하였으며, 초음파 발생기는 20 kHz에서 작동하는 고출력용을 사용하였으며, 고출력용 초음파 발생기를 사용하여 400, 1200, 2400, 4000 W/L의 출력을 가하였다. As a method for preparing the antler extract according to the present invention, by selecting purified water as the antler extract solvent, the extraction solvent ratio for the antler sample is constant, and the extraction experiment at room temperature using the ultrasonic power and the extraction time per unit volume of the extraction solution as the process and system variables. The ultrasonic generator was used for high power operating at 20 kHz, and the output of 400, 1200, 2400, 4000 W / L was applied using the high power ultrasonic generator.
본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 저출력용 초음파 발생기를 사용시 초음파 처리 시간에 따른 약리 활성 성분의 추출 효과가 미약하게 나타난 것을 확인하였으며, 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조방법에 있어서는 상기 고출력용의 2400W/L의 출력을 적용하였다. 그 이유로서는 상기 3시간의 고출력 초음파를 처리하였을 때 녹용 추출물의 수율이 1200 ~ 2400W/L의 출력에서는 순도의 저하가 두드러지게 나타나지 않았으며 녹용 추출물의 수율이 가장 좋게 나타났다. 2400 W/L의 출력 이상에서는 추출 수율이 크게 증가하지 않았다. 그러므로 본 발명에 따른 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 3시간의 고출력 초음파를 처리하여 1200 ~ 2400W/L의 출력에서 가장 좋은 유효 수율을 얻을 수 있었다. 또한 추출 용매로서 정제수의 비율이 증가할수록 유효 수율은 감소하는 것으로 나타났다. 즉 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 추출 용매로서 정제수를 사용할 때 적정 범위는 예비 실험의 범위 10, 20, 30, 50, 70, 100g/L (녹용/정제수 비율)에서 50g/L 범위가 넘어가면 유효 수율은 20g/L의 60% 수준으로 낮아짐을 확인하였다. 그러므로 추출 용매로서 정제수를 사용시 유효 범위는 20 ~ 50g/L 가 가장 적당함을 알 수 있었다. 이때 20g/L 미만으로 정제수를 사용시 추출 용매의 단위 부피당 녹용 시료의 양을 너무 과다하게 첨가하는 형태가 되어 녹용 추출물의 농축 효과가 크게 저하되는 것을 확인하였다. In the method for preparing the antler extract according to the present invention, it was confirmed that the extraction effect of the pharmacologically active ingredient according to the ultrasonic treatment time was weak when using the low power ultrasonic generator, and in the method for preparing the antler extract according to the present invention for the high output A power of 2400W / L was applied. The reason for this was that when the high-power ultrasonic treatment for 3 hours was performed, the yield of the antler extract was not remarkably decreased at the output of 1200 to 2400 W / L, and the yield of the antler extract was the best. Above 2400 W / L, the extraction yield did not increase significantly. Therefore, in the manufacturing method of the antler extract according to the present invention was able to obtain the best effective yield at the output of 1200 ~ 2400W / L by treatment with high power ultrasound of 3 hours. In addition, the effective yield decreased as the ratio of purified water increased as the extraction solvent. That is, when using purified water as the extraction solvent of the antler extract according to the present invention, the appropriate range is effective when the range of 10, 20, 30, 50, 70, 100 g / L (detox antler / purified water ratio) exceeds 50 g / L Yield was confirmed to be lowered to the level of 60% of 20g / L. Therefore, when using purified water as the extraction solvent, the effective range was found to be the most suitable 20 ~ 50g / L. In this case, when the purified water was used at less than 20 g / L, the amount of the antler sample per unit volume of the extraction solvent was excessively added, thereby confirming that the concentration effect of the antler extract greatly decreased.
하기 표 1에 나타난 바와 같이 녹용 98g, 비타민 C 1g, d-토코페롤(혼합형) 1g을 원료로하여 추출 중의 산화안정성을 배가시키며, 특히 저온 초음파 추출한 후 여과하고, 감압 농축하여 건조시 20g의 녹용 추출물을 획득하였다. As shown in Table 1 below, antler 98g, vitamin C 1g, d-tocopherol (mixed type) 1g as a raw material to double the oxidative stability during extraction, in particular, low temperature ultrasonic extraction, filtration, concentrated under reduced pressure to dry 20g of antler extract Obtained.
실시예 2 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 안정성 실험 Example 2 Stability Test of Deer Antler Extract According to the Present Invention
먼저 pH 변화에 따른 영향을 살펴 보았다. 본 발명의 녹용 추출물 10% 용액으로 제조하여 pH 5.0 내지 9.0 pH의 변화에 따른 침전물 형성 유무에 대하여 관찰하여 아래 표 2에 나타내었다. 그 결과 pH 변화에 따른 침전 현상은 없는 것으로 나타났다.First, the effects of pH change were examined. Prepared with a 10% solution of the antler extract of the present invention to observe the presence or absence of precipitate formation according to the change in pH 5.0 to 9.0 is shown in Table 2 below. As a result, there was no precipitation phenomenon due to the pH change.
+ : 침전 형성, - : 침전 없음+: Precipitate formation,-: no precipitation
실시예 3 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 이취 마스킹 효과 테스트Example 3: Off-flavor masking effect test of the antler extract according to the present invention
본 발명의 녹용 추출물로서 실시예 1과 종래의 녹용 추출물로서 실시예 1에서 항산화 제제를 제외하여 초음파 추출을 통해 얻은 녹용 추출물에 대하여 10% 용액으로 제조하여 성인 10명에 대하여 이취에 대한 관능 테스트를 실시하였다. The antler extract of the present invention was prepared as a 10% solution for the antler extract obtained by ultrasonic extraction except for the antioxidant agent in Example 1 and the conventional antler extract in Example 1 to perform a sensory test for off-flavor for 10 adults Was carried out.
실험예 1 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 과산화수소를 처리한 세포 사멸의 방어 효과Experimental Example 1: Protective effect of the cell death treated with hydrogen peroxide of the antler extract according to the present invention
과산화수소를 처리하여 유도되는 세포 사멸에 대하여 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물의 방어 효과를 평가한 것으로 활성산소종에 의한 세포 자극에 대한 보호 효과를 평가하였다. 먼저 NIH3T3 세포를 65mm 페트리디쉬에 1×106/ml 농도로 5ml씩 분주하여 세포의 부착을 유도한 후 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물을 세포 사멸이 유도되지 않는 농도로 처리하고, 다시 과산화수소를 0, 1, 2, 5, 10mM로 각각 처리한 후 24시간 배양하여 세포 사멸에 대한 방어 효과를 평가하였다. 이하 세포 생존율 평가는 설퍼로다민 B 정량법으로 수행하였다. 실험 결과를 표 4에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물은 1 중량%로 처리하였을 때 가장 우수한 세포사멸 방어 효과를 나타내었다. The protective effect of the antler extract obtained in Example 1 against cell death induced by treatment with hydrogen peroxide was evaluated. First, 5 ml of NIH3T3 cells were injected into 65 mm Petri dishes at a concentration of 1 × 10 6 / ml to induce cell adhesion. , 1, 2, 5, 10mM after treatment for 24 hours to evaluate the protective effect against cell death. The following cell viability evaluation was performed by the Sulfurhodamine B assay. As shown in Table 4, the antler extract obtained in Example 1 showed the best apoptotic defense effect when treated with 1% by weight.
그리하여 활성산소종에 대하여 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물이 항산화 효과가 우수하였음을 알 수 있었다. Thus, it was found that the antler extract obtained in Example 1 with respect to active oxygen species had an excellent antioxidant effect.
% : 세포 생존율%: Cell viability
실험예 2 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과Experimental Example 2 Antioxidant Effect by DPPH Scavenging Activity According to the Concentration of Deer Antler Extract According to the Present Invention
활성 산소에 의한 반응은 거의 대부분 라디칼 반응으로서 자동산화반응 과정이 포함된다. 생체 내에서 자동산화반응을 차단시키는 역할은 항산화제가 담당하고 있다. 전자를 주는 능력으로서 환원력이 클수록 강한 항산화제가 된다. 항산화제의 환원력을 측정하는 시약으로 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl radical(DPPH)가 있다. DPPH는 화합물 내 질소 중심의 안정화된 구조의 라디칼로 존재한다. 517nm에서 최대 흡수를 나타내며 환원되면 517nm에서 흡수가 없어진다. 본 발명의 한방 식물 추출물의 환원력의 크기는 라디칼 소거활성(Scavenging activity, SC50)으로 표시하며 SC50은 DPPH의 농도가 50% 감소하는데 필요한 농도를 나타낸다. 본 발명의 녹용 추출물에 대하여 농도별 SC50을 측정하여 나타난 결과를 표 5에 나타내었다. 표 4에서 본 녹용 추출물의 농도에 따라 DPPH 소거능력에 따른 항산화 효과가 있음을 확인하였다. 본 발명의 녹용 추출물을 농도에 따라 DPPH 소거 활성(SC 50)이 우수하였으며 7.5 ㎕/㎖을 나타내었다.Reactions by free radicals are almost always radical reactions, including the process of automatic oxidation. Antioxidants are responsible for blocking the automatic oxidation in vivo. The greater the reducing power as an electron-giving ability, the stronger the antioxidant. A reagent that measures the reducing power of antioxidants is 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl radical (DPPH). DPPH exists as a radical of a stabilized structure of the nitrogen center in the compound. Maximum absorption at 517 nm is shown and when reduced, absorption is lost at 517 nm. The magnitude of the reducing power of the herbal plant extract of the present invention is expressed by the radical scavenging activity (SCcavenging activity, SC50) and SC50 represents the concentration required to reduce the concentration of DPPH by 50%. Table 5 shows the results obtained by measuring the SC50 by concentration for the antler extract of the present invention. In Table 4 it was confirmed that there is an antioxidant effect according to the DPPH scavenging ability according to the concentration of the present antler extract. The antler extract of the present invention exhibited excellent DPPH scavenging activity (SC 50) according to the concentration and showed 7.5 μl / ml.
실험예 3 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 슈퍼록사이드 음이온(superoxide anion) 소거 활성에 의한 항산화 효과Experimental Example 3 Antioxidant Effect by Superoxide Anion Scavenging Activity According to the Concentration of Deer Antler Extract According to the Present Invention
활성산소 가운데 슈퍼록사이드 음이온은 자외선 흡수로 시작되는 광증감반응에 의해 생성되고, 생체내에 존재하는 SOD(Superoxide dismutase) 효소에 의해 과산화수소로 전환된다. 슈퍼록사이드와 과산화수소는 반응성이 약하여 직접적으로 조직세포 손상에 참여하는 경우는 드물지만 보다 위험한 하이드록시라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철과 구리 이온을 환원시킬 수 있고, 환원된 철과 구리 이온은 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다. 또한 생체내에서 슈퍼록사이드는 페리틴으로부터 철 이온(II)을 방출시킬 수 있다. 이러한 현상은 자외선 조사 후에 나타나며 자외선으로 인해 생성된 슈퍼록사이드의 작용으로 간주되고 있다. Superoxide anion among the active oxygen is produced by the photosensitization reaction that begins with ultraviolet absorption, and is converted to hydrogen peroxide by the SOD (Superoxide dismutase) enzyme present in the living body. Superoxides and hydrogen peroxides are less reactive and therefore rarely directly involved in tissue cell damage, but participate in the production of more dangerous hydroxy radicals. That is, the superoxide can reduce iron and copper ions, and the reduced iron and copper ions reduce hydrogen peroxide, resulting in hydroxyl radicals. In vivo, superoxides can also release iron ions (II) from ferritin. This phenomenon appears after ultraviolet irradiation and is considered to be the action of superoxides produced by ultraviolet radiation.
본 발명의 녹용 추출물을 농도에 따라 슈퍼록사이드 라디칼의 소거활성(SC 50)은 표 6에서 보여주듯이 우수하였으며 20.1 ㎕/㎖을 나타내었다.According to the concentration of the antler extract of the present invention, the scavenging activity (SC 50) of the superoxide radical was excellent as shown in Table 6 and showed 20.1 μl / ml.
실험예 4 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 하이드록실 라디칼 (hydroxyl radical) 소거 활성에 의한 항산화 효과Experimental Example 4: Antioxidative Effect by the Hydroxyl Radical Scavenging Activity According to the Concentration of Deer Antler Extract According to the Present Invention
하이드록실 라디칼은 세포에 손상을 주는 가장 강력한 free radical로서 피부 세포막의 지질의 과산화반응을 일으키고 특히 DNA 및 결합조직 기질 손상에 참여하는 주원인 활성 산소종으로 알려져 있다. 특히 자외선 흡수로 시작되는 광증감 반응에 의해 슈퍼록사이드와 과산화수소가 생성되고 이들은 생체내에서 보다 위험한 하이드록실 라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철 이온과 구리 이온을 환원시킬 수 있고 환원된 철과 구리는 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다. Hydroxyl radicals are the most powerful free radicals that damage cells and are known to be active oxygen species that cause peroxidation of lipids in skin cell membranes and are particularly involved in DNA and connective tissue matrix damage. In particular, photosensitization reactions that begin with ultraviolet absorption produce superoxides and hydrogen peroxide and they participate in the production of more dangerous hydroxyl radicals in vivo. That is, superoxides can reduce iron ions and copper ions, and reduced iron and copper reduce hydrogen peroxide, resulting in hydroxyl radicals.
본 발명의 녹용 추출물은 in vitro에서 Fenton 반응에 의해 생성시킨 하이드록실 라디칼을 소거하는 능력을 측정하여 표 7에 나타내었다. 즉 녹용 추출물은 농도에 따라 하이드록실 라디칼을 소거하는 것을 보여주고 있으며 하이드록실 라디칼 소거활성(SC 50)이 우수하였으며 23.1㎕/㎖을 나타내었다. Deer Antler extract of the present invention is shown in Table 7 by measuring the ability to eliminate the hydroxyl radical produced by the Fenton reaction in vitro. In other words, the antler extract showed the scavenging of the hydroxyl radical according to the concentration.
실험예 5 : ATP 합성 촉진 활성 측정Experimental Example 5 Determination of ATP Synthesis Promoting Activity
사람섬유아세포(Human dermal fibroblast, 5계대)를 48well plate에 well당 3×104 cells 접종한 후 페니실린(100 IU/mL), 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지 넣고 37℃를 유지하여 10% 이산화탄소를 포함하는 배양기내에서 배양하였다. 24시간 배양후 FBS가 함유되지 않은 DMEM 배지로 1회 세척한 다음 본 발명의 녹용추출물을 함유한 새로운 DMEM배지(녹용추출물 함유, 0.04~10%(v/v)를 well당 300㎕씩 넣고 24시간 배양한다. 녹용추출물을 함유하지 않은 새로운 DMEM 배지로 배양한 것을 대조군으로 사용한다.Human fibroblasts (Human dermal fibroblast (5 passages)) were inoculated into 3 wells per cell in 3 × 104 cells per 48 well plate, and then penicillin (100 IU / mL), streptomycin (100 ㎍ / mL) and 10% FBS (fetal bovine serum) DMEM containing Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) medium was maintained at 37 ℃ and incubated in an incubator containing 10% carbon dioxide. After 24 hours of incubation, the cells were washed once with FMEM-free DMEM medium, and then added 300 μl of each well of DMEM medium containing velvet extract (containing velvet extract, 0.04 ~ 10% (v / v) per well 24 Incubation time The incubation with fresh DMEM medium containing no antler extract is used as a control.
ATP 측정은 PerkinElmer사의 ATPlite를 사용하였다. 300㎕ 배지를 함유하고 있는 well에 lysis buffer를 well당 150㎕씩 넣고 오비탈쉐이커에서 700rpm으로 5분간 흔들어 준다. 기질용액을 well당 150㎕씩 넣고 암조건에서 오비탈 쉐이커에서 700rpm으로 5분간 흔들어 준다. 암조건에서 10분간 방치후 Molecular Devices사의 Spectramax L 루미노메타를 이용하여 RLU값을 측정하여 도 1에 나타내었다. ATP measurement was performed using PerkinElmer's ATPlite. Add 150 µl of lysis buffer to the well containing 300 µl medium and shake for 5 minutes at 700 rpm in an orbital shaker. Add 150µl of substrate solution per well and shake for 5 minutes at 700rpm in an orbital shaker under dark conditions. After standing for 10 minutes in the dark condition using the Spectramax L luminometer of Molecular Devices, the RLU value was measured and shown in FIG. 1.
도 1에서 처럼 대조군 대비 40% 수준의 ATP 합성 능력이 증가함을 알 수 있었으며, 본 발명에 의한 녹용 추출물의 세포 성장 효과를 확인할 수 있었다. As shown in FIG. 1, it was found that the ATP synthesis ability was increased by 40% compared to the control, and the cell growth effect of the antler extract according to the present invention was confirmed.
이상 상기 실시예와 실험예를 통하여 본 발명의 녹용 추출물은 천연 항산화 효과를 유지하도록 저온의 초음파 추출 단계에서 항산화 제제를 동시에 처리하여 녹용 추출물에서 유래한 천연 유효 성분을 열에 의한 손실을 최소화시킴으로서 항산화 효과와 세포 생장 효과가 우수한 녹용 추출물을 제공하는 것이다. Through the above examples and experimental examples, the antler extract of the present invention is simultaneously treated with an antioxidant agent in a low temperature ultrasonic extraction step to maintain a natural antioxidant effect, thereby minimizing the loss of the natural active ingredient derived from the antler extract by heat. It is to provide an antler extract with excellent cell growth effects.
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